CN112646758B - 一株醋酸钙不动杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

一株醋酸钙不动杆菌及其应用，本发明涉及一株醋酸钙不动杆菌及其应用。本发明的目的是为了解决现有SAs降解菌存在效率低、易产生二次污染以及菌株自生的安全难以保证的问题，本发明一株醋酸钙不动杆菌为醋酸钙不动杆菌(Acinetobactercalcoaceticus)WQ‑D2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2020年12月21日，保藏编号为CCTCCNO：M2020939。本发明醋酸钙不动杆菌在降解水体磺胺类药物中的应用。本发明筛选的菌株对磺胺二甲嘧啶的降解效率高。本发明应用于环境微生物技术领域。

Description

一株醋酸钙不动杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株醋酸钙不动杆菌及其应用。
背景技术
抗生素由于其毒性、环境中复杂的转化和生物积累恶性循环，最近被认为是对生物和人类健康的新兴威胁。磺胺类药物(SAs)已被广泛用作抗感染剂，尤其是在人类和兽医学中，并且今天仍然广泛使用。磺胺二甲嘧啶(SMZ)，最常用的SAs之一，在土壤、污水处理厂、地表水、地下水以及饮用水中经常被检测到。报告的残留浓度在ng/L至μg/L范围内，已发现对人体具有慢性毒性，然后引起器官损害，甚至可能引起“三致效应”。对水生生物来说，残留在水体中的SAs对水生生物造成直接或间接的生态毒理效应，长时间生活在SAs的水环境中，直接影响水生生物的生长与繁殖，导致其出现死亡现象。此外，研究SAs代谢过程中发现，乙酰化SAs的危害不容忽视，虽然此类化合物不具有活性，但具有更高的毒性，此类化合物由于其溶解度低、易析出结晶、产生结晶尿、增加肾毒性，比母体SAs危害更大，容易造成环境的二次污染。因此，发明一种低成本、高效率、低风险、避免产生二次污染的SAs降解菌意义重大。
此外，现阶段筛选、研究、报道的磺胺类降解菌几乎都源于重污染或严重污染的样地，比如，污水处理厂的污水或者底泥中，医疗废水中以及长期有高抗生素压力存在各类环境中。重污染环境往往存在杂乱的污染物类型，长期在这样的压力下，菌株虽然具备一定的抗生素降解能力，但菌株自生的安全难以保证，可能还会携带其他不清楚的致病机制。为了更好的服务于生物修复处理技术，需要在确保菌株自生安全的情况下，获得具有抗生素降解能力的菌株，显得极为重要。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有SAs降解菌存在效率低、易产生二次污染以及菌株自生的安全难以保证的问题，提供一株醋酸钙不动杆菌及其应用。
本发明一株醋酸钙不动杆菌为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2020年12月21日，保藏编号为CCTCC NO：M 2020939。
本发明一株醋酸钙不动杆菌在降解水体磺胺类药物中的应用。
本发明醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2是从北京市东南发展区地下水中分离、纯化得到的。具体方法为：抽取北京市东南发展区地下水监测井(60-80m)中的水样5L，低温保存带回实验室，5L水分装在10mL的无菌小管中4℃下保存。
好氧条件下，在富集培养基中添加一定量的磺胺二甲嘧啶对水样中的磺胺二甲嘧啶降解菌进行富集处理，操作如下：装液量为250mL的锥形瓶中加注140mL的液体富集培养基A(磺胺二甲嘧啶初始浓度为M)，再吸取10mL水样加注到液体富集培养基A中，将富集体系放置在37℃，150r·min-1的水浴摇床中震荡培养(避光处理)，以15d为一周期；冷冻离心得到第一周期的富集物，将磺胺二甲嘧啶的浓度提高至2M，重复上述操作，进行第二周期的富集；第三周期的磺胺二甲嘧啶浓度为3M。做4个重复平行实验，分别为磺胺二甲嘧啶初始浓度M分别为1mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和15mg·L-1。
分别用四个平行实验的第三周期的富集体系进行菌株筛选，吸取1mL富集液稀释至10-5、10-6梯度，分别吸取100uL稀释液涂布，在固体无机盐培养基(磺胺二甲嘧啶浓度为3M)上培养。划线分离得到的纯菌落在磺胺二甲嘧啶浓度为M的液体无机盐培养基上进行效果验证。最后分离、纯化得到单一菌株。
采用常规检测方法对菌株进行生理生化鉴定，菌株为革兰氏阴性菌前期呈现短杆状，小球状贯穿整个时期，无芽孢。在无机盐固体平板上培养基上48h后，菌落呈圆形、乳白色、表面略微凸起、不透明、略有黏性，菌落直径在0.5-1.5毫米之间。最适生长温度为25℃，pH为7.0，乳糖发酵为阴性，葡萄糖发酵为阴性，硝酸盐为阳性，柠檬酸盐为阴性，甲基红为阳性，接触酶为阳性，淀粉酶为阴性，氧化酶为阴性，伏-普为阴性。委托生工生物工程(上海)股份有限公司进行16S rRNA基因序列测定，引物为通用引物为27F和1492R。将获得的序列信息，输入NCBI数据库，通过BLAST程序对数据库中所有的序列进行同源性比对分析，结果发现目标菌株的16S序列信息与MN911371.1:26-1408 Acinetobacter calcoaceticusstrain具有100％的相似性。
综上所述所述的菌株形态学特征、生理生化特征、16S rRNA序列特征，应属于不动杆菌属(Acinetobacter)，最终命名为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2。
不动杆菌是一类不发酵糖类的革兰氏阴性球杆菌，也是人体正常菌群的组成部分。醋酸钙不动杆菌也是《伯氏系手册》中记载的第一种不动杆菌属的菌株，现有研究报道中，未见醋酸钙不动杆菌致病性的相关报道，且本发明筛选的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2筛选源为地下水，筛选环境安全性高，并且菌株为非选择性致病菌，菌株安全性可以保障。醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2菌株在抗生素污染浓度阈值内，能有效去除地下水中的磺胺二甲嘧啶，同时确保了菌株自生的安全性，高效性，为地下水生物修复技术提供一种新菌株。
本发明筛选的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2对磺胺二甲嘧啶的降解效率高，在温度25℃、pH值7.0、磺胺二甲嘧啶浓度5mg/L、接种量3％时，7d内降解率可达92.67％。质谱分析降解产物，结果检测到-SO2-和-NH-基团之间键断裂的主要产物2-氨基-4,6-二甲基嘧啶，以及化学氧化产物、光降解产物2-[N-(4-氨基苯基)氨基]-4,6-二甲嘧啶，通过目标m/z及光谱片段以及通过先前的研究来推断，部分为羟基化产物，如：C12H14N4O3S、C6H9N3O3S以及其他氨基苯磺酸，未产生乙酰化SAs物质，不会对环境造成二次污染。
附图说明
图1为WQ-D2菌株系统发育树。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式一株醋酸钙不动杆菌为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2020年12月21日，保藏编号为CCTCC NO：M 2020939。
本实施方式醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2是从北京市东南发展区地下水中分离、纯化得到的。具体方法为：抽取北京市东南发展区地下水监测井(60-80m)中的水样5L，低温保存带回实验室，5L水分装在10mL的无菌小管中4℃下保存。
好氧条件下，在富集培养基中添加一定量的磺胺二甲嘧啶对水样中的磺胺二甲嘧啶降解菌进行富集处理，操作如下：装液量为250mL的锥形瓶中加注140mL的液体富集培养基A(磺胺二甲嘧啶初始浓度为M)，再吸取10mL水样加注到液体富集培养基A中，将富集体系放置在37℃，150r·min-1的水浴摇床中震荡培养(避光处理)，以15d为一周期；冷冻离心得到第一周期的富集物，将磺胺二甲嘧啶的浓度提高至2M，重复上述操作，进行第二周期的富集；第三周期的磺胺二甲嘧啶浓度为3M。做4个重复平行实验，分别为磺胺二甲嘧啶初始浓度M分别为1mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和15mg·L-1。
分别用四个平行实验的第三周期的富集体系进行菌株筛选，吸取1mL富集液稀释至10-5、10-6梯度，分别吸取100uL稀释液涂布，在固体无机盐培养基(磺胺二甲嘧啶浓度为3M)上培养，划线分离得到的纯菌落在磺胺二甲嘧啶浓度为M的液体无机盐培养基上进行效果验证。最后分离、纯化得到单一菌株。
采用常规检测方法对菌株进行生理生化鉴定，菌株为革兰氏阴性菌前期呈现短杆状，小球状贯穿整个时期，无芽孢。在无机盐固体平板上培养基上48h后，菌落呈圆形、乳白色、表面略微凸起、不透明、略有黏性，菌落直径在0.5-1.5毫米之间。最适生长温度为25℃，pH为7.0，乳糖发酵为阴性，葡萄糖发酵为阴性，硝酸盐为阳性，柠檬酸盐为阴性，甲基红为阳性，接触酶为阳性，淀粉酶为阴性，氧化酶为阴性，伏-普为阴性。委托生工生物工程(上海)股份有限公司进行16S rRNA基因序列测定，引物为通用引物为27F和1492R。将获得的序列信息，输入NCBI数据库，通过BLAST程序对数据库中所有的序列进行同源性比对分析，结果发现目标菌株的16S序列信息与MN911371.1:26-1408Acinetobacter calcoaceticusstrain具有100％的相似性。
综上所述所述的菌株形态学特征、生理生化特征、16S rRNA序列特征，应属于不动杆菌属(Acinetobacter)，最终命名为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2。
具体实施方式二：本实施方式一株醋酸钙不动杆菌在降解水体磺胺类药物中的应用。
地下水中磺胺二甲嘧啶的检出浓度为4.12×10-4—2.69×10-2mg/L，根据风险熵(RQ)计算、评价标准(RQ<0.1为低风险，RQ>1为高风险，否则为中风险)分析，地下水中磺胺二甲嘧啶的风险熵为0.24<RQ<15，为中高风险污染物，长期富集风险更高，亟待处理。
本实施方式筛选的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2对磺胺二甲嘧啶的降解效率高，在温度25℃、pH值7.0、磺胺二甲嘧啶浓度5mg/L、接种量3％时，7d内降解率可达92.67％。质谱分析降解产物，结果检测到-SO2-和-NH-基团之间键断裂的主要产物2-氨基-4,6-二甲基嘧啶，以及化学氧化产物、光降解产物2-[N-(4-氨基苯基)氨基]-4,6-二甲嘧啶，通过目标m/z及光谱片段以及通过先前的研究来推断，部分为羟基化产物，如：C12H14N4O3S、C6H9N3O3S以及其他氨基苯磺酸，未产生乙酰化SAs物质，不会对环境造成二次污染。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二不同的是：磺胺类药物为磺胺二甲嘧啶。其他与具体实施方式二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三不同的是：醋酸钙不动杆菌降解水体中磺胺二甲嘧啶的方法为：将醋酸钙不动杆菌WQ-D2(Acinetobactercalcoaceticus)WQ-D2的菌悬液按照3％的接种量，接入受磺胺二甲嘧啶污染的地下水中，调节pH 7.0，温度25℃，培养7d；其中菌悬液的活菌数为8.00×10^8cfu/mL-8.12×10^8cfu/mL。其他与具体实施方式二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2的筛选方法为：抽取北京市东南发展区地下水监测井(60-80m)中的水样5L，低温保存带回实验室，5L水分装在10mL的无菌小管中4℃下保存。
好氧条件下，在富集培养基中添加一定量的磺胺二甲嘧啶对水样中的磺胺二甲嘧啶降解菌进行富集处理，操作如下：装液量为250mL的锥形瓶中加注140mL的液体富集培养基A(磺胺二甲嘧啶初始浓度为M)，再吸取10mL水样加注到液体富集培养基A中，将富集体系放置在37℃，150r·min-1的水浴摇床中震荡培养(避光处理)，以15d为一周期；冷冻离心得到第一周期的富集物，将磺胺二甲嘧啶的浓度提高至2M，重复上述操作，进行第二周期的富集；第三周期的磺胺二甲嘧啶浓度为3M。做4个重复平行实验，分别为磺胺二甲嘧啶初始浓度M分别为1mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和15mg·L-1
分别用四个平行实验的第三周期的富集体系进行菌株筛选，吸取1mL富集液稀释至10-5、10-6梯度，分别吸取100uL稀释液涂布，在固体无机盐培养基(磺胺二甲嘧啶浓度为3M)上培养。划线分离得到的纯菌落在磺胺二甲嘧啶浓度为M的液体无机盐培养基上进行效果验证。最后分离、纯化得到单一菌株。
液体富集培养基A：每升培养基中含有LB肉汤20g。
固体无机盐培养基：每升培养基中含有Na2CO30.11g，MgSO4·7H2O 0.06g，(NH4)2SO4 0.24g，KH2PO40.34g，Na2HPO4·12H2O 0.90g，CaCl20.005g，FeSO4·7H2O 0.0003g，琼脂20g，微量元素溶液1mL，其余为蒸馏水。
液体无机盐培养基：每升培养基中含有Na2CO30.11g，MgSO4·7H2O 0.06g，(NH4)2SO4 0.24g，KH2PO40.34g，Na2HPO4·12H2O 0.90g，CaCl20.005g，FeSO4·7H2O 0.0003g，微量元素溶液1mL，其余为蒸馏水。
微量元素溶液：每升微量元素溶液含有FeCl2·4H2O 1.5g，CoCl20.19g，MnSO40.1g，Na2MoO4·2H2O 0.024g，NiCl2·6H2O 0.025g，ZnCl20.07g，MnCl2·4H2O 0.006g，CuCl2·2H2O 0.002g，其余为蒸馏水。
具体实施方式六：本实施方式醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2的鉴定：
1、菌株形态鉴定
采用常规检测方法对菌株进行生理生化鉴定菌株为革兰氏阴性菌前期呈现短杆状，小球状贯穿整个时期，无芽孢。
在无机盐固体平板上培养基上48h后，菌落呈圆形、乳白色、表面略微凸起、不透明、略有黏性，菌落直径在0.5-1.5毫米之间。
生理生化特征：
最适生长温度为25℃，pH为7.0，乳糖发酵为阴性，葡萄糖发酵为阴性，硝酸盐为阳性，柠檬酸盐为阴性，甲基红为阳性，接触酶为阳性，淀粉酶为阴性，氧化酶为阴性，伏-普为阴性。
2、菌株16S rRNA基因序列特征：
委托生工生物工程(上海)股份有限公司进行16S rRNA基因序列测定，引物为通用引物为27F和1492R。获得菌株16S rRNA基因序列，DNA序列如SEQ ID NO：1所示，将获得的序列信息，输入NCBI数据库，通过BLAST程序对数据库中所有的序列进行同源性比对分析，构建的系统发育树如图1所示。结果发现目标菌株的16S序列信息与MN911371.1:26-1408Acinetobacter calcoaceticus strain具有100％的相似性。
综上所述所述的菌株形态学特征、生理生化特征、16S rRNA序列特征，应属于不动杆菌属(Acinetobacter)，最终命名为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2。
对本实施方式的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)WQ-D2在降解地下水中磺胺二甲嘧啶上的功能性验证：
试验1：Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2降解能力实验
Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2菌悬液母液的预制：
将Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2在固体选择培养基平板上画线纯化，挑取单菌落于液体富集培养基B中在37℃下进行24h的富集，收集10mL的菌悬液高速冷冻离心，用PBS缓冲液稀释，添加到液体选择培养基中在37℃下进行24h的富集，收集10mL的菌悬液高速冷冻离心，用PBS缓冲液稀释，添加到液体选择培养基中进行二次传代，重复以上工作，完成菌株的三次传代，得到Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2菌悬液母液；其中菌悬液的活菌数为8.00×10^8cfu/mL-8.12×10^8cfu/mL。
Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2降解基础培养基配制：
抗生素母液配方：磺胺二甲嘧啶0.01g，甲醇(GR级)10mL溶解。
液体选择培养基配方：每升培养基中含有Na2CO30.11g，MgSO4·7H2O 0.06g，(NH4)2SO40.24g，KH2PO40.34g，Na2HPO4·12H2O 0.90g，CaCl20.005g，FeSO4·7H2O 0.0003g，微量元素溶液1mL，10mg/mL的抗生素母液5mL，其余为蒸馏水。
固体选择培养基配方：每升培养基中含有Na2CO30.11g，MgSO4·7H2O 0.06g，(NH4)2SO40.24g，KH2PO40.34g，Na2HPO4·12H2O 0.90g，CaCl20.005g，FeSO4·7H2O 0.0003g，琼脂20g，微量元素溶液1mL，10mg/L的抗生素母液5mL，其余为蒸馏水。
液体富集培养基B配方：每升培养基中含有LB肉汤20g，10mg/L的抗生素母液5mL，其余为蒸馏水。
Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2降解能力实验：
正交实验设计，研究本发明的Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2降解磺胺二甲嘧啶的能力，向液体无机盐培养基中加入磺胺二甲嘧啶，然后接入Acinetobactercalcoaceticus WQ-D2菌悬液母液，培养体系为100mL，在正交条件下连续培养，每24h取样一次，监测磺胺二甲嘧啶残余量，连续检测7d，用一次性注射器在无菌条件下吸取2mL降解液，过0.22μm的滤膜(PTFE)于2mL棕色上样瓶中，用封口膜密封瓶口，置于4℃保存，待测，每组检测做三个平行。正交实验设计如表1：
表1 L9(34)正交试验表
Figure BDA0002915020390000071
磺胺二甲嘧啶标准曲线的绘制及残余量测定：
用甲醇(GR级)与磺胺二甲嘧啶(>99.8％)分别配制浓度为5.00、10.00、20.00、40.00、80.00、100.00mg/mL的标准液，用美国Waters公司HPLC进行色谱分析，进样量2mL，色谱柱C18，分析总时长7.5min，具体数据见表2：
表2标准溶液
Figure BDA0002915020390000072
由此得出标准曲线方程：y＝100373x+33216，R2＝0.9999。
从三个平行样中，每24h吸取10ml培养液，用旋转蒸发仪浓缩富集为2ml体积，过0.22μm滤膜，保存在2ml色谱上样瓶中，上机测试。按照标准曲线计算，在温度25℃、pH值6.0、磺胺二甲嘧啶浓度1mg/L、接种量1％时，7d内降解率可达98.14％。在温度25℃、pH值7.0、磺胺二甲嘧啶浓度5mg/L、接种量3％时，7d内降解率可达92.67％。参照地下水理化参数，水温为25℃左右，pH在7左右，因此在地下水的环境条件下，本实施例Acinetobactercalcoaceticus WQ-D2具有较高的降解率。
实施例2、LC-MS测定磺胺二甲嘧啶降解产物：
Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2菌悬液母液的预制：
将Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2在固体选择培养基平板上画线纯化，挑取单菌落于液体富集培养基B中在37℃下进行24h的富集，收集10mL的菌悬液高速冷冻离心，用PBS缓冲液稀释，添加到液体选择培养基中在37℃下进行24h的富集，收集10mL的菌悬液高速冷冻离心，用PBS缓冲液稀释，添加到液体选择培养基中进行二次传代，重复以上工作，完成菌株的三次传代，得到Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2菌悬液母液；其中菌悬液的活菌数为8.00×10^8cfu/mL-8.12×10^8cfu/mL。
Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2降解基础培养基配制：
抗生素母液配方：磺胺二甲嘧啶0.01g，甲醇(GR级)10mL溶解。
液体选择培养基配方：每升培养基中含有Na2CO30.11g，MgSO4·7H2O 0.06g，(NH4)2SO40.24g，KH2PO40.34g，Na2HPO4·12H2O 0.90g，CaCl20.005g，FeSO4·7H2O 0.0003g，微量元素溶液1mL，10mg/mL的抗生素母液5mL，其余为蒸馏水。
固体选择培养基配方：每升培养基中含有Na2CO30.11g，MgSO4·7H2O 0.06g，(NH4)2SO40.24g，KH2PO40.34g，Na2HPO4·12H2O 0.90g，CaCl20.005g，FeSO4·7H2O 0.0003g，琼脂20g，微量元素溶液1mL，10mg/L的抗生素母液5mL，其余为蒸馏水。
液体富集培养基B配方：每升培养基中含有LB肉汤20g，10mg/L的抗生素母液5mL，其余为蒸馏水。
向液体无机盐培养基中加入磺胺二甲嘧啶，磺胺二甲嘧啶的终浓度为5mg/L，然后接入Acinetobacter calcoaceticus WQ-D2菌悬液母液，接种量3％。培养体系为100mL，在温度25℃、pH值7.0条件下连续培养7d，做三个平行试验，从三个平行样中，每24h吸取10mL培养液，用旋转蒸发仪浓缩富集为2mL体积，过0.22μm滤膜，保存在2mL色谱上样瓶中，上机测试。
色谱条件：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18；(2.1*100mm，1.7um)；流动相：0.1％甲酸(A)-乙腈(B)，体积比为A：B＝75：25；梯度洗脱程序：0～0.5min，95％A，0.5～7.0min，95％～5％A，7.0～7.01min，5％～95％A，7.01～7.5min，95％A；柱温：30℃；进样体积2uL；流速0.4mL/min。
质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，采用正离子模式，扫描范围m/z：50-600；毛细管电压：3.0kV；离子源温度：150℃；去溶剂气流量：650L/h；去溶剂气温度：450℃；锥孔反吹气流量：150L/h；多反应监测(MRM)模式。
质谱分析结果检测到-SO2-和-NH-基团之间键断裂的主要产物2-氨基-4,6-二甲基嘧啶，以及化学氧化产物、光降解产物2-[N-(4-氨基苯基)氨基]-4,6-二甲嘧啶，通过目标m/z及光谱片段以及通过先前的研究来推断，部分为羟基化产物，如：C12H14N4O3S、C6H9N3O3S以及其他氨基苯磺酸，未产生乙酰化SAs物质，不会对环境造成二次污染。
序列表
<110>哈尔滨师范大学
<120>一株醋酸钙不动杆菌及其应用
<160> 3
<210> 1
<211> 1383
<212> DNA
<213>醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）
<400> 1
tcgagcggag agaggtagct tgctactgat cttagcggcg gacgggtgag taatgcttag 60
gaatctgcct attagtgggg gacaacattt cgaaaggaat gctaataccg catacgtcct 120
acgggagaaa gcaggggatc ttcggacctt gcgctaatag atgagcctaa gtcggattag 180
ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc gacgatctgt agcgggtctg agaggatgat 240
ccgccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat 300
tggacaatgg gcgcaagcct gatccagcca tgccgcgtgt gtgaagaagg ccttatggtt 360
gtaaagcact ttaagcgagg aggaggctac tttagttaat acctagagat agtggacgtt 420
actcgcagaa taagcaccgg ctaactctgt gccagcagcc gcggtaatac agagggtgca 480
agcgttaatc ggatttactg ggcgtaaagc gcgcgtaggc ggctaattaa gtcaaatgtg 540
aaatccccga gcttaacttg ggaattgcat tcgatactgg ttagctagag tgtgggagag 600
gatggtagaa ttccaggtgt agcggtgaaa tgcgtagaga tctggaggaa taccgatggc 660
gaaggcagcc atctggccta acactgacgc tgaggtgcga aagcatgggg agcaaacagg 720
attagatacc ctggtagtcc atgccgtaaa cgatgtctac tagccgttgg ggcctttgag 780
gctttagtgg cgcagctaac gcgataagta gaccgcctgg ggagtacggt cgcaagacta 840
aaactcaaat gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgatg 900
caacgcgaag aaccttacct ggccttgaca tagtaagaac tttccagaga tggattggtg 960
ccttcgggaa cttacataca ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt 1020
gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt ttccttattt gccagcgagt aatgtcggga 1080
actttaagga tactgccagt gacaaactgg aggaaggcgg ggacgacgtc aagtcatcat 1140
ggcccttacg gccagggcta cacacgtgct acaatggtcg gtacaaaggg ttgctaccta 1200
gcgataggat gctaatctca aaaagccgat cgtagtccgg attggagtct gcaactcgac 1260
tccatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagaatg ccgcggtgaa tacgttcccg 1320
ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtttgtt gcaccagaag tagctagcct 1380
aac 1383
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物27F的核苷酸序列。
<400> 2
AGAGTTTGAT CCTGGCTCAG 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物1492R核苷酸序列。
<400> 3
GGTTACCTTG TTACGACTT 19

Claims (3)

1.一株醋酸钙不动杆菌，其特征在于它为醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）WQ-D2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2020年12月21日，保藏编号为CCTCC NO：M 2020939。
2.如权利要求1所述的一株醋酸钙不动杆菌在降解水体磺胺二甲嘧啶中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述醋酸钙不动杆菌降解水体中磺胺二甲嘧啶的方法为：将醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus ）WQ-D2的菌悬液按照3%的接种量，接入受磺胺二甲嘧啶污染的地下水中，调节pH 7.0，温度25℃，培养7d；其中菌悬液的活菌数为8.00×108cfu/mL-8.12×108cfu/mL。
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