CN112625945A - 一种复合微生物除臭菌及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合微生物除臭菌及其制备方法，包括以下具体步骤：取污泥进行3代菌株富集培养；纯化优势菌株；进行镜检鉴定形态然后测序确定菌属/种，再进行拮抗试验，筛选出无拮抗作用的几株；进行优势菌株拮抗能力测试，得到拮抗能力有或无的检测菌；取经基因测定并互相无拮抗作用的菌液，单一扩大培养，保存作为生产菌种；进行增菌培养；制备复合微生物除臭菌剂。本发明具有成本低、使用简单、针对餐厨垃圾臭气、微生物降解高效、安全性高等特点。
Description
技术领域
本发明涉及餐厨垃圾中的生物处理领域，尤其涉及一种复合微生物除臭菌及其制备方法。
背景技术
随着我国经济发展，城市餐厨垃圾的产生量日益增加，在收集、转运、处理过程中，极容易腐败变质散发臭气。臭气含有硫化合物和含氮化合物，如硫化氢、硫醚类、吲哚类、醇类、氨气等，影响环境不利于健康。
目前，针对臭气的处理方法主要有化学法、物理法、生物法。化学方法主要通过强氧化剂将恶臭物质氧化减少臭气；物理法主要利用活性炭、沸石等多孔介质吸附达到除臭效果，但存在成本较高、降解不彻底，易造成二次污染，对环境或人体易造成伤害，不符合可持续发展原则。生物法是通过有效的功能菌株或生物酶作用，对恶臭物质进行降解或抑制。生物处理技术具成本效益好，无二次污染，符合可持续发展原则；缺点是现有的多种生物除臭剂，应用于餐厨垃圾臭气集气塔喷淋中，效果不明显，缺乏针对性。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明所解决的技术问题是提供一种针对餐厨垃圾的能有效去除臭气效果的生物方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种复合微生物除臭菌及其制备方法，包括以下具体步骤：
(一)取污泥进行3代菌株富集培养，将优选污泥添加到对应的培养基上进行接种；
所述对应的培养基包括：
酵母菌采用麦芽汁马铃薯培养基，其具体成分组成为：麦芽浸粉13g/L、马铃薯粉7g/L；
乳酸菌采用乳酸细菌培养基，其具体成分组成为：蛋白胨10g/L、牛肉粉 8g/、酵母粉4.0g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、吐温801g/L；
放线菌采用高氏培养基，其具体成分组成为：硝酸钾1g/L(请补充具体数值)、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钠0.5g/L、可溶性淀粉20g/L；
芽孢杆菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，其具体成分组成为：牛肉膏0.3g/L、蛋白胨1g/L、氯化钠0.5g/L、氢氧化钠0.5g/L；
光合培养基采用ATYP培养基，其具体成分组成为：磷酸二氢钾1g/L、氯化钙0.1g/L、碳酸氢钠3g/L、乙酸钠1g/L、氯化镁0.5g/L、氯化铵1g/L、氯化钠1g/L、微量元素1mL/L、维生素溶液1mL/L、琥珀酸钠1g/L、酵母提取物 0.5g/L、蛋白胨0.5g/L；
(二)纯化优势菌株，在所述对应的培养基中添加2％的琼脂制成固体培养基，经两次平板固体培养基分离后，挑取形态均匀良好的菌落再次放入所述对应的液体培养基中，进行增菌培养得到纯化优势菌株；
(三)优势菌株先进行镜检鉴定形态然后测序确定菌属/种，再进行拮抗试验，筛选出无拮抗作用的几株；
所述测序鉴定测序确定均属/种方法为：提取菌种的DNA，交付第三方基因检测公司进行16sRNA基因序列测定，经比对，确定各菌株的菌属/种；
所述拮抗试验方法为：利用营养固体培养基，取各菌株的液体培养液于营养固体培养基上相互培养，看是否出现拮抗作用；
(四)进行优势菌株拮抗能力测试，通过单一菌液培养-与培养基混合培养- 切割培养基-注入培养基-不同菌株划线-培养得到拮抗能力有或无的检测菌；
(五)取经基因测定并互相无拮抗作用的菌液，单一扩大培养，保存作为生产菌种；
(六)进行增菌培养，取互相无拮抗作用的酵母菌0.1-10％，乳酸菌0.1-10％，光合菌0.1-10％，芽孢杆菌0.1-10％，放线菌0.1-10％于营养培养基中进行增菌培养，测定pH在4.0以内，复合菌剂活菌数达到3*107CFU/mL，即增菌培养完成；
(七)制备复合微生物除臭菌剂，取等量复合菌剂、红糖含量大于50％的糖蜜按1：5质量比例与自来水混合均匀,置于室温中密闭发酵5-7天，测定pH 在4.0以内，活菌数达到3*107CFU/mL，即制得复合微生物除臭菌剂。
本发明的另一个技术方案是一种复合微生物除臭菌，由上述复合微生物制备方法制备而成。
与现有技术相比，采用本发明有益效果：
(1)对目前大部分微生物除臭液对臭气具有一定的降解能力但是缺乏针对性，本发明可针对餐厨垃圾处理中的混合气体及可应用于项目除臭塔中且对设备无特殊要求；
(2)本发明微生物除臭液能在好氧环境中生长且繁殖快，迅速成为优势菌群；
(3)复合除臭微生物效果良好，按比例混合基优化培养后，比单一菌株的分解臭气能力强。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例1:
一种复合微生物除臭菌及其制备方法，包括以下具体步骤：
(一)取污泥进行3代菌株富集培养，将优选污泥添加到对应的培养基上进行接种；
所述对应的培养基包括：
酵母菌采用麦芽汁马铃薯培养基，其具体成分组成为：麦芽浸粉13g/L、马铃薯粉7g/L；
乳酸菌采用乳酸细菌培养基，其具体成分组成为：蛋白胨10g/L、牛肉粉 8g/、酵母粉4.0g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、吐温801g/L；
放线菌采用高氏培养基，其具体成分组成为：硝酸钾1g/L、磷酸二氢钾 0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钠0.5g/L、可溶性淀粉20g/L；
芽孢杆菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，其具体成分组成为：牛肉膏0.3g/L、蛋白胨1g/L、氯化钠0.5g/L、氢氧化钠0.5g/L；
光合培养基采用ATYP培养基，其具体成分组成为：磷酸二氢钾1g/L、氯化钙0.1g/L、碳酸氢钠3g/L、乙酸钠1g/L、氯化镁0.5g/L、氯化铵1g/L、氯化钠1g/L、微量元素1mL/L、维生素溶液1mL/L、琥珀酸钠1g/L、酵母提取物 0.5g/L、蛋白胨0.5g/L；
(二)纯化优势菌株，在所述对应的培养基中添加2％的琼脂制成固体培养基，经两次平板固体培养基分离后，挑取形态均匀良好的菌落再次放入所述对应的液体培养基中，进行增菌培养得到纯化优势菌株；
(三)优势菌株先进行镜检鉴定形态然后测序确定菌属/种，再进行拮抗试验，筛选出无拮抗作用的几株；
所述测序鉴定测序确定均属/种方法为：提取菌种的DNA，交付第三方基因检测公司进行16sRNA基因序列测定，经比对，确定各菌株的菌属；
所述拮抗试验方法为：利用营养固体培养基，取各菌株的液体培养液于营养固体培养基上相互培养，看是否出现拮抗作用；
(四)进行优势菌株拮抗能力测试，通过单一菌液培养-与培养基混合培养- 切割培养基-注入培养基-不同菌株划线-培养得到拮抗能力有或无的检测菌；
(五)取经基因测定并互相无拮抗作用的菌液，单一扩大培养，保存作为生产菌种；
(六)进行增菌培养，取互相无拮抗作用的酵母菌0.1％，乳酸菌0.1％，光合菌0.1％，芽孢杆菌0.1％，放线菌0.1％于营养培养基中进行增菌培养，测定 pH在4.0以内，复合菌剂活菌数达到3*107CFU/mL，即增菌培养完成；
(七)制备复合微生物除臭菌剂，取等量复合菌剂、红糖含量大于50％的糖蜜按1：5质量比例与自来水混合均匀,置于室温中密闭发酵5-7天，测定pH 在4.0以内，活菌数达到3*107CFU/mL，即制得复合微生物除臭菌剂。
实施例2:
一种复合微生物除臭菌及其制备方法，包括以下具体步骤：
(一)取污泥进行3代菌株富集培养，将优选污泥添加到对应的培养基上进行接种；
所述对应的培养基包括：
酵母菌采用麦芽汁马铃薯培养基，其具体成分组成为：麦芽浸粉13g/L、马铃薯粉7g/L；
乳酸菌采用乳酸细菌培养基，其具体成分组成为：蛋白胨10g/L、牛肉粉 8g/、酵母粉4.0g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、吐温801g/L；
放线菌采用高氏培养基，其具体成分组成为：硝酸钾1g/L、磷酸二氢钾 0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钠0.5g/L、可溶性淀粉20g/L；
芽孢杆菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，其具体成分组成为：牛肉膏0.3g/L、蛋白胨1g/L、氯化钠0.5g/L、氢氧化钠0.5g/L；
光合培养基采用ATYP培养基，其具体成分组成为：磷酸二氢钾1g/L、氯化钙0.1g/L、碳酸氢钠3g/L、乙酸钠1g/L、氯化镁0.5g/L、氯化铵1g/L、氯化钠1g/L、微量元素1mL/L、维生素溶液1mL/L、琥珀酸钠1g/L、酵母提取物 0.5g/L、蛋白胨0.5g/L；
(二)纯化优势菌株，在所述对应的培养基中添加2％的琼脂制成固体培养基，经两次平板固体培养基分离后，挑取形态均匀良好的菌落再次放入所述对应的液体培养基中，进行增菌培养得到纯化优势菌株；
(三)优势菌株先进行镜检鉴定形态然后测序确定菌属/种，再进行拮抗试验，筛选出无拮抗作用的几株；
所述测序鉴定测序确定菌属/种方法为：提取菌种的DNA，交付第三方基因检测公司进行16sRNA基因序列测定，经比对，确定各菌株的菌属；
所述拮抗试验方法为：利用营养固体培养基，取各菌株的液体培养液于营养固体培养基上相互培养，看是否出现拮抗作用；
(四)进行优势菌株拮抗能力测试，通过单一菌液培养-与培养基混合培养- 切割培养基-注入培养基-不同菌株划线-培养得到拮抗能力有或无的检测菌；
(五)取经基因测定并互相无拮抗作用的菌液，单一扩大培养，保存作为生产菌种；
(六)进行增菌培养，取互相无拮抗作用的酵母菌5％，乳酸菌5％，光合菌5％，芽孢杆菌5％，放线菌5％于营养培养基中进行增菌培养，测定pH在4.0 以内，复合菌剂活菌数达到3*107CFU/mL，即增菌培养完成；
(七)制备复合微生物除臭菌剂，取等量复合菌剂、红糖含量大于50％的糖蜜按1：5质量比例与自来水混合均匀,置于室温中密闭发酵5-7天，测定pH 在4.0以内，活菌数达到3*107CFU/mL，即制得复合微生物除臭菌剂。
实施例3:
一种复合微生物除臭菌及其制备方法，包括以下具体步骤：
(一)取污泥进行3代菌株富集培养，将优选污泥添加到对应的培养基上进行接种；
所述对应的培养基包括：
酵母菌采用麦芽汁马铃薯培养基，其具体成分组成为：麦芽浸粉13g/L、马铃薯粉7g/L；
乳酸菌采用乳酸细菌培养基，其具体成分组成为：蛋白胨10g/L、牛肉粉 8g/、酵母粉4.0g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、吐温801g/L；
放线菌采用高氏培养基，其具体成分组成为：硝酸钾1g/L、磷酸二氢钾 0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钠0.5g/L、可溶性淀粉20g/L；
芽孢杆菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，其具体成分组成为：牛肉膏0.3g/L、蛋白胨1g/L、氯化钠0.5g/L、氢氧化钠0.5g/L；
光合培养基采用ATYP培养基，其具体成分组成为：磷酸二氢钾1g/L、氯化钙0.1g/L、碳酸氢钠3g/L、乙酸钠1g/L、氯化镁0.5g/L、氯化铵1g/L、氯化钠1g/L、微量元素1mL/L、维生素溶液1mL/L、琥珀酸钠1g/L、酵母提取物 0.5g/L、蛋白胨0.5g/L；
(二)纯化优势菌株，在所述对应的培养基中添加2％的琼脂制成固体培养基，经两次平板固体培养基分离后，挑取形态均匀良好的菌落再次放入所述对应的液体培养基中，进行增菌培养得到纯化优势菌株；
(三)优势菌株先进行镜检鉴定形态然后测序确定菌属/种，再进行拮抗试验，筛选出无拮抗作用的几株；
所述测序鉴定测序确定均属/种方法为：提取菌种的DNA，交付第三方基因检测公司进行16sRNA基因序列测定，经比对，确定各菌株的菌属；
所述拮抗试验方法为：利用营养固体培养基，取各菌株的液体培养液于营养固体培养基上相互培养，看是否出现拮抗作用；
(四)进行优势菌株拮抗能力测试，通过单一菌液培养-与培养基混合培养- 切割培养基-注入培养基-不同菌株划线-培养得到拮抗能力有或无的检测菌；
(五)取经基因测定并互相无拮抗作用的菌液，单一扩大培养，保存作为生产菌种；
(六)进行增菌培养，取互相无拮抗作用的酵母菌10％，乳酸菌10％，光合菌10％，芽孢杆菌10％，放线菌10％于营养培养基中进行增菌培养，测定pH 在4.0以内，复合菌剂活菌数达到3*107CFU/mL，即增菌培养完成；
(七)制备复合微生物除臭菌剂，取等量复合菌剂、红糖含量大于50％的糖蜜按1：5质量比例与自来水混合均匀,置于室温中密闭发酵5-7天，测定pH 在4.0以内，活菌数达到3*107CFU/mL，即制得复合微生物除臭菌剂。
本发明的复合除臭微生物效果良好，按比例混合基优化培养后，比单一菌株的分解臭气能力强。
为了更好的说明本发明的有益效果，进行现场投放应用测试：
采用臭气分析方法，实验结果由5位嗅味员共同评价及判定完成。因为在实际需除臭项目中，恶臭气体的主要成分浓度的变化十分复杂，无法对每种臭气成分进行分析，以实际感官评价作为结果分析，更具有实际参考性。
嗅味员将臭味等级按标准分为0-5级。
表1：恶臭强度分级
| 强度 | 指标 |
| 0 | 无味 |
| 1 | 勉强能感觉到气味 |
| 2 | 气味很弱但能分辨其性质 |
| 3 | 很容易感觉到气味 |
| 4 | 强烈的气味 |
| 5 | 无法忍受的强烈气味 |
表2：嗅味员判定结果
| 时间(Day) | 未处理前 | 处理后 |
| 1 | 4 | 1 |
| 2 | 4 | 1 |
| 3 | 4 | 2 |
由上表2可知，本发明分解臭气能力强。
与现有技术相比，采用本发明有益效果：
(1)对目前大部分微生物除臭液对臭气具有一定的降解能力但是缺乏针对性，本发明可针对餐厨垃圾处理中的混合气体及可应用于项目除臭塔中且对设备无特殊要求；
(2)本发明微生物除臭液能在好氧环境中生长且繁殖快，迅速成为优势菌群；
(3)复合除臭微生物效果良好，按比例混合基优化培养后，比单一菌株的分解臭气能力强。
以上结合实施例对本发明的实施方式做出了详细说明，但本发明不局限于所描述的实施方式。对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明的原理和精神的情况下，对这些实施方式进行各种变化、修改、替换和变型仍落入本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种复合微生物除臭菌制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
(一)取污泥进行3代菌株富集培养，将优选污泥添加到对应的培养基上进行接种；
(二)纯化优势菌株，在所述对应的培养基中添加2％的琼脂制成固体培养基，经两次平板固体培养基分离后，挑取形态均匀良好的菌落再次放入所述对应的液体培养基中，进行增菌培养得到纯化优势菌株；
(三)优势菌株先进行镜检鉴定形态然后测序确定菌属/种，再进行拮抗试验，筛选出无拮抗作用的几株；
(四)进行优势菌株拮抗能力测试，通过单一菌液培养-与培养基混合培养-切割培养基-注入培养基-不同菌株划线-培养得到拮抗能力有或无的检测菌；
(五)取经基因测定并互相无拮抗作用的菌液，单一扩大培养，保存作为生产菌种；
(六)进行增菌培养，取互相无拮抗作用的酵母菌0.1-10％，乳酸菌0.1-10％，光合菌0.1-10％，芽孢杆菌0.1-10％，放线菌0.1-10％于营养培养基中进行增菌培养，测定pH在4.0以内，复合菌剂活菌数达到3*107CFU/mL，即增菌培养完成；
(七)制备复合微生物除臭菌剂，取等量复合菌剂、红糖含量大于50％的糖蜜按1：5质量比例与自来水混合均匀，置于室温中密闭发酵5-7天，测定pH在4.0以内，活菌数达到3*107CFU/mL，即制得复合微生物除臭菌剂。
2.根据权利要求1所述的复合微生物除臭菌制备方法，其特征在于，步骤(一)中，所述对应的培养基包括：
酵母菌采用麦芽汁马铃薯培养基，其具体成分组成为：麦芽浸粉13g/L、马铃薯粉7g/L；
乳酸菌采用乳酸细菌培养基，其具体成分组成为：蛋白胨10g/L、牛肉粉8g/、酵母粉4.0g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、吐温80 1g/L；
放线菌采用高氏培养基，其具体成分组成为：硝酸钾1g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钠0.5g/L、可溶性淀粉20g/L；
芽孢杆菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，其具体成分组成为：牛肉膏0.3g/L、蛋白胨1g/L、氯化钠0.5g/L、氢氧化钠0.5g/L；
光合培养基采用ATYP培养基，其具体成分组成为：磷酸二氢钾1g/L、氯化钙0.1g/L、碳酸氢钠3g/L、乙酸钠1g/L、氯化镁0.5g/L、氯化铵1g/L、氯化钠1g/L、微量元素1mL/L、维生素溶液1mL/L、琥珀酸钠1g/L、酵母提取物0.5g/L、蛋白胨0.5g/L。
3.根据权利要求1所述的复合微生物除臭菌制备方法，其特征在于，步骤(三)中，所述测序鉴定测序确定菌属/种方法为：提取菌种的DNA，交付第三方基因检测公司进行16sRNA基因序列测定，经比对，确定各菌株的菌属/种。
4.根据权利要求1所述的复合微生物除臭菌制备方法，其特征在于，步骤(三)中，所述拮抗试验方法为：利用营养固体培养基，取各菌株的液体培养液于营养固体培养基上相互培养，看是否出现拮抗作用。
5.一种复合微生物除臭菌，其特征在于，采用权利要求1至5任一所述复合微生物除臭菌制备方法制备而成。
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| CN202011474361.1A CN112625945A (zh) | 2020-12-14 | 2020-12-14 | 一种复合微生物除臭菌及其制备方法 |
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|---|---|---|---|---|
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