CN112624877B - 一种茄科类果菜和单子叶作物叶面菌肥及制备方法与应用 - Google Patents

一种茄科类果菜和单子叶作物叶面菌肥及制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明创造性的提供一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥及其制备方法，采用具有良好发酵性能的新菌株Rhodoblastus acidophila PNSB‑AC CGMCC No.20881，通过特定的发酵方法与特定的组份，制备获得茄科类果菜和单子叶农作物叶面菌肥，能够有效的促进番茄、辣椒、草莓、小麦、谷子和水稻叶面喷施应用，该菌剂能够显著提高作物品质，解决因光照不足而造成的产量降低，对于农业种植领域具有广泛的开发价值。

Description

一种茄科类果菜和单子叶作物叶面菌肥及制备方法与应用
技术领域
本发明属于肥料技术领域，涉及一种微生物肥料的制备方法，具体涉及茄科类果菜叶面菌肥及其制备方法与应用的技术领域。
背景技术
在农业种植中，为了促进作物生长，多实用化肥进行养分补充，但大量使用化肥，易造成造成土壤板结，导致农植物产量下降。化肥利用率低，氮肥因为易挥发、流失，化肥大量使用使蔬菜瓜果品质大大下降。化肥一般成分比较单一，所以长期使用化肥必然导致土壤中所含养分趋于单一，易使作物营养失调，从而导致作物品质下降。同时，还会导致蔬菜中硝酸盐含量超标、土壤中有益菌及蚯蚓的大量死亡，化肥的长期低效施用，往往造成土壤中某些元素的过分积累和土壤理化性质的变化及环境的污染。
微生物菌肥能够在植物的根系周围形成了优势种群，抑制了其他有害菌的生命活动。快速分解土壤有机物质，促进土壤团粒的形成，且通过有益菌的活动能够疏松土壤，土壤的保肥、供肥、保水、供水及透气性都得到很好的调节。同时，分解土壤中的农药残留，固氮、解磷、解钾，提高作物品质，还能够达到生物防治病害的效果。
因此，寻找具有优良发酵性能且具有广谱的作物适用性的菌株制备微生物菌肥对于农业种植领域具有广泛的开发价值。
发明内容
针对现有技术中类似微生物菌肥存放活菌数较低且应用作物种类较单一的技术问题，本发明旨在创造性的提供一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥及其制备方法，采用对于动植物无害的嗜酸光合细菌类新菌株，通过特定的发酵方法与特定的组份，制备获得茄科类果菜和单子叶农作物叶面菌肥，能够有效的促进番茄、辣椒、草莓、小麦、谷子和水稻叶面喷施应用，该菌剂能够显著提高作物品质，解决因光照不足而造成的作物产量降低，对于农业种植领域具有广泛的开发价值。
本发明提供一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，具体具体的采用如下步骤制备获得：
(1)采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1ml，pH 5.0配制的液体培养基；微量元素SL-4母液成分(g/L):EDTA 0.5g,FeSO4﹒7H2O 0.2g,ZnSO4﹒7H2O0.01g,MnCl2﹒4H2O 0.003g,硼酸0.03g,六水氯化钴0.02g,二水氯化铜0.001g,六水氯化镍0.002g,二水钼酸钠0.003g,去离子水1L；
(2)将噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入步骤(1)中制备获得的液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养；
(3)将步骤(2)中的发酵菌液中依次加入鼠李糖脂0.5-1.5mg/L、壳聚糖1-5mg/L、黄腐酸0.75-1.75mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
优选的，发酵温度30℃、发酵时间5-8天、光照强度1000-2000lx
更优选的，发酵时间为7天。
优选的，鼠李糖脂加入量1mg/L
优选的，壳聚糖3mg/L
优选的，黄腐酸1.25mg/L
本发明中，具体提供一种经过鉴定属于嗜酸光合细菌类的新菌种噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC，CGMCC No.20881。菌株分离水样自新疆五家渠市梅花味精酸性废水排污沟，废水pH 4.5，采集底泥沉积物。该菌株能在pH 4.0和8.5时生长，氯化钠浓度0.5％至3％浓度时菌株活菌数较高，最适生长温度为30℃，该菌株能够在500至6000lx光强下生长，并且其活菌细胞色素在500-900nm范围内出现有4个特征峰，其属于典型紫色非硫光合细菌。
本发明根据新疆地理环境的特殊性，通过从新疆五家渠市梅花味精酸性废水排污沟中进行微生物菌种的培养、分离，筛选一大批优良菌种，并从中优选出一株编号为PNSB-AC的噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)，经微生物学分类与鉴定，属于嗜酸光合细菌属，该菌株最适生长条件为：温度30℃，最高生长温度为40℃，培养基为RCVBN培养基，参照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版)等对菌株进行形态学、生理生化试验，确定PNSB-AC菌株为嗜酸光合细菌属中成员，但是具有与常见的嗜酸光合细菌属成员菌种不同的特点，具有新菌种的特性。
菌株噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC在RCVBN固体培养基上，培养24h菌落可达2～4mm，灰白色，光滑，圆形，扁平，半透明，边缘整齐，革兰氏染色结果为G-。
进一步，本发明通过对上述菌种噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881基因测序，序列参见附后提供的SEQ ID NO:1所示，所得序列经常见网站进行比对分析，结果发现，菌株PNSB-AC的16S rRNA基因序列与Rhodoblastusacidophila(JN408837)相似率高达96.86％，菌株PNSB-AC与Rhodoblastus acidophilaDSM 137 NR 104756的亲缘关系最近(96.72％)。利用本领域常见采用的MEGA 5.0软件通过Neighbor-Joining方法，构建系统发育树。结果经比对分析发现，菌株PNSB-AC作为新菌种的支持率极高，在进化树中体现极好的稳定性，经过系列菌种鉴定可知该菌株PNSB-AC确定其为噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)新种，具有新菌种典型性的特点，从分类学角度暂命名为噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC。该新菌种已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期是2020年10月13日，保藏号是CGMCC No.20881。经微生物学鉴定暂命名为噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC。
进一步，本发明提供所述一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用。
所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用，所述的应用方式为叶面喷施。
所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用，所述的应用作物为番茄、辣椒、草莓、谷子、小麦、水稻。
所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用，每亩采用5L叶面菌肥加入30kg清水混合均匀进行番茄、辣椒、草莓、谷子叶面喷施。
所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用，每亩采用3L叶面菌肥进行小麦、水稻叶面喷施。
本发明重点是通过实验证明采用噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881按照本发明提供的技术方案进行茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的制备，在利用特定发酵条件的制备中创造性的通过实验证实制备的叶面菌肥具有高效地促进作物生长的特性，且在对于多种农作物种植中的应用中获得显著突出的技术效果。
通过实施本发明的具体的发明内容，可以达到以下的技术效果。
(1)通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥应用于番茄种植，土壤灌根和喷施光合细菌较对照组番茄平均每株增产40％，获得的番茄可溶性糖含量提升了106％，可溶性固形物含量提升了25％，总酸浓度提升了16％，维生素C含量提升了73％。
(2)通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥应用于辣椒种植，土壤灌根和喷施光合细菌较对照组辣椒平均每株增产20％，每亩干辣椒平均增产30％，经测算增收750元/亩。
(3)通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥应用于草莓种植，发病指数降低至0％，经测算平均每年可增收3万元；通过应用于谷子种植，每平方米产量较其它对照组显著增减6.5％，增产效果显著。
(4)通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥应用于水稻种植，在扬花期和灌浆期喷施两次，水稻增产8％显著高于对照组(p<0.05)，随化学肥料一起灌溉水稻，使水稻土壤活性得到了显著提升，土壤活力增加53％-153％。
(5)通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥应用于小麦种植，在扬花期和灌浆期喷施两次，与对照组相比能够显著提高小麦产量6.5％(p<0.05)，对于果树套种遮阴小麦在扬花期和灌浆期喷施两次，结果显示与对照组相比喷施本叶面菌肥的遮阴小麦的旗叶捕光能力(PIabs)在开花期提高了4.4％，灌浆期提高了5.1％，差异均显著(p<0.05)，可孕小穗数增加了8.09％，不孕小穗数降低了6.56％，穗粒数增加了2.6％，穗粒重增加了5.66％，籽粒产量提高了3.97％，以上数据与对照组相比差异均显著(p<0.05)，对于农业种植领域具有广泛的开发价值。
附图说明
图1所示为噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC菌株16S rRNA基因系统发育分析。
图2所示为噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC活菌细胞色素吸光峰。
图3所示为培养基起始pH对噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC活菌数的影响。
图4所示为盐度对噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC活菌的影响。
图5所示为温度对噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC活菌的影响。
图6所示为光照强度对噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC活菌的影响。
图7所示为应用于番茄种植效果图。
其中图A所示为番茄苗高、叶片数、胸径情况图；图B所示为番茄壮苗率情况图；图C所示为番茄产量情况图；
图8所示为应用于辣椒种植效果图。
其中图A所示为辣椒产量情况图；图B所示为干辣椒产量图；图C所示为经济效益情况图；
图9所示为应用于草莓种植效果图。
其中图A所示为草莓发病率情况图；图B所示为草莓增收情况图；
图10所示为应用于谷子种植效果图。
其中图A所示为草谷子产量情况图；图B所示为谷子10穗穗粒情况图；
图11所示为应用于水稻种植效果图。
其中图A所示为土壤亚硝酸还原酶情况图；图B所示为土壤酸性蛋白酶情况图；
图12所示为应用于小麦种植效果图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细描述，但本发明的方法不限于下述实施例。
本发明中采用的试剂为：KH2PO4、K2HPO4、NH4Cl、MgCl2﹒6H2O、CaCl2﹒2H2O、CH3COONa、CH3CH2COONa、酵母粉、微量元素SL-4母液、鼠李糖脂、壳聚糖、黄腐酸、琼脂。
主要仪器设备：超净工作台(SW-CJ-2FD)、灭菌锅(YXQ-LS-75)、紫外分光光度计(UV-2550)、pH仪(多参数测试仪S220)、电子天平(JY20002)、离心机(20PR-52)。
本发明中选用的所有材料、试剂和仪器都为本领域熟知的，但不限制本发明的实施，本发明中涉及到的％都为重量百分比，除非特别指出除外，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥
本发明提供一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，具体具体的采用如下步骤制备获得：
(1)采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1ml，pH 5.0配制的液体培养基；微量元素SL-4母液成分(g/L):EDTA 0.5g,FeSO4﹒7H2O 0.2g,ZnSO4﹒7H2O0.01g,MnCl2﹒4H2O 0.003g,硼酸0.03g,六水氯化钴0.02g,二水氯化铜0.001g,六水氯化镍0.002g,二水钼酸钠0.003g,去离子水1L；
(2)将噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入步骤(1)中制备获得的液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养；
(3)将步骤(2)中的发酵菌液中依次加入鼠李糖脂0.5-1.5mg/L、壳聚糖1-5mg/L、黄腐酸0.75-1.75mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
实施例二：嗜酸光合细菌的分离及特征分析
(1)嗜酸光合细菌分离
菌株分离水样自新疆五家渠市梅花味精酸性废水排污沟，废水pH4.5，采集底泥沉积物。利用富集培养法对紫色非硫嗜酸性光合细菌进行定向富集。富集培养基成分(1g/L)：KH2PO4 0.04g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.01g，CaCl2﹒2H2O 0.05g，CH3COONa 1g，微量元素SL-4母液1ml，复合维生素母液1ml，pH 5.0，25℃，光照强度2000lx，恒温培养7天，待培养基颜色变为红色后吸取菌体进行菌种分离。菌种分离培养基(RCVBN)(g/L)：KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Clg，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O 0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，琼脂7g，微量元素SL-4母液1ml(配方同上)，pH 5.0。将稀释的菌体涂布于RCVBN培养基后，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，25℃，光照强度2000lx，恒温培养，根据平板上菌落出现时间，大小，菌落形态进行菌落分离。
(2)菌株鉴定
挑取出单菌落进行平板纯化，然后对菌株进行16SrRNA基因测序分子，系统发育分析，鉴定结果如附图1所示。结果显示PNSB-AC菌株与Rhodoblastus acidophila(JN408837)相似率高达96.86％，并且与该菌模式菌株系统发育上归为一个分支，因此将其归类于Rhodoblastus acidophila，菌株编号PNSB-AC。
通过对菌株噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC活菌细胞色素吸光波长进行检测，测定结果如附图2所示，500-900nm范围内出现有4个特征峰，分别位于480nm、510nm、590nm和810nm处，其属于典型紫色非硫光合细菌细菌叶绿素a的吸光峰位置。
(3)性能测定
菌株噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC在不同起始pH条件下生长情况如附图3所示，该菌最佳生长pH为5.0-5.5，其生长随pH增加而降低，pH 3.5和9.0时其活性完全受到抑制，pH 4.0和8.5时能够生长，但活性只有最高活性的30％，pH 7.5时其活性还存有60％，因此该菌株属于嗜酸菌，总体喜欢比较酸性环境，但对碱具有一定耐受性。
菌株噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC在不同盐浓度条件下生长情况如附图4所示，在氯化钠浓度0.5％至3％浓度时菌株活菌数较高，1％-1.5％盐浓度条件下菌体生长活性最高，当盐浓度高于3.5％时菌体生长受到显著的影响，其活性下降了70％，当盐浓度大于4％以后其活性基本上完全受到抑制，菌体不生长。
菌株噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC在不同培养温度条件下生长情况如附图5所示，结果显示菌株最适生长温度为30℃，20-25℃时其活性较高，而温度超过40℃时菌株活性生长受到抑制，而当温度为45℃时菌体基本不生长。
光照强度对菌株噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC生长影响情况如附图6所示，结果显示，该菌株在500至6000lx光强下，菌株生长活性较高，其中以1000-2000lx光照强度下菌株生长性能最高，在弱光500lx时其生长性能也较高，表明其潜在的可以应用于高色度难透光的水体污染物降解。光照强度超过10000lx时其活性受到抑制，表明其细胞色素达到了光饱和，生长受到抑制。
实施例三：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的制备
采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O 0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1ml，pH 5.0配制的液体培养基；将噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养，发酵温度30℃、发酵时间5天、光照强度1000-2000lx；依次加入鼠李糖脂0.5mg/L、壳聚糖1mg/L、黄腐酸0.75mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
实施例四：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的制备
采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O 0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1ml，pH 5.0配制的液体培养基；将噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养，发酵温度30℃、发酵时间6天、光照强度1000-2000lx；依次加入鼠李糖脂0.75mg/L、壳聚糖2mg/L、黄腐酸1mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
实施例五：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的制备
采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O 0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1ml，pH 5.0配制的液体培养基；将噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养，发酵温度30℃、发酵时间7天、光照强度1000-2000lx；依次加入鼠李糖脂1mg/L、壳聚糖3mg/L、黄腐酸1.25mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
实施例六：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的制备
采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O 0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1ml，pH 5.0配制的液体培养基；将噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养，发酵温度30℃、发酵时间7天、光照强度1000-2000lx；依次加入鼠李糖脂1.25mg/L、壳聚糖4mg/L、黄腐酸1.5mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
实施例七：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的制备
采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O 0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1ml，pH 5.0配制的液体培养基；将噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养，发酵温度30℃、发酵时间8天、光照强度1000-2000lx；依次加入鼠李糖脂1.5mg/L、壳聚糖5mg/L、黄腐酸1.75mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
实施例八：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥质量
基于上述实施例三至实施例七中制备获得的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，对于菌肥液体的pH情况及喷施时在叶面成型情况进行观察。
(1)菌肥液体的pH情况
基于上述实施例三至实施例七中制备一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥分别标号1-5，对活菌数进行测定，并对采用pH计对pH值进行测定。测定情况如表1所示。
表1：叶面菌肥液体的pH测定情况
编号 pH值 活菌数(cfu/ml)
1号 5.5 0.95×10<sup>10</sup>
2号 5.4 0.98×10<sup>10</sup>
3号 5 1.23×10<sup>10</sup>
4号 4.9 1.20×10<sup>10</sup>
5号 4.8 1.21×10<sup>10</sup>
根据对实施例三至实施例七中提供的技术方案中菌株发酵后的活菌数进行测定，结果显示实施例五中提供的技术方案制备获得的3号叶面肥获得的活菌数具有最高水平，根据pH值测情况所示，五种叶面菌肥的液体pH值范围为4.8-5.5，根据菌株PNSB-AC筛选过程中，在不同起始pH条件下生长情况菌株生长情况，本发明提供的技术方案制备获得的叶面菌肥的液体pH值情况能够满足PNSB-AC菌株快速生长的pH环境。其中，3号叶面肥的液体pH环境最适宜PNSB-AC菌株快速生长。
(2)喷施时在叶面成型情况
基于上述实施例三至实施例七中制备获得的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥分别标号1-5，并在作物叶面喷施，观察成型情况，通过观察可知随着鼠李糖脂添加浓度的增加，制备获得叶面菌肥在作物叶面的成型情况越优，粘附时间越长，但出于对成本考虑，认为采用鼠李糖脂加入量1mg/L最优。
实施例九：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的应用
通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，通过应用于番茄种植，每亩采用5L叶面菌肥加入30kg清水混合均匀进行喷施，土壤灌根和喷施光合细菌较对照组番茄平均每株增产40％，获得的番茄可溶性糖含量提升了106％，可溶性固形物含量提升了25％，总酸浓度提升了16％，维生素C含量提升了73％；具体测定结果参见附图7。
实施例十：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的应用
通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，通过应用于辣椒种植，每亩采用5L叶面菌肥加入30kg清水混合均匀进行喷施，土壤灌根和喷施光合细菌较对照组辣椒平均每株增产20％，每亩干辣椒平均增产30％，经测算增收750元/亩；具体测定结果参见附图8。
实施例十一：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的应用
通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，通过应用于草莓种植，每亩采用5L叶面菌肥加入30kg清水混合均匀进行喷施，发病指数降低至0％，经测算平均每年可增收3万元；具体测定结果参见附图9。
实施例十二：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的应用
通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，通过应用于谷子种植，每亩采用5L叶面菌肥加入30kg清水混合均匀进行喷施，每平方米产量较其它对照组显著增减6.5％，增产效果显著；具体测定结果参见附图10。
实施例十三：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的应用
通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，通过应用于水稻种植，在扬花期和灌浆期喷施两次，用量3kg/亩，水稻增产8％显著高于对照组(p<0.05)，随化学肥料一起灌溉水稻，使水稻土壤活性得到了显著提升，土壤活力增加53％-153％，具体测定结果参见附图11。
实施例十四：一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥的应用
通过采用本发明提供的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，通过应用于小麦种植，在扬花期和灌浆期喷施两次，用量3kg/亩，与对照组相比能够显著提高小麦产量6.5％(p<0.05)；对于果树套种遮阴小麦在扬花期和灌浆期喷施两次，用量3kg/亩，结果显示与对照组相比喷施本叶面菌肥的遮阴小麦的旗叶捕光能力(PIabs)在开花期提高了4.4％，灌浆期提高了5.1％，差异均显著(p<0.05)，可孕小穗数增加了8.09％，不孕小穗数降低了6.56％，穗粒数增加了2.6％，穗粒重增加了5.66％，籽粒产量提高了3.97％，以上数据与对照组相比差异均显著(p<0.05)，对于农业种植领域具有广泛的开发价值。具体测定结果参见表2及附图12。
表2：应用于小麦种植效果测定
Figure GDA0003627573130000171
本发明提供的技术方案制备的一种茄科类果菜和单子叶作物的通过采用具有优良发酵性能且具有显著新菌株特征的噬酸柏拉红菌(Rhodoblastus acidophila)PNSB-ACCGMCC No.20881菌株进行发酵，配合特定浓度的鼠李糖脂、壳聚糖、黄腐酸，通过黄腐酸对溶液pH的调整作用，营造最佳的菌株存活环境，丰富叶面菌肥的营养成份；加入适宜浓度的鼠李糖脂，在获得最优的作物叶面的成型情况前提下，合理降低成本；复配特定浓度的壳聚糖，促进微量元素的聚集与吸收，最大限度促进作物微量元素吸收情况，最大化提升作物生长，从而显著的提升经济价值，对于农作物种植领域的发展具有巨大的潜在开发价值。
如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。
序列表
<110> 新疆农业科学院微生物应用研究所（中国新疆-亚美尼亚生物工程研究开发中心）
<120> 一种茄科类果菜和单子叶作物叶面菌肥及制备方法与应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1463
<212> DNA
<213> Rhodoblastus acidophila PNSB-AC
<400> 1
agtttgatcc tggctcagaa cgaacgctgg cggcaggcct aacacatgca agtcgaacgg 60
gcatagcaat atgtcagtgg cagacgcgta acgaagacgt cggtacatgc ccattgctac 120
ggaacaactc agggtatctt gagcatttac cggatatgcc tatcgaggga atgatttatc 180
gccgaaggag tggcccgcgt ccgattagct agttggtgag gtaatggctc accaaggcga 240
cgatcggtag ctggtctgag aggatgatca gccacattgg gactgagaca cggcccaaac 300
tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg gacaatgggc gcaagcctga tccagccatg 360
ccgcgtgagt gatgacggcc ctagggttgt aaagctcttt gacccacgtc gataatgacg 420
gtaatgggag aagaagcccc gcctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaaggggg 480
ctagcgttgt tcggatttac tgggcgtaaa gcgcacgtag gcggatcttt aagtcagggg 540
tgaaatgccg gagctcaact tcggaactgc ctttgatact ggagatcttg agttcgagag 600
aggtgagtgg aactgcgagt gtagaggtga aattcgtaga tattcgcaag aacaccagtg 660
gcgaaggcgg ctcactggct cgatactgac gctgaggtgc gaaagcgtgg ggagcaaaca 720
ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatggat gctagccgtt aggcagcttg 780
ctgcttagtg gcgcagctaa cgctttaagc atcccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt 840
aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa 900
gcaacgcgca gaaccttacc agcttttgac atgtcttgga cggatagcag agatgttatc 960
ttctcttcgg agccgagaac acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat 1020
gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcatcc aacgtcctta gttgcgttca ttaagttggc 1080
ctctctaggg agacttccgg tgataagcgg agaggaagct ctggatgacg tcaagtccac 1140
ttggcccttt caggctgggc tacacacgtg gtacaatgcc ggtgacaatc gcatgcgaaa 1200
ggccgacctc tagcaaatct caattaaccg tctcagttcg gattgtactc tgcaactcga 1260
gtgcatgaag gtggaatcgc tagttatcgc agatcagatc gctccggtga atacgttccc 1320
gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagttggc tttacccgaa ggcgtttcgc 1380
taaccgcaag gaggcagacg accacggtag ggtcagcgac tggggtgaag tcgtatcaag 1440
gtagccgtag gggaacctgc ggc 1463

Claims (8)

1.一种噬酸柏拉红菌（Rhodoblastus acidophila）PNSB-AC，其特征在于，所述的噬酸柏拉红菌（Rhodoblastus acidophila）PNSB-AC的菌种保藏号为CGMCC No.20881。
2.一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，其特征在于，具体的采用如下步骤进行制备：
(1)采用KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.3g，NH4Cl 0.1g，MgCl2﹒6H2O 0.2g，CaCl2﹒2H2O 0.5g，CH3COONa 1g，CH3CH2COONa 0.5g，酵母粉0.1g，微量元素SL-4母液1mL，pH5.0配制的液体培养基，所述的微量元素SL-4母液含有EDTA 0.5g，FeSO4﹒7H2O 0.2g，ZnSO4﹒7H2O 0.01g，MnCl2﹒4H2O 0.003g，硼酸0.03g，六水氯化钴0.02g，二水氯化铜0.001g，六水氯化镍0.002g，二水钼酸钠0.003g，去离子水1L；
(2)将噬酸柏拉红菌（Rhodoblastus acidophila）PNSB-AC CGMCC No.20881菌株种子液加入步骤(1)中制备获得的液体培养基中，使用厌氧培养罐，罐体顶层空气通入二氧化碳将空气排空，然后密封置于光照培养箱，恒温培养；
(3)将步骤(2)中的发酵菌液中依次加入鼠李糖脂0.5-1.5mg/L、壳聚糖1-5mg/L、黄腐酸0.75-1.75mg/L混合均匀，制备获得茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥。
3.如权利要求2所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，其特征在于发酵温度为30℃、发酵时间为5-8天、光照强度为1000-2000lx。
4.如权利要求2所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，其特征在于，发酵时间为7天。
5.如权利要求2所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥，其特征在于，鼠李糖脂加入量为1mg/L、壳聚糖的加入量为3mg/L、黄腐酸的加入量为1.25mg/L 。
6.如权利要求2至权利要求5任意一项所述一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用。
7.如权利要求6所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用，其特征在于，每亩采用5L叶面菌肥加入30kg清水混合均匀，利用无人机进行番茄、辣椒、草莓、谷子叶面喷施。
8.如权利要求6所述的一种茄科类果菜和单子叶作物的叶面菌肥在农作物种植中的应用，其特征在于，每亩采用3L叶面菌肥利用无人机进行小麦、水稻叶面喷施。
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