CN112602688B - 一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的试剂盒和方法 - Google Patents
一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的试剂盒和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112602688B CN112602688B CN202011240445.9A CN202011240445A CN112602688B CN 112602688 B CN112602688 B CN 112602688B CN 202011240445 A CN202011240445 A CN 202011240445A CN 112602688 B CN112602688 B CN 112602688B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- citrus red
- mites
- acaricide
- red spider
- female
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000488583 Panonychus ulmi Species 0.000 title claims abstract description 76
- GJUABKCEXOMRPQ-UHFFFAOYSA-N 1-[(2,5-dimethoxyphenyl)diazenyl]naphthalen-2-ol Chemical compound COC1=CC=C(OC)C(N=NC=2C3=CC=CC=C3C=CC=2O)=C1 GJUABKCEXOMRPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 75
- 239000000642 acaricide Substances 0.000 title claims abstract description 72
- 230000000895 acaricidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 66
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 241000238876 Acari Species 0.000 claims abstract description 35
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims abstract description 33
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 241000488581 Panonychus citri Species 0.000 claims abstract description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 claims abstract description 13
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000012795 verification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 abstract description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 16
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 12
- 239000005944 Chlorpyrifos Substances 0.000 description 9
- SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N chlorpyrifos Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=NC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- AWSZRJQNBMEZOI-UHFFFAOYSA-N 2-methoxyethyl 2-(4-tert-butylphenyl)-2-cyano-3-oxo-3-[2-(trifluoromethyl)phenyl]propanoate Chemical compound C=1C=C(C(C)(C)C)C=CC=1C(C#N)(C(=O)OCCOC)C(=O)C1=CC=CC=C1C(F)(F)F AWSZRJQNBMEZOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 description 8
- 239000005653 Bifenazate Substances 0.000 description 8
- 239000005655 Cyflumetofen Substances 0.000 description 8
- 239000005897 Etoxazole Substances 0.000 description 8
- ZSBXGIUJOOQZMP-UHFFFAOYSA-N Isomatrine Natural products C1CCC2CN3C(=O)CCCC3C3C2N1CCC3 ZSBXGIUJOOQZMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZSBXGIUJOOQZMP-JLNYLFASSA-N Matrine Chemical compound C1CC[C@H]2CN3C(=O)CCC[C@@H]3[C@@H]3[C@H]2N1CCC3 ZSBXGIUJOOQZMP-JLNYLFASSA-N 0.000 description 8
- 239000005663 Pyridaben Substances 0.000 description 8
- 239000005664 Spirodiclofen Substances 0.000 description 8
- 239000005931 Spirotetramat Substances 0.000 description 8
- VHLKTXFWDRXILV-UHFFFAOYSA-N bifenazate Chemical compound C1=C(NNC(=O)OC(C)C)C(OC)=CC=C1C1=CC=CC=C1 VHLKTXFWDRXILV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IXSZQYVWNJNRAL-UHFFFAOYSA-N etoxazole Chemical compound CCOC1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C1N=C(C=2C(=CC=CC=2F)F)OC1 IXSZQYVWNJNRAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229930014456 matrine Natural products 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- DWFZBUWUXWZWKD-UHFFFAOYSA-N pyridaben Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1CSC1=C(Cl)C(=O)N(C(C)(C)C)N=C1 DWFZBUWUXWZWKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- DTDSAWVUFPGDMX-UHFFFAOYSA-N spirodiclofen Chemical compound CCC(C)(C)C(=O)OC1=C(C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)C(=O)OC11CCCCC1 DTDSAWVUFPGDMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- CLSVJBIHYWPGQY-GGYDESQDSA-N spirotetramat Chemical compound CCOC(=O)OC1=C(C=2C(=CC=C(C)C=2)C)C(=O)N[C@@]11CC[C@H](OC)CC1 CLSVJBIHYWPGQY-GGYDESQDSA-N 0.000 description 8
- ZYHMJXZULPZUED-UHFFFAOYSA-N propargite Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1OC1C(OS(=O)OCC#C)CCCC1 ZYHMJXZULPZUED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 6
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 239000002420 orchard Substances 0.000 description 5
- IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 5u8924t11h Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O3)C=C[C@H](C)[C@@H](C(C)C)O4)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C.C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 4
- 229950008167 abamectin Drugs 0.000 description 4
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 4
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 4
- RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N avermectin B1a Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 241000273311 Aphis spiraecola Species 0.000 description 2
- 241000488585 Panonychus Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- WCXDHFDTOYPNIE-RIYZIHGNSA-N (E)-acetamiprid Chemical compound N#C/N=C(\C)N(C)CC1=CC=C(Cl)N=C1 WCXDHFDTOYPNIE-RIYZIHGNSA-N 0.000 description 1
- 239000005875 Acetamiprid Substances 0.000 description 1
- 241000239223 Arachnida Species 0.000 description 1
- 241000254127 Bemisia tabaci Species 0.000 description 1
- 239000005874 Bifenthrin Substances 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N Ecdysone Natural products O=C1[C@H]2[C@@](C)([C@@H]3C([C@@]4(O)[C@@](C)([C@H]([C@H]([C@@H](O)CCC(O)(C)C)C)CC4)CC3)=C1)C[C@H](O)[C@H](O)C2 UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N 0.000 description 1
- 241000851181 Eutetranychus orientalis Species 0.000 description 1
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 1
- 241000206753 Gloiopeltis Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 206010020710 Hyperphagia Diseases 0.000 description 1
- 206010021033 Hypomenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000218231 Moraceae Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 241001093501 Rutaceae Species 0.000 description 1
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 description 1
- 241001454295 Tetranychidae Species 0.000 description 1
- YASYVMFAVPKPKE-UHFFFAOYSA-N acephate Chemical compound COP(=O)(SC)NC(C)=O YASYVMFAVPKPKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001467 acupuncture Methods 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N alpha-Ecdysone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(CCC3(C(C(C(O)CCC(C)(C)O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- OMFRMAHOUUJSGP-IRHGGOMRSA-N bifenthrin Chemical compound C1=CC=C(C=2C=CC=CC=2)C(C)=C1COC(=O)[C@@H]1[C@H](\C=C(/Cl)C(F)(F)F)C1(C)C OMFRMAHOUUJSGP-IRHGGOMRSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N ecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@H]([C@H](O)CCC(C)(C)O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 208000022530 polyphagia Diseases 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000004557 technical material Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01M—CATCHING, TRAPPING OR SCARING OF ANIMALS; APPARATUS FOR THE DESTRUCTION OF NOXIOUS ANIMALS OR NOXIOUS PLANTS
- A01M1/00—Stationary means for catching or killing insects
- A01M1/20—Poisoning, narcotising, or burning insects
- A01M1/2005—Poisoning insects using bait stations
- A01M1/2011—Poisoning insects using bait stations for crawling insects
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种快速测定不同区域与寄主植物上柑桔红蜘蛛田间种群对杀螨剂的敏感性的试剂盒和方法。A、从同一地域田间随机选取5个植株采集柑桔红蜘蛛成螨，用毛笔挑取柑桔红蜘蛛敏感品系雌成螨转移到豆叶上，放入装有梯度浓度的杀螨剂的离心管，晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂。取出后，培养观察1h并计算死亡率，绘制毒力回归曲线，获得毒力回归方程，计算得到柑桔红蜘蛛敏感品系对杀螨剂的LC99，并得到2*LC99，用2*LC99作为诊断剂量备选浓度，按其浓度大小前后设置相应的浓度梯度进行验证试验，选取柑桔红蜘蛛死亡率为100％的剂量值作为诊断剂量；B、用毛笔挑取待测地的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入含有诊断剂量的杀螨剂的离心管晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，取出后，培养观察1h，并计算死亡率判定待测地的柑桔红蜘蛛对杀螨剂的敏感性。
Description
技术领域
本发明属于害虫防治领域，具体涉及一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的试剂盒和方法。
背景技术：
柑桔红蜘蛛Panonychus citri(McGregor)隶属于蛛形纲(Arachnida)、蜱螨目(Acarina)、叶螨科(Tetranychidae)、全爪螨属(Panonychus)(Mcgregor,1948)，又称为柑桔全爪螨、瘤皮红蜘蛛，属于完全变态类螨虫。柑桔红蜘蛛是一种世界性分布的多食性害螨，主要分布在亚洲、欧洲、非洲、南美洲等柑桔产地，可取食芸香科、豆科和桑科等112种寄主植物，但主要以柑桔类果树为主为害(A.Migeon et al.,2012)。柑桔红蜘蛛主要以成螨、若螨或者幼螨的口针刺吸食叶片、嫩枝和果实的汁液，被害的叶片形成白色斑点，叶背面布满蜕皮壳，造成大量落叶，成熟果实出现淡黄色斑点，果形变小，柑桔质量和产量均下降(刘映红等,1995；梁声侃等,2014；Van Leeuwen et al.,2015)。柑桔红蜘蛛为害较为严重的是长江上中游、华南及江南大部分地区(冷峰等,2008)。为有效的控制柑桔红蜘蛛的田间危害，需要明确其对常用杀螨剂的敏感性，以便于更科学、更精准的选药和用药。
近年来，一种更为简便的研究病虫害敏感性的方法逐渐受到研究人员的重视，即为诊断剂量法。王少丽等人开发了快速检测杀虫剂对烟粉虱毒力的试剂盒，张润祥等人采用诊断剂量法开发了快速测定黄蚜对联苯菊酯和啶虫脒敏感性的诊断试剂盒，张燕宁、张兰等人采用诊断剂量法开发了快速测定瓜蚜对毒死蜱和乙酰甲胺磷敏感性的诊断试剂盒。高希武等人采用诊断剂量法开发了快速测定禾谷缢管蚜对不同药剂的抗性水平。
诊断剂量法相对于传统的生物测定法更加简便。但是，在现有的相关技术方面未见采用诊断剂量法研究柑桔红蜘蛛对不同杀螨剂敏感性的报道。现有常用玻片浸渍法和浸叶法等生物测定法，通过比较田间种群和敏感种群对常用杀螨剂的致死中浓度(LC50)的区别，来确定其敏感性。但是这些方法存在如下问题：一是专业技术性强；二是工作量大；三是耗费时间较长，不能及时为指导用药提供依据。为指导田间更科学、更精准用药，增强其实用性和便捷性，供基层科技人员使用，急需研究了快速测定柑桔红蜘蛛对不同杀螨剂敏感性的方法，并开发了诊断试剂盒。
发明内容：
本发明的目的是提供一种实用性强，便捷性高，无需专业人员操作的快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的方法，其为指导基层科技人员在田间更科学、更精准用药提供了指导。
本发明的快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的方法，包括以下步骤：
A、诊断剂量的确定：用毛笔挑取柑桔红蜘蛛敏感品系雌成螨转移到豆叶上，放入装有梯度浓度的杀螨剂的离心管，轻轻晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率，绘制毒力回归曲线，获得毒力回归方程，计算得到柑桔红蜘蛛敏感品系对杀螨剂的LC99，并得到2*LC99，用2*LC99作为诊断剂量备选浓度，按其浓度大小前后设置相应的浓度梯度进行验证试验，选取柑桔红蜘蛛死亡率为100％的剂量值作为诊断剂量；
B、测定敏感性：用毛笔挑取待测地的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入含有诊断剂量的杀螨剂的离心管轻轻晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率，判定待测地的柑桔红蜘蛛对杀螨剂的敏感性。
优选，所述的步骤A的用毛笔挑取柑桔红蜘蛛敏感品系雌成螨转移到豆叶上，放入装有梯度浓度的杀螨剂的离心管中轻轻晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率是用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛敏感品系雌成螨转移到豆叶上，放入装有梯度浓度的杀螨剂的离心管中轻轻晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，置于光照培养箱中，温度：25℃±1，湿度：70％，光周期L:D＝14h:10h，1h后用便携式放大镜观察，计算死亡率。
优选，所述的步骤B的用毛笔挑取待测地的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入含有诊断剂量的杀螨剂的离心管中轻轻晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率是用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入含有诊断剂量的杀螨剂的离心管中5～10s，使虫体接触杀螨剂，1h后用便携式放大镜观察，计算死亡率。
所述的判定待测地的柑桔红蜘蛛对杀螨剂的敏感性，当死亡率：≥95％，为敏感种群；死亡率：88％≤X＜95％；为敏感性下降种群；死亡率：＜88％，为非敏感性种群。
本发明的第二个目的是提供一种快速测定柑桔红蜘蛛对不同杀螨敏感性的诊断试剂盒，其含有离心管、干净新鲜的豆叶、便携式放大镜、毛笔，离心管中装有诊断剂量浓度的杀螨剂。
所述的离心管优选为50ml离心管(长10cm，宽2.8cm)。
所述的毛笔是0号毛笔。
所述的豆叶是黄豆叶(7日龄，长7cm，宽3cm)。
本发明提供了一种更快速、更科学、更精准、更简单测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的诊断试剂盒和方法，使用该试剂盒，能在1小时内快速测定和判断柑桔红蜘蛛对该杀螨剂的敏感性，为指导田间科学用药提供简单便捷的用具和方法。
附图说明：
图1是不同杀螨剂2*LC99对应死亡率拟合曲线图。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
本实施例的快速测定柑桔红蜘蛛杀螨敏感性的诊断试剂盒有50ml塑料离心管、干净新鲜的豆叶、便携式放大镜(60倍)、0号毛笔构成。所述的塑料离心管中装有相应诊断剂量浓度的杀螨剂。
本发明的快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的诊断试剂盒的使用方法是：将准备好的杀螨剂的诊断试剂盒带到田间，用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入装有药液(杀螨剂)的塑料离心管中5-10s，1h后用便携式放大镜观察，并计算死亡率。
1、离心管中药液的浓度及用量试验
试验药剂：99.2％毒死蜱(Chlorpyrifos)原粉、99％螺虫乙酯(Spirotetramat)原粉、99％阿维菌素(Abamectin)原粉、98％螺螨酯(Spirodiclofen)原粉、97％乙螨唑(Etoxazole)原粉、99％哒螨灵(Pyridaben)原粉、99％联苯肼酯(Bifenazate)原粉、90％炔螨特(Propargite)原液、96％丁氟螨酯(Cyflumetofen)原粉、15％苦参碱(Matrine)液体。
2、试验种群及材料
柑桔红蜘蛛敏感品系(SS)：在室内不接触任何药剂的情况下在健康的柑橘苗上进行连续饲养。饲养条件：温度25±1℃，相对湿度60±10％，光周期L:D＝14：10。
柑桔红蜘蛛抗性品系(R)：田间采集。
供试昆虫：柑桔红蜘蛛Panonychus citri(McGregor)。
敏感品系(S)：采自华南农业大学没有接触过药剂的柑橘红蜘蛛。
抗性品系(R)：增城种群(Zengcheng，ZC)采自广州市增城区果园(东经113°49′6″，北纬23°23′47″)；从化种群(Conghua，CH)采自广州市从化区果园(东经113°47′55″，北纬23°45′19″)；杨村种群(Yangcun,YC)：采自惠州市杨村果园(东经114°28′16″，北纬23°25′52″)；山前种群(Shanqian,SQ)：采自惠州市山前果园(东经114°19′41″，北纬23°21′45″)；河源种群(Heyuan,HY)：采自河源市东源果园(东经114°45′43″，北纬24°5′50″)。以上所有柑桔红蜘蛛均于2019年10-12月份采集。
供试试剂：丙酮、0.1％TW-80溶液。
供试靶标作物：柑橘树。
供试的害虫：柑桔红蜘蛛。
3、试验方法
3.1诊断剂量的确定
通过浸渍法测定杀螨剂对柑桔红蜘蛛敏感品系的毒力，利用独立回归方程计算柑桔红蜘蛛死亡率在99％时所对应的剂量LC99，用2*LC99作为诊断剂量备选浓度，按其浓度大小前后设置相应的浓度梯度进行验证试验，选取柑桔红蜘蛛死亡率为100％的剂量值作为诊断剂量。并且利用设置好的浓度测出的平均死亡率拟合出一条曲线，将2*LC99浓度值代入曲线中查看其死亡率，比较验证实际的死亡率，进一步验证2*LC99浓度梯度设置的可靠性。
3.2具体操作
将杀螨剂原药溶解于丙酮中配成母液，然后用质量分数0.1％TW-80水溶液将母液稀释成不同的浓度梯度，从稀释好的药液中取10mL放入50mL的塑料离心管中用于毒力测定。选取大小一致的柑桔红蜘蛛雌成螨25头，将其转移到豆叶上，5分钟后将带有柑桔红蜘蛛雌成螨的豆叶放入塑料离心管中，轻轻晃动5秒后取出，将虫体及其周围多余的药液用吸水纸迅速吸干，置于光照培养箱中(温度：25℃±1，湿度：70％，光周期L:D＝14h:10h)，1h后于便携式放大镜下观察柑桔红蜘蛛死亡个数，计算死亡率，绘制毒力回归曲线。每个样品每个浓度三个重复。不同杀螨剂浓度设置如下表1。
表1不同杀螨剂浓度设置
3.2.1诊断剂量的确定：根据毒力回归方程，计算得到柑桔红蜘蛛敏感品系对杀螨剂的LC99，并得到2*LC99，用2*LC99作为诊断剂量备选浓度，按其浓度大小前后设置相应的浓度梯度进行验证试验，选取柑桔红蜘蛛死亡率为100％的剂量值作为诊断剂量。并且利用设置好的浓度测出的平均死亡率拟合出一条曲线，将2*LC99浓度值带入曲线中查看其死亡率，比较验证实际的死亡率，进一步验证2*LC99浓度梯度设置的可靠性。
3.2.3诊断试剂盒敏感性等级确定：运用生物测定法和诊断剂量法测定相同状态下的柑桔红蜘蛛，以生物测定的结果为制定标准制定出对柑桔红蜘蛛评价标准的敏感性级别。
3.3实验结果
3.3.1毒力测定结果：不同杀螨剂对柑桔红蜘蛛的毒力见表2。
表2不同杀螨剂对柑桔红蜘蛛敏感品系的毒力测定结果
3.3.2诊断剂量的确定
测定了杀螨剂对柑桔红蜘蛛敏感品系的毒力，结果见表2。利用独立回归方程计算柑桔红蜘蛛死亡率在99％时所对应的剂量LC99，用2*LC99作为诊断剂量备选浓度，按其浓度大小前后设置相应的浓度梯度进行验证试验，选取柑桔红蜘蛛死亡率为100％的剂量值作为诊断剂量。不同杀螨剂诊断剂量浓度梯度设置见表3。不同杀螨剂2*LC99对应死亡率拟合曲线图如图1所示，不同杀螨剂诊断剂量室内验证试验见表4。不同杀螨剂诊断剂量见表5。
表3不同杀螨剂诊断剂量浓度梯度设置
表4不同杀螨剂诊断剂量室内验证试验
表5不同杀螨剂对柑桔红蜘蛛快速测定的诊断剂量
应用例1：
本实施例的快速测定柑桔红蜘蛛对不同杀螨敏感性的诊断试剂盒有50ml塑料离心管、干净新鲜的豆叶、便携式放大镜、0号毛笔构成。所述的离心管中装有相应诊断剂量浓度的药液(表5)。
将准备好的杀螨剂的诊断试剂盒带到田间，用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入装有药液的塑料离心管中，轻轻晃动5秒后取出，将虫体及其周围多余的药液用吸水纸迅速吸干，1h后用便携式放大镜观察其死亡率。
1、2020年7月10日，用快速测定柑桔红蜘蛛对不同杀螨敏感性的诊断试剂盒检测了河源市东源县柠檬现代产业园柑橘树上的柑桔红蜘蛛的敏感性，用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入装有药液的塑料离心管中，轻轻晃动5秒后取出，将虫体及其周围多余的药液用吸水纸迅速吸干，1h后用便携式放大镜观察其死亡率。结果发现：对阿维菌素的平均死亡率为86.68％；对丁氟螨酯的平均死亡率为94.68％；对联苯肼酯的平均死亡率为88.00％；对乙螨唑的平均死亡率为68.00％；对螺虫乙酯的平均死亡率为68.00％；对螺螨酯的平均死亡率为81.32％；对炔螨特的平均死亡率为57.32％；对哒螨灵的平均死亡率为94.68％；对毒死蜱的平均死亡率为78.68％；对苦参碱的平均死亡率为98.68％。检测结果表明，该地区柑桔红蜘蛛对丁氟螨酯、哒螨灵和苦参碱处于敏感状态；该地区柑桔红蜘蛛对阿维菌素、联苯肼酯、毒死蜱和螺螨酯的敏感性下降；该地区柑桔红蜘蛛对乙螨唑、螺虫乙酯、炔螨特已产生抗性。所以该地区可以继续使用丁氟螨酯、哒螨灵和苦参碱防治该地区的柑桔红蜘蛛。使用阿维菌素、联苯肼酯、毒死蜱和螺螨酯防治柑桔红蜘蛛是需要一定的时间间隔或者合理搭配其他药剂。但是由于该地区柑桔红蜘蛛对乙螨唑、螺虫乙酯和炔螨特已产生抗性，所以应该停止使用。
2、2020年7月28日，用田间快速检测试剂盒检测了惠州市博罗县杨村柑橘园上柑桔红蜘蛛的敏感性，用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入装有药液的塑料离心管中，轻轻晃动5秒后取出，将虫体及其周围多余的药液用吸水纸迅速吸干，1h后用便携式放大镜观察其死亡率。结果发现：对阿维菌素的平均死亡率为82.68％；对丁氟螨酯的平均死亡率为96.00％；对联苯肼酯的平均死亡率为97.32％；对乙螨唑的平均死亡率为54.68％；对螺虫乙酯的平均死亡率为68％；对螺螨酯的平均死亡率为85.32％；对炔螨特的平均死亡率为54.68％；对哒螨灵的平均死亡率为96.00％；对毒死蜱的平均死亡率为82.68％；对苦参碱的平均死亡率为97.32％。检测结果表明，该地区柑桔红蜘蛛对丁氟螨酯、哒螨灵、联苯肼酯和苦参碱处于敏感状态；该地区柑桔红蜘蛛对阿维菌素、毒死蜱和螺螨酯的敏感性下降；该地区柑桔红蜘蛛对乙螨唑、螺虫乙酯和炔螨特已产生抗性。所以该地区可以继续使用丁氟螨酯、哒螨灵、联苯肼酯和苦参碱防治该地区的柑桔红蜘蛛。使用阿维菌素、毒死蜱和螺螨酯防治柑桔红蜘蛛是需要一定的时间间隔或者合理搭配其他药剂。但是由于该地区柑桔红蜘蛛对乙螨唑、螺虫乙酯和炔螨特已产生抗性，所以应该停止使用。
Claims (3)
1.一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、诊断剂量的确定：用毛笔挑取柑桔红蜘蛛敏感品系雌成螨转移到豆叶上，放入装有梯度浓度的杀螨剂的离心管，晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率，绘制毒力回归曲线，获得毒力回归方程，计算得到柑桔红蜘蛛敏感品系对杀螨剂的LC99，并得到2*LC99，用2*LC99作为诊断剂量备选浓度，按其浓度大小前后设置相应的浓度梯度进行验证试验，选取柑桔红蜘蛛死亡率为100％的剂量值作为诊断剂量；
B、测定敏感性：用毛笔挑取待测地的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入含有诊断剂量的杀螨剂的离心管晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率，判定待测地的柑桔红蜘蛛对杀螨剂的敏感性；
所述的判定待测地的柑桔红蜘蛛对杀螨剂的敏感性，当死亡率：≥95％，为敏感种群；死亡率：88％≤X＜95％；为敏感性下降种群；死亡率：＜88％，为非敏感种群。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤A的用毛笔挑取柑桔红蜘蛛敏感品系雌成螨转移到豆叶上，放入装有梯度浓度的杀螨剂的离心管中晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率是用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛敏感品系雌成螨转移到豆叶上，放入装有梯度浓度的杀螨剂的离心管中晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，置于光照培养箱中，温度：25℃±1，湿度：70％，光周期L:D＝14h:10h，1h后用便携式放大镜观察，计算死亡率。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤B的用毛笔挑取待测地的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入含有诊断剂量的杀螨剂的离心管中晃动5～10s，使虫体接触杀螨剂，培养观察并计算死亡率是用0号毛笔挑取25头大小一致的柑桔红蜘蛛雌成螨转移到豆叶上，放入含有诊断剂量的杀螨剂的离心管中5～10s，使虫体接触杀螨剂，1h后用便携式放大镜观察，计算死亡率。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011240445.9A CN112602688B (zh) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | 一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的试剂盒和方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011240445.9A CN112602688B (zh) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | 一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的试剂盒和方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112602688A CN112602688A (zh) | 2021-04-06 |
| CN112602688B true CN112602688B (zh) | 2022-03-15 |
Family
ID=75224566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011240445.9A Active CN112602688B (zh) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | 一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的试剂盒和方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112602688B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62145004A (ja) * | 1985-12-19 | 1987-06-29 | Yamamoto Noyaku Kk | 抵抗性発達を抑制する殺ダニ組成物 |
| CN1391810A (zh) * | 2002-07-04 | 2003-01-22 | 胡凡 | 含阿维菌素的杀虫杀螨组合物 |
| CN101869105A (zh) * | 2010-06-11 | 2010-10-27 | 湖北大学 | 一种安全环保型杀螨剂 |
| CN104407125A (zh) * | 2014-12-07 | 2015-03-11 | 新疆大学 | 一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒 |
| CN110122451A (zh) * | 2019-05-30 | 2019-08-16 | 西南大学 | 叶螨类微小型害虫敏感性田间快速检测试剂盒及使用方法 |
| CN111735939A (zh) * | 2020-06-08 | 2020-10-02 | 仲恺农业工程学院 | 草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒、专用饲料瓶及方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7972614B2 (en) * | 2006-04-12 | 2011-07-05 | Nisus Corporation | Dual-action pest control formulation and method |
| CN203870086U (zh) * | 2014-04-02 | 2014-10-08 | 长江大学 | 一种快速检测朱砂叶螨对杀螨剂敏感度的试剂瓶 |
| CN104062413A (zh) * | 2014-07-21 | 2014-09-24 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 一种叶螨生物测定方法及其应用 |
| CN104396889A (zh) * | 2014-10-27 | 2015-03-11 | 四川农业大学 | 一种加州新小绥螨低温贮存方法 |
| CN109459538A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-03-12 | 华中农业大学 | 快速筛选防治褐飞虱杀虫剂的试剂盒及其方法 |
-
2020
- 2020-11-09 CN CN202011240445.9A patent/CN112602688B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62145004A (ja) * | 1985-12-19 | 1987-06-29 | Yamamoto Noyaku Kk | 抵抗性発達を抑制する殺ダニ組成物 |
| CN1391810A (zh) * | 2002-07-04 | 2003-01-22 | 胡凡 | 含阿维菌素的杀虫杀螨组合物 |
| CN101869105A (zh) * | 2010-06-11 | 2010-10-27 | 湖北大学 | 一种安全环保型杀螨剂 |
| CN104407125A (zh) * | 2014-12-07 | 2015-03-11 | 新疆大学 | 一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒 |
| CN110122451A (zh) * | 2019-05-30 | 2019-08-16 | 西南大学 | 叶螨类微小型害虫敏感性田间快速检测试剂盒及使用方法 |
| CN111735939A (zh) * | 2020-06-08 | 2020-10-02 | 仲恺农业工程学院 | 草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒、专用饲料瓶及方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| "柑橘全爪螨田间种群敏感性测定及三种";丁天波等;《应用昆虫学报》;20121231;第382-389页 * |
| "柑橘木虱抗药性研究进展";田发军等;《应用昆虫学报》;20181231;第565-573页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112602688A (zh) | 2021-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7607338B1 (en) | Handheld instrument for monitoring and/or identification of chemicals | |
| Frankland et al. | Asthma caused by the grain weevil | |
| US20030148529A1 (en) | Utilization of invertebrate learning for flexible and sensitive monitoring and identification of chemicals | |
| CN108207950B (zh) | 一种牧草盲蝽寄主植物挥发物及其应用 | |
| CN109845705B (zh) | 一种小型寄生蜂成虫胃毒、触杀毒力测定装置及使用方法 | |
| CN112602688B (zh) | 一种快速测定柑桔红蜘蛛杀螨剂敏感性的试剂盒和方法 | |
| CN104407125B (zh) | 一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒 | |
| CN110122451A (zh) | 叶螨类微小型害虫敏感性田间快速检测试剂盒及使用方法 | |
| Lima et al. | Weather and plant age affect the levels of steroidal saponin and Pithomyces chartarum spores in Brachiaria grass | |
| CN111735939A (zh) | 草地贪夜蛾抗药性快速鉴定试剂盒、专用饲料瓶及方法 | |
| Swingle | Hydrogen Ion Concentration within the Digestive Tract of Certain Insects. | |
| CN104267152B (zh) | 一种快速检测稗草抗药性的方法 | |
| CN210690514U (zh) | 一种适合于快速检测瓜蚜对杀虫剂敏感度的装置 | |
| Daum et al. | Development of the bait principle for boll weevil control: Calco Oil Red N-1700® Dye for measuring ingestion | |
| CN107167583B (zh) | 一种检测二化螟抗药性的方法 | |
| CN106290658A (zh) | 一种食用植物油中阿维菌素、甲草胺和腐霉利的定量方法 | |
| CN112300163A (zh) | 苦参碱类生物碱及其制备方法和应用 | |
| CN109459538A (zh) | 快速筛选防治褐飞虱杀虫剂的试剂盒及其方法 | |
| CN101595872B (zh) | 瑞香狼毒中2-甲基-5-异丙基苯酚在农药中的应用 | |
| Kamwi et al. | Seasonal variation in the prevalence of malaria and vector species in Northern Namibia | |
| CN104062413A (zh) | 一种叶螨生物测定方法及其应用 | |
| Schneeweis et al. | Food habits of deer in the Black Hills | |
| CN114636763B (zh) | 一种同时检测农作物中呋虫胺和溴氰菊酯农药残留的方法 | |
| Tollefson et al. | Influence of sampler variation on adult corn rootworm population estimates | |
| CN101653141B (zh) | 瑞香狼毒中3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯-1-醇在农药中的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |