CN112569341A - 白僵菌素类似物作为apc/c的小分子激动剂的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了白僵菌素类似物作为APC/C的小分子激动剂的应用。本发明首次公开了如式Ⅰ所示的天然来源的白僵菌素类似物激活APC/C的功能，是有力的后期促进因子复合物(APC/C‑Cdh1)或后期促进因子复合物(APC/C‑Cdc20)的激动剂。该类化合物作为APC/C的小分子激动剂，在APC/C类蛋白活性失调引起的细胞生理学改变、靶向激活APC/C控制细胞增殖紊乱疾病等研究领域具有重要应用价值。

Description

白僵菌素类似物作为APC/C的小分子激动剂的应用

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及小分子激动剂。

背景技术

泛素化作为一种重要的翻译后修饰，可通过泛素(ubiquitin，Ub)-蛋白酶体系统(UPS)调控蛋白质的降解。“后期促进复合物/细胞周期体”(anaphase-promoting complex/cyclosome，APC/C)是一个明星泛素连接酶(ubiquitin ligase enzyme，E3)复合物。APC/C通常是由11～13个亚基蛋白组成的复合体，例如从非洲爪蟾卵细胞中分离的周期蛋白B的E3至少含有8个不同的亚基。APC/C主要包括四个部分：①与泛素结合酶(ubiquitinconjugating enzyme，E2)结合的部分；②TPR亚基；③结构性复合物；④共激活分子Cdc20、Cdh1和Ama1，APC/C的活性调节和底物识别特异性主要依靠共激活分子。APC/C激发E2-泛素复合物同靶蛋白破坏框结合，然后激发泛素同破坏框C-末端的赖氨酸残基结合，此过程不断循环使泛素多聚化；带有泛素链的蛋白为26S蛋白酶所识别，降解为多肽和氨基酸并释放出单体泛素分子。APC/C分子结构复杂、生物学功能广泛，在复制和细胞分裂过程中控制各种事件，参与细胞周期、代谢、DNA损伤修复、细胞自噬、凋亡、衰老及肿瘤发生等多种生物学过程。

正常细胞周期的进程，必须有特定的细胞周期调控分子在特定时刻迅速降解，以完成DNA复制、有丝分裂期的进展、G1期的维持和胞质分裂等。细胞周期进程中存在两个限制点即G1/S转变期和G2/M转变期，细胞周期的调控主要是对以上两个限制点的调控，是多因素参与的复杂过程。重要的细胞周期调控蛋白例如有S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase-associated protein2，Skp2)、细胞周期蛋白A(cyclin A)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、securin等。其中，Skp2是经过充分研究的F-box蛋白，也是Skp1-Cul1-Fbox(SCF)E3连接酶复合物的关键部分。它通过泛素化和蛋白酶体降解来调节p27和p21的蛋白表达水平，从而控制细胞周期，特别是G1期到S期的过渡调控。如Skp2过度活化造成G1期关卡失控，就会使应该停止增殖或生理性凋亡的细胞不停地进入细胞周期，导致细胞恶性增生及癌的形成。而cyclin A2也是细胞周期蛋白家族中重要的一员，参与G1/S期和G2/M期调控，在DNA复制、转录过程中有非常重要的作用。

多数APC/C的底物就是重要的细胞周期调节蛋白。APC/C是细胞中最主要的介导Skp2泛素化降解的E3泛素连接酶，APC/C激活后能够降低细胞中Skp2表达，提高p27蛋白水平，导致细胞周期停顿，抑制细胞增殖；APC/C通过在特定时期泛素化降解Skp2，达到控制细胞周期精确运行的功能。近年，对APC/C分子结构和组成的解析工作取得了极大的进展，APC/C-Cdh1在G1期发挥主要的作用，具有较高活性，保证Cyclin、Skp2等不要过早积累，使细胞维持在G1期。APC/C-Cdc20在M期发挥主要作用，启动细胞从M中期过渡到后期，促使姐妹染色体分离，维持细胞周期正常进行。可见，在细胞周期调控中APC/C具有重要地位，可以通过介导细胞周期相关蛋白质的泛素化降解从而精确调控细胞周期的转换，并受共激活分子Cdc20、Cdh1的正向调控，从而激活其泛素化降解途径降解其下游靶标蛋白Skp2、CyclinA2等。APC/C的失活常常会引起细胞周期紊乱，细胞周期相关蛋白异常积累以及细胞分裂过程受阻等。因此，研究APC/C可极大地促进对哺乳动物细胞周期调控、细胞自噬和凋亡、能量代谢和肿瘤发生的理解。

在科研过程中，往往需要针对某个关键因子对其进行激活或抑制，观察下游信号通路的变化，从而进行相关研究和开发。APC/C一直以来都是研究者重点关注的蛋白以及潜在的药物作用靶点，因此对APC/C具有激活或抑制作用的试剂就显得极为重要。目前市面上已存在用于科研的APC/C抑制剂TAME和Apcin。然而尚无关于APC/C激动剂的研究或者商业化产品，这极大地限制了对APC/C的进一步研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了白僵菌素类似物作为APC/C的小分子激动剂的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

白僵菌素类似物或其盐作为APC/C的小分子激动剂的应用，所述白僵菌素类似物的结构式如式Ⅰ所示：

其中，所述R¹，R^1’，R^1”各自独立地选自氢、C1～C4的烷基、羟基、氟、氯或溴；R²，R^2’，R^2”各自独立地选自芳基。

本发明所述的“芳基”为含有芳香环或类芳香环的结构，具体指的是从芳香环衍生出的取代基，例如包括苯基、苄基(苯甲基)、苯乙基、对甲苯基、邻甲苯基或间甲苯基等。

本发明所述的“盐”意指那些保留生物学有效性和母体化合物性质的盐，包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、硫酸或高氯酸等，所述有机酸例如乙酸、抗坏血酸、三氟乙酸、丙酸、羟乙酸、(D)或(L)乳酸、(D)或(L)苹果酸、草酸、富马酸、马来酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、水杨酸、肉桂酸、扁桃酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、羟乙磺酸或丙二酸等。

本发明所述的类似物还包括式Ⅰ所示的化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体等。

进一步地，本发明所述的应用指的是如式Ⅰ所示的白僵菌素类似物或其盐在制备APC/C的小分子激动剂中的应用。

在一个实施例中，所述R²为苄基，所述R^2’为苄基，所述R^2”为苄基，其结构式如式Ⅱ所示：

在一个优选的实施例中，所述R¹为甲基，所述R^1’为甲基，所述R^1”为甲基，所述R²为苄基，所述R^2’为苄基，所述R^2”为苄基，其结构式如式Ⅲ所示：

式Ⅲ所示的化合物即为白僵菌素。白僵菌素是一种六元环状缩酯肽化合物，由3个甲基苯丙氨酸和(D)-a-羟基异戊酸残基交替相连而成，具有3个相同的D-2-α-2羟异戊基-L-N-苯基，分子式为C₄₅H₅₇N₃O₉，分子量为786。白僵菌素是真菌的次生代谢产物，最早由Hamil于1969年首次从球孢白僵菌的菌丝体中提取到。

进一步地，所述APC/C为APC/C-Cdh1，即以Cdh1作为共激活分子的APC/C。

进一步地，所述APC/C为APC/C-Cdc20，即以Cdc20作为共激活分子的APC/C。

进一步地，所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C加速Skp2的降解。

进一步地，所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C加速CycliinA2的降解。

进一步地，所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C提高p27的表达水平，并增加p27的稳定性。

进一步地，所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C提高p21的表达水平。

进一步地，所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C抑制DNA的合成。

APC/C是细胞中最主要的介导Skp2泛素化降解的E3泛素连接酶，APC/C激活后能够降低细胞中Skp2表达，提高p27等蛋白水平，从而控制细胞周期，特别是G1期到S期的过渡调控。因此，本发明通过上述机制对白僵菌素类似物对APC/C的作用进行了验证，并发现，白僵菌素能够在DU145细胞中通过APC/C介导的泛素化过程降解Skp2，从而影响细胞的增殖能力，具体机制是：白僵菌素作用于APC/C后可以明显降低Skp2的半衰期，加快它们的降解速度，从而明显降低DU145细胞内的Skp2的蛋白水平；本发明进一步通过siRNA破坏APC/C的结构，消除白僵菌素类似物泛素化降解Skp2的能力，证明了白僵菌素类似物是以APC/C为靶点来介导泛素化降解Skp2蛋白，间接印证了白僵菌素类似物对APC/C的激动作用。同时，Skp2蛋白的耗尽会提高其底物蛋白p27的稳定性，并且会增加p27的表达量，Skp2的另一底物蛋白p21的表达量也会明显增加。而p27与p21都是抑癌蛋白，可以抑制高恶性前列腺癌细胞DU145细胞的DNA复制和合成，有效抑制其过度增殖。本发明对p27、p21、DNA合成及DU145细胞的增殖情况的研究进一步印证了白僵菌素类似物对APC/C的激动作用。因此本发明证实了白僵菌素类似物，尤其是白僵菌素确实可以激活APC/C并通过激活APC/C来调节其下游通路，是一种明确的APC/C激动剂。

本发明所涉及的设备、试剂、工艺、参数等，除有特别说明外，均为常规设备、试剂、工艺、参数等，不再作实施例。

本发明所列举的所有范围包括该范围内的所有点值。

本发明所述“大约”、“约”或“左右”等指的是所述范围或数值的±20％范围内。

本发明中，所述“室温”即常规环境温度，可以为10～30℃。

本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：

1.本发明首次发现白僵菌素能够激活APC/C，并通过激活APC/C降解其底物蛋白Skp2，引起下游信号通路的系列变化。因此，白僵菌素类似物、尤其是白僵菌素可以作为APC/C激动剂，在针对APC/C的研究例如用于APC/C活性失调引起的细胞生理学改变研究中有望发挥重要作用。

2.白僵菌素是真菌的次生代谢产物，至今为止已从多种天然产物及其共生微生物、甚至海洋来源的真菌代谢产物中被发现。内生真菌易于扩增培养，且活性化合物更易分离纯化，因此白僵菌素的来源广泛，在大规模的生产应用上不存在阻碍。

3.本发明能够填补现在APC/C激动剂的缺失，为相关科研工作者提供研究工具，具有重要的科研价值和应用前景。

附图说明

图1用于说明白僵菌素E2A1通过泛素化途径降解Skp2。

图2用于说明破坏APC/C-Cdh1结构后消除了E2A1泛素化降解Skp2的作用，其中A用于说明采用si-Cdh1有效降低Cdh1的mRNA，从而抑制Cdh1蛋白的翻译与表达，B用于说明采用si-Cdh1破坏APC/C-Cdh1结构组后及给予E2A1后对Skp2的影响。

图3用于说明E2A1影响DU145细胞周期相关蛋白的表达，其中A为WesternBlotting实验结果，B为Western Blotting实验结果的量化示意图。

图4用于说明E2A1影响Skp2的稳定性。

图5为Skp2蛋白(A)与p27蛋白(B)的稳定性曲线。

图6用于说明E2A1通过蛋白酶体降解途径降解CyclinA2和Skp2。

图7用于说明E2A1对DU145细胞增殖的影响。

图8用于说明E2A1对DU145细胞增殖的量效曲线与半数抑制浓度(IC₅₀)。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：白僵菌素(E2A1)促进APC/C介导的靶蛋白Skp2和CyclinA2的泛素化修饰

Skp2、Cyclin A2是明确的APC/C的下游靶标蛋白，因此可以通过Skp2、Cyclin A2来验证白僵菌素(以下记为E2A1)对APC/C是否有影响。因此，本实施例首先验证了化合物E2A1是否通过泛素化蛋白酶体途径介导Skp2蛋白的降解。

本实施例在HEK293T细胞模型中构建泛素化模型，共分为4个实验组，分别为(1)空白对照组(2)阴性对照组(3)阳性对照组(4)实验组，每组细胞按照图1所示加入相应转染质粒或化合物处理24h后按照Western Blotting蛋白收集方法收集并提取蛋白，并采用镍磁珠亲和提取方法提取组氨酸标记(His-tag)的泛素化蛋白。

本实施例采用的缓冲液如下：

结合缓冲液：6M盐酸胍(guanidine-HCl)，0.1M Na₂HPO₄/NaH₂PO₄，10mM咪唑(imidazole)，pH7.4

洗涤缓冲液：20mM磷酸钠(Sodium Phosphate)，500mM NaCl，50mM咪唑(imidazole)，pH7.4

洗脱缓冲液：20mM磷酸钠(Sodium Phosphate)，500mM NaCl，500mM咪唑(imidazole)，pH7.4

具体实验流程如下：

1.取每组培养好的细胞，用适量PBS洗涤1次，用500μL结合缓冲液重悬，超声破碎细胞，置于冰上10min，12000rpm离心15min后去上清液即为粗提蛋白样品。

2.磁珠预处理：将磁珠置于涡旋混匀器上充分混匀，然后取适量悬液于离心管中，进行磁性分离，弃上清。加入与分离出珠子相同体积的结合缓冲液，上下翻转或吹打数次，磁性分离去上清，重复洗涤2次。

3.目标蛋白与磁珠结合：

1mL磁珠至少可结合5mg蛋白，6cm皿取300μL磁珠(保证珠子体积不至于过少，结合充分)。将第2步裂解好的粗提蛋白样品加入到有磁珠的离心管中，涡旋震荡15s，充分混匀，将混匀后的样品放置在旋转混匀器上4℃培养4h使得磁珠与蛋白充分结合，然后进行磁性分离，弃上清。

4.磁珠洗涤：

加入1mL洗涤缓冲液到装有磁珠的离心管中，翻转或吹打数次，使磁珠悬浮，磁性分离，上清收集备检，重复1次。加1mL洗涤缓冲液使磁珠重新悬浮，将磁珠移到新离心管(防止原离心管壁其他蛋白非特异性吸附)，磁性分离，弃上清。

5.目标蛋白洗脱：

加入200μL蛋白洗脱缓冲液于上步磁珠中，翻转吹打数次，磁性分离，收集洗脱液到新离心管，即为纯化蛋白样品。

结果如图1所示，对比不加化合物E2A1(图1中组3)的阳性对照组，加入5μM化合物E2A1处理(图1中组4，即实验组)能够促进Skp2泛素化，从而加速Skp2降解。

随后，本实施例又构建了APC/C失活的细胞模型来验证E2A1是否是通过APC/C来介导的Skp2蛋白的泛素化降解。

具体实验流程如下：

1.铺板：细胞培养44h左右铺板，6cm皿，待细胞汇合70％左右，准备转染。

2.si-RNA转染：按照转染试剂说明书操作。

a)换液：提前半小时换4.5mL无血清培养基；

b)制备转染液：12.5μL si-RNA+475μL无血清培养基+12.5μL转染试剂混匀静置15min；

c)转染：逐滴加入上述制备好的转染液到6cm皿中，轻微晃动混匀，继续培养6h；

d)换液：6h后换完全培养基继续培养。

3.加药：细胞转染后继续培养24h后加药，E2A1作用浓度15μM，作用时间20h。

4.收细胞处理样品：按之前方法刮细胞裂解提取蛋白备用。

结果如图2所示，与对照组(图2B中组2)相比，使用si-Cdh1破坏APC/C结构组(图2B中组4)明显减弱了E2A1对Skp2的降解程度，说明E2A1确实是通过激活APC/C加速Skp2的泛素化降解，说明E2A1属于一种新型的APC/C蛋白活性激动剂。

实施例2：化合物E2A1促进的APC/C对其底物的泛素化修饰造成其靶蛋白Skp2的稳定性降低和进一步降解

本实施例将10μM的E2A1与DU145共同培养24h后测定细胞周期相关蛋白的表达量。

具体实验流程如下：

1.DU145细胞培养24h后进行化合物处理；

2.将线菌酮(CHX)储存液用完全培养基稀释到终浓度35μM后备用；

3.将待处理的细胞取出，沿孔壁轻柔吸弃原有旧培养基后，将上述混匀的2mL 35μM线菌酮的完全培养基沿壁轻轻加入孔中，分别培养0，3，6，12小时后收集细胞，裂解细胞并收集蛋白，通过Western Blotting实验验证E2A1影响p27、Skp2蛋白降解。

实验结果如图3所示：Skp2、CyclinA2蛋白表达明显降低；Skp2泛素化降解靶蛋白p27和p21蛋白含量则显著升高；而MCM3蛋白基本没变化。该结果表明化合物E2A1可以影响DU145细胞周期相关蛋白的表达，以降低DU145细胞中Skp2，CyclinA2含量为主。

接下来，本实施例验证了E2A1降低DU145细胞中细胞周期相关Skp2蛋白含量降低是通过加速其蛋白酶体降解速度。本实施例预先用放线菌酮(CHX)抑制细胞内蛋白质的合成能力，然后设计不同的实验组在不同的时间点收取细胞进行WB实验，结果如图4和5所示：13μM的E2A1可以将DU145细胞中Skp2的半衰期由12h以上降低到6h，同时将p27的半衰期明显延长。该结果表明化合物E2A1可以通过激活APC/C降低Skp2的稳定性，并增加p27蛋白的稳定性。

接下来本实施例设计实验验证化合物E2A1是否通过泛素化蛋白酶体途径介导Skp2降解。

具体实验流程如下：

1.DU145细胞培养24h后进行化合物处理；

2.将MG-132储存液用完全培养基稀释到终浓度13μM后备用；

3.将待处理的细胞取出，沿孔壁轻柔吸弃原有旧培养基后，将上述混匀的2mL 13μM MG-132的完全培养基沿壁轻轻加入孔中，培养24小时后收集细胞，裂解细胞并收集蛋白，通过Western Blotting实验验证E2A1影响cyclin A2、Skp2蛋白降解。

结果如图6所示，与对照组相比，当使用蛋白酶体抑制剂MG-132阻断蛋白酶体降解途径后再使用E2A1处理DU145细胞，Skp2蛋白含量并没有明显降低，以上结果说明E2A1对于细胞周期相关蛋白的影响是通过激活APC/C降低Skp2蛋白稳定性，加速其降解实现的。

实施例3：化合物E2A1促进的Skp2蛋白泛素化降解，能够进一步抑制前列腺癌细胞株DU145的DNA复制和合成

细胞增殖标记物BrdU是胸腺嘧啶的衍生物，常用于标记新合成的DNA(细胞周期S期)，这种标记可以稳定存在，并随着DNA复制进入子代细胞中，因此可以用于检测判断细胞的DNA合成能力。为了确定化合物E2A1是否会影响DU145细胞DNA的合成能力，本实施例设计BrdU标记实验来验证化合物E2A1对DU145细胞DNA合成能力的影响。

免疫荧光的具体实验流程如下：

1.在12孔细胞培养板中放入处理干净的细胞爬片与每孔5×10⁵个DU145细胞共培养12h；

2.12h后将原有完全培养基吸弃，1ml 1×PBS洗2遍，吸弃；

3.每孔加入1mL基础培养基进行同步化处理36h；

4.36h后1×PBS洗2遍，然后换成完全培养基，并加入10μM的E2A1，培养12h；

5.培养12h后，进行BrdU标记(终浓度50μM)，放入37℃、5％CO₂培养箱孵育2h；

6.将之前-20℃冰冻甲醇拿出用于固定细胞，沿孔壁缓慢加入1mL，使液体完全覆盖细胞，固定15min；

7.然后吸去固定液后，开盖。生物安全柜自然风干；

8.固定好的细胞爬片置于12孔板中，用自封袋封好，4℃保存备用，可保存1周，用于后续BrdU染色；

9.取出对应的细胞爬片，一分为二，一份置于12孔板4℃保存备用，另一份放入湿盒中，做好标记，每片爬片加入适量体积的2M HCl，恒温培养箱37℃孵育65min；

10.加入1×PBS洗3次，吸弃PBS，操作时注意区分正反面；

11.滴加适量的PBS-BSA(含5％BSA)室温条件下封闭1h，然后吸净封闭液；

12.用PBST 1:100稀释抗BrdU抗体，加入适量稀释后的抗体，室温孵育1h，避光；

13.加入1×PBS洗3次，当洗第3次时配制二抗稀释液，用PBST 1:300稀释；

14.加入二抗，室温孵育45min，避光；

15.加入1×PBS洗1次，吸干，晾干，取浓度为1mg/mL的DAPI母液，用PBS 1:1000稀释，室温孵育5min左右，避光；

16.PBS再洗1次，轻轻用吸水纸吸净PBS，晾干，滴加一滴50％甘油封片，封片时注意不要产生气泡，正面朝下；

17.镜检并拍照。

结果如图7所示，10μM的E2A1可以明显减少BrdU阳性细胞的所占比例，且具有显著性(P<0.01)。该结果说明化合物E2A1可以降低DU145细胞中新合成DNA的含量，有效的证明了化合物E2A1可以降低DU145的DNA合成能力，并可能以此来影响DU145细胞的增殖能力。进一步地通过细胞增殖抑制实验进行验证。

细胞增殖抑制实验的具体实验流程如下：

(1)按8000个/孔的细胞浓度接种在96孔细胞培养板内，每孔细胞悬液200μL，设置空白实验组，阴性对照组，实验组，每组设置3～4个复孔，将种盘后的细胞转移到37℃、5％CO₂培养箱中培养24h；

(2)24h后取出细胞，用真空泵沿孔壁轻柔吸弃原有旧培养基，禁止碰触孔底，以防吸弃孔底细胞，并加入含有相应浓度的E2A1(12.5μM，25μM，50μM，100μM，200μM)化合物与细胞继续培养48h；

(3)培养后进行CCK8孵育；将CCK8母液充分混匀，按1：9比例用完全培养基稀释，混匀备用；

(4)将待处理的细胞从CO₂培养箱中取出，用真空泵沿孔壁轻柔吸弃原有旧培养基，禁止碰触孔底，以防吸弃孔底细胞；

(5)将上述混匀的含有CCK8的完全培养基，每孔100μL沿壁轻轻加入孔中；

(6)将细胞培养皿转移到37℃、5％CO₂培养箱中培养2h；

(7)孵育完全后将96孔细胞培养板放进酶标仪中测OD450吸光值；

(8)将各数据放入GraphPad Prism 7.0软件，运用软件自带的IC50拟合功能计算IC50值，并绘制抑制曲线。

结果如图8所示，采用不同浓度梯度的E2A1处理DU145细胞24h后，得到了E2A1抑制DU145细胞的量效曲线，经过计算，E2A1在体外抑制DU145细胞的半数抑制浓度(IC50＝14.95μM)。该结果说明化合物E2A1可以抑制DU145细胞细胞增殖。

综上所述，本发明验证了白僵菌素主要通过激活APC/C加速Skp2和CyclinA2的降解，从而使抑癌蛋白p27和p21可以稳定高水平表达，以此来抑制DNA复制和合成，从而影响前列腺癌细胞的增殖。说明白僵菌素可以激活APC/C降解其底物蛋白Skp2，并引起下游信号通路的系列变化，是一种明确的APC/C激动剂。

以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (10)

1.白僵菌素类似物或其盐作为APC/C的小分子激动剂的应用，所述白僵菌素类似物的结构式如式Ⅰ所示：

其中，所述R¹，R^1’，R^1”各自独立地选自氢、C1～C4的烷基、羟基、氟、氯或溴；R²，R^2’，R^2”各自独立地选自芳基。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述R²为苄基，所述R^2’为苄基，所述R^2”为苄基，其结构式如式Ⅱ所示：

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述R¹为甲基，所述R^1’为甲基，所述R^1”为甲基，所述R²为苄基，所述R^2’为苄基，所述R^2”为苄基，其结构式如式Ⅲ所示：

4.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于：所述APC/C为APC/C-Cdh1。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于：所述APC/C为APC/C-Cdc20。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于：所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C加速Skp2的降解。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于：所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C加速CyclinA2的降解。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于：所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C提高p27的表达水平，并增加p27的稳定性。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于：所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C提高p21的表达水平。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于：所述白僵菌素类似物或其盐通过激活APC/C抑制DNA的合成。

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