CN112566667A - 治疗癌症的方法和材料 - Google Patents

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Abstract

本文提供了用于治疗患有表达HER2的癌症的哺乳动物的方法和材料。例如，提供了包含抗HER2抗体和至少一分子抗癌药物的抗体药物缀合物，以及向患有表达HER2的癌症的哺乳动物(例如，人)施用此类抗体药物缀合物以治疗哺乳动物的方法。

Description

治疗癌症的方法和材料
技术领域
本文涉及用于治疗患有表达HER2的癌症的哺乳动物的方法和材料。例如，可向患有表达HER2的癌症的哺乳动物(例如，人)施用含有抗HER2抗体和至少一种抗癌药物的抗体药物缀合物(ADC)，以治疗该哺乳动物。
发明背景
HER2是许多癌症，尤其是表现出HER2蛋白过表达或HER2基因扩增的乳腺癌和胃癌的原癌基因(Yan等人，2014 Cancer treatment reviews,40(6):770-780)。约15-20％的乳腺癌患者过表达HER2。这种过度表达与恶性肿瘤增加和预后不良密切相关(Witton等人，2003 The Journal of pathology,200(3):290-297)。胃癌是世界上第五大常见癌症，2012年报告了近一百万新病例(Ferlay等人，2015International journal of cancer,136(5):E359-86)。大约20％的胃癌过表达HER2(美国癌症协会，2017“Targeted Therapies forStomach Cancer”，可从cancer.org在线获得)。由于疾病的遗传复杂性和异质性，表达HER2的胃癌是一个医疗需求未得到满足的领域(Lordick等人，2014 Cancer treatmentreviews,40(6):692-700)。
目前美国食品和药物管理局(FDA)批准的HER2靶向疗法的用途有限。曲妥珠单抗
Figure BDA0002941364610000011
经FDA批准用于联合化学疗法或紫杉醇治疗HER2阳性转移性乳腺癌，用于联合化疗治疗HER2阳性进展期胃癌可显著延长进展期胃癌患者的生存期(Van(Van Cutsem等人，2009 J clin oncol,27:15s)。
Figure BDA0002941364610000012
(培妥珠单抗)被FDA批准用于治疗HER2阳性的转移性乳腺癌患者，所述患者以前没有接受过抗HER2疗法或与曲妥珠单抗和多西他赛联合治疗转移性疾病的化疗。
Figure BDA0002941364610000013
(阿多-曲妥珠单抗艾美坦辛(ado-trastuzumabemtansine)；也称为T-DM1)是FDA批准的ADC，其含有与细胞毒性剂艾美坦辛连接的曲妥珠单抗，用于治疗HER2阳性的转移性乳腺癌患者，所述患者以前接受过曲妥珠单抗和紫杉烷的治疗。虽然联合治疗可以延长胃癌患者的总体生存期，其中一半患者在治疗后一年有所进展，但联合曲妥珠单抗仅使应答率增加了约12％，表明患者对曲妥珠单抗有耐药性(Bang等人，2010 The Lancet,376(9742):687-697)。因此，需要相对于目前可用的HER2靶向疗法具有增加的功效的靶向表达HER2的癌症的治疗剂，以及需要靶向对目前可用的HER2靶向疗法耐药(例如，对目前可用的HER2靶向疗法不起反应的；诸如治疗后复发的表达HER2的癌症)的表达HER2的癌症的治疗剂。
发明概述
本文提供了包含靶向肿瘤相关抗原(例如，HER2多肽)的抗体和抗癌药物的ADCs，所述抗癌药物可施用于患有表达该抗原的癌症(例如，表达HER2的癌症)的哺乳动物(例如，人)以治疗该哺乳动物。例如，抗体药物缀合物(ADC)可包括抗HER2抗体(例如，MAB802)和至少一分子的与抗体缀合的抗癌药物分子(例如，奥瑞斯他汀(auristatin)衍生物，诸如单甲基奥瑞斯他汀E(MMAE))。该ADC的每个抗体可包含不止一分子的抗癌药物分子。在一些情况下，本文所述的ADC可包含提高的岩藻糖基化水平(例如，相对于其它抗HER2抗体)的抗HER2抗体。在一些情况下，本文所述的ADC可具有增加的药物/抗体比率(DAR；例如，相对于包含抗HER2抗体的其它ADCs)。本文还提供了用于制造和使用包含抗HER2抗体(例如，MAB802)和一个或多个抗癌药物(例如，MMAE)的ADCs的方法和材料。例如，可向患有表达HER2的癌症的哺乳动物(例如人)施用含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADC，以治疗该哺乳动物。
如本文所证实的，包括通过vc接头(vcLinker)与MMAE偶联的MAB802抗体的ADCMRG002，在表达HER2的肿瘤中表现出体外和体内抗肿瘤活性。例如，MRG002在体外抑制许多乳腺癌和胃癌细胞的癌细胞生长方面明显比T-DM1更有效(表5)。例如，MRG002在体内显著抑制乳腺癌和胃癌(包括曲妥珠单抗耐药性肿瘤和T-DM1耐药性PDX模型)的肿瘤生长。因此，MRG002可满足治疗患有表达HER2的癌症，尤其是难治性表达HER2的癌症(例如，难治性表达HER2的乳腺癌和难治性表达HER2的胃癌)和/或复发的(例如，转移性)表达HER2的癌症(例如，复发的表达HER2的乳腺癌和复发的表达HER2的胃癌)的患者的未被满足的医疗需求。
总的来说，本文的一个方面特征在于一种ADC，其包含具有大于约90％岩藻糖基化的抗HER2抗体、至少一分子的抗癌药物和连接抗HER2抗体与一个或多个分子的所述抗癌药物的接头。
所述抗HER2抗体可以是IgG抗体。所述抗HER2抗体可以是人源化抗体。所述抗HER2抗体可包括具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的轻链。所述抗HER2抗体可包括具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链(例如，具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的重链)。所述抗HER2抗体可以是MAB802抗体。所述抗HER2抗体可具有低于约14％的去岩藻糖基化(afucosylation)。所述抗HER2抗体可对CD16具有结合亲和力，其平衡解离常数(KD)值大于约2.5×10-08M。CD16可以是人176Val CD16a，并且KD可为约6.9×10-08M至约7.1×10-08M。CD16可为人176Phe CD16a，并且KD可为约6.6×10-07M至约6.9×10-07M。所述ADC的每分子抗体包含至少3分子所述抗癌药物。所述抗癌药物可以是奥瑞斯他汀衍生物(例如，单甲基奥瑞斯他汀E)。所述接头可以是可切割的接头(例如，缬氨酸瓜氨酸二肽接头)。
在另一个方面，本文特征在于一种包含多种ADCs的组合物，其中所述ADCs包括具有大于约90％岩藻糖基化的抗HER2抗体、至少一分子抗癌药物和连接抗HER2抗体与一个或多个分子的抗癌药物的接头。所述抗HER2抗体可以是IgG抗体。所述抗HER2抗体可以是人源化抗体。所述抗HER2抗体可包括具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的轻链。所述抗HER2抗体可包括具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链(例如，具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的重链)。所述抗HER2抗体可以是MAB802抗体。所述抗HER2抗体可具有低于约14％的去岩藻糖基化。所述组合物可以具有大于每抗HER2抗体约3.5分子抗癌药物的药物/抗体比(例如，每抗HER2抗体约3.8分子抗癌药物的药物/抗体比)。所述抗癌药物可以是奥瑞斯他汀衍生物(例如，单甲基奥瑞斯他汀E)。所述接头可以是可切割的接头(例如，缬氨酸瓜氨酸二肽接头)。
在另一方面，本文特征在于一种治疗患有表达HER2的癌症的哺乳动物的方法。所述方法包括或主要由以下组成：向哺乳动物施用ADC，其中所述ADC包含具有大于约90％岩藻糖基化的抗HER2抗体、至少一分子抗癌药物分子和连接抗HER2抗体与一个或多个分子的抗癌药物的接头。所述哺乳动物可以是人。所述表达HER2的癌症可以是乳腺癌。所述表达HER2的癌症可以是胃癌。所述表达HER2的癌症可以是难治性癌症(例如，曲妥珠单抗耐药性癌症或T-DM1耐药性癌症)。所述抗HER2抗体可以是IgG抗体。所述抗HER2抗体可以是人源化抗体。所述抗HER2抗体可包括具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的轻链。所述抗HER2抗体可包括具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链(例如，具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的重链)。所述抗HER2抗体可以是MAB802抗体。所述抗HER2抗体可具有低于约14％的去岩藻糖基化。所述抗HER2抗体可对CD16具有结合亲和力，其KD值大于约2.5×10- 08M。CD16可以是人176Val CD16a，并且KD可为约6.9×10-08M至约7.1×10-08M。CD16可以是人176Phe CD16a，并且KD可为约6.6×10-07M至约6.9×10-07M。所述ADC可具有导致约0％至约30％的细胞裂解(例如，约13.9％至约15.7％的细胞裂解)的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性。所述ADC的每分子抗HER2抗体可包含至少三分子抗癌药物。所述抗癌药物可以是奥瑞斯他汀衍生物(例如，单甲基奥瑞斯他汀E)。所述接头可以是可切割的接头(例如，缬氨酸瓜氨酸二肽接头)。所述施用可包括施用约0.6mg至约4mg/kg哺乳动物体重的ADC。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。例如，对于术语“例如”和“如”及其语法等同物，除非另有明确说明，否则应理解为遵循短语“并且没有限制”。例如，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该(the)”包括复数指代物。例如，术语“约”是指“大约”(例如，加上或减去指示值的大约10％)。尽管与本文所述相似或等同的方法和材料可用于实施本发明，在下文中仍描述了合适的方法和材料。应当理解，为了清楚起见，在单独实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可以在单个实施方案中组合提供。相反，为了简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征也可以单独或以任何合适的子组合来提供。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用以其整体并入。如有冲突，以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实例仅是说明性的，而不是限制性的。
本发明的一个或多个实施方案的细节在附图和以下描述中阐述。根据说明书和附图以及权利要求书，本发明的其它特征、目的和有利方面将变得显而易见。
附图说明
图1包含具有抗HER2单克隆抗体(MAB802)、vc接头和奥瑞斯他汀衍生物MMAE的MRG002分子的示意图。X为每抗体上偶联的MMAE分子数。
图2A包含聚糖类型的示意图。在这些聚糖中，具有红色三角形(代表岩藻糖)的那些被岩藻糖基化，而其它未被岩藻糖基化。图2B包含显示MAB802上存在的聚糖级分的荧光色谱图。
图3包含MRG002的疏水相互作用色谱-高效液相色谱(HIC-HPLC)的特征谱。
图4包含显示了抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性测定中MRG002、MAB802和曲妥珠单抗的代表性剂量-反应曲线的图。
图5包含显示了MRG002和T-DM1
Figure BDA0002941364610000051
在BT-474细胞中的抗增殖活性的图。
图6显示了MRG002、T-DM1、mAb-2和曲妥珠单抗-ADC对BT-474乳腺癌CDX模型肿瘤体积的影响(左)和研究结束时的肿瘤照片(右)。ADC-2代表MRG002；mAb-2代表MAB802；曲妥珠单抗-ADC是由曲妥珠单抗和与MRG002中相同的vcMMAE组成的ADC；“对照”代表媒介物(vehicle)；媒介物组的动物数量为10，其它组为6。
图7显示了MRG002、T-DM1、mAb-2和曲妥珠单抗-ADC对NCI-N87胃癌CDX模型肿瘤体积的影响(左)和研究结束时的肿瘤照片(右)。ADC-2代表MRG002；mAb-2代表MAB802；曲妥珠单抗ADC是由曲妥珠单抗和vcMMAE组成的ADC。
图8显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对乳腺癌PDX模型BC#046的肿瘤体积的影响。在第84天之前，媒介物(ADC-2溶剂)组中的所有荷瘤小鼠已经被安乐死，以符合动物福利要求(4只小鼠的体重减轻超过20％，而另外7只小鼠的肿瘤体积超过2000mm3)，因此没有拍摄肿瘤的照片。
图9显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对乳腺癌PDX模型BC#197的肿瘤体积的影响(左)和研究结束时的肿瘤照片(右)。组1为媒介物(ADC-2溶剂)，组2为ADC-2，剂量为3mg/kg，组3为ADC-2，剂量为10mg/kg，组4为T-DM1，剂量为10mg/kg。ADC-2溶剂组中的5只荷瘤小鼠在第84天之前已经被安乐死，以符合动物福利要求(8号小鼠的体重减轻超过20％，2号、5号、6号和7号小鼠的肿瘤体积超过2000mm3)，因此没有拍摄它们相应肿瘤的照片。
图10显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对胃癌PDX模型STO#041肿瘤体积的影响。在第84天之前，媒介物(ADC-2溶剂)组中的所有荷瘤小鼠已经被安乐死，以符合动物福利要求(肿瘤体积超过2000mm3)。
图11显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对胃癌PDX模型STO#053的肿瘤体积的影响(左)和研究结束时的肿瘤照片(右)。组1为媒介物(ADC-2溶剂)，组2为ADC-2，剂量为3mg/kg，组3为ADC-2，剂量为10mg/kg，组4为T-DM1，剂量为10mg/kg。ADC-2溶剂组中的6只荷瘤小鼠在第84天之前已经被安乐死，以符合动物福利要求(1号、2号、3号、4号、7号和8号小鼠的肿瘤体积>2000mm3)，因此没有拍摄这些肿瘤的照片。
图12显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对胃癌PDX模型STO#069的肿瘤体积的影响。在第84天之前，媒介物(ADC-2溶剂)组中的所有荷瘤小鼠已经被安乐死，以符合动物福利要求(肿瘤体积超过2000mm3)。
图13显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对胃癌PDX模型STO#179的肿瘤体积的影响(左)和研究结束时的肿瘤照片(右)。组1为媒介物(ADC-2溶剂)，组2为ADC-2，剂量为1mg/kg，组3为ADC-2，剂量为3mg/kg，组4为T-DM1，剂量为3mg/kg。ADC-2媒介物组中的5只荷瘤小鼠在第84天之前已经被安乐死，以符合动物福利要求(1号、2号、3号、4号和5号小鼠的肿瘤体积>2000mm3)，因此没有拍摄这些肿瘤的照片。
图14显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对胃癌PDX模型STO#240的肿瘤体积的影响(左)和研究结束时的肿瘤照片(右)。组1为媒介物(ADC-2溶剂)，组2为ADC-2，剂量为3mg/kg，组3为ADC-2，剂量为10mg/kg，组4为T-DM1，剂量为10mg/kg。ADC-2媒介物组中的1号荷瘤小鼠在第84天之前已经被安乐死，以符合动物福利要求(肿瘤体积>2000mm3)，因此没有拍摄其肿瘤的照片。
图15显示了MRG002(ADC-2)和T-DM1对胃癌PDX模型STO#410的肿瘤体积的影响。为了符合动物福利要求(肿瘤体积超过2000mm3)，在第84天之前对媒介物(ADC-2溶剂)组中的所有荷瘤小鼠实施安乐死。
发明详述
本文提供了用于治疗癌症的方法和材料。在一些情况下，本文提供的ADCs可包含靶向肿瘤相关抗原(例如，HER2多肽)的抗体和可向患有表达该抗原的癌症(例如，表达HER2的癌症)的哺乳动物(例如，人)施用的抗癌药物。例如，ADCs可包括含HER2抗体(例如，MAB802)和至少1分子(例如，2、3、4、5或更多分子)的一种或多种抗癌药物(例如，奥瑞斯他汀衍生物诸如MMAE)。在一些情况下，可向患有表达该抗原的癌症(例如，表达HER2的癌症)的哺乳动物(例如，人)施用本文提供的ADCs，以治疗该哺乳动物。例如，可向患有表达HER2的癌症的哺乳动物施用一种或多种含有抗HER2抗体和抗癌药物的ADCs，以降低癌症的严重度，减轻癌症的症状，和/或减少哺乳动物体内存在的癌细胞的数量。
抗体-药物缀合物
本文提供了包含抗HER2抗体(例如，MAB802)和至少1分子(如2、3、4、5或更多分子)的一种或多种抗癌药物分子(例如，奥瑞斯他汀衍生物诸如MMAE)的ADCs。不受理论限制，据信本文所述的ADCs(例如，MRG002)结合肿瘤细胞表面的HER2受体，通过受体介导的内吞作用被内化，在溶酶体内释放MMAE，并导致肿瘤细胞生长被抑制和/或细胞死亡。
抗体
本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADCs)可包括任何合适的抗HER2抗体。如本文中所用，“抗体”可以是完整的抗体或抗原结合(Fab)片段(例如，天然存在的Fab或合成Fab(例如，融合蛋白诸如单链可变片段(scFv))。例如，抗HER2抗体可包括对HER2多肽具有结合亲和力的任何完整抗体或抗体片段。抗HER2抗体可以是任何合适的类别和亚类(例如，IgG诸如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；IgA诸如IgA1和IgA2；IgD；IgE和IgM)。在一些情况下，抗HER2抗体可以是IgG(例如IgG1)抗体。抗HER2抗体可以是重组抗体。抗HER2抗体可以是嵌合抗体(例如，人源化抗体)。在一些情况下，抗HER2抗体可以是人源化抗体。抗HER2抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。在一些情况下，抗体可以是单克隆抗体。抗HER2抗体可以是单特异性抗体或双特异性抗体。例如，在抗HER2抗体是双特异性抗体的情况下，双特异性抗HER2抗体可对HER2多肽具有结合亲和力，并对第二抗原具有结合亲和力。抗HER2抗体可对磷酸化的HER2多肽具有结合亲和力，或者可对非磷酸化的HER2多肽具有结合亲和力。
抗HER2抗体可包括任何合适的序列。在一些情况下，抗HER2抗体轻链可包括下述互补决定区(CDRs)：
ASQDVNTAVA(SEQ ID NO:1)；
SASFLYS(SEQ ID NO:2)；和
QQHYTTPPT(SEQ ID NO:3)。
例如，包括如SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的CDRs的抗HER2抗体轻链可包括如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
在一些情况下，抗HER2抗体轻链可以具有与SEQ ID NO:4所示的序列具有至少75％(例如，至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列。例如，抗HER2抗体可具有与SEQ ID NO:4相比具有至少75％同一性的氨基酸序列，并且包括如SEQ ID NO:1、SEQID NO:2和SEQ ID NO:3所示的CDRs。
在一些情况下，抗HER2抗体重链可包括以下所示的CDRs：
GFNIKDTYIH(SEQ ID NO:5)；
IYPTNGYTRYADSVK(SEQ ID NO:6)；和
WGGDGFYAMDY(SEQ ID NO:7)。
例如，包含如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的CDRs的抗HER2抗体重链可包括如SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
SEQ ID NO:8
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP
SEQ ID NO:9
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:10
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
在一些情况下，抗HER2抗体重链可具有与SEQ ID NO:8至SEQ ID No:10中的任一个所示序列相比具有至少75％(例如，至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列。例如，抗HER2抗体可具有与SEQ ID NO:9相比具有至少75％同一性的氨基酸序列，并且包括如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的CDRs。例如，抗HER2抗体可具有与SEQ ID NO:9相比具有至少75％同一性的氨基酸序列，包括如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的CDRs，并且在残基359-361处具有EEM序列。
可用于本文所述ADC的抗HER2抗体的实例包括但不限于MAB802、曲妥珠单抗、培妥珠单抗和赫妥珠单抗。例如，本文所述的ADC可包括MAB802抗体。
本文还提供了编码本文所述的抗HER2抗体的核酸以及用于表达编码本文所述的抗HER2抗体的核酸的构建体(例如，表达构建体)。
在一些情况下，抗HER2抗体可具有升高的岩藻糖基化水平和/或降低的去岩藻糖基化水平(例如，相对于其它抗HER2抗体，诸如在当前FDA批准的HER2靶向疗法中使用的抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗))。
如本文中所用，岩藻糖基化百分比是指附接至含有岩藻糖的抗体上的聚糖的摩尔百分比(即，岩藻糖基化聚糖的摩尔量与岩藻糖基化和非岩藻糖基化聚糖的总摩尔量的百分比)。
如本文中所用，去岩藻糖基化百分比是指不含岩藻糖的附接至抗体上的聚糖的摩尔百分比(即，非岩藻糖基化聚糖的摩尔量与岩藻糖基化和非岩藻糖基化聚糖的总摩尔量的百分比)。
聚糖类型的实例可以是如图2A所示的。例如，参考图2A，岩藻糖基化百分比可被确定为岩藻糖基化聚糖总量(G0F-GlcNAc.G0F、G1F和G2F)除以所有聚糖的总量(G0F-GlcNAc.G0、G0F、Man5、G1、G1F、G2F)的比率。类似地，去岩藻糖基化百分比可被确定为非岩藻糖基化聚糖总量(G0、Man5和G1)除以所有聚糖总量(G0F-GlcNAcG0、G0F、Man5、G1、G1F、G2F)的比率。
在一些情况下，抗HER2抗体在抗体的Fc区中具有升高的岩藻糖基化水平和/或降低的去岩藻糖基化水平。任何合适的方法都可用来测定抗体上岩藻糖基化的量。例如，糖基化分析(例如，N-聚糖分析)可使用HPLC(参见，例如，实施例)或如其它地方所述(参见，例如，EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0；2.2.59.糖蛋白的聚糖分析)来进行。
在一些情况下，抗HER2抗体可具有大于约86％的岩藻糖基化(例如，大于约87％、大于约88％、大于约89％、大于约90％、大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约95％、大于约96％、大于约98％、大于约99％或约100％的岩藻糖基化)。
在一些情况下，抗HER2抗体可具有约86％至约100％的岩藻糖基化(例如，约86％至约99％、约86％至约98％、约86％至约97％、约86％至约95％、约86％至约92％、约86％至约90％、约86％至约88％、约87％至约100％、约88％至约100％、约89％至约100％、约90％至约100％、约93％至约100％、约95％至约100％、约97％至约100％、约88％至约97％、约90％至约95％、约87％至约92％、或约92％至约98％或约92％至约99％的岩藻糖基化)。例如，抗HER2抗体可具有约97.77％或约98％的岩藻糖基化。
在一些情况下，抗HER2抗体可具有少于约14％的去岩藻糖基化(例如，少于约13％，少于约12％，少于约11％，少于约10％，少于约9％，少于约8％，少于约7％，少于约6％，少于约5％，少于约4％，少于约3％，少于约2％，少于约1％，或少于约0.5％的去岩藻糖基化)。在一些情况下，抗HER2抗体可具有约0％至约14％的去岩藻糖基化(例如，约0％至约12％、约0％至约10％、约0％至约9％、约0％至约8％、约0％至约7％、约0％至约6％、约0％至约5％、约0％至约4％、约0％至约3％、约0％至约2％、约0％至约1％、约1％至约14％、约3％至约14％、约5％至约14％、约7％至约14％、约10％至约14％、约12％至约14％、约1％至约10％、约2％至约7％、约3％至约6％、约0.5％至约5％、约1％至约5％、约1.5％至约4％或约2％至约3％的去岩藻糖基化)。例如，抗HER2抗体可具有约2.23％的去岩藻糖基化。
在一些情况下，抗HER2抗体可被修饰成具有升高的岩藻糖基化水平和/或具有降低的去岩藻糖基化水平。可使用任何合适的方法来改变(例如，升高或降低)抗HER2抗体的岩藻糖基化水平。例如，抗HER2抗体上的岩藻糖基化水平可以例如通过改变培养基渗透压来改变。例如，可使用例如岩藻糖基转移酶来提高抗HER2抗体上的岩藻糖基化水平。例如，可使用例如岩藻糖基转移酶抑制剂来降低抗HER2抗体上的岩藻糖基化水平。在一些情况下，如其它地方所述(参见，例如，Konno等人，2012Cytotechnology,64:249-265；和Yamane-Ohnuki等人，2009mAbs,1:3)，抗HER2抗体可被修饰成具有升高的岩藻糖基化水平并且/或者具有降低的去岩藻糖基化水平。
抗HER2抗体可具有降低的抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)活性(例如，相对于其它抗HER2抗体，例如在当前FDA批准的HER2靶向疗法中使用的抗HER2抗体(例如,曲妥珠单抗))。例如，抗HER2抗体可具有导致细胞裂解减少的ADCC活性。在一些情况下，抗HER2抗体可具有ADCC活性，所述ADCC活性导致少于约30％(例如，少于约30％、少于约29％、少于约28％、少于约27％、少于约26％、少于约25％、少于约24％、少于约23％、少于约22％、少于约21％、少于约20％、少于约19％、少于约18％、少于约17％、小于约16％、小于约15％、小于约14％、小于约13％、小于约12％、小于约11％、小于约10％、小于约9％、小于约8％、小于约7％、小于约6％，或小于约5％)的细胞裂解。在一些情况下，抗HER2抗体可具有导致约0％至约30％细胞裂解(例如，约0％至约28％、约0％至约25％、约0％至约22％、约0％至约20％、约0％至约17％、约0％至约15％、约0％至约13％、约0％至约10％、约0％至约5％、约2％至约30％、约5％至约30％、约10％至约30％、约12％至约30％、约15％至约30％、约18％至约30％、约20％至约30％、约22％至约30％、约25％至约30％、约3％至约25％、约5％至约22％、约8％至约20％、约10％至约18％或约13％至约16％的细胞裂解)的ADCC活性。例如，抗HER2抗体可具有导致约13.9％至约15.7％细胞裂解的ADCC活性。例如，抗HER2抗体可具有导致约14.8％的细胞裂解的ADCC活性。
抗HER2抗体可具有降低的CD16结合亲和力(例如，相对于其它抗HER2抗体，诸如在当前FDA批准的HER2靶向疗法中使用的抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗))。CD16可以是人CD16。CD16可以是CD16的CD16a或CD16b形式。例如，CD16可以是CD16a。在一些情况下，CD16可在位置176处具有缬氨酸残基(例如,176Val CD16)。在一些情况下，CD16可在位置176处具有苯丙氨酸残基(例如，176Phe CD16)。在一些情况下，抗HER2抗体可具有平衡解离常数(KD)值大于约2.5×10-08M(例如，大于约2.7×10-08M,大于约3.0×10-08M,大于约3.2×10- 08M,大于约3.5×10-08M,大于约4.0×10-08M,大于约4.3×10-08M,大于约4.5×10-08M,大于约4.8×10-08M,大于约5.0×10-08M,大于约5.3×10-08M,大于约5.5×10-08M,大于约5.7×10- 08M,大于约6.0×10-08M,大于约6.2×10-08M,大于约6.5×10-08M,大于约6.8×10-08M,大于约2.5×10-08M,大于约7.0×10-08M,大于约7.3×10-08M,大于约7.5×10-08M,大于约7.8×10- 08M,大于约8.0×10-08M,大于约8.2×10-08M,大于约8.5×10-08M,大于约8.7×10-08M,大于约9.0×10-08M或大于约9.5×10-08M)的CD16结合亲和力。在一些情况下，抗HER2抗体可具有KD值为约2.5×10-08M至约10.0×10-08M(例如，约3.0×10-08M至约10.0×10-08M、约3.5×10-08M至约10.0×10-08M、约4.0×10-08M至约10.0×10-08M、约4.5×10-08M至约10.0×10-08M、约5.0×10-08M至约10.0×10-08M、约5.5×10-08M至约10.0×10-08M、约6.0×10-08M至约10.0×10- 08M、约6.5×10-08M至约10.0×10-08M、约6.8×10-08M至约10.0×10-08M、约7.0×10-08M至约10.0×10-08M、约7.2×10-08M至约10.0×10-08M、约7.5×10-08M至约10.0×10-08M、约7.8×10-08M至约10.0×10-08M、约8.0×10-08M至约10.0×10-08M、约8.2×10-08M至约10.0×10-08M、约8.5×10-08M至约10.0×10-08M、约2.5×10-08M至约9.5×10-08M、约2.5×10-08M至约9.0×10-08M、约2.5×10-08M至约8.8×10-08M、约2.5×10-08M至约8.5×10-08M、约2.5×10-08M至约8.2×10-08M、约2.5×10-08M至约8.0×10-08M、2.5×10-08M至约7.7×10-08M、约2.5×10-08M至约7.5×10-08M、约2.5×10-08M至约7.3×10-08M、约2.5×10-08M至约7.0×10-08M、约2.5×10-08M至约6.8×10-08M、约2.5×10-08M至约6.5×10-08M、约3.0×10-08M至约9.5×10-08M、约3.5×10-08M至约9.0×10-08M、约4.0×10-08M至约8.8×10-08M、约4.5×10-08M至约8.5×10-08M、约5.0×10-08M至约8.2×10-08M、约5.5×10-08M至约8.0×10-08M、约6.0×10-08M至约7.8×10-08M或约6.5×10-08M至约7.5×10-08M)的CD16结合亲和力。例如，抗HER2抗体可具有CD16结合亲和力(例如，对人176Val CD16a的结合亲和力)，其KD值为约6.9×10-08M(例如，约6.988×10-08M)至约7.1×10-08M(例如，约7.089×10-08M)。例如，抗HER2抗体可以具有CD16结合亲和力(例如，对人176Phe CD16a的结合亲和力)，其KD值为约6.6×10-07M(例如，约6.620×10-07M)至约6.9×10-07M(例如，约6.894×10-07M)。
抗癌药物
本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADCs)可以包括任何合适的抗癌药物。在一些情况下，所述一种或多种抗癌药物可包括一个或多个分子的单一抗癌药物(例如，对于每个抗HER2抗体而言)。在一些情况下，一个或多个抗癌药物可包括两个或更多个分子的两种或更多种不同的抗癌药物(例如，对于每个抗HER2抗体而言)。抗癌药物可以是细胞毒性剂。抗癌药物可以是抗微管剂。抗癌药物可以是微管形成抑制剂。抗癌药物可以是抗肿瘤剂。抗癌药物可以是天然化合物或合成药物。可用于本文所述ADCs的抗癌药物的实例包括但不限于奥瑞斯他汀药物(例如，单甲基奥瑞斯他汀E(MMAE)和单甲基奥瑞斯他汀F(MMAF))、美坦辛类(例如，美坦辛(DM1)、美坦辛(INN)和美坦辛(USAN))、吡咯苯并二氮杂
Figure BDA0002941364610000151
类(PBDs)、多卡米星、卡利奇霉素、SN-38、鹅膏蕈碱和艾立布林(eribulin)或其衍生物。
例如，含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADCs可包括每分子抗体的一个或多个分子的MMAE。
接头
本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADCs)可包括连接抗HER2抗体与一个或多个抗癌药物的一个或多个接头。接头可以是任何合适的接头。
由于接头的功能是在抗体与药物之间提供物理连接，原则上，多种化学基团可以充当接头。接头通常是二价有机连接基团，其中一个价(valency)代表与抗体的附接点，一个价(valency)代表与药物的附接点。
接头可以是可裂解的接头，也可以是不可裂解的接头。在一些情况下，接头可以是可切割的接头。例如，可切割的接头可被酶诸如组织蛋白酶B切割。接头可以是包括一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个或更多个)氨基酸(例如，天然氨基酸或非天然氨基酸)的肽接头。例如，肽接头可包括缬氨酸和/或瓜氨酸中的一种或多种。
接头也可以是可生物降解的接头。可用于本文所述ADCs的接头的实例包括但不限于缬氨酸瓜氨酸二肽接头(vc接头)、二硫化物接头、硫醚接头、SPP、SMCC、SPDB、MC、乙酰丁酸盐和CL2A，和/或腙(hydrazone)、PEG4-Mal、b-葡萄糖醛酸苷。在一些情况下，接头可以是如其它地方所述的(参见，例如，Donaghy,2016mAbs,8:659-71)。
例如，含有抗HER2抗体和一个或多个抗癌药的ADCs可包括连接抗HER2抗体与一个或多个抗癌药的vc接头。
在一些实施方案中，接头具有下式：
-L1 xAy-L2 z-
其中：
L1为第一二价化学基团；
x为0或1；
Ay为氨基酸或肽基团，其中：
每个A是独立选择的氨基酸基团；
y为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12；
L2为第二二价化学基团；以及
z为0或1。
L1，当存在时，其将所述抗体连接于式–Ay–的氨基酸或肽部分。所述抗体通过能形成合适的共价键的官能团(诸如巯基(SH)、氨基、羟基、羧基或羧基)连接于L1。所述官能团可以存在于原始获得的抗体上，或者通过化学操作引入。例如，巯基可通过分子内二硫键的还原产生。合适的氨基可包括抗体的赖氨酸部分的氨基。
合适的L1基团的实例包括，例如：–O–、–S–、–S(O)–、–S(O)2–、–C(O)–、–NH–、–N(C1–C6)烷基–、–NHC(O)–、–C(O)NH–、–O(CO)–、–C(O)O–、–O(CO)NH–、–NHC(O)O–、–O(CO)O–、–NHC(O)NH–、–O(C1–C6)亚烷基–、–S(C1–C6)亚烷基–、–S(O)(C1–C6)亚烷基–、–S(O)2(C1–C6)亚烷基–、–C(O)(C1–C6)亚烷基–、–NH((C1–C6)亚烷基)C(O)–、–C(O)((C1–C6)亚烷基)C(O)–、–C(O)((C1–C6)亚烷基)NH–、–O(CO)–、–C(O)O–、–O(CO)NH–、–NHC(O)O–、–O(CO)O–、–NHC(O)NH–、未取代的–(C1–C10)亚烷基–、未取代的–(C1–C10)杂亚烷基或被独立地选自由以下组成的组的一个或多个(例如，1、2、3、4或5个取代基)取代的–(C1–C10)亚烷基或–(C1–C10)杂亚烷基：C1–C6)烷基、(C2–C6)烯基、(C2–C6)炔基、卤素、(C1–C6)卤代烷基、-CN、–NO2、–C(＝O)R、–OC(＝O)Ar、–C(＝O)OR、–C(＝O)NR2、–C(＝NR)NR2、–OR、–Ar、–OAr、–((C1–C6)亚烷基)Ar、–O((C1–C6)亚烷基)Ar、–OC(＝O)(C1–C6)烷基、–OC(＝O)O(C1–C6)烷基、–OC(＝O)NR2、–NR2、–NRAr、–NR((C1–C6)亚烷基)Ar、–NRC(＝O)R、–NRC(＝O)Ar、–NRC(＝O)O(C1–C6)烷基、–NRC(＝O)NR2、–NRSO2R、–SR、–S(O)R、–SO2R、–OSO2(C1–C6)烷基、–SO2NR2、(C1–C8)全氟烷基、–(C2–C6)亚烷基–OR、–O(C2–C6)亚烷基–N((C1–C6)烷基)2、–P(＝O)(OR)2、–OP(＝O)(OR)2、氧代(oxo)和硫基(sulfido),其中每个R基团为氢或(C1–C6烷基)，例如甲基，并且其中每个Ar独立被芳基或杂芳基或被以下的一个或多个取代的芳基或杂芳基取代：(C1–C6)烷基、(C2–C6)烯基、(C2–C6)炔基、卤素、(C1–C6)卤代烷基、–CN、–NO2、–C(＝O)R、–C(＝O)OR、–C(＝O)NR2、–C(＝NR)NR2、–OR、–OC(＝O)(C1–C6)烷基、–OC(＝O)O(C1–C6)烷基、–OC(＝O)NR2、–NR2、–NRC(＝O)R、–NRC(＝O)O(C1–C6)烷基、–NRC(＝O)NR2、–NRSO2R、–SR、–S(O)R、–SO2R、–OSO2(C1-C6)烷基、–SO2NR2、(C1–C8)全氟烷基、–(C2–C6)亚烷基-OR、–O(C2–C6)亚烷基–N((C1–C6)烷基)2、–P(＝O)(OR)2、–OP(＝O)(OR)2，其中每个R基团为氢或(C1–C6烷基)。另外，–(C1–C10)亚烷基和–(C1–C10)杂亚烷基可被一个或多个氧代基团(C＝O)取代，并且杂亚烷基的氮和硫原子可以任选地被氧化(例如，形成S(O)、–S(O)2–或氮氧化物)。合适的杂亚烷基可包括一个或多个1,2-二氧亚乙基单元–(OCH2CH2)nO，其中n为整数，例如1、2、3、4或5。–(C1–C10)亚烷基和–(C1–C10)杂亚烷基还包括–(C1–C6)亚烷基和–(C1–C6)杂亚烷基以及–(C1–C3)亚烷基和–(C1–C3)杂亚烷基L1可以是下式的基团：
Figure BDA0002941364610000171
其可以例如通过S或NH附接到抗体上，使得连接部分(包括将L1附接到抗体上的官能团)具有下式：
Figure BDA0002941364610000172
Figure BDA0002941364610000181
合适的L3基团包括式(–C1–C10)亚烷基–或–(C1–C10)杂亚烷基的基团,诸如-CH2–、–(CH2)2–、–(CH2)3–、–(CH2)4–、–(CH2)5–、–(CH2)6–、–(CH2)7–、–(CH2)8–、–CH2CH2OCH2–和–CH2CH2OCH2CH2OCH2–。在一些实施方案中，L3具有式–(CH2)5–。
当氨基酸或肽基团存在时，其是氨基酸或二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元。
在一些实施例中，每个A是下式的基团：
–NH–CH(A1)–C(O)–
在一些实施方案中，每个A1独立地选自氢、甲基、异丙基、异丁基、叔丁基、苄基、对-羟基苄基、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(＝NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、-(CH2)3NHCHO、-(CH2)4NHC(＝NH)NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、-(CH2)3NHCONH2、-(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-吡啶基甲基、3-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基-、苯基、环己基、2-(苯基)乙基、2-(4-羟基苯基)乙基、(咪唑-4-基)甲基和吲哚-3-基甲基。
在一些实施方案中，每个A是选自丙氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、吡咯赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、硒代半胱氨酸、缬氨酸、色氨酸和酪氨酸的氨基酸部分。
形成A的氨基酸基团可以是R或S(或D或L)构型。在一些实施方案中，氨基酸可以是天然存在的构型(即,S或L；或者在半胱氨酸的情况下为R/L)。
在一些实施方案中，A是下式的二肽：
–NH–CH(A11)–C(O)–NH–CH(A12)–C(O)–
其中A11和A12独立地选自如上定义的式A1。在一些实施方案中，A11可以是甲基并且A12可以是(CH2)4NH2。在一些实施方案中，A11可以是异丙基并且A12可以是(CH2)4NH2。在一些实施方案中，A11可以是苄基并且A12可以是(CH2)4NH2。在一些实施方案中，A11可以是吲哚-3-基甲基并且A12可以是(CH2)4NH2。在一些实施方案中，A11可以是甲基并且A12可以是(CH2)3NHCONH2。在一些实施方案中，A11可以是异丙基并且A12可以是(CH2)3NHCONH2。在一些实施方案中，A11可以是苄基并且A12可以是(CH2)3NHCONH2。在一些实施方案中，A11可以是吲哚-3-基甲基并且A12可以是(CH2)3NHCONH2。
L2,当存在时，其将氨基酸或式-Ay–的肽部分连接至药物部分。合适的L2基团的实例包括，例如：–O–、–S–、–S(O)–、–S(O)2–、–C(O)–、–NH–、–N(C1–C6)烷基、–NHC(O)–、–C(O)NH–、–O(CO)–、–C(O)O–、–O(CO)NH–、–NHC(O)O–、–O(CO)O–、–NHC(O)NH–、–O(C1C6)亚烷基–、–S(C1–C6)亚烷基–、–S(O)(C1–C6)亚烷基–、–S(O)2(C1–C6)亚烷基–、–C(O)(C1–C6)亚烷基–、–NH((C1–C6)亚烷基)C(O)–、–C(O)((C1–C6)亚烷基)C(O)–、–C(O)((C1–C6)亚烷基)NH–、–O(CO)–、–C(O)O–、–O(CO)NH–、–NHC(O)O–、–O(CO)O–、–NHC(O)NH–、未取代的–(C1–C10)亚烷基–、未取代的–(C1–C10)杂亚烷基或被独立地选自由以下组成的组的一个或多个(例如，1、2、3、4或5个取代基)取代的–(C1–C10)亚烷基或–(C1–C10)杂亚烷基：C1–C6)烷基、(C2–C6)烯基、(C2–C6)炔基、卤素、(C1–C6)卤代烷基、-CN、–NO2、–C(＝O)R、–OC(＝O)Ar、–C(＝O)OR、–C(＝O)NR2、–C(＝NR)NR2、–OR、–Ar、–OAr、–((C1–C6)亚烷基)Ar、–O((C1–C6)亚烷基)Ar、–OC(＝O)(C1–C6)烷基、–OC(＝O)O(C1–C6)烷基、–OC(＝O)NR2、–NR2、–NRAr、–NR((C1–C6)亚烷基)Ar、–NRC(＝O)R、–NRC(＝O)Ar、–NRC(＝O)O(C1–C6)烷基、–NRC(＝O)NR2、–NRSO2R、–SR、–S(O)R、–SO2R、–OSO2(C1–C6)烷基、–SO2NR2、(C1–C8)全氟烷基、–(C2–C6)亚烷基–OR、–O(C2–C6)亚烷基–N((C1–C6)烷基)2、–P(＝O)(OR)2、–OP(＝O)(OR)2、氧代(oxo)和硫基(sulfido),其中每个R基团为氢或(C1–C6烷基)，例如甲基，并且其中每个Ar独立被芳基或杂芳基或被以下的一个或多个取代的芳基或杂芳基取代：(C1–C6)烷基、(C2–C6)烯基、(C2–C6)炔基、卤素、(C1–C6)卤代烷基、–CN、–NO2、–C(＝O)R、–C(＝O)OR、–C(＝O)NR2、–C(＝NR)NR2、–OR、–OC(＝O)(C1–C6)烷基、OC(＝O)O(C1–C6)烷基、–OC(＝O)NR2、–NR2、–NRC(＝O)R、–NRC(＝O)O(C1–C6)烷基、–NRC(＝O)NR2、–NRSO2R、–SR、–S(O)R、–SO2R、–OSO2(C1–C6)烷基、–SO2NR2、(C1–C8)全氟烷基、–(C2–C6)亚烷基-OR、–O(C2–C6)亚烷基–N((C1–C6)烷基)2、–P(＝O)(OR)2、–OP(＝O)(OR)2，其中每个R基团为氢或(C1–C6烷基)。另外，–(C1–C10)亚烷基和–(C1–C10)杂亚烷基可被一个或多个氧代基团(C＝O)取代，并且杂亚烷基的氮和硫原子可以任选地被氧化(例如，形成S(O)、–S(O)2–或氮氧化物)。合适的杂亚烷基可包括一个或多个1,2-二氧亚乙基单元–(OCH2CH2)nO-，其中n为整数，例如1、2、3、4或5。–(C1–C10)亚烷基–和–(C1–C10)杂亚烷基–还包括–(C1–C6)亚烷基–和–(C1–C6)杂亚烷基以及–(C1–C3)亚烷基–和–(C1–C3)杂亚烷基。
在一些实施方案中，L2基团是能够在氨基酸或肽部分–Ay与L2之间的键水解后分解以释放药物分子的基团。
或者，含有自降解间隔单元(self-immolative Spacer unit)的本发明化合物可以释放--D，而不需要单独的水解步骤。在该实施方案中，--Y--是通过PAB基团的氨基氮原子连接至--W.sub.w--，以及通过碳酸酯、氨基甲酸酯或醚基团直接连接至-D的PAB基团。不受理论限制，方案2描绘了通过氨基甲酸酯或碳酸酯基团直接附接至--D的PAB基团的药物释放的可能机制。这种基团的实例是可通过消除反应释放药物的式–NH-p-C6H4-CH2-或-NH-p-C6H4-CH2-OC(O)的对氨基苄基L2基团。
在一些实施方案中，所述接头可具有下式：
Figure BDA0002941364610000211
或下式之一(带有形成抗体与连接基团之间的连接的S或NH基团)：
Figure BDA0002941364610000212
在一些情况下，本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADCs)可包含MAB802抗体和通过vc接头连接的平均约3.8分子的MMAE。例如，ADC可以如实施例1所述。例如，ADC可以如图1所示。
ADCs
本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一个或多个抗癌药物(例如，MMAE)的ADCs)可具有降低的ADCC活性(例如，相对于其它抗HER2抗体，诸如在当前FDA批准的HER2靶向疗法中使用的抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗))。例如，本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一个或多个抗癌药物(例如，MMAE)的ADCs)可具有导致细胞裂解减少的ADCC活性。在一些情况下，ADC可具有ADCC活性，所述ADCC活性导致少于约30％(例如，少于约30％、少于约29％、少于约28％、少于约27％、少于约26％、少于约25％、少于约24％、少于约23％、少于约22％、少于约21％、少于约20％、少于约19％、少于约18％、少于约17％、少于约16％、少于约15％、少于约14％、少于约13％、少于约12％、少于约11％、少于约10％，少于约9％、少于约8％、少于约7％、少于约6％或少于约5％)的细胞裂解。在一些情况下，ADC可具有ADCC活性，所述ADCC活性导致约0％至约30％的细胞裂解(例如，约0％至约28％、约0％至约25％、约0％至约22％、约0％至约20％、约0％至约17％、约0％至约15％、约0％至约13％、约0％至约10％、约0％至约5％、约2％至约30％、约5％至约30％、约10％至约30％、约12％至约30％、约15％至约30％、约18％至约30％、约20％至约30％、约22％至约30％、约25％至约30％、药1％至约25％、约3％至约22％、约5％至约20％、约7％至约18％或约10％至约13％的细胞裂解)。例如，ADC可具有导致约9.9％至约12.7％的细胞裂解的ADCC活性。例如，ADC可具有导致约11.3％的细胞裂解的ADCC活性。
本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一个或多个抗癌药物(例如，MMAE)的ADCs)可具有降低的CD16结合亲和力(例如，相对于其它抗HER2抗体，诸如在当前FDA批准的HER2靶向疗法中使用的抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗))。CD16可以是人的CD16。CD16可以是CD16的CD16a或CD16b形式。例如，CD16可以是CD16a。在一些情况下，CD16在位置176处可具有缬氨酸残基(例如，176Val CD16)。在一些情况下，CD16可在位置176处具有苯丙氨酸残基(例如，176Phe CD16)。在某些情况下，CD16可在位置176处具有苯丙氨酸残基。在一些情况下，ADC可具有KD值大于约2.5×10-08M(例如，大于约2.7×10-08M、大于约3.0×10-08M、大于约3.2×10-08M、大于约3.5×10-08M、大于约4.0×10-08M、大于约4.3×10-08M、大于约4.5×10-08M、大于约4.8×10-08M、大于约5.0×10-08M、大于约5.3×10-08M、大于约5.5×10-08M、大于约5.7×10-08M、大于约6.0×10-08M、大于约6.2×10-08M、大于约6.5×10-08M、大于约6.8×10-08M、大于约2.5×10-08M、大于约7.0×10-08M、大于约7.3×10-08M、大于约7.5×10-08M、大于约7.8×10-08M、大于约8.0×10-08M、大于约8.2×10-08M、大于约8.5×10-08M、大于约8.7×10-08M、大于约9.0×10-08M或大于约9.5×10-08M)的CD16结合亲和力。在一些情况下，ADC可具有KD值为约2.5×10-08M至约10.0×10-08M(例如，约3.0×10-08M至约10.0×10-08M、约3.5×10-08M至约10.0×10-08M、约4.0×10-08M至约10.0×10-08M、约4.5×10-08M至约10.0×10- 08M、约5.0×10-08M至约10.0×10-08M、约5.5×10-08M至约10.0×10-08M、约6.0×10-08M至约10.0×10-08M、约6.5×10-08M至约10.0×10-08M、约6.8×10-08M至约10.0×10-08M、约7.0×10-08M至约10.0×10-08M、约7.2×10-08M至约10.0×10-08M、约7.5×10-08M至约10.0×10-08M、约7.8×10-08M至约10.0×10-08M、约8.0×10-08M至约10.0×10-08M、约8.2×10-08M至约10.0×10-08M、约8.5×10-08M至约10.0×10-08M、约2.5×10-08M至约9.5×10-08M、约2.5×10-08M至约9.0×10-08M、约2.5×10-08M至约8.8×10-08M、约2.5×10-08M至约8.5×10-08M、约2.5×10-08M至约8.2×10-08M、约2.5×10-08M至约8.0×10-08M、约2.5×10-08M至约7.7×10-08M、约2.5×10-08M至约7.5×10-08M、约2.5×10-08M至约7.3×10-08M、约2.5×10-08M至约7.0×10-08M、约2.5×10-08M至约6.8×10-08M、约2.5×10-08M至约6.5×10-08M、约3.0×10-08M至约9.8×10-08M、约3.5×10-08M至约9.5×10-08M、约4.0×10-08M至约9.2×10-08M、约4.5×10-08M至约9.0×10-08M、约5.0×10-08M至约8.8×10-08M、约5.5×10-08M至约8.5×10-08M、约6.0×10-08M至约8.2×10-08M、约6.5×10-08M至约8.0×10-08M或约6.8×10-08M至约7.8×10-08M)的CD16结合亲和力。例如，ADC可具有CD16结合亲和力(例如，对人176Val CD16a的结合亲和力)，其KD值为约8.094×10-08M至约8.465×10-08M。例如，ADC可具有CD16结合亲和力(例如，对人176Phe CD16a的结合亲和力)，其KD值为约7.877×10-07M至约9.708×10-07M。
本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一个或多个抗癌药物(例如，MMAE)的ADCs)可具有至少一个(例如，1、2、3、4、5、6个或更多个)抗癌药物分子(例如，每分子抗HER2抗体)。在一些情况下，本文所述的ADCs可具有不止一个(例如，2、3、4、5、6个或更多个)抗癌药物分子(例如，对每分子抗HER2抗体而言)。例如，ADC可具有约3个分子至约8个分子的MMAE(例如，约3个分子至约7个分子、约3个分子至约6个分子、约3个分子至约5个分子、约3个分子至约4个分子、约4个分子至约8个分子、约5个分子至约8个分子、约6个分子至约8个分子、约7个分子至约8个分子、约4个分子至约7个分子、约5个分子至约6个分子、约4个分子至约5个分子或者约6个分子至约7个分子的MMAE)。例如，本文所述的ADCs的每分子MAB802可具有约3至约4分子的MMAE。例如，本文所述的ADCs的每分子MAB802可以平均具有约3.8分子MMAE。在一些情况下，本文所述的ADsC(例如，含有抗HER2抗体和一个或多个抗癌药物(例如，MMAE)的ADCs)可具有增加的DAR(例如，相对于其它靶向HER2的ADCs，例如当前FDA批准的靶向HER2的ADCs(例如，T-DM1))。如本文中所用，DAR是指与抗HER2抗体结合的抗癌药物分子的数量。应当理解，本文所述的ADCs通常包含完全数量的分子的抗癌药物，并且以有理数提供(例如，暗示分子的级分(fraction)或部分(portion))的任何DAR旨在表示每个抗HER2抗体的抗癌药物分子的平均数量。在一些情况下，ADC可具有大于约3.5(例如，大于约3.55、大于约3.6、大于约3.65、大于约3.7、大于约3.75或大于约3.8)的DAR。例如，ADC可以具有约3.5至约8(例如，约4至约8、约4.5至约8、约5至约8、约5.5至约8、约6至约8、约6.5至约8、约7至约8、约3.5至约7、约3.5至约6.5、约3.5至约6、约3.5至约5.5、约3.5至约5、约3.5至约4.5、约3.5至约4、约3.6至约7、约3.7至约6或约3.8至约5)的DAR。例如，ADC可具有约为3.8的DAR。
在一些情况下，本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADCs)可具有导致约9.9％至约12.7％的细胞裂解(例如，约11.3％的细胞裂解)的ADCC活性，可具有KD值为约8.094×10-08M至约8.465×10-08M的CD16结合亲和力(例如，对人176ValCD16a的结合亲和力)，可具有KD值为约7.877×10-07M至约9.708×10-07M的CD16结合亲和力(例如，对人176Phe CD16a的结合亲和力)，和/或可具有约为3.8的DAR。
在一些情况下，本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADCs)还可包含一种或多种附加成分。例如，ADCs可包含可检测的标记物，诸如但不限于荧光标记物(例如，用于监测位置(loca))。
在一些实施方案中，所述ADC可由以下公式表示：
Figure BDA0002941364610000251
其中AB代表抗体，k代表每分子抗体附接的接头/药物基团的数量。对于任何给定的抗体分子，k代表整数，例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。对于作为整体表示的ADC，k表示药物/抗体比率(即，每个抗体附接的药物分子的平均数量)。在一些实施方案中，k可以在约1至约6的范围内，例如，约为1、约为1.5、约为2、约2.5、约为3、约为3.5、约为4、约4.5、约为5、约为5.5或约为6。在一些实施例中，k可为约3.5或更大，例如，约3.55或更大，约3.6或更大，约3.7或更大，约3.75或更大，或约3.8或更大。
方法
本文还提供了用于制造和使用本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的方法和材料。例如，可向患有表达HER2的癌症的哺乳动物(例如人)施用含有抗HER2抗体和一种或多种抗癌药物的ADC，以治疗该哺乳动物。
如本文所用，术语“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指以下措施中的一种或多种：(1)预防疾病；例如，在可能易患疾病(disease)、疾患(condition)或病症(disorder)但尚未经历或表现出疾病的病理学或症状学的个体中预防所述疾病、疾患或病症；(2)抑制疾病；例如，在正在经历或显示疾病、疾患或病症的病理学或症状学的个体中抑制所述疾病、疾患或病症(即，阻止病理学和/或症状学的进一步发展)；和(3)改善疾病；例如，在正在经历或显示疾病、疾患或病症的病理学或症状学的个体中改善所述疾病、疾患或病症(即，逆转病理学和/或症状学)，诸如降低疾病的严重度或减轻或缓和疾病的一种或多种症状。
在一些情况下，治疗癌症可包括在患有癌症的哺乳动物中减少癌症的一种或多种(例如，两种、三种、四种或五种)体征或症状的数量、频率或严重度。例如，治疗可以降低癌症的严重度(例如，可以减少肿瘤中癌细胞的数量和/或减小肿瘤的尺寸(例如，体积)，减缓癌症的进展(例如，可以减少或消除肿瘤的生长和/或转移，或者可以减少癌细胞的增殖、迁移和/或侵袭的可能性)，和/或降低患有癌症的哺乳动物的癌症复发的风险。例如，向患有表达HER2的癌症的哺乳动物(例如，人)施用一种或多种含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物(例如，MMAE)的ADCs可以抑制表达HER2的癌细胞的癌细胞生长。例如，向患有表达HER2的癌症的哺乳动物(例如，人)施用一种或多种含有抗HER2抗体(例如MAB802)和一种或多种抗癌药物(例如MMAE)的ADCs可以减小表达HER2的肿瘤的肿瘤体积。
任何患有表达HER2的癌症的合适的哺乳动物都可以如本文所述进行治疗。例如，患有表达HER2的癌症的人和其它灵长类动物诸如猴子可用一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)治疗，以减轻癌症症状，和/或减少人或其它灵长类动物体内存在的癌细胞的数量。在一些情况下，患有表达HER2的癌症的狗、猫、马、牛、猪、羊、小鼠和大鼠可用一种或多种包含抗HER2抗体(例如，MAB802)和一个或多个本文所述的抗癌药物的ADCs进行治疗。
当治疗患有如本文所述的表达HER2的癌症的哺乳动物(例如，人)时，表达HER2的癌症可以是任何合适的表达HER2的癌症。在一些情况下，表达HER2的癌症可以是难治性癌症(例如，对抗癌药物耐药(例如，对其无反应)的癌症)。例如，如本文所述治疗的癌症可以是曲妥珠单抗耐药性癌症。例如，如本文所述治疗的癌症可以是T-DM1耐药性癌症。在一些情况下，表达HER2的癌症可以是复发的(例如，转移性)癌症。可如本文所述治疗的表达HER2的癌症的实例包括但不限于乳腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、甲状腺癌、头颈癌、胶质母细胞瘤和肉瘤。例如，表达HER2的癌症可以是表达HER2的乳腺癌(例如，曲妥珠单抗和/或T-DM1耐药性乳腺癌)。例如，表达HER2的癌症可以是表达HER2的胃癌(例如，曲妥珠单抗和/或T-DM1耐药性胃癌)。
在一些情况下，可对患有癌症的哺乳动物进行评估，以确定该癌症是否是表达HER2的癌症。可使用任何合适的方法来确定癌症是否是表达HER2的癌症。例如，HER2的表达可使用例如转录测定诸如RT-PCR和/或翻译测定诸如蛋白质印迹分析来确定。
一旦鉴定为患有表达HER2的癌症(例如，表达HER2的乳腺癌或表达HER2的胃癌)，则可向哺乳动物施用一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)。
可将一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)与用于治疗癌症的一种或多种附加剂作为联合治疗向患有癌症的哺乳动物施用。例如，可将一种或多种本文所述的ADCs与一种或多种抗癌治疗(例如，放射疗法、化学疗法、其它靶向疗法、激素疗法、血管生成抑制剂和/或免疫检查点抑制剂，诸如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体和抗TIGIT抗体)联合给哺乳动物施用。在包含一种或多种本文所述的ADCs的组合物与附加剂一起用于治疗癌症的情况下，一种或多种附加剂可以同时施用或单独施用。在一些情况下，可以首先施用包含一种或多种本文所述的ADCs的组合物，然后施用一种或多种附加剂，反之亦然。
组合物和施用
可将一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)配制成组合物(例如，药学上可接受的组合物)，用于向患有表达HER2的癌症的哺乳动物施用。例如，可将治疗有效量的一种或多种本文所述的ADCs配制成组合物，并向患有表达HER2的癌症的哺乳动物施用以治疗该哺乳动物。组合物可以是无菌组合物。组合物可以配制成任何合适的施用形式，包括但不限于溶液、混悬液、缓释制剂、片剂、胶囊、丸剂、粉剂和颗粒剂。
含有一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物可包括多种(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、50、75、100种或更多种)抗体-药物缀合物。在一些情况下，本文所述的包含多种ADCs的组合物中的ADCs可包含相同数量分子的一种或多种抗癌药物。在一些情况下，本文所述的包含多种ADCs的组合物中的ADCs可包含不同数量分子的一种或多种抗癌药物。在一些情况下，组合物可具有增加的DAR(例如，相对于其它HER2靶向的ADCs，诸如当前FDA批准的HER2靶向的ADCs(例如，T-DM1))。在一些情况下，组合物可具有大于约3.5(例如，大于约3.55、大于约3.6、大于约3.65、大于约3.7、大于约3.75或大于约3.8)的DAR。例如，组合物可具有约3.5至约8(例如，约4至约8、约4.5至约8、约5至约8、约5.5至约8、约6至约8、约6.5至约8、约7至约8、约3.5至约7、约3.5至约6.5、约3.5至约6、约3.5至约5.5、约3.5至约5、约3.5至约4.5、约3.5至约4、约3.6至约7、约3.7至约6或约3.8至约5)的DAR。例如，ADC可具有约为3.8的DAR。
在一些情况下，包含一种或多种本文所述的ADCs(例如，包含抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物可以是药学上可接受的组合物。例如，可将治疗有效量的一种或多种本文所述的ADCs配制成药学上可接受的组合物，并向患有表达HER2的癌症的哺乳动物施用，以治疗该哺乳动物。如本文中所用，术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内的化合物、材料、组合物和/或剂型，其适合用于与人类和动物的组织接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相称。例如，治疗有效量的一种或多种T型钙通道拮抗剂可以与一种或多种药学上可接受的载体(例如，添加剂、稀释剂和/或赋形剂)一起配制。药学上可接受的载体可以是固体、半固体或液体材料。药学上可接受的载体可以是用作一种或多种T型钙通道拮抗剂的媒介物、载体或介质的任何化合物。可用于本文所述的药学上可接受的组合物中的药学上可接受的载体的实例包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇如维生素E TPGS、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物和羊毛脂。
可将含有一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物(例如，药物组合物)配制成以任何合适的形式施用。本文所述的组合物可呈固体形式或液体形式。在一些情况下，包含一种或多种本文所述的ADCs的药学上可接受的组合物可以是缓释组合物。本文所述组合物可被配制成的剂型实例包括但不限于溶液、混悬液、片剂、胶囊(例如，软明胶胶囊或硬明胶胶囊)、丸剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、小袋、扁囊剂、酏剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂(例如，固体气雾剂或液体气雾剂)和软膏。在一些情况下，包含一种或多种本文所述的ADC的药学上可接受的组合物可以是无菌组合物。例如，含有一种或多种本文所述的ADCs的药学上可接受的组合物可包括水性和非水性无菌注射溶液，所述注射溶液可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使组合物与预期受体的血液等渗的溶质；以及可包含助悬剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬液。
含有一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物(例如，药物组合物)可被设计成用于任何适当类型的施用(例如，局部、口服、肠胃外或吸入施用)。当通过局部施用进行施用时，含有一种或多种本文所述的ADCs(例如含有抗HER2抗体(例如MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的药物组合物可以经皮、表皮、眼和/或粘膜(例如，鼻内、阴道和直肠)施用。当通过局部施用进行施用时，含有一种或多种本文所述的ADCs的药物组合物可呈例如透皮贴剂、软膏、洗液、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂的形式。当通过口服施用进行施用时，含有一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的药物组合物可呈例如丸剂、片剂或胶囊的形式。当通过肠胃外施用进行施用时，可通过静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内、颅内(例如，鞘内或脑室内)注射或输注来施用含有一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物)的药物组合物。当通过肠胃外给药时，包含一种或多种本文所述的ADCs的药物组合物可呈例如液体、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂和粉末的形式。当通过肠胃外给药时，含有一种或多种本文所述的ADCs的药物组合物可以以一种或多种丸药剂量的形式给药，或者可以通过连续灌注(例如，通过泵)给药。当通过吸入施用进行施用时，含有一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的药物组合物可以是对肺有影响的。例如，施用包含一种或多种本文所述的ADCs的药物组合物可以包括吸入或吹入液体(例如，气溶胶)和/或固体(例如，粉剂)。当通过吸入施用进行施用时，包含一种或多种本文所述的ADCs的药物组合物可呈例如液体、凝胶和粉末的形式。
可以局部或全身性施用包含一种或多种本文所述的ADCs(例如，包含抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物(例如，药物组合物)。例如，可通过口服施用或注射向哺乳动物(例如，人)全身性施用包含一种或多种本文所述的ADCs的组合物。
根据癌症的严重度、施用途径、受试者的年龄和一般健康状况、赋形剂的使用、与其它治疗性治疗(诸如使用其它剂)共同使用的可能性以及治疗医生的判断，一种或多种本文所述的ADCs(如含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的有效剂量可以不同。
包含一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物的有效量，可以是降低癌症严重度、减缓癌症进展和/或降低哺乳动物的癌症复发风险而不对哺乳动物产生显著毒性的任何量。含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADC的有效量可以为约0.6mg/kg体重(mg/kg)至约10mg/kg(例如，约1mg/kg至约10mg/kg、约2mg/kg至约10mg/kg、约3mg/kg至约10mg/kg、约4mg/kg至约10mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约6mg/kg至约10mg/kg、约7mg/kg至约10mg/kg、约8mg/kg至约10mg/kg、约9mg/kg至约10mg/kg、约0.6mg/kg至约9mg/kg、约0.6mg/kg至约8mg/kg、约0.6mg/kg至约7mg/kg、约0.6mg/kg至约6mg/kg、约0.6mg/kg至约5mg/kg、约0.6mg/kg至约4mg/kg、约0.6mg/kg至约3mg/kg、约0.8mg/kg至约9mg/kg、约1mg/kg至约8mg/kg、约1.5mg/kg至约7mg/kg、约2mg/kg至约6mg/kg、约3mg/kg至约5mg/kg、约1mg/kg至约4mg/kg、约1.5mg/kg至约3mg/kg、约2mg/kg至约4mg/kg或约2mg/kg至约6mg/kg)。例如，含有MAB802抗体和一个或多个分子的MMAE的ADC的有效量可为约1.8mg/kg至约2.4mg/kg。例如，含有MAB802和一个或多个分子的MMAE的ADC的有效量可为约2mg/kg。例如，含有MAB802和一个或多个分子的MMAE的ADC的有效量可为约3mg/kg。所述有效量可以保持不变，或者可根据哺乳动物对治疗的反应以滑动标度或可变剂量进行调整。各种因素会影响用于特定应用的实际有效量。例如，施用频率、治疗持续时间、多种治疗剂的使用、施用途径和疾患(例如,癌症)的严重度可能要求增加或减少实际施用的有效量。
含有一种或多种本文所述的ADCs(例如含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物的施用频率可以是降低癌症严重度、减缓癌症进展和/或降低哺乳动物的癌症复发风险而不对哺乳动物产生显著毒性的任何频率。例如，施用频率可以从约每周一次到约每四周一次，从约每两周一次到约每三周一次，或者从约每三周一次到约每四周一次。在一些情况下，施用频率可以是约每三周一次。施用频率可以保持不变，也可以在治疗期间变化。用含有一种或多种本文所述的ADCs的组合物治疗的过程可以包括休息期。例如，包含一种或多种本文所述的ADCs的组合物可以在两周时间内每天施用，随后是两周的休息期，并且这种方案可以重复多次。与有效量一样，各种因素会影响用于特定应用的实际施用频率。例如，有效量、治疗持续时间、多种治疗剂的使用、施用途径和癌症(例如，表达HER2的癌症)的严重度可能需要增加或减少施用频率。
施用包含一种或多种本文所述的ADCs(例如，包含抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物的有效持续时间可以是降低癌症严重度、减缓癌症进展和/或降低哺乳动物的癌症复发风险而不对哺乳动物产生显著毒性的任何持续时间。例如，有效持续时间可以从数天变化到数周、数月或数年不等。在一些情况下，癌症治疗的有效持续时间可以在约1个月至约10年的持续时间内变化。例如，有效持续时间可包括包含一种或多种本文所述的ADCs的组合物的任何合适的施用次数(例如，治疗周期)。在一些情况下，治疗癌症的有效持续时间可包括八次施用(例如，治疗周期)包含一种或多种本文所述的ADCs的组合物。多种因素可影响用于特定治疗的实际有效持续时间。例如，有效持续时间可以随着施用频率、有效量、多种治疗剂的使用、施用途径和所治疗疾患的严重度而变化。
在一些情况下，可以监测哺乳动物体内存在的癌症(例如，表达HER2的癌症)。例如，可以监测哺乳动物体内存在的肿瘤尺寸、哺乳动物体内存在的癌细胞的数量和/或与正在治疗的癌症相关的一个或多个症状的严重度。可以使用任何合适的方法来确定哺乳动物体内存在的癌细胞的数量是否减少。例如，成像技术可用于评估哺乳动物体内存在的癌细胞数量。
含有一种或多种本文所述的ADCs(例如，含有抗HER2抗体(例如，MAB802)和一种或多种抗癌药物的ADCs)的组合物可以与包装材料组合并配置成试剂盒。包含在试剂盒中的包装材料可包含说明或标签，所述说明或标签描述如何将组合物用于治疗患有本文所述的表达HER2的癌症的哺乳动物(例如，人)。
本发明将在以下实施例中进一步描述，所述实施例不限制权利要求中描述的本发明的范围。
实施例
实施例1:MRG002的制备
MAB802的制备
MAB802是平均预期摩尔质量为145,423Da的人源化重组IgG1。根据MRG002分子的设计，其是基于与曲妥珠单抗相同的氨基酸序列开发的，具有提高的岩藻糖基化(降低的去岩藻糖基化)和降低的ADCC活性。
MAB802的轻链序列(SEQ ID NO:4)和重链序列(SEQ ID NO:9)被编码在表达质粒中，并由用这些质粒稳定共转染的CHO细胞表达。随后通过有限稀释进行的亚克隆产生了具有相对高的比生产率(specific productivity)、良好的生长特性和期望的产品质量的细胞系，并用于产生初级细胞库(PCB)，由此衍生出主细胞库(master cell bank)(MCB)和工作细胞库(WCB)。
通过解冻含有表达单克隆抗体MAB802的CHO细胞的WCB小瓶，开始制造MAB802。细胞在不断扩大的容器中连续扩增，直至形成250L的生产生物反应器。收获细胞，通过三步色谱纯化MAB802，然后通过纳米过滤步骤除去任何潜在的外来病毒因子。然后浓缩该池，并通过超滤/渗滤步骤将缓冲液交换成制剂缓冲液。将纯化和配制的MAB802散装物(bulk)过滤，装入瓶中，并储存。
MAB802的表征包括对抗体的结构特征和理化性质(包括一级、二级和高级结构、翻译后修饰、体外生物活性、纯度和杂质)的研究。
完整抗体、轻链和重链的分子量符合理论值；氨基酸序列与理论序列一致。
使用糖基化分析程序评估翻译后修饰。聚糖通过PNG酶F从mAb释放，并由荧光剂2-AB进行衍生化。衍生的聚糖用正相HPLC分析。分离每种聚糖级分，并根据其峰面积进行定量。代表性荧光色谱图如图2B所示。不同批次之间的翻译后修饰是一致的，并且去岩藻糖基化显著低于
Figure BDA0002941364610000331
(赫赛汀)(表1)。
表1.1:MAB802和
Figure BDA0002941364610000332
的N-聚糖百分比
Figure BDA0002941364610000333
表1.2:MAB802和
Figure BDA0002941364610000334
的去岩藻糖基化水平比较
Figure BDA0002941364610000335
Figure BDA0002941364610000341
表1.3：MAB802和
Figure BDA0002941364610000342
的去岩藻糖基化水平比较
Figure BDA0002941364610000343
注意：*三个批次的平均值
MAB802显示出显著低于
Figure BDA0002941364610000344
的ADCC活性(图4)，这与MAB802与
Figure BDA0002941364610000345
相比具有较低的CD16结合亲和力相一致。
MRG002的制备
MRG002是一种抗体药物缀合物(ADC)，由三种组分组成：抗HER2单克隆抗体(MAB802)、vc接头和奥瑞斯他汀衍生物MMAE(图1)。每个MRG002分子平均携带3.8个MMAE。
使用渗滤将约10mg的MAB802抗体缓冲液交换到还原缓冲液中，并使用A280测定蛋白质浓度。将还原剂DTT以2:1的摩尔比加入到抗体中，使反应混合物在室温下持续混合孵育2小时。然后，将部分还原的抗体用30KD超滤装置(容量为15mL)交换到缀合缓冲液中，并通过A280测定蛋白质浓度。取10μL样品，通过Ellman法测定每抗体中游离硫醇的平均数。
以下公式用于计算游离硫醇的摩尔浓度：
Figure BDA0002941364610000346
其中b是比色皿的光程长度(通常为1cm)。
基于抗体和游离硫醇的摩尔浓度计算每抗体的游离硫醇的平均数。
在纯DMSO中制备含有通过缬氨酸-瓜氨酸二肽连接的MMAE的药物-接头缀合物的溶液，将其以1:1的与游离硫醇的摩尔比加入到还原的抗体中，混合该组合物，并将所得混合物在室温下孵育30分钟，并持续搅拌。将N-乙酰基-L-半胱氨酸以20:1的与vcMMAE的摩尔比加入到反应混合物中，混合该组合物，并将所得混合物孵育5分钟。最后，使用30KD超滤装置(容量为15mL)将混合物纯化并缓冲交换到制剂缓冲液中，以获得成品，然后将其在≤-60℃下储存。
药物/抗体比率的测定：
制备的MRG002批次的药物/抗体比率(DAR)通过HIC-HPLC特征谱来测定(图3)。如其它地方所述(参见，例如，Ouyang,“第17章：Drug-to-Antibody Ratio(DAR)and DrugLoad Distribution by Hydrophobic Interaction Chromatography and ReversedPhase High-Performance Liquid Chromatography”2013；Laurent Ducry(编辑),Antibody-Drug Conjugates,Methods in Molecular Biology，第1045卷；SpringerScience+Business Media)，进行了HIC-HPLC。
实施例2:体外结合亲和力
材料和方法
使用Biacore T200通过表面等离子共振技术(SPR)分析了MRG002、MAB802和
Figure BDA0002941364610000351
与固定化HER2-Fc、人CD16a(176Val，His标签)和人CD16a(176Phe，His标签)的结合动力学。将抗his IgG和HER2-hFc分别在醋酸钠(pH 4.5)中稀释至20μg/mL和2μg/mL，分别以约6000和300个共振单位的量通过胺偶联固定在S系列传感器芯片CM5(GE Health)上；然后，对于具有固定的抗his IgG的流动池，以10μL/分钟的流速注射0.5μg/mL的人CD16a(176Val，His标签)或人CD16a(176Phe，His标签)以结合固定的抗his IgG。最后，将MRG002、MAB802或
Figure BDA0002941364610000352
在HBS-EP buffer(10mM HEPES,150mM NaCl,3.0mM EDTA,0.05％表面活性剂P20,pH 7.4)中的系列稀释液以30μL/分钟的流速注射到其相应的流动池中。使用BIAevaluation软件(BIAcore)，通过用二价结合模型拟合数据来计算结合速率(Ka)、解离速率(Kd)和解离平衡常数(KD)。
实验结果
体外结合亲和力(以下称为亲和力)研究包括MRG002、MAB802和参考药物
Figure BDA0002941364610000353
对人HER2以及人CD16a(176Val；176Phe)的亲和力。
研究了MRG002对人HER2、人CD16a(176Val)和人CD16a(176Phe)的亲和力。为了比较偶联前后亲和力的差异以及批次间的一致性，研究了3批MRG002和相应批次的MAB802。另外，本研究还比较了
Figure BDA0002941364610000354
与MRG002和MAB802的亲和力。如其它地方所述(参见，例如，Campbell等人，2007Biomaterials,28(15):2380-2392)，通过Biacore T200使用表面等离子体共振(SPR)技术来测量亲和力。
这些样品对人HER2抗原和人CD16a的结合亲和力如表2所示。
表2:使用Biacore测量的MRG002、MAB802和
Figure BDA0002941364610000361
对人HER2抗原和人CD16a的结合亲和力
Figure BDA0002941364610000362
对人HER2抗原的结合亲和力：3批MRG002的KD值的范围为6.625×10-11至7.503×10-11M；2批MAB802的KD值的范围为7.988×10-11至9.861×10-11M；
Figure BDA0002941364610000363
的KD值为1.219×10-10M。这些结果表明，缀合前后的亲和力相似，并且MAB802与
Figure BDA0002941364610000364
的亲和力相似。
Figure BDA0002941364610000365
与人HER2抗原的亲和力与文献中报道的一致(参见，例如，Selis等人，2016International journal of molecular sciences,17(4):491)。
与人CD16a(176Val，His标签)的结合亲和力：3批MRG002的KD值范围为8.094×10-08至8.465×10-08M；2批MAB802的KD值的范围为6.988×10-08至7.089×10-08M；
Figure BDA0002941364610000366
的KD值为2.484×10-08M。这些结果表明缀合前后亲和力是相似的。然而，MAB802的亲和力比
Figure BDA0002941364610000367
低3倍。
与人CD16a(176Phe，His标签)的结合亲和力：3批MRG002的KD值的范围为7.877×10-07至9.708×10-07M；2批MAB802的KD值的范围为6.620×10-07至6.894×10-07M；
Figure BDA0002941364610000368
的KD值为2.535×10-07M。这些结果表明，缀合前后的亲和力相似。然而，MAB802的亲和力比
Figure BDA0002941364610000369
低3倍。
实施例3:ADCC/CDC活性
材料和方法
MRG002是通过将重组人源化抗HER2 IgG1单克隆抗体MAB802与接头药物vcMMAE缀合而制备的。为了评估MRG002是否保留了来自MAB802(其为IgG1型单克隆抗体)的ADCC和CDC活性，测试了3批MRG002及其相应的MAB802批次的这些活性。
实验结果
使用工程化的NK细胞系作为效应细胞，高表达HER2的SKBR3细胞系作为靶细胞，以及
Figure BDA0002941364610000371
作为阳性参考药物，通过计算和比较靶细胞裂解的量(靶细胞裂解的最大百分比)来评估ADCC活性。实验结果如图4所示。
结果表明，对于3批MRG002，平均靶细胞裂解量为9.9％至12.7％，平均值为11.3％；对于2批MAB802，平均靶细胞裂解量为13.9％至15.7％，平均值为14.8％；对于
Figure BDA0002941364610000372
平均靶细胞裂解量为23.94％至33.07％，平均值为29.49％。结果表明，MRG002的ADCC活性与无药物缀合的MAB802相似，但明显低于
Figure BDA0002941364610000373
由于抗体的ADCC活性与其对CD16的亲和力呈正相关，因此与
Figure BDA0002941364610000374
相比，MRG002和MAB802的ADCC活性较低，这可通过对CD16的亲和力降低来解释(参见表2)。
Figure BDA0002941364610000375
的靶细胞裂解量与早先的报告(参见，例如，Zhao等人，2011Proceedings of the National Academy of Sciences,108(45):18342-18347)一致。
使用20％的正常人血清(NHS)作为补体来源，过表达HER2的SKBR3细胞作为靶细胞，通过测量靶细胞释放到培养基中的ATP的量来测定CDC活性。
Figure BDA0002941364610000376
对Ramos细胞的CDC活性用作阳性对照，
Figure BDA0002941364610000377
用作MAB802的参考药物。
结果表明，
Figure BDA0002941364610000378
对Ramos细胞的CDC活性非常明显，靶细胞裂解率为100％。然而，3批MRG002、3批MAB802和
Figure BDA0002941364610000379
对SKRB3细胞没有显示CDC活性。
Figure BDA00029413646100003710
对SKRB-3细胞没有显著CDC活性的结果与文献一致(参见，例如，Mamidi等人，2013Molecularoncology,7(3):580-594；Petricevic等人，2013Journal of translational medicine,11(1):307；和Haen等人，2016 Oncotarget,7(11):13013)。
实施例4:体外细胞毒性测定
材料和方法
将细胞解冻，并传代两代。除去培养基后，用5mL DPBS洗涤细胞一次，用3mL胰蛋白酶消化，洗涤并用培养基重悬。将0.5mL细胞混悬液用于细胞计数。细胞计数后，将细胞以8000个细胞/孔(对于SKBR3细胞)、20000个细胞/孔(对于BT-474细胞)、20000个细胞/孔(对于NCI-N87细胞)、24000个细胞/孔(对于MDA-MB-453细胞)的密度接种在96孔板中。在37℃孵育24小时后，加入连续稀释的T-DM1和MRG002，并与细胞一起孵育96小时，加入20μl/孔的CCK-8显色剂，最后通过分光计读取OD450-650，并进行读数的四个参数拟合。
试剂和来源分别列于表3和表4。
表3:测试品
Figure BDA0002941364610000381
表4:细胞系和培养基
Figure BDA0002941364610000382
注：Medicilon＝Shanghai Medicilon Inc.
结果
MRG002和T-DM1的平均IC50列于表5中，代表性体外细胞生长抑制曲线如图5所示。
表5:MRG002和T-DM1在不同细胞系中的抗增殖活性
Figure BDA0002941364610000391
注意：活动倍数＝T-DM1的平均IC50与MRG002的平均IC50的比率
表5显示MRG002在抑制这些癌细胞的生长方面比T-DM1更有效。例如，与T-DM1相比，MRG002杀死BT-474乳腺癌细胞的效力高25倍，杀死NCI-N87胃癌细胞系的效力高5.3倍。
实施例5:体内药效研究
材料和方法
在两个CDX(细胞系来源的异种移植物)和多个PDX(患者来源的异种移植物)模型中评价了MRG002的抗肿瘤活性。这两个CDX模型是用乳腺癌细胞株BT-474和胃癌细胞株NCI-N87建立的，两者都具有高水平的HER2表达，然而PDX模型显示不同水平的HER2表达。
将～5×106个BT-474或NCI-N87细胞皮下接种于BALB/c裸鼠中，建立CDX模型。植入BT-474的小鼠接受皮下放置的颗粒形式的β-雌二醇，以促进肿瘤生长。当肿瘤生长至约150mm3～250mm3的尺寸时，以q7d×2、q7d×3或q7d×4方案静脉内注射MRG002、T-DM1或非结合对照ADCs。
通过将人乳腺癌或胃癌组织的小碎片(15-30mm3)皮下植入BALB/c裸鼠中来建立PDX模型。在移植前三天，计划用于乳腺癌异种移植的小鼠接受皮下放置的颗粒形式的β-雌二醇以促进肿瘤生长。当肿瘤生长至约150mm3至约250mm3时，按q3w×4静脉内施用MRG002、T-DM1或非结合对照ADC。
PDX模型由许多胃癌和乳腺癌模型组成，这些模型中有许多是
Figure BDA0002941364610000401
耐药性的。在所有这些实验中，商购可得的HER2靶向ADC药物T-DM1
Figure BDA0002941364610000402
被用作比较抗肿瘤活性的参考药物。
在整个研究过程中，每周测量肿瘤尺寸两次。使用以下公式计算肿瘤尺寸：肿瘤体积(TV)＝肿瘤长度(l)×肿瘤宽度(w)2/2，其中“l”和“w”分别表示肿瘤的长度和宽度；相对肿瘤体积(RTV)＝Vf/V0，其中V0是分组前(即,第0天)测量的肿瘤体积，Vf是实验最后一天测量的肿瘤体积；T/C(％)＝(测试品组的RTV/媒介物组的RTV)×100％；TGI％＝(媒介物组的平均TV-测试品组的平均TV)/测试品组的平均TV×100％。所有动物实验都是按照经批准的机构动物护理和设施协议进行的。
在BT-474和NCI-N87 CDX模型中进行了探索性研究，初始信息列于表6中。
表6:体内药效研究中使用的2个CDX模型的信息
Figure BDA0002941364610000403
结果
乳腺癌和胃癌CDX模型的体内药效
MRG002在BT-474乳腺癌CDX模型中的抗肿瘤活性。图6显示MRG002(3mg/kg,iv,q7d×2)和赫赛汀-ADC(3mg/kg,iv,q7d×2)均在D21在6/6小鼠中引起完全肿瘤消退。同时，T-DM1(3mg/kg，iv，q7d×2)和mAb-2(3mg/kg，iv，q7d×2)在D21时的抑瘤率分别为64％和57％。所有测试品均被荷瘤小鼠良好耐受。
MRG002在NCI-N87胃癌CDX模型中的抗肿瘤活性
探索性研究中MRG002的抗肿瘤活性如图7所示。MRG002(3mg/kg，iv，q7d×3)显著抑制高表达HER2的NCI-N87异种移植物的生长，其中T/C(％)＝10.00％，TGI％＝90.07％。T-DM1(3mg/kg,iv,q7d×3)的T/C(％)和TGI％分别为31.72％和67.52％。赫赛汀-ADC(3mg/kg,iv,q7d×3)的T/C(％)和TGI％分别为8.28％和91.86％。mAb-2(3mg/kg,iv,q7d×3)的T/C(％)和TGI％分别为74.83％和26.28％。所有测试品均被荷瘤小鼠耐受。
乳腺癌和胃癌PDX模型的体内药效
MRG002在乳腺癌PDX模型BC#046中的抗肿瘤活性。
BC#046是
Figure BDA0002941364610000411
耐药性人乳腺癌PDX模型。结果(图8)显示，在第63天，MRG002剂量组的T/C(％)在1mg/kg时的为45.07％(P<0.001)，在3mg/kg时的为0.45％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为54.93％和99.55％，T-DM1的T/C(％)和TGI％在3mg/kg时分别为6.56％(P<0.001)和93.44％。
这些结果表明，对于过表达HER2的人PDX模型BC#046，MRG002和T-DM1在3mg/kg下均可有效抑制肿瘤生长，在相同剂量水平下，MRG002比T-DM1更有效。所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1均有良好的耐受性。
MRG002在乳腺癌PDX模型BC#197中的抗肿瘤作用
BC#197是
Figure BDA0002941364610000412
耐药性人乳腺癌PDX模型。结果(图9)显示，在第69天，MRG002组的T/C(％)在3mg/kg时为14.11％(P<0.001)，在10mg/kg时为2.26％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为85.89％和97.74％，肿瘤完全消退分别为1/8和5/8，肿瘤部分消退分别为1/8和3/8；T-DM1的T/C(％)和TGI％在10mg/kg下分别为63.31％(P<0.001)和36.69％。
这些结果表明，对于过表达HER2的PDX模型BC#197，MRG002在3mg/kg和10mg/kg下均有效地抑制了肿瘤生长，而T-DM1在10mg/kg下显示出对肿瘤生长没有太大的抑制作用。所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1均有良好的耐受性。
MRG002在胃癌PDX模型STO#041中的抗肿瘤作用
STO#041是
Figure BDA0002941364610000421
耐药性人胃癌PDX模型。结果(图10)显示，在第46天，MRG002剂量组的T/C(％)在1mg/kg下为61.46％(P<0.001)，在3mg/kg下为32.47％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为38.54％和67.53％；T-DM1的T/C(％)和TGI％在3mg/kg下分别为83.66％(P>0.05)和16.34％。
这些结果表明，对于过表达HER2的人PDX模型STO#041，只有的MRG002在3mg/kg下显示出显著的肿瘤抑制作用。所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1均有良好的耐受性。
MRG002在胃癌PDX模型STO#053中的抗肿瘤作用
结果(图11)显示，在第45天，MRG002剂量组的T/C(％)在3mg/kg下为47.75％(P<0.01)，在10mg/kg下为0.65％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为52.25％和99.35％；T-DM1的T/C(％)和TGI％在10mg/kg下分别为19.43％(P>0.05)和80.57％。
这些结果表明，对于过表达HER2的人PDX模型STO#053，MRG002在3mg/kg下以及T-DM1在10mg/kg下均显示出对肿瘤生长的显著抑制，而MRG002在3mg/kg下显示出对肿瘤生长没有太大的抑制作用。另外，所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1的耐受性良好。
MRG002在胃癌PDX模型STO#069中的抗肿瘤作用
结果(图12)显示，在第40天，MRG002剂量组的T/C(％)在1mg/kg下为70.78％(P>0.05)，在3mg/kg下为6.02％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为29.22％和93.98％；T-DM1的T/C(％)和TGI％在3mg/kg下分别为90.03％(P>0.05)和9.97％。
这些结果表明，对于过表达HER2的人PDX模型STO#069，只有3mg/kg的MRG002显示出显著的肿瘤抑制作用。所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1均有良好的耐受性。
MRG002在胃癌PDX模型STO#179中的抗肿瘤作用
STO#179是
Figure BDA0002941364610000422
耐药性人胃癌PDX模型。结果(图13)显示，在第59天，MRG002剂量组的T/C(％)在1mg/kg下为35.20％(P<0.001)，在3mg/kg下为4.14％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为64.80％和95.86％；T-DM1的T/C(％)和TGI％在3mg/kg下分别为92.56％(P>0.05)和7.44％。
这些结果表明，对于过表达HER2的人PDX模型STO#179，MRG002在1mg/kg和3mg/kg下均以剂量依赖性方式表现出显著的抗肿瘤活性，而T-DM1在3mg/kg下没有表现出显著的肿瘤生长抑制作用。所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1均有良好的耐受性。
MRG002在胃癌PDX模型STO#240中的抗肿瘤作用
STO#240是
Figure BDA0002941364610000431
耐药性人胃癌PDX模型。结果(图14)显示，在第83天，MRG002剂量组的T/C(％)在3mg/kg下为20.70％(P<0.001)，在10mg/kg下为18.78％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为79.30％和81.22％；T-DM1的T/C(％)和TGI％在10mg/kg下分别为40.96％(P<0.01)和59.04％。
这些结果表明，对于过表达HER2的人PDX模型STO#240，MRG002在3mg/kg和10mg/kg下均显示出显著的抗肿瘤活性，而T-DM1在10mg/kg下未显示出显著的肿瘤生长抑制作用。所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1均有良好的耐受性。
MRG002在胃癌PDX模型STO#410中的抗肿瘤作用
STO#410是
Figure BDA0002941364610000432
耐药性人胃癌PDX模型。结果(图15)显示，在第38天，MRG002剂量组的T/C(％)在3mg/kg下为39.94％(P<0.001)，在10mg/kg下为0％(P<0.001)，而其相应的TGI％分别为60.06％和100％；T-DM1的T/C(％)和TGI％在10mg/kg下分别为108.79％(P>0.05)和-8.79％。
这些结果表明，对于过表达HER2的人PDX模型STO#410，MRG002在3mg/kg和10mg/kg下均显示出显著的抗肿瘤活性，而T-DM1在10mg/kg下未显示出对肿瘤生长的抑制作用。所有荷瘤小鼠对MRG002和T-DM1均有良好的耐受性。
总结
这些模型的抗肿瘤活性概述于表7中。
表7:MRG002(i.v.,q3w×4)在胃癌(STO)和乳腺癌(BC)的HER2阳性PDX模型中的体内药效。
Figure BDA0002941364610000441
Figure BDA0002941364610000451
注:“/”表示不适用；肿瘤体积(TV)＝l×w2/2，其中“l”和“w”分别代表肿瘤的长度和宽度；相对肿瘤体积(RTV)＝Vf/V0，其中V0是分组前(即，第0天)测量的肿瘤体积，Vf是实验最后一天测量的肿瘤体积；T/C(％)＝(测试品组的RTV/媒介物组的RTV)×100％；TGI％＝(媒介物组的平均TV-测试品组的平均TV)/测试品组的平均TV×100％。
体外细胞毒性测定表明，MRG002在抑制许多乳腺癌和胃癌细胞的癌细胞生长方面明显比T-DM1更有效(表7)。
体内药效研究结果表明，MRG002显著抑制乳腺和胃CDX和PDX模型中的肿瘤生长，并且被荷瘤小鼠良好耐受。值得注意的是，MRG002显著抑制
Figure BDA0002941364610000452
耐药性肿瘤和
Figure BDA0002941364610000453
耐药性PDX模型的肿瘤生长。。
这些结果表明，MRG002在体外和体内显示出比目前可用的ADCs更好的抗肿瘤活性。
其它实施方案
应当理解，虽然已经结合本发明的详细描述描述了本发明，但前述描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其它方面、有利方面和修改在以下权利要求的范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 上海美雅珂生物技术有限责任公司
<120> 治疗癌症的方法和材料
<130> IDC210006
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
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Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala
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<212> PRT
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<220>
<223> MAB802 轻链CDR2
<400> 2
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
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<212> PRT
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<223> MAB802 轻链CDR3
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Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
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<223> MAB802 轻链
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
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<223> MAB802 重链片段
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
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Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
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<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAB802 重链
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 10
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAB802 重链变体
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450

Claims (55)

1.一种抗体-药物缀合物，其包含：
具有大于约90％岩藻糖基化的抗HER2抗体，
至少一分子抗癌药物，和
连接所述抗HER2抗体和所述至少一分子所述抗癌药物的接头。
2.如权利要求1所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体是IgG抗体。
3.如权利要求1-2中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体是人源化抗体。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体包含轻链，所述轻链包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体包含重链，所述重链包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
6.如权利要求5所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体包含重链，所述重链包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体是MAB802抗体。
8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体具有小于约14％的去岩藻糖基化(afucosylation)。
9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体对CD16具有结合亲和力，其平衡解离常数(KD)值大于约2.5×10-08M。
10.如权利要求9所述的抗体-药物缀合物，其中所述CD16是人176Val CD16a，并且其中所述KD为约6.9×10-08M至约7.1×10-08M。
11.如权利要求9所述的抗体-药物缀合物，其中所述CD16是人176Phe CD16a，并且其中所述KD为约6.6×10-07M至约6.9×10-07M。
12.如权利要求1-15中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述ADC包含每分子抗体至少三分子的所述抗癌药物。
13.如权利要求1-12中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗癌药物是奥瑞斯他汀(auristatin)衍生物。
14.如权利要求13所述的抗体-药物缀合物，其中所述奥瑞斯他汀(auristatin)衍生物是单甲基奥瑞斯他汀E(MMAE)。
15.权利要求1-14中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述接头是可切割的接头。
16.如权利要求15所述的抗体-药物缀合物，其中所述接头包括缬氨酸瓜氨酸二肽接头。
17.一种包含多种抗体-药物缀合物的组合物，所述抗体-药物缀合物包含：
具有大于约90％岩藻糖基化的抗HER2抗体，
至少一分子抗癌药物，和
连接所述抗HER2抗体和所述至少一分子所述抗癌药物的接头。
18.如权利要求17所述的组合物，其中所述抗HER2抗体是IgG抗体。
19.权利要求17-18中任一项所述的组合物，其中所述抗HER2抗体是人源化抗体。
20.如权利要求17-19中任一项所述的组合物，其中所述抗HER2抗体包含轻链，所述轻链包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
21.如权利要求17-20中任一项所述的组合物，其中所述抗HER2抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
22.如权利要求21所述的组合物，其中所述抗HER2抗体包含重链，所述重链包含如SEQID NO:9所示的氨基酸序列。
23.如权利要求17-22中任一项所述的组合物，其中所述抗HER2抗体是MAB802抗体。
24.如权利要求17-23中任一项所述的组合物，其中所述抗HER2抗体具有少于约14％的去岩藻糖基化。
25.如权利要求17-24中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含大于每抗HER2抗体约3.5分子所述抗癌药物的的药物/抗体比率。
26.如权利要求25所述的组合物，其中所述组合物包含每抗HER2抗体约3.8分子所述抗癌药物的药物/抗体比率。
27.如权利要求17-26中任一项所述的组合物，其中所述抗癌药物是奥瑞斯他汀(auristatin)衍生物。
28.如权利要求27所述的组合物，其中所述奥瑞斯他汀(auristatin)衍生物是单甲基奥瑞斯他汀E(MMAE)。
29.如权利要求17-28中任一项所述的组合物，其中所述接头是可切割的接头。
30.如权利要求29所述所述的组合物，其中所述接头包括缬氨酸瓜氨酸二肽接头。
31.一种治疗患有表达HER2的癌症的哺乳动物的方法，所述方法包括：
向所述哺乳动物施用抗体-药物缀合物(ADC)，其中所述ADC包含具有大于约90％岩藻糖基化的抗HER2抗体、至少一分子抗癌药物和连接所述抗HER2抗体与所述至少一分子抗癌药物的接头。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
33.如权利要求31-32中任一项所述的方法，其中所述表达HER2的癌症是乳腺癌。
34.如权利要求31-23中任一项所述的方法，其中所述表达HER2的癌症是胃癌。
35.如权利要求31-34中任一项所述的方法，其中所述表达HER2的癌症是难治性癌症。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述难治性癌症是曲妥珠单抗耐药性癌症。
37.如权利要求35所述的方法，其中所述难治性癌症是T-DM1耐药性癌症。
38.如权利要求31-37中任一项所述的方法，其中所述抗HER2抗体是IgG抗体。
39.如权利要求31-38中任一项所述的方法，其中所述抗HER2抗体是人源化抗体。
40.如权利要求31-39中任一项所述的方法，其中所述抗HER2抗体包含轻链，所述轻链包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
41.如权利要求31-40中任一项所述的方法，其中所述抗HER2抗体包含重链，所述重链包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述抗HER2抗体包含重链，所述重链包含如SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列。
43.如权利要求31-42中任一项所述的方法，其中所述抗HER2抗体是MAB802抗体。
44.如权利要求31-43中任一项所述的方法，其中所述抗HER2抗体具有小于约14％的去岩藻糖基化。
45.如权利要求31-44中任一项所述的方法，其中所述抗HER2抗体对CD16具有结合亲和力，其平衡解离常数(KD)值大于约2.5×10-08M。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述CD16是人176Val CD16a，并且其中所述KD为约6.9×10-08M至约7.1×10-08M。
47.如权利要求45所述的方法，其中所述CD16是人176Phe CD16a，并且其中所述KD为约6.6×10-07M至约6.9×10-07M。
48.如权利要求31-47中任一项所述的方法，其中所述ADC具有导致约0％至约30％的细胞裂解的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述ADC具有导致约13.9％至约15.7％的细胞裂解的ADCC活性。
50.如权利要求31-49中任一项所述的方法，其中所述ADC包含每分子抗HER2抗体至少三分子的所述至少一种抗癌药物。
51.如权利要求31-50中任一项所述的方法，其中所述抗癌药物是奥瑞斯他汀(auristatin)衍生物。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述奥瑞斯他汀(auristatin)衍生物是单甲基奥瑞斯他汀E(MMAE)。
53.如权利要求31-52中任一项所述的方法，其中所述接头是可切割的接头。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述接头包括缬氨酸瓜氨酸二肽接头。
55.如权利要求31-54中任一项所述的方法，其中所述施用包括每kg所述哺乳动物体重施用约0.6mg至约4mg所述ADC。
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