TW201739472A - 抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體及妥布賴森(tubulysin)類似物之抗體藥物結合物、製備及用途 - Google Patents

抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體及妥布賴森(tubulysin)類似物之抗體藥物結合物、製備及用途

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Abstract

本發明提供一種抗體藥物結合物，其具有由式(I)表示之結構：□其中m為1、2、3或4，且Ab為具有如本文所揭示之重鏈及輕鏈CDRs的抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體。

Description

抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體及妥布賴森(TUBULYSIN)類似物之抗體藥物結合物、製備及用途
本發明係關於抗體藥物結合物。特定言之，本發明係關於抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體及妥布賴森(tubulysin)類似物之抗體藥物結合物。
本發明係關於抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體及妥布賴森類似物之抗體藥物結合物，及其調配物及用途。 抗體藥物結合物(ADC，亦稱作免疫結合物)為目前產生強烈關注之抗癌劑。在ADC中，治療劑(亦稱作藥物、彈頭或有效負載物)共價連接或結合至抗體，該抗體抗原係由癌細胞表現。抗體經由其結合於抗原而將ADC引導至癌症，亦即，抗體充當專門將ADC傳遞至癌細胞之靶向劑。一旦到達，共價鍵聯(稱作連接子)斷裂或抗體降解，引起治療劑在癌症部位釋放。相反地，當ADC在血液體系中循環時，治療劑由於其與抗體之共價鍵聯而保持無活性。因此，ADC中之治療劑由於其定位釋放可比普通化學治療劑更加有效(亦即，具細胞毒性)。最近，兩種ADC已獲得上市許可：ADCETRIS™，其中抗CD30抗體與奧瑞他汀(auristatin)結合，及KADCYLA™，其中抗Her2抗體曲妥珠單抗(trastuzumab)與類美登素(maytansinoid)結合。關於ADC之作用模式之評介，參見Schrama等人. 2006。(本文中利用第一作者或發明人引用之此文獻及其他文獻的完整文獻目錄引用列在本說明書的結尾處)。 磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3為癌胚抗原，其屬於糖基-磷脂醯肌醇-錨定之硫酸肝素蛋白聚糖之磷脂醯肌醇蛋白聚糖家族。磷脂醯肌醇蛋白聚糖之特徵為與稱為肝素硫酸鹽葡糖胺聚糖之錯雜多醣鏈的共價鍵聯。磷脂醯肌醇蛋白聚糖涉及在細胞-胞外基質介面處之細胞信號傳導(Sasisekharan等人.2002)。迄今為止，已鑑別出人類磷脂醯肌醇蛋白聚糖家族之六個獨特的成員。細胞膜結合之磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3由經一或多個二硫鍵連接之兩個次單元組成。 磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3在發育期間表現在胎兒肝臟及胎盤中且在正常成人組織中下調或靜默。磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3基因中之突變及耗乏造成人類辛普森-果拉比-貝美勒(Simpson-Golabi-Behmel)或辛普森畸形症候群。磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3表現在不同癌症中，且特定言之，肝細胞癌(HCC，肝癌之最常見形式)、黑素瘤、威爾姆氏腫瘤(Wilm's tumor)，及肝母細胞瘤(Jakubovic及Jothy 2007；Nakatsura及Nishimura 2005)。 HCC為全世界癌症相關聯之死亡的第三大主要原因。每年，HCC導致約1百萬例死亡(Nakatsura及Nishimura 2005)。導致肝之肝硬化的B型肝炎病毒、C型肝炎病毒及長期大量飲酒仍為HCC之最常見原因。其發病率由於C型肝炎病毒感染之傳播已在美國顯著上升且預期在今後二十年會繼續上升。HCC主要藉由肝移植或腫瘤切除術來治療。患者預後視基本肝功能及腫瘤經診斷所在之分期兩者而定(Parikh及Hyman 2007)。因此，需要有效的HCC治療策略。 存在抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體在癌症療法中用作治療性抗體或用於結合物中的不同揭示內容。Smith等人.2007揭示抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體與奧瑞他汀之結合物。Zhang等人.2014揭示抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體與DNA小溝結合劑環丙烷苯并吲哚(CBI)型烷基化劑之ADC。Terrett等人.2014揭示抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體及其用於治療與磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3相關之病況(包括HCC)之用途，以及一般地，其在免疫結合物中之用途。與抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體之免疫結合物相關之其他揭示內容包括Ho等人.2015及2015。
本發明提供一種抗體藥物結合物(ADC)，其包含作為靶向劑之抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體以及妥布賴森類似物，該ADC具有出乎意料所需的效能、治療指數及藥物動力學特性之組合且其可用於治療多種癌症，包括HCC、肺癌及卵巢癌。該抗體藥物結合物具有由式I表示之結構其中 m為1、2、3或4且 Ab為具有以下之抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體 (a) 重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO:1； (b) 重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO:2； (c) 重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO:3； (d) κ輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO:4； (e) κ輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO:5；以及 (f) κ輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO:6。 如由下標m反映，視抗體Ab具有可用於結合之位點的數目及所採用之實驗條件而定，各抗體Ab可與超過一個藥物部分結合。熟習此項技術者將瞭解，當每一個別抗體Ab與整數個藥物部分結合時，可分析結合物之結合製劑之藥物部分與抗體Ab之非整數比，反映統計學平均值。此比率稱作取代比率(SR)或同義地，藥物-抗體比率(DAR)。較佳地，每一抗體Ab與3個或4個藥物部分(亦即，m為3或4)結合。結合製劑之平均值m較佳地在3與3.5之間(亦即，DAR為3至3.5)。 在一較佳實施例中，抗體Ab具有根據SEQ ID NO:7之重鏈可變區胺基酸序列及根據SEQ ID NO:8之κ輕鏈可變區胺基酸序列。 在另一較佳實施例中，抗體Ab具有包含SEQ ID NO:9之重鏈恆定區及包含SEQ ID NO:10之κ輕鏈恆定區。重鏈恆定區可在其C端進一步具有離胺酸。 在又一較佳實施例中，抗體Ab具有包含SEQ ID NO:11之重鏈及包含SEQ ID NO:12之κ輕鏈。此抗體在本文中稱作GPC3.1。相對應地。其中抗體為GPC3.1之式I之ADC在本文中稱作ADC3.1。 抗體GPC3.1之重鏈視情況可在其C端進一步具有離胺酸。 本發明亦提供一種治療患有癌症之人類個體中之該癌症的方法，其包含向該人類個體投與治療有效量之本發明之抗體藥物結合物，其中該癌症為肝細胞癌、卵巢癌或肺癌，尤其肝癌或肺癌。抗體藥物結合物較佳地以在0.1 mg/kg與20 mg/kg之間，較佳地在0.5 mg/kg與15 mg/kg之間，且更佳地在1.0 mg/kg與5 mg/kg之間的劑量經靜脈內投與。 本發明亦提供一種醫藥調配物，其包含本發明之抗體藥物結合物及醫藥學上可接受之賦形劑。 本發明亦提供編碼包含SEQ ID NO:11之抗體重鏈的經分離核酸分子，該核酸分子較佳地包含SEQ ID NO:13。 本發明亦提供包含SEQ ID NO:13之核酸分子的表現載體，及包含此類表現載體之宿主細胞。 本發明亦提供編碼包含SEQ ID NO:12之抗體κ鏈的經分離核酸分子，該核酸分子包含SEQ ID NO:15。 本發明亦提供包含SEQ ID NO: 15之核酸分子的表現載體，及包含此類表現載體之宿主細胞。
相關申請案之交叉參考 本申請案根據35 U.S.C. §119(e)主張2016年5月10日申請之美國臨時申請案第62/333,944號之權益；其揭示內容以引用之方式併入本文中。 定義 「抗體」意謂全抗體及其任何抗原結合片段(亦即「抗原結合部分」)或單鏈變異體。全抗體為包含至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈由二硫鍵相互連接之蛋白。每一重鏈包含重鏈可變區(VH )及包含三個域(CH1 、CH2 及CH3 )之重鏈恆定區。每一輕鏈包含輕鏈可變區(VL 或Vk )及包含單一域CL 之輕鏈恆定區。VH 及VL 區可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，穿插較保守的構架區(FR)。各VH 及VL 包含三個CDR及四個FR，以下列次序自胺基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。可變區含有與抗原相互作用之結合域。恆定區可調節抗體與宿主組織或因子(包括免疫系統之各種細胞(例如效應細胞)及典型補體系統之第一成分(Clq))之結合。若抗體結合至抗原X以5×10-8 M或更低，更佳地1×10-8 M或更低，更佳地6×10-9 M或更低，更佳地3×10-9 M或更低，甚至更佳地2× 10-9 M或更低之KD ，則稱該抗體與抗原X「特異性結合」。抗體可為嵌合、人類化，或較佳為人類抗體。重鏈恆定區可經工程改造以影響糖基化類型或程度、以延長抗體半衰期、以增強或減小與效應細胞或補體系統之相互作用，或以調變一些其他特性。該工程改造可藉由置換、添加或缺失一或多個胺基酸或藉由一域與另一免疫球蛋白類型之一域置換，或前述之組合來實現。 抗體之「抗原結合片段」及「抗原結合部分」(或簡稱「抗體部分」或「抗體片段」)意謂保留特異性結合於抗原能力的抗體之一或多個片段。已顯示抗體之抗原結合功能可由全長抗體之片段執行，諸如(i) Fab片段，由VL 、VH 、CL 及CH1 域組成之單價片段；(ii) F(ab')2 片段，包含兩個Fab片段由在鉸鏈區之二硫橋鍵連接之二價片段；(iii) Fab'片段，其基本上為具有鉸鏈區之部分的Fab (參見例如Abbas等人，Cellular and Molecular Immunology ，第6版，Saunders Elsevier 2007)；(iv) Fd片段，其由VH 及CH1 域組成；(v) Fv片段，其由抗體之單臂之VL 及VH 域組成；(vi) dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341 :544-546)，其由VH 域組成；(vii)經分離之互補決定區(CDR)；以及(viii)奈米抗體，含有單一可變域及兩個恆定域之重鏈可變區。較佳的抗原結合片段為Fab、F(ab')2 、Fab'、Fv及Fd片段。此外，儘管Fv片段之兩個域VL 及VH 由各別基因編碼，但其可利用重組方法藉由能夠將其作成單一蛋白鏈的合成連接子接合，其中VL 及VH 區配對形成單價分子(稱為單鏈Fv或scFv；參見例如Bird等人 (1988)Science 242 :423-426；及Huston 等人 (1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879-5883)。此單鏈抗體亦涵蓋於術語抗體之「抗原結合部分」內。 「經分離抗體」意謂基本上不含具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體(例如，特異性結合抗原X之經分離抗體基本上不含特異性結合除抗原X以外之抗原的抗體)。然而，特異性結合抗原X之經分離抗體可與其他抗原(諸如來自其他物種之抗原X分子)具有交叉反應性。在某些實施例中，經分離抗體特異性結合於人類抗原X且不與其他(非人類)抗原X抗原交叉反應。此外，經分離抗體可基本上不含其他細胞物質和/或化學物質。 「單株抗體」或「單株抗體組合物」意謂具有單一分子組成之抗體分子之製劑，其對特定抗原決定基展示單一結合特異性及親和力。 「人類抗體」意謂具有可變區之抗體，其中構架及CDR區兩者(及恆定區，若存在)來源於人類生殖系免疫球蛋白序列。人類抗體可包括後續修飾，包括自然或合成修飾。人類抗體可包括不由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如，藉由活體外隨機或位點特異性突變誘發或活體內體細胞突變引入之突變)。然而，「人類抗體」不包括其中來源於另一哺乳動物物種(諸如鼠)之生殖系之CDR序列已移植至人類構架序列上的抗體。 「人類單株抗體」意謂呈現單一結合特異性之抗體，其具有其中構架區及CDR區兩者皆衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區。在一個實施例中，人類單株抗體由包括自轉殖基因非人類動物(例如，轉殖基因鼠)獲得之B細胞的融合瘤產生，該動物具有包含人類重鏈轉殖基因及融合至永生化細胞之輕鏈轉殖基因之基因體。 抗體GPC3.1 初看，待由ADC中之抗體執行的作用表現為僅一個：導引結合藥物至靶細胞，且一旦到達，即釋放其藥物有效負載物在靶細胞內部或其環境中。然而，對於有成效之ADC選擇適合之抗體需要除僅結合於所關注之抗原以外的多個變量。多個因素可影響ADC之整體功效，包括在到達靶細胞之前在循環中之穩定性、與抗原之結合親和力、相對於亦表現該抗原之非靶細胞之安全性，以及藥物動力學。此等因素間之相互作用難以預測。如在下文呈現之資料展示，並非結合於磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3之所有抗體產生與抗體GPC3.1一樣有效的ADC。 抗體GPC3.1之重鏈之CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2及SEQ ID NO:3之胺基酸。抗體GPC3.1之輕(κ)鏈之CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6之胺基酸。重鏈可變區及κ鏈可變區之胺基酸序列分別由SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8給出。 抗體GPC3.1之重鏈恆定區為IgG1同型，包含R214、E356及M358異型 (根據如Kabat等人，「Sequences of proteins of immunological interest」第5版，出版第91-3242號，U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991中所列舉之EU索引編號；下文稱為「Kabat」)。其胺基酸序列列舉於SEQ ID NO:9中。此異型組合在白種人群中具有較高流行率。 抗體GPC3.1之κ輕鏈恆定區具有如SEQ ID NO:10中所列舉之胺基酸序列。 抗體GPC3.1之完整重鏈胺基酸序列及κ輕鏈胺基酸序列分別列舉於SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中。 Terrett等人. 2014揭示具有與IgG1或IgG4同型之抗體GPC3.1相同之重鏈及輕鏈可變區的抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體4A6。通常進一步揭示抗體4A6可用於ADC中，但並不提供任何工作實例。 抗體GPC3.1可藉由其重鏈及κ鏈在適合之宿主細胞中之重組表現來產生。SEQ ID NO:13展示DNA序列，包含可用於重組產生重鏈之信號肽，而SEQ ID NO:14展示藉此編碼之胺基酸序列。DNA與胺基酸序列之間的比對展示於圖 1A 至 1C 中。SEQ ID NO:15展示DNA序列，包含可用於重組產生κ鏈之信號肽，而SEQ ID NO:16展示藉此編碼之胺基酸序列。DNA與胺基酸序列之間的比對展示於圖 2A 至 2B 中。 熟習此項技術者將知道，在抗體係用重鏈C端離胺酸基以重組方式產生時，該離胺酸常常在細胞培養產生期間由內源性羧肽酶移除(Luo等人，2012)。因此抗體GPC3.1亦可採用對應於SEQ ID NO:13但具有用於C端位置處之離胺酸的額外密碼子的DNA序列並隨後允許轉譯後酶促去除離胺酸來產生。 本發明亦提供編碼抗體GPC3.1之核酸，特定言之編碼其重鏈(SEQ ID NO:11)之核酸(SEQ ID NO:13)，及此類核酸之保守修飾。「保守修飾」意謂，對於核酸序列而言，藉由除修飾以外之另一核酸替代其中之核酸的修飾產生編碼與由原始核酸序列編碼之一者相比相同的或經保守修飾的胺基酸序列的經修飾核酸序列，或在原始核酸不編碼胺基酸序列時，所得經修飾之核酸序列基本上與原始核酸序列相同。因為基因密碼之簡併，大量功能上相同之核酸序列可編碼任何既定蛋白。核酸序列可具有複數個保守修飾。 當多肽或核酸分子與特定SEQ ID NO:相關時，較佳地此類多肽或核酸分子由相關SEQ ID NO:之胺基酸或核酸序列組成。 治療劑及連接子 本發明之結合物中之治療劑為合成妥布賴森類似物且具有由式(II)表示之結構(Cheng等人，2013)：。 妥布賴森為強效自然存在之細胞毒素，其充當藉由阻止微管蛋白組裝進入微管中來干擾有絲分裂的抗有絲分裂劑。經感染細胞在G2 /M期積聚並經受細胞凋亡。 為將治療劑結合至抗體，需要連接子部分。在本發明之個例中，連接子部分具有由式(III)表示之結構：其包含纈胺酸-瓜胺酸二肽(Val-Cit，以習知的N至C方向敍述)，其經設計以在ADC到達靶癌細胞並由其內化之後由胞內酶組織蛋白酶B裂解，由此釋放治療劑以發揮其細胞毒素效應。參見Dubowchik等人，1998a、1998b及2002。 在本發明之結合物之製備中，藥物(II)及連接子(III)藉由在連接子(II)之瓜胺酸之-CO2 H基團與化合物(II)之芳族-NH2 之間形成醯胺鍵來偶合，產生具有由式(IV)表示之結構的治療劑-連接子化合物。化合物(IV)隨後結合至抗體以製備式(I)之ADC。抗體GPC3.1之離胺酸殘基之側鏈中之ε-胺基與2-亞胺基硫雜環戊烷反應以引入游離硫醇(-SH)基團。硫醇基可與化合物(IV)中之順丁烯二醯亞胺基反應以實現結合： 通常，實現每一抗體兩至四個硫醇之硫醇化程度。關於代表性程序，參見Cong等人.2015，其揭示內容以引用之方式併入本文中。 除自然存在之妥布賴森之外，具有強效細胞毒活性之合成妥布賴森類似物為已知的，例如Cheng等人.2013及Cong 2015中所揭示。此等參考文獻進一步揭示此類妥布賴森類似物可用於ADC中。 特定言之，Cheng等人.2013揭示以下各者之製備：妥布賴森類似物-連接子化合物，在彼處稱為式(VI-t)(亦即，與上文式(IV)相同，除羧酸α位之外消旋甲基以外)，及在其中表4處，其與抗CD70抗體或抗間皮素抗體之結合物。實例 可參考以下實例進一步理解本發明之實踐，該等實例係以說明之方式提供且不具有限制性。實例 1 將抗體GPC3.1 VH 及VK 序列選殖入含有黏骨素信號序列及人類IgG1及κ恆定區之表現載體中。將所得重鏈及輕鏈表現載體共轉染至CHO細胞中且針對IgG表現選擇並篩檢穩定純系。選擇並擴增一個純系以用於抗體產生。實例 2 此通用程序可用於製得本文所揭示之ADC3.1及其他抗體藥物結合物。最初，抗體緩衝更換成含有50 mM NaCl及2 mM二伸乙三胺五乙酸(DTPA)之0.1 M磷酸鹽緩衝液(pH 8.0)並濃縮至5 mg/mL至10 mg/mL。經由添加2-亞胺基硫雜環戊烷(thiolane)至抗體來實現硫醇化。添加之2-亞胺基硫雜環戊烷之量可藉由初步實驗測定且在抗體與抗體之間變化。在初步實驗中，將遞增量之2-亞胺基硫雜環戊烷之滴定添加至抗體中，且在室溫(室溫，大約25℃)與抗體一起培育1小時後，使用SEPHADEX™ G-25管柱在50 mM HEPES、5 mM甘胺酸、2 mM DTPA (pH 5.5)中使抗體去鹽，且藉由與二硫二吡啶(DTDP)反應來快速測定引入之硫醇基的數目。硫醇基與DTDP之反應導致釋放硫吡啶，其可以光譜在324 nm監測。通常使用蛋白質濃度為0.5 mg/mL至1.0 mg/mL之樣品。可使用在280 nm之吸光度精確測定樣品中之蛋白質濃度，且接著各樣品之等分試樣(0.9 mL)在室溫與0.1 mL DTDP (於乙醇中之5 mM儲備溶液)一起培育10分鐘。亦在旁邊培育僅緩衝液加DTDP之空白樣品。在10分鐘之後，量測在324 nm之吸光度且使用19,800 M-1 之硫吡啶之消光係數定量硫醇基之數目。 通常，每個抗體大約兩個至三個硫醇基之硫醇化程度為所需。舉例而言，在一些抗體，此可藉由添加15倍莫耳過量之2-亞胺基硫雜環戊烷之後在室溫培育1小時來達成。接著將抗體與2-亞胺基硫雜環戊烷以所需之莫耳比培育且隨後於結合緩衝液(conjugation buffer)(50 mM HEPES、5 mM甘胺酸、2 mM DTPA、pH 5.5)中去鹽。使經硫醇化物質維持於冰上，同時如上文所描述定量引入之硫醇數目。 在校驗引入之硫醇數目之後，以每個硫醇2.5倍莫耳過量添加式(IV)之二聚體-連接子。使結合反應在含有25%丙二醇及5%海藻糖之最終濃度的結合緩衝液中進行。通常，將藥物-連接子儲備溶液溶解於100% DMSO中。將儲備溶液直接添加至經硫醇化抗體。 在室溫下培育結合反應混合物2小時並伴隨輕微攪拌。隨後，將10倍莫耳過量之N-乙基順丁烯二醯亞胺(100 mM於DMSO中之儲備液)添加至結合混合物中並再攪拌一小時以阻斷任何未反應之硫醇。 接著使樣品經由0.2 µ過濾器過濾。該物質經由TFF VivaFlow 50 Sartorius 30 MWCO PES膜緩衝交換至10 mg/mL甘胺酸、20 mg/mL山梨醇、15%乙腈(MeCN) pH 5.0中 (5倍TFF緩衝液交換體積)以移除任何未反應之藥物。最終調配藉由將TFF添加至20 mg/mL山梨醇、10 mg/mL甘胺酸、pH 5.0中進行。實例 3 圖 3A 比較ADC3.1與Hep3B肝細胞癌(肝癌)及H446小細胞肺癌(SCLC)細胞之結合。與Hep3B細胞之較高結合指示其表現比H446細胞更高含量之磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3。同型對照物為抗CD70抗體。 使用3 H胸苷分析法(其中對3 H胸苷併入之抑制指示對所測試細胞株之增殖的抑制)評定ADC3.1對Hep3B及H446細胞之增殖的劑量依賴性抑制作用。人類腫瘤細胞株獲自美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，P.O. Box 1549，Manassas, VA 20108, USA，且根據ATCC之說明進行培養。將細胞以1.0×104 個細胞/孔接種於96孔培養盤中。將1:3連續稀釋之ADC3.1添加至該等孔中。使培養盤培育72小時。使該等培養盤在整個培育期之最後24小時經1.0 μCi之3 H-胸苷/孔脈衝、收集並在Top Count閃爍計數器(Packard Instruments，Meriden，CT)上讀取。使用PRISM™軟體，版本4.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA)來測定EC50 值(細胞增殖減少50%時之ADC濃度)。圖 3B 及 3C 展示ADC3.1以劑量依賴性方式抑制所測試細胞株之增殖，而同型ADC(對照物)基本上無抑制作用。在圖 3B 中，對照物為抗間皮素抗體與式(IV)之藥物-連接子化合物之結合物。在圖 3C 中，對照物為抗CD70抗體與式(IV)之藥物-連接子化合物之結合物。 EC50 值以及抗HepG2及HuH7D12肝細胞癌細胞株之彼等值加上單獨藥物(式(II))之資料展示於表1中。此等結果展示，大體而言，ADC3.1以可比於非結合藥物之水準的水準有效傳遞藥物至靶細胞。亦即，藥物自結合物之釋放係高效的。 實例 4 圖 4A 及 4B 呈現對與ADC3.1抗Hep3B腫瘤之劑量依賴性功效的異種移植研究的資料。ADC3.1以0.01 µmol/kg、0.03 µmol/kg及0.1 µmol/kg之劑量相隔七天投與兩次(Q7D×2)。(0.1 µmol/kg之劑量大致對應於5 mg/kg。因此，將該等劑量分別轉化成0.5 mg/kg、1.5 mg/kg及5 mg/kg)。同型ADC與圖 3C 中一樣。在本文所描述之此及其他異種移植研究中，使用CB17.SCID小鼠。 資料展示在0.1 µmol/kg下，ADC3.1非常有效於使得腫瘤消退(圖 4A )、良好耐受，且緩解腫瘤生長相關之惡病質。媒劑(調配緩衝液)及ADC同型對照物為低效的，且ADC3.1與同型對照物之間的選擇率大於3:1。較低劑量之ADC3.1 (0.01 µmol/kg及0.03 µmol/kg)明顯低效。咸信此急劇升降的劑量依賴性反應部分歸因於ADC3.1之非線性藥物動力學。實例 5 在ADC3.1抗HuH7D12細胞之單次給藥功效之異種移植研究中，ADC3.1之功效展示於圖 5A (腫瘤體積消退)及圖 5B (體重變化百分比)中。該等劑量為0.1 µmol/kg及0.3 µmol/kg (分別為5 mg/kg及15 mg/kg)。 相對應的分次給藥研究展示於圖 6A 及6B 中，其中以一週的時間間隔投與三次劑量(Q7D×3)。該等劑量為0.033 µmol/kg及0.1 µmol/kg。 結果指示單次給藥方案更有效，且腫瘤消退在0.3 µmol/kg之單一劑量下顯著(八隻小鼠中之七隻變成無腫瘤)。實例 6 進行類似的異種移植研究，比較單次給藥(圖 7A 至 7B )及分次給藥(Q7D×3，圖 8A 至 8B )給藥方案對ADC3.1抗H446細胞之功效。在該等圖式中以圓括號標註之劑量含量係以µmol/kg為單位，分別對應於5 mg/kg及15 mg/kg。此研究包括對照物(同型ADC)，其為抗間皮素抗體與式(IV)之二聚體-連接子之ADC。 此外，單次給藥方案在某種程度上更有效，但呈現較高的瞬時體重減輕。在單次給藥研究中，在0.3 µmol/kg下之八隻小鼠中之八隻中及在0.1 µmol/kg下之八隻小鼠中之四隻中觀測到腫瘤消退。在分次給藥研究中，在0.1 µmol/kg下之八隻小鼠中之四隻中觀測到腫瘤消退。實例 7 此實例得到患者衍生異種移植(PDX)研究之結果。圖 9 展示在用ADC3.1治療後患者衍生卵巢腫瘤體積之減小。給藥時程為Q7D×6 (六次的每週一次給藥)且劑量為3 mg/kg。對照物為攜載相同連接子及藥物部分(式(IV))之CD70 ADC，以同樣3 mg/kg之劑量，但使用三次的每週一次給藥(Q7D×3)之給藥時程。第一次給藥為植入後30天。圖 10 展示在用ADC3.1治療之後的患者衍生之鱗狀肺腫瘤體積之減小。給藥時程為X7D×6 (六次的每週一次給藥)且劑量為3 mg/kg。對照物為攜載相同連接子及藥物部分(式(IV))之間皮素ADC，以同樣3 mg/kg之劑量但給藥時程為三次的每週一次給藥(Q7D×3)。第一次給藥為植入後30天。實例 8 此實例描述尋求鑑別抗體GPC3.1之變異體的研究，該等變異體可為ADC之更好的靶向劑。 抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體以類似效率內化至靶細胞中，諸如表現較高含量之磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3的癌細胞，無論其為低親和力結合劑(較快koff ，KD ≈ 10 nM)或高親和力結合劑(較慢koff ，KD ≤ 1 nM)。假設地，有可能的是，具有相對較低親和力之抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體之ADC可呈現針對正常細胞(其具有磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3之較低表現含量)減弱的毒性。此外，具有相對較低親和力之抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體之ADC可更容易地分佈至遠端腫瘤組織中。為評估此假設，製備抗體GPC3.1之83種變異體，其在可變區中含有修飾。在此等變異體中，為針對抗體GPC3.1之頭對頭比較選擇三種最有前景的(指定為抗體A、B及C)。 與抗體GPC3.1相比，抗體A具有相同的重鏈CDR1及輕(κ)鏈CDR1及CDR2 (分別為SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5)，但具有不同的重鏈CDR2及CDR3 (分別為SEQ ID NO:17及SEQ ID NO:18)及κ鏈CDR3 (SEQ ID NO:19)。此外，抗體A在某些重鏈構架胺基酸方面不同於抗體GPC3.1，如在其重鏈可變區序列(SEQ ID NO:23)中所指出。其κ鏈可變區序列提供於SEQ ID NO:24中。其重鏈及κ鏈恆定區具有與抗體GPC3.1中之彼等相同的序列(分別為SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10)。 與抗體GPC3.1相比，抗體B具有相同的重鏈CDR3及輕(κ)鏈CDR1及CDR2 (分別為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5)，但具有不同的重鏈CDR1及CDR2 (分別為SEQ ID NO:20及SEQ ID NO:21)及κ鏈CDR3 (SEQ ID NO:22)。此外，抗體B在某些重鏈構架胺基酸方面不同於抗體GPC3.1，如在其重鏈可變區序列(SEQ ID NO:25)中所指出。其κ鏈可變區序列提供於SEQ ID NO:26中。其重鏈及κ鏈恆定區具有與抗體GPC3.1中之彼等相同的序列(分別為SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10)。 與抗體GPC3.1相比，抗體C具有相同的重鏈CDR3及輕(κ)鏈CDR1及CDR2 (分別為SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5)，但具有不同的重鏈CDR1及CDR2 (分別為SEQ ID NO:20及SEQ ID NO:17)及κ鏈CDR3 (SEQ ID NO:19)。此外，抗體C在某些重鏈構架胺基酸方面不同於抗體GPC3.1，如在其重鏈可變區序列(SEQ ID NO:27)中所指出。其κ鏈可變區序列提供於SEQ ID NO:28中。其重鏈及κ鏈恆定區具有與抗體GPC3.1中之彼等相同的序列(分別為SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10)。 抗體A、B、C及GPC3.1之相應koff 及KD 值展示於表2中。 與抗體GPC3.1相比，變異體抗體A、B及C根據Biacore™分析在KD 及koff 方面呈現介於10倍與30倍之間的改良。其同樣在小鼠中呈現更快的清除率。圖 11A 為在0.5 mg/kg之靜脈內劑量下之SCID小鼠中之藥物動力學(PK)特徵曲線之對比。該等特徵曲線相似，但抗體GPC3.1之特徵曲線稍微更佳。圖 11B 呈現在使用Hep3B肝細胞癌細胞之活體外分析中3 H胸苷併入之結果。根據此等結果，抗體A、B及C與式(IV)之藥物-連接子的ADC (分別為ADC A、ADC B及ADC C)比ADC3.1稍微更具活性。圖 11C 展示圖 11B 之四種ADC之結合之FACS (螢光活化之細胞分選)研究的結果。ADC A比另三個(其活性類似)稍微更具活性。 因此，鑒於前述之活體外結果，將ADC A、ADC B及ADC C視為針對ADC3.1之活體內比較研究之有前景的候選物。此類研究之結果呈現並論述於下文之實例10中。實例 9 此實例描述具有類似目標之不同研究，該目標即為鑑別其他抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體，其作為ADC中之靶向劑可比抗體GPC3.1更有效。 與其修改抗體GPC3.1，不如藉由使HuMab®轉殖基因小鼠免疫來重新製得抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體。藉由使HuMab®轉殖基因小鼠免疫來產生人類抗體之方法揭示於Terrett等人，US 8,680,247 B2 (2014)中，其揭示內容以引用之方式併入本文中。如此產生之四種抗體與抗體GPC3.1之結合特性展示於下表3中。 分組研究展示抗體E結合至與抗體GPC3.1不同之抗原決定基且未與其面對面阻斷。未測定抗體D之抗原決定基分組。圖 12A 展示抗體GPC3.1、E及E之PK特徵曲線相似。使用SCID小鼠，且以0.5 mg/kg之劑量經靜脈內投與。圖 12B 展示，在活體外Hep3B3 H胸苷併入分析中，ADC3.1與抗體E與藥物-連接子(IV)之ADC (ADC E)之活性非常接近，且EC50 分別為0.17 nM及0.13 nM。 鑒於以上結果，選擇抗體E用於針對ADC 3.1之ADC比較研究。實例 10 使藥物連接子化合物(IV)與抗體A、B、C及E組合來製備ADC，以產生分別指示為ADC A、ADC B、ADC C及ADC E之ADC。使用Hep3B細胞，針對此等四種ADC以及ADC 3.1、媒劑(調配緩衝液)對照物及ADC對照物(抗CD70抗體與藥物-連接子(IV)之ADC)執行活體內異種移植研究。劑量在一種情況(圖 13A )下為0.1 µmol/kg (5 mg/kg)且在另一情況(圖 13B )下為0.03 µmol/kg (1.5 mg/kg)。給藥頻率為Q7D×2。如可自此等圖式發現，ADC A、ADC B、ADC C或ADC E中無一者與抗體GPC3.1在減小腫瘤體積方面一樣有效。此等結果證明藉由自活體外結果推斷來研發有效的ADC之不可預測的性質。鑒於活體外特性相似，ADC 3.1相比於其他四種ADC之優良活體內功效係出人意料的。實例 11 出於比較目的，製備抗GPC3抗體GPC3.1與藥物-連接子化合物(V)之ADC。化合物(V)中之藥物部分屬於稱為環丙烷苯并吲哚(CBI)之細胞毒素之類別且已經用於ADC中(Zhang等人.2015)。 當利用3 H胸苷分析測試抗Hep3B癌細胞時，化合物(V)之ADC具有宜與ADC3.1之效能(EC50 0.15 nM)相比的效能(EC50 0.079 nM)。然而，前者之藥物動力學(PK)特性不與ADC3.1之藥物動力學特性一樣合乎需要。 本發明之前述詳細描述包括主要或僅涉及本發明之特定部分或態樣的段落。應瞭解，出於明晰及便利之目的，特定特徵可不僅在揭示該特徵之段落中相關，且本文之揭示內容包括不同段落中存在之資訊的所有適當組合。類似地，儘管本文之各種圖式及描述係關於本發明之特定實施例，但應瞭解，若特定特徵揭示於特定圖式或實施例之情形下，則此類特徵亦可以適當程度與另一特徵組合用於另一圖式或實施例之情形下或通常本發明中。 此外，儘管本發明尤其關於某些較佳實施例描述，但本發明並不限於此類較佳實施例。確切地說，本發明之範疇藉由所附申請專利範圍界定。 參考文獻 下文提供以下參考文獻的完整引用，之前在本說明書中該等參考文獻以簡化方式以第一作者(或發明者)及日期形式引用。此等參考文獻中之每一者以引用之方式併入本文中以用於所有目的。 Cheng et al., US 8,394,922 B2 (2013). Cong et al., US 8,980,824 B2 (2015). Dubowchiket al. , “Cathepsin B-Sensitive Dipeptide Prodrugs. 1. A Model Study of Structural Requirements for Efficient Release of Doxorubicin,”Biorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 3341 [1998a]. Dubowchiket al. , “Cathepsin B-Sensitive Dipeptide Prodrugs. 2. Models of Anticancer Drugs Paclitaxel (Taxol™), Mitomycin C, and Doxorubicin,”Bioorg. Med. Chem. Lett. ,1998 , 8, 3347 [1998b]. Dubowchiket al. , “Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin from Internalizing Immunoconjugates: Models Studies of Enzymatic Drug Release and Antigen-Specific in Vitro Anticancer Activity,”Bioconjugate Chem. 2002 , 13, 855. Hoet al. , US 2014/0044714 A1 (2014). Hoet al. , US 2015/0147330 A1 (2015). Jakubovic and Jothy, “Glypican-3: From the mutations of Simpson-Golabi-Behmel genetic syndrome to a tumor marker for hepatocellular carcinoma,”Exp. Mol. Path .2007 , 82, 184. Luoet al. , “Probing of C-Terminal Lysine Variation in a Recombinant Monoclonal Antibody Production Using Chinese Hamster Ovary Cells With Chemically Defined Media,”Biotechnol . Bioeng. 2012 , 109 (5), 2306. Nakatsura and Nishimura, “Usefulness of the Novel Oncofetal Antigen Glipcan-3 for Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma and Melanoma,”Biodrugs 2005 , 19 (2), 71. Parikh and Hyman, “Hepatocellular Cancer: A Guide for the Internist,”Am. J. Med. 2007 , 120 (3), 194. Sasisekharanet al ., “Roles of Heparan-Sulphate Glycosaminoglycans in Cancer,”Nature Rev. Cancer 2002 , 2, 521. Schramaet al. ,"Antibody targeted drugs as cancer therapeutics,”Nature Rev. Drug Disc. 2006 , 5, 147-159. Smithet al. , WO 2007/137170 A2 (2007). Terrettet al. , US 8,680,247 B2 (2014). Zhanget al. , US 8,852,599 B2 (2014). Zhanget al. , US 9,186,416 B2 (2015). 序列表 下表4提供與本說明書一起提交之序列表之簡短概述。
圖 1A 至 1C 以組合展示本發明之編碼信號肽之核苷酸序列及抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體之重鏈(SEQ ID NO:13)與如此經編碼之胺基酸序列(SEQ ID NO:14)之間的比對。圖 2A 至 2B 以組合展示本發明之編碼信號肽之核苷酸序列及抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體之κ輕鏈(SEQ ID NO:15)與如此經編碼之胺基酸序列(SEQ ID NO:16)之間的比對。圖 3A 至 3C 以組合展示抗體GPC3.1結合至Hep3B肝細胞癌及H446小細胞肺癌細胞，且在與藥物結合時，其有效地傳遞該藥物以抑制此類細胞之增殖。圖 4A 至 4B 展示如分別利用腫瘤體積收縮率及體重變化百分比所量測的Hep3B異種移植模型中之ADC3.1之劑量依賴性功效。圖 5A 至 5B 及圖 6A 至 6B 比較在單次給藥及分次給藥投與方案中之ADC3.1抗HuH7D12肝細胞癌腫瘤之功效。圖 7A 至 7B 及圖 8A 至 8B 比較在單次給藥及分次給藥投與方案中之ADC3.1抗H446小細胞肺癌腫瘤之功效。圖 9 及圖 10 分別為展示ADC3.1抗來源於卵巢癌及鱗狀肺癌患者之腫瘤細胞之功效的異種移植研究。圖 11A 至 11C 比較抗體GPC3.1及作為抗體GPC3.1之變異體的三個抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體以及其各別ADC的特性。圖 12A 比較GPC3.1相對於藉由轉殖基因小鼠之獨立免疫所製備之其他抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體中之彼等的藥物動力學及活體外特性。圖 12B 比較ADC3.1與自彼等其他抗體中之一者所製備之ADC的活體外效能。圖 13A 至 13B 比較ADC3.1相對於藉由其他抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體製得之ADC中之彼等的活體內功效。

Claims (9)

  1. 一種抗體藥物結合物，其具有由式(I)表示之結構其中 m為1、2、3或4且 Ab為具有以下之抗磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3抗體 (a) 重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO:1； (b) 重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO:2； (c) 重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO:3； (d) κ輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO:4； (e) κ輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO:5；及 (f) κ輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO:6。
  2. 如請求項1之抗體藥物結合物，其中該抗體Ab具有包含SEQ ID NO:7之重鏈可變區及包含SEQ ID NO:8之κ輕鏈可變區。
  3. 如請求項1之抗體藥物結合物，其中該抗體Ab具有包含SEQ ID NO:9之重鏈恆定區及包含SEQ ID NO:10之κ輕鏈恆定區。
  4. 如請求項3之抗體藥物結合物，其中該重鏈恆定區進一步包含C端離胺酸。
  5. 如請求項1之抗體藥物結合物，其中該抗體Ab具有包含SEQ ID NO:11之重鏈及包含SEQ ID NO:12之κ輕鏈。
  6. 如請求項5之抗體藥物結合物，其中該重鏈進一步包含C端離胺酸。
  7. 一種如請求項1、2、3、4、5或6之抗體藥物結合物之用途，其用於製造供治療患有癌症之人類個體癌症之藥物，其中該癌症為肝細胞癌、卵巢癌或肺癌。
  8. 如請求項7之用途，其中該抗體藥物結合物以介於0.1 mg/kg與20 mg/kg之間的劑量經靜脈內投與。
  9. 一種醫藥調配物，其包含如請求項1、2、3、4、5或6之抗體藥物結合物及醫藥學上可接受之賦形劑。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111712520A (zh) * 2018-02-15 2020-09-25 西雅图基因公司 磷脂酰肌醇聚糖3抗体及其偶联物

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110352074A (zh) 2017-02-28 2019-10-18 西雅图遗传学公司 用于偶联的半胱氨酸突变抗体
KR20220083665A (ko) * 2019-08-01 2022-06-20 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 Gpc3에 특이적인 항체 및 그것의 사용 방법
WO2023036043A1 (zh) * 2021-09-09 2023-03-16 广东东阳光药业有限公司 抗癌结合分子及其应用
CA3237201A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Sotio Biotech Inc. Treatment of myxoid/round cell liposarcoma patients
WO2023092099A1 (en) * 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007137170A2 (en) 2006-05-20 2007-11-29 Seattle Genetics, Inc. Anti-glypican-3 antibody drug conjugates
ES2562790T3 (es) * 2007-07-17 2016-03-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos monoclonales contra Glipicano-3
US8394922B2 (en) * 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
US9206257B2 (en) 2011-04-19 2015-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies specific for glypican-3 and use thereof
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
WO2013181543A1 (en) 2012-06-01 2013-12-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services High-affinity monoclonal antibodies to glypican-3 and use thereof
ES2628156T3 (es) * 2013-02-14 2017-08-01 Bristol-Myers Squibb Company Compuestos de tubulisina, métodos para su fabricación y su uso

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111712520A (zh) * 2018-02-15 2020-09-25 西雅图基因公司 磷脂酰肌醇聚糖3抗体及其偶联物

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