CN112553203A - 一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA‑lnc5及其应用，属于植物基因工程技术领域。该长链非编码RNA‑lnc5的cDNA全长序列如SEQ ID NO.1所示，有1个长75bp的小开放阅读框，序列如SEQ ID NO.2所示。构建RNA‑lnc5基因的瞬时表达载体，在杨树原生质体中对lnc5的编码能力进行验证，发现lnc5不具有编码能力。通过将lnc5基因转入杨树，与未转基因杨树相比，过量表达lnc5基因的转基因杨树表现出不定根数目明显减少、最大侧根长增加和株高显著减少，表明过量表达lnc5基因能促进杨树侧根伸长、抑制杨树茎的生长和不定根的形成及降低植株的高度。

Description

一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5及其应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5及其应用。

背景技术

不定根发生是林木重要的繁殖和适应性特征。以初生根及侧根为主的禾本科农作物，根系发育主要取决于根尖干细胞的维持与分化，它不仅是作物在有利条件下高产的重要保障，也是作物抗逆育种的基础；而依赖于无性系选育和无性系造林的林木树种，插穗的“不定”生根及其应答逆境胁迫的可塑性发育，既是林木在复杂土壤环境中的资源获取机制，也是无性系林业生产中的核心环节，其关键是不定根原基的形成。作为林木基础生物学研究的模式树种，杨树也是开展林木不定根发生机理研究的首选。目前，虽然杨树不定根发生相关的部分关键基因、miRNA以及调控通路已经得到了初步验证，但杨树基因组中有关lncRNA真实性鉴定与注释面临巨大挑战。

长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一类序列保守性低、长度大于200个核苷酸且不具有蛋白编码能力的转录本。大多数lncRNA由RNA聚合酶II转录，部分来源于RNA聚合酶III，植物中有少量lncRNA由其特有RNA聚合酶IV和V产生；多数lncRNA具有特定的空间结构和时空表达模式。植物lncRNA的研究才刚刚起步，但已逐渐在拟南芥、水稻、苜蓿、玉米、番茄、棉花等草本模式植物的分子生物学领域崭露头角。相对于mRNA和miRNA在进化上的保守性，lncRNA序列相似性弱、作用机制复杂多样，在模式植物上所揭示的lncRNA作用方式很难在不同物种间类推。林木较草本植物有更为复杂的生长发育和逆境应答机制，近年来，基于高通量测序和生物信息预测的林木lncRNA也大量涌现，在林木生长发育和逆境应答的多个环节均已发现lncRNA的作用踪迹。到目前为止，尚未有林木lncRNA生物学功能及其作用机制的研究报道。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5。本发明所要解决的另一技术问题在于提供所述调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5，其cDNA全长序列如SEQ ID NO.1所示。

含有所述的调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5的cDNA全长序列或其sORF序列的载体或重组菌。

进一步地，所述的载体是瞬时表达载体或植物表达载体。

进一步地，所述的植物表达载体在RNA-lnc5的cDNA全长序列或其sORF序列的5′端组装组成型强表达启动子P35S。

进一步地，所述的植物表达载体在RNA-lnc5的cDNA全长序列或其sORF序列的3′端组装强终止子T35S。

进一步地，所述的植物表达载体组装Kan基因表达盒。

进一步地，所述的植物表达载体组装LB和RB序列。

所述的调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5在调控杨树生长发育中的应用。

进一步地，所述的调控杨树生长发育具体为：调节根系发育或降低株高。

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

与现有技术相比，本发明通过将lnc5基因转入杨树，过量表达lnc5基因的转基因杨树表现出不定根数目明显减少、最大侧根长增加，同时，与未转基因杨树相比，转基因杨树的株高显著减少，过量表达lnc5基因抑制了杨树茎的生长，表明过表达lnc5能抑制杨树不定根的形成与发育并参与调控植株的高度，具有调控杨树生长发育的功能。

附图说明

图1是lnc5的基因结构图；

图2是lnc5的二级结构预测图；

图3是lnc5蛋白编码能力验证图；

图4是lnc5在杨树不同组织中的表达模式图；

图5是植物表达载体pK2GW7的结构示意图；

图6为过量表达lnc5的转基因杨树分子检测图；

图7为过量表达lnc5的转基因杨树表达量分析图；

图8为过量表达lnc5基因的转基因杨与未转基因杨(CK)的整体形态比较图；

图9为过量表达lnc5基因的转基因杨与未转基因杨(CK)的不定根数目，最大侧根长以及株高的比较图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

以下实施例所使用的主要供试材料为：取组培室30天‘南林895’杨组培苗的茎尖组织(ST)与根尖(RT)组织样品提取RNA(RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒，天根，DP441)和DNA(植物基因组DNA提取试剂盒，天根，DP305-02)，生长45天的‘南林895杨’叶片用于原生质体提取与瞬时表达实验。

实施例1：通过PCR技术克隆lnc5基因

基于申请人前期杨树生长发育相关lncRNA的筛选结果，使用Oligo 6设计特异性引物，利用高保真酶PrimeSTAR Max DNA Ploymerase进行序列扩增，得到目的片段，克隆入

Cloning Vector载体，对插入片段进行PCR筛选后进行测序。具体引物序列和主要过程如下：

1、PCR反应：

1)反转录，将以下成分加入到一个置于冰上的RNase-free的小离心管中：TotalRNA 1μg，5×PrimeScript RT Master Mix(for Real Time)4μL，Nuclease-free Water补至20μL；

2)轻轻混匀，短暂离心，37℃温育15min；进入PCR步骤，或-20℃保存反应物；

3)PCR反应体系组成：2×PrimeSTAR Max premix 25μL，PCR Forward Primer(10μM)1μL，PCR Reverse Primer(10μM)1μL，cDNA模板2μL，Nuclease-free Water 21μL。反应程序：98℃15sec；98℃15sec，55℃15sec，72℃15sec，35cycles；72℃5min。

2、纯化片段与克隆载体的连接反应：采用北京全式金提供的平末端基础载体

Cloning Vector，参考说明书，反应体系(5μL)：1μL纯化回收的PCR产物，1μL

Cloning Vector，3μL Nuclease-free Water。反应条件：25℃10min。

3、大肠杆菌转化(冰上操作)：将新鲜制备或-80℃冻存的大肠杆菌Trans-T1感受态细胞在冰上融化；取5μL纯化片段与克隆载体的连接产物，加入到100μL感受态细胞中，并轻轻混匀，冰浴25min；42℃水浴中热击45sec，立即置于冰上3min；向离心管中加入600μLLB液体培养基，37℃，150rpm，温控摇床上摇菌1h；4000rpm离心5min，在超净工作台吸掉上清，混匀剩余菌液；将菌液涂抹于含有Amp的LB筛选培养板上，37℃倒置培养过夜。

4、阳性克隆筛选及测序分析

将800μL Amp抗性的LB液体培养基加入到1.5mL离心管中，挑取单菌落接种于离心管中。250rpm，37℃，温控摇床上摇菌6-7h，以菌液为模板，使用TaKaRa的rTaq酶进行PCR检测。20.0μL反应体系：10×PCR Buffer(Mg²⁺free)2.0μL，MgCl₂(25mM)1.3μL，dNTP Mixture(each 2.5mM)1.5μL，M13F 1.0μL，M13R 1.0μL，菌液1.5μL，rTaq 0.1μL，Milli-Q Water11.6μL。反应程序：94℃4min；94℃30sec，55℃30sec，72℃1.30min，35cycles；72℃10min。

菌液PCR检测为阳性的克隆进行测序鉴定，获取序列信息。

5、lnc5的基因结构分析与序列分析

最终得到与高通量测序结果一致的298bp cDNA序列，序列如SEQ ID NO.1所示。随后，以‘南林895杨’DNA为模板，进行PCR扩增，得到长度为432bp的序列，两者比较后，发现其中插入有134bp的内含子片段(图1)。

将lnc5序列在NCBI数据库中进行Blastn比对，结果未发现同源序列。随后，在拟南芥TAIR数据库和非编码RNA数据库NONCODE中进行比对检索，阈值设置为E＜0.005，结果在两个数据库中均未找到相似的序列，表明lnc5是一个保守性较差的、未知的非编码RNA。通过lncRNA亚细胞定位预测工具lncLocator对lnc5的亚细胞定位情况进行预测，显示lnc5为细胞膜定位。近年来的研究发现，一些lncRNA序列包含一个或多个miRNA结合位点，由此结合miRNA，成为lncRNA发挥功能的一种非常重要的作用方式。同时miRNA自身可以靶向蛋白质编码基因，从而抑制其表达。因此当这类lncRNA与miRNA结合时，可以通过与miRNA靶基因竞争而降低miRNA对蛋白编码基因的抑制作用，影响蛋白编码基因的功能。因此，通过植物miRNA靶基因分析工具psRNATarget对lnc5的miRNA结合位点进行预测分析。在lnc5基因序列中未发现杨树miRNA的结合位点，排除lnc5通过结合miRNA发挥作用这一可能性。

RNA的二级结构对非编码RNA的功能具有重要的影响。由于lncRNA具有复杂多样的功能和作用方式，而不具备类似miRNA前体所拥有的典型、保守二级结构，因此使得lncRNA的鉴定和功能研究更具有难度。lncRNA的二级结构对于研究lncRNA的功能和作用方式具有重要意义。因此，利用RNAfold对lnc5的二级结构进行预测，发现lnc5的二级结构十分复杂，由多个茎环结构组成(图2)。根据二级结构预测得出lnc5的最小自由能(minimum freeenergy，MFE)为-58.30kcal/mol。

实施例2：lnc5的编码能力与保守性预测

1、lnc5编码能力与保守性预测

RNA的编码能力是鉴定lncRNA的一个重要标准。通过NCBI ORFfinder对lnc5进行ORF预测，发现lnc5具有一个长度为仅为75bp的小ORF(sORF)，编码24个氨基酸。通过Blastp对lnc5编码的这24个氨基酸进行比对检索，结果未发现同源蛋白。此外，利用Pfam数据库对这24个氨基酸进行检索也未发现有功能结构域。众所周知，核糖体是mRNA翻译形成蛋白质的发生场所，因此，RNA序列有没有核糖体结合位点(RBS)是判断RNA能否翻译的一个重要依据。利用RegRNA2.0软件对lnc5的核糖体结合位点进行预测，预测结果发现lnc5序列中并未检测到核糖体结合位点，说明lnc5不具有翻译能力。综上结果初步表明lnc5不具有编码能力，是一个非编码RNA。

2、lnc5的编码能力验证

利用NCBI ORFfinder预测其开放阅读框。利用Oligo6对预测得到的lnc5的小开放阅读框(short ORF，sORF)进行引物设计，序列如SEQ ID NO.4所示，并设计包含该sORF的5′UTR的引物，序列如SEQ ID NO.5所示，进而进行PCR扩增和测序验证，具体引物如下：

使用TaKaRa提供的LA Taq酶，进行PCR扩增，利用Gateway技术中的BP反应将得到的lnc55′UTR+sORF片段分别连接到入门载体PCR8/GW/TOPO^TM中，然后通过LR反应将入门载体上的目的片段转移到携带GFP标签的p2GWF7.0载体中。具体操作步骤如下：

(1)以反转录合成的cDNA为模板，进行PCR扩增，PCR反应体系为：TakaRa LA Taq(5U/μL)0.5μL，10×LA PCR Buffer(Mg²⁺Free)5.0μL，MgCl₂(25mM)5.0μL，dNTP Mixture(2.5mM each)8.0μL，正向引物(10μM)2.0μL，反向引物(10μM)2.0μL；cDNA模板1.0μL，ddH₂O26.5μL，总体积为50.0μL；PCR反应程序为：94℃3min；94℃30sec，56℃30sec，72℃1min，30个循环；72℃10min。

利用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将目的条带切下并用AXYGEN公司的DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收纯化，纯化结果用于BP反应模板

(2)BP反应

在PCR管中依次加入：Fresh PCR product(purified)80ng；Salt solution 0.5μL；pCRTM8/GW/TOPOTM vector 0.5μL；加无菌ddH₂O补足3μL。反应程序为：22℃1h。依据实施例1方法转化连接产物，在奇霉素抗性的LB固体培养基上培养12h，选择3个阳性克隆测序，检测正确的保存质粒备用。

(3)LR反应

反应体系为：linearized entry clone 50ng；purified destination vector75ng；LR Clonase II enzyme mix 0.5μL；加TE(pH 8.0)补足2.5μL。反应条件：25℃1h；加入0.25μL的Proteinase K solution，混合混匀，之后37℃水浴10min。依据实施例1方法转化连接产物，选择3个阳性克隆测序，检测正确的质粒即是携带目的基因的p2GWF7.0载体。

(4)杨树原生质体转化

a)制备所需试剂

W5：200mM MES(pH5.7)，2.25g NaCl，4.6g CaCl₂·2H₂O，500mol/L KCl；

MMG：200mM MES(pH5.7)，7.28g甘露醇，2mol/L MgCl；

WI：200mM MES(pH5.7)，5.46g甘露醇，0.075g KCl；

30％PEG溶液：0.8mol/L甘露醇，1mol/L CaCl₂·2H₂O，1.5g PEG-4000。

b)制备酶解液

在10mL离心管中加入：200mM MES 500μL，0.8mol/L甘露醇3.75mL，ddH₂O 75μL，0.2mol/L KCl 500μL；70℃水浴3-5min。趁热加入100μL纤维素酶和25μL果胶酶。55℃水浴10min后，置于冰上冷却至室温。加入50μL lmol/L MgCl₂、0.005g小牛血清蛋白，混匀后过滤灭菌。

c)酶解杨树叶片

选择生长40天左右，长势良好的‘南林895杨’组培苗叶片用于制备原生质体。用刀片将叶片切成0.5-1mm宽的叶条。将叶片切好后舒展地放入酶解液中，28℃暗培养3h。加入预冷的5mL W5溶液稀释含有原生质体的酶液。使用200目筛子过滤去除未酶解的叶子。用50mL的圆底离心管，4℃，900rpm离心5min沉淀原生质体。除去上清后，用3mL W5溶液重悬沉淀在圆底管底部的原生质体。显微镜下观察计数。冰上静置50min，再次除去上清，用一定体积的MMG对原生质体进行重悬，最后使其终浓度达到6×10⁵个/mL。

d)杨树原生质体瞬时转化

使用天根小提中量质粒提取试剂盒进行高纯度质粒的提取。向2mL离心管中加入10ug的质粒DNA和100μL的杨树叶肉原生质体，轻柔混匀。加入110μL的PEG溶液，轻柔混匀。室温静置15-30min。加入1mL的W5溶液混合混匀。用水平离心机1000rpm，离心5min，之后弃去上清。用100μL的0.6M的WI溶液轻柔重悬原生质体。室温下暗培养，诱导原生质体表达转化的载体16h。使用荧光显微镜观察GFP标签的表达。

结果显示，对照35S：：GFP在杨树原生质体的细胞核、细胞膜、细胞质中都有荧光产生，而35S：：lnc5 5′UTR+sORF-GFP在原生质体中只能检测到叶绿体自发荧光，并未检测到GFP荧光(图3)。进行三次的独立重复实验，并检测多个视野都是一样的结果。结果表明lnc5确实不具有编码能力，是一个长链非编码RNA。

实施例3：实时定量检测lnc5的表达水平

实时定量PCR(qRT-PCR)所用试剂盒为FastStart Universal SYBR Green MasterMix(Roche，USA)，所用仪器为ABI ViiA^TM 7Real-time PCR system(Applied Biosystems，USA)。利用Oligo 6软件进行引物设计，每个反应三次重复，以Eflα为内参，用2^-ΔΔCt法进行相对表达量的计算。具体引物序列如下：

qRT-PCR反应所用的试剂按下面的比例配置：FastStart Universal SYBR GreenMaster 10μL，PCR Forward Primer(10μM)0.5μL，PCR Reverse Primer(10μM)0.5μL，cDNA模板3μL，ddH₂O 6μL，总体积20μL。

反应程序为：94℃30sec，94℃5sec，60℃34sec，95℃15sec，40个循环，60℃1min，95℃15sec。

选择南京林业大学校园内10年树龄‘南林895杨’韧皮部(phloem)、木质部(xylem)、芽(bud)、根(root)、叶(leaf)和茎(stem)等六个组织进行了实时定量分析，实验结果以韧皮部的表达量为基准，表述其他组织中lnc5和Pe5的相对表达量。实验发现，lnc5在韧皮部的表达量最低，在其他组织中表达量较高，在根中的表达量明显达到峰值；而下游靶基因PeWOX5基因在茎和芽中的表达量较低，在其他组织中表达量略有提高，而在根中表达量达到最高(图4)。

实施例4：lnc5基因植物过表达载体构建

1)BP反应

利用通路克隆技术构建lnc5基因的过量表达载体。使用特异PCR引物(实施例2引物)，以cDNA为模板，进行PCR扩增，将lnc5基因ORF构建到入门载体。入门载体为pCR^TM8/GW/TOPO^TM vector(Invitrogen)。反应体系为：Fresh PCR product(purified)80ng；Saltsolution 0.5μL；pCR^TM8/GW/TOPO^TM vector 0.5μL；加无菌ddH₂O补足3μL。反应程序为：22℃1h。

2)LR反应

从筛选培养板上挑取阳性克隆进行PCR检测及测序验证，带lnc5基因的入门载体与植物表达载体pK2GW7进行LR反应。载体质粒如图5所示。反应体系为：linearized entryclone 50ng；purified destination vector 75ng；LR Clonase II enzyme mix 0.5μL；加TE(pH8.0)补足2.5μL。反应条件：25℃1h；加入0.25μL的Proteinase K solution，混合混匀，之后37℃水浴10min。经LR反应后lnc5基因导入植物表达载体pK2GW7中，在lnc5基因的5′端组装组成型强表达启动子P35S，它能使lnc5基因在杨树体内高效表达；在lnc5基因的3′端组装了强终止子T35S，可有效终止lnc5基因的转录；在载体质粒上组装Kan基因表达盒，作为转基因杨树的筛选标记，可以用卡那霉素进行转基因杨树的筛选；在载体质粒组装LB和RB序列，促使组装于其间的lnc5基因表达框架和筛选标记基因Kan整合至杨树受体细胞染色体中。通过PCR检测及测序验证，确认过量表达载体构建成功，命名为pK2GW7-1nc5，该基因位于启动子P35S之后，在启动子P35S的驱动下，lnc5可在杨树体内高效表达。

实施例5：lnc5基因的遗传转化与检测

(1)杨树的遗传转化

通过液氮冻融法将所构建的pK2GW7-lnc5过量表达载体转入农杆菌菌株EHA105(Invitrogen)，通过农杆菌介导将lnc5基因转入杨树。

(2)转基因植株的检测与表型观测实验结果

A、杨树转基因植株的分子检测

对转基因植株和未转基因植株进行DNA和RNA提取，利用PCR技术在DNA水平上检测外源基因是否整合到杨树基因组中，利用实时定量PCR技术，检测外源基因在RNA水平的表达情况。

通过农杆菌介导的遗传转化，将35S：：lnc5转入到山新杨叶盘中。通过叶片愈伤组织分化再生，最终得到了转基因山新杨。从中选取9个株系做DNA水平的分子检测，检测结果如图6所示。图中可以看出，转基因植株可以检测到载体与lnc5的条带，而CK则无目的条带。初步验证，lnc5已经转入到杨树基因组中，此9个株系均为阳性植株。从这9个阳性株系中选取4个进行RNA的提取，通过实时定量PCR技术对lnc5在转基因植株中的表达水平进行了检测(图7)，结果显示lnc5在这4个转基因植株中的表达水平显著高于CK。由此可以证明，lnc5基因已经转入山新杨中，并在其中过量表达。

B、杨树转基因植株的表型观测

观测统计的样本为同一生长环境条件下培养30天的转基因和CK组培苗，4个转基因株系及对照CK各取5棵进行表型的观测(如图8)和统计。统计的内容包括，植株的不定根数目、最长侧根长度及植株高度等。统计的方法为单因素方差分析法，其中显著性水平设定为P值小于0.05。

以四个已确认lnc5高表达的转基因株系和CK组培苗为材料，每个株系选取5-10株进行不定根数目、最大侧根长和植株高度的统计，统计结果如图9所示。转基因株系的表型观测统计结果与其表达量变化趋势基本保持一致。图中可以看出，lnc5转基因杨树的不定根数目显著少于CK，其中lnc5相对表达量最高的L2株系的不定根减少最为明显，其次是L8株系，这一统计结果说明lnc5可能抑制了杨树不定根的形成。同时可以看出，与CK相比，各转基因株系的最大侧根长均有增长，其中L2的最大侧根长增长最为显著，其次是L9株系，这一结果显示lnc5可能参与杨树根的发育生长。而在植株高度的观测统计中，我们发现，转基因植株的高度显著低于CK，尤其是对应的L2株系。因此，可以推断lnc5可能参与调控植物的茎尖分生组织以调节植株高度。

序列表

<110> 南京林业大学

<120> 一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5及其应用

<130> 100

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 298

<212> DNA

<213> Populus×euramericana cv. Nanlin895

<400> 1

ctaagtggga tgcaaactca gctgtgacaa aagtgataat gctgctgaag cacaggtcaa 60

cttggccatt ttggaggacc acataaagct aacgattgct ccaaggttct tagcttcgag 120

ataaggcagg caatcagata ccgcggaatt tcacacagag tgccggaatg ctcttgaatt 180

caggacagca caaacataaa ggatgcatag accaaaatat ggattttaca atcatcgaga 240

tttagtctgc actgaaggag agacttaaaa agaatgcttc cattactata aagcagag 298

<210> 2

<211> 75

<212> DNA

<213> Populus×euramericana cv. Nanlin895

<400> 2

atgctcttga attcagcaca gcacaaacat aaaggatgca tagaccaaaa tatggatttt 60

acaatcatcg agatt 75

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> lnc5 F1(Artificial)

<400> 3

ctaagtggga tgcaaactca gc 22

<210> 4

<211> 27

<212> DNA

<213> lnc5 R1(Artificial)

<400> 4

ctctgcttta tagtaatgga agcattc 27

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> lnc5U-OF(Artificial)

<400> 5

ctaagtggga tgcaaactca 20

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> lnc5U-OR(Artificial)

<400> 6

aatctcgatg attgtaaaat cc 22

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> lnc5O-F(Artificial)

<400> 7

atgctcttga attcagcaca g 21

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> lnc5O-R(Artificial)

<400> 8

aatctcgatg attgtaaaat cc 22

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> Eflα-F(Artificial)

<400> 9

ggcaaggaga aggtacacat 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> Eflα-R(Artificial)

<400> 10

caatcacacg cttgtcaata 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> lnc5qRT-F(Artificial)

<400> 11

tgctgctgaa gcacaggtca 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> lnc5qRT-R(Artificial)

<400> 12

tgctgctgaa gcacaggtca 20

Claims (9)

1.一种调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5，其cDNA全长序列如SEQ ID NO.1所示。

2.含有权利要求1所述的调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5的cDNA全长序列或其sORF序列的载体或重组菌。

3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述的载体是瞬时表达载体或植物表达载体。

4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述的植物表达载体在RNA-lnc5的cDNA全长序列或其sORF序列的5′端组装组成型强表达启动子P35S。

5.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述的植物表达载体在RNA-lnc5的cDNA全长序列或其sORF序列的3′端组装强终止子T35S。

6.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述的植物表达载体组装Kan基因表达盒。

7.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述的植物表达载体组装LB和RB序列。

8.权利要求1所述的调控杨树生长发育的长链非编码RNA-lnc5在调控杨树生长发育中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的调控杨树生长发育具体为：调节根系发育或降低株高。

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