CN112552399B - 抗sars-cov-2中和抗体 - Google Patents

Abstract

本公开提供了针对SARS‑COV‑2的新颖中和抗体和其抗原结合片段。还提供了包括其的药物组合物和试剂盒以及其用途。

Description

抗SARS-COV-2中和抗体

技术领域

本公开大体上涉及新颖抗SARS-COV-2中和抗体。

背景技术

由新型冠状病毒，即严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2；SARS-CoV-2）引起的全球大流行的冠状病毒疾病2019（COVID-19）已严重恶化了公共卫生和经济。虽然大部分感染群体显示轻微症状，但一些进展成急性呼吸窘迫综合征，且现已报告超过700,000例死亡。

SARS-CoV-2感染宿主细胞是通过病毒包膜上表达的称为刺突（S）糖蛋白的糖蛋白介导，所述糖蛋白包括S1亚基和S2亚基。S1亚基含有与宿主细胞上的人类血管收缩素转化酶2（angiotensin converting enzyme 2；ACE2）受体直接结合的受体结合结构域（receptor-binding domain；RBD），而S2亚基介导病毒包膜与宿主细胞膜融合以便促进病毒感染。

康复患者的血浆已用以治疗其它感染，且也已证明是有益于轻微和严重COVID-19患者的，这是由于血浆中产生的中和抗体。然而，由于血浆是由从COVID-19康复的人捐赠的且不能大规模生产，所以康复血浆治疗受到限制。

因此，迫切需要针对SARS-COV-2具有高度强效的中和效果的大规模中和抗体。

发明内容

在本公开通篇中，冠词“一个（种）（a/an）”和“所述（the）”在本文中用于指一个（种）或超过一个（种）（即，至少一个（种））所述冠词的语法对象。举例来说，“一种抗体”意味着一种抗体或超过一种抗体。

在一个方面中，本公开提供了一种能够与SARS-CoV-2特异性结合的分离的或重组的抗体或其抗原结合片段，其包括：

a）选自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的1、2或3种重链CDR（VH-CDR）序列；

b）选自SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 13的1、2或3种重链CDR序列；或

c）选自SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22和SEQ ID NO: 23的1、2或3种重链CDR序列。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段进一步包括：

a）选自SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6的1、2或3种轻链CDR（VL-CDR）序列；

b）选自SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15和SEQ ID NO: 16的1、2或3种轻链CDR序列；或

c）选自SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25和SEQ ID NO: 26的1、2或3种轻链CDR序列。

在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包括：

a）VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其分别包括SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2和SEQID NO: 3的氨基酸序列；以及VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其分别包括SEQ ID NO: 4、SEQID NO: 5和SEQ ID NO: 6的氨基酸序列；

b）VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其分别包括SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12和SEQID NO: 13的氨基酸序列；以及VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其分别包括SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15和SEQ ID NO: 16的氨基酸序列；或

c）VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其分别包括SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22和SEQID NO: 23的氨基酸序列；以及VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其分别包括SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25和SEQ ID NO: 26的氨基酸序列。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 27的氨基酸序列或与其具有至少80%序列一致性的序列的可变重链可变区（VH）。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段进一步包括含SEQ ID NO: 8、SEQ IDNO: 18、SEQ ID NO: 28的氨基酸序列或与其具有至少80%序列一致性的序列的轻链可变区（VL）。

在一些实施例中，抗体或抗原结合片段包括选自由SEQ ID NO: 7/8、17/18、27/28组成的群组的一对重链可变区和轻链可变区序列，或与其具有至少80%序列一致性但仍保持对于SARS-CoV-2的特异性结合亲和力的一对同源序列。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段进一步包括一个或多个氨基酸残基突变，但仍保持与SARS-CoV-2特异性结合的。

在一些实施例中，所述突变中的至少一个在一个或多个CDR序列中，和/或在一个或多个VH或VL序列中但不在任一个CDR序列中。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段进一步包括重链恒定区和/或轻链恒定区。

在一些实施例中，重链恒定区来自人类IgG1。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段是双功能抗体、Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段（dsFv）、(dsFv)₂、双特异性dsFv（dsFv-dsFv'）、二硫键稳定的双功能抗体（ds双功能抗体）、单链抗体分子（scFv）、scFv二聚体（二价双功能抗体）、多特异性抗体、骆驼化单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段是双特异性的。

在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段与一个或多个缀合物部分连接。

在另一方面中，本公开还提供一种抗体或其抗原结合片段，其与上文提及的抗体或其抗原结合片段竞争与SARS-CoV-2结合。

在另一方面中，本公开还提供一种药物组合物，其包括上文提及的抗体或其抗原结合片段中的一种或多种和药学上可接受的载体。

在一些实施例中，药物组合物进一步包括能够中和SARS-CoV-2的第二抗体。

在一些实施例中，第二抗体与SARS-CoV-2结合的表位不同于上文提及的抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2结合的那种/那些表位的表位。

在另一方面中，本公开还提供一种治疗或预防个体中的SARS-CoV-2感染的方法，其包括向个体给药有效量的上文提及的抗体或其抗原结合片段或上文提及的药物组合物。

在一些实施例中，个体是人类或非人类动物。

在一些实施例中，个体已鉴定为感染了SARS-CoV-2，或怀疑感染了SARS-CoV-2，或处于暴露于SARS-CoV-2的风险下。

在一些实施例中，所述给药是经口、鼻、静脉内、皮下、舌下或肌肉内给药。

在一些实施例中，方法进一步包括给药有效量的第二治疗剂。

在一些实施例中，第二治疗剂选自抗病毒剂（如，第二SARS-CoV-2中和抗体）、RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂、核苷类似物、抗病毒细胞因子（如，干扰素）或免疫刺激剂。

在另一方面中，本公开还提供一种中和个体中的SARS-CoV-2的方法，其包括向个体给药上文提及的抗体或其抗原结合片段或上文提及的药物组合物。

在另一方面中，本公开还提供一种用于预防或降低感染SARS-CoV-2的个体传染SARS-CoV-2的方法，其包括向感染SARS-CoV-2的个体给药有效量的上文提及的抗体或其抗原结合片段或上文提及的药物组合物。

在另一方面中，本公开还提供一种降低感染SARS-CoV-2的个体中的病毒负荷的方法，其包括向个体给药有效量的上文提及的抗体或其抗原结合片段或上文提及的药物组合物。

在另一方面中，本公开还提供一种上文提及的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗或预防个体中的SARS-CoV-2感染；或用于预防、抑制个体中的SARS-CoV-2感染或SARS-CoV-2相关病状的进展和/或延迟其发作；或用于预防或降低感染SARS-CoV-2的个体传染SARS-CoV-2；或用于降低感染SARS-CoV-2的个体中的病毒负荷的药物的用途。

在另一方面中，本公开还提供一种试剂盒，其包括上文提及的抗体或其抗原结合片段或上文提及的药物组合物，其适用于检测SARS-CoV-2的存在。

在另一方面中，本公开提供了一种分离的多核苷酸，其编码如本文所描述的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施例中，本公开的分离的多核苷酸包括选自由以下组成的群组的核苷酸序列：SEQ ID NO: 9-10、19-20和29-30；或与其具有至少80%序列一致性的同源序列。

在一些实施例中，同源物序列编码与由选自由SEQ ID NO: 9-10、19-20和29-30组成的群组的任何核苷酸序列所编码的蛋白质相同的蛋白质。

附图说明

图1显示如通过ELISA所测定的本公开中提供的抗体与SARS-CoV-2病毒样颗粒（virus-like particle；VLP）的结合概况。

图2显示本公开中提供的抗体对于Vero-E6细胞中的真实SARS-CoV-2的中和。

图3显示如通过ELISA所测定的本公开中提供的抗体与S蛋白（3a）、S1亚基（3b）和RBD（3c）的结合概况。

具体实施方式

以下对本公开的描述仅旨在说明本公开的各种实施例。因此，所讨论的具体修改不应被解释为对本公开范围的限制。对于所属领域的技术人员将显而易见的是，可在不脱离本公开的范围的情况下进行各种等效物、改变和修改，且应理解这类等效实施例包括在本文中。本文引用的所有参考文献，包含出版物、专利和专利申请，均以全文引用的方式并入本文中。

定义

如本文所用，术语“抗体”包含与特定抗原结合的任何免疫球蛋白、单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、二价抗体、一价抗体、多特异性抗体或双特异性抗体。天然完整抗体包括两条重（H）链和两条轻（L）链。哺乳动物重链分类为α、δ、ε、γ和μ，每条重链由可变区（VH）以及第一、第二、第三和任选存在的第四恒定区（分别为CH1、CH2、CH3、CH4）组成；哺乳动物轻链分类为λ或κ，而每条轻链由可变区（VL）和恒定区组成。抗体呈“Y”形，其中Y的茎部由通过二硫键结合在一起的两条重链的第二和第三恒定区组成。Y的每个臂包含与单一轻链的可变区和恒定区结合的单一重链的可变区和第一恒定区。轻链和重链的可变区负责抗原结合。两条链中的可变区一般含有三个高度可变的环，称为互补决定区（complementaritydetermining region；CDR）（轻链CDR包含VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，重链CDR包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3）。本文中所公开的抗体和抗原结合片段的CDR边界可通过Kabat、IMGT、Chothia或Al-Lazikani的约定来限定或鉴定（Al-Lazikani，B., Chothia, C.,Lesk, A. M.，《分子生物学杂志（J. Mol. Biol.）》，273(4)，927 (1997)；Chothia, C.等人，《分子生物学杂志（J Mol Biol.）》12月5日;186(3):651-63 (1985)；Chothia, C.和Lesk, A.M.，《分子生物学杂志》196,901 (1987)；Chothia, C.等人，《自然（Nature）》. 12月21-28日;342(6252):877-83 (1989)；Kabat E.A.等人，免疫学相关蛋白质的序列（Sequences of Proteins of immunological Interest），第5版. 马里兰州贝塞斯达的美国国家卫生研究院公共卫生署（Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda, Md.）(1991)；Marie-Paule Lefranc等人，《发育与比较免疫学（Developmental and Comparative Immunology）》，27: 55-77 (2003)；Marie-PauleLefranc等人，《免疫组学研究（Immunome Research）》，1(3)，(2005)；Marie-PauleLefranc，B细胞分子生物学（Molecular Biology of B cells）（第二版），第26章，481-514，(2015)）。三个CDR插在被称为构架区（framework region；FR）（轻链FR包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，重链FR包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4）的侧翼链段（stretch）之间，所述侧翼链段比CDR更高度保守且形成支撑高度可变环的支架。重链和轻链的恒定区不参与抗原结合，但呈现出各种效应功能。基于抗体重链恒定区的氨基酸序列来对抗体分类。抗体的五种主要类别或同型为大免疫球蛋白A（IgA）、IgD、IgE、IgG和IgM，其特征分别在于α、δ、ε、γ和μ重链的存在。若干主要抗体类别分为亚类，如IgG1（γ1重链）、IgG2（γ2重链）、IgG3（γ3重链）、IgG4（γ4重链）、IgA1（α1重链）或IgA2（α2重链）。

在某些实施例中，本文提供的抗体涵盖其任何抗原结合片段。如本文所用，术语“抗原结合片段”是指由抗体的一部分形成的抗体片段，其包括一个或多个CDR或与抗原结合但不包括完整天然抗体结构的任何其它抗体片段。抗原结合片段的实例包含但不限于双功能抗体、Fab、Fab'、F(ab')₂、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段（dsFv）、(dsFv)₂、双特异性dsFv（dsFv-dsFv'）、二硫键稳定的双功能抗体（ds双功能抗体）、单链抗体分子（scFv）、scFv二聚体（二价双功能抗体）、双特异性抗体、多特异性抗体、骆驼化单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体和二价结构域抗体。抗原结合片段能够结合至与亲本抗体所结合相同的抗原。

关于抗体的“Fab”是指抗体的由通过二硫键与单一重链的可变区和第一恒定区结合的单一轻链（可变区和恒定区）组成的部分。

“Fab’”是指包含一部分铰链区的Fab片段。

“F(ab’)₂”是指Fab’的二聚体。

关于抗体（例如IgG、IgA或IgD同型）的“Fc”是指由通过二硫键与第二重链的第二和第三恒定结构域结合的第一重链的第二和第三恒定结构域组成的抗体的部分。关于IgM和IgE同型抗体的Fc进一步包括第四恒定结构域。抗体的Fc部分负责各种效应功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity；ADCC）和补体依赖性细胞毒性（complement dependent cytotoxicity；CDC），但不在抗原结合中起作用。

关于抗体的“Fv”是指带有完整抗原结合位点的抗体的最小片段。Fv片段由与单一重链的可变区结合的单一轻链的可变区组成。

“单链Fv抗体”或“scFv”是指由轻链可变区和重链可变区直接或通过肽连接子序列彼此连接组成的工程改造的抗体（Huston JS等人《美国国家科学院院刊（Proc Natl Acad Sci USA）》，85:5879(1988)）。

“单链Fv-Fc抗体”或“scFv-Fc”是指由与抗体Fc区连接的scFv组成的工程改造的抗体。

“骆驼化单结构域抗体”、“重链抗体”或“HCAb”是指含有两个V_H结构域且不含轻链的抗体（Riechmann L.和Muyldermans S.，《免疫学方法杂志（J Immunol Methods.）》 12月10日;231(1-2):25-38 (1999)；Muyldermans S.，《生物技术杂志（J Biotechnol.）》 6月;74(4):277-302 (2001)；WO94/04678；WO94/25591；美国专利第6,005,079号）。重链抗体最初来源于骆驼科（Camelidae）（骆驼、单峰骆驼和羊驼）。尽管缺乏轻链，但骆驼化抗体具有真实的抗原结合谱系（Hamers-Casterman C.等人,《自然》. 6月3日; 363(6428):446-8(1993)；Nguyen VK.等人 《免疫遗传学（Immunogenetics）》. 4月; 54(1):39-47 (2002)；Nguyen VK.等人 《免疫学（Immunology）》 . 5月; 109(1):93-101 (2003)）。重链抗体的可变结构域（“VHH结构域”）代表由适应性免疫反应产生的已知的最小抗原结合单元（Koch-Nolte F.等人，《美国实验生物学学会联合会杂志（FASEB J.）》 11月;21(13):3490-8. 电子版2007年6月15日 (2007)）。

“纳米抗体”是指由来自重链抗体的VHH结构域和两个恒定结构域CH2与CH3组成的抗体片段。

“双功能抗体”或“dAb”包含具有两个抗原结合位点的小抗体片段，其中所述片段包括与同一多肽链中的V_L结构域连接的V_H结构域（V_H-V_L或V_L-V_H）（参见例如HolligerP.等人，《美国国家科学院院刊》7月15日;90(14):6444-8(1993)；EP404097；WO93/11161）。通过使用过短以使得同一链上的两个结构域之间不能配对的连接子，迫使结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。所述抗原结合位点可靶向相同或不同的抗原（或表位）。在某些实施例中，“双特异性ds双功能抗体”是靶向两种不同抗原（或表位）的双功能抗体。

“结构域抗体”是指仅含有重链的可变区或轻链的可变区的抗体片段。在某些情况下，两个或更多个V_H结构域用肽连接子共价接合，产生二价或多价结构域抗体。二价结构域抗体的两个V_H结构域可靶向相同或不同的抗原。

如本文所用，术语“价”是指在既定分子中存在的指定数量的抗原结合位点。术语“一价（monovalent）”是指仅具有一个单一抗原结合位点的抗体或抗原结合片段；和术语“多价”是指具有多个抗原结合位点的抗体或抗原结合片段。因此，术语“二价”、“四价”和“六价”分别表示在抗原结合分子中存在两个结合位点、四个结合位点和六个结合位点。在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段是二价的。

如本文所用，“双特异性”抗体是指具有来源于两种不同单克隆抗体且能够与两种不同的表位结合的人工抗体。两种表位可存在于同一抗原上，或其可存在于两种不同抗原上。

在某些实施例中，“scFv二聚体”是一种二价双功能抗体或双特异性scFv（BsFv），其包括V_H-V_L（通过肽连接子连接）与另一个V_H-V_L部分二聚化，使得一个部分的V_H与另一个部分的V_L配位且形成可靶向相同抗原（或表位）或不同抗原（或表位）的两个结合位点。在其它实施例中，“scFv二聚体”是一种双特异性双功能抗体，其包括V_H1-V_L2（通过肽连接子连接）与V_L1-V_H2（也通过肽连接子连接）结合，使得V_H1与V_L1配位且V_H2与V_L2配位，且每个配位对具有不同抗原特异性。

“dsFv”是指在单一轻链的可变区与单一重链的可变区之间的键联是二硫键的二硫键稳定的Fv片段。在一些实施例中，“(dsFv)₂”或“(dsFv-dsFv')”包括三条肽链：通过肽连接子（例如较长柔性连接子）连接且分别通过二硫桥键与两个V_L部分结合的两个V_H部分。在一些实施例中，dsFv-dsFv’是双特异性的，其中各二硫键配对的重链和轻链具有不同抗原特异性。

如本文所用，术语“嵌合”意思指重链和/或轻链的一部分来源于一个物种且重链和/或轻链的其余部分来源于不同物种的抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，非人类动物是哺乳动物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、豚鼠或仓鼠。

如本文所用，术语“亲和力”是指免疫球蛋白分子（即，抗体）或其片段与抗原之间的非共价相互作用的强度。

如本文所用，术语“特异性结合（specific binding/specifically binds）”是指两个分子之间，例如抗体与抗原之间的非随机结合反应。特异性结合的特征可在于结合亲和力，例如由K_D值表示，即，当抗原与抗原结合分子之间的结合达到平衡时，解离速率与结合速率的比率（k_off/k_on）。K_D可通过使用所属领域中已知的任何常规方法来测定，包含但不限于表面等离子共振法、Octet法、微型热泳法、HPLC-MS法和FACS分析法。≤10^-6 M（例如≤5×10^-7 M、≤2×10^-7 M、≤10^-7 M、≤5×10^-8 M、≤2×10^-8 M、≤10^-8 M、≤5×10^-9 M、≤4×10^-9M、≤3×10^-9M、≤2×10^-9 M或≤10^-9 M）的K_D值可指示抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2（例如SARS-CoV-2）之间的特异性结合。

如本文所用，术语“表位”是指抗体所结合的抗原上特定的一组原子或氨基酸。如果两个抗体对某个抗原呈现竞争性结合，那么其可以结合所述抗原内的相同或紧密相关的表位。表位可以是线性或构象的（即，包含间隔开的氨基酸残基）。举例来说，如果抗体或抗原结合片段阻断参考抗体与抗原的结合至少85%、或至少90%或至少95%，那么抗体或抗原结合片段可视为结合与参考抗体相同/紧密相关的表位。

如本文所用，术语“氨基酸”是指含有胺（-NH₂）和羧基（-COOH）官能团以及对各氨基酸具有特异性的侧链的有机化合物。氨基酸的名称在本公开中也表示为标准单字母或三字母码，其如下概述。

与氨基酸序列有关的“保守取代”是指氨基酸残基被含具有类似物理化学特性的侧链的不同氨基酸残基置换。举例来说，可在具有疏水性侧链的氨基酸残基（例如Met、Ala、Val、Leu和Ile）间、具有中性亲水性侧链的残基（例如Cys、Ser、Thr、Asn和Gln）间、具有酸性侧链的残基（例如Asp、Glu）间、具有碱性侧链的氨基酸（例如His、Lys和Arg）间、或具有芳香族侧链的残基（例如Trp、Tyr和Phe）间进行保守取代。如所属领域中所知，保守取代通常不会引起蛋白质构象结构的显著变化，且因此可保持蛋白质的生物活性。

与氨基酸序列（或核酸序列）有关的“序列一致性百分比（%）”定义为在对准序列且在必要时，引入间隙以使相同氨基酸（或核酸）达到最大数量之后，候选序列中与参考序列中的氨基酸（或核酸）残基相同的氨基酸（或核酸）残基的百分比。氨基酸残基的保守取代可视为或可不视为相同残基。出于确定氨基酸（或核酸）序列一致性百分比的目的进行的比对可例如使用可公开获得的工具，如BLASTN、BLASTp（可见于美国国家生物技术信息中心（U.S.National Center for Biotechnology Information；NCBI）的网站，另参见AltschulS.F.等人，《分子生物学杂志》，215:403-410(1990)；Stephen F.等人，《核酸研究（Nucleic Acids Res.）》，25:3389-3402(1997)）、ClustalW2（可见于欧洲生物信息研究所（EuropeanBioinformatics Institute）网站，另参见Higgins D.G.等人，《酶学方法（Methods in Enzymology）》，266:383-402(1996)；Larkin M.A.等人，《生物信息学（Bioinformatics）》（英格兰牛津（Oxford，England）），23(21):2947-8(2007)））和ALIGN或Megalign（DNASTAR）软件实现。所属领域的技术人员可使用所述工具所提供的默认参数，或可视需要例如通过选择合适算法来自定义比对的参数。

“分离的”物质已通过人工方式从天然状态改变。如果“分离的”组合物或物质存在于自然界中，那么所述组合物或物质已经从其原始环境改变或从其原始环境移出，或这两种情况都有。举例来说，天然地存在于活动物体内的多核苷酸或多肽不是“分离”的，但如果所述多核苷酸或多肽与其天然状态的共存材料充分地分离，由此以大体上纯的状态存在，那么所述多核苷酸或多肽是“分离的”。“分离的核酸序列”是指分离的核酸分子的序列。在某些实施例中，“分离的抗体或其抗原结合片段”是指如通过电泳法（如，SDS-PAGE、等电点聚焦、毛细电泳法）或色谱法（如，离子交换色谱或反相HPLC）所测定，纯度为至少60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的抗体或其抗原结合片段。

术语“个体”包含人类和非人类动物。非人类动物包含所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，如非人类灵长类动物、小鼠、大鼠、猫、兔、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。除指出的以外，术语“患者”或“个体”在本文中可互换使用。

如本文所用，术语“预防（prevent/preventing）”包含减缓疾病发作、降低发展成疾病的风险、抑制或延迟表现或发展与疾病有关的症状、降低疾病随后的收缩或发展的严重程度、改善相关症状和诱导预防疾病的免疫性，

术语“中和”关于抗体的意思指，抗体能够破坏所形成的病毒颗粒或抑制病毒颗粒的形成或预防易感的细胞与病毒颗粒结合或易感的细胞感染病毒颗粒。

如本文所用，疾病、病症或病状的“治疗（treating/treatment）”包含预防或缓解疾病、病症或病状；减缓疾病、病症或病状的发作或发展速率；降低发展成疾病、病症或病状的风险；降低或终止与疾病、病症或病状有关的症状；产生疾病、病症或病状的完全或部分消退；治愈疾病、病症或病状；或其一些组合。

术语“药学上可接受的”指示，指定载体、媒剂、稀释剂、赋形剂和/或盐一般在化学上和/或物理上与构成处方的其它成分相容，且在生理上与其接受者相容。

针对SARS-CoV-2的示例性中和抗体

在某些实施例中，本公开提供了针对SARS-CoV-2的中和抗体和其抗原结合片段，其包括一个或多个（例如1、2、3、4、5或6个）选自由以下组成的群组的序列的CDR：SYDIN（SEQID NO: 1）、WMNPNSANPGYAQKFQG（SEQ ID NO: 2）、ARVTIHYDILTGYYSNAFDI（SEQ ID NO: 3）、RASQTISSYLN（SEQ ID NO: 4）、AASSLQS（SEQ ID NO: 5）、QQSYTTFMYT（SEQ ID NO: 6）、SYAIS（SEQ ID NO: 11）、GIIPIFGTTNYAQKFQG（SEQ ID NO: 12）、RSAYGDKGYYFDY（SEQ IDNO: 13）、RASQSVSNFLA（SEQ ID NO: 14）、DASNRAT（SEQ ID NO: 15）、QQRSNWPPQET（SEQ IDNO: 16）、SYAIT（SEQ ID NO: 21）、GIIPIFGTANFAQKFQG（SEQ ID NO: 22）、LGGFADPFDY（SEQID NO: 23）、RASQSVSNYLA（SEQ ID NO: 24）、DAFNRAT（SEQ ID NO: 25）、QQRSNWPPRIT（SEQID NO: 26）。

如本文所用，抗体“15A7”是指具有含SEQ ID NO: 7的序列的重链可变区和含SEQID NO: 8的序列的轻链可变区的单克隆抗体。

如本文所用，抗体“31C2”是指具有含SEQ ID NO: 17的序列的重链可变区和含SEQID NO: 18的序列的轻链可变区的单克隆抗体。

如本文所用，抗体“37G2”是指具有含SEQ ID NO: 27的序列的重链可变区和含SEQID NO: 28的序列的轻链可变区的单克隆抗体。

在某些实施例中，本公开提供了针对SARS-CoV-2的中和抗体和其抗原结合片段，其包括一个或多个（例如1、2、3、4、5或6个）抗体15A7、31C2或37G2的CDR序列。

在某些实施例中，本公开提供了针对SARS-CoV-2的中和抗体和其抗原结合片段，其包括：VH-CDR1，其包括选自由SEQ ID NO: 1、11和21组成的群组的氨基酸序列；VH-CDR2，其包括选自由SEQ ID NO: 2、12和22组成的群组的氨基酸序列；和VH-CDR3，其包括选自由SEQ ID NO: 3、13和23组成的群组的氨基酸序列；和/或VL-CDR1，其包括选自由SEQ ID NO:4、14和24组成的群组的氨基酸序列；VL-CDR2，其包括选自由SEQ ID NO: 5、15和25组成的群组的氨基酸序列；和VL-CDR3，其包括选自由6、16和26组成的群组的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了针对SARS-CoV-2的中和抗体和其抗原结合片段，其包括：VH-CDR1，其包括SEQ ID NO: 1的序列；VH-CDR2，其包括SEQ ID NO: 2的序列；VH-CDR3，其包括SEQ ID NO: 3的序列；和/或VL-CDR1，其包括SEQ ID NO: 4的序列；VL-CDR2，其包括SEQ ID NO: 5的序列；和VL-CDR3，其包括SEQ ID NO: 6的序列。

在某些实施例中，本公开提供了针对SARS-CoV-2的中和抗体和其抗原结合片段，其包括：VH-CDR1，其包括SEQ ID NO: 11的序列；VH-CDR2，其包括SEQ ID NO: 12的序列；VH-CDR3，其包括SEQ ID NO: 13的序列；和/或VL-CDR1，其包括SEQ ID NO: 14的序列；VL-CDR2，其包括SEQ ID NO: 15的序列；和VL-CDR3，其包括SEQ ID NO: 16的序列。

在某些实施例中，本公开提供了针对SARS-CoV-2的中和抗体和其抗原结合片段，其包括：VH-CDR1，其包括SEQ ID NO: 21的序列；VH-CDR2，其包括SEQ ID NO: 22的序列；VH-CDR3，其包括SEQ ID NO: 23的序列；和/或VL-CDR1，其包括SEQ ID NO: 24的序列；VL-CDR2，其包括SEQ ID NO: 25的序列；和VL-CDR3，其包括SEQ ID NO: 26的序列。

下表1显示抗体15A7、31C2和37G2的CDR氨基酸序列。CDR边界由Kabat的约定来限定或鉴定。下表2显示抗体15A7、31C2和37G2的重链和轻链可变区氨基酸序列。下表3显示抗体15A7、31C2和37G2的重链和轻链可变区核酸序列。

表1. 3种单克隆抗体的CDR氨基酸序列

表2. 3种单克隆抗体的可变区氨基酸序列

表3. 3种单克隆抗体的可变区核酸序列

已知CDR负责抗原结合。然而，已发现并非全部6个CDR均为必不可少的或不可改变的。换句话说，有可能置换或改变或修改中和抗体15A7、31C2和37G2中的一个或多个CDR，而大体上保留对于SARS-CoV-2的特异性结合亲和力。

本文提供的抗体和其抗原结合片段可包括来自任何物种，如小鼠、人类、大鼠或兔的合适的构架区（framework region；FR）序列，只要抗体和其抗原结合片段可与SARS-CoV-2特异性结合即可。在某些实施例中，上表1中提供的CDR序列获自人类抗体。在某些实施例中，FR序列来源于人类。

在一些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段包括重链可变结构域的全部或一部分和/或轻链可变结构域的全部或一部分。在一个实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段是由本文提供的重链可变结构域的全部或一部分组成的单结构域抗体。所属领域中可获得这种单结构域抗体的更多信息（参见例如美国专利第6,248,516号）。

在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段进一步包括免疫球蛋白（Ig）恒定区，其任选地进一步包括重链和/或轻链恒定区。在某些实施例中，重链恒定区包括CH1、铰链和/或CH2-CH3区（或任选地CH2-CH3-CH4区）。在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段包括人类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2或IgM的重链恒定区。在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段包括人类IgG1的重链恒定区。在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段包括人类IgG4的重链恒定区。在某些实施例中，轻链恒定区包括Cκ或Cλ。本文提供的抗体和其抗原结合片段的恒定区可与野生型恒定区序列一致或相差一个或多个突变。

在某些实施例中，相较于由任何动物（例如人类）产生的抗体，本文提供的抗体或其抗原结合片段具有不同氨基酸序列。在某些实施例中，相较于由任何动物（例如人类）产生的抗体，本文提供的抗体或其抗原结合片段具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、30、40、50或60个不同氨基酸。在某些实施例中，相较于由任何动物（例如人类）产生的抗体，本文提供的抗体或其抗原结合片段在FR区或Fc区中具有不同氨基酸。在某些实施例中，本文提供的抗体或其抗原结合片段具有上表1中提供的六个CDR序列，且相较于由任何动物（例如人类）产生的抗体在FR区或Fc区中具有不同氨基酸。

在某些实施例中，本文提供的抗体或其抗原结合片段对于SARS-CoV-2具有足以提供预防和/或治疗用途的特异性结合亲和力。

本文提供的抗体或其抗原结合片段可为单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、重组的抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、标记的抗体、二价抗体、抗独特型抗体或融合蛋白。重组的抗体是一种使用重组方法在活体外而非在动物中制备的抗体。

在某些实施例中，本公开提供了一种中和抗体或其抗原结合片段，其与本文提供的抗体或其抗原结合片段竞争与SARS-CoV-2结合。在某些实施例中，本公开提供了一种中和抗体或其抗原结合片段，其与包括以下的抗体竞争与SARS-CoV-2结合：a）包括SEQ IDNO: 7的序列的重链可变区和包括SEQ ID NO: 8的序列的轻链可变区；b）包括SEQ ID NO:17的序列的重链可变区和包括SEQ ID NO: 18的序列的轻链可变区；或c）包括SEQ ID NO:27的序列的重链可变区和包括SEQ ID NO: 28的序列的轻链可变区。

抗体变体

本文提供的抗体和其抗原结合片段也涵盖本文提供的抗体序列的各种变体。

在某些实施例中，抗体变体在上表1中提供的一个或多个CDR序列中、上表2中提供的重链可变区或轻链可变区的一个或多个非CDR序列中和/或恒定区（例如Fc区）中，包括一个或多个突变。这类变体保留其亲本抗体对于SARS-CoV-2的结合特异性，但具有由突变赋予的一个或多种期望特性。举例来说，抗体变体可具有改进的抗原结合亲和力、改进的糖基化模式、降低的糖基化风险、降低的脱氨基作用、降低或耗竭的效应功能、改进的FcRn受体结合、增加的药代动力学半衰期、pH灵敏性和/或与结合的相容性。

可使用所属领域中已知的方法，例如“丙氨酸扫描诱变”（参见例如Cunningham和Wells (1989) 科学《Science》，244:1081-1085），来筛选亲本抗体序列以鉴定进行修饰或取代的合适的或优选的残基。简单来说，可鉴定靶标残基（例如带电残基，如Arg、Asp、His、Lys和Glu），且所述靶标残基可被中性或带负电氨基酸（例如丙氨酸或聚丙氨酸）置换，且产生已修饰的抗体且针对所关注特性进行筛选。如果特定氨基酸位置处的取代展现所关注的功能变化，那么所述位置可鉴定为潜在的突变残基。潜在残基可通过用不同类型的残基（例如半胱氨酸残基、带正电残基等）取代来进一步评定。

亲和力变体

抗体的亲和力变体可在一个或多个上表1中提供的CDR序列、表2中提供的重链或轻链可变区序列或一个或多个FR序列中含有突变，其可容易地由所属领域的技术人员基于表1中提供的CDR序列和表2中提供的重链或轻链可变区序列鉴定，因为所属领域中众所周知CDR区在可变区中侧接两个FR区。亲和力变体保留亲本抗体对于SARS-CoV-2的特异性结合亲和力，或甚至具有优于亲本抗体改进的SARS-CoV-2特异性结合亲和力。在某些实施例中，CDR序列、FR序列或可变区序列中的至少一个（或所有）取代包括保守取代。

所属领域的技术人员应理解，在上表1中提供的CDR序列和上表2中提供的可变区序列中，一个或多个氨基酸残基可被取代，而所得抗体或抗原结合片段仍保留对于SARS-CoV-2的结合亲和力或结合能力，或甚至具有改进的结合亲和力或能力。所属领域中已知的各种方法均可用于实现这个目的。举例来说，可使用噬菌体展示技术产生且表达抗体变体（如，Fab或scFv变体）的文库，且随后针对对于SARS-CoV-2的结合亲和力进行筛选。再例如可使用计算机软件虚拟地模拟抗体与SARS-CoV-2的结合，且鉴定抗体上形成结合界面的氨基酸残基。这类残基可避免进行取代，以便防止结合亲和力降低，或作为取代的目标以实现较强结合。

在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段在CDR序列中的一个或多个和/或FR序列中的一个或多个中包括一个或多个氨基酸残基取代。在某些实施例中，亲和力变体在CDR序列和/或FR序列中包括总共不超过20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个取代。

在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段包括与上表1中列出的那种（或那些）CDR序列具有至少80%（例如至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%）序列一致性但仍保持以类似于或甚至高于其亲本抗体的水平与SARS-CoV-2特异性结合的1、2或3个CDR序列。

在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段包括与上表2中列出的那种（或那些）可变区序列具有至少80%（例如至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%）序列一致性但仍保持在类似于或甚至高于其亲本抗体对于SARS-CoV-2的特异性结合亲和力的水平的一个或多个可变区序列。在一些实施例中，突变发生在CDR外的区域（中例如在FR中）。

糖基化变体

本文提供的抗体和其抗原结合片段也涵盖糖基化变体，可获得所述糖基化变体以增加或降低抗体或其抗原结合片段的糖基化程度。

抗体或其抗原结合片段可包括引入或去除糖基化位点的一个或多个修饰。糖基化位点是侧链可与碳水化合物部分（例如寡糖结构）连接的氨基酸残基。抗体的糖基化通常是N-连接的或O-连接的。N-连接是指碳水化合物部分与天冬酰胺残基，例如三肽序列（如，天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸，其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸）中的天冬酰胺残基的侧链连接。O-连接糖基化是指糖N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一种与羟基氨基酸，最常见地与丝氨酸或苏氨酸的连接。天然糖 基化位点的去除可便利地实现，例如通过改变氨基酸序列以使得上文所描述的三肽序列（对于N-连接糖基化位点）中的一个或序列中存在的丝氨酸或苏氨酸残基（对于O-连接糖基化位点）被取代来实现。可以类似方式，通过引入这类三肽序列或丝氨酸或苏氨酸残基来产生新的糖基化位点。

半胱氨酸工程改造的变体

本文提供的抗体和其抗原结合片段也涵盖半胱氨酸工程改造的变体，其包括一个或多个引入的游离半胱氨酸氨基酸残基。

游离半胱氨酸残基是不作为二硫桥键的一部分的半胱氨酸残基。半胱氨酸工程改造的变体适用于在工程改造的半胱氨酸位点处，通过例如顺丁烯二酰亚胺或卤代乙酰基与例如细胞毒性和/或成像化合物、标记、或放射性同位素等结合。用于工程改造抗体或其抗原结合片段以引入游离半胱氨酸残基的方法是所属领域中已知的，参见例如WO2006/034488。

Fc变体

本文提供的抗体和其抗原结合片段也涵盖Fc变体，其包括在Fc区和/或铰链区处例如用于提供改变的效应功能(如ADCC和CDC)的一个或多个氨基酸残基突变。所属领域中已描述通过抗体工程改造改变ADCC活性的方法，参见例如， Shields RL.等人，《生物化学杂志（J Biol Chem.）》 2001. 276(9): 6591-604；Idusogie EE.等人，《免疫学杂志（J Immunol.）》2000.164(8):4178-84；Steurer W.等人，《免疫学杂志》 1995，155(3): 1165-74；Idusogie EE.等人，《免疫学杂志》 2001，166(4): 2571-5；Lazar GA.等人，PNAS，2006，103(11): 4005-4010；Ryan MC.等人，《分子癌症治疗学（Mol. Cancer Ther.）》，2007，6:3009-3018；Richards JO,.等人，《分子癌症治疗学）》 2008，7(8): 2517-27；Shields R.L.等人，《生物化学杂志（J. Biol. Chem）》，2002，277: 26733-26740；Shinkawa T.等人，《生物化学杂志》，2003，278: 3466-3473。

也可例如通过改进或减弱C1q结合和/或CDC来改变本文提供的抗体或抗原结合片段的CDC活性（参见例如WO99/51642；Duncan & Winter 《自然》 322:738-40 (1988)；美国专利第5,648,260号；美国专利第5,624,821号）；和关于Fe区变体的其它实例，WO94/29351。

选自Fc区的氨基酸残基329、331和322的一个或多个氨基酸可用不同氨基酸残基置换，以改变Clq结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性（CDC）（参见Idusogie等人的美国专利第6,194,551号）。也可引入一个或多个氨基酸取代来改变抗体固定补体的能力（参见Bodmer等人的PCT公开案WO 94/29351）。

本文中也涵盖本文提供的抗体和其抗原结合片段，其具有在Fc区和/或铰链区处具有一个或多个氨基酸残基突变的Fc变体，以提供降低或消除的SARS-CoV-2感染的抗体依赖性增强（antibody dependent enhancement；ADE）。这类Fc变体可具有降低的与Fc受体（FcR）的结合。这类突变的实例包含但不限于在CH2结构域的位置4、5或两个处的亮氨酸残基的突变（例如突变为丙氨酸，作为LALA变体），参见例如WO2010043977A2，其以其全文并入本文中。

抗原结合片段

本文也提供针对SARS-CoV-2的中和抗原结合片段。抗原结合片段的各种类型是所属领域中已知的，且可基于本文提供的针对SARS-CoV-2的中和抗体来开发，包括例如其CDR显示于上表1中且可变序列显示于表2中的示范性抗体和其不同变体（如，亲和力变体、糖基化变体、Fc变体、半胱氨酸工程改造的变体等）。

在某些实施例中，本文提供的针对SARS-CoV-2的中和抗原结合片段是双功能抗体、Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段（dsFv）、(dsFv)₂、双特异性dsFv（dsFv-dsFv'）、二硫键稳定的双功能抗体（ds双功能抗体）、单链抗体分子（scFv）、scFv二聚体（二价双功能抗体）、多特异性抗体、骆驼化单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体和二价结构域抗体。

各种技术可用于制造这类抗原结合片段。示例性方法包含：酶促消化完整抗体（参见例如Morimoto等人，《生物化学与生物物理学方法杂志（Journal of Biochemical and Biophysical Methods）》 24:107-117 (1992)；和Brennan等人，《科学》，229:81 (1985)）、通过宿主细胞（如，大肠杆菌（E. Coli））重组表达（例如针对Fab、Fv和ScFv抗体片段）、从如上文所论述的噬菌体展示文库筛选（例如针对ScFv）和化学偶合两个Fab’-SH片段以形成F(ab’)₂片段（Carter等人，《生物技术（Bio/Technology）》 10:163-167 (1992)）。用于制造抗体片段的其它技术对于所属领域的技术人员是显而易见的。

在某些实施例中，抗原结合片段是scFv。scFv的产生描述于例如WO 93/16185；美国专利第5,571 894号和第5,587,458号中。ScFv可在氨基或羧基端处与效应蛋白融合以提供融合蛋白（参见例如《抗体工程改造（Antibody Engineering）》，Borrebaeck编）。

在某些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段是二价、四价、六价或多价的。大于二价的任何分子视为多价的，涵盖例如三价、四价、六价等。

如果两个结合位点均对与相同抗原或相同表位的结合具有特异性，那么二价分子可为单特异性的。在某些实施例中，这提供比一价对应物（monovalent counterpart）更强的与抗原或表位的结合。类似地，多价分子也可是单特异性的。在某些实施例中，在二价或多价抗原结合部分中，结合位点的第一价和结合位点的第二价结构上相同（即，具有相同序列）或结构上不同（即，具有不同序列，即使具有相同特异性）。

如果两个结合位点对不同抗原或表位具有特异性，那么二价也可为双特异性。这也适用于多价分子。举例来说，当两个结合位点对于第一抗原（或表位）为单特异性的且第三结合位点对第二抗原（或表位）具有特异性时，三价分子可为双特异性的。

缀合物

在一些实施例中，本文提供的抗体和其抗原结合片段进一步包括一个或多个缀合物部分。缀合物部分可与抗体或其抗原结合片段连接。缀合物部分是可与抗体或其抗原结合片段连接的部分。经考虑，多种缀合物部分可与本文提供的抗体或其抗原结合片段连接（参见例如“缀合物疫苗（Conjugate Vaccines）”，对微生物学与免疫学的贡献（Contributions to Microbiology and Immunology），J.M.Cruse和R.E.Lewis, Jr.(编)，纽约（New York）的卡格出版社（Carger Press），(1989)）。这些缀合物部分可通过共价结合、亲和力结合、嵌入、配位结合、复合、结合（association）、掺合（blending）或添加等方法与抗体或其抗原结合片段连接。

在某些实施例中，本文提供的抗体或其抗原结合片段可进行工程改造以在表位结合部分外含有用于与一个或多个缀合物部分结合的特异性位点。举例来说，这种位点可以包含一个或多个反应性氨基酸残基，例如半胱氨酸或组氨酸残基，以便于与缀合物部分共价连接。

在某些实施例中，抗体或其抗原结合片段可与缀合物部分间接连接或通过另一缀合物部分与缀合物部分连接。举例来说，本文提供的抗体或其抗原结合片段可与生物素结合，随后与结合至亲和素的第二缀合物间接结合。在一些实施例中，缀合物部分包括清除调节剂（例如聚合物，如延长半衰期的PEG）、可检测标记（例如发光标记、荧光标记、酶-底物标记）或其它治疗性分子。

可检测标记的实例可以包含用于检测的荧光标记（例如荧光素、若丹明（rhodamine）、丹磺酰基（dansyl）、藻红蛋白（phycoerythrin）或德克萨斯红（Texas Red））、酶-底物标记（例如辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、荧光素酶（luceriferase）、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶或β-D-半乳糖苷酶）、放射性同位素（例如¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S、³H、¹¹¹In、¹¹²In、¹⁴C、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁸⁶Y、⁸⁸Y、⁹⁰Y、¹⁷⁷Lu、²¹¹At、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、¹⁵³Sm、²¹²Bi和³²P，其它镧系元素）、发光标记、发色部分、地高辛（digoxigenin）、生物素/亲和素、DNA分子或金。

在某些实施例中，缀合物部分可以是有助于增加抗体半衰期的清除调节剂。示范性实例包含水溶性聚合物，如PEG、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇/丙二醇共聚物等。聚合物可以具有任何分子量，且可以是支链或非支链的。与抗体连接的聚合物的数量可以变化，且如果连接超过一种聚合物，那么其可以是相同或不同的分子。

在某些实施例中，缀合物部分可以是纯化部分，如磁珠。

在某些实施例中，本文提供的抗体或其抗原结合片段用作缀合物的基础。

药物组合物

本公开进一步提供药物组合物，其包括本文提供的针对SARS-CoV-2的中和抗体或其抗原结合片段和一种或多种药学上可接受的载体。

用于本文所公开的药物组合物的药学上可接受的载体可包含例如药学上可接受的液体、凝胶或固体载体、水性媒剂、非水性媒剂、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、麻醉剂、悬浮/分散剂、钳合剂或螯合剂、稀释剂、佐剂、赋形剂或无毒辅助物质、所属领域中已知的其它组分或其各种组合。

合适的组分可包含例如抗氧化剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、润滑剂、调味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂或稳定剂，如糖和环糊精。合适的抗氧化剂可包含例如甲硫氨酸、抗坏血酸、EDTA、硫代硫酸钠、铂、过氧化氢酶、柠檬酸、半胱氨酸、硫代甘油、硫代乙醇酸、硫代山梨糖醇、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯和/或没食子酸丙酯。如本文所公开，在包括如本文提供的抗体或其抗原结合片段和缀合物的组合物中包含一种或多种抗氧化剂，如甲硫氨酸，将减少抗体或其抗原结合片段的氧化。这个氧化减少将防止或减少结合亲和力损失，从而改进抗体稳定性且使保存期最长。因此，在某些实施例中，提供药物组合物，其包括如本文中所公开的一种或多种抗体或其抗原结合片段和一种或多种抗氧化剂（如，甲硫氨酸）。进一步提供通过将本文提供的抗体或抗原结合片段与一种或多种抗氧化剂（如，甲硫氨酸）混合，以防止所述抗体或抗原结合片段氧化、延长其保存期和/或改进其功效的方法。

为了进一步说明，药学上可接受的载体可包含例如水性媒剂，如氯化钠注射液、林格氏注射液（Ringer's injection）、等渗右旋糖注射液、无菌水注射液或右旋糖和乳酸林格氏注射液；非水性媒剂，如植物来源的非挥发性油、棉籽油、玉米油、芝麻油或花生油；抑制细菌或抑制真菌浓度的抗微生物剂；等渗剂，如氯化钠或右旋糖；缓冲剂，如磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂；抗氧化剂，如硫酸氢钠；局部麻醉剂，如盐酸普鲁卡因（procainehydrochloride）；悬浮剂和分散剂，如羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；乳化剂，如聚山梨醇酯80（TWEEN-80）；钳合剂或螯合剂，如乙二胺四乙酸（EDTA）或乙二醇四乙酸（EGTA）、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。用作载体的抗微生物剂可以添加到多剂量容器中的药物组合物中，所述多剂量容器包含苯酚或甲酚、汞剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵（benzalkoniumchloride）以及苄索氯铵（benzethonium chloride）。合适的赋形剂可包含例如为水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。合适的无毒辅助物质可包含例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、溶解性增强剂，或如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或环糊精的药剂。

药物组合物可以是液体溶液、悬浮液、乳液、丸剂、胶囊、片剂、持续释放处方或散剂。口服处方可包含标准载体，如药物级甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。

在某些实施例中，药物组合物被调配成可注射组合物。可注射药物组合物可被制备成任何常规形式，例如液体溶液、悬浮液、乳液，或适合于产生液体溶液、悬浮液或乳液的固体形式。注射用制剂可包含可立即用于注射的无菌和/或无热原质溶液；仅在使用之前与溶剂组合的无菌干燥可溶性产品，如冻干粉，包含皮下片剂；可立即用于注射的无菌悬浮液；仅在使用之前与媒剂组合的无菌干燥不溶性产品；以及无菌和/或无热原质乳液。溶液可以是水性或非水性的。

在某些实施例中，单位剂量的肠胃外制剂被包装在安瓿、小瓶或带针注射器中。供肠胃外给药的所有制剂都应当是无菌且无热原质的，如所属领域中所知和实践的那样。

在某些实施例中，无菌冻干粉是通过将如本文中所公开的抗体或抗原结合片段溶解于适合溶剂中制备。溶剂可以含有赋形剂，所述赋形剂将改进粉剂或由粉剂制备的复原溶液的稳定性或其它药理学成分。可以使用的赋形剂包含但不限于水、右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它合适的药剂。溶剂可含有缓冲剂，如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾，或所属领域的技术人员已知的在一个实施例中在约中性pH下的其它这类缓冲剂。之后无菌过滤溶液，随后在所属领域的技术人员已知的标准条件下冻干，得到所需处方。在一个实施例中，将所得溶液分配到小瓶中进行冻干。各小瓶可含有单一剂量或多剂量的针对SARS-CoV-2的中和抗体或其抗原结合片段或其组合物。小瓶过填充超出一次剂量或一组剂量所需的较少量（例如约10%）是可接受的，以便于抽取准确的样品且准确给药。冻干粉剂可以在适当的条件下存储，如在约4℃到室温下。

用注射用水复原冻干粉，得到供肠胃外给药的处方。在一个实施例中，为进行复原，将无菌和/或无热原质水或其它液态适合载体添加到冻干粉中。精确量取决于所给出的选定疗法，且可以凭经验确定。

试剂盒

在某些实施例中，本公开提供了一种试剂盒，其包括本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物。在某些实施例中，本公开提供了一种试剂盒，其包括本文提供的抗体或其抗原结合片段和第二治疗剂。第二治疗剂可为第二SARS-CoV-2中和抗体；抗病毒剂，如RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂；核苷类似物；抗病毒细胞因子（如，干扰素）；免疫刺激剂；和其它抗病毒剂。

在某些实施例中，第二SARS-CoV-2中和抗体可为对于SARS-CoV-2具有中和活性且任选地与SARS-CoV-2结合的表位不同于本文提供的抗体与SARS-CoV-2结合的那些/那种表位的任何抗体。

在某些实施例中，第二治疗剂选自由以下组成的群组：伊佛霉素（Ivermectin）、克拉瑞（Colcrys）（秋水仙碱）、阿韦甘（Avigan）（法匹拉韦（favipiravir））和其它抗病毒药品、特敏福（Tamiflu）（奥司他韦（oseltamivir））、卡乐翠（Kaletra）（洛匹那韦（lopinavir）/利托那韦（ritonavir））、安挺乐（Actemra）（托西利单抗（tocilizumab））、康复血浆、阿奇霉素（Azithromycin）、羟化氯喹和氯喹、地塞米松（Dexamethasone）、瑞美德韦（Remdesivir）、氟伏沙明（Fluvoxamine）、贝伐单抗（Bevacizumab）、赛瑞单抗（sarilumab）、托西利单抗（Tocilizumab）、皮质类固醇、硝唑尼特（Nitazoxanide）、优米弗韦（Umifenovir）、法莫替丁（Famotidine）、卡莫司他（camostat）和萘莫司他（Nafamostat）。

必要时，这类试剂盒可进一步包含一种或多种各种常规药物试剂盒组分，例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、额外容器等，如将对所属领域的技术人员显而易见的。试剂盒中还可以包含作为插入物或标签的说明书，指示待给药的组分的量、给药指南和/或将组分混合的指南。

使用方法

在一个方面中，本公开还提供治疗个体中的SARS-CoV-2感染的方法，其包括向个体给药有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物。

在另一方面中，本公开还提供用于预防个体中的SARS-CoV-2感染或SARS-CoV-2-相关病状、抑制其进展和/或延迟其发作的方法，其包括向个体给药有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物。

在另一方面中，本公开还提供用于预防或降低感染SARS-CoV-2的个体传染SARS-CoV-2的方法，其包括向个体给药有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物。

在一些实施例中，本公开还提供用于降低感染SARS-CoV-2的个体中的病毒负荷的方法，其包括向个体给药有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物。

本公开还提供用其中和个体中的SARS-CoV-2的方法。

在某些实施例中，个体是人类。

在某些实施例中，个体是感染了SARS-CoV-2或处于其风险下的人类。SARS-CoV-2感染可包含例如呼吸道处的SARS-CoV-2感染，包含鼻腔感染、下呼吸道感染或肺感染。

在某些实施例中，个体是暴露于或怀疑暴露于SARS-CoV-2的人类。术语“SARS-CoV-2暴露”意指正暴露于存在或已出现SARS-CoV-2载体的环境。“SARS-CoV-2载体”是指其上或其中具有可传染的SARS-CoV-2的任何活的或无生命个体。“可传染的SARS-CoV-2”是指能够从一个活的或无生命个体扩散到另一活的或无生命个体的SARS-CoV-2。

如本文所用，术语“有效量”是指药物可显著地消除、改善或改进与疾病或异常病状有关的症状或可产生预防与疾病或异常病状有关的症状发作或甚至预防疾病或异常病状发展的所需效果的剂量。疾病或异常病状可与病毒感染，如SARS-CoV-2感染有关。有效量的本公开的抗体或其抗原结合片段意指，其剂量可引起消除、改善或改进与SARS-CoV-2感染症状发作有关的症状，包含但不限于发热或发冷、咳嗽、呼吸急促或呼吸困难、疲乏、肌肉或身体疼痛、头痛、新的味觉或嗅觉丧失、喉咙痛、鼻塞或流鼻涕、恶心或呕吐，和腹泻；有效量的本公开的抗体或其抗原结合片段也意指，其剂量可有效地预防SARS-CoV-2感染或有效地预防SARS-CoV-2感染症状发作。

本文提供的抗体或抗原结合片段的有效量将取决于所属领域中已知的各种因素，如个体的体重、年龄、既往病史、当前药品、健康状态以及发生交叉反应的可能性、过敏、敏感性和不良副作用，以及给药途径和疾病发展程度。如由这些和其它情况或要求所指示，所属领域的技术人员（例如医生或兽医）可按比例减少或增加剂量。

在某些实施例中，给药剂量可以在治疗过程中改变。举例来说，在某些实施例中，初始给药剂量可以高于后续给药剂量。在某些实施例中，取决于个体的反应，给药剂量可以在治疗过程中改变。

可以调整给药方案以提供最优的期望反应（例如治疗反应）。举例来说，可给药单次剂量，或可随时间推移给药若干分次剂量。

本文提供的抗体或其抗原结合片段可以通过所属领域中已知的任何途径给药，例如胃肠外（例如，皮下、腹膜内、静脉内（包括静脉内输注）、肌肉内或皮内注射）或非胃肠外（例如，口服、鼻内、眼内、舌下、经直肠或局部）途径。

在一些实施例中，本文提供的抗体或其抗原结合片段可单独或与治疗有效量的第二治疗剂组合给药。举例来说，本文中所公开的抗体或其抗原结合片段可与第二治疗剂（例如第二SARS-CoV-2中和抗体）组合给药；抗病毒剂，如RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂；核苷类似物；抗病毒细胞因子（如，干扰素）；免疫刺激剂；和其它抗病毒剂。

在某些这些实施例中，可与一种或多种额外治疗剂同时给药与一种或多种额外治疗剂组合给药的本文提供的抗体或其抗原结合片段，和在某些这些实施例中，可作为同一药物组合物的一部分给药抗体或其抗原结合片段和额外治疗剂。然而，与另一种治疗剂“组合”给药的抗体或其抗原结合片段不是必须与所述药剂同时或在相同的组合物中给药。在另一种药剂之前或之后给药的抗体或其抗原结合片段被认为与所述药剂“组合”给药，如所述短语在本文中所用，即使抗体或抗原结合片段和第二药剂是通过不同途径给药的。当可能时，根据额外治疗剂的产品信息表单中列出的时间表或根据主治医师案头参考2003（Physicians’Desk Reference 2003）（主治医师案头参考（Physicians’Desk Reference）,第57版；医学经济学公司（Medical Economics Company）；ISBN: 1563634457; 第57版(2002年11月)）或所属领域中熟知的方案，给药与本文中所公开的抗体或其抗原结合片段组合给药的额外治疗剂。

在另一方面中，本公开提供了试剂盒，其包括本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物，任选地其与适用于检测SARS-CoV-2病毒的可检测部分结合。试剂盒可进一步包括使用说明书。

在另一方面中，本公开还提供一种本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物在制备用于治疗或预防个体中的SARS-CoV-2感染；或用于预防、抑制个体中的SARS-CoV-2感染或SARS-CoV-2相关病状的进展和/或延迟其发作；或用于预防或降低感染SARS-CoV-2的个体传染SARS-CoV-2；或用于降低感染SARS-CoV-2的个体中的病毒负荷的药物的用途。

在另一方面中，本公开还提供一种本文提供的抗体或其抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物在制备用于诊断SARS-CoV-2感染的诊断试剂的用途。

提供以下实例是为了更好地说明所要求的发明，而不应理解为限制本发明的范围。以下描述的所有特定组合物、材料和方法完全或部分地在本发明的范围内。这些特定组合物、材料和方法不打算限制本发明，而仅说明在本发明的范围内的特定实施例。在不脱离本发明范围的情况下，所属领域的技术人员无需履行发明能力即可开发出等效组合物、材料和方法。应理解，可对本文所描述的程序作出许多变化，但仍在本发明的界限内。本发明人打算将这类变化形式包含在本发明的范围内。

实例

实例1：材料和方法

人类样品

从拉瓦尔大学的大学医院中心（Centre Hospitalier Universitaire ofUniversité Laval；CHU-Université Laval），采集来自健康对照供体的外周血液单核细胞（Peripheral blood mononuclear cell；PBMC），而来自COVID-19存活者的PBMC获自多伦多（Toronto）的森尼布鲁克医院（SunnyBrook Hospital）。在样品采集之前从两个机构获得伦理委员会的伦理批准，且所有参与者签署个人知情同意书。

荧光细胞分选

根据制造商的说明书，使用EZ-Link™磺基-NHS-生物素（加拿大伯林顿（Burlington，Canada）的赛默飞世尔科学（ThermoFisher scientific））将SARS-CoV-2病毒样颗粒（VLP）（加拿大魁北克（Quebec，Canada）的美的卡歌（Medicago））生物素化。

在使用1 μg生物素化的SARS-CoV-2 VLP染色之前，将来自COVID-19存活者的PBMC解冻且静置30分钟。随后，样品使用存活力染料（可固定的存活力染料eFluor，赛默飞世尔）、A488偶联的抗生蛋白链菌素（加利福尼亚州圣何塞（San Jose，CA）的百进生技（Biolegend））和针对CD14（M5E2）、CD3（SP34-2）、CD19（HIB19）、IgG（G18-145）和IgM（G20-127）的谱系标记（全部均来自BD生物科学（BD Biosciences）（加利福尼亚州圣何塞））的组合进行染色。在广泛洗涤样品之后，使用FACSARIA融合物（BD生物科学）分别分选SARS-CoV-2特异性B细胞。使用如先前所描述的饲养细胞，培养分选的B细胞2周（Cox等人 《单克隆抗体（mAbs）》 8:1，129-140；2016）。从SARS-CoV-2特异性B细胞培养物采集上清液和细胞用于进一步分析。

SARS-CoV-2特异性酶联免疫吸附分析（Enzyme-linked immunosorbent assay； ELISA）

用100 ng SARS-CoV-2 VLP（美的卡歌）涂布96孔板的各孔隔夜。在用PBS、5%牛奶广泛洗涤和阻断之后，将各孔与培养物上清液一起在37℃下培育1小时。在额外洗涤之后，将各孔与15 ng辣根过氧化酶（HRP）结合的山羊抗人类IgG（加拿大圭尔夫（Guelph，Canada）的曼德尔科学（Mandel scientific））一起培育。在最后一组洗涤之后，将各孔与2,2'-连氮基双[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二铵盐（ABTS）底物（曼德尔科学）一起培育，且读取405nm下的吸光度。

抗体序列的回收

如先前所描述获得抗体序列（Cox等人 《单克隆抗体》 8:1，129-140；2016）。按照制造商的说明书，用凯杰（Qiagen）RNeasy微小试剂盒（凯杰）从单细胞分选的B细胞培养物提取RNA。使用凯杰一步RT-PCR试剂盒（凯杰，目录号：210212）扩增人类抗体基因。基于公开的集合（参见Smith等人，快速产生对接种抗原具有特异性的完全人类单克隆抗体（Rapidgeneration of fully human monoclonal antibodies specific to a vaccinatingantigen），Nat Proto 2009；4:372-84）设计RT-PCR引物。RT-PCR产物用作用于用英杰（Invitrogen）pfx50 DNA聚合酶扩增抗体可变区的嵌套式PCR中的模板，正向和反向嵌套式PCR引物的设计是基于如前所描述的在人类IgG重链和轻链可变区的构架1区开始处的序列（参见Collarini等人，用于治疗和预防来源于感染患者的B细胞的呼吸道合胞病毒的强效高亲和力抗体（Potent high-affinity antibodies for treatment and prophylaxis ofrespiratory syncytial virus derived from B cells of infected patients），《免疫学杂志》 2009；183:6338-45）。随后，嵌套式PCR产物用作用于将抗体轻链和重链PCR产物与连接子序列连接的重叠PCR中的模板，且用输注HD克隆试剂盒（克隆科技公司（Clontech），目录号：639649）克隆到质粒载体中以用于测序。

SARS-CoV-2中和分析

使用HEK293瞬时表达系统（北京义翘神州生物科技有限公司（Sino Biological））以重组方式表达呈IgG1形式的测试抗体以用于进一步分析。将Vero-E6细胞接种在具有补充有10%胎牛血清的DMEM（吉毕科（Gibco））的96孔细胞培养板（20,000个细胞每孔）中，且在37℃下生长隔夜。将具有指示浓度的抗体与100 TCID50 SARS-CoV-2混合。将混合物移到含有Vero-E6细胞的孔中且在37℃下培育1小时。在去除上清液之后，添加200 μL细胞培养基且随后在37℃与5% CO₂下培育培养板3天。用结晶紫对细胞进行染色，且测量570 nm/630nm下的吸光度。中和定义为与阳性对照相比的百分比降低。使用GraphPad Prism 7中的非线性回归分析，计算两个重复的中和效价。

S蛋白-特异性ELISA

用0.1或1 μg/mL的SARS-CoV-2 S、S1或RBD蛋白（北京义翘神州生物科技有限公司）涂布聚苯乙烯微板（康宁（Corning））隔夜。在用含有0.2% Tween 20的PBS洗涤之后，使用2% BSA（西格玛阿尔德里奇（Sigma Aldrich））在PBST中在37℃下阻断培养板1小时。在用PBST洗涤之后，将测试抗体（1 μg/mL）添加到各孔中且在37℃下培育1小时。在用PBST洗涤之后，添加以1:5000稀释的HRP结合的山羊抗人类IgG抗体且在37℃下培育1小时。在洗涤之后，将3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）底物溶液添加到微量板，且在室温下培育6 min，随后添加2M H₂SO₄以终止反应。检测450 nm下的吸光度。

实例2：抗体的表征

在通过SARS-CoV-2特异性结合分析（数据未显示）筛选所有获得的抗体之后，获得了三种最好的抗体（即，37G2、31C2和15A7），这三种抗体在我们筛选的众多抗体中表现出了最为优异的结合亲和性。图1中显示三种抗体的SARS-CoV-2特异性结合活性。对抗体的CDR区进行测序且在表1中列出。据申请人所知，含有如表1中所列CDR的SARS-CoV-2抗体之前并未报道过，因此，本申请提供了全新的SARS-CoV-2抗体，为对抗SARS-CoV-2疫情提供了更多的选择。

以重组方式表达这3种抗体且使用活病毒在Vero-E6细胞中进行活体外中和分析。如图2中所示出，所有抗体呈现明显的针对SARS-CoV-2感染的中和能力。计算出的37G2、31C2和15A7的EC₅₀分别是1.37、0.57和0.61 μg/mL。

我们测试抗体与刺突蛋白（S蛋白）、S1亚基和RBD结构域的结合特性。如图3中所示，15A7与S蛋白、S1亚基和RBD结构域结合，表明抗体15A7阻断SARS-CoV-2与ACE2之间的相互作用。另外两种抗体37G2和31C2与S蛋白结合，但不与S1亚基或RBD结构域结合，表明其结合位点可能在S蛋白的S2亚基上。

基于如上所述的SARS-CoV-2特异性结合活性和针对SARS-CoV-2感染的中和能力的实验数据，申请人认为本申请的抗体具有较优异的活性，具有开发成药品的潜力以及大规模生产的应用前景。

本文中所公开或所要求保护的所有组合物和方法都可根据本公开在无过度实验的情况下作出和执行。虽然本发明的组合物和方法已结合优选实施例描述，但是对于所属领域的技术人员显而易见的是，可以对方法和本文所描述的方法中的步骤或步骤顺序进行变更而这些变更不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地说，显而易见的是，在化学上和生理学上相关的某些药剂可以取代本文中所描述的药剂，同时实现相同或相似的结果。对所属领域的技术人员显而易见的是，所有这类类似取代和修改视为在由所附权利要求书限定的本发明的精神、范围和概念内。

序列表

<110> 恒翼生物医药科技（上海）有限公司

<120> 抗SARS-COV-2中和抗体

<130> 072176-8016CN01

<160> 30

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 1

Ser Tyr Asp Ile Asn

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 2

Trp Met Asn Pro Asn Ser Ala Asn Pro Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 3

Ala Arg Val Thr Ile His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Ser Asn

1 5 10 15

Ala Phe Asp Ile

20

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 4

Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 5

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 6

Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Phe Met Tyr Thr

1 5 10

<210> 7

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Ala Asn Pro Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Phe

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Arg Val Thr Ile His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr

100 105 110

Ser Asn Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Ala Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 8

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Phe Met

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Met Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 387

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 9

caagtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc 120

tctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtgctaa cccaggctat 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagccttc 240

atggagctga gcagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagcccga 300

gtaactatac attacgatat tttgactggt tattattcga atgcttttga tatctggggc 360

caagggacaa tggtcgccgt ctcttca 387

<210> 10

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 10

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggcaagtca gaccattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tggggcagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacacta ccttcatgta cacttttggc 300

caggggacca tgctggagat caaa 324

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 11

Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 12

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 13

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 13

Arg Ser Ala Tyr Gly Asp Lys Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 14

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 15

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 16

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Gln Glu Thr

1 5 10

<210> 17

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 17

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Arg Ser Ala Tyr Gly Asp Lys Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 18

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Phe

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Gln Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 19

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 19

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcgtc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac aacaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga acagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gggacgttcg 300

gcctacggtg ataaagggta ctactttgat tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 20

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 20

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aacttcttag cctggtacca acagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctacagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctccgca agagacgttc 300

ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaa 327

<210> 21

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 21

Ser Tyr Ala Ile Thr

1 5

<210> 22

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 22

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Phe Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 23

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 23

Leu Gly Gly Phe Ala Asp Pro Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 24

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 24

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 25

Asp Ala Phe Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 26

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 26

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Arg Ile Thr

1 5 10

<210> 27

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 27

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Phe Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala His Leu Gly Gly Phe Ala Asp Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 28

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 28

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ala Pro Arg Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Phe Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Arg Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 29

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 29

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcacctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaacttc 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc ccacctaggg 300

gggttcgctg acccctttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357

<210> 30

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 30

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aactacttag cctggtacca acagaaagct 120

ggccaggctc ccagggtcct catctatgat gcattcaaca gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctccgcg gatcaccttc 300

ggccaaggga cacgactgga gattaaa 327

Claims (22)

1.一种能够与SARS-CoV-2特异性结合的分离的或重组的抗体或其抗原结合片段，其包括：氨基酸序列为SEQ ID NO: 1的VH-CDR1、氨基酸序列为SEQ ID NO: 2的VH-CDR2和氨基酸序列为SEQ ID NO: 3的VH-CDR3；以及氨基酸序列为SEQ ID NO: 4的VL-CDR1、氨基酸序列为SEQ ID NO: 5的VL-CDR2和氨基酸序列为SEQ ID NO:6的VL-CDR3。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包括含SEQ ID NO: 7的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包括含SEQ ID NO: 8的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其包括SEQ ID NO: 7/8的一对重链可变区和轻链可变区序列。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包括重链恒定区或轻链恒定区。

6.根据权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区来自人类IgG1。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其是双功能抗体。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其是Fab、Fab'、F(ab')₂或scFv。

9.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其是双特异性的。

10.一种药物组合物，其包括根据权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段中的一种或多种和药学上可接受的载体。

11.根据权利要求10所述的药物组合物，其进一步包括能够中和SARS-CoV-2的第二抗体。

12.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10至11中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗个体中的SARS-CoV-2感染的药物中的用途。

13.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10至11中任一项所述的药物组合物在制备用于抑制个体中的SARS-CoV-2感染的药物中的用途。

14.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10至11中任一项所述的药物组合物在制备用于抑制个体中的SARS-CoV-2相关病状的进展的药物中的用途。

15.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10至11中任一项所述的药物组合物在制备用于抑制个体中的SARS-CoV-2相关病状的延迟其发作的药物中的用途。

16.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10至11中任一项所述的药物组合物在制备用于降低感染SARS-CoV-2的个体传染SARS-CoV-2的药物中的用途。

17.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10至11中任一项所述的药物组合物在制备用于降低感染SARS-CoV-2的个体中的病毒负荷的药物中的用途。

18.根据权利要求12至17中任一项所述的用途，其中所述个体是人类或非人类动物。

19.根据权利要求12至17中任一项所述的用途，其中所述药物是静脉内给药。

20.一种试剂盒，其包括根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求10至11中任一项所述的药物组合物，其适用于检测SARS-CoV-2的存在。

21.一种分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或抗原结合片段。

22.根据权利要求21所述的分离的多核苷酸，其包括SEQ ID NO: 9-10的核苷酸序列。

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