CN112504794A - 组织透明化试剂及其制备方法和应用 - Google Patents

组织透明化试剂及其制备方法和应用 Download PDF

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CN112504794A CN202011287244.4A CN202011287244A CN112504794A CN 112504794 A CN112504794 A CN 112504794A CN 202011287244 A CN202011287244 A CN 202011287244A CN 112504794 A CN112504794 A CN 112504794A
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郑海荣
胡德红
盛宗海
刘新
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    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
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Abstract

本申请提供了一种组织透明化试剂,按质量百分比计,包括:脱毛剂1%‑10%,透明剂5%‑70%,促透剂2%‑30%,余量为助剂。该组织透明化试剂能够在短时间内使得生物组织变得透明,从而有利于注射、成像等实验的进行。本申请还提供了组织透明化试剂的制备方法和应用。

Description

组织透明化试剂及其制备方法和应用
技术领域
本申请涉及生物医学技术领域,尤其涉及组织透明化试剂及其制备方法和应用。
背景技术
小鼠是生物医学研究中常用的实验动物,对其进行注射是药理、毒理、遗传、肿瘤、免疫学等实验领域中常用的实验手段。在对小鼠进行注射时,小鼠的血管不易辨识,从而影响注射以及后续观察的进行,甚至会耽误整个实验流程的进行。
发明内容
有鉴于此,本申请提供了一种组织透明化试剂及其制备方法,该组织透明化试剂能够在短时间内使得生物组织变得透明,从而有利于注射、成像等实验的进行,在生物医学领域有广泛的应用前景。
第一方面,本申请提供了一种组织透明化试剂,按质量百分比计,包括:
脱毛剂 1%-10%
透明剂 5%-70%
促透剂 2%-30%
余量为助剂。
在本申请中,组织透明化试剂中的脱毛剂可以对生物组织上的毛发进行脱除,有利于组织的直接暴露;同时,透明剂能够降低生物组织散射,使得组织内部折射率均一化,实现透明化效果,并且不会破坏组织原有的结构,促透剂进一步提高透明剂渗透至组织中,加快组织内部折射率均一化程度,从而在短时间内使得生物组织透明化,有利于注射、成像等实验的进行,更有利于其在生物医学领域中的应用。
可选的,按质量百分比计,所述组织透明化试剂包括:
脱毛剂 3%-8%
透明剂 20%-60%
促透剂 10%-25%
余量为助剂。
可选的,所述透明剂和所述促透剂的质量比为(1-6):1。
可选的,所述脱毛剂包括无机脱毛剂和有机脱毛剂中的至少一种,所述无机脱毛剂包括碱金属硫化物和碱土金属硫化物中的至少一种,所述有机脱毛剂包括巯基乙酸钙。
可选的,所述透明剂包括糖类和醇类中的至少一种;所述糖类包括单糖和二糖中的至少一种,所述醇类包括乙醇、丙二醇、丙三醇、丁二醇、正丁醇、聚乙二醇、聚乙烯醇和山梨醇中的至少一种。
可选的,所述促透剂包括天然促透剂和合成促透剂中的至少一种,所述天然促透剂包括薄荷类化合物和萜类化合物中的至少一种,所述合成促透剂包括二甲基亚砜、氮酮、噻酮和油酸中的至少一种。
可选的,所述组织透明化试剂中,所述助剂的质量占比为1%-55%,所述助剂包括赋形剂和表面活性剂中的至少一种,所述赋形剂和所述表面活性剂的质量比为(1-10):1。
进一步的,所述赋形剂包括水、凡士林、淀粉、固体石蜡、液体石蜡和微晶蜡中的至少一种,所述表面活性剂包括十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦和聚山梨酯中的至少一种。
本申请组织透明化试剂能够在短时间内使得生物组织变得透明,从而有利于注射、成像等实验的进行,在生物医学领域中具有广泛的应用前景。
第二方面,本申请提供了一种组织透明化试剂的制备方法,包括:
将脱毛剂、透明剂、促透剂和助剂混合均匀,得到组织透明化试剂,其中,所述脱毛剂的质量占比为1%-10%,所述透明剂的质量占比为5%-70%,所述促透剂的质量占比为2%-30%。
本申请提供的组织透明化试剂的制备方法简单、操作便捷,有利于其广泛应用。
第三方面,本申请提供了如第一方面所述的组织透明化试剂在组织透明化处理和/或组织成像中的应用。
在本申请中,该组织透明化试剂能够在短时间内使得生物组织变得透明,从而达到组织透明化处理、组织成像等要求,有利于进行注射、成像等操作,为生物医学领域的研究提供强有力的支持。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
图1为实施例1中组1提供的组织透明化试剂处理不同时间后的黑鼠尾部示意图。
图2为实施例1中组1提供的组织透明化试剂处理黑鼠耳部的示意图。
图3为效果实施例3的检测结果图。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
本申请提供了一种组织透明化试剂,按质量百分比计,包括:
脱毛剂 1%-10%
透明剂 5%-70%
促透剂 2%-30%
余量为助剂。
在本申请中,组织透明化试剂中的脱毛剂可以对生物组织上的毛发进行脱除,有利于组织的直接暴露;同时,透明剂能够降低生物组织散射,使得组织内部折射率均一化,实现透明化效果,并且不会破坏组织原有的结构,促透剂进一步提高透明剂渗透至组织中,加快组织内部折射率均一化程度;组织透明化试剂中脱毛剂、透明剂和促透剂三者协同作用,从而可以在短时间内使得生物组织透明化,大大提高了透明化的速度和效果,同时各成分对生物组织不产生毒性作用,有利于注射、成像等实验的进行,更有利于其在生物医学领域中的应用。
在本申请中,组织透明化试剂中包括了质量占比为1%-10%的脱毛剂,从而可以在组织透明化试剂作用于生物组织时,对生物组织的毛发进行脱除,将组织直接暴露,同时还有利于透明剂和促透剂直接作用于组织中,避免毛发对透明剂和促透剂效果的影响,有利于短时间实现透明化以及成像要求。在本申请一实施例中,组织透明化试剂中包括了质量占比为3%-8%的脱毛剂,从而提高脱毛速度,并且含量不至于过高,避免浪费。进一步的,组织透明化试剂中包括了质量占比为4%-6%的脱毛剂,从而进一步提高脱毛速度,同时还可以避免对透明剂和促透剂效果的影响,提高透明化速度。具体的,组织透明化试剂中脱毛剂的质量占比可以但不限于为3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%或6%。
在本申请实施方式中,脱毛剂包括无机脱毛剂和有机脱毛剂中的至少一种。在一实施例中,无机脱毛剂包括碱金属硫化物和碱土金属硫化物中的至少一种。进一步的,无机脱毛剂包括钠、钾、钙、钡、锶中至少一种元素的硫化物。具体的,无机脱毛剂可以但不限于为硫化钠、硫化钾、硫化钙、硫化锶中的至少一种。在另一实施例中,有机脱毛剂包括巯基乙酸钙。采用上述脱毛剂能够减小脱毛剂对生物组织的刺激作用,同时脱毛效果好,脱毛速度快。
在本申请中,组织透明化试剂中包括了质量占比为5%-70%的透明剂,从而可以在组织透明化试剂作用于生物组织时,渗入生物组织中,使得原有折射率分布不均一的组织内部中混入了高渗透、高折射率的透明剂,组织发生可逆的变化,整个组织的折射率趋近一致,降低组织对光的散射,提高光在组织中的穿透深度,从而达到组织透明化的效果。在本申请一实施例中,组织透明化试剂中包括了质量占比为20%-60%的透明剂,从而提高渗透速度,提升透明化效果,同时还不会对组织原有结构造成破坏。进一步的,组织透明化试剂中包括了质量占比为40%-60%的透明剂,从而进一步提高透明化速度。具体的,组织透明化试剂中透明剂的质量占比可以但不限于为10%、15%、20%、28%、30%、34%、40%、46%、50%、55%、60%或69%。
在本申请实施方式中,透明剂包括糖类和醇类中的至少一种。在一实施例中,糖类包括单糖和二糖中的至少一种。具体的,单糖可以但不限于为果糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖中的至少一种,二糖可以但不限于为蔗糖和麦芽糖中的至少一种。在另一实施例中,醇类包括乙醇、丙二醇、丙三醇、丁二醇、正丁醇、聚乙二醇、聚乙烯醇和山梨醇中的至少一种。通过采用糖类和醇类的透明剂,既能够提升组织透明化效果和速率,同时还对生物组织无毒副作用,并且原料来源广泛,有利于试剂成本的降低。
在本申请中,组织透明化试剂中包括了质量占比为2%-30%的促透剂,从而可以在组织透明化试剂作用于生物组织时,起到高效渗透的作用,使得组织细胞间隙增大,促进透明剂的渗入,加快组织内部折射率一致化程度,提升透明化效果呈现速度,同时组织透明化试剂中促透剂含量适宜,不会对生物组织原有结构造成破坏,有助于后续实验的进行。在本申请一实施例中,组织透明化试剂中包括了质量占比为10%-25%的促透剂,从而提高透明剂渗入,加快透明化速度。进一步的,组织透明化试剂中包括了质量占比为15%-22%的促透剂,从而进一步提高透明剂渗入的速度,提升透明化速度。具体的,组织透明化试剂中促透剂的质量占比可以但不限于为5%、8%、10%、15%、17%、20%、25%、26%、29%或30%。
在本申请实施方式中,促透剂包括天然促透剂和合成促透剂中的至少一种。在一实施例中,天然促透剂包括薄荷类化合物和萜类化合物中的至少一种。进一步的,薄荷类化合物包括薄荷油、薄荷醇和薄荷脑中的至少一种;萜类化合物包括香叶醇、芳樟醇、倍半萜烯和樟脑中的至少一种。在另一实施例中,合成促透剂包括二甲基亚砜、氮酮、噻酮和油酸中的至少一种。采用上述促透剂能够进一步提高与透明剂的协同作用,提升组织透明化速率和程度。
在本申请中,促透剂能够促进透明剂渗入组织中,两者相互作用,从而进一步增加透明化程度和速率。在本申请实施方式中,透明剂和促透剂的质量比为(1-6):1。从而能够进一步促进促透剂和透明剂的协同作用,提升透明剂渗入组织的速度,使得组织的折射率可以较快的达到一致,减少对光的散射,在更短时间内达到组织透明化程度。进一步的,透明剂和促透剂的质量比为(2-6):1。具体的,透明剂和促透剂的质量比为可以但不限于为1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1或6:1。
在本申请一实施方式中,组织透明化试剂包括质量占比为3%-8%的脱毛剂、质量占比为20%-60%的透明剂、质量占比为10%-25%的促透剂,以及余量的助剂。
在本申请另一实施方式中,组织透明化试剂包括质量占比为3%-8%的脱毛剂、质量占比为40%-60%的透明剂、质量占比为10%-25%的促透剂,以及余量的助剂。
在本申请另一实施方式中,组织透明化试剂包括质量占比为4%-6%的脱毛剂、质量占比为25%-60%的透明剂、质量占比为15%-22%的促透剂,以及余量的助剂。
在本申请另一实施方式中,组织透明化试剂包括质量占比为4%-6%的脱毛剂、质量占比为40%-60%的透明剂、质量占比为15%-22%的促透剂,以及余量的助剂。
在一具体实施例中,组织透明化试剂包括质量占比为1%的脱毛剂、质量占比为60%的透明剂、质量占比为20%的促透剂,以及余量的助剂。
在另一具体实施例中,组织透明化试剂包括质量占比为10%的脱毛剂、质量占比为15%的透明剂、质量占比为25%的促透剂,以及余量的助剂。
在另一具体实施例中,组织透明化试剂包括质量占比为5%的脱毛剂、质量占比为70%的透明剂、质量占比为10%的促透剂,以及余量的助剂。
在另一具体实施例中,组织透明化试剂包括质量占比为5%的脱毛剂、质量占比为25%的透明剂、质量占比为30%的促透剂,以及余量的助剂。
在另一具体实施例中,组织透明化试剂包括质量占比为5%的脱毛剂、质量占比为60%的透明剂、质量占比为15%的促透剂,以及余量的助剂。
在本申请实施方式中,组织透明化试剂中,助剂的质量占比为1%-55%。进一步的,组织透明化试剂中,助剂的质量占比为15%-50%。更进一步的,组织透明化试剂中,助剂的质量占比为18%-42%。具体的,组织透明化试剂中助剂的质量占比为可以但不限于为5%、10%、15%、19%、20%、28%、35%、40%、42%、48%或50%。
在本申请实施方式中,助剂包括赋形剂和表面活性剂中的至少一种。在本申请中,赋形剂可以使试剂呈现所需的形状,例如可以但不限于为水状、乳液状、膏状等,可以根据实际需要的剂型,选择赋形剂的种类。在一实施例中,赋形剂包括水、凡士林、淀粉、固体石蜡、液体石蜡和微晶蜡中的至少一种,从而可以获得所需的剂型。在本申请中,表面活性剂可以改善组织透明化试剂内部的界面状态,使得各成分在试剂中能够长期稳定存在,且不会影响彼此的作用效果。在一实施例中,表面活性剂包括十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦和聚山梨酯中的至少一种。在本申请一实施方式中,赋形剂和表面活性剂的质量比为(1-10):1。从而可以得在组织透明化试剂保持所需剂型的同时,试剂内部各成分可以稳定存在,整体稳定性好。进一步的,赋形剂和表面活性剂的质量比为(2-8):1。具体的,赋形剂和表面活性剂的质量比可以但不限于为1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1或9:1。在本申请另一实施方式中,助剂还可以包括分散剂、抗氧化剂、交联剂等,具体的可以根据需要进行选择。可选的,交联剂包括硼砂和硼酸中的至少一种。在一实施例中,透明剂包括聚乙烯醇,助剂包括硼砂,硼砂作为交联剂,使得聚乙烯醇发生凝胶化,形成凝胶,其他组分均匀混合其中,得到凝胶剂。
在本申请中,通过组织透明化试剂擦拭生物组织,使其组织呈现透明化,例如对静脉进行擦拭后,静脉血管呈透明化,血管清晰可见,提高了静脉注射的准确镀,提高注射效率,又如通过对生物组织擦拭,提高透明化程度,组织清晰可见,有利于成像操作的进行等,为动物实验提供有力的技术支持;同时本申请提供的组织透明化试剂在擦拭生物组织数分钟内即可使其组织呈现透明化,同时还不会破会组织原有的结构,效率优异;并且本申请提供的组织透明化试剂对在体或离体组织进行处理,更有利于后续实验的进行。在本申请实施方式中,通过将组织透明化试剂涂覆至生物组织10min内,即可生物组织呈现透明化。
在生物医学领域,往往需要对生物组织进行注射、组织成像等操作,以便于治疗、检测、观察等实验过程的进行。在本申请中,组织透明化试剂可以但不限于用于动物组织,例如人、鼠、兔、羊等,从而有利于相关实验的进行。在一实施例中,鼠可以包括小鼠、大鼠等,例如白鼠、黑鼠等,处理部位可以但不限于耳部、四肢、尾部等。其中,白鼠常用于生物医学领域实验中,如小白鼠、大白鼠等,通过本申请提供的组织透明化试剂,对其组织进行擦拭后,能够在数分钟内使得组织透明化,提高血管等组织的清晰程度,从而有利于注射、成像等操作的进行;黑鼠(Rattus rattus)是鼠科、家鼠属的动物,体形细长,尾长大于体长,耳大而薄,后足细而长,有两个主要色型:黑色型与棕褐色型,黑色型背毛黑色、腹毛铅灰色,棕褐色型背毛暗灰黄褐色、腹毛灰白色。由于黑鼠体色的特殊性,其组织在不进行任何处理时几乎无法辨识,造成了注射、成像等操作的困难。相关技术中,采用热敷、酒精擦拭的方法使静脉等血管扩张,提高血管清晰度,从而提高注射和成像效果。而对于黑鼠来说,即使进行上述操作仍然无法辨识静脉等血管的位置,依然影响了注射、成像等操作的进行。在本申请中,通过提供的组织透明化试剂,对其组织进行擦拭后,能够在数分钟内使得组织透明化,提高血管等组织的清晰程度,从而有利于注射、成像等操作的进行。
本申请还提供了上述组织透明化试剂的制备方法,包括:将脱毛剂、透明剂、促透剂和助剂混合均匀,得到组织透明化试剂,其中,脱毛剂的质量占比为1%-10%,透明剂的质量占比为5%-70%,促透剂的质量占比为2%-30%。本申请提供的组织透明化试剂的制备方法简单、操作便捷,有利于其广泛应用。
本申请还提供了上述组织透明化试剂在生物组织透明化处理和/或组织成像中的应用。在本申请中,该组织透明化试剂能够在短时间内使得生物组织变得透明,从而达到组织透明化处理、组织成像等要求,有利于进行注射、成像等操作,为生物医学领域的研究提供强有力的支持。
在本申请中,可以但不限于通过涂抹、擦拭等方式将组织透明化试剂覆盖在生物组织表面,从而使组织透明化试剂中的各个成分发挥作用,实现生物组织透明化的效果。
在本申请中,组织透明化试剂可以但不限于用于动物组织,例如人、鼠、兔、羊等,从而有利于相关实验的进行。在一实施例中,鼠可以包括小鼠、大鼠等,例如白鼠、黑鼠等。
实施例1
脱毛剂选择硫化钠,透明剂选择甘油,促透剂选择噻酮,助剂包括水和凡士林,水和凡士林的质量比为2:1,按表1的所示的质量百分含量称取上述各物质,经均匀混合后得到多组组织透明化试剂。
表1实施例组织透明化试剂配方表
编号 脱毛剂(%) 透明剂(%) 促透剂(%) 助剂(%)
1 1 70 25 4
2 3 70 2 25
3 5 5 30 60
4 7 65 28 -
5 5 60 15 20
6 6 40 19 35
7 9 50 21 18
8 8 25 25 42
9 10 60 10 20
实施例2
脱毛剂选择巯基乙酸钙,透明剂选择甘露糖和丁二醇,甘露糖和丁二醇的质量比为1:1,促透剂选择氮酮,助剂包括水和十二烷基苯磺酸钠,水和十二烷基苯磺酸钠的质量比为1:1,按表1的所示的质量百分含量称取上述各物质,经均匀混合后得到多组组织透明化试剂。
实施例3
脱毛剂选择硫化钙,透明剂选择麦芽糖和山梨醇,麦芽糖和山梨醇的质量比为1:2,促透剂选择薄荷脑,助剂包括淀粉和十二烷基苯磺酸钠,淀粉和十二烷基苯磺酸钠的质量比为3:1,按表1的所示的质量百分含量称取上述各物质,经均匀混合后得到多组组织透明化试剂。
对比例1
脱毛剂选择硫化钠,透明剂选择甘油,促透剂选择噻酮,助剂包括水和凡士林,水和凡士林的质量比为2:1,按表2的所示的质量百分含量称取上述各物质,经均匀混合后得到多组组织透明化试剂。
表2对比例组织透明化试剂配方表
编号 脱毛剂(%) 透明剂(%) 促透剂(%) 助剂(%)
1 5 0 - 95
2 - 90 - 10
3 15 82 1 2
4 - 100 - -
效果实施例1
将黑鼠麻醉,采用上述实施例以及对比例得到的多组组织透明化试剂对黑鼠尾部进行处理,在处理数分钟后用棉球将黑鼠尾部擦拭干净并拍照观察。其中,实施例1中组1的拍照结果如图1所示,其中图1中从左至右依次为处理前黑鼠尾部、试剂处理2min后的黑鼠尾部、试剂处理5min后的黑鼠尾部以及试剂处理10min后的黑鼠尾部,可以看出,随着试剂处理时间的延长,黑鼠尾部静脉血管逐渐清晰,组织透明化程度加大,使得静脉注射更加方便。在处理10min后的黑鼠尾部静脉血管清晰,可以轻易的进行注射等操作。以实施例1中组1试剂处理10min的黑鼠尾部为参照,观察其他各组达到相同清晰程度所需要的时间。结果发现,实施例1-3中各组均可以在10min或10min内达到相同透明化程度,表明本申请提供的组织透明化试剂可以在较短时间内实现组织透明化的效果,同时,实施例1-3中的组5-组9可以在5min或5min内达到相同的透明化程度,透明化效率更高;而对比例的组1没有透明化的效果,对比例的组3在处理10min还未达到相同的水平,继续处理后小鼠尾部受到损失,不利于后续实验进行,对比例的组2和组4由于不含脱毛剂,静脉血管无法达到上述相同的透明化水平。
同时采用上述实施例以及对比例得到的多组组织透明化试剂对黑鼠耳部进行处理,在处理数分钟后用棉球将黑鼠耳部擦拭干净并拍照观察。其中,实施例1中组1的拍照结果如图2所示,其中图2中从左至右依次为处理前黑鼠耳部、试剂处理7min后的黑鼠耳部。可以看出,经过试剂处理后,黑鼠耳部血管清晰度提高,有利于后续实验的进行。以实施例1中组1试剂处理7min的黑鼠尾部为参照,观察其他各组达到相同清晰程度所需要的时间。结果发现,实施例1-3中各组均可以在7min或7min内达到相同透明化程度,表明本申请提供的组织透明化试剂可以在较短时间内实现组织透明化的效果,同时,实施例1-3中的组5-组9可以在5min或5min内达到相同的透明化程度,透明化效率更高;而对比例的组1没有透明化的效果,对比例的组3在处理7min还未达到相同的水平,对比例的组2和组4由于不含脱毛剂,静脉血管无法达到上述相同的透明化水平。
效果实施例2
采用与效果实施例1相同的实验过程,不同之处在于,对小白鼠(Musmusculus)的尾部进行处理。以实施例1中组1试剂处理10min的黑鼠尾部为参照,发现实施例提供的试剂在处理小白鼠时,可以在8min内达到相同的透明化程度,用时更短;而对比例的组1和组3在处理15min以上才能达到相同的水平,处理时间较长,对比例的组2和组4由于不含脱毛剂,静脉血管仍然隐约可见,无法达到上述相同的透明化水平。
效果实施例3
将硫化钠、甘油和噻酮分别用DMEM培养基(达尔伯克改良伊格尔培养基)稀释成不同的浓度。将对数生长期的Bend3细胞以1-5×104个/孔加入96孔板中,过夜培养至贴壁,然后加入含有相应浓度的硫化钠、甘油和噻酮的DMEM培养基培养24h。每孔加入20μL噻唑蓝(5mg/ml),37℃、5%CO2及饱和湿度的培养箱中孵育4h,吸出培养基,加入150μL的二甲基亚砜,10min后在490nm酶标仪检测,检测不同浓度的硫化钠、甘油和噻酮对内皮细胞Bend3的细胞毒性作用,结果如图3所示,可以看出,内皮细胞Bend3在不同浓度的硫化钠、甘油和噻酮培养基中均可以正常生长,硫化钠、甘油和噻酮对细胞不产生毒性。
以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本申请专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本申请构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本申请的保护范围。因此,本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种组织透明化试剂,其特征在于,按质量百分比计,包括:
脱毛剂 1%-10%
透明剂 5%-70%
促透剂 2%-30%
余量为助剂。
2.如权利要求1所述的组织透明化试剂,其特征在于,按质量百分比计,包括:
脱毛剂 3%-8%
透明剂 20%-60%
促透剂 10%-25%
余量为助剂。
3.如权利要求1所述的组织透明化试剂,其特征在于,所述透明剂和所述促透剂的质量比为(1-6):1。
4.如权利要求1所述的组织透明化试剂,其特征在于,所述脱毛剂包括无机脱毛剂和有机脱毛剂中的至少一种,所述无机脱毛剂包括碱金属硫化物和碱土金属硫化物中的至少一种,所述有机脱毛剂包括巯基乙酸钙。
5.如权利要求1所述的组织透明化试剂,其特征在于,所述透明剂包括糖类和醇类中的至少一种;所述糖类包括单糖和二糖中的至少一种,所述醇类包括乙醇、丙二醇、丙三醇、丁二醇、正丁醇、聚乙二醇、聚乙烯醇和山梨醇中的至少一种。
6.如权利要求1所述的组织透明化试剂,其特征在于,所述促透剂包括天然促透剂和合成促透剂中的至少一种,所述天然促透剂包括薄荷类化合物和萜类化合物中的至少一种,所述合成促透剂包括二甲基亚砜、氮酮、噻酮和油酸中的至少一种。
7.如权利要求1所述的组织透明化试剂,其特征在于,所述组织透明化试剂中,所述助剂的质量占比为1%-55%,所述助剂包括赋形剂和表面活性剂中的至少一种,所述赋形剂和所述表面活性剂的质量比为(1-10):1。
8.如权利要求7所述的组织透明化试剂,其特征在于,所述赋形剂包括水、凡士林、淀粉、固体石蜡、液体石蜡和微晶蜡中的至少一种,所述表面活性剂包括十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦和聚山梨酯中的至少一种。
9.一种组织透明化试剂的制备方法,其特征在于,包括:
将脱毛剂、透明剂、促透剂和助剂混合均匀,得到组织透明化试剂,其中,所述脱毛剂的质量占比为1%-10%,所述透明剂的质量占比为5%-70%,所述促透剂的质量占比为2%-30%。
10.如权利要求1-8任一项所述的组织透明化试剂在组织透明化处理和/或组织成像中的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113218741A (zh) * 2021-04-29 2021-08-06 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 组织透明化试剂盒和方法
CN113781848A (zh) * 2021-08-14 2021-12-10 西安电子科技大学 一种基于智能手机的光学投影断层成像装置、系统及方法
WO2024089224A1 (fr) * 2022-10-26 2024-05-02 Centre National De La Recherche Scientifique Composition et procede de transparisation d'echantillons biologiques

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6219575B1 (en) * 1998-10-23 2001-04-17 Babak Nemati Method and apparatus to enhance optical transparency of biological tissues
CN103263678A (zh) * 2013-02-20 2013-08-28 华中科技大学 一种足垫皮肤组织光透明剂
CN104568553A (zh) * 2014-12-30 2015-04-29 深圳先进技术研究院 一种组织光透明剂及其应用
CN105561347A (zh) * 2015-12-31 2016-05-11 上海宇昂新材料科技有限公司 血管显像增强剂
CN106390138A (zh) * 2016-08-29 2017-02-15 华中科技大学 一种皮肤组织光透明溶液及其制备方法和应用
CN108106909A (zh) * 2017-11-27 2018-06-01 华中科技大学 一种生物组织光透明剂、光透明化方法及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6219575B1 (en) * 1998-10-23 2001-04-17 Babak Nemati Method and apparatus to enhance optical transparency of biological tissues
CN103263678A (zh) * 2013-02-20 2013-08-28 华中科技大学 一种足垫皮肤组织光透明剂
CN104568553A (zh) * 2014-12-30 2015-04-29 深圳先进技术研究院 一种组织光透明剂及其应用
CN105561347A (zh) * 2015-12-31 2016-05-11 上海宇昂新材料科技有限公司 血管显像增强剂
CN106390138A (zh) * 2016-08-29 2017-02-15 华中科技大学 一种皮肤组织光透明溶液及其制备方法和应用
CN108106909A (zh) * 2017-11-27 2018-06-01 华中科技大学 一种生物组织光透明剂、光透明化方法及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GENINA, ELINA A. ET AL: "Integrated effects of fractional laser microablation and sonophoresis on skin immersion optical clearing in vivo.", JOURNAL OF BIOPHOTONICS, vol. 13, pages 86 - 88 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113218741A (zh) * 2021-04-29 2021-08-06 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 组织透明化试剂盒和方法
CN113218741B (zh) * 2021-04-29 2022-03-22 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 组织透明化试剂盒和方法
CN113781848A (zh) * 2021-08-14 2021-12-10 西安电子科技大学 一种基于智能手机的光学投影断层成像装置、系统及方法
WO2024089224A1 (fr) * 2022-10-26 2024-05-02 Centre National De La Recherche Scientifique Composition et procede de transparisation d'echantillons biologiques
FR3141523A1 (fr) * 2022-10-26 2024-05-03 Centre National De La Recherche Scientifique Composition et procédé de transparisation d’échantillons biologiques

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