CN1124478C - 生物组织切片包埋剂 - Google Patents

Abstract

本发明属生物技术检测领域，具体涉及一种生物组织切片包埋剂。本发明提供了一种生物组织切片塑料包埋剂，采用乙二醇丙烯酸酯类化合物和醇类有机溶剂等化合物配制成，能在4℃-20℃下进行切片制作，切片能清楚的观察到细胞结构和细胞的贮铁情况。本发明取材方便，操作简便，在进行生物组织包埋时不产生热量，不破坏、遮蔽细胞蛋白质和核酸，可以直接对切片进行免疫酶标检测，完善了血液病诊断的“涂片+切片+免疫组化”的“金标准”，为血液病的诊断和判断预后提供了技术保证。

Description

生物组织切片包埋剂

技术领域

本发明属生物技术检测领域，具体涉及一种生物组织切片包埋剂。

背景技术

恶性血液病是严重危害人类健康的疾病，血液病的诊断分型主要靠病理诊断，通过病理切片对恶性血液病进行诊断分型及预后判断，病理切片的质量对血液病的正确诊断分型有着直接的影响。质量高的病理切片有利于对血液病进行正确的判断，指导医师对病人进行正确的治疗。长久以来，国内外均以传统的石蜡包埋剂进行包埋切片，自70年代开始国外将塑料包埋剂应用于生物学、微生物学以及医学科研等诸方面，并开始将其用于部分血液病病理学研究中。传统的石蜡包埋剂进行包埋时由于石蜡可使细胞收缩，且进行切片前须经脱钙处理，无法准确观察病理标本的内部结构和细胞贮铁情况。尤其对于骨髓标本的包埋效果很不理想。因此，研制一种能有效制作骨髓等血液样本的病理切片的包埋剂成为血液病病理学研究的重大问题。水溶性丙烯酸酯类包埋剂聚合后具有良好的切割性能，不需脱去包埋剂即可进行各种组织化学染色及酶组化、免疫组化等反应，全部制片可在4℃或室温进行，目前应用较多的是乙二醇丙烯酸酯(GMA)包埋剂。塑料包埋剂的应用使血液病的诊断和预后判断准确性大大提高，但在包埋过程中塑料包埋剂在聚合时产生热量，会遮蔽、破坏细胞内蛋白质及核酸成分，使之无法完全的保存；同时，生物切片无法直接进行免疫酶标等组化检测。因此，如何提供一种能在包埋时有效保存细胞内蛋白质及核酸成分，并直接进行免疫组化检测的包埋剂成为血液病病理学研究的热点问题之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种能使血液切片中细胞结构清楚显示，能准确观察切片细胞内部结构和贮铁情况、而且包埋过程中不产热、不影响细胞蛋白质及核酸成分，并能在制作切片后直接做免疫组化检测的生物组织切片包埋剂。

为实现本发明和达到上述目的，本发明采用如下方案来配制。本发明生物组织切片包埋剂(以下简称Hemapun865、Hemapun948、Hemapun959)由包埋剂(也称甲液)和促进剂(也称乙液)分别按一定比例配制而成。

本发明生物组织切片包埋剂采用乙二醇丙烯酸酯类化合物、聚乙二醇类化合物或二乙二醇丁醚或2-丁氧乙醇、苯甲酰类化合物、苯甲胺类化合物配制甲液，配制时可按需要选取上述化合物中的3种或4种按一定配比配制而成。

本发明生物组织切片包埋剂采用醇类有机溶剂和苯甲胺类化合物，按一定配比配制成乙液。

本发明甲液采用的乙二醇丙烯酸酯类化合物为甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯单体(日本东京工业株式会社生产)，聚乙二醇类化合物为聚乙二醇(上海化学试剂公司生产)或二乙二醇丁醚(市售)或2-丁氧乙醇(市售)，苯甲酰类化合物为过氧化苯甲酰(上海化学试剂公司)。乙液采用的聚乙二醇类化合物为聚乙二醇(上海化学试剂公司生产)，苯甲胺类化合物为N-N二甲基苯甲胺(新丰化工厂生产)。

本发明生物组织切片包埋剂制备步骤是：

1、制备包埋剂(甲液)：

甲液按如下操作方法配制：用乙二醇丙烯酸酯类化合物溶剂80-100ml充分溶解苯甲酰类化合物0.6-1.2g后，加入聚乙二醇类化合物5-8ml或二乙二醇丁醚1.2-1.6ml或2-丁氧乙醇1.2-1.6ml和苯甲胺类化合物1.5-2.5ml，充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

2、制备促进剂(乙液)：

乙液按如下操作方法配制：将醇类有机溶剂8-12ml和苯甲胺类化合物0.6-1.0ml按一定配比12∶1-15∶1混合溶解，充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

3、制备本发明包埋剂：

用本发明对生物组织切片进行包埋时，先将生物组织按常规固定方法脱水处理完毕，将组织浸没于甲液中，充分浸泡1-2小时后，滴入乙液0.02-0.04ml，然后置于4℃冷藏，待其形成聚合物，取出进行切片。甲液乙液聚合反应适合温度为室温或低温条件，反应时间为1-5小时。

本发明甲液各组分的用量一般为：

乙二醇丙烯酸酯类化合物溶剂80-90ml、苯甲酰类化合物0.6-0.8g、聚乙二醇类化合物5.5-6.5ml或二乙二醇丁醚1.2-1.4ml或2-丁氧乙醇1.2-1.4ml、苯甲胺类化合物1.9-2.1ml。

乙液各组分的一般用量为：

醇类有机溶剂8-12ml和苯甲胺类化合物0.6-1.0ml。

本发明甲液各组分的最适宜用量是：乙二醇丙烯酸酯类化合物溶剂84ml、苯甲酰类化合物0.6g、聚乙二醇类化合物6ml或二乙二醇丁醚或2-丁氧乙醇1.2ml、苯甲胺类化合物2ml。

乙液各组分的最适宜用量为：醇类有机溶剂10ml和苯甲胺类化合物0.8ml。

具体实施方式

实施例1(Hemapun865)：

甲液配制：取甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯单体84ml，将过氧化苯甲酰0.6g充分溶解，加入聚乙二醇6ml充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

乙液配制：取聚乙二醇10ml和N-N二甲基苯甲胺0.8ml，将二者充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

包埋时，将生物组织按常规固定方法脱水处理完毕，将组织浸没于甲液中，充分浸泡2小时后，滴入乙液0.03ml，然后置于普通冰箱4℃冷藏3小时后，即可取出进行切片。

实施例2(Hemapun948)：

甲液配制：取甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯单体84ml，将将过氧化苯甲酰0.6g充分溶解，加入二乙二醇丁醚或2-丁氧乙醇1.2ml，充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

乙液配制：取聚乙二醇10ml和N-N二甲基苯甲胺0.8ml，将二者充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

包埋时，将生物组织按常规固定方法脱水处理完毕，将组织浸没于甲液中，充分浸泡2小时后，滴入乙液0.02ml，然后置于简易真空环境、4℃放置2小时后，即可取出进行切片。

实施例3(Hemapun959)：

甲液配制：取甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯单体84ml，将将过氧化苯甲酰0.6g充分溶解，加入聚乙二醇6ml和N-N二甲基苯甲胺2ml，充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

乙液配制：取聚乙二醇10ml和N-N二甲基苯甲胺0.8ml，将二者充分摇匀，置棕色玻瓶于4℃避光保存。

包埋时，将生物组织按常规固定方法脱水处理完毕，将组织浸没于甲液中，充分浸泡2小时后，滴入乙液0.02ml，然后置于-10℃冷藏5小时后，即可取出进行切片。

本发明生物组织切片包埋剂(Hemapun865、Hemapun948和Hemapun959)经临床检验实际应用，证实用本发明所制作的生物组织切片可以清楚地观察到生物组织细胞的内部结构和贮铁的存在。其中Hemapun948和Hemapun959在进行生物切片包埋过程中，不会产热和遮蔽组织蛋白质、核酸，制成的切片可以直接进行免疫酶标检测，完善了血液病诊断的“涂片+切片+免疫组化”的“金标准”，使血液病的诊断和判断预后更加完善。

附图说明

图1是本发明(Hemapun865)包埋切片急性髓细胞性白血病(M2)，HE染色，放大倍数10×40，白血病细胞内结构显示清晰。

图2是本发明包埋切片，Gomori染色，放大倍数10×10，清晰显示网状纤维蛋白的网络样结构。

图3、4、5、6是本发明(Hemapun948)包埋切片进行免疫组化染色，能清晰显示阳性反应。

其中：图3为CD41，放大倍数10×40，APAAP法，巨核细胞(+)

      图4为血红糖蛋白A，放大倍数10×40，血红糖蛋白A阳性

图5为CD33，放大倍数10×40，APAAP法，髓系细胞阳性

图6为CD13，放大倍数10×40，APAAP法，髓系细胞阳性

Claims (5)

1、一种生物组织切片包埋剂，含有包埋剂和促进剂，其特征在于所述包埋剂采用下述组分和用量：

乙二醇丙烯酸酯类化合物80-100ml

聚乙二醇类化合物5-8ml或二乙二醇丁醚1.2-1.6ml或2-丁

氧乙醇1.2-1.6ml

苯甲酰类化合物0.6-1.2g

苯甲胺类化合物1.5-2.5ml，所述促进剂采用下述组分和用量：

醇类有机溶剂8-12ml

苯甲胺类化合物0.6-1.0ml。

2、按权利要求1所述的生物组织切片包埋剂，其特征在于所述包埋剂组分用量为：

乙二醇丙烯酸酯类化合物80-90ml

聚乙二醇类化合物5.5-6.5ml或二乙二醇丁醚1.2-1.4ml或

2-丁氧乙醇1.2-1.4ml

苯甲酰类化合物0.6-0.8g

苯甲胺类化合物1.9-2.1ml。

3、按权利要求1所述的生物组织切片包埋剂，其特征在于所述包埋剂组分用量为：

乙二醇丙烯酸酯类化合物84ml

聚乙二醇类化合物6ml或二乙二醇丁醚1.2ml或2-丁氧乙醇

1.2ml

苯甲酰类化合物0.6g

苯甲胺类化合物2ml。

4、按权利要求1所述的生物组织切片包埋剂，其特征在于所述促进剂组分用量为：

醇类有机溶剂9-11ml

苯甲胺类化合物0.7-0.9ml。

5、按权利要求1所述的生物组织切片包埋剂，其特征在于所述促进剂组分用量为：

醇类有机溶剂10ml

苯甲胺类化合物0.8ml。

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