CN112439060A - Pd-l1免疫疗法的新用途 - Google Patents

Abstract

本公开涉及PD‑L1免疫疗法的新用途。具体而言，提供了PD‑L1抗体联合CD40抗体在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途。该方案的展现较优的疾病控制率和客观响应率，体现联合用药的协同效应。

Description

PD-L1免疫疗法的新用途

技术领域

本公开属于医药领域，涉及PD-L1免疫疗法的新用途。

背景技术

免疫调控性抗体提供一种治疗办法且可用于直接强化抗肿瘤免疫应答或可用作抗癌疫苗的佐剂(Melero,I.,et al.Nat Rev Cancer 7,2007,95-106)。CD40是细胞表面表达的糖蛋白之一，属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族，并在免疫系统中起重要作用。CD40表达发生在包括B淋巴细胞在内的许多正常细胞和肿瘤细胞中。例如黑色素瘤即属于具有CD40表达的肿瘤，而30％至70％的实体肿瘤也具有CD40表达。目前已知CD40的激活可有效触发抗肿瘤反应(Tong等人，Cancer Gene Therapy,2003，10:1-13)，包括肿瘤特异性T细胞反应的免疫激活、对CD40阳性肿瘤直接的细胞凋亡作用，以及剌激导致ADCC的体液反应，且观察到的肿瘤根除与肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的出现强烈相关。同时也不应被忽视的是，全身施用CD40抗体与副作用相关，如休克综合征和细胞因子释放综合征(van Mierlo等人，Proc.Nat1.Acad.Sci.USA,2002,99:5561-5566)。

目前有多家国际制药公司在研发如上述针对CD40的单克隆抗体，它通过特异性刺激免疫激活，最大限度提高患者自身对肿瘤的免疫系统反应，从而达到对肿瘤细胞进行杀伤的目的。相关专利如CN1198647、CN1369015、CN1582165、CN100430419、CN101014386、CN101237882、CN101289510、CN101490086、CN103842382、CN104918957、WO2002028904、WO2011123489、WO2012149356、WO2013034904、WO2015091853、WO2016196314、WO2017040932、WO2017004006等。迄今为止，辉瑞(相关产品已许可给罗氏)、Alligator等公司的抗CD40抗体均在临床前动物模型中观测到了良好的肿瘤杀伤效果。同时，WO2018219327提供有着高亲和力，高选择性，高生物活性的抗CD40抗体，用于通过刺激CD40抗体。

PD-1(程序性死亡受体1)抗体可以特异性识别并结合淋巴细胞表面PD-1，阻断PD-1/PD-L1信号通路，进而激活T细胞对肿瘤的免疫杀伤作用，调动机体免疫系统而清除体内肿瘤细胞。PD-1有两个配体PD-L1和PD-L2，其中PD-L1主要表达于T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞(dendritic cell,DC)上，在活化后细胞上的表达能够进行上调。研究表明很多肿瘤细胞及肿瘤组织微环境的免疫细胞表达PD-L1。由于PD-L1起到第二信号通路抑制T细胞增殖的作用，所以阻断PD-L1/PD-1之间结合成为了肿瘤免疫治疗领域一个非常有潜力的新兴靶点。

目前已公开了一系列抗PD-L1抗体，其中，CN107614529A公开了一系列PD-L1抗体，能够有效地提高抑治肿瘤发生和发展的效果。

本公开提供了一种PD-L1抗体联合CD40抗体在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途，并显示了良好的协同作用和抑瘤效果。

发明内容

本公开(The disclosure)提供了一种PD-L1抗体或抗原结合片段联合CD40抗体或抗原结合片段在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途。

在一些实施方案中，所述PD-L1抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含分别如SEQID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3所述的PD-1抗体或抗原结合片段的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

在一些实施方案中，所述PD-L1抗体或抗原结合片段轻重链中CDR序列如下表所示：

在一些实施方案中，所述PD-L1抗体或抗原结合片段包含和氨基酸序列：SEQ IDNO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列一致性的轻链可变区CDR序列，和氨基酸序列：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列一致性的重链可变区CDR序列。

进一步地，所述PD-L1抗体或抗原结合片段可选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，人抗体，优选人源化抗体。

在一些实施方案中，所述用途中所述PD-L1抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：7所示的重链可变区或其变体，和SEQ ID NO：8所示的轻链可变区或其变体。

在一些实施方案中，所述PD-L1抗体或抗原结合片段包含和氨基酸序列SEQ IDNO：7具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列一致性的重链可变区序列，和氨基酸序列SEQ ID NO：8具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列一致性的轻链可变区序列。

在某些实施方式中，所述的PD-L1抗体或抗原结合片段进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG2或IgG4重链恒定区，更优选包含引入F234A和L235A突变的IgG4重链恒定区；所述人源化抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的恒定区。

在某些实施方式中，所述PD-L1抗体或抗原结合片段包含和氨基酸序列SEQ IDNO：9具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列一致性的重链可变区序列，和氨基酸序列SEQ ID NO：11具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列一致性的轻链序列。

在某些实施方式中，所述的PD-L1抗体或抗原结合片段的重链序列为SEQ ID NO：9，和轻链序列为SEQ ID NO：11。

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO：7

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIK

SEQ ID NO：8

注：序列中斜体为FR序列；下划线为CDR序列。

重链序列

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVT MTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO：9

重链序列编码基因序列

CAGGTGCAACTGGTGCAGAGCGGTGCCGAGGTGAAGAAGCCTGGCGCAAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAG GCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGG CAGGATCGGGCCCAACAGTGGTTTCACTAGCTACAATGAAAAGTTCAAGAACAGGGTAACCATGACCAGGGACACCT CCACCAGCACAGTGTATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGGCGGC AGCAGCTACGACTACTTCGACTATTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGAGCAGTGCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGGCTGCTGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA

SEQ ID NO：10

轻链序列

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGS GSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQSFEDPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO：11

轻链序列编码基因序列：

GACATCGTGCTGACCCAGAGTCCCGCCTCACTTGCCGTGAGCCCCGGTCAGAGGGCCACCATCACCTGT AGGGCCAGCGAGAGCGTGAGCATCCACGGCACCCACCTGATGCACTGGTATCAACAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAA ACTGCTGATCTACGCCGCCAGCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCCGCCAGGTTCAGCGGCTCCGGCAGCGGCACCGACT TCACCCTCACTATCAACCCCGTGGAGGCCGAGGACACCGCCAACTACTACTGCCAGCAGAGCTTCGAGGACCCCCTG ACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA

SEQ ID NO：12

本公开用途中PD-L1抗体或抗原结合片段与CD40抗体或抗原结合片段顺序或同时施用。

本公开用途中PD-L1抗体或抗原结合片段与CD40抗体或抗原结合片段是静脉或皮下施用的。

另一方面，本公开用途中所述CD40抗体或抗原结合片段具有分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

名称	序列	编号
			HCDR1	GYILTTYWIT	SEQID NO：13
HCDR2	DIHPGSGSTKYNEKFKS	SEQID NO：14
			HCDR3	RDY	SEQID NO：15
LCDR1	RSSQNIVNSQGNTYLE	SEQID NO：16
			LCDR2	KVTNRFS	SEQID NO：17
LCDR3	FQASLVPWT	SEQID NO：18

在一些实施方案中，所述CD40抗体或抗原结合片段可选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，人抗体，优选人源化抗体。

在一些实施方案中，用途中所述CD40抗体或其抗原结合片段具有如SEQ ID NO:19所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区。

QVQLQQPGADLVKPGASVKMSCKASGYILTTYWITWVKQRPGQGLEWIGDIHPGSGSTKYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQLTRLSSEDSAVYYCARRDYWGQGTTLTVSS

SEQ ID NO：19

DVLMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGESPKLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASLVPWTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO：20

在可选实施方案中，药物组合物中所述的人源化CD40抗体轻链和重链可变区上的轻链和重链FR区序列分别来源于人种系轻链和重链或其突变序列。

进一步地，所述人源化CD40抗体重链序列为如SEQ ID NO:22所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为氨基酸位点在6和8的突变，突变后的氨基酸优选为I、A或L；所述人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:21所示的序列或其变体，所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为氨基酸位点在2和3的突变，突变后的氨基酸优选为I、V或L。

在可选实施方案中，所述人源化CD40抗体重链可变区进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链FR区，优选包含人源IgG1、IgG2或IgG4重链FR区，更优选包含人源IgG1或IgG2重链FR区。

在可选的实施方案中，药物组合物中所述CD40抗体的轻链与如SEQ ID NO：21所示轻链氨基酸序列具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同一性，所述CD40抗体的重链氨基酸序列与如SEQ IDNO：22所示重链氨基酸序列具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同一性。

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYILTTYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGSGSTKYNEKFKSRVTLTVDTSISTAYMELSRLRSEDTAVYYCARRDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO：22

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASLVPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO：21

本公开中所述PD-L1抗体或抗原结合片段联合CD40抗体或抗原结合片段在制备治疗肿瘤疾病的药物用途中，根据金氏公式计算Q值>1.15，展现药物的协同作用。

根据疾病的类型和严重性，所述PD-L1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中中的施用剂量(按患者体重给药)为1-50mg/kg，优选自1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg、32mg/kg、33mg/kg、34mg/kg、35mg/kg、36mg/kg、37mg/kg、38mg/kg、39mg/kg、40mg/kg、42mg/kg、45mg/kg、47mg/kg、50mg/kg，更优选1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或两数值之间任意数值。

在一些实施方案汇总，所述PD-L1抗体或抗原结合片段剂量选自50-3000mg，优选自50mg、60mg、70mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、375mg、400mg、425mg、450mg、475mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg、2000mg、2050mg、2100mg、2150mg、2200mg、2250mg、2300mg、2350mg、2400mg、2450mg、2500mg、2550mg、2600mg、2650mg、2700mg、2750mg、2800mg、2850mg、2900mg、2950mg、3000mg或两数值之间任意数值剂量值。

在另一些实施方案中，所述CD40抗体或抗原结合片段在人类受试者中中的施用剂量(按患者体重给药)0.1～10.0mg/kg，可以为0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.2mg/kg、1.4mg/kg、1.6mg/kg、1.8mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg、2.4mg/kg、2.6mg/kg、2.8mg/kg、3.0mg/kg、3.2mg/kg、3.4mg/kg、3.6mg/kg、3.8mg/kg、4.0mg/kg、4.2mg/kg、4.4mg/kg、4.6mg/kg、4.8mg/kg、5.0mg/kg、5.2mg/kg、5.4mg/kg、5.6mg/kg、5.8mg/kg、6.0mg/kg、6.2mg/kg、6.4mg/kg、6.6mg/kg、6.8mg/kg、7.0mg/kg、7.2mg/kg、7.4mg/kg、7.6mg/kg、7.8mg/kg、8.0mg/kg、8.2mg/kg、8.4mg/kg、8.6mg/kg、8.8mg/kg、9.0mg/kg、9.2mg/kg、9.4mg/kg、9.6mg/kg、9.8mg/kg、10.0mg/kg或两数值之间任意数值。

在一些实施方案中，所述CD40抗体或抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为0.1-40mg，可以为0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg、3.0mg、3.1mg、3.2mg、3.3mg、3.4mg、3.5mg、3.6mg、3.7mg、3.8mg、3.9mg、4.0mg、4.1mg、4.2mg、4.3mg、4.4mg、4.5mg、4.6mg、4.7mg、4.8mg、4.9mg、5.0mg、5.1mg、5.2mg、5.3mg、5.4mg、5.5mg、5.6mg、5.7mg、5.8mg、5.9mg、6.0mg、6.1mg、6.2mg、6.3mg、6.4mg、6.5mg、6.6mg、6.7mg、6.8mg、6.9mg、7.0mg、7.1mg、7.2mg、7.3mg、7.4mg、7.5mg、7.6mg、7.7mg、7.8mg、7.9mg、8.0mg、8.1mg、8.2mg、8.3mg、8.4mg、8.5mg、8.6mg、8.7mg、8.8mg、8.9mg、9.0mg、9.1mg、9.2mg、9.3mg、9.4mg、9.5mg、9.6mg、9.7mg、9.8mg、9.9mg、10.0mg、10.1mg、10.2mg、10.3mg、10.4mg、10.5mg、10.6mg、10.7mg、10.8mg、10.9mg、11.0mg、11.1mg、11.2mg、11.3mg、11.4mg、11.5mg、11.6mg、11.7mg、11.8mg、11.9mg、12.0mg、12.1mg、12.2mg、12.3mg、12.4mg、12.5mg、12.6mg、12.7mg、12.8mg、12.9mg、13.0mg、13.1mg、13.2mg、13.3mg、13.4mg、13.5mg、13.6mg、13.7mg、13.8mg、13.9mg、14.0mg、14.1mg、14.2mg、14.3mg、14.4mg、14.5mg、14.6mg、14.7mg、14.8mg、14.9mg、15.0mg、15.1mg、15.2mg、15.3mg、15.4mg、15.5mg、15.6mg、15.7mg、15.8mg、15.9mg、16.0mg、16.1mg、16.2mg、16.3mg、16.4mg、16.5mg、16.6mg、16.7mg、16.8mg、16.9mg、17.0mg、17.1mg、17.2mg、17.3mg、17.4mg、17.5mg、17.6mg、17.7mg、17.8mg、17.9mg、18.0mg、18.1mg、18.2mg、18.3mg、18.4mg、18.5mg、18.6mg、18.7mg、18.8mg、18.9mg、19.0mg、19.1mg、19.2mg、19.3mg、19.4mg、19.5mg、19.6mg、19.7mg、19.8mg、19.9mg、20.0mg、20.1mg、20.2mg、20.3mg、20.4mg、20.5mg、20.6mg、20.7mg、20.8mg、20.9mg、21.0mg、21.1mg、21.2mg、21.3mg、21.4mg、21.5mg、21.6mg、21.7mg、21.8mg、21.9mg、22.0mg、22.1mg、22.2mg、22.3mg、22.4mg、22.5mg、22.6mg、22.7mg、22.8mg、22.9mg、23.0mg、23.1mg、23.2mg、23.3mg、23.4mg、23.5mg、23.6mg、23.7mg、23.8mg、23.9mg、24.0mg、24.1mg、24.2mg、24.3mg、24.4mg、24.5mg、24.6mg、24.7mg、24.8mg、24.9mg、25.0mg、25.1mg、25.2mg、25.3mg、25.4mg、25.5mg、25.6mg、25.7mg、25.8mg、25.9mg、26.0mg、26.1mg、26.2mg、26.3mg、26.4mg、26.5mg、26.6mg、26.7mg、26.8mg、26.9mg、27.0mg、27.1mg、27.2mg、27.3mg、27.4mg、27.5mg、27.6mg、27.7mg、27.8mg、27.9mg、28.0mg、28.1mg、28.2mg、28.3mg、28.4mg、28.5mg、28.6mg、28.7mg、28.8mg、28.9mg、29.0mg、29.1mg、29.2mg、29.3mg、29.4mg、29.5mg、29.6mg、29.7mg、29.8mg、29.9mg、30.0mg、30.1mg、30.2mg、30.3mg、30.4mg、30.5mg、30.6mg、30.7mg、30.8mg、30.9mg、31.0mg、31.1mg、31.2mg、31.3mg、31.4mg、31.5mg、31.6mg、31.7mg、31.8mg、31.9mg、32.0mg、32.1mg、32.2mg、32.3mg、32.4mg、32.5mg、32.6mg、32.7mg、32.8mg、32.9mg、33.0mg、33.1mg、33.2mg、33.3mg、33.4mg、33.5mg、33.6mg、33.7mg、33.8mg、33.9mg、34.0mg、34.1mg、34.2mg、34.3mg、34.4mg、34.5mg、34.6mg、34.7mg、34.8mg、34.9mg、35.0mg、35.1mg、35.2mg、35.3mg、35.4mg、35.5mg、35.6mg、35.7mg、35.8mg、35.9mg、36.0mg、36.1mg、36.2mg、36.3mg、36.4mg、36.5mg、36.6mg、36.7mg、36.8mg、36.9mg、37.0mg、37.1mg、37.2mg、37.3mg、37.4mg、37.5mg、37.6mg、37.7mg、37.8mg、37.9mg、38.0mg、38.1mg、38.2mg、38.3mg、38.4mg、38.5mg、38.6mg、38.7mg、38.8mg、38.9mg、39.0mg、39.1mg、39.2mg、39.3mg、39.4mg、39.5mg、39.6mg、39.7mg、39.8mg、39.9mg、40.0或两数值之间任意数值，优选1-20mg。

在本公开中的用途中所述肿瘤示例选自但不限于乳腺癌(如三阴性乳腺癌)、肺癌、胃癌、结直肠癌(如直肠癌、结直肠癌)、肾癌(如肾细胞癌)、肝癌(如肝细胞癌)、黑素瘤(如转移性黑色瘤)、非小细胞肺癌、胰腺癌、实体瘤、淋巴癌(如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤)，优选为非小细胞肺癌、乳腺癌、黑素瘤、淋巴癌(如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤)或肾癌。

在另一些实施方案中，所述PD-L1抗体或其抗原结合片段的给药频为一天一次、两天一次、三天一次、四天一次、五天一次、六天一次、一周一次、二周一次、三周一次、四周一次或一月一次，优选二周一次或三周一次。

在一些实施方案中，所述CD40抗体或其抗原结合片段的给药频为一天一次、两天一次、三天一次、四天一次、五天一次、六天一次、一周一次、二周一次、三周一次、四周一次或一月一次，优选二周一次或三周一次。

在一些实施方案中，所述PD-L1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量50-3000mg，每2-3周一次。在一些实施方案中，所述PD-L1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量600mg，每2-3周一次，静脉注射。

在一些实施方案中，所述CD40抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量1-20mg，每2-3周一次。

在一些实施方案中，PD-L1抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量50-3000mg，每2-3周一次；所述CD40抗体或其抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量1-20mg，每2-3周一次。

本公开还提供了一种预防或治疗肿瘤疾病的方法，包括给予肿瘤患者有效治疗量的抗PD-L1抗体或抗原结合片段和CD40抗体或抗原结合片段。

本公开另一方面还提供了一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合，其包含有效治疗量的抗PD-L1抗体或抗原结合片段和/或CD40抗体或抗原结合片段。

本公开所述的方案中，所述的联合任选的还包含其他组分，所述其他组分包括但不限于其他抗肿瘤药等。

在一些实施方案中，本公开用途中进一步包含细胞因子抑制剂，所述细胞因子抑制剂选TNFa抗体

本公开还涉及一种包含PD-L1抗体或抗原结合片段和CD40抗体或抗原结合片段，以及一种或多种药用载体、赋形剂、稀释剂的药物组合物。所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。例如，可以配制为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、栓剂、吸入剂或喷雾剂。在一些实施方案中，所述组合物可以可以单独给药，或者与一种或多种治疗剂联合使用，如细胞因子抑制剂，所述细胞因子抑制剂选TNFa抗体。

另一方面，本公开所述PD-L1抗体或抗原结合片段与CD40抗体或抗原结合片段联用减少药物不良反应的药物，优选地，所述药物不良反应选自由PD-L1抗体或抗原结合片段和CD40抗体或抗原结合片段引起。

本公开所述PD-L1抗体或抗原结合片段联合CD40抗体或抗原结合片段作为降低抗PD-1抗体单独施用剂量和/或法米替尼或其可药用盐单独施用剂量的药物。在一些实施方案中，与PD-L1抗体或抗原结合片段联合使用时，所述CD40抗体或抗原结合片段的施用量为单独施用剂量的10％～100％，优选10％～75％，更优选75％、50％、25％、12.5％。在一些实施方案中，与CD40抗体或抗原结合片段联合使用时，所述PD-L1抗体或抗原结合片段的施用量为单独施用剂量的10％～100％，优选10％～75％，更优选75％、50％、25％、12.5％。

如无相反解释，本公开中术语具有如下含义：

人与动物对同一药物的耐受性相差较大，一般来说，动物的耐受性要比人大。一般可按下列比例换算：人用药量为1，小白鼠、大白鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-10。此外，可以采用人与动物表面积计算法来换算，1)人体表面积计算法，一般认为如许文氏公式(中国生理学杂志，12,327,1937)、Mech-Rubner氏公式。上述方法可适用于本公开中人与不同种类动物之间药物剂量的换算。

本披露关于“联合”或“联用”是一种给药方式，是指在一定时间期限内给予至少一种剂量的PD-L1抗体或抗原结合片段和至少一种剂量的CD40抗体或抗原结合片段，其中两种物质都显示药理学作用。所述的时间期限可以是一个给药周期内，优选4周内，3周内，2周内，1周内，或24小时以内，更优选12小时以内。可以同时或依次给予PD-L1抗体或抗原结合片段和CD40抗体或抗原结合片段。这种期限包括这样的治疗，其中通过相同给药途径或不同给药途径给予PD-L1抗体或抗原结合片段和CD40抗体或抗原结合片段。本申请所述联合的给药方式选自同时给药、独立地配制并共给药或独立地配制并相继给药。

本披露中所述“有效量”或“有效治疗量”包含足以改善或预防医学病症的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：如待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。

本公开的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，优选人源化抗体。

术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的对人PD-L1的单克隆抗体。制备时用PD-L1抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。在本公开一个实施方案中，所述的鼠源PD-L1抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或其变体的重链恒定区。

术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。在本公开一个实施方案中，所述的PD-L1嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的PD-L1嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区。人抗体的恒定区可选自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变后无ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用)毒性的IgG4。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。本公开的人源化抗体也包括进一步由噬菌体展示对CDR进行亲和力成熟后的人源化抗体。

本公开中所述的“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab‘片段，F(ab’)2片段，以及与人PD-L1结合的Fv片段ScFv片段；其包含本公开所述抗体的选自SEQ IDNO:1至SEQ ID NO:12中的一个或多个CDR区。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chain antibody)或单链Fv(sFv)。本公开的术语“与PD-L1结合”，指能与人PD-L1相互作用。本公开的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本公开抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

本披露中所述“治疗失败”是指受试者在基线时伴有可测量的前例腺癌病灶，根据RECIST 1.1疗效评定标准为疾病进展(PD)、毒性不可耐受或研究者判断受试者不能继续临床获益，或根据前列腺癌评价标准PCWG3，大于等于2个新发骨病灶被认为疾病进展(PD)。

本披露中所述“毒性不可耐受”是指因药物引起的不良反应不能继续接受治疗。

无进展生存期(PFS)：从随机开始到首次记录前例腺癌客观进展日期或到任何原因导致死亡的时间，以先出现者为准。

总生存期(OS)指从随机期至任何原因导致死亡的期。末次随访时仍存活的受试者，其OS以末次随访时间计为数据删失。失访的受试者，其OS以失访前末次证实存活时间计为数据删失。数据删失的OS定义为从随机分组到删失的时间。

客观缓解率(Objective response rate，ORR)指肿瘤缩小达到一定并且保持一定时间的病人的比例，包含了CR和PR的病例。采用实体瘤缓解评估标准(RECIST 1.1标准)来评定肿瘤客观缓解。受试者在基线时必须伴有可测量的肿瘤病灶，疗效评定标准根据RECIST 1.1标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD)。

缓解持续时间(DoR)：首次PR或者CR至首次PD或者死亡的时间。

疾病控制率(Disease Control Rate，DCR)指经确认的完全缓解、部分缓解和疾病稳定(≥8周)病例数在可评价疗效患者中的百分比。

靶病灶评估

完全缓解(CR)：所有靶病灶消失，全部病理淋巴结(包括靶结节和非靶结节)短直径必须减少至＜10mm。

部分缓解(PR)：靶病灶直径之和比基线水平减少至少30％。

疾病进展(PD)：以整个实验研究过程中所有测量的靶病灶直径之和的最小值为参照，直径和相对增加至少20％(如果基线测量值最小就以基线值为参照)；除此之外，必须满足直径和的绝对值增加至少5mm(出现一个或多个新病灶也视为疾病进展)。

疾病稳定(SD)：靶病灶减小的程度没达到PR，增加的程度也没达到PD水平，介于两者之间，研究时可以直径之和的最小值作为参考。

非靶病灶的评估

完全缓解(CR)：所有非靶病灶消失，且肿瘤标记物恢复至正常水平。所有淋巴结为非病理尺寸(短径＜10mm)。

非完全缓解/非疾病进展：存在一个或多个非靶病灶和/或持续存在肿瘤标记物水平超出正常水平。

疾病进展：已存在的非靶病灶出现明确进展。注：出现一个或多个新病灶也被视为疾病进展。

本研究显著毒性定义为在DLT观察期内发生的与研究药物相关的下述任一事件(分级标准参照NCI CTCAE 5.0)

(1)非血液学毒性：III/IV度非血液学毒性(胃肠道毒性(如恶心呕吐)及电解质紊乱须为最佳治疗后仍持续为III/IV度，但不包括：脱发；具有确定原因的发热，如肿瘤或感染；肿瘤骨转移引起的疼痛；碱性磷酸酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶或脂肪酶升高但不伴有相关显著临床症状等)；II度及以上心功能不全、肾功能损害、神经毒性；

(2)血液学毒性：IV度血液学毒性，如IV度的中性粒细胞减少、贫血、血小板减少等，或III度中性粒细胞减少伴≧38℃发热、III度血小板减少伴明显的临床出血倾向。

附图说明

图1：各组平均肿瘤生长曲线

图2：各组个体肿瘤生长曲线

图3：各组的肿瘤重量分布

图4：人源化T/DC/A375荷瘤小鼠体重变化曲线

图5：人源化T/DC/A375荷瘤小鼠体重相对变化曲线

具体实施方式

实施例1

1.实验目的

评价CD抗体或和PD-L1抗体联用在人源化T/DC/A375混合接种皮下移植瘤模型中的抗肿瘤作用。

2.实验材料

2.1细胞株

A375人黑色素瘤细胞，培养于含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养液中。

2.2实验动物

2.2.1实验动物来源

24只NCG小鼠，雌性，6-8周，体重约18-22g。购自江苏集萃药康生物科技有限公司。动物合格证号：201902773。实验动物使用许可证号：SYXK(沪)2015-0015。饲养环境：SPF级。在正式实验前，适应性饲养3天。

2.2.2实验动物饲养

所有的NCG小鼠饲养于SPF级动物房IVC恒温恒压系统中，其中温度20～26℃，湿度40～70％，光照周期12小时明12小时暗。每个笼盒内饲养不多于6只NCG小鼠，笼盒大小为325mm×210mm×180mm，笼盒内使用垫料为玉米芯，每周更换两次。在整个实验过程中，所有实验小鼠均可以自由饮食，饲料和水均经过高压灭菌，每周更换2次。所有出入动物饲养室或实验操作人员均穿戴灭菌实验服、一次性医用口罩和橡胶手套。每只饲养笼均有对应的明确的详细标签，标签内容包括：IACUC批准号LDIACUC006、动物数目、性别、品系、接收日期、项目编号、组别、目前实验阶段和实验负责人等。

2.3受试药物

化合物A：PD-L1抗体，其抗体序列如SEQ ID NO：9所示的重链，和如SEQ ID NO：11所示的轻链。

化合物B：CD40抗体，其抗体序列如SEQ ID NO:21所示的轻链，和如SEQ ID NO:22所示的重链。

3.实验步骤与方法

3.1A375肿瘤细胞的培养

A375细胞培养在含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养液中。收集指数生长期的A375细胞，HBSS重悬至适合浓度用于NCG小鼠皮下肿瘤接种。共培养所用的A375细胞需经过Mitomycin C处理2h后，PBS洗三次。

3.2PBMC的分离以及与A375共培养

取正常人外周血，用密度梯度离心法分离人PBMC，收集的PBMC用CD14 microbeads分选单核细胞，加入含10ng/mL IL-4和100ng/mL GM-CSF的RPMI 1640培液培养6天，进行MoDC细胞的诱导培养。剩余的细胞加入含IL-2 10ng/mL的RPMI1640，加入经Mitomycin C处理的A375细胞中，共培养6天后，收集悬浮的PBMC细胞用于CD3+T细胞的分选。6天后收集MoDC细胞，并取部分用于CD209-PE染色，FACS分析是否成功诱导MoDC。

3.3A375肿瘤细胞和T细胞、MoDC细胞混合接种

收取CD3+T细胞，与MoDC细胞和A375细胞按5:1:50的比例，即CD3+T细胞4×105个，MoDC 8×104个，A375细胞4×106个，0.2mL/只(含50％Matrigel)，接种于雌性NCG小鼠皮下。接种后，根据小鼠体重采用随机分组设计进行分组，随机分配到4个实验组中，每组6只，分组当天开始给药，详细的给药方法、给药剂量和给药途径见表1，分组给药当天为第0天(D0)。

表1.实验设计

注：N：使用动物数量；i.p.：腹腔注射；给药体积：根据荷瘤鼠体重调整给药体积(0.1mL/10g)。

3.4受试药物配制

3.5实验观察

在整个实验过程中，对实验动物的使用和观察均按照AAALAC动物使用和管理的相关规定进行。实验动物在接种肿瘤细胞后，每天进行观察，记录其发病和死亡等。在按照常规实验过程中，对所有的实验动物进行行为、进食、进水、体重改变、毛发光泽和其他一些异常情况的监测和记录。

3.6评估指标

主要是检测受试药物化合物A和化合物B联用在人源化T/DC/A375混合接种皮下移植瘤小鼠模型中对肿瘤的生长抑制作用或完全治愈能力。

3.6.1肿瘤体积测量：使用游标卡尺每周两次测量，肿瘤体积计算公式为V＝0.5×a×b²，a，b分别代表肿瘤的长径和宽径。

3.6.2肿瘤生长抑制率TGI(％)＝(1-T/C)×100％。T/C％为肿瘤相对增殖率，T/C％＝T/C×100％，即在某一时间点，给药组和对照组的相对肿瘤体积的百分比值。T和C分别为给药组和对照组在某一特定时间点的肿瘤体积(TV)。

3.6.3联合给药组增效效应：金氏公式Q＝E(a+b)/[Ea+Eb-Ea×Eb]，Ea、Eb为单药TGI，E(a+b)为联合给药组TGI。Q值>1.15，表示药物联用具有协同作用。

3.6.4荷瘤鼠体重测量：所有荷瘤鼠体重每周测量两次。体重变化用公式RCBW％＝(BW_i–BW₀)/BW₀×100％，BW_i是小鼠当前体重，BW₀是分组当日的小鼠体重。

3.6.5当实验中个别荷瘤鼠出现极度消瘦濒临死亡或肿瘤体积达到2000mm3时，荷瘤鼠将被提前进行安乐死处理。实验结束后直接对所有小鼠实施安乐死，收集肿瘤并称重拍照。

3.7数据分析

所有数据均采用Mean±SEM表示，用Graphpad中student’s test比较给药组与对照组的组间差异以及联合给药组与单用组的组间差异。所有的数据均用Graphpad进行分析。P<0.05即认为具有显著性差异。

4.实验结果

给药后第23天，空白对照组平均肿瘤体积为752.11±95.37mm³；组1、组2以及组3的平均肿瘤体积分别为651.27±208.04mm³，329.40±121.37mm³和123.42±27.96mm³，其肿瘤生长抑制率分别为13.41％、56.20％和83.59％；空白对照组肿瘤平均重量为0.807±0.109g；组1、组2以及组3的肿瘤平均重量分别为0.751±0.253g、0.351±0.136g和0.144±0.040g。与空白对照组相比，组2、组2的肿瘤体积与肿瘤重量均存在显著性差异，表现出明显的抑制肿瘤生长的作用，且组3的肿瘤体积与肿瘤重量与组组1相比均存在显著性差异。此外，根据金氏公式计算所得Q值＝1.35，表明相比于组1和组2，组3表现出协同抗肿瘤作用(见图1-3、表2和表3)。

表2.对照组和各给药组肿瘤平均体积(Mean±SEM)

注：A：与空白对照组比较，B：与组3比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；Q＝E(a+b)/[Ea+Eb-Ea×Eb]，Ea、Eb为单药TGI，E(a+b)为联用组TGI,Q值>1.15表示药物联用具有协同作用。

表3.对照组和各给药组肿瘤平均重量(Mean±SEM)

注：A：与空白对照组比较，B：与组3比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；

另外，与空白对照组相比，各组小鼠平均体重未见明显变化，表明荷瘤小鼠对测试剂量的各受试药物具有良好的耐受性(见图2和表4)。

表4.对照组和各给药组体重变化情况(Mean±SEM)

5.实验结论

联合给药能显著抑制人源化T/DC/A375皮下移植瘤的生长，且与单药组相比，联合给药组表现出协同抗肿瘤作用；同时，荷瘤小鼠对各受试剂量下的药物均能良好耐受，两者联用未产生明显的毒性反应。

序列表

<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司

<120> PD-L1免疫疗法的新用途

<160> 22

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Ser Tyr Trp Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ile His Gly Thr His Leu Met His

1 5 10 15

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Gln Gln Ser Phe Glu Asp Pro Leu Thr

1 5

<210> 7

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ile His

20 25 30

Gly Thr His Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe

85 90 95

Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 10

<211> 1341

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Cys Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys

1 5 10 15

Ala Gly Ala Gly Cys Gly Gly Thr Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Thr

20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Cys Ala

35 40 45

Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala Ala Ala Gly Thr Gly Ala Gly Cys Thr

50 55 60

Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Thr Ala

65 70 75 80

Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys

85 90 95

Thr Gly Gly Ala Thr Gly Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Ala

100 105 110

Gly Gly Cys Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys Thr Gly Gly Ala Cys Ala

115 120 125

Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Gly

130 135 140

Gly Gly Cys Ala Gly Gly Ala Thr Cys Gly Gly Gly Cys Cys Cys Ala

145 150 155 160

Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Ala Cys Thr Ala Gly

165 170 175

Cys Thr Ala Cys Ala Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Gly Thr Thr Cys

180 185 190

Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Gly Gly Gly Thr Ala Ala Cys Cys Ala

195 200 205

Thr Gly Ala Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Cys Ala Cys Cys Thr Cys

210 215 220

Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys Ala Gly Thr Gly Thr Ala Thr

225 230 235 240

Ala Thr Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys

245 250 255

Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys

260 265 270

Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Thr Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Thr

275 280 285

Gly Cys Cys Ala Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Cys Ala Gly Cys Ala

290 295 300

Gly Cys Thr Ala Cys Gly Ala Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Gly Ala

305 310 315 320

Cys Thr Ala Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Cys

325 330 335

Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Gly Ala

340 345 350

Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Thr Thr Cys Cys Ala Cys Cys Ala Ala

355 360 365

Gly Gly Gly Cys Cys Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Cys Thr Thr Cys

370 375 380

Cys Cys Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly Cys Thr

385 390 395 400

Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Cys Cys Gly Ala

405 410 415

Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Gly Cys Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly

420 425 430

Gly Gly Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Gly

435 440 445

Ala Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Gly Ala Ala Cys Cys

450 455 460

Gly Gly Thr Gly Ala Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Gly Thr Gly Gly

465 470 475 480

Ala Ala Cys Thr Cys Ala Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala

485 490 495

Cys Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly Cys Ala Cys Ala Cys

500 505 510

Cys Thr Thr Cys Cys Cys Gly Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Thr Ala

515 520 525

Cys Ala Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr Cys Thr

530 535 540

Ala Cys Thr Cys Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Gly Thr

545 550 555 560

Gly Gly Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys

565 570 575

Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Thr Gly Gly Gly Cys Ala Cys Gly Ala

580 585 590

Ala Gly Ala Cys Cys Thr Ala Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Ala Ala

595 600 605

Cys Gly Thr Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Ala Ala Gly Cys Cys Cys

610 615 620

Ala Gly Cys Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly

625 630 635 640

Ala Cys Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Thr Thr Gly Ala Gly Thr Cys

645 650 655

Cys Ala Ala Ala Thr Ala Thr Gly Gly Thr Cys Cys Cys Cys Cys Ala

660 665 670

Thr Gly Cys Cys Cys Ala Cys Cys Ala Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly

675 680 685

Cys Ala Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly

690 695 700

Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Thr Cys

705 710 715 720

Cys Thr Gly Thr Thr Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys

725 730 735

Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Thr

740 745 750

Gly Ala Thr Cys Thr Cys Cys Cys Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr

755 760 765

Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Cys Gly Thr Gly Cys Gly Thr Gly Gly

770 775 780

Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Cys Ala

785 790 795 800

Gly Gly Ala Ala Gly Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Gly Thr Cys

805 810 815

Cys Ala Gly Thr Thr Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Gly

820 825 830

Thr Gly Gly Ala Thr Gly Gly Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Thr

835 840 845

Gly Cys Ala Thr Ala Ala Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Cys Ala

850 855 860

Ala Ala Gly Cys Cys Gly Cys Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys

865 870 875 880

Ala Gly Thr Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Gly Thr Ala

885 890 895

Cys Cys Gly Thr Gly Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys

900 905 910

Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys Ala Cys Cys

915 920 925

Ala Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Gly Gly

930 935 940

Cys Ala Ala Gly Gly Ala Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys

945 950 955 960

Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly

965 970 975

Gly Cys Cys Thr Cys Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Thr

980 985 990

Cys Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys

995 1000 1005

Ala Ala Ala Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys

1010 1015 1020

Cys Cys Cys Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Ala Gly Gly Thr

1025 1030 1035 1040

Gly Thr Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Cys Ala

1045 1050 1055

Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Thr Gly Ala

1060 1065 1070

Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Thr Cys Ala Gly

1075 1080 1085

Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Cys

1090 1095 1100

Ala Ala Ala Gly Gly Cys Thr Thr Cys Thr Ala Cys Cys Cys Cys Ala

1105 1110 1115 1120

Gly Cys Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala

1125 1130 1135

Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Cys Ala Ala Thr Gly Gly Gly

1140 1145 1150

Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Thr

1155 1160 1165

Ala Cys Ala Ala Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys

1170 1175 1180

Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Ala Cys

1185 1190 1195 1200

Gly Gly Cys Thr Cys Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr

1205 1210 1215

Ala Cys Ala Gly Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr

1220 1225 1230

Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Thr Gly Gly

1235 1240 1245

Cys Ala Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Ala Thr Gly Thr Cys Thr

1250 1255 1260

Thr Cys Thr Cys Ala Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly Thr Gly Ala Thr

1265 1270 1275 1280

Gly Cys Ala Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Cys Thr Gly Cys Ala Cys

1285 1290 1295

Ala Ala Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Gly Ala

1300 1305 1310

Ala Gly Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys

1315 1320 1325

Thr Cys Thr Gly Gly Gly Thr Ala Ala Ala Thr Gly Ala

1330 1335 1340

<210> 11

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ile His

20 25 30

Gly Thr His Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe

85 90 95

Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 12

<211> 657

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys

1 5 10 15

Ala Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys Thr Cys Ala Cys Thr

20 25 30

Thr Gly Cys Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Gly Thr

35 40 45

Cys Ala Gly Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala

50 55 60

Cys Cys Thr Gly Thr Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala

65 70 75 80

Gly Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Ala Thr Cys Cys Ala Cys

85 90 95

Gly Gly Cys Ala Cys Cys Cys Ala Cys Cys Thr Gly Ala Thr Gly Cys

100 105 110

Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Ala Ala

115 120 125

Ala Cys Cys Cys Gly Gly Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Cys Cys

130 135 140

Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Cys Gly

145 150 155 160

Cys Cys Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala

165 170 175

Gly Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Gly Cys Cys

180 185 190

Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Gly

195 200 205

Gly Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala Cys Cys Gly Ala Cys Thr Thr

210 215 220

Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Ala Cys Thr Ala Thr Cys Ala Ala Cys

225 230 235 240

Cys Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly

245 250 255

Ala Cys Ala Cys Cys Gly Cys Cys Ala Ala Cys Thr Ala Cys Thr Ala

260 265 270

Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Gly Cys Thr Thr Cys

275 280 285

Gly Ala Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Thr

290 295 300

Thr Cys Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala

305 310 315 320

Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Gly Cys Gly Thr

325 330 335

Ala Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala Thr

340 345 350

Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys

355 360 365

Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly

370 375 380

Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly

385 390 395 400

Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr

405 410 415

Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Thr Cys Thr Ala Thr

420 425 430

Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly

435 440 445

Thr Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala

450 455 460

Thr Ala Ala Cys Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Thr Cys Gly

465 470 475 480

Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala

485 490 495

Gly Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Ala

500 505 510

Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys

515 520 525

Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala

530 535 540

Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Ala

545 550 555 560

Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala Gly Ala Ala Ala

565 570 575

Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr Cys Thr Ala Cys Gly Cys Cys Thr

580 585 590

Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Cys Ala Thr Cys Ala

595 600 605

Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr Cys Gly Cys Cys Cys

610 615 620

Gly Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys Thr Thr Cys Ala

625 630 635 640

Ala Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Thr Gly Thr Thr Gly

645 650 655

Ala

<210> 13

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 13

Gly Tyr Ile Leu Thr Thr Tyr Trp Ile Thr

1 5 10

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 14

Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 15

<211> 3

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 15

Arg Asp Tyr

1

<210> 16

<211> 16

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 16

Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 17

Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 18

Phe Gln Ala Ser Leu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 19

<211> 112

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 19

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Leu Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Thr Arg Leu Ser Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 20

<211> 112

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 20

Asp Val Leu Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser

20 25 30

Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Glu Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala

85 90 95

Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 21

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser

20 25 30

Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala

85 90 95

Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 22

<211> 442

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Leu Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

130 135 140

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

145 150 155 160

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

165 170 175

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

180 185 190

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

195 200 205

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

225 230 235 240

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

245 250 255

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

260 265 270

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

275 280 285

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

290 295 300

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

305 310 315 320

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

325 330 335

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

340 345 350

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

355 360 365

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

370 375 380

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

385 390 395 400

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

405 410 415

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

420 425 430

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

Claims (15)

1.一种PD-L1抗体或抗原结合片段联合CD40抗体或抗原结合片段在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途，所述PD-L1抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含分别如SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3所述的PD-1抗体或抗原结合片段的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述PD-L1抗体或抗原结合片段选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体，优选人源化抗体。

3.根据权利要求2所述的用途，其中所述PD-L1抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：7所示的重链可变区或其变体，和SEQ ID NO：8所示的轻链可变区或其变体。

4.根据权利要求2或3所述的用途，其中所述PD-L1抗体或抗原结合片段进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG2或IgG4重链恒定区，更优选包含引入F234A和L235A突变的IgG4重链恒定区；所述人源化抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的恒定区。

5.根据权利要求4所述的用途，其中所述PD-L1抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO：9所示重链，和如SEQ ID NO：11所示轻链。

6.根据权利要求1-5任一项所述的用途，其中所述CD40抗体或其抗原结合片段具有分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

7.根据权利要求6所述的用途，其中所述CD40抗体或其抗原结合片段为人源化抗体。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述CD40抗体或其抗原结合片段包含如SEQ IDNO:19所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:20所示的轻链可变区。

9.根据权利要求6-8任一项所述的用途，其中所述人源化抗体重链可变区进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链FR区，优选包含人源IgG1、IgG2或IgG4重链FR区，更优选包含人源IgG1或IgG2重链FR区。

10.根据权利要求1-9任一项所述的用途，其中所述CD40抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:21所示的轻链，和如SEQ ID NO:22所示的重链。

11.权利要求1所述的用途，其中所述的肿瘤为乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、胰腺癌、实体瘤，优选为非小细胞肺癌、乳腺癌、黑素瘤、淋巴癌或肾癌。

12.根据权利要求1所述的用途，其中所述PD-L1抗体或抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为50-3000mg，优选500-2000mg，更优选600mg或1200mg。

13.根据权利要求1所述的用途，其中所述CD40抗体或抗原结合片段在人类受试者中的施用剂量为0.1-40mg，优选1-20mg。

14.根据权利要求13所述的用途，其进一步包含细胞因子抑制剂，所述细胞因子抑制剂选TNFa抗体。

15.一种药物组合，其包含有效治疗量的PD-L1抗体或抗原结合片段和/或CD40抗体或抗原结合片段。

Images