CN112430623B - 一种快速测定cgrp/cgrp受体抗体药物生物学活性的方法 - Google Patents

一种快速测定cgrp/cgrp受体抗体药物生物学活性的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速测定CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的方法。所述方法包括构建得到稳定表达CRE报告基因的效应细胞，用CGRP刺激激活报告基因表达，并用CGRP/CGRP受体抗体药物阻断CGRP信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体的生物学活性。本发明针对CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的测定首次建立了一种快速、准确的定量检测方法，所述方法能够准确、简单、快速地检测CGRP/CGRP受体抗体药物的生物学活性。

Description

一种快速测定CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的方法
技术领域
本发明属于生物医药检测领域，具体而言，涉及一种快速测定CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的方法。
背景技术
偏头痛是全球第三大最常见疾病和第六大致残性疾病，是一种常见的慢性神经血管性疾病，特征为反复发作的剧烈头痛，多为偏侧。据估计，在全球范围内，偏头痛患者总数超过10亿人，大约90％为发作性偏头痛(EM)，其特征为每月偏头痛天数可多达14天；其余10％为慢性偏头痛(CM)，其特征为每月发生头痛天数至少15天，其中8天及以上为偏头痛，患者病情持续时间超过3个月。目前，尚没有药物能够治愈偏头痛。世界卫生组织(WHO)已将偏头痛列为10大最致残疾病之一，与其他人群相比，偏头痛患者更可能发生抑郁、焦虑、睡眠障碍、其他疼痛及疲劳等。CGRP(降钙素基因相关肽)是一种神经肽，已被证明在偏头痛发作时释放，可能是偏头痛发作的诱因。目前，CGRP及其受体(CGRPR)已成为偏头痛药物研发的热门靶点。
抗体药物以其独特的作用机制和高效性，现已成为生物医药领域的重要组成部分之一，在疾病治疗上具有广阔的应用前景，并且已成功应用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病。截止2017年，已有69种单抗隆抗体药物通过FDA审批并上市销售，其中，包括全人源单抗、人源化单抗、嵌合单抗、鼠源单抗、抗体偶联药物、双特异性抗体和抗体类似物，目前，自身免疫性疾病、癌症仍然是单克隆抗体药物的主要应用领域。CGRP/CGRPR抗体是一种CGRP/CGRPR阻断剂，用于治疗偏头痛，目前国内还没有相关的药物上市。CGRP/CGRPR抗体与细胞膜上CGRP受体或可溶性CGRP结合，阻断CGRP与CGRP受体的结合，使CGRP信号通路不能被激活，从而抑制相关的机制，有效改善偏头痛的症状。
面对抗体类药物的快速发展，迫切需要建立相应的抗体药物质量评价和质量控制技术体系。生物学活性测定是对药物的有效成分和含量，以及药物效价的测定，是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。目前国内尚无CGRP/CGRPR抗体的生物学活性测定方法，本发明采用了转基因细胞测活方法对CGRP/CGRPR抗体的生物学活性进行了测定，4小时即可获得结果，实验周期短，操作简便，并且避免了长时间孵育所带来的细胞污染可能性等客观因素的问题，为CGRP/CGRPR抗体药物首次提供了一种生物学活性测定方法。
发明内容
为了弥补现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的方法，该方法实验周期短，4小时即可获得结果，操作简便，并且避免了长时间孵育所带来的细胞污染可能性等客观因素的问题，为CGRP/CGRPR抗体药物首次提供了一种生物学活性测定方法。
本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：
本发明的第一方面提供了一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的细胞株的构建方法。
进一步，所述方法包括如下步骤：
(1)含有CRE-Luc报告基因的质粒转导效应细胞；
(2)筛选得到稳定表达报告基因的细胞株。
进一步，步骤(1)中所述效应细胞优选为人神经瘤细胞；
更优选地，所述效应细胞为SK-N-MC。
SK-N-MC细胞属于人神经上皮瘤细胞，其表面表达有CGRP受体(由降钙素样受体(CLR)和受体活性修饰蛋白1(RAMP1)组成异二聚体)，CGRP与CGRP受体结合，活化下游的腺苷酸环化酶，胞内cAMP水平上升，进入细胞核识别并结合CRE序列，从而产生作用。将合成构建的Plv-CRE-Luc-PGK-blasticidin质粒进行慢病毒包装，然后转导入SK-N-MC细胞内，CGRP与CGRP受体结合后激活cAMP信号通路，并启动与CRE序列连接的荧光素酶报告基因的表达。抗CGRP(CGRPR)抗体与CGRP(CGRPR)竞争性结合CGRPR(CGRP)，阻断CGRP信号通路，因此，抗CGRP/CGRPR抗体浓度与效应细胞中的荧光素酶表达量成反比。
进一步，步骤(2)中所述的筛选是通过加入抗生素进行筛选的。
进一步，所述抗生素包括(但不限于)：杀稻瘟菌素(Blasticidin)、潮霉素(Hygromycin B)、嘌呤霉素(Puromycin)、6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)、氨苄青霉素(Ampicillin)；
优选地，所述抗生素为杀稻瘟菌素(Blasticidin)。
作为本发明的一种优选的实施方案，含有CRE序列的荧光素酶报告基因的质粒为Plv-CRE-Luc-PGK-blasticidin质粒，所述质粒导入SK-N-MC效应细胞后，加入杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选，得到稳定表达CRE-Luc报告基因的单克隆细胞株。
本发明的第二方面提供了一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的方法。
进一步，所述方法包括构建得到稳定表达CRE-Luc报告基因的效应细胞，用CGRP刺激激活报告基因表达，并用CGRP/CGRPR抗体药物阻断CGRP信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体药物的生物学活性。
进一步，所述方法包括如下步骤：
(1)根据本发明第一方面所述的方法构建得到稳定表达CRE-Luc报告基因的效应细胞；
(2)将CGRP加至步骤(1)所述的效应细胞中刺激激活报告基因的表达；
(3)将CGRP/CGRPR抗体药物样品及参比品等比例稀释后，分别转移至步骤(2)中效应细胞和CGRP的混合物中，在37℃培养箱中进行孵育；
(4)向步骤(3)中加入荧光素酶底物，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定CGRP/CGRPR抗体药物样品的生物学活性。
进一步，步骤(1)中所述效应细胞的细胞密度为5×103-4×104个/孔，优选为1×104个/孔。
进一步，步骤(2)中所述CGRP的终浓度为0.4ng/mL-5ng/mL，优选为5ng/mL。
进一步，步骤(3)中所述等比例稀释的比例为1:1.8-1:2，优选为1:2。
进一步，步骤(3)中所述孵育的时间为2-22小时，优选为4小时。
进一步，步骤(4)中所述四参数曲线是根据在酶标仪上使用化学发光读取的相对化学发光单位值，通过数据处理拟合的倒S型四参数曲线。
进一步，步骤(4)中所述样品的生物学活性是通过比较样品与参比品四参数曲线的半抑制浓度值，得出样品的相对效价来确定的。
在本发明的实施例中，使用荧光素酶试剂盒检测化学发光值，优选为使用Promega公司的Bright-Glo荧光素酶试剂盒检测化学发光值。
荧光素酶(Luciferase)来自于自然界能够发光的生物，是在生物体内能够催化荧光素(Luciferin)或脂肪醛氧化发光的一类酶的总称。根据来源生物种类的不同，可将荧光素酶分为萤火虫荧光素酶(FL)和细菌荧光素酶(BL)。目前，以北美萤火虫来源的荧光素酶基因的应用最为广泛，该基因可编码产生550个氨基酸的荧光素酶蛋白。FL基因来自萤火虫，在Mg2+、ATP、O2的参与下，催化D-荧光素(D-luciferin)氧化脱羧，产生激活态的氧化荧光素，并放出光子，产生550-580nm的荧光。
荧光素酶报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件(如启动子、增强子和沉默子等)和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。荧光素酶报告基因系统是以荧光素(Luciferin)为底物，来检测萤火虫荧光素酶(Fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化Luciferin氧化成Oxyluciferin，在Luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(Bioluminescence)，然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定。
在本发明的实施例中，在酶标仪上使用化学发光读取相对化学发光单位值(Relative light unit,RLU)通过数据处理拟合倒S型四参数曲线。倒S型四参数曲线，可反映出上下渐近线、IC50值和斜率等指标。优选地，使用Graphpad7.0进行数据处理拟合倒S型四参数曲线。
在本发明的实施例中，通过比较样品与参比品四参数曲线的半抑制浓度值(Halfmaximal inhibitory concentration，IC50)，得出样品的相对效价。计算公式为：相对效价＝参比品IC50/样品IC50×100％。
在本发明的实施例中，CGRP/CGRPR抗体药物为君实生物在研的针对CGRP或CGRP受体的抗体药物。此外，为了验证本发明所述方法的专属性，在本发明的实施例中，采用了不同靶点的单抗药物进行验证，包括地舒单抗(Denosumab，靶点为RANKL)、曲妥珠单抗(Trastuzumab，靶点为HER2)、英夫利昔(Infliximab，靶点为TNF-α)和维布妥昔单抗(Brentuximab，靶点为CD30)。
本发明的第三方面提供了一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的产品。
进一步，所述产品包括稳定表达CRE-Luc报告基因的细胞株。
进一步，所述产品还包括CGRP、CGRP/CGRPR抗体药物样品及参比品。
进一步，所述产品还包括荧光素酶底物。
本发明的第四方面提供了一种用于CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性评价的体系。
进一步，所述体系包括如下组分：
(1)稳定表达CRE-Luc报告基因的细胞株；
(2)CGRP、CGRP/CGRPR抗体药物样品及参比品；
(3)荧光素酶底物。
本发明的第五方面提供了本发明第四方面所述的体系在CGRP/CGRPR抗体药物的质量控制中的应用；
优选地，所述应用包括本发明第二方面所述的方法。
除非另有定义，本发明上下文中的所有科技术语具有本领域普通技术人员所理解的相同含义。此外，对部分术语解释如下：
本文中使用的术语“抗体”，包括全抗体和任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或其单链。“抗体”包含至少两个重链(H)和两条通过二硫键相互连接的轻链(L)或其抗原结合部分的蛋白质。每个重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由三个结构域CH1，CH2和CH3组成。每个轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区域可以进一步细分为高变区域，称为互补决定区(CDR)，散布于更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由以下顺序从氨基末端到羧基末端排列的三个CDR和四个FR组成：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。其中术语“抗体”是指免疫球蛋白或其片段或衍生物，并且包括包含抗原结合位点的任何多肽，不管其是否在体外或体内产生。该术语包括但不限于多克隆、单克隆、单特异性、多特异性、非特异性、人源化、单链、嵌合、合成、重组、杂交、突变和接枝抗体。此外，术语“抗体”还包括保留抗原结合功能的抗体片段，例如Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb和其他抗体片段。
本文中使用的术语“样品”，是指待鉴别、待测定的供测试样品。在本发明中，抗体药物样品包括在工业生产中被生产出的待检测其生物学活性的抗体药物样品，具体包括CGRP单抗、地舒单抗(Denosumab)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、英夫利昔(Infliximab)和维布妥昔单抗(Brentuximab)。
本发明的优点和有益效果如下：
(1)本发明首次提供了一种快速测定CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的方法，并且目前关于CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的测定方法国内未见报道。
(2)本发明提供的快速测定CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的方法，具有操作简便，实验周期短，4h即可获得结果，成本低，不需要进行动物实验，结果稳定可靠，特异性好，准确度高等优点，有利于促进CGRP/CGRP受体抗体药物的质量控制与临床应用，具有良好的推广应用价值。
(3)本发明提供了一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的细胞株的构建方法以及包含该细胞株的产品和体系，该产品和体系能够用于CGRP/CGRP受体抗体药物生物学活性的快速检测，具有准确度高、安全快速的优点。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1是不同克隆的效应细胞荧光素酶活性测定的结果图；
图2是SK-N-MC-CRE-Luc细胞不同孵育时间下四参数曲线图；
图3是SK-N-MC-CRE-Luc细胞不同细胞密度下四参数曲线图；
图4是SK-N-MC-CRE-Luc细胞不同抗原浓度下四参数曲线图；
图5是SK-N-MC-CRE-Luc细胞不同抗原浓度下抗体作用的四参数曲线图；
图6是SK-N-MC-CRE-Luc细胞不同抗原浓度不同抗体稀释比例下抗体作用的四参数曲线图；
图7是SK-N-MC-CRE-Luc细胞对不同靶点的单抗药物的作用结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。
实施例1稳定表达CRE-luciferase的SK-N-MC细胞株筛选
1、实验材料
SK-N-MC细胞来源于ATCC；Plv-CRE-Luc-PGK-blasticidin质粒购于武汉金开瑞生物工程有限公司；CGRP购于强耀生物科技有限公司；CGRP抗体购于苏州君盟生物医药科技有限公司(对应于说明书发明内容中的君实生物)；Bright-Glo荧光素酶试剂盒购买于Promega公司。
2、慢病毒转导
采用慢病毒包装方法对SK-N-MC细胞进行转导，孵育48h后，换液加入含5μg/mLBlasticidin的细胞培养基进行加压筛选。待细胞密度和活力恢复后，通过有限稀释法，按照0.4-0.6个/孔的密度，铺96孔板筛选单克隆。在细胞生长期间，观察并标记哪些孔是单克隆，当单克隆孔内SK-N-MC细胞汇合度达到30％以上时，将此孔内细胞转移至24孔板，逐步扩大培养。
3、SK-N-MC-CRE-Luc细胞株筛选
每孔10000个细胞，100μL每孔铺至96孔板，37℃，5％CO2培养过夜，第二天将CGRP稀释至6ng/mL、3ng/mL、1.5ng/mL、0.75ng/mL、0ng/mL(终浓度为2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.25ng/mL、0ng/mL)，每孔50μL，4h后每孔加入100μL Bright-Glo，检测化学发光值。
4、实验结果
结果见表1，经过筛选，SK-N-MC-CRE-Luc 1A8细胞对CGRP的刺激有较好荧光素酶表达反应性(见图1)，因此，选取SK-N-MC-CRE-Luc 1A8细胞为试验用细胞，并命名为SK-N-MC-CRE-Luc细胞。
表1 SK-N-MC-CRE-Luc克隆筛选化学发光值
浓度(ng/mL) 0 0.25 0.5 1 2 信噪比
1A8 12162 443032 427805 435885 418060 34
2B6 1272 29629.5 28132.5 32696 38474 30
4C3 5597 165302 153817 152508 148764 27
6C3 5917 149782 140934 150925 164771 28
4D6 9623 304126 282649.5 258124 302393 31
1B7 4156 90726 74081 79351 86146 21
1C8 456 12331 12121 12707 14391 32
4E6 169 5131 4661 4621 4438 26
2C7 3622 77693 72002 70223 67585 19
1C3 31015 711184 691374 643107 705922 23
实施例2检测方法的优化
1、CGRP浓度、孵育时间、不同细胞密度优化
将CGRP浓度稀释到较高的浓度100ng/mL(终浓度)，1:3稀释，11个浓度点，在不同的细胞密度以及孵育时间下根据测定的化学发光值拟合的四参数曲线确定CGRP的作用范围，以及较为合适的孵育时间和细胞密度。
实验方法：将SK-N-MC-CRE-Luc细胞按5×103-4×104个/孔加入到96孔白板中，37℃，5％CO2过夜培养；CGRP初始浓度100ng/mL(终浓度)，1:3稀释11个浓度梯度，共12个浓度点(包括浓度点0ng/mL)，37℃，5％CO2培养。分别在2h、4h、6h、和22h加入Bright-Glo，检测化学发光值，根据测定的化学发光值拟合的四参数曲线以及信噪比，确定一个较为合适的孵育时间以及细胞密度。
实验结果：结果显示，1×104个/孔细胞密度孵育4h后的化学发光值拟合的四参数曲线以及信噪比较好(见图2和图3)，适合作为最优的细胞密度和孵育时间；SK-N-MC-CRE-Luc细胞在不同CGRP浓度刺激下所得到的四参数曲线图见图4。
2、CGRP浓度优化
根据本实施例中1的实验结果，将CGRP设置为0.4ng/mL、0.6ng/mL、0.8ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL(终浓度)六个不同的浓度，分别进行CGRP单抗的抑制实验，根据测定的化学发光值拟合的四参数曲线确定CGRP的使用浓度(终浓度)。
实验方法：将SK-N-MC-CRE-Luc细胞按1×104个/孔加入到96孔白板中，37℃，5％CO2过夜培养；CGRP单抗初始浓度为1200ng/mL(终浓度)，1:3梯度稀释12个浓度点，加入上述细胞板中；CGRP分别稀释至0.4ng/mL、0.6ng/mL、0.8ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL(终浓度)，分别转移到上述细胞板中；37℃，5％CO2培养。4h后加入Bright-Glo，检测化学发光值。
实验结果：结果显示，CGRP浓度在2.5ng/mL和5ng/mL(终浓度)时能够达到很好的信噪比(见图5)。
3、抗体量效范围以及稀释比例优化
根据本实施例中2的实验结果，将CGRP单抗稀释到较高的浓度500ng/mL(终浓度)，分别以1:2和1:1.8的稀释比例稀释11个浓度点，根据测定的化学发光值拟合的四参数曲线确定CGRP单抗的作用范围。
实验方法：将SK-N-MC-CRE-Luc细胞按1×104个/孔加入到96孔白板中，37℃，5％CO2培养过夜；CGRP稀释至2.5ng/mL和5ng/mL(终浓度)，转移到上述细胞板中；CGRP单抗稀释至1000ng/mL(终浓度)，分别以1:2和1:1.8的稀释比例稀释11个浓度点，将稀释后的抗体50μL/孔转移至细胞板中；37℃，5％CO2培养。4h后加入Bright-Glo，检测化学发光值。
实验结果：结果见图6，根据IC50值及上下平台计算，确定CGRP单抗起始点终浓度为500ng/mL，1:2稀释，设十个浓度点，能够保证上下平台各有两个浓度点，线性部分至少三个点。
实施例3检测方法的验证
本发明所述的方法是针对抗CGRP/CGRPR抗体的生物学活性方法，因此，对其专属性的验证采用了不同靶点的单抗药物：CGRP单抗(CGRP单抗，靶点为CGRP)、地舒单抗(Denosumab，靶点为RANKL)、曲妥珠单抗(Trastuzumab，靶点为HER2)、英夫利昔(Infliximab，靶点为TNF-α)和维布妥昔单抗(Brentuximab，靶点为CD30)。在相同的实验条件下，利用本发明所述的SK-N-MC-CRE-Luc报告基因测活体系，测定上述不同靶点的单抗药物的活性，以对本发明所述的检测方法的专属性进行验证。
实验方法：将SK-N-MC-CRE-Luc细胞按1×104个/孔加入到96孔白板中，37℃，5％CO2培养过夜；加入5ng/mL(终浓度)的CGRP；将上述不同靶点的单抗药物分别稀释至初始浓度500ng/mL(终浓度)，1:2稀释10个浓度梯度，50μL/孔分别转移至上述细胞板中；37℃，5％CO2培养。4h后加入Bright-Glo，检测化学发光值。
实验结果：实验结果见图7，结果显示本方法对RANKL、HER2、TNF-α、CD30靶点的抗体药物均没有剂量效应曲线，说明本方法不适于除了CGRP/CGRPR靶点以外的其他药物，证明本发明所述方法的专属性较好。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (14)

1.一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的细胞株的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1) 将含有CRE-Luc报告基因的质粒Plv-CRE-Luc-PGK-blasticidin导入效应细胞中；
(2) 加入杀稻瘟菌素加压筛选得到稳定表达CRE-Luc报告基因的细胞株；
所述效应细胞为人神经瘤细胞SK-N-MC。
2.一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1) 根据权利要求1所述的方法构建得到稳定表达CRE-Luc报告基因的效应细胞；
(2) 将CGRP加至步骤(1)所述的效应细胞中刺激激活报告基因的表达；
(3) 将CGRP/CGRPR抗体药物样品及参比品等比例稀释后，分别转移至步骤(2)中效应细胞和CGRP的混合物中，在37℃培养箱中进行孵育；
(4) 向步骤(3)中加入荧光素酶底物，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定CGRP/CGRPR抗体药物样品的生物学活性。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述效应细胞的细胞密度为5×103-4×104个/孔。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述效应细胞的细胞密度为1×104个/孔。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述CGRP的终浓度为0.4ng/mL-5ng/mL。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述CGRP的终浓度为5ng/mL。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述等比例稀释的比例为1:1.8-1:2。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述等比例稀释的比例为1:2。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述孵育的时间为2-22小时。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述孵育的时间为4小时。
11.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述样品的生物学活性是通过比较样品与参比品四参数曲线的半抑制浓度值，得出样品的相对效价来确定的。
12.一种快速测定CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性的产品，其特征在于，所述产品包括根据权利要求1所述的方法构建得到的稳定表达CRE-Luc报告基因的细胞株。
13.一种用于CGRP/CGRPR抗体药物生物学活性评价的体系，其特征在于，所述体系包括如下组分：
(1) 根据权利要求1所述的方法构建得到的稳定表达CRE-Luc报告基因的细胞株；
(2) CGRP、CGRP/CGRPR抗体药物样品及参比品；
(3) 荧光素酶底物。
14.权利要求13所述的体系在CGRP/CGRPR抗体药物的质量控制中的应用，其特征在于，所述应用包括权利要求2-11中任一项所述的方法。
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