CN112409455A - 一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料及其制备方法和应用 - Google Patents

一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料及其制备方法和应用。所述多肽纳米材料包括通过酰胺键相连的疏水单元、组装单元和靶向单元；所述靶向单元包括靶向新生血管内皮细胞的多肽序列，且所述多肽序列与血管内皮生长因子共受体特异性结合。本发明提供的多肽纳米材料具有靶向新生血管内皮细胞的作用，并且通过配体‑受体相互作用与血管内皮生长因子共受体结合，并自组装形成纳米纤维，包裹在内皮细胞表面并占据了血管内皮生长因子共受体，阻断了其余血管内皮生长因子结合的信号通路，抑制内皮细胞的迁移，抑制新生血管生成，所述多肽纳米材料为脉络膜新生血管的治疗提供了可靠的靶向治疗方法。

Description

一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料及其制备方法 和应用
技术领域
本发明属于纳米材料技术领域，具体涉及一种多肽纳米材料及其制备方法和应用，尤其涉及一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料及其制备方法和应用。
背景技术
新生血管是多种疾病发生的标志，其形成主要源于内皮细胞在信号通路调控下的迁移。脉络膜新生血管是眼部的高发疾病，在这一疾病模型中，脉络膜内皮细胞会异常的迁移到其他眼部区域，如Bruch膜或视网膜色素上皮细胞等区域，进而引发其他症状，严重者会导致失明。脉络膜新生血管常伴随其他疾病，如病理性近视，黄斑水肿等疾病共同发生，对人体眼部造成极大伤害。
针对脉络膜新生血管的治疗，究其根本，还是针对新生血管的治疗，具体来说，就是通过抑制促进新生血管形成的信号通路来实现对内皮细胞迁移、新生血管生成的抑制。常见的促进新生血管形成的信号通路即为血管内皮生长因子(Vascular endothelialgrowth factor，VEGF)与其受体，如血管内皮生长因子受体(VEGFR)、神经菌毛素(neuropilin-1，NRP-1)之间的信号通路。其作用机理为，VEGF靶向到内皮细胞表面的受体上，发生配体-受体相互作用，激活下游信号通路，进而实现内皮细胞的迁移以及新生血管的形成。
纳米颗粒的尺寸在10～100nm时，会增加在体内的循环时间；其也可以被动靶向作用富集到肿瘤。依靠多肽分子间的非共价键作用(氢键、疏水、π-π等相互作用)，可通过对外界条件包括时间、酶、温度、pH等以及配体-受体相互作用等的调控，使多肽分子发生组装结构上的变化。比如，由纳米颗粒在某种外界条件的刺激下调控形成具有β-sheet结构的纳米纤维。相比于纳米颗粒，纳米纤维可以通过多价键效应实现更强的受体结合效果和结合时间，为长效的阻止VEGF与NRP-1的结合提供了切实有效的材料选择和方法。
因此，在本领域中，期望能够结合纳米纤维的长效滞留和多价键效应，设计一种可以在脉络膜新生血管处实现靶向并原位转化形成的多肽纳米纤维材料，阻断VEGF与NRP-1结合的信号通路，抑制内皮细胞的迁移，进而抑制新生血管的生成，这种抗新生血管生成药物的研究具有广泛的应用研究意义。
发明内容
鉴于现有技术中存在的问题，本发明提供一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料及其制备方法和应用。所述多肽纳米材料具有脉络膜新生血管内皮细胞的靶向性，同时兼具与脉络膜新生血管内皮细胞上的受体蛋白之间的配体-受体相互作用(Receptor-ligand interaction)，能够在内皮细胞表面由纳米颗粒转化生成纳米纤维。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料，包括通过酰胺键相连的疏水单元、组装单元和靶向单元。
所述靶向单元包括靶向新生血管内皮细胞的多肽序列，且所述多肽序列与血管内皮生长因子共受体特异性结合。
本发明所述结构的多肽纳米材料可分为三部分功能结构，具体为疏水单元、组装单元和靶向单元。其中，靶向单元不仅具有脉络膜新生血管内皮细胞的靶向性，同时与脉络膜新生血管内皮细胞上的受体蛋白具有配体-受体相互作用，即双方特异性基团的具有互补性且空间结构适配，通过此相互作用，受体蛋白诱导纳米材料的形貌发生转化，形成纳米纤维。纳米纤维覆盖在内皮细胞表面，占据新生血管内皮细胞上的受体蛋白，使受体蛋白与VEGF的结合信号通路被阻断，抑制内皮细胞的迁移，进而抑制新生血管的生成，最终实现对脉络膜新生血管的治疗。
作为本发明优选的技术方案，所述血管内皮生长因子共受体包括神经菌毛素(neuropilin-1，NRP-1)。
优选地，所述疏水单元的供体包括双芘、丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸或棕榈酸中的任意一种或至少两种的组合，优选为双芘。
优选地，所述疏水单元的供体为双芘，即式I所示结构的分子：
Figure BDA0002774663710000031
本发明中，所述疏水单元的供体可以是
Figure BDA0002774663710000032
Figure BDA0002774663710000033
Figure BDA0002774663710000034
中的任意一种或至少两种的组合。
本发明中，所述疏水单元为疏水且带有羧酸基团的有机化合物即可。疏水基团能够帮助所述多肽纳米材料在从有机相到水相的分散过程中利用疏水相互作用自组装形成聚集体纳米颗粒。
作为本发明优选的技术方案，所述组装单元包括多肽序列KLVFF。
优选地，所述组装单元的结构如式II所示：
Figure BDA0002774663710000041
其中
Figure BDA0002774663710000042
表示基团连接位点。
优选地，所述靶向单元包括多肽序列RPL和/或CGFYWLRSC。
优选地，所述靶向单元的供体为式III和/或式IV所示结构的分子，其中，式III和式IV的结构式如下：
Figure BDA0002774663710000043
Figure BDA0002774663710000051
优选地，所述多肽纳米材料的结构如式V或式VI所示：
Figure BDA0002774663710000052
本发明提供的多肽纳米材料，具有脉络膜新生血管内皮细胞的靶向性，同时兼具与脉络膜新生血管内皮细胞上的受体蛋白neuropilin-1之间的配体-受体相互作用，通过此相互作用，多肽纳米材料在初始阶段形成的纳米颗粒转化生成纳米纤维覆盖在内皮细胞表面。
相对于纳米颗粒，纳米纤维具有更好的稳定性，在生物体内不容易被清除，在生物体内具有较长的滞留时间，并且具有良好的生物兼容性；纳米纤维占据neuropilin-1后，使neuropilin-1与血管内皮生长因子的结合信号通路被阻断，因而有效地抑制了内皮细胞的迁移，进而抑制了新生血管的生成。
第二方面，本发明还提供一种如第一方面所述的多肽纳米材料的制备方法，包括：
以树脂为载体，以疏水单元的供体、组成组装单元和靶向单元的组成氨基酸为原料，利用固相合成方法制备得到所述多肽纳米材料。
本发明中所述多肽纳米材料可以采用本领域常规的技术手段进行制备，其中，最常用的方法即为固相合成法。以采用Wang树脂，按照多肽顺序，通过偶联剂进行偶联，其中有机化合物也同样按照氨基酸的偶联方法进行反应，最后经三氟乙酸裂解、氮气吹干和乙醚纯化等步骤制备即可得到。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的多肽纳米材料的受体-配体诱导自组装方法，其特征在于，所述受体-配体诱导自组装方法包括如下步骤：
(1)将多肽纳米材料溶于有机溶剂中，得到多肽纳米材料溶液；
(2)将步骤(1)得到的多肽纳米材料溶液与缓冲溶液混合，所述多肽纳米材料自组装为纳米颗粒；
(3)而后加入血管内皮生长因子共受体，所述多肽纳米材料自组装为纳米纤维。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)所述有机溶剂包括二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或1,4-二氧六环中的任意一种或至少两种的组合，优选为二甲基亚砜。
优选地，步骤(1)所述多肽纳米材料溶液中多肽纳米材料的摩尔浓度为10-5～10- 2M，例如可以是1×10-4M、3×10-4M、5×10-4M、8×10-4M、1×10-3M、3×10-3M、5×10-3M、8×10- 3M或1×10-2M等。
优选地，步骤(2)所述缓冲溶液包括PBS缓冲液，其pH值为7.4左右。
作为本发明优选的技术方案，步骤(3)中所述血管内皮生长因子共受体的浓度为10-7～10-5M，例如可以是1×10-7M、3×10-7M、5×10-7M、8×10-7M、1×10-6M、3×10-6M、5×10- 6M、8×10-6M或1×10-5M等。
优选地，步骤(3)中所述自组装在超声条件下进行。
优选地，所述超声的时间为1～5min，例如可以是1min、2min、3min、4min或5min等。
优选地，所述超声的频率为30～50KHz，例如可以是30KHz、32KHz、35KHz、38KHz、40KHz、42KHz、45KHz或48KHz等，优选为40KHz。
优选地，步骤(3)所述超声后还包括静置的操作。
优选地，所述静置为在20～30℃(例如可以是22℃、25℃、28℃、30℃、32℃、35℃或38℃等)下保持8～120h(例如可以是10h、12h、16h、24h、36h、48h、60h、72h、96h、108h或120h等)。
作为本发明优选的技术方案，所述受体-配体诱导自组装方法包括如下步骤：
(1)将多肽纳米材料溶于二甲基亚砜中，所述多肽纳米材料的结构如式V所示，得到多肽纳米材料溶液，所述多肽纳米材料溶液中多肽纳米材料的摩尔浓度为10-5～10-2M；
(2)将步骤(1)得到的多肽纳米材料溶液加入PBS缓冲溶液中，多肽纳米材料自组装为纳米颗粒；
(3)而后加入神经菌毛素，超声1～5min后于20～30℃保持8～120h，所述多肽纳米材料的靶向单元与神经菌毛素结合诱导自组装，所述多肽纳米材料自组装为纳米纤维。
本发明的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料在PBS缓冲溶液中自组装形成纳米颗粒，在蛋白NRP-1的作用下，诱导转化生成纳米纤维。
第四方面，本发明提供一种如第一方面所述的多肽纳米材料在制备脉络膜新生血管治疗药物中的应用。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
(1)本发明提供的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料包括酰胺键相连的疏水单元、组装单元和靶向单元，通过固相合成方法即可制备得到；所述多肽纳米材料由于组装单元的存在，在溶液中可自组装形成纳米颗粒，同时其靶向单元为其提供了脉络膜新生血管内皮细胞的靶向性，且该靶向单元兼具与脉络膜新生血管内皮细胞上的受体蛋白的配体-受体相互作用；在受体蛋白的诱导下，所述多肽纳米材料可组装形成纳米纤维，即由纳米颗粒形貌转化为纳米纤维，组装单元与靶向单元相互配合，共同实现多肽纳米材料的靶向、自组装、形貌转化等过程。
(2)本发明中所述多肽纳米材料可在内皮细胞表面滞留，可以原位在脉络膜新生血管位置转化形成纤维，并结合NRP-1，阻断VEGF与NRP-1结合的信号通路，抑制内皮细胞迁移与新生血管生成，为脉络膜新生血管的治疗提供可靠诊断以及靶向治疗方法，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为实施例1制备的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料的质谱图。
图2为实施例2中多肽纳米材料自组装为纳米颗粒前后溶液中荧光强度的变化曲线图。
图3(A)为实施例3中多肽纳米材料在超纯水中自组装后的透射电镜图(标尺200nm)。
图3(B)为实施例3中多肽纳米材料在加入蛋白后的自组装形成纳米纤维后的透射电镜图(标尺100nm)。
图4(A)为实施例4中多肽纳米材料在内皮细胞表面发生滞留的单光子激光共聚焦图(标尺10μm)。
图4(B)为实施例4中多肽纳米材料在内皮细胞表面发生原位形貌转化的扫描电镜图。
图4(C)为图4(B)中黑色框线处的放大图。
图5(A)为实施例5中实验组、对照组以及PBS组对内皮细胞迁移抑制的显微图；其中a图为实验组，b图为对照组，c图为PBS组。
图5(B)为实施例5中实验组、对照组以及PBS组对内皮细胞迁移抑制后伤口面积对比图。
图6(A)为实施例6中实验组、对照组以及PBS组在第0天和第2天时鸡胚新生血管的显微图。
图6(B)为实施例6中实验组、对照组以及PBS组培养鸡胚后新生血管数量的增加值的对比图。
图7(A)为实施例7中实验组、对照组以及PBS组中大鼠模型的免疫荧光切片图(标尺40μm)；其中a图为实验组，b图为对照组，c图为PBS组。
图7(B)为实施例7中实验组、对照组以及PBS组中荧光信号强度对比图。
图8(A)为实施例8中实验组、对照组以及PBS组中大鼠模型的H&E染色图；其中a图为实验组，b图为对照组，c图为PBS组。
图8(B)为实施例8中实验组、对照组以及PBS组大鼠模型的H&E染色图中CNV面积大小对比图。
图8(C)为实施例8中实验组、对照组以及PBS组中大鼠模型的免疫组化切片染色图；其中a图为实验组，b图为对照组，c图为PBS组。
图8(D)为实施例8中实验组、对照组以及PBS组中大鼠模型的脉络膜新生血管数量对比图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。
以下实施例中，未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道获得的常规产品。
实施例1
在本实施例中，用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料的结构如下所示：
Figure BDA0002774663710000101
即在本发明所提供的式V中，疏水单元的的供体为有机化合物双芘，组装单元的供体为KLVFF，靶向单元的供体为靶向多肽RPL。
所述用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料以多肽的固相合成方法来合成，采用Wang树脂，按照多肽顺序，通过偶联剂(氮甲基吗啉:DMF＝5:95，体积比)进行偶联，其中有机化合物也同样按照氨基酸的偶联方法进行反应，最后经三氟乙酸裂解、氮气吹干、乙醚纯化而得。
对本实施例合成的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料进行质谱表征，结果如图1所示，由该图可知，图中所出现的离子峰满足材料分子的分子量的特征峰。
实施例2
在本实施例中对实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料进行自组装，考察该材料与蛋白结合转化情况。
首先，测试用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料的自组装生成纳米颗粒，将实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料溶于DMSO中，测试其荧光强度，而后将DMSO的溶液注入到超纯水中(DMSO的体积为10％)，充分混合，之后静置1分钟测试其荧光强度，测试结果如图2所示。
从图2中可以看出，分子在大量水做为溶剂时，相比分子在DMSO中的荧光由450nm红移到520nm，表明材料从单分子态变为聚集态。
实施例3
本实施例中所述用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料的蛋白诱导形变组装方法如下：
称取多肽纳米材料6.7mg溶于1mL DMSO溶剂中，再将此溶液用注射器快速注射到199mL的超纯水中，然后滴加NRP-1蛋白1mL，浓度为20μM，超声5分钟，静置5天，使用透射电镜对所得溶液进行观察。
图3(A)是实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料在超纯水中的透射电镜图，即将多肽纳米材料的DMSO溶液注射到水中后、在加入蛋白之前(时间点记为第0天)得到材料的纳米颗粒溶液；
图3(B)为多肽纳米材料在蛋白诱导下的多肽自组装后的透射电镜图，即在加入蛋白5天后，材料形变完全，即得到纳米纤维溶液。
由图可知，用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料在少量蛋白的诱导下发生形貌转换，生成纳米纤维。
实施例4
在该实施例中，考察实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料在内皮细胞表面的滞留和转化情况，具体方法如下：
(1)准备人脐静脉内皮细胞(HUVECs)悬浮液，每个共聚焦培养皿1mL，培养过夜；
取出培养基，加入含有摩尔浓度为20μM的多肽纳米材料的培养基1mL，培养4小时，用PBS缓冲液(pH为7.4)清洗3遍，进行共聚焦成像实验，采用405nm激光通道，收集绿光波段(450～550nm)；
所得单光子激光共聚焦照片如图4(A)所示。
(2)准备细胞悬浮液于12孔板中，每个孔1.5mL，加入表面用等离子体处理的硅板，培养过夜；
取出培养基，加入含有摩尔浓度为20μM的多肽纳米材料的培养基1.5mL，培养4小时，用PBS缓冲液(pH为7.4)清洗3遍，再使用质量分数为4％的多聚甲醛溶液(即多聚甲醛与PBS缓冲液的体积比为1:24)固化3h，再依次用PBS稀释好的10％、30％、50％、70％、90％、100％的乙醇溶液脱水处理，每个浓度脱水两次，每次10分钟；
然后，用叔丁醇溶液置换出水和乙醇，置换两次，每次10分钟，喷金，进行扫描电镜实验。
图4(B)为实施例1制备的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料在内皮细胞表面发生原位形貌转化的扫描电镜照片，图4(C)为图4(B)中黑色框线所选位置的放大图；
因此，本实施例中证明了实施例1中制备得到的多肽纳米材料能够在内皮细胞表面滞留，且发生原位转化后生成纳米纤维。
对比例1
本对比例中提供一种多肽纳米材料，其与实施例1的区别在于，其组装单元部分被替代为KAAGG(实施例1中为KLVFF)，其余结构单元及制备方法与实施例1保持一致。
实施例5
在本实施例中考察实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料对内皮细胞迁移抑制的情况，方法如下：
准备细胞悬浮液于6孔板中，每个孔2.5mL，过夜培养；
使用移液枪枪头在孔板中部自上而下划出伤口，再用PBS缓冲液(pH为7.4)洗去没有贴壁的细胞，加入多肽纳米材料浓度为20μM的培养基2.5mL，培养24小时；
同时设置对照组以及PBS组。
其中，对照组使用的是对比例1中提供的多肽纳米材料，PBS组中不添加多肽纳米材料，即空白组。
用PBS清洗3遍，质量浓度为4％的多聚甲醛溶液(即多聚甲醛与PBS缓冲液的体积比为1:24)固化2h，0.1％的结晶紫溶液(结晶紫与水的体积比为0.1:99.9)染色10分钟，再用PBS清洗3遍，进行伤口愈合实验拍摄；
如图5(A)为实验组(a图)、对照组(b图)和PBS组(c图)的纤维照片，图5(B)为三实验组中伤口范围大小对比图，由图可知，实施例1中制备的多肽纳米材料可以有效的抑制内皮细胞的迁移，且抑制效果相比于对照组和PBS组具有显著性差异。
实施例6
在本实施例中考察实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料对新生血管生成的抑制情况，方法如下：
使用九日龄的鸡胚，小心打开气室，剥去薄膜，加入用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料浓度20μM的PBS溶液；
同时设置对照组和PBS组，其中，对照组使用的是对比例1中提供的多肽纳米材料，PBS组中不添加多肽纳米材料，即空白组。
在加入用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料前(第0天)以及加入用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料2天后分别拍照，统计鸡胚的新生血管数量。
结果如图6(A)和图6(B)所示，该图表明，在使用用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料与鸡胚共孵育2天后，鸡胚中新生血管数量的增加值明显少于PBS组，证明用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料可以有效抑制新生血管的生成。
实施例7
在本实施例中考察实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料在小动物脉络膜区域的滞留效果，方法如下：
大鼠视网膜下注射基质胶，用于建立脉络膜新生血管大鼠模型，注射基质胶两天后，开始用于材料滞留效果的验证。
将所有大鼠随机的分为3组，每组3只，通过玻璃体内注射实验材料，注射频次为每四天一次；
其中，实验组注射3μL、含有摩尔浓度为20μM的多肽纳米材料的PBS溶液(同时，保证DMSO体积分数不超过0.5％)；
同时设置对照组和PBS组，其中，对照组使用的是对比例1中提供的多肽纳米材料，PBS组中不添加多肽纳米材料，即空白组。
距离第一次注射10天后将大鼠安乐死，取其眼部组织进行固定并切片，对切片进行免疫荧光染色。
结果如图7(A)所示，由图可知，实验组中(a图)注射了用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料的大鼠脉络膜新生血管区域存在的绿色荧光信号明显高于对照组(b图)和PBS组(c图)，且如图7(B)所示，这种荧光信号强度的变化具有显著性差异。证明材料具有在脉络膜新生血管部位长效滞留的效果。
实施例8
在本实施例中考察实施例1制备得到的用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料对脉络膜新生血管的治疗效果，方法如下：
大鼠视网膜下注射基质胶，用于建立脉络膜新生血管大鼠模型。注射基质胶两天后，开始用于材料滞留效果的验证。我们将所有大鼠随机的分为3组，每组3只，通过玻璃体内注射我们的材料，注射频次为每四天一次。
实验组注射3μL，浓度为20μM的实验组的PBS溶液(保证DMSO体积分数不超过0.5％)。对照组注射3μL，浓度为20μM的对照组的PBS溶液(保证DMSO体积分数不超过0.5％)。
PBS组注射3μL的PBS溶液。距离第一次注射10天后将大鼠安乐死，取其眼部组织进行固定并切片，对切片进行H&E染色和CD31免疫荧光测试。
如图8(A)所示，实验组中(a图)注射了用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料的大鼠脉络膜新生血管区域面积明显小于对照组(b图)和PBS组(c图)，且如图8(B)所示这种面积的差异具有显著性。
同时，如图8(C)所示，实验组中(a图)注射了用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料的大鼠脉络膜新生血管数量明显小于对照组(b图)和PBS组(c图)，且如图8(D)所示，数量的差异具有显著性；本实施例证明多肽纳米材料具有抑制脉络膜新生血管的效果。
同样的，对于式VI所示的多肽纳米材料进行实验验证，结果发现其效果与式V所述的多肽纳米材料效果相近，此处出于篇幅考虑以及避免赘述，不在详细描述实验过程。
综上所述，所述多肽纳米材料制备方法简单，能够在溶液中自组装生成纳米颗粒，同时，所述多肽纳米材料能够在内皮细胞表面滞留，且在蛋白诱导下发生转化，形成纳米纤维。以鸡胚和大鼠作为实验材料，实验结果均显示本发明提供的多肽纳米材料能够明显抑制内皮细胞的迁移，进而抑制脉络膜新生血管的形成。
申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种用于治疗脉络膜新生血管的多肽纳米材料，其特征在于，所述多肽纳米材料包括通过酰胺键相连的疏水单元、组装单元和靶向单元；
所述靶向单元包括靶向新生血管内皮细胞的多肽序列，且所述多肽序列与血管内皮生长因子共受体特异性结合。
2.根据权利要求1所述的多肽纳米材料，其特征在于，所述血管内皮生长因子共受体包括神经菌毛素；
优选地，所述疏水单元的供体包括双芘、丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸或棕榈酸中的任意一种或至少两种的组合，优选为双芘；
优选地，所述疏水单元的供体为式I所示结构的分子：
Figure FDA0002774663700000011
3.根据权利要求1或2所述的多肽纳米材料，其特征在于，所述组装单元包括多肽序列KLVFF；
优选地，所述组装单元的结构如式II所示：
Figure FDA0002774663700000012
其中
Figure FDA0002774663700000021
表示基团连接位点。
4.根据权利要求1～3任一项所述的多肽纳米材料，其特征在于，所述靶向单元包括多肽序列RPL和/或CGFYWLRSC；
优选地，所述靶向单元的供体为式III和/或式IV所示结构的分子，其中，式III和式IV的结构式如下：
Figure FDA0002774663700000022
优选地，所述多肽纳米材料的结构如式V或式VI所示：
Figure FDA0002774663700000031
5.一种如权利要求1～4任一项所述的多肽纳米材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
以树脂为载体，以疏水单元的供体、组成组装单元和靶向单元的组成氨基酸为原料，利用固相合成方法制备得到所述多肽纳米材料。
6.一种如权利要求1～4任一项所述的多肽纳米材料的受体-配体诱导自组装方法，其特征在于，所述受体-配体诱导自组装方法包括如下步骤：
(1)将多肽纳米材料溶于有机溶剂中，得到多肽纳米材料溶液；
(2)将步骤(1)得到的多肽纳米材料溶液与缓冲溶液混合，所述多肽纳米材料自组装为纳米颗粒；
(3)而后加入血管内皮生长因子共受体，所述多肽纳米材料自组装为纳米纤维。
7.根据权利要求6所述的受体-配体诱导自组装方法，其特征在于，步骤(1)所述有机溶剂包括二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺或1,4-二氧六环中的任意一种或至少两种的组合，优选为二甲基亚砜；
优选地，步骤(1)所述多肽纳米材料溶液中多肽纳米材料的摩尔浓度为10-5～10-2M；
优选地，步骤(2)所述缓冲溶液包括PBS缓冲液。
8.根据权利要求6或7所述的受体-配体诱导自组装方法，其特征在于，步骤(3)中所述血管内皮生长因子共受体的浓度为10-7～10-5M；
优选地，步骤(3)中所述自组装在超声条件下进行；
优选地，所述超声的时间为1～5min；
优选地，所述超声的频率为30～50KHz，优选为40KHz；
优选地，步骤(3)所述超声后还包括静置的操作；
优选地，所述静置为在20～30℃下保持8～120h。
9.根据权利要求6～8任一项所述的受体-配体诱导自组装方法，其特征在于，所述受体-配体诱导自组装方法包括如下步骤：
(1)将多肽纳米材料溶于二甲基亚砜中，所述多肽纳米材料的结构如式V所示，得到多肽纳米材料溶液，所述多肽纳米材料溶液中多肽纳米材料的摩尔浓度为10-5-10-2M；
(2)将步骤(1)得到的多肽纳米材料溶液加入PBS缓冲溶液中，多肽纳米材料自组装为纳米颗粒；
(3)而后加入神经菌毛素，超声1～5min后于20～30℃保持8～120h，所述多肽纳米材料的靶向单元与神经菌毛素结合诱导自组装，所述多肽纳米材料自组装为纳米纤维。
10.如权利要求1～4任一项所述的多肽纳米材料在制备脉络膜新生血管治疗药物中的应用。
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