CN112409376A - 一种基于dcaf15的蛋白降解靶向嵌合体及其制备方法和应用 - Google Patents

一种基于dcaf15的蛋白降解靶向嵌合体及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种E3连接酶DCAF15小分子配体化合物，以及含有它们的双官能团化合物。根据本发明描述，该类双官能团化合物是基于蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)技术用作靶蛋白的降解剂。本发明描述了这样一类双官能团化合物，一端含有与E3连接酶DCAF15结合的配体，另一端含有与靶蛋白结合的配体，通过适当的连接基团连接使得靶蛋白被置于E3连接酶DCAF15附近实现靶蛋白泛素化降解。该类可合成的化合物在体内外均具有良好的降解靶蛋白的药理学活性，因此在降解各种致病蛋白方面有着广泛的应用前景。

Description

一种基于DCAF15的蛋白降解靶向嵌合体及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一类双官能团化合物，其被发现能泛素化并降解靶蛋白。具体地，本发明涉及这样的化合物：其一端包含结合E3泛素连接酶DCAF15的配体(定义
Figure BDA0002172859150000011
基团)，另一端包含结合靶蛋白质的配体(定义
Figure BDA0002172859150000012
基团)，通过适当
Figure BDA0002172859150000013
连接基团使得靶蛋白被置于E3泛素连接酶DCAF15附近，引起靶蛋白质泛素化并最终被降解。
背景技术
泛素化作为蛋白质翻译后修饰方式之一，在蛋白定位、代谢、功能调控和降解中都发挥着至关重要的作用，泛素是维持细胞内蛋白质稳态的关键因子之一。基于泛素-蛋白酶体系统的蛋白靶向降解是目前药物研发领域的一个热门方向。蛋白降解靶向嵌合体技术(PROTAC)是利用双官能团小分子诱导蛋白质降解的一项技术，该技术的基本原理在于利用细胞自带的“泛素-蛋白酶体”降解系统，来达到降解靶标蛋白的目的。PROTAC分子可通过泛素-蛋白酶体系统利用细胞自身的蛋白质降解机制从细胞中去除特定的疾病相关蛋白，从而迅速降低疾病相关蛋白的水平，是一种靶向治疗的替代方案。与传统的蛋白质抑制剂不同，PROTAC分子是一类双官能团的活性化合物，一个活性端可以与靶蛋白紧密结合，另一个活性端用来与E3泛素连接酶相结合，两个活性端通过一个合适的连接基团连接。该分子通过两个活性端使得靶蛋白与E3泛素连接酶在空间距离上被拉近，从而使靶蛋白泛素化，并最终被蛋白酶体识别并降解。理论上PROTAC分子只提供结合活性，属于事件驱动药物，有别于传统的占据驱动药物。不需要直接抑制靶蛋白的功能活性，又可以重复利用将多个靶蛋白泛素化降解直到PROTAC分子被代谢，ROTAC分子的循环利用特性类似于酶或者催化剂。因此理论上PROTAC分子不需要很高的剂量便能产生效果，同时也能避免长期抑制带来的靶蛋白产生耐药性等问题。但要使该项技术成功应用于新药研发领域，有几个关键挑战必须克服：第一，找到一个能与特定E3连接酶结合的配体，才能实现募集特定E3泛素连接酶并泛素化靶标蛋白；第二：PROTAC分子的分子量相对于传统小分子药物来说更大，而且分子中存在较多氢键供体和受体，与传统小分子药物的研发存在矛盾。对小分子抑制剂来说，与靶标蛋白结合能力的强弱决定了小分子药效的高低，而对PROTAC分子来讲，其功能发挥包含了多个步骤，最关键的是形成一个稳定的“靶蛋白-PROTAC-E3泛素连接酶”三元复合物。第三，由于PROTAC作用机制是彻底降解靶蛋白，脱靶毒性是个需要考虑的问题，同时彻底降解蛋白质相对于仅仅抑制靶蛋白是否会产生更为严重的毒副作用，这些都有待于未来的临床试验来进一步验证。
针对第一个关键挑战，虽然目前已有600多种E3泛素连接酶被发现，但目前已成功用于PROTAC技术的配体只有靶向MDM2的nutlins，靶向凋亡抑制蛋白IAPs的Bestatin，靶向CRBN的Thalidomide、Pomalidomide系列化合物，靶向VHL的VHL-298等四类。其中只有基于VHL和CRBN这两种E3连接酶的PROTAC分子取得了广泛应用，但是基于CRBN配体Thalidomide系列结构的PROTAC分子选择性较差，并且这类PROTAC分子能同时降解CRBN的天然底物IKAF1/IKZF3(大多时候被认为是一种脱靶效应)。而VHL配体的分子量过大，比表面积过高。这都不利于PROTAC分子的成药性。因此，开发成药性更高的新E3连接酶的小分子配体是PROTAC技术未来发展的方向之一。
最近多篇文章表明，DCAF15是一个与VHL和CRBN同属一个亚家族的E3连接酶，在肿瘤蛋白降解中发挥重要作用。indisulam及与其类似的磺胺类化合物可以作为E3连接酶DCAF15的调节剂，并且该类磺胺类化合物能够通过DCAF15诱导RBM39(CAPERα)的泛素化并最终被蛋白酶体降解。通过RBM39的免疫沉淀反应偶联质谱分析显示，通过磺胺类药物的作用，RBM39被招募至CRL4DCAF15E3泛素连接酶复合物，导致其发生泛素化并降解。因此，磺胺类化合物可能是一种DCAF15的小分子配体。
发明内容
为发现更多可用于PROTAC的E3连接酶，提高新型PROTAC分子的成药性，本发明的主要创新点是首次将DCAF15作为应用于PROTAC技术新的E3连接酶。基于靶蛋白BET抑制剂JQ-1设计并合成新的PROTAC分子实现了对靶蛋白的降解，从而证明了DCAF15在PROTAC技术中运用的可行性。同时，本发明证实可利用磺胺类小分子作为E3连接酶DCAF15小分子配体的可行性，并制成“Drug-like”的PROTAC分子，从而提供将蛋白质募集至E3连接酶DCAF15以进行泛素化和降解的方式，从而最终提供基于这种蛋白质降解的治疗方法。
本发明的一个目的是提供具有将内源蛋白质募集至E3泛素连接酶DCAF15以进行降解的化合物。
本发明的另一目的是提供调节有需要的个体或对象内源蛋白质降解并且可用于治疗通过降解蛋白质调节的疾病状态或状况的化合物。
本发明的又一目的是提供利用根据本发明所述的化合物鉴定降解生物学系统中的目标蛋白质的效果的方法。
本发明的再一方面是提供治疗有需要的个体的方法，其中靶向的蛋白质降解将产生目的治疗效果。
本发明的另一目的是提供可用于第一医疗应用的化合物和组合物。
本发明的再一方面是提供用于治疗患者的化合物和/或组合物，其中靶向的蛋白质降解将产生目的治疗效果。
本发明基于如下发现：细胞自带的“泛素-蛋白酶体”蛋白至降解系统具有清理细胞中变异、变性、受损或有害的蛋白，维持各种蛋白正常水平的能力。泛素在E3连接酶的引导下与靶蛋白在空间上被拉近，泛素会转移至靶蛋白的赖氨酸残基上对靶蛋白实现泛素化，多聚泛素化的靶蛋白能被蛋白酶体识别并降解。因此，本发明提供通过E3连接酶DCAF15利用PROTAC技术实现靶蛋白泛素化并降解的化合物和组合物及其应用。
本发明描述了一类双官能团化合物，能够招募内源性蛋白到E3连接酶附近致使其降解。尤其是本发明提供蛋白靶向降解嵌合分子PROTAC，能够靶向多种多肽或蛋白质并将其泛素化降解。本发明提供的化合物优势在于具有广泛的药理学活性，与任何蛋白质类或家族的靶向多肽的降解/抑制相一致。此外，本说明书提供了使用本说明书所述有效数量的化合物治疗或改善疾病状况的方法，比如癌症。
本发明提供一种可用于调节蛋白质活性的化合物。该化合物为双官能团化合物，包含一个泛素连接酶结合部分(E3泛素连接酶配体即
Figure BDA0002172859150000031
基团)，以及一个靶蛋白结合部分(蛋白/多肽结合配体即
Figure BDA0002172859150000041
基团)，通过适当的连接基团
Figure BDA0002172859150000042
连接使之能形成稳定的“靶蛋白-双官能团化合物-E3连接酶”三元复合物将目标蛋白/多肽被置于E3连接酶附近，导致该蛋白的降解。
在优选的实施例中，
Figure BDA0002172859150000043
是DCAF15配体(即
Figure BDA0002172859150000044
)。
根据本发明的实施例，本发明涉及根据下列结构的化合物：
Figure BDA0002172859150000045
其中，
Figure BDA0002172859150000046
表示能够特异性结合到靶蛋白的配体，
Figure BDA0002172859150000047
表示能够募集E3连接酶的配体，
Figure BDA0002172859150000048
表示将
Figure BDA0002172859150000049
和
Figure BDA00021728591500000410
连接起来的连接基团。
根据本发明的实施例，
Figure BDA00021728591500000411
是DCAF15泛素连接酶配体，即
Figure BDA00021728591500000412
本发明涉及根据下列一般结构的化合物：包括其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药：
Figure BDA00021728591500000413
其中，
Figure BDA00021728591500000414
表示能够特异性结合到靶蛋白的配体，
Figure BDA00021728591500000415
表示能够特异性募集E3连接酶DCAF15的配体。
Figure BDA00021728591500000416
表示连接基团，其可存在或不存在，存在时，
Figure BDA00021728591500000417
表示将
Figure BDA00021728591500000418
和
Figure BDA00021728591500000419
之间的连接基团。
在本发明的某些实施例中，其中
Figure BDA00021728591500000420
是
Figure BDA00021728591500000421
基团，其可与
Figure BDA0002172859150000051
基团相同或不同并且直接或通过连接基团
Figure BDA0002172859150000052
连接于
Figure BDA0002172859150000053
基团，化合物类似于二聚化合物，其中化合物两端均包含DCAF15结合部分。
根据本发明的实施例，
Figure BDA0002172859150000054
和
Figure BDA0002172859150000055
存在时，各自独立地具有以下特征结构：
Figure BDA0002172859150000056
本发明中，
Figure BDA0002172859150000057
的A和B分别是对应的某个环，且R1、R2被任意一个或多个对应基团修饰以直接或通过所述连接基团
Figure BDA0002172859150000058
共价地结合到所述
Figure BDA0002172859150000059
基团，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药。
本发明中，环A和B分别为环烷基，杂环烷基，芳香环，杂环芳基；
R1和R2分别选自下列基团中的任意一个或多个：H，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6烷氧基，卤素，C1-6卤代烷基，C1-6烷基氰基，C1-6烷基羟基，-OR2a，-NR2bR2d，-C1-6烷基-NR2bR2d，-C(O)R1a，-C(O)R2d，-C(O)OR2a，-C1-6烷基-C(O)OR2b，-OC(O)R2b，-OC(O)OR2b，-C(O)NR2aR2b，-C(O)N(OH)R2b，-NR2bC(O)OR2c，-C1-6烷基-NR2bC(O)R2c，-OC(O)NR2bR2c，-NR2bC(O)NR2bR2c，-NR2bC(NR2b)NR2bR2c，-C(O)NR2bC(O)R2b，-C1-6烷基-NR2bC(O)OR2c，-SR2a，-SO2R2b，-SO2OR2b，-SO2NR2bR2c，-NR2bSO2R2b，-P(O)(OR2b)2，-B(OR2b)，-CN，-NH2，-NO2，-N3，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-杂环烷基，C1-6烷基-芳基，C1-6烷基-O-芳基，C1-6烷基-杂环芳基，杂环芳基-芳基；其中，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-2个R2b基团取代；
其中，R1a选自下列基团中的任意一个：-OR1b或-NR1bR1c；
R1b和R1c分别选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-芳基，其中，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-4个R1d基团取代；
R1d选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，C1-6烷氧基，-NO2；
R2a选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-杂环烷基，C1-6烷基-芳基，C1-6烷基-杂环芳基，其中，所述环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-2个R2b取代基；
R2b和R2c分别选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基；
R2d选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-芳基，C1-6烷基-杂环芳基，其中，所述环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-4个R2b基团取代。
优选地，
环A和B分别独立地为苯环，5-15个原子组成的杂芳基中的任意一个，其中，所述5-15个原子组成的杂芳基选自吡咯、噻吩、呋喃、噁唑、咪唑、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、喹啉、嘌呤。
R1、R2分别独立地为H，F，Cl，Br，I，CN，OH，NO2，NH2，COOH，C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧基，C2-6烯基，C2-6炔基、C3-6环烷基，-C(O)R1a，-C(O)R2d，-C(O)OR2a，-C(O)NR2aR2b，-NR2bC(O)OR2c，-SR2a，-SO2R2b，-SO2OR2b，-SO2NR2bR2c中的任意一个或多个；
其中，R1a，R2a，R2b，R2c，R2d的定义同上。
根据本发明的实施例，
Figure BDA0002172859150000061
是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0002172859150000071
根据本发明的实施例，本发明所述的优选的化合物可根据下式所示的任意一个或多个：
Figure BDA0002172859150000072
其中，R1PC，R2PC，R3PC，R4PC，R5PC，R6PC，R7PC，R8PC和R9PC中的任意一个是
Figure BDA0002172859150000073
基团，其余独立地是：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基。
本发明中，R1PC，R2PC，R3PC，R4PC，R5PC，R6PC，R7PC，R8PC和R9PC中的任意一个是
Figure BDA0002172859150000074
基团，其余的优选为氢。
根据本发明的实施例，在某些优选实施例中涉及根据下列化学结构的化合物：
Figure BDA0002172859150000081
其中，R5PC，R6PC中的任意一个是
Figure BDA0002172859150000082
基团，其余的是氢；
或
Figure BDA0002172859150000083
其中R5PC，R6PC中的任意一个是
Figure BDA0002172859150000084
基团，其余的是氢。
根据本发明的实施例，
Figure BDA0002172859150000085
为C1-30烷基，C1-30卤代烷基，C1-30烷氧基，C2-30烯基，C2-30炔基。
根据本发明的实施例，基团
Figure BDA0002172859150000086
涉及以下化学结构：
-X-Y-Z-
X表示连接到
Figure BDA0002172859150000087
的部分，Z表示连接到
Figure BDA0002172859150000088
的部分，X和Z分别独立地为
Figure BDA0002172859150000089
Figure BDA00021728591500000810
中的任意一个。优选地，为
Figure BDA00021728591500000811
其中，Y表示X和Z之间的连接基团，其特征在于Y为1-20个碳原子的烷基，卤代烷基，烷氧基，或其间任意位置含有一个或者多个
Figure BDA00021728591500000812
Figure BDA0002172859150000091
基团。优选地，为
Figure BDA0002172859150000092
根据本发明的实施例，
Figure BDA0002172859150000093
基团是结合靶蛋白质的基团，
Figure BDA0002172859150000094
基团是能够特异性结合任意靶蛋白质的配体，包括结构蛋白、受体、酶、细胞表面蛋白质、细胞整体功能相关蛋白质，包括下列涉及的蛋白质：催化活性、芳香酶活性、运动活性、解旋酶活性、代谢过程(合成代谢、分解代谢)、抗氧化剂活性、蛋白水解、生物合成、具有下列的蛋白质：激酶活性、氧化还原酶活性、转移酶活性、水解酶活性、裂解酶活性、异构酶活性、连接酶活性、酶调节因子活性、信号转导活性、结构分子活性、结合活性(蛋白质、脂质糖)、受体活性、细胞运动性、膜融合、细胞通信、生物学过程调节、发育、细胞分化、刺激响应、行为蛋白质、细胞粘附蛋白质、下列涉及的蛋白质：细胞死亡、下列涉及的蛋白质：蛋白质转运体活性、核转运、离子转运体活性、通道转运体活性、载体活性、通透酶活性、分泌活性、电子转运体活性、发病、分子伴侣调节因子活性、核酸结合活性、转录调节因子活性、胞外组织和生物发生活性和翻译调节因子活性。
根据本发明的实施例，在具体实施例中，
Figure BDA0002172859150000095
基团是靶向包含BET布罗莫结构域的蛋白质BRD2、BRD3、BRD4的化合物，根据以下化学结构：
Figure BDA0002172859150000096
其中，R表示
Figure BDA0002172859150000097
基团；
或靶向FKBP的化合物，根据下列化学结构：
Figure BDA0002172859150000101
其中，R表示
Figure BDA0002172859150000102
基团；
或靶向DCAF15蛋白本身(
Figure BDA0002172859150000103
是
Figure BDA0002172859150000104
)的化合物，根据以下化学结构：
Figure BDA0002172859150000105
其中，R表示
Figure BDA0002172859150000106
基团。
根据本发明的实施例，在具体实施例中提供了下列双官能团化合物(包括其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药)：
Figure BDA0002172859150000107
(T)-N-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)丙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000111
(S)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000112
(S)-N-(4-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)丁基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000113
(S)-N-(5-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)戊基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000114
(S)-N-(6-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)己基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000121
(S)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000122
(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000123
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000131
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000132
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-20-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000133
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十三烷-23-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000134
(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000141
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000142
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十七烷-17-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000143
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-20-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000151
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十三烷-23-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000152
(S)-4-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)磺胺酰基)-N-(5-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)戊基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000153
(S)-4-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000161
(S)-3-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)磺胺酰基)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000162
(S)-3-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂-14基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000163
(R)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000171
(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-((2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000172
3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)-N-(1-(3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000173
4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)-N-(1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯基)-1-氧代-5,8,11,14-四氧杂-2-氮杂十六烷-16-基)苯甲酰胺；
Figure BDA0002172859150000174
(R)-1-(3-(2-((5-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯甲酰胺基)戊基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure BDA0002172859150000181
(R)-1-(3-(2-((2-(2-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure BDA0002172859150000182
(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,15-二氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure BDA0002172859150000183
(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,21-二氧代-5,8,11,14,17-五氧杂-2,20-二氮杂二十二烷-22-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure BDA0002172859150000191
(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,24-二氧代-5,8,11,14,17,20-六氧杂-2,20-二氮杂二十五烷-25-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯。
本发明还提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，药物组合物包括上述任一项所述的化合物，组合药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂，和任选地进一步组合另外的生物活性剂。
本发明还提出了一种化合物库，包括上述任一项所述的化合物，组合药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂，和任选地进一步组合另外的生物活性剂。
本发明还提出了在有需要的个体体内调节靶蛋白的蛋白质活性的方法，包括给予所述个体一定量的所述的化合物、或药物组合物、或化合物库。
本发明还提供一种治疗个体疾病状态或状况的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的所述的化合物、或药物组合物、或化合物库，以调节所述个体体内的蛋白质活性。
其中，所述疾病状态或状况是指失调蛋白质活性引起疾病状态或状况。
其中，所述疾病是鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、肝细胞癌、和肾细胞癌、膀胱、肠、乳腺、宫颈、结肠、食管、头、肾、肝、肺、颈、卵巢、胰腺、前列腺和胃的癌症；白血病；良性和恶性淋巴瘤，具体地伯基特淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；良性和恶性黑素瘤；骨髓增殖性疾病；肉瘤，包括尤文肉瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、脂肉瘤、肌肉瘤、周围神经上皮瘤、滑膜肉瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、神经节瘤、神经节神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、松果体细胞瘤、脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经纤维瘤和神经鞘瘤；肠癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、卵巢癌、睾丸癌、甲状腺癌、星形细胞瘤、食管癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、黑素瘤；骨肉瘤、霍奇金病、维尔姆斯瘤或畸胎瘤。
优选地，所述癌症为淋巴瘤细胞SUDHL4。
本发明还提出了一种降解细胞中的靶蛋白的方法，包括使所述细胞暴露于有效量的所述的化合物、或药物组合物、或化合物库。
所述靶蛋白为BRD4、FKBP、RBM39。
本发明还提出了一种降解有需要的个体体内的靶蛋白的方法，包括给予所述个体有效量的所述的化合物、或药物组合物、或化合物库。
所述靶蛋白为BRD4、FKBP、RBM39。
本发明还提出了一种通过DCAF15降解蛋白质或多肽治疗疾病的方法，包括给予个体或对象任意一项上述化合物、或药物组合物、或化合物库，任选地组合另外的生物活性剂用于疾病的治疗，疾病类型主要是癌症。
本发明还提出了上述任一项所述化合物、或药物组合物、或化合物库在制备药物中的用途，所述药物用于通过DCAF15降解相应的靶蛋白。
所述靶蛋白为BRD4、FKBP、RBM39。
本发明还提出了上述任一项所述化合物、或药物组合物、或化合物库在制备用于调节有需要的个体体内的靶蛋白活性的药物中的应用。
本发明还提出了上述任一项所述化合物、或药物组合物、或化合物库在制备降解细胞中的靶蛋白的药物中的应用。
本发明还提出了上述任一项所述化合物、或药物组合物、或化合物库在制备降解有需要的个体体内的靶蛋白的药物中的应用。
本发明还提出了上述任一项所述化合物、或药物组合物、或化合物库在制备治疗个体疾病状态或状况的药物中的应用。
所述药物用于抑制癌细胞的生长、增殖、迁移、浸润、克隆形成，促进癌细胞的凋亡。
本发明的有益效果在于：本发明提供的基于E3连接酶DCAF15小分子配体双功能团化合物在体内外均具有良好的降解靶蛋白的药理学活性，在降解各种致病蛋白方面有着广泛的应用前景。
附图说明
图1是根据本发明实施例中所示部分化合物在SUDHL4淋巴瘤细胞系中对靶蛋白BRD4降解情况示意图；
图2是根据本发明实施例中所示化合物DP012对SUDHL4淋巴瘤细胞增殖的影响示意图。具体的，A为DP012相较于两端配体JQ1、E7820对SUDHL4淋巴瘤细胞生长影响示意图；B为DP012对SUDHL4淋巴瘤细胞中BRD4蛋白、BRD4重要下游c-MYC、细胞凋亡标志蛋白切割型的PARP和Caspase3的影响示意图；C为DP012对SUDHL4淋巴瘤细胞凋亡影响示意图；D为DP012、JQ1、E7820及DP021(DP012的对映异构体无法结合到BRD4蛋白)在不同浓度条件下对BRD4蛋白、BRD4重要下游c-MYC、细胞凋亡标志蛋白切割型的PARP和Caspase3的影响示意图；
图3是根据本发明实施例中所示化合物DP012抑制荷瘤小鼠淋巴瘤的生长并在小鼠体内降解BRD4蛋白示意图。具体的，A为荷瘤小鼠肿瘤体积随给药时间变化示意图；B为荷瘤小鼠肿瘤重量相较于空白组的变化示意图；C为给药DP012后肿瘤组织中BRD4、c-MYC、RBM39蛋白相较于空白组的变化示意图；D为给药DP012后肿瘤组织中BRD4、c-MYC、RBM39蛋白水平相较于空白组统计结果示意图；E为给药DP012后肿瘤组织中BRD4、c-MYC、KI67相较于空白组的免疫组化染色结果示意图。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施例中有涉及到降解FKBP、DCAF15的化合物的制备(实施例1-23至实施例1-29)。
低温反应装置为EYELA(PSL-1810)磁力搅拌低温恒温水槽；EYELA(N-1100)旋转蒸发仪；实验所得化合物的纯度结果均来自于Agilent 1200series LC system高效液相色谱分析仪(色谱条件：Zorbax XDB-C18(4.6×150nm，5μm)，柱温40℃，流动相为MeOH/H2O，运行流速1.5mL/min，紫外检测波长为254nm，进样量10μL)；核磁共振波谱仪为Bruker 500型(内标：TMS，使用溶剂为DMSO-d6)；反应中间体以及终产物的纯化均使用层析色谱柱(所用硅胶200-300目)，所使用的硅胶购买于青岛海洋化工厂。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除特别说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并用TLC跟踪反应进度，后处理均经过饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。
实施例一：各个化合物的制备
实施例1-1、(S)-N-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)丙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP001)的合成
Figure BDA0002172859150000221
取7-氨基-4-甲基-1H-吲哚-3-甲腈(200mg，1.17mmol)，吡啶(232mg，2.93mmol)溶于5mLTHF溶液，冰浴下搅拌10min，4-(氯磺酰)苯甲酸(388mg，1.76mmol)溶于5mLTHF溶液中，加至反应体系。R.T.反应过夜。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酸(304mg，产率73％)。
将4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酸(25mg，0.07mmol)溶于2mL DMF中，加入N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺(14mg，0.08mmol)，DIEA(27mg，0.21mmol)，HATU(29mg，0.08mmol)，R.T.反应两小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得产物(3-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(25mg，产率69％)。
将(3-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(25mg，0.05mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入0.5mL三氟乙酸，R.T.反应2h。反应完全后，蒸干溶剂，直接投下一步；将上一步反应产物溶于3mL DMF中，加入(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸(25mg，0.07mmol)，DIEA(33mg，0.25mmol)，HATU(29mg，0.07mmol)，R.T.反应2h。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到(S)-N-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)丙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP001)(21mg，产率43.3％)：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.26(s,1H),10.30(s,1H),8.69(t,J＝5.6Hz,1H),8.30(t,J＝5.7Hz,1H),8.16(s,1H),7.92(d,J＝8.2Hz,2H),7.81(d,J＝8.1Hz,2H),7.46(d,J＝8.5Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),6.77(d,J＝7.8Hz,1H),6.67(d,J＝7.9Hz,1H),4.51(dd,J＝8.2,6.0Hz,1H),3.31–3.18(m,2H),2.59(s,3H),2.55(s,3H),2.40(s,3H),1.75–1.67(m,2H),1.60(s,3H).
实施例1-2、(S)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP002)的合成
Figure BDA0002172859150000231
取7-氨基-4-甲基-1H-吲哚-3-甲腈(81mg，0.48mmol)，吡啶(94mg，1.19mmol)溶于3mLTHF溶液，冰浴下搅拌10min，3-(氯磺酰基)苯甲酸(157mg，0.71mmol)溶于3mLTHF溶液中，加入反应液。R.T.反应过夜。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酸(126mg，产率75％)；将3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酸(25mg，0.07mmol)溶于2mL DMF中，加入[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(14mg，0.07mmol)，DIEA(27mg，0.21mmol)，HATU(29mg，0.08mmol)，R.T.反应两小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得产物叔(2-(2-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(26mg，产率72％)；将(2-(2-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(26mg，0.05mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入0.5mL三氟乙酸，R.T.反应2h。反应完全后，蒸干溶剂，直接投下一步；将上一步反应产物溶于3mLDMF中，加入(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸(25mg，0.07mmol)，DIEA(33mg，0.25mmol)，HATU(29mg，0.07mmol)，R.T.反应2h。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到(S)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP002)(19mg，产率40％)：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(s,1H),10.02(s,1H),8.73(t,J＝5.5Hz,1H),8.31(t,J＝5.7Hz,1H),8.26–8.23(m,1H),8.17(s,1H),8.09(d,J＝7.8Hz,1H),7.77(d,J＝7.9Hz,1H),7.60–7.55(m,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,2H),7.41(d,J＝8.2Hz,2H),6.75(d,J＝7.7Hz,1H),6.52(d,J＝7.5Hz,1H),4.51(dd,J＝8.0,6.1Hz,1H),3.60–3.42(m,8H),3.29–3.22(m,2H),,2.59(s,3H),2.55(s,3H),2.39(s,3H),1.60(s,3H).
实例1-3、(S)-N-(4-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)丁基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP003)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为N-叔丁氧羰基-1,4-丁二胺，按实施例1-1的方法制备DP003，产率64.1％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(d,J＝3.2Hz,1H),10.05(s,1H),8.65(t,J＝5.6Hz,1H),8.25–8.12(m,2H),7.94(d,J＝8.5Hz,2H),7.77(d,J＝8.5Hz,2H),7.47(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(d,J＝8.6Hz,2H),6.77(d,J＝8.7Hz,1H),6.54(d,J＝7.8Hz,1H),4.51(dd,J＝8.2,6.0Hz,1H),3.32–3.08(m,6H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.60(s,3H),1.59–1.46(m,4H).
实例1-4、(S)-N-(5-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)戊基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP004)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为N-(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯，按实施例1-1的方法制备DP004，产率27.1％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),10.05(s,1H),8.63(t,J＝5.6Hz,1H),8.22–8.16(m,2H),7.94(d,J＝7.7Hz,2H),7.76(d,J＝7.7Hz,2H),7.49(d,J＝7.8Hz,2H),7.42(d,J＝7.9Hz,2H),6.77(d,J＝7.7Hz,1H),6.54(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.0,6.2Hz,1H),3.31–3.03(m,6H),2.60(s,3H),2.56(s,3H),2.41(s,3H),1.62(s,3H),1.58–1.31(m,6H).
实施例1-5、(S)-N-(6-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)己基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP005)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为N-(6-氨基己基)氨基甲酸叔丁酯，按照实施例1-1的方法制备DP005，产率21.4％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),10.06(s,1H),8.62(t,J＝5.6Hz,1H),8.21–8.15(m,2H),7.96–7.90(m,2H),7.79–7.74(m,2H),7.50–7.46(m,2H),7.45–7.39(m,2H),6.80–6.74(m,1H),6.54(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.1,6.1Hz,1H),3.29–3.03(m,6H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.39(s,3H),1.61(s,3H),1.54–1.41(m,5H),1.37–1.28(m,3H).
实施例1-6、(S)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DO006)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯，按照实施例1-1的方法制备DP006，产率25.5％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(d,J＝3.2Hz,1H),10.04(s,1H),8.70(t,J＝5.5Hz,1H),8.29(t,J＝5.6Hz,1H),8.18(d,J＝3.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.5Hz,2H),7.74(d,J＝8.5Hz,2H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(d,J＝8.5Hz,2H),6.76(d,J＝8.3Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.2,6.0Hz,1H),3.57(t,J＝6.0Hz,2H),3.54–3.42(m,4H),3.33–3.11(m,4H),2.59(s,3H),2.55(s,3H),2.40(s,3H),1.60(s,3H).
实施例1-7、(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP007)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯，按照实施例1-1的方法制备DP007，产率23.9％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),10.05(s,1H),8.73(t,J＝5.9Hz,1H),8.28(t,J＝6.1Hz,1H),8.18(s,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.76(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.5Hz,2H),7.42(d,J＝8.7Hz,2H),6.77(d,J＝7.7Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.1,6.0Hz,1H),3.64–3.17(m,14H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.61(s,3H).
实施例1-8、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP008)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯，按照实施例1-1的方法制备DP008，产率33.0％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),10.04(s,1H),8.71(t,J＝5.6Hz,1H),8.27(t,J＝5.9Hz,1H),8.18(d,J＝3.0Hz,1H),7.94(d,J＝8.1Hz,2H),7.76(d,J＝8.2Hz,2H),7.48(d,J＝8.2Hz,2H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),6.77(d,J＝7.7Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51-4.49(m,1H),3.57–3.49(m,10H),3.47–3.38(m,4H),3.31–3.18(m,4H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-9、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十七烷-17-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP009)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为16-氨基-5,8,11,14-四氧杂-2-氮杂十六烷酸1,1-二甲基乙酯，按实施例1-1的方法制备DP009，产率27.1％。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(s,1H),10.04(s,1H),8.71(t,J＝5.7Hz,1H),8.27(t,J＝5.8Hz,1H),8.17(s,1H),7.93(d,J＝8.2Hz,2H),7.76(d,J＝8.1Hz,2H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),6.76(d,J＝7.8Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.0,6.0Hz,1H),3.57–3.19(m,22H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-10、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-20-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP010)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为O-(2-氨基乙基)-O’-[2-(叔丁氧羰基-氨基)乙基]四乙二醇，按实施例1-1的方法制备DP010，产率33.6％。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(d,J＝3.2Hz,1H),10.04(s,1H),8.70(t,J＝5.6Hz,1H),8.27(t,J＝5.7Hz,1H),8.18(d,J＝2.9Hz,1H),7.94(d,J＝8.2Hz,2H),7.76(d,J＝8.1Hz,2H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),6.77(d,J＝7.7Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.0,6.0Hz,1H),3.56–3.37(m,24H),3.30–3.21(m,2H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-11、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十三烷-23-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DO011)的合成
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺替换为O-(2-氨基乙基)-O'-[2-(叔丁氧羰基-氨基)乙基]六聚乙二醇，按照实施例1-1的方法制备DP011，产率35.8％。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(d,J＝3.3Hz,1H),10.04(s,1H),8.71(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(t,J＝5.7Hz,1H),8.18(d,J＝2.9Hz,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.77(d,J＝8.3Hz,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(d,J＝8.3Hz,2H),6.77(d,J＝7.7Hz,1H),6.53(d,J＝7.6Hz,1H),4.51(dd,J＝8.1,6.0Hz,1H),3.63–3.16(m,30H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.41(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-12、(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP012)的合成
将[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯替换为2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯，按照实施例1-2的方法制备DP012,产率26.7％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(d,J＝3.2Hz,1H),10.02(s,1H),8.77(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(t,J＝5.7Hz,1H),8.24(s,1H),8.17(d,J＝3.0Hz,1H),8.07(d,J＝7.7Hz,1H),7.78(d,J＝7.9Hz,1H),7.65–7.59(m,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),6.76(d,J＝7.8Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝7.9,6.2Hz,1H),3.60–3.39(m,10H),3.31–3.18(m,4H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.61(s,3H).
实施例1-13、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP013)的合成
将[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯替换为(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯，按实施例1-2的方法制备DP013，产率30.8％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(d,J＝3.1Hz,1H),10.02(s,1H),8.76(t,J＝5.6Hz,1H),8.27(t,J＝5.7Hz,1H),8.24(s,1H),8.18(d,J＝3.1Hz,1H),8.07(d,J＝7.9Hz,1H),7.79(d,J＝7.7Hz,0H),7.65–7.58(m,1H),7.48(d,J＝8.7Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.0,6.1Hz,1H),3.57–3.18(m,18H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-14、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十七烷-17-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP014)的合成
将[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯替换为16-氨基-5,8,11,14-四氧杂-2-氮杂十六烷酸1,1-二甲基乙酯，按照1-2的方法制备DP014，产率27.6％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(d,J＝3.2Hz,1H),10.02(s,1H),8.76(t,J＝5.6Hz,1H),8.27(t,J＝5.7Hz,1H),8.24(s,1H),8.17(d,J＝3.0Hz,1H),8.07(d,J＝7.8Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.64–7.59(m,1H),7.48(d,J＝8.5Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),6.76(d,J＝7.7Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.1,6.0Hz,1H),3.59–3.47(m,14H),3.47–3.38(m,4H),3.33–3.18(m,4H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-15、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-20-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP015)的合成
将[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯替换为O-(2-氨基乙基)-O’-[2-(叔丁氧羰基-氨基)乙基]四乙二醇，按实施例1-2的方法制备DP015，产率29.1％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(d,J＝3.1Hz,1H),10.02(s,1H),8.76(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(t,J＝5.7Hz,1H),8.24(s,1H),8.17(d,J＝2.8Hz,1H),8.07(d,J＝7.9Hz,1H),7.79(d,J＝8.1Hz,1H),7.65–7.59(m,1H),7.48(d,J＝8.7Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),6.76(d,J＝8.3Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.1,6.0Hz,1H),3.57–3.17(m,26H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-16、(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十三烷-23-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP016)的合成
将[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯替换为O-(2-氨基乙基)-O'-[2-(叔丁氧羰基-氨基)乙基]六聚乙二醇，按实施例1-2的方法制备DP016，产率33.4％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(d,J＝3.2Hz,1H),10.02(s,1H),8.76(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(t,J＝5.7Hz,1H),8.24(s,1H),8.17(d,J＝2.9Hz,1H),8.07(d,J＝7.8Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,1H),7.65–7.58(m,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),6.76(d,J＝7.9Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝8.1,6.0Hz,1H),3.59–3.17(m,30H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.41(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-17、(S)-4-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)磺胺酰基)-N-(5-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)戊基)苯甲酰胺(DP017)的合成
Figure BDA0002172859150000291
将7-硝基吲哚(1g，6.15mmol)，N-氯代酞酰亚胺(1.1g，6.25mmol)，HCl(0.1mmol)溶于THF(5mL)，R.T.反应三小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，蒸干得产物3-氯-7-硝基-1H-吲哚(1.1g，产率90.7％)，直接用于下一步反应；将3-氯-7-硝基-1H-吲哚(300mg，1.53mmol)，铁粉(256mg，4.58mmol)，氯化铵(816mg，15.26mmol)溶于乙醇/水(15mL/10mL)的混合溶液中，80℃回流反应2h。反应完全后，减压蒸馏出去乙醇，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到3-氯-1H-吲哚-7-胺(250mg，产率98.3％)；
取3-氯-1H-吲哚-7-胺(275mg，1.65mmol)，吡啶(326mg，4.13mmol)溶于5mL THF溶液，冰浴下搅拌10min，4-(氯磺酰)苯甲酸(546mg，2.48mmol)溶于5mL THF溶液中，加入反应液。R.T.反应过夜。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到4-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酸(446mg，产率77％)；
将4-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酸(30mg，0.09mmol)溶于2mLDMF中，加入N-(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯(19mg，0.09mmol)，DIEA(33mg，0.26mmol)，HATU(36mg，0.09mmol)，R.T.反应两小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得产物(5-(4-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，产率65.6％)；
将(5-(4-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酰胺基)戊基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.06mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入0.5mL三氟乙酸，R.T.反应2h。反应完全后，蒸干溶剂，直接投下一步；
将上一步反应产物溶于3mL DMF中，加入(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸(25mg，0.07mmol)，DIEA(33mg，0.25mmol)，HATU(29mg，0.07mmol)，R.T.反应2h。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到(S)-4-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(5-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)戊基)苯甲酰胺(DP017)(20mg，产率39.2％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.12(d,J＝5.9Hz,1H),10.13(s,1H),8.61(t,J＝5.6Hz,1H),8.18(t,J＝5.7Hz,1H),7.97–7.87(m,2H),7.80(d,J＝8.2Hz,2H),7.51–7.47(m,3H),7.43–7.40(m,2H),7.26(d,J＝7.9Hz,1H),6.97–6.92(m,1H),6.81–6.76(m,1H),4.50(dd,J＝8.2,6.0Hz,1H),3.29–3.04(m,6H),2.59(s,3H),2.41(s,3H),1.62(s,3H),1.55–1.45(m,4H),1.38–1.31(m,2H).
实施例1-18、(S)-4-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺(DP018)的合成
将N-(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯替换为[2-(2-氨基乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯，按照实施例1-17的方法制备DP018，产率29.6％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.17(d,J＝3.1Hz,1H),10.17(s,1H),8.69(t,J＝5.4Hz,1H),8.29(t,J＝5.6Hz,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,2H),7.79(d,J＝8.5Hz,2H),7.49–7.44(m,3H),7.40(d,J＝8.5Hz,2H),7.24(d,J＝7.9Hz,1H),6.97–6.90(m,1H),6.80(d,J＝7.5Hz,1H),4.50(dd,J＝8.3,5.9Hz,1H),3.62–3.16(m,10H),2.59(s,3H),2.40(s,3H),1.60(s,3H).
实例1-19、(S)-3-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)磺胺酰基)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺(DP019)的合成
Figure BDA0002172859150000311
将实例1-17所得的3-氯-1H-吲哚-7-胺(100mg,0.60mmol)，吡啶(119mg,1.50mmol)溶于2mLTHF溶液中，冰浴条件下搅拌10min，3-(氯磺酰)苯甲酸(198mg，0.90mmol)溶于2mLTHF溶液中，加入反应液，R.T.反应过夜。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到3-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酸(158mg，产率76％)；
将3-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酸(30mg，0.09mmol)溶于2mLDMF中，加入2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(21mg，0.09mmol)，DIEA(33mg，0.26mmol)，HATU(42mg，0.11mmol)，R.T.反应两小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得产物(2-(2-(2-(3-(N-(3--氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(36mg，产率68.8％)；
将(2-(2-(2-(3-(N-(3--氯-1H-吲哚-7-基)氨磺胺酰基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(36mg，0.06mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入0.5mL三氟乙酸，R.T.反应2h。反应完全后，蒸干溶剂，直接投下一步；
将上一步反应产物溶于3mL DMF中，加入(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸(24mg，0.06mmol)，DIEA(23mg，0.18mmol)，HATU(30mg，0.08mmol)，R.T.反应2h。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到(S)-3-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺(DP019)(34mg，产率65.0％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.08(d,J＝2.8Hz,1H),10.07(s,1H),8.76(t,J＝5.6Hz,1H),8.30–8.26(m,2H),8.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.64–7.58(m,1H),7.50–7.46(m,3H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),7.26(d,J＝7.9Hz,1H),6.98–6.87(m,1H),6.75(d,J＝7.5Hz,1H),4.51(dd,J＝7.9,6.2Hz,1H),3.59–3.17(m,14H),2.59(s,3H),2.40(s,3H),1.61(s,3H).
实施例1-20、(S)-3-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂-14基)苯甲酰胺(DP020)的合成
将2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯换成(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯，按照实施例1-19的方法制备DP020，产率32.5％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.08(d,J＝2.8Hz,1H),10.07(s,1H),8.76(t,J＝5.6Hz,1H),8.32–8.24(m,2H),8.08–8.03(m,1H),7.85–7.81(m,1H),7.62–7.58(m,1H),7.50–7.46(m,3H),7.42(d,J＝8.6Hz,2H),7.26(d,J＝7.9Hz,1H),6.98–6.89(m,1H),6.75(d,J＝7.5Hz,1H),4.51(dd,J＝8.0,6.1Hz,1H),3.59–3.16(m,18H),2.59(s,3H),2.40(s,3H),1.62(s,3H).
实施例1-21、(R)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP021)的合成
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸换成(R)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸，按照实施例1-12的方法制备DP021，产率29.4％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(d,J＝3.2Hz,1H),10.03(s,1H),8.77(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(t,J＝5.7Hz,1H),8.24(s,1H),8.18(d,J＝3.1Hz,1H),8.08(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(d,J＝7.8Hz,1H),7.64–7.59(m,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),6.76(d,J＝7.8Hz,1H),6.52(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(dd,J＝7.9,6.2Hz,1H),3.61–3.39(m,10H),3.32–3.19(m,4H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.61(s,3H).
实施例1-22、(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-((2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP022)的合成
Figure BDA0002172859150000331
将4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酸(25mg，0.07mmol)，1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(15mg，0.07mmol)，DIEA(27mg，0.21mmol)，HATU(32mg，0.08mmol)溶于2mL DMF中，R.T.反应2h。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(27mg，产率69％)；
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸(25mg，0.06mmol)，炔丙胺(4mg，0.07mmol)，DIEA(24mg，0.19mmol)，HATU(31mg，0.08mmol)溶于2mL DMF中，R.T.反应2h。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f]的[1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(23mg，产率84％)；
N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(27mg，0.05mmol)，(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f]的[1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(23mg，0.05mmol)，硫酸铜(9mg，0.05mmol)，抗坏血酸钠(3mg，0.16mmol)溶于THF/H2O(2mL/0.5mL)混合溶剂中，R.T.反应5h。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得到(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-((2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(DP022)(21mg，产率40％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),10.04(s,1H),8.79–8.64(m,2H),8.18(d,J＝2.4Hz,1H),7.95–7.91(m,3H),7.76(d,J＝8.1Hz,2H),7.47(d,J＝8.3Hz,2H),7.39(d,J＝8.3Hz,2H),6.77(d,J＝7.7Hz,1H),6.52(d,J＝7.6Hz,1H),4.56–4.50(m,1H),4.50–4.45(m,2H),4.39–4.35(m,2H),3.82–3.76(m,2H),3.54–3.23(m,14H),2.59(s,3H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),1.61(s,3H).
实例1-23、3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)-N-(1-(3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)苯甲酰胺(DP023)的合成
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸换成3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酸，按照实施例1-13的方法制备DP023，产率23.6％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(d,J＝3.2Hz,2H),10.02(s,2H),8.75(t,J＝5.6Hz,2H),8.23(t,J＝1.8Hz,2H),8.18(d,J＝3.1Hz,2H),8.09–8.05(m,2H),7.81–7.78(m,2H),7.64–7.59(m,2H),6.79–6.73(m,2H),6.52(d,J＝7.7Hz,2H),3.53–3.48(m,12H),3.43–3.38(m,4H),2.56(s,6H).
实施例1-24、4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)-N-(1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯基)-1-氧代-5,8,11,14-四氧杂-2-氮杂十六烷-16-基)苯甲酰胺(DP024)的合成
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸换成4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酸，按照实施例1-9的方法制备DP024，产率25.9％。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.99(d,J＝3.2Hz,2H),10.04(s,2H),8.73–8.68(m,2H),8.19–8.17(m,2H),7.96–7.92(m,4H),7.79–7.73(m,4H),6.80–6.76(m,2H),6.53(d,J＝7.7Hz,2H),3.54–3.36(m,20H),2.57(d,J＝3.2Hz,6H).
实施例1-25、(R)-1-(3-(2-((5-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯甲酰胺基)戊基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯(DP025)的合成
Figure BDA0002172859150000351
将(R)-1-(3–((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙-1-醇(200mg，0.55mmol)，(S)-1-((S)-2(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸(200mg，0.5mmol)，DIC(68mg，0.54mmol)，DMAP(120mg，0.98mmol)溶于12mL二氯甲烷中，R.T.反应两小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得产物(R)-1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯)丙基-(S)-1-(S)-2-(3,4,5-)三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸甲酯(270mg，产率72.4％)；
将(R)-1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯)丙基-(S)-1-(S)-2-(3,4,5-)三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸甲酯(215mg，0.29mmol)溶于5mL THF中，加入四丁基氟化铵(75mg，0.29mmol)，R.T.反应两小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，得产物(R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(3-羟基苯基)丙基-(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸(180mg，产率99％)，直接投入下一步反应；
(R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(3-羟基苯基)丙基-(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸(50mg，0.08mmol)，溴乙酸叔丁酯(17mg，0.09mmol)，碘化钾(1mg，0.004mmol)，碳酸钾(33mg，0.24mmol)，碳酸铯(26mg，0.08mmol)溶于DMF中，R.T.反应两小时。反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得产物(R)-1-(3-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基-(S)-1-((S)-2(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸(42mg，产率71.3％)；
将(R)-1-(3-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基-(S)-1-((S)-2(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸(42mg，0.06mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸(0.5mL)，R.T.反应两小时。反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，得产物2-(3-((R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(38mg，产率97.8％)。
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸替换成2-(3-((R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸，按照实施例1-4的方法制备DP025，产率16.7％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.88(d,J＝8.1Hz,1H),9.14(s,1H),7.97–7.90(m,5H),7.85(t,J＝6.7Hz,1H),7.44(d,J＝7.5Hz,1H),7.34–7.29(m,2H),7.25(d,J＝8.1Hz,1H),7.18–7.12(m,1H),6.97–6.90(m,2H),6.81–6.72(m,2H),6.65(d,J＝5.0Hz,3H),5.51–5.39(m,1H),4.58(d,J＝12.4Hz,1H),4.54–4.43(m,2H),3.93–3.89(m,2H),3.86–3.80(m,11H),3.76(s,2H),3.60–3.53(m,1H),3.37–3.35(m,2H),3.25–3.20(m,2H),3.13–3.10(m,2H),2.88–2.78(m,1H),2.76–2.67(m,1H),2.54(s,3H),2.36–2.18(m,2H),2.00–1.81(m,2H),1.78–1.34(m,12H),1.00(t,J＝8.0Hz,3H).
实施例1-26、(R)-1-(3-(2-((2-(2-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯(DP026)的合成
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸替换成2-(3-((R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸，按照实施例1-6的方法制备DP026，产率15.6％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.88(d,J＝8.1Hz,1H),9.14(s,1H),8.12–8.05(m,1H),7.93(s,3H),7.91(t,J＝6.9Hz,1H),7.44(d,J＝7.5Hz,1H),7.34–7.27(m,2H),7.25(d,J＝8.1Hz,1H),7.19–7.13(m,2H),6.97–6.90(m,2H),6.81–6.72(m,2H),6.65(d,J＝5.0Hz,3H),5.51–5.40(m,1H),4.58(d,J＝12.4Hz,1H),4.54–4.43(m,2H),3.93–3.90(m,2H),3.86–3.80(m,11H),3.76(s,2H),3.68–3.51(m,8H),3.47–3.44(m,3H),2.85–2.79(m,1H),2.76–2.67(m,1H),2.54(s,3H),2.36–2.18(m,2H),2.00–1.91(m,2H),1.78–1.75(m,2H),1.74–1.59(m,4H),1.00(t,J＝8.0Hz,3H).
实施例1-27、(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,15-二氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯(DP027)的合成
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸替换成2-(3-((R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸，按照实施例1-8的方法制备DP027，产率14.2％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.01(s,1H),10.06(s,1H),8.75–8.67(m,1H),8.17(d,J＝2.7Hz,1H),8.11–8.03(m,1H),7.93(d,J＝8.2Hz,2H),7.76(d,J＝8.3Hz,2H),7.21–7.14(m,1H),6.86–6.81(m,3H),6.76(d,J＝8.0Hz,1H),6.72(s,1H),6.65–6.60(m,1H),6.58(d,J＝7.6Hz,1H),6.55–6.52(m,3H),5.56–5.48(m,1H),4.48–4.44(m,2H),4.03–3.98(m,1H),3.76–3.68(m,9H),3.63(d,J＝2.6Hz,1H),3.58(s,4H),3.56(s,2H),3.54–3.44(m,10H),3.40–3.36(m,5H),3.31–3.24(m,3H),2.68–2.59(m,2H),2.55(s,3H),2.40–2.29(m,1H),2.23–2.12(m,1H),2.03–1.85(m,4H),1.70–1.52(m,2H),1.30(s,1H),1.19–1.14(m,1H),0.89–0.77(m,3H).
实施例1-28、(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,21-二氧代-5,8,11,14,17-五氧杂-2,20-二氮杂二十二烷-22-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯(DP028)的合成
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸替换成2-(3-((R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸，按照实施例1-10的方法制备DP028，产率17.6％，1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.87(d,J＝8.0Hz,1H),9.13(s,1H),8.15–8.03(m,1H),7.93–7.89(m,1H),7.44(d,J＝7.5Hz,1H),7.34–7.28(m,2H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.19–7.12(m,1H),6.98–6.89(m,4H),6.81–6.72(m,3H),6.67–6.62(m,4H),5.51–5.39(m,1H),4.63–4.60(m,1H),4.54–4.44(m,2H),3.90–3.85(m,2H),3.83(d,J＝1.1Hz,12H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.71–3.54(m,19H),3.48–3.35(m,3H),2.85–2.76(m,1H),2.75–2.68(m,1H),2.55(s,3H),2.35–2.19(m,2H),2.01–1.83(m,2H),1.81–1.72(m,2H),1.70–1.61(m,4H),1.00(t,J＝8.0Hz,3H).
实施例1-29、(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,24-二氧代-5,8,11,14,17,20-六氧杂-2,20-二氮杂二十五烷-25-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯(DP029)的合成
将(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酸替换成2-(3-((R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸，按照实施例1-11的方法制备DP029，产率18.1％，1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ9.88(d,J＝8.0Hz,1H),9.14(s,1H),8.08(s,1H),7.90(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(d,J＝7.5Hz,1H),7.36–7.28(m,3H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.16–7.13(m,1H),7.01–6.88(m,3H),6.84–6.71(m,3H),6.65(d,J＝5.0Hz,4H),5.58–5.44(m,1H),4.66–4.37(m,3H),3.93–3.85(m,2H),3.83(d,J＝1.1Hz,12H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.71–3.53(m,22H),3.50–3.32(m,3H),2.85–2.77(m,1H),2.75–2.63(m,1H),2.54(s,3H),2.35–2.28(m,1H),2.26–2.17(m,2H),1.98–1.82(m,2H),1.79–1.72(m,2H),1.71–1.61(m,4H),1.00(t,J＝8.0Hz,3H).
表1实施例1-1到1-29(DP001-DP-029)所示化合物的制备
Figure BDA0002172859150000391
Figure BDA0002172859150000401
Figure BDA0002172859150000411
Figure BDA0002172859150000421
Figure BDA0002172859150000431
Figure BDA0002172859150000441
Figure BDA0002172859150000451
实施例二：本发明化合物在细胞水平降解BRD4蛋白的效果
实施例2-1、细胞的培养
本实验中所用淋巴瘤细胞SUDHL4购买于美国标准生物收藏中心(ATCC)。细胞所用培养基中均加入10％胎牛血清(Gibco)和100单位/毫升青霉素、100微克/毫升链霉素(Gibco)，将细胞悬浮培养在37℃恒温培养箱(湿度95％，CO25％)中。
实施例2-2、化合物筛选
将合成的可招募DCAF15E3泛素连接酶并靶向降解BET家族蛋白的PROTAC分子：DP001，DP002，DP003，DP004，DP005，DP006，DP007，DP008，DP009，DP010，DP011，DP012，DP013，DP014，DP015，DP016，DP017，DP018，DP019，DP020，DP021，DP022溶解于DMSO溶剂中，使用终浓度为0，1微摩尔/升，5微摩尔/升，10微摩尔/升，20微摩尔/升，40微摩尔/升，80微摩尔/升等不同剂量处理淋巴瘤细胞SUDHL4共孵育16h。随后离心收集淋巴瘤细胞，用1×上样缓冲液重悬细胞，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析对靶蛋白BRD4的降解情况。实验结果发现一系列本发明化合物(DP002，DP006，DP007，DP008，DP009，DP010，DP011，DP012，DP013，DP014，DP015，DP016，DP017，DP018，DP019，DP020)在低微摩浓度条件下可有效诱发靶蛋白BRD4的降解，以DP012效果最为显著。结果如图2所示，BRD4蛋白在化合物浓度为20微摩尔/升时即出现明显降解(>90％)。
实施例2-3、MTS法测定细胞增殖
将淋巴瘤细胞SUDHL4以适当密度接种至96孔板(Corning)，培养24h后，依次加入不同浓度本发明化合物DP012，使其终浓度分别为0.010微摩尔/升，0.033微摩尔/升，0.1微摩尔/升，0.33微摩尔/升，1微摩尔/升，3.3微摩尔/升，10微摩尔/升，33微摩尔/升，100微摩尔/升，对照组加入等量的DMSO，各组设3个副孔。继续培养24小时或48h后，加入20微升/孔的MTS检测液，轻轻混匀。37℃孵育一段时间后，将96孔板置于酶标仪(SPECTRAMAX 190)中，在490nm波长下测定OD值后计算细胞存活率，统计分析化合物对于淋巴瘤细胞SUDHL4增殖的影响。实验结果发现一系列本发明化合物(DP002，DP006，DP007，DP008，DP009，DP010，DP011，DP012，DP013，DP014，DP015，DP016，DP017，DP018，DP019，DP020)在低微摩浓度条件下可有效抑制淋巴瘤细胞SUDHL4的增殖。表1为所有PROTAC化合物对靶蛋白BRD4的半降解浓度、半抑制浓度和最高降解效率统计。综合以上结果，本发明选取效果最优的DP012用于后续实验研究。
表1
Figure BDA0002172859150000471
此外，将本发明化合物对其它淋巴瘤细胞、白血病细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、皮肤癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、白血病细胞、卵巢癌细胞、胃癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞和口腔癌细胞等多种肿瘤细胞进行增殖抑制效果实验，在大部分细胞中均取得了相似的显著抑制效果。
实施例三：本发明化合物降解BRD4抑制淋巴瘤细胞的生长并促进其凋亡
为了验证合成的DP012在体外对细胞生长的影响，本发明测定了DP012以及两端配体JQ1、E7820的对SUDHL4细胞生长的半抑制浓度(如图2A所示)，结果表明DP012对细胞的生长的抑制作用不受两端配体的影响，而是取决定于PROTAC化合物本身的效果。接着本发明利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DP012处理SUDHL4后对BRD4通路下游信号分子的影响，发现随着BRD4蛋白水平的降解，其下游最为重要的癌基因转录因子c-MYC也出现了浓度梯度性的下调(如图2B所示)。随着浓度梯度的增加，BRD4的水平逐渐降低，细胞凋亡标志蛋白切割型的PARP和Caspase3出现了明显的浓度梯度性的上调(如图2B所示)。流式细胞分析定量检测凋亡细胞，也进一步验证了细胞分子水平的检测，在20微摩尔/升浓度DP012的处理下，细胞已出现明显的大规模凋亡现象(如图2C所示)。以上的结果表明DP012引发的BRD4的降解，可在体外显著抑制细胞的增殖(半抑制浓度＝14.67微摩尔/升)，促进细胞凋亡，而且DP012引发的分子水平的改变取决于PROTAC分子本身，不受PROTAC两端配体JQ1和E7820的影响(如图2D所示)。
实施例四：本发明化合物抑制荷瘤小鼠淋巴瘤的生长并在体内降解靶蛋白
本实验采用淋巴瘤细胞SUDHL4皮下荷瘤模型，将107/只的SUDHL4细胞与基质胶(Corning)1:1混合后，注射到4周雄性免疫缺陷型小鼠(SCID)背部皮下。待肿瘤体积平均生长至100mm3后，将小鼠随机分为两组，分别为阴性对照组、100毫克/千克剂量给药组(DP012)。将以上两组小鼠每天给药，并每两天使用游标卡尺监测肿瘤体积大小。12天后终止实验，处死各组实验小鼠，剥离原位肿瘤测量其重量，检测肿瘤生长以及靶蛋白降解情况。结果表明，阴性对照组小鼠的原位肿瘤的体积与重量显著大于给药组(如图3A、B所示)。提取对照组和给药组小鼠的肿瘤组织进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，发现本发明化合物DP012可显著降解体内肿瘤组织中的靶蛋白BRD4并抑制下游重要癌基因c-MYC的表达(如图3C、D所示)。另外，本发明化合物也保留了其作为E3泛素连接酶DCAF15配体的生物活性，在体内诱发RBM39蛋白的降解，体现了本发明化合物双靶点的协同抗肿瘤活性(如图3C、D所示)。免疫组织化学染色进一步的支持了蛋白检测的结果，染色发现靶蛋白BRD4以及下游分子c-MYC的表达出现显著下调(如图3E左、中所示)。利用细胞增殖性标记蛋白KI67染色发现，DP012处理后显著抑制了荷瘤组织中肿瘤细胞的增殖活性(如图3E右所示)。

Claims (18)

1.符合以下化学结构的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药：
Figure FDA0002172859140000011
其中，
Figure FDA0002172859140000014
表示能够特异性结合到靶蛋白的配体，
Figure FDA0002172859140000015
表示能够募集E3连接酶的配体，
Figure FDA0002172859140000016
表示将
Figure FDA0002172859140000017
和
Figure FDA0002172859140000018
连接起来的连接基团。
2.符合以下化学结构的化合物：
Figure FDA0002172859140000012
其中，
Figure FDA0002172859140000019
表示能够特异性结合到靶蛋白的配体，
Figure FDA00021728591400000110
表示能够特异性募集E3连接酶DCAF15的配体；
Figure FDA00021728591400000111
表示连接基团，其可存在或不存在，存在时，
Figure FDA00021728591400000112
表示将
Figure FDA00021728591400000113
和
Figure FDA00021728591400000114
之间的连接基团。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，所述化合物符合以下化学结构：
Figure FDA0002172859140000013
其中，R1PC，R2PC，R3PC，R4PC，R5PC，R6PC，R7PC，R8PC和R9PC中的任意一个是
Figure FDA0002172859140000024
基团，其余独立地是：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，所述化合物符合以下化学结构：
Figure FDA0002172859140000021
其中，R5PC，R6PC中的任意一个是
Figure FDA0002172859140000025
基团，其余的是氢；
或
Figure FDA0002172859140000022
其中，R5PC，R6PC中的任意一个是
Figure FDA0002172859140000026
基团，其余的是氢。
5.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述
Figure FDA0002172859140000027
具有以下特征结构：
Figure FDA0002172859140000023
其中，环A和B分别为环烷基，杂环烷基，芳香环，杂环芳基；
R1和R2分别选自下列基团中的任意一个或多个：H，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6烷氧基，卤素，C1-6卤代烷基，C1-6烷基氰基，C1-6烷基羟基，-OR2a，-NR2bR2d，-C1-6烷基-NR2bR2d，-C(O)R1a，-C(O)R2d，-C(O)OR2a，-C1-6烷基-C(O)OR2b，-OC(O)R2b，-OC(O)OR2b，-C(O)NR2aR2b，-C(O)N(OH)R2b，-NR2bC(O)OR2c，-C1-6烷基-NR2bC(O)R2c，-OC(O)NR2bR2c，-NR2bC(O)NR2bR2c，-NR2bC(NR2b)NR2bR2c，-C(O)NR2bC(O)R2b,-C1-6烷基-NR2bC(O)OR2c，-SR2a，-SO2R2b，-SO2OR2b，-SO2NR2bR2c，-NR2bSO2R2b，-P(O)(OR2b)2，-B(OR2b)，-CN，-NH2，-NO2，-N3，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-杂环烷基，C1-6烷基-芳基，C1-6烷基-O-芳基，C1-6烷基-杂环芳基，杂环芳基-芳基；其中，所述环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-2个R2b基团取代；
其中，R1a选自下列基团中的任意一个：-OR1b或-NR1bR1c；
R1b和R1c分别选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-芳基，其中，所述环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-4个R1d基团取代；
R1d选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，C1-6烷氧基，-NO2；
R2a选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-杂环烷基，C1-6烷基-芳基，C1-6烷基-杂环芳基，其中，所述环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-2个R2b基团取代；
R2b和R2c分别选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基；
R2d选自下列基团中的任意一个：H，C1-6烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基，C1-6烷基-环烷基，C1-6烷基-芳基，C1-6烷基-杂环芳基，其中，所述环烷基，杂环烷基，芳基，杂环芳基可被1-4个R2b基团取代。
6.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，
A和B分别独立地为苯环，5-15个原子组成的杂芳基中的任意一个；其中，所述5-15个原子组成的杂芳基选自吡咯、噻吩、呋喃、噁唑、咪唑、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、喹啉、嘌呤；
R1、R2分别独立地为氢，F，Cl，Br，I，CN，OH，NO2，NH2，COOH，C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧基，C2-6烯基，C2-6炔基、C3-6环烷基，-C(O)R1a，-C(O)R2d，-C(O)OR2a，-C(O)NR2aR2b，-NR2bC(O)OR2c，-SR2a，-SO2R2b，-SO2OR2b，-SO2NR2bR2c中任意的一个或多个；
其中，R1a，R2a，R2b，R2c，R2d的定义和权利要求5相同。
7.根据权利要求6所述的化合物，其特征在于，
Figure FDA0002172859140000045
是根据以下化学结构的基团：
Figure FDA0002172859140000041
8.根据权利要求1-4之任一项所述的化合物，其特征在于，
Figure FDA0002172859140000046
为C1-30烷基，C1-30卤代烷基，C1-30烷氧基，C2-30烯基，C2-30炔基的至少之一构成的基团。
9.根据权利要求8所述的化合物，其特征在于，
Figure FDA0002172859140000047
具有以下特征结构：
-X-Y-Z-
X表示连接到
Figure FDA0002172859140000048
的部分，Z表示连接到
Figure FDA0002172859140000049
的部分，X和Z分别独立地为
Figure FDA0002172859140000042
Figure FDA0002172859140000043
中的任意一个；
其中，Y表示X和Z之间的连接基团，为1-20个碳原子的烷基，卤代烷基，烷氧基，或其间任意位置含有一个或者多个
Figure FDA0002172859140000044
基团。
10.根据权利要求1-4之任一项所述的化合物，其特征在于，所述
Figure FDA00021728591400000410
基团是能够特异性结合到靶蛋白的配体；其中，所述靶蛋白选自结构蛋白质、受体、酶、细胞表面蛋白质、细胞整体功能相关蛋白质，包括下列涉及的蛋白质：催化活性、芳香酶活性、运动活性、解旋酶活性、合成代谢、分解代谢、抗氧化剂活性、蛋白水解、生物合成、具有下列的蛋白质：激酶活性、氧化还原酶活性、转移酶活性、水解酶活性、裂解酶活性、异构酶活性、连接酶活性、酶调节因子活性、信号转导活性、结构分子活性、蛋白质、脂质糖、受体活性、细胞运动性、膜融合、细胞通信、生物学过程调节、发育、细胞分化、刺激响应、行为蛋白质、细胞粘附蛋白质、下列涉及的蛋白质：细胞死亡、下列涉及的蛋白质：蛋白质转运体活性、核转运、离子转运体活性、通道转运体活性、载体活性、通透酶活性、分泌活性、电子转运体活性、发病、分子伴侣调节因子活性、核酸结合活性、转录调节因子活性、胞外组织和生物发生活性和翻译调节因子活性。
11.根据权利要求10所述的化合物，其特征在于，所述
Figure FDA0002172859140000052
基团是：
靶向包含BET布罗莫结构域的蛋白质BRD2、BRD3、BRD4的化合物，其化学结构如下：
Figure FDA0002172859140000051
其中R表示
Figure FDA0002172859140000053
基团；
或靶向FKBP的化合物，根据下列化学结构：
Figure FDA0002172859140000061
其中，R表示
Figure FDA0002172859140000064
基团；
或，靶向DCAF15蛋白本身(
Figure FDA0002172859140000065
是
Figure FDA0002172859140000066
)的化合物，其化学结构如下：
Figure FDA0002172859140000062
其中R表示
Figure FDA0002172859140000067
基团。
12.根据权利要求1-11之任一项所述的化合物，其特征在于，包括：
Figure FDA0002172859140000063
(S)-N-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)丙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000071
(S)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000072
(S)-N-(4-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)丁基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000073
(S)-N-(5-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)戊基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000081
(S)-N-(6-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)己基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000082
(S)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000083
(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000091
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000092
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000093
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-20-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000094
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十三烷-23-基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000101
(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000102
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000103
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十七烷-17-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000111
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18-五氧杂-3-氮杂二十烷-20-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000112
(S)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-2-氧代-6,9,12,15,18,21-六氧杂-3-氮杂二十三烷-23-基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000113
(S)-4-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)磺胺酰基)-N-(5-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)戊基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000121
(S)-4-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000122
(S)-3-(N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)磺胺酰基)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000123
(S)-3-(N-(3-氯-1H-吲哚7-基)磺胺酰基)-N-(1-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)2-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂-14基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000131
(R)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000132
(S)-N-(2-(2-(2-(2-(4-((2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000133
3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)-N-(1-(3-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000134
4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)-N-(1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰基)苯基)-1-氧代-5,8,11,14-四氧杂-2-氮杂十六烷-16-基)苯甲酰胺；
Figure FDA0002172859140000141
(R)-1-(3-(2-((5-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯甲酰胺基)戊基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure FDA0002172859140000142
(R)-1-(3-(2-((2-(2-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure FDA0002172859140000143
(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,15-二氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure FDA0002172859140000151
(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,21-二氧代-5,8,11,14,17-五氧杂-2,20-二氮杂二十二烷-22-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯；
Figure FDA0002172859140000152
(R)-1-(3-((1-(4-(N-(3-氰基-4-甲基-1H-吲哚-7-基)氨磺酰)苯基)-1,24-二氧代-5,8,11,14,17,20-六氧杂-2,20-二氮杂二十五烷-25-基)氧基)苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙基(S)-1-((S)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羧酸酯。
13.一种药物组合物或化合物库，其特征在于，其包括权利要求1-12之任一项所述的化合物，组合药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂，和任选地进一步组合另外的生物活性剂。
14.根据权利要求1-12之任一项所述的化合物、或根据权利要求13所述的药物组合物或化合物库在制备用于调节有需要的个体体内的靶蛋白的蛋白活性、和/或降解细胞中的靶蛋白、和/或降解有需要的个体体内的靶蛋白的药物中的应用。
15.根据权利要求1-12之任一项所述的化合物、或根据权利要求13所述的药物组合物或化合物库在制备治疗个体疾病状态或状况的药物中的应用。
16.一种在有需要的个体体内调节靶蛋白的蛋白质活性、和/或降解细胞中的靶蛋白、和/或降解有需要的个体体内的靶蛋白的方法，其特征在于，包括给予所述个体一定量的根据权利要求1-12之任一项所述的化合物、或根据权利要求13所述的药物组合物或化合物库。
17.一种治疗个体疾病状态或状况的方法，其特征在于，所述方法包括给予所述个体有效量的根据权利要求1-12之任一项所述的化合物、或根据权利要求13所述的药物组合物或化合物库，以调节所述个体体内的蛋白质活性。
18.根据权利要求15所述的应用、或根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述疾病是鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、肝细胞癌、和肾细胞癌、膀胱、肠、乳腺、宫颈、结肠、食管、头、肾、肝、肺、颈、卵巢、胰腺、前列腺和胃的癌症；白血病；良性和恶性淋巴瘤，具体地伯基特淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；良性和恶性黑素瘤；骨髓增殖性疾病；肉瘤，包括尤文肉瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、脂肉瘤、肌肉瘤、周围神经上皮瘤、滑膜肉瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、神经节瘤、神经节神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、松果体细胞瘤、脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经纤维瘤和神经鞘瘤；肠癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、卵巢癌、睾丸癌、甲状腺癌、星形细胞瘤、食管癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、黑素瘤；骨肉瘤、霍奇金病、维尔姆斯瘤或畸胎瘤。
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