CN112399856A

CN112399856A - 用于眼部纤维化和/或血管生成的联合治疗

Info

Publication number: CN112399856A
Application number: CN201980043926.XA
Authority: CN
Inventors: S·A·库克; S·谢弗
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2018-04-27
Filing date: 2019-04-26
Publication date: 2021-02-23
Also published as: JP2021522272A; MX2020011401A; BR112020021985A2; CA3098340A1; EP3784282A1; CL2020002774A1; GB201806918D0; WO2019207122A1; US20210238272A1; AU2019258820A1; PH12020551786A1; KR20210005125A; EA202092292A1

Abstract

公开了用于诊断，治疗和预防尤其是在眼睛中的纤维化和/或血管生成的方法。在特定的实施方案中，所述方法采用IL‑11介导的信号传导的拮抗作用和血管生成的拮抗作用。还提供了包含IL‑11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的组合。

Description

用于眼部纤维化和/或血管生成的联合治疗

本申请要求2018年4月27日提交的GB1806918.7的优先权，其内容和要素出于所有目的通过引用并入本文。

发明领域

本发明涉及通过IL-11介导的信号转导的拮抗作用和血管生成的拮抗作用来诊断、治疗和预防纤维化和/或血管生成(尤其在眼睛中)。

发明背景

血管生成作为必不可少的过程，是伤口愈合过程的关键部分。异常的血管生成经常导致严重的疾病和并发症；大多数导致灾难性视力丧失的疾病都是由于异常的血管生成和伤口愈合而引起的，通常是由于组织缺血，炎症或代谢紊乱引起的。

抗血管生成疗法，例如抗VEGF疗法，是一类减少视网膜黄斑下新血管形成的不断增长的药物。这些药物治疗的疾病包括与年龄有关的黄斑变性、糖尿病性眼病和某些癌症。

纤维化是必不可少的过程，是伤口愈合的关键部分。纤维化过度在许多罕见和常见疾病中很常见，并且在疾病发病机理中十分重要。以过度纤维化为特征的疾病包括但不限于：全身性硬化症、硬皮病、肥厚型心肌病、扩张型心肌病(DCM)、心房纤颤、心室纤颤、心肌炎、肝硬化、肾脏疾病、哮喘、眼病、囊性纤维化、关节炎和特发性肺纤维化。尽管对人类健康产生了巨大影响，但治疗和诊断纤维化的方法仍是一项尚未满足的医疗需求。

发明内容

在第一方面，本发明提供了一种在受试者中治疗或预防纤维化的方法，该方法包括向受试者施用治疗或预防有效量的IL-11介导信号传导拮抗剂和血管生成因子拮抗剂。

在第二方面，本发明提供了一种IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的组合，用于预防纤维化的治疗方法。

另一方面，本发明涉及IL-11介导信号传导的拮抗剂和血管生成因子拮抗剂的用途，用于制造一种用于治疗或预防纤维化方法的药物。

在本文公开的任何方面中，纤维化优选为眼睛中的纤维化。

在一些实施方案中，纤维化选自格雷夫氏眼病、视网膜上纤维化、视网膜纤维化、特发性黄斑前纤维化、视网膜下纤维化(例如与视网膜脱离或黄斑变性相关(例如湿性年龄相关性黄斑变性(AMD))、糖尿病性视网膜病、青光眼)、地理萎缩、角膜纤维化、手术后纤维化(例如白内障手术后的后囊或青光眼小梁切除术后的小泡)、结膜纤维化或结膜下纤维化。

在一些实施方案中，纤维化为视网膜纤维化。在一些实施方案中，纤维化为视网膜前纤维化。在一些实施方案中，纤维化为视网膜下纤维化。

在本文公开的方面的一些实施方案中，纤维化为心脏、肝脏或肾脏的纤维化。在一些实施方案中，纤维化为肝脏中的并且与慢性肝病或肝硬化相关。在一些实施方案中，纤维化为肾脏中的并且与慢性肾脏疾病有关。在一些实施方案中，纤维化为心脏中的，并且与心脏肌肉组织或心脏电特性的功能障碍或心脏的壁或瓣膜的增厚相关。

在本文公开的方面的一些实施方案中，血管生成因子拮抗剂选自以下的血管生成因子的拮抗剂：血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和血小板衍生的生长因子(PDGF)。

在一些实施方案中，血管生成因子是VEGF。在一些实施方案中，VEGF是VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C和/或VEGF-D中的一种或多种。在一些实施方案中，所述VEGF是VEGF-A。

在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL-11与IL-11受体结合的试剂。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL-11：IL11Rα复合物与gp130的结合的试剂。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL-11：IL11Rα反式信号转导复合物与gp130的结合的试剂。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL11Rα与gp130的结合的试剂。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL-11与IL-11结合的试剂。

在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够结合IL-11或IL-11受体的试剂。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是抗IL-11抗体或抗IL-11Rα抗体。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是IL-11诱饵受体。

在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂能够减少IL-11或IL-11的受体的表达。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是能够阻止或减少血管生成因子与血管生成因子互作伴侣的结合的试剂。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是能够结合血管生成因子或血管生成因子互作伴侣的试剂。

在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是能够阻止或减少血管生成因子与血管生成因子受体结合的试剂。

在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是能够结合血管生成因子或血管生成因子受体的试剂。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是抗血管生成因子抗体或抗血管生成因子受体抗体。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是血管生成因子的诱饵受体。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是VEGF诱饵受体。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是阿柏西普(aflibercept)(SEQ ID NO：24)。

在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂能够减少血管生成因子或血管生成因子受体的表达。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

在所述的方法，使用的组合，或本文中所述的用途的一些实施方案中，治疗或预防纤维化的方法包括向受试者施用IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂，所述受试者中表达IL-11或IL-11受体已被确定上调。在一些实施方案中，血管生成因子或血管生成因子受体的表达已经确定被上调。

在所述的方法，使用的组合，或本文中所述的用途的一些实施方案中，治疗或预防的方法包括确定受试者中IL-11或IL-11受体的表达是否被上调，并向其中IL-11或IL-11受体表达上调的受试者施用IL-11拮抗剂介导的信号传导和血管生成因子的拮抗剂。

在另一方面，本发明提供了一种确定受试者对通过IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂治疗或预防纤维化的适宜性的方法。在一些实施方案中，该方法包括任选地在体外确定受试者中白介素11(IL-11)、白介素11受体(IL-11R)、血管生成因子或血管生成因子受体的表达是否被上调。在一些实施方案中，该方法包括任选地在体外确定受试者中血管生成因子或血管生成因子受体的表达是否被上调。

在另一方面，本发明提供了一种选择受试者以便用IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂治疗或预防纤维化的方法。在一些实施方案中，该方法包括任选地在体外，受试者中白细胞介素11(IL-11)、白细胞介素11受体(IL-11R)、血管生成因子或血管生成因子受体的表达是否上调。在一些实施方案中，该方法包括任选地在体外确定受试者中血管生成因子或血管生成因子受体的表达是否被上调。

在另一方面，本发明提供了一种诊断受试者中纤维化或发生纤维化风险的方法。在一些实施方案中，所述方法包括，任选地在体外，上调所述受试者中获得的样品中的白细胞介素11(IL-11)、白细胞介素11受体(IL-11R)、血管生成因子或血管生成因子受体。在一些实施方案中，该方法包括任选地在体外确定受试者中血管生成因子或血管生成因子受体的表达是否被上调。在一些实施方案中，该方法包括为利用IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子拮抗剂治疗选择受试者。

在另一方面，本发明提供了一种为患有或疑似患有纤维化的受试者提供预后的方法，并且基于该测定，为通过IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂治疗的受试者提供预后。在一些实施方案中，该方法包括任选地在体外确定，在从受试者获得的样品中白介素11(IL-11)、白介素11受体(IL-11R)、血管生成因子或血管生成因子受体是否被上调。在一些实施方案中，该方法包括选择被确定具有白介素11(IL-11)、白介素11受体(IL-11R)、血管生成因子或血管生成因子受体的表达上调的受试者，以便利用IL-11介导的信号传导拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂治疗。

在另一方面，本发明提供了一种诊断对象的纤维化或发生纤维化风险的方法，该方法包括任选地在体外确定受试者中的一种或多种遗传因子，并选择对象通过IL-11介导信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂进行治疗。在一些实施方案中，一种或多种遗传因素可预测白介素11(IL-11)或白介素11受体(IL-11R)表达的上调，或IL-11或IL-11R活性的上调。在一些实施方案中，一种或多种遗传因子可预测血管生成因子或血管生成因子受体表达的上调，或血管生成因子或血管生成因子受体活性的上调。在一些实施方案中，一种或多种遗传因子可预测血管生成因子或血管生成因子受体表达的上调，或血管生成因子或血管生成因子受体活性的上调。

在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是抗IL-11抗体，而血管生成因子的拮抗剂是VEGF诱饵受体。在一个优选的实施方案中，所述VEGF诱饵受体是阿柏西普。

本发明还提供了一种包含IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的组合。本发明还提供了一种药物组合物，其包含IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂。本发明还提供了一种试剂盒，其包含预定量的IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂，如本文所述的组合或如本文所述的药物组合物。

在一些实施方案中，血管生成因子选自血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和血小板衍生的生长因子(PDGF)。在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是一种能够阻止或减少IL-11与IL-11受体结合的试剂，任选地，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够结合IL-11或IL-11受体的试剂，例如如本文所述。在一些实施方案中，IL-11介导的信号转导的拮抗剂能够降低IL-11或IL-11受体的表达，例如本文所述的试剂。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是能够阻止或减少血管生成因子与血管生成因子互作伴侣结合的试剂。血管生成因子的拮抗剂可以是能够结合血管生成因子或血管生成因子互作伴侣的试剂，例如本文所述。血管生成因子的拮抗剂可以是阿柏西普。血管生成因子的拮抗剂可能能够减少血管生成因子互作伴侣的表达，例如本文所述的拮抗剂。

发明描述

本发明基于一出乎意料的发现，血管生成因子拮抗剂和IL-11介导信号传导的拮抗剂的组合疗法在纤维化，尤其是眼中纤维化的治疗中提供了优异的治疗效果。另外，本文证明了意想不到的发现，即IL-11介导的信号传导的拮抗剂能够治疗眼中的纤维化，并且IL-11介导的信号传导的拮抗作用能够改善联合治疗中血管生成的拮抗作用的功效。数据还显示在脉络膜新血管形成(CNV)中，IL-11介导信号传导的拮抗作用具有令人惊讶的治疗效果。

白介素11和IL-11受体

白介素11(IL-11)，也称为脂肪形成抑制因子，是一种多效性细胞因子，是IL-6家族细胞因子的成员，包括IL-6、IL-11、IL-27、IL-31、制瘤素、白血病抑制因子(LIF)、心肌营养因子1(CT-1)、心肌营养因子样细胞因子(CLC)、睫状神经营养因子(CNTF)和神经蛋白(NP-1)。

白介素11(IL-11)在多种间充质细胞类型¹中表达。IL-11基因组序列已被定位到19号染色体和7¹号染色体着丝粒区域，并通过确保能有效从细胞分泌的典型信号肽进行转录。IL-11、cJun/AP-1的激活蛋白复合物，位于其启动子序列内，对于IL-11¹的基础转录调控至关重要。人IL-11的未成熟形式是199个氨基酸的多肽，而成熟的IL-11则编码178个氨基酸残基的蛋白质(Garbers和Scheller，生物化学2013；394(9):1145-1161)。人IL-11氨基酸序列可在UniProt保藏号为编号P20809(P20809.1 GI：124294；SEQ ID NO：1)获得。重组人IL-11(opvevekin)也可商购获得。来自其他物种(包括小鼠、大鼠、猪、牛，几种骨鱼和灵长类动物)的IL-11也已被克隆和测序。

在本说明书中，“IL-11”是指来自任何物种的IL-11，并且包括来自任何物种的IL-11的同种型、片段、变体或同源物。在优选的实施方案中，该物种是人类(智人)。IL-11的同种型、片段、变体或同系物可以任选地被表征为，与来自给定物种(例如人类)的未成熟或成熟IL-11的氨基酸序列具有至少70％，优选地选自80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的一种的氨基酸序列同一性。IL-11的同种型、片段、变体或同源物可任选地特征为结合IL-11Rα(优选来自相同物种)并刺激表达IL-11Rα和gp130的细胞中信号转导的能力(例如Curtis等，血液，1997，90(11)；或Karpovich等，Mol.Hum.Reprod.2003 9(2):75-80中述及)。IL-11的片段可以具有任何长度(以氨基酸数量计)，尽管可以选择为成熟IL-11长度的至少25％，或最大长度为成熟IL-11长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％之一。IL-11片段的最小长度为10个氨基酸，最大长度为15、20、25、30、40、50、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或195个氨基酸中的一个。

IL-11信号通过普遍表达的糖蛋白130(gp130；也称为糖蛋白130、IL-6ST、IL-6-beta或CD130)的同型二聚体发出信号。Gp130是一种跨膜蛋白，与IL-6受体家族形成I型细胞因子受体的一个亚基。通过单独的白介素11受体亚基α(IL-11Rα)获得特异性，虽然最初的细胞因子与α受体的结合事件导致与gp130形成最终复合物，但它不直接参与信号转导。

人gp130(包括22个氨基酸的信号肽)是918个氨基酸的蛋白质，成熟形式是866个氨基酸，包括597个氨基酸的胞外域，22个氨基酸的跨膜域和277个氨基酸的胞内域。蛋白质的胞外域包含gp130的细胞因子结合模块(CBM)。gp130的CBM包括gp130的Ig样结构域D1，和gp130的纤连蛋白III型结构域D2和D3。人gp130的氨基酸序列可从UniProt保藏号No.P40189-1(SEQ ID NO：2)获得。

人IL-11Rα是422个氨基酸的多肽(UniProt Q14626；SEQ ID NO：3)，与鼠类IL-11Rα有约85％的核苷酸和氨基酸序列同一性(Du和Williams.，血液89卷，第11期，1997年6月1日)。IL-11Rα的两种同种型已被报道，它们在胞质结构域中不同(Du和Williams，同上)。IL-11受体α链(IL-11Rα)与IL-6受体α链(IL-6Rα)具有许多结构和功能相似性。细胞外结构域显示24％的氨基酸同一性，包括特征性的保守基序Trp-Ser-X-Trp-Ser(WSXWS)。短胞质结构域(34个氨基酸)缺少激活JAK/STAT信号通路所需的盒1和2区域。

鼠IL-11上的受体结合位点已被绘制，并鉴定了三个位点-位点I、II和III。通过位点II区域中的取代和通过位点III区域中的取代，减少了与gp130的结合。位点III突变体没有显示出可检测的激动剂活性并且具有IL-11Rα拮抗剂活性(细胞因子抑制剂第8章；由Gennaro Ciliberto和Rocco Savino编辑，Marcel Dekker有限公司出版，2001年)。

在本说明书中，IL-11受体/IL-11的受体(IL-11R)是指能够结合IL-11的多肽或多肽复合物。在一些实施方案中，IL-11受体能够结合IL-11并在表达该受体的细胞中诱导信号转导。

IL-11受体可以来自任何物种，包括来自任何物种的IL-11受体的同种型、片段、变体或同源物。在优选的实施方案中，该物种是人类(智人)。

在一些实施方案中，IL-11受体(IL-11R)可以是IL-11Rα。在一些实施方案中，IL-11的受体可以是包含IL-11Rα的多肽复合物。在一些实施方案中，IL-11受体可以是包含IL-11Rα和gp130的多肽复合物。在一些实施方案中，IL-11受体可以是gp130或包含结合IL-11的gp130复合物。

IL-11Rα的同种型、片段、变体或同系物可以可选地被表征为，与来自给定物种(例如人类)的IL-11Rα的氨基酸序列具有至少70％，优选80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。IL-11Rα的同种型、片段、变体或同系物可选的特征为结合IL-11(优选来自相同物种)并刺激表达IL-11Rα和gp130的细胞中信号转导的能力(例如，如Curtis等，血液，1997，90(11)或Karpovich等，Mol.Hum.Reprod.2003 9(2):75-80中述及)。IL-11的片段可具有任意长度(以氨基酸数量计)，尽管可选地为成熟IL-11Rα长度的至少25％，或最大长度为成熟IL-11Rα长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。IL-11受体片段的片段的最小长度可以为10个氨基酸，最大长度为15、20、25、30、40、50、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、400或415个氨基酸。

IL-11信号传导

IL-11以低亲和力(Kd～10nmol/L)与IL-11Rα结合，仅这些结合伴侣之间的相互作用不足以转导生物信号。能够信号转导的高亲和力受体(Kd～400至800pmol/L)的产生需要IL-11Rα和gp130的共表达(Curtis等，血液，1997.12.1；90(11)：4403-12；Hilton等，EMBO J13：4765，1994；Nandurkar等，Oncogene12：585，1996)。IL-11与细胞表面IL-11Rα的结合主要通过有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)级联和Janus激酶/信号转导子和转录激活子来诱导异二聚化、酪氨酸磷酸化、gp130激活和下游信号传导(Jak/STAT)途径(Garbers和Scheller，同上)。

原则上，可溶性IL-11Rα还可与IL-11形成具有生物活性的可溶性复合物(Pflanz等，1999FEBS Lett，450，117-122)，增加了类似IL-6、IL-11在某些情况下结合可溶性IL-11Rα优先于结合细胞表面gp130的可能性(Garbers和Scheller，同上)。Curtis等(血液1997.12.1；90(11)：4403-12)描述了可溶性鼠IL-11受体α链(sIL-11R)的表达并检查了gp130细胞中的信号传导。在gp130存在但没有跨膜IL-11R的情况下，sIL-11R介导的IL-11依赖的M1白血病细胞的分化以及Ba/F3细胞的增殖以及早期细胞内事件，包括gp130、STAT3和SHP2的磷酸化，类似于通过跨膜IL-11R的信号传导。最近已经证明，通过与可溶性IL-11Rα结合的IL-11可以激活通过细胞膜结合gp130发出信号(Lokau等，2016细胞通讯，14，1761–1773)。这种所谓的IL-11反式信号转导可能是IL-11-介导信号转导的非常重要的组成部分，甚至可能是IL-11-介导信号转导的最常见形式。尽管IL-11Rα的表达仅限在相对较小的细胞类型子集，但gp130在广泛的细胞类型中表达。

如本文所用，“IL-11反式信号转导”是指结合了IL-11的IL-11Rα与gp130的结合触发的信号转导。IL-11可以作为非共价复合物结合至IL-11Rα。在IL-11：IL-11Rα复合物与gp130结合后，gp130被膜结合并由发生信号的细胞表达。在一些实施方案中，IL-11Rα可以是可溶性IL-11Rα。在一些实施方案中，可溶性IL-11Rα是IL-11Rα的可溶性(分泌的)同种型(例如，缺乏跨膜结构域)。在一些实施方案中，可溶性IL-11Rα是细胞膜结合IL-11Rα的胞外结构域的经蛋白水解切割的释放产物。在一些实施方案中，IL-11Rα可以是细胞膜结合的，并且通过gp130的信号传导可以通过结合有IL-11结合的细胞膜结合的IL-11Rα而触发，称为“IL-11顺式信号传导”。

已证明IL-11-介导的信号传导可刺激造血和血小板生成、刺激破骨细胞活性、刺激神经发生、抑制脂肪形成、减少促炎性细胞因子表达，调节细胞外基质(ECM)代谢并介导胃肠道上皮细胞¹的正常生长控制。

白介素11(IL-11)的生理作用仍不清楚。IL-11与造血细胞的活化和血小板的产生有最紧密的联系，但也被认为具有促炎性、抗炎性、促血管生成性，并且对瘤形成很重要。已知TGFβ1或组织损伤可诱导IL-11表达(Zhu，M.等PLOS ONE 10，(2015)；Yashiro，R.等.J.Clin.Periodontol.33，165-71(2006)；Obana，M.等循环121，684-91(2010)；Tang，W等.化学生物学杂志..273,5506–13(1998))。

IL-11是TGFβ介导的信号传导的重要转录后调节剂。已证明TGFβ1刺激IL-11的AP-1启动子区域，并且已证明由TGFβ诱导分泌的IL-11诱导肠成肌纤维细胞中ERK p42/44和p38 MAP激酶的活化(Bamba等.美国生理学、胃肠和肝脏生理学.(2003)(285(3)：G529-38)。MAP激酶抑制剂能够显着降低TGFβ诱导的IL-11分泌，并且p38 MAP激酶介导的mRNA稳定已被证明对TGFβ诱导的IL-11分泌至关重要。

如本文所用，“IL-11信号传导”和“IL-11-介导的信号传导”是指通过IL-11或其具有成熟IL-11分子功能的片段，与IL-11受体结合而介导的信号传导。

抗体和抗原结合片段

在一些实施方案中，能够抑制IL-11-介导的信号传导或能够抑制血管生成因子介导的信号传导的试剂是抗体或其抗原结合片段。

在本文中，“抗体”以最广义使用，并且涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出与相关靶分子的结合即可。

鉴于当今与单克隆抗体技术有关的技术，可以制备针对大多数抗原的抗体。抗原结合部分可以是抗体(例如Fab片段)或合成抗体片段(例如单链Fv片段[ScFv])的一部分。可以通过已知技术制备针对所选抗原的单克隆抗体，例如《单克隆抗体：技术手册》，H Zola(CRC出版社，1988年)和《单克隆杂交瘤抗体：技术和应用》，J·G·赫雷尔(CRC出版社，1982年)。嵌合抗体被Neuberger等(1988，第8届国际生物技术研讨会第2部分，792-799)讨论。单克隆抗体(mAb)在本发明的方法中特别有用，并且是特异性靶向抗原上单个表位的同质抗体群体。

多克隆抗体也可用于本发明的方法。单特异性多克隆抗体是优选的。可以使用本领域众所周知的方法来制备合适的多克隆抗体。

抗体的抗原结合片段，例如Fab和Fab₂片段，也可以作为基因工程抗体和抗体片段使用/提供。抗体的可变重链(V_H)和可变轻链(V_L)结构域参与抗原识别，这是早期蛋白酶消化实验首先认知的事实。这一点通过啮齿动物抗体的“人源化”进一步的证实。啮齿动物来源的可变域可以与人源的恒定域融合，使得所得抗体保留啮齿动物亲本抗体的抗原特异性(Morrison等，(1984)美国科学院院报.81，6851-6855)。

根据本公开的抗体和抗原结合片段，包含能够与相关靶分子结合的抗体的互补决定区(CDR)，所述靶分子即IL-11、含有IL-11的复合物、IL的受体、血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的受体。

抗体通常包含六个CDR；轻链可变区(VL)中的三个：LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3以及重链可变区(VH)中的三个：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3。六个CDR共同定义了抗体的抗原决定簇，它是抗体与靶分子结合的部分。定义抗体CDR有几种不同的约定，例如Kabat等人在《免疫学意义的蛋白质序列》第5版，美国国立卫生研究院公共卫生服务，贝塞斯达，马里兰州(1991)，Chothia等，分子生物学杂志.196：901-917(1987)，和VBASE2，如Retter等，核酸研究.(2005)33(增刊1)：D671-D674中所描述的。

本公开的抗体和抗原结合片段，可以通过能够结合相关靶分子的单克隆抗体(mAb)的序列来设计和制备。抗体的抗原结合区，例如单链可变片段(scFv)，Fab和Fab₂片段也可以被使用/提供。“抗原结合区”是能够与给定抗体特异性的靶标结合的抗体任何片段。

在一些实施方案中，抗体/片段包含能够结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的受体的抗体的VL和VH区。抗体的抗原结合区的VL和VH区共同构成Fv区。在一些实施方案中，抗体/片段包含或由抗体的Fv区组成，其能够与血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的受体结合。Fv区可以表示为单链，其中VH和VL区是共价连接的，例如，通过柔性寡肽。因此，抗体/片段可以包含或由scFv组成，所述scFv包含能够与血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子受体结合的抗体的VL和VH区。

抗体的抗原结合区的VL和轻链恒定(CL)区，以及VH区和重链恒定1(CH1)区共同构成Fab区。在一些实施方案中，抗体/片段包含或由抗体的Fab区组成，该Fab区能够结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子受体。

在一些实施方案中，抗体/片段包含或由能够结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的受体的完整抗体组成。“完整抗体”是指具有与免疫球蛋白(Ig)的结构基本相似的结构的抗体。例如，不同种类的免疫球蛋白及其结构在Schroeder和Cavacini的过敏临床免疫学杂志，(2010)125(202):S41-S52中述及，其通过引用整体并入本文。G型免疫球蛋白(即IgG)是约150kDa的糖蛋白，包含两个重链和两个轻链。从N末端到C末端，重链包含VH，其后是包含三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)的重链恒定区，类似地，轻链包含VL，其后是CL。取决于重链，免疫球蛋白可以分类为IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA(例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。轻链可以是κ(κ)或λ(λ)。

Fab、Fv、ScFv和dAb抗体片段均可在大肠杆菌中表达并从大肠杆菌中分泌，因此可容易地生产大量所述片段。

完整抗体和F(ab')₂片段是“二价”的。“二价”是指所述抗体和F(ab')₂片段具有两个抗原结合位点。相反，Fab、Fv、ScFv和dAb片段是单价的，仅具有一个抗原结合位点。也可以使用本领域众所周知的噬菌体展示技术来制备能够结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子受体的合成抗体。

抗体可通过亲和成熟过程产生，与未修饰的亲本抗体相比，其中产生的修饰抗体对抗原具有改善的亲和力。亲和成熟的抗体可以通过本领域已知的方法产生，例如，Marks等，Rio/Technology，10：779-783(1992)；和Barbas等，美国科学院学报.91：3809-3813(1994年)；Schier等，基因169：147-155(1995)；Yelton等，免疫杂志，155：1994-2004(1995)；Jackson等，免疫杂志154(7)：331 0-159(1995)；和Hawkins等，分子生物学杂志.226:889-896(1992)中所述的。

抗体/片段包括多特异性(例如双特异性)抗体，例如由两种或多种不同抗体的片段组成多克隆抗体，进而多特异性抗体结合两种或多种类型的抗原。在一些实施方案中，双特异性抗体包含本文所述的抗体/片段，其能够结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子受体、IL-11、含有IL-11的复合物或IL-11的受体。在一些实施方案中，双特异性抗体包括(i)本文所述的能够结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物的抗体/片段，和(ii)本文所述的能够结合IL-11的抗体/片段，含有IL-11的复合物或IL-11的受体。该抗体可以包含对第二抗原具有亲和力的不同片段，该第二抗原可以是任何想要的抗原。

制备双特异性抗体的技术是本领域公知的，例如，参见Mueller，D等，(2010生物药24(2)：89-98)，Wozniak-Knopp G等(2010年，蛋白质工程23(4)：289-297。Baeuerle，PA等，(2009年，癌症研究69(12)：4941-4944)。双特异性抗体和双特异性抗原结合片段可以以任何合适的形式提供，例如在Kontermann MAbs 2012，4(2)：182-197中描述的那些形式，其全部内容通过引用合并于此。例如，双特异性抗体或双特异性抗原结合片段可以是双特异性抗体缀合物(例如IgG2、F(ab’)₂或CovX-Body)、双特异性IgG或IgG样分子(例如IgG、scFv₄-Ig、IgG-scFv、scFv-IgG、DVD-Ig、IgG-sVD、sVD-IgG、1-IgG中的2种、mAb²或Tandemab通用LC)，不对称双特异性IgG或IgG样分子(例如，kih IgG、kih IgG通用LC、CrossMab、IgG-scFab、mAb-Fv、电荷对或SEED抗体)，小双特异性抗体分子(例如双体抗体Db)、dsDb、DART、scDb、tandAbs、串联scFv(taFv)、串联dAb/VHH、三体、三头、Fab-scFv或F(ab’)₂-scFv₂)、双特异性Fc和C_H3融合蛋白(例如taFv-Fc、双-双体抗体、scDb-C_H3、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、scFv-kih-Fc或scFv-kih-C_H3)，或双特异性融合蛋白(例如scFv₂-白蛋白、scDb-白蛋白、taFv毒素、DNL-Fab₃、DNL-Fab₄-IgG、DNL-Fab₄-IgG-细胞因子₂)。特别参见Kontermann MAbs2012，4(2)：182-19的图2)。

产生双特异性抗体的方法包括化学交联抗体或抗体片段，例如，通过可还原的二硫键或不可还原的硫醚键，例如Segal和Bast，2001，双特异性抗体的生产。《免疫学最新实验方法》14：IV：2.13：2.13.1–2.13.16中所述，在此以引用的方式全文并入。例如，N-琥珀酰亚胺基-3-(-2-吡啶基二硫代)-丙酸酯(SPDP)可用于化学交联，例如Fab通过铰链区SH-片段断裂，以生成二硫键连接的双特异性F(ab)₂异二聚体。

产生双特异性抗体的其他方法包括融合产生抗体的杂交瘤，例如，用聚乙二醇制备可分泌双特异性抗体的正交瘤细胞，如D.M.和Bast，B.J.2001，双特异性抗体的生产，《免疫学最新实验方法》，14：IV：2.13：2.13.1–2.13.16中所述。

双特异性抗体和双特异性抗原结合片段也可以通过重组生产，例如通过编码抗原结合分子的多肽的核酸构建物来重组表达，例如《抗体工程：方法和方案》(AntibodyEngineering:Methods and Protocols),第二版(休氏出版社，2012年)，第40章：双特异性抗体的产生：二抗体和串联scFv(Hornig和

)，或法文，如何制作双特异性抗体，分子医学方法，Med.2000；40:333-339中所述。

例如，编码两个抗原结合结构域的轻链和重链可变结构域(即，能够结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物，或血管生成因子的受体抗原结合结构域的轻链和重链可变结构域，以及能够与另一种靶蛋白结合的抗原结合结构域的轻链和重链可变结构域)的DNA构建体，并包括编码抗原结合结构域之间合适的接头或二聚结构域的序列，可以通过分子克隆技术制备。此后，重组双特异性抗体可以通过在合适的宿主细胞(例如哺乳动物宿主细胞)中表达(例如体外)构建体来产生重组双特异性抗体，随后表达的重组双特异性抗体可以任选地纯化。

适配体

在一些实施方案中，适配体为能够抑制IL-11-介导的信号传导或能够抑制血管生成因子介导的信号传导的试剂。

适配体，也称为核酸/肽配体，是一种核酸或肽分子，特征在于能够以高特异性和高亲和力结合靶分子。迄今为止，几乎鉴定出的每个适配体都是非天然存在的分子。

通过指数富集(SELEX ^TM)，或通过开发SOMAmers(慢脱速率修饰的适配体)进行配体系统进化的方法(Gold Let等，(2010)PLoS ONE 5(12):e15004)，可以鉴定和/或产生针对给定靶标的适配体(例如IL-11、含有IL-11的复合物或IL-11的受体、血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的受体)。(2010)PLoS ONE 5(12):e15004).适配体和SELEX在Tuerk和Gold，科学(1990)249(4968)：505-10和WO 91/19813中述及。SELEX和SOMAmer技术的应用包括例如，添加模拟氨基酸侧链的官能团，以扩大适配体的化学多样性。结果，针对靶的高亲和力适配体可以被富集和鉴定。

适配体可以是DNA或RNA分子，并且可以是单链或双链的。适配体可包含化学修饰的核酸，例如其中糖和/或磷酸盐和/或碱是化学修饰的。这样的修饰可以改善适配体的稳定性或使适配体更抗降解，并且可以包括在核糖的2位′上的修饰。

适配体可以通过技术人员熟知的方法合成。例如，适配体可以化学合成，例如在固相载体上。固相合成可以使用亚磷酰胺化学法。简而言之，将固相支持的核苷酸去三苯甲基化，然后与适当活化的核苷亚磷酰胺偶联形成亚磷酸三酯键。然后可能发生帽化(capping)，随后通过氧化剂(通常是碘)氧化亚磷酸三酯。然后可以重复该循环以装配适配体(例如，参见Sinha，N.D.；Biernat，J.；McManus，J.；

H.核酸研究，1984，12，4539；和Beaucage，S.L.；Lyer，R.P.(1992)，四面体48(12)：2223)。

合适的核酸适配体可以任选地具有以下之一的最小长度：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个核苷酸。合适的核酸适配体可以任选地具有以下之一的最大长度：20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个核苷酸。合适的核酸适配体可以任选地具有以下之一的长度：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53 54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79个或80个核苷酸。

适配体可以是经选择或经工程改造以结合特定靶分子的肽。肽适配体及其产生和鉴定的方法在Reverdatto等，Curr Top Med Chem.Sci，(2015)15(12)：1082-101，其全部内容通过引用合并于此。肽适配体可以任选地具有以下之一的最小长度：2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸。肽适配体可以任选地具有以下之一的最大长度：15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。合适的肽适配体可以任选地具有以下之一的长度：2-30、2-25、2-20、5-30、5-25或5-20个氨基酸。

适配体可以具有nM或pM范围内的K_d，例如，小于500nM、100nM、50nM、10nM、1nM、500pM、100pM之一。

能够减少因子或受体表达的药物

在本发明的方面，IL-11介导的信号传导的拮抗剂和/或血管生成因子的拮抗剂能够阻止或减少一种或多种靶标的表达。

表达可以是基因或蛋白质表达。

基因表达可以通过本领域技术人员已知的多种手段来测量，例如通过定量实时PCR(qRT-PCR)或基于报告基因的方法测量mRNA的水平。类似地，可以通过本领域众所周知的各种方法来测量蛋白质表达。例如，通过基于抗体的方法，例如通过蛋白质印迹、免疫组织化学、免疫细胞化学、流式细胞仪、ELISA、ELISPOT或基于报告子的方法。表达可以通过受试者的细胞/组织/器官/器官系统进行。

在一些实施方案中，所述试剂可以是抑制性核酸，例如反义或小干扰RNA，包括但不限于shRNA或siRNA。

寡核苷酸分子，特别是RNA，可用于调节基因表达。这些包括反义寡核苷酸、通小干扰RNA(siRNA)对mRNA的靶向降解、转录后基因沉默(PTG)、微RNA(miRNA)对mRNA的发育调控序列特异性翻译抑制和靶向转录基因沉默。

反义寡核苷酸优选为单链的寡核苷酸，其通过互补序列结合靶向并结合至靶寡核苷酸，例如，mRNA。当靶寡核苷酸是mRNA时，反义物与mRNA的结合阻断了mRNA的翻译和基因产物的表达。反义寡核苷酸可被设计以结合有义基因组核酸并抑制靶核苷酸序列的转录。

在特定染色体基因座上，RNAi机制和小RNA在靶向异染色质复合物和表观遗传基因沉默中的作用已被证实。依赖双链RNA(dsRNA)的转录后沉默，也称为RNA干扰(RNAi)，是一种dsRNA复合物靶向特定同源基因在短时间内进行沉默的现象。它作为一个信号，促进具有序列同一性的mRNA降解。一个20nt的siRNA通常足够长，可以诱导基因特异性沉默，但也足够短，可以逃避宿主应答。靶向基因产物的表达下降广泛，少数siRNA分子可诱导90％的沉默。基于RNAi的治疗剂已经针对多种适应症进入了I、II和III期临床试验(自然2009年1月22日；457(7228)：426-433)。

在本领域中，根据它们的来源，将这些RNA序列称为“短或小干扰RNA”(siRNA)或“微RNA”(miRNA)。两种类型的序列都可通过与互补RNA结合并触发mRNA消除(RNAi)或阻止mRNA翻译成蛋白质来下调基因表达。siRNA衍生自长双链RNA的加工，在自然界中发现的通常是外源的。微干扰RNA(miRNA)是内源编码的小非编码RNA，衍生自短发夹的加工。siRNA和miRNA均可在不进行RNA裂解的情况下抑制带有部分互补靶序列的mRNA的翻译，并降解带有完全互补序列的mRNA。

siRNA配体通常是双链的，并且为了优化RNA介导的靶基因功能下调的有效性，优选选择siRNA分子的长度以确保RISC复合物正确识别siRNA。该复合物介导了mRNA靶标的siRNA的识别，因此siRNA足够短以减少宿主反应。

miRNA配体通常为单链，并具有部分互补的区域，从而使配体形成发夹结构。miRNA是从DNA转录而未翻译成蛋白质的RNA基因。编码miRNA基因的DNA序列比miRNA长。该DNA序列包括miRNA序列和近似的反向互补序列。当此DNA序列转录为单链RNA分子时，miRNA序列及其反向互补碱基对形成部分双链RNA片段。microRNA序列的设计在John等，PLoSBiology，11(2)，1862-1879，2004中进行了讨论。

通常，拟模拟siRNA或miRNA作用的RNA配体具有10至40个核糖核苷酸(或其合成类似物)，更优选地17至30个核糖核苷酸，更优选地19至25个核糖核苷酸，最优选地21至23个核糖核苷酸。在本发明的一些实施方案中，使用双链siRNA的分子可以具有对称的3'突出端，例如一个或两个(核糖)核苷酸，通常是dTdT 3'突出端的UU。基于本文提供的公开，本领域技术人员可以容易地设计合适的siRNA和miRNA序列，例如使用诸如Ambion siRNA检索之类的资源。siRNA和miRNA序列可以通过合成产生并外源添加以引起基因下调，或使用表达系统(例如载体)产生。在一个优选的实施方案中，siRNA是综合合成的。

可以在细胞中加工更长的双链RNA以产生siRNA(参见例如Myers(2003)自然生物技术21：324-328)。较长的dsRNA分子可能具有对称的3'或5'突出端。一个或两个(核糖)核苷酸，或可能具有平末端。更长的dsRNA分子可以是25个核苷酸或更长。优选地，更长的dsRNA分子长度在25至30个核苷酸之间。更优选地，更长的dsRNA分子长度在25至27个核苷酸之间。最优选地，更长的dsRNA分子的长度为27个核苷酸。可以使用载体pDECAP表达长度为30个核苷酸或更长的dsRNA(Shinagawa等，基因和进展，17，1340-5，2003)。

另一个选择是在细胞中表达短发夹RNA分子(shRNA)。shRNA比合成siRNA更稳定。shRNA由短反序列组成，并由小环序列分隔。一个反向重复与基因靶标互补。在细胞中，shRNA被DICER加工成siRNA，可降解靶基因mRNA并抑制表达。在优选的实施方案中，通过从载体内源地(在细胞内)转录产生shRNA。通过在RNA聚合酶III启动子例如人H1或7SK启动子或RNA聚合酶II启动子的控制下用编码shRNA序列的载体转染细胞，可以在细胞内产生shRNA。或者，可以通过从载体转录外源性(体外)合成shRNA。shRNA可以被直接引入细胞。优选地，shRNA序列的长度为40至100个碱基，更优选地为40至70个碱基。发夹茎的长度优选为19至30个碱基对。茎可包含G-U配对以稳定发夹结构。

siRNA分子，更长的dsRNA分子或miRNA分子可以通过核酸序列(优选包含在载体中)的转录重组制备。优选地，siRNA分子，更长的dsRNA分子或miRNA分子包含靶因子或受体的部分序列。

在一个实施方案中，siRNA、更长的dsRNA或miRNA通过从载体内源地(在细胞内)转录产生。可以以本领域已知的任何方式将载体引入细胞。任选地，可以通过组织特异性(例如心脏、肝脏、肾脏或眼睛特异性)启动子来调节RNA序列的表达。在另一个实施方案中，siRNA、更长的dsRNA或miRNA可通过从载体外源地(体外)转录产生。

合适的载体可以是配置成表达能够抑制的寡核苷酸试剂的寡核苷酸载体。这样的载体可以是病毒载体或质粒载体。可以将治疗性寡核苷酸掺入病毒载体的基因组中，并且可操作地连接至调节序列，例如启动子，驱动其表达。术语“可操作地连接”可以包括这样的情况，其中选择的核苷酸序列和调节性核苷酸序列，可以将核苷酸序列的表达置于调节序列的影响或控制下的方式共价连接。因此，如果调节序列能够实现形成部分或全部选定核苷酸序列的核苷酸序列的转录，则该调节序列可操作地连接至选定核苷酸序列。

编码启动子表达的siRNA序列的病毒载体是本领域已知的，其长期表达治疗性寡核苷酸具有益处。实施例包括慢病毒(自然2009年1月22日；457(7228)：426-433)，腺病毒(Shen等，FEBS Lett 2003年3月27日；539(1-3)111-4)和逆转录病毒(Barton和Medzhitov，PNAS 11月12日，2002年第99卷，第23期14943-14945)。

在其他实施方案中，可以将载体装备为辅助治疗性寡核苷酸运输至需要抑制表达的位点。此类载体通常涉及使寡核苷酸与带正电荷的载体(例如，阳离子细胞穿透肽，阳离子聚合物和树状聚合物以及阳离子脂质)复合；使寡核苷酸与小分子(例如胆固醇，胆汁酸和脂质)、聚合物、抗体和RNA缀合；或将寡核苷酸封装在纳米颗粒制剂中(Wang等人，AAPSJ.2010年12月；12(4)：492-503)。

在一个实施方案中，载体可以包含有义和反义方向的核酸序列，使得当表达为RNA时，有义和反义部分将缔合以形成双链RNA。

或者，可使用本领域已知的标准固相或液相合成技术合成siRNA分子。核苷酸之间的连接可以是磷酸二酯键或替代基团，例如，式P(O)S(硫醇盐)的连接基团；P(S)S，(二硫代)；P(O)NR'2；P(O)R'；P(O)OR6；CO；或CONR'2，其中R为H(或盐)或烷基(1-12C)，R6为烷基(1-9C)通过-O-或-S-连接至相邻核苷酸。

除了天然存在的碱基以外，还可以使用修饰的核苷酸碱基，并且可以赋予包含它们的siRNA分子有利的性质。

例如，修饰的碱基可以增加siRNA分子的稳定性，从而减少沉默所需的量。提供修饰的碱基还可以提供比未修饰的siRNA更多，或更少稳定的siRNA分子。

术语“修饰的核苷酸碱基”涵盖具有共价修饰的碱基和/或糖的核苷酸。例如，修饰的核苷酸包括具有糖的核苷酸，所述糖共价附接到低分子量有机基团而非在3'位置的羟基和在5'位置的磷酸。因此，修饰的核苷酸还可以包括2'取代的糖，例如2'-O-甲基-；2'-O-烷基；2'-O-烯丙基；2'-S-烷基；2'-S-烯丙基；2'-氟-；2'-卤或叠氮核糖，碳环糖类似物，α-异头糖；差向异构糖，例如阿拉伯糖，木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖和七庚糖。

修饰的核苷酸是本领域已知的，包括烷基化的嘌呤和嘧啶，酰化的嘌呤和嘧啶以及其他杂环。这些类型的嘧啶和嘌呤在本领域中是已知的，包括伪异胞嘧啶，N4，N4-乙基胞嘧啶、8-羟基-N6-甲基腺嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、肌苷、N6-异戊基腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤，1-甲基伪尿嘧啶，1-甲基鸟嘌呤、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、-D-甘露糖基肌氨酸、5-甲氧基羰基甲基尿嘧啶、5甲氧基尿嘧啶、2甲硫基-N6-异戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸甲基丙烯酸酯、伪尿嘧啶、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5甲基尿嘧啶、N-尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶5-氧乙酸、肌氨酸、2-硫胞嘧啶、5-丙基尿嘧啶、5-丙基胞嘧啶、5-乙基尿嘧啶、5-乙基胞嘧啶、5-丁基尿嘧啶、5-戊基尿嘧啶、5-戊基胞嘧啶和2,6，二氨基嘌呤、甲基伪尿嘧啶、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基胞嘧啶。

在秀丽隐杆线虫、果蝇、植物和哺乳动物中，与使用RNAi沉默的基因有关的方法是本领域已知的(Fire A等，1998自然391：806-811；Fire，A.Trends Genet.15，358-363(1999)；Sharp，P.A.RNA干扰2001，基因进展15，485-490(2001)；Hammond，S.M.等，自然评论遗传学.2，110-1119(2001)；Tuschl，T.化学生物学2，239-245(2001)；Hamilton，A.等，科学286，950-952(1999)；科学286：950-952。Hammond，S.M.，等，自然404，293-296(2000)。Zamore，P.D.等，细胞101，25-33(2000)；Bernstein,E.,等,自然409,363-366(2001)；Elbashir,S.M.,等,基因进展.15，188-200(2001)；WO0129058；WO9932619，和Elbashir S M等，2001自然411：494-498)。

该核酸可以是双链siRNA。(如技术人员将理解的，并且如下面进一步解释的，siRNA分子也可以包括短的3'DNA序列。)

本发明的核酸与靶序列之间期望有完美同一性/互补性，尽管这是优选的，但不是必需的。因此，与靶标的mRNA相比，本发明的核酸可包括单个错配。然而，可以预料的是，即使存在单个错配也可能导致效率降低，因此不存在错配是优选的。如果存在3'的突出端，则不考虑错配的数量。

术语“互补性”不限于由天然存在的核糖核苷酸和/或脱氧核糖核苷酸组成的核酸之间的常规碱基配对，还包括mRNA与本发明的包括非天然核苷酸的核酸之间的碱基配对。

形成双链RNA的链可能具有短的3'二核苷酸突出端，可能是DNA或RNA。与3'RNA突出端相比，3'DNA突出端的使用对siRNA活性没有影响，但是降低了核酸链化学合成的成本(Elbashir等，2001c)。因此，DNA二核苷酸可能是优选的。

当其存在时，二核苷酸突出端可以彼此对称，尽管这不是必需的。实际上，有义(上部)链的3'突出端与RNAi活性无关，因为它不参与mRNA的识别和降解(Elbashir等，2001a，2001b，2001c)。

尽管果蝇中的RNAi实验表明，反义3'突出端可能参与了mRNA的识别和靶向(Elbashir等，2001c)，但在哺乳动物细胞中，3'突出端似乎对siRNA的RNAi活性并不必要。因此，在哺乳动物细胞中，3'突出端的错误退火几乎没有影响(Elbashir等，2001c；Czauderna等，2003)。

因此，任何二核苷酸突出端均可用于siRNA的反义链。然而，二核苷酸优选为-UU或-UG(如果突出端为DNA则为-TT或-TG)，更优选为-UU(或-TT)。-UU(或-TT)二核苷酸突出端最有效，并且与RNA聚合酶III转录末端信号(终止子信号为TTTTT)一致(即能够形成一部分)。因此，该二核苷酸是最优选的。也可以使用二核苷酸AA、CC和GG，但效果较差，因此较不优选。

此外，siRNA可以完全省略3'突出端。

本发明还提供了分别由上述双链核酸之一的组分链组成的单链核酸(本文称为单链siRNA)，优选具有3’-突出端，但任选地没有。本发明还提供了包含成对的这样的单链核酸的试剂盒，其能够彼此体外杂交以形成前述的双链siRNA，然后可以将其引入细胞中。

互补部分通常通过间隔子连接，所述间隔子具有合适的长度和序列以允许两个互补部分彼此杂交。两个互补的部分(即有义和反义)可以按任意顺序5'-3'连接。间隔子通常是大约4-12个核苷酸，优选4-9个核苷酸，更优选6-9个核苷酸的短序列。

优选地，间隔子的5'端(紧邻上游互补部分的3')由核苷酸-UU-或-UG-，同样优选地-UU-组成(尽管同样，这些特定的二核苷酸的使用不是必需的)。在OligoEngine(西雅图，华盛顿州，美国)的pSuper系统中推荐使用的合适间隔子为UUCAAGAGA。在这种情况和其他情况下，间隔子的末端可以彼此杂交，例如通过少量(例如1或2个)碱基对，将双链基序延伸到靶标的确切序列之外。

类似地，转录的RNA优选包括从下游互补部分开始的3’突出端。同样，这优选为–UU或–UG，更优选地为–UU。

随后，在哺乳动物细胞中,此类shRNA分子可被DICER酶切割，以产生上述的双链siRNA，其中杂交dsRNA的一条或每条链包含3'突出端。

合成本发明核酸的技术已是本领域众所周知的。

技术人员可使用熟知的技术和可商购的材料为本发明的DNA构建合适的转录载体。特别地，DNA将与控制序列相关，包括启动子和转录终止序列。

特别适合的是市售可用的OligoEngine(西雅图，华盛顿，美国)的pSuper和pSuperior系统。它们使用聚合酶III启动子(H1)和一个T5转录终止子序列，在转录的3'末端提供两个U残基(在DICER处理后，在siRNA的一条链上提供3'UU突出端)。

另一种合适的系统在Shin等(RNA，2009年5月；15(5)：898-910)描述了，它使用另一个聚合酶III启动子(U6)。

本发明还提供了包含本发明的双链siRNA或本发明的转录载体与一种或多种药学上可接受的载体混合的组合物。合适的载体包括亲脂性载体或囊泡，其可有助于细胞膜的渗透。

适合于施用本发明的siRNA双链体和DNA载体的材料和方法是本领域众所周知的，鉴于RNAi技术的潜力，改进的方法正在开发中。

通常，有许多技术可用于将核酸引入哺乳动物细胞。技术的选择取决于将核酸转移至体外培养的细胞中还是体内患者细胞中。适用于体外将核酸转移至哺乳动物细胞的技术包括使用脂质体、电穿孔、显微注射、细胞融合、DEAE、葡聚糖和磷酸钙沉淀。体内基因转移技术包括用病毒(通常是逆转录病毒)载体转染和病毒外壳蛋白-脂质体介导的转染(Dzau等，(2003)生物技术趋势11，205-210)。

特别地，在以下文章中公开了在体外和体内的细胞中施用本发明的核酸的合适技术：

一般性综述：Borkhardt，A.2002年,通过RNA干扰阻断恶性细胞中的癌基因-高度特异性的癌症治疗的新希望？癌细胞,2:167-8。Hannon,G.J.2002.RNA干扰,自然，418:244-51。McManus,M.T.,和P.A.Sharp.2002.哺乳动物中通过小干扰RNA的基因沉默，遗传学自然评论，3:737-47。Scherr，M.，M.A.Morgan和M.Eder，2003b，哺乳动物中通过小干扰RNA的基因沉默，现代药物化学，10:245-56。Shuey，D.J.，D.E.McCallus和T.Giordano，2002.RNAi：治疗干预中的基因沉默，今日药物发现，7:1040-6。

脂质体的全身递送：Lewis,D.L.,J.E.Hagstrom,A.G.Loomis，J.A.Wolff和H.Herweijer，2002.siRNA的高效递送以抑制出生后小鼠的基因表达。自然遗传，32:107-8。Paul，C.P.，P.D.Good,I.Winer,和D.R.Engelke.2002.小干扰RNA在人细胞中的有效表达，自然生物科技，20:505-8。Song E.，S.K.Lee,J.Wang,N.Ince,N.Ouyang,J.Min,J.Chen,P.Shankar,和J.Lieberman.2003.靶向Fas的RNA干扰可保护小鼠免受爆发性肝炎，自然医学，9:347-51。Sorensen,D.R.,M.Leirdal,和M.Sioud，2003.通过在成年小鼠中系统传递合成的siRNAs来沉默基因，分子生物学杂志，327:761-6。

病毒介导的转移：Abbas-Terki,T.,W.Blanco-Bose,N.Deglon,W.Pralong,和P.Aebischer.2002.慢病毒介导的RNA干扰.人类基因疗法，13:2197-201。Barton，G.M.和R.Medzhitov，2002.逆转录病毒将小干扰RNA导入原代细胞，美国科学院院报，99：14943-5。E.Devroe和P.A.Silver.2002.逆转录病毒提供的siRNA，BMC Biotechnol，2:15。Lori，F.，P.Guallini，L.Galluzzi和J.Lisziewicz.2002.基因疗法可治疗HIV感染.美国药物基因组学杂志，2:245-52。Matta，H.，B.Hozayev，R.Tomar，P.Chugh和P.M.Chaudhary.2003.慢病毒载体用于递送小干扰RNA的用途，癌症生物疗法.2:206-10。Qin,X.F.,D.S.An,I.S.Chen和D.Baltimore，2003.通过慢病毒介导的针对CCR5的小干扰RNA抑制人T细胞中的HIV-1感染，美国科学院院报，100：183-8。Scherr，M.，K.Battmer，A.Ganser和M.Eder.2003a.慢病毒介导的小干扰RNA传递对基因表达的调节，细胞周期，2:251-7。Shen,C.,A.K.Buck，X.Liu，M.Winkler和S.N.Reske.2003.腺病毒传递的siRNA使基因沉默.FEBS Lett.539:111-4。

肽递送：Morris，M.C.，L.Chaloin，F.Heitz和G.Divita,2000.易位肽和蛋白质及其在基因传递中的用途，生物技术当前述评，11:461-6。Simeoni，F.，M.C.Morris,F.Heitz,和G.Divita.2003.深入了解基于肽的基因传递系统MPG的机制：将siRNA传递至哺乳动物细胞的意义，核酸研究.31:2717-24。其他适合将siRNA递送至靶细胞的技术可以基于纳米颗粒或纳米胶囊，例如美国专利号6,649,192B和5,843,509B中所述的那些。

血管生成和血管生成因子

血管生成是生理过程，通过该过程从先前存在的血管中形成新血管。这是生长、愈合和恶性肿瘤中的重要过程。血管生成的上调是眼疾病，尤其是视网膜新血管疾病的共同特征。血管系统的发育和维持对于所有实质组织的正常功能至关重要，缺陷会导致疾病和器官衰竭，尤其是本文所述的眼部疾病。大多数新血管视网膜疾病导致纤维化。

许多血管生成诱导物已被鉴定出，包括血管内皮生长因子(VEGF)家族成员、血管生成素、转化生长因子(TGF)、血小板衍生生长因子、肿瘤坏死因子-α、白介素和成纤维生长因子(FGF)家族成员。血管生成的细胞和分子机制在Adams和Alitalo，《分子细胞生物学自然综述》，第8卷，第464–478页(2007)和Otrock等，了解血管生成生物学：最重要分子机制的综述，《血细胞、分子和疾病》，第39卷，第2期，2007年，第212-220页中述及，通过引用将其全部内容合并于此。

如本文所用，“血管生成因子”是指能够诱导/增强/促进血管生成的任何因子(例如肽/多肽、糖蛋白、脂蛋白、聚糖、糖脂、脂质、核酸或其片段)。能够诱导/增强/促进血管生成的因素可被鉴定，例如，通过体外或体内的血管生成的测定实验中分析。用于分析血管生成的合适测定法包括内皮细胞迁移测定法、内皮细胞增殖测定法和内皮管形成测定法。血管生成测定法在Adair TH，Montani JP.血管生成.圣拉斐尔(加利福利亚州)：Morgan和Claypool生命科学；2010，第2章，血管生成测定法中有详细描述，其全部内容通过引用并入本文。

在一些实施方案中，血管生成因子是能够诱导/促进血管生成的多肽或多肽复合物。血管生成因子可以是可溶的或膜结合的，并且可以是多肽或多肽复合物配体，或该配体的多肽或多肽复合物受体。血管生成因子可以来自任何物种，并且包括来自任何物种的血管生成因子的同种型、片段、变体或同源物。在优选的实施方案中，该物种是人类(智人)。血管生成因子的同种型、片段、变体或同系物任选的特征为，与来自给定物种(例如人类)的未成熟或成熟血管生成因子氨基酸序列具有至少70％，优选地选自80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的一种的氨基酸序列同一性。血管生成因子的同种型、片段、变体或同源物任选的特征为，与血管生成因子的互作伴侣(例如，血管生成因子的受体或血管生成因子的配体)结合的能力，和/或诱导/促进血管生成的能力。例如，血管生成因子可以是VEGF、VEGF受体、FGF、FGF受体、PDGF或PDGF受体、或VEGF、VEGF受体的片段、变体、同种型或同系物、FGF、FGF受体、PDGF或PDGF受体。

血管生成因子的多肽片段可以具有任何长度(按氨基酸数目计)，尽管可以任选地为成熟血管生成因子长度的至少25％，并且最大长度可以为成熟血管生成因子的长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％之一。血管生成因子可以是包含一个或多个亚基的复合物，例如异源或同源二聚体。

如本文所用，“血管生成因子的互作伴侣”是指能够与血管生成因子相互作用(例如结合)的任何因子(例如多肽或多肽复合物)。相互作用可以是非共价结合。

血管生成因子和该血管生成因子的互作伴侣优选缔合以形成生物学功能复合物，例如能够启动/促进信号传导(例如促血管生成信号传导)的受体：配体复合物。血管生成因子的互作伴侣可以是，例如血管生成因子的受体，或者是血管生成因子的配体。在一些实施方案中，血管生成因子的互作伴侣和血管生成因子之间的相互作用为诱导/促进血管生成信号和/或血管生成。例如，VEGF与VEGF受体的结合能够通过表达VEGF受体的细胞触发细胞内信号传导，从而诱导/促进血管生成过程。

例如，血管生成因子的互作伴侣可以是血管生成因子受体。在一些实施方案中，血管生成因子受体可以是能够结合VEGF、FGF、PDGF或VEGF、FGF或PDGF的片段、变体、同种型或同系物的多肽或多肽复合物。血管生成因子受体包括，例如VEGF受体、FGF受体和PDGF受体。根据本公开内容，应当理解，血管生成因子受体是血管生成因子。例如，VEGFR既是血管生成因子(即能够诱导/增强/促进血管生成的因子)又是血管生成因子受体(即VEGF的受体)。

类似地，血管生成因子的互作伴侣可以是血管生成因子受体的配体。在一些实施方案中，血管生成因子受体的配体可以是能够结合VEGF受体、FGF受体、PDGF受体、或VEGF受体、FGF受体或PDGF受体的片段、变体、同种型或同系物的多肽或多肽复合物。血管生成因子配体包括，例如VEGF、FGF和PDGF。根据本公开内容，应当理解，血管生成因子配体是血管生成因子。例如，VEGF既是血管生成因子(即能够诱导/增强/促进血管生成的因子)，又是血管生成因子受体的配体(即VEGF受体的配体)。

在一些实施方案中，在纤维化情况下或在其他方面，本文提供的任何方法或组合物可用于治疗/预防血管生成。

血管内皮生长因子(VEGF)

在本文的一些实施方案中，所述血管生成因子是VEGF。VEGF是一种生长因子，由包含胎盘生长因子的基因家族编码(PIGF，AAD30179.1 GI：4809334)、VEGF-A(AAP86646.1GI：32699990)、VEGF-B(AAC50721.1 GI：1488259)、VEGF-C(CAA63907.1 GI：1182005)、VEGF-D(BAA24264.1 GI：2766190)，而orf病毒编码VEGF-E(ABA00650.1 GI：74230845)。在一些实施方案中，所述VEGF是VEGF-A。外显子剪接的差异导致产生四种主要的VEGF-A同种型：VEGF121、VEGF165、VEGF189和VEGF206，在信号序列切割后其分别具有121、165、189和206个氨基酸的[65]。VEGF165似乎是主要的同种型。

VEGF刺激源自动脉、静脉和淋巴系统的血管内皮细胞的生长，并在多种体内模型中诱导血管生成(即形成薄壁内皮衬里的结构)，诱导微血管通透性快速升高[66-68]。

在本说明书中，“VEGF”是指来自任何物种的VEGF(例如VEGF-A、B、C、D或E)，并且包括来自任何物种的VEGF的同种型、片段、变体或同源物。在优选的实施方案中，该物种是人类(智人)。VEGF的片段可以具有任何长度(按氨基酸数目计)，尽管可以任选地为成熟VEGF长度的至少25％，并且最大长度可以为成熟VEGF长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％之一。VEGF片段的最小长度为10个氨基酸，最大长度为15、20、25、30、40、50、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或225个氨基酸中的一个。

VEGF通过结合三种受体VEGFR1(AAH39007.1 GI：24660372)、VEGFR2(P35968.2GI：9087218)和VEGFR3(AAA85215.1 GI：1150991)发挥其生物学作用。每个受体具有VEGF的细胞外结合结构域，跨膜序列和细胞内酪氨酸激酶部分。结合至细胞外受体结构域的VEGF二聚化受体并且导致细胞内酪氨酸激酶部分的磷酸化。

在本说明书中，“VEGF的受体”或“VEGF受体”是指能够结合VEGF的多肽或多肽复合物。在一些实施方案中，VEGF受体能够结合VEGF并在表达该受体的细胞中诱导信号转导。在一些实施方案中，“VEGF的受体”是指VEGFR。在本说明书中，除非另有说明，否则“VEGFR”是指VEGFR1、VEGFR2和/或VEGFR3。

VEGFR可以任选地被表征为，与来自给定物种(例如人类)的VEGFR氨基酸序列具有至少70％，优选地为80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。VEGFR的同种型、片段、变体或同源物可选的特征为结合VEGF(优选来自相同物种)并刺激表达VEGFR的细胞中的信号转导的能力。VEGF受体的片段可以具有任意长度(以氨基酸数目计)，尽管可选地为成熟VEGFR的长度的至少25％，并且最大长度为成熟VEGFR长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％之一。VEGF受体片段的片段可以具有10个氨基酸的最小长度，并且最大长度为20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000、1010、1020、1030、1040、1050、1060、1070、1080、1090、1100、1110、1120、1130、1140、1150、1160、1170、1180、1190、1200、1210、1220、1230、1240、1250、1260、1270、1280、1290、1300、1310、1320、1330、1340、1350、1360、1370、1380、1390、1400、1410、1420、1430、1440、1450、1460、1470、1480、1490、1500、1510、1520、1530、1540、1550、1560、1570、1580、1590、1600、1610、1620、1630、1640、1650、1660、1670、1680、1690、1700、1710、1720、1730、1740、1750、1760、1770、1780、1790或1795个氨基酸之一。

成纤维细胞生长因子(FGF)

酸性和碱性成纤维细胞生长因子分别为aFGF和bFGF，是肝素结合蛋白促分裂原，被认为在血管生成中起重要作用。有22种不同的FGF和四种不同的酪氨酸激酶受体(FGFR)。FGF及其受体在Presta等，血管生成中的成纤维细胞生长因子/成纤维细胞生长因子受体系统，《细胞生长因子综述》，16(2005)，第159-178页中进行了综述，其全文通过引用并入本文。

如本文所用，“FGF”是指来自任何物种的aFGF或bFGF，并且包括其同种型、片段、变体或同源物。例如，FGF可以是：FGF1(AAH32697.1 GI：21595687)、FGF2(P09038.3 GI：261260095)、FGF3(P11487.1 GI：122748)、FGF4(NP_001998.1 GI：4503701)、FGF5(P12034.4 GI：85700417)、FGF6(P10767.4 GI：1169676)、FGF7(P21781.1 GI：122756)、FGF8(NP_001193318.1 GI：329755303)、FGF9(NP_002001.1 GI：4503707)、FGF10(CAG46466.1 GI：49456291)、FGF11(Q92914.1 GI：2494457)、FGF12(P61328.1 GI：47117683)、FGF13(Q92913.1 GI：2494461)、FGF14(NP_001308867.1 GI：1013165743)、FGF15(AAO13811.1 GI：27448228)、FGF16(NP_003859.1 GI：4503691)、FGF17(AAQ89228.1GI：37182856)、FGF18(AAQ89954.1 GI：37222209)、FGF19(NP_005108.1 GI：4826726)、FGF20(AAH98339.1 GI：68226699)、FGF21(AAQ89444.1 GI：37183289)或FGF22(Q9HCT0.1GI：13626689)，或其同种型、片段、变体或同源物。“FGF受体”是指能够结合FGF及其同种型、片段、变体或同源物的多肽或多肽复合物。FGF受体包括FGFR1(AAH15035.1 GI：21955340)、FGFR2(AAA61188.1 GI：3397110)、FGFR3(P22607.1 GI：120050)和FGFR4(AAH11847.1 GI：15080148)及其同种型、片段、变体或同源物。在一些实施方案中，FGF受体能够结合FGF并诱导表达FGF受体的细胞内的信号转导。

血小板衍生生长因子

血小板衍生生长因子(PDGF)最初从血小板中纯化，然后在成纤维细胞、星形胶质细胞、角质形成细胞、上皮细胞和其他细胞类型中进行鉴定。PDGF以杂二聚体(PDGF-AB)或同二聚体(PDGF-AA或-BB)形式存在，由链A(P04085.1 GI：129719)和B(CAG46606.1 GI：49456571)组成。PDGF-R有两种形式，即α(P16234.1 GI：129892)和β(P09619.1 GI：129890)，各自被不同的基因编码。根据所结合的生长因子，PDGF-R同源或异源二聚。PDGF及其受体在Ross等，血小板衍生的生长因子的生物学，细胞，46卷，155-169，1986年7月18日中述及，其通过引用整体并入本文。

如本文所用，“PDGF”是指来自任何物种的PDGF-A、PDGF-B、PDGF-AB、PDGF-AA、PDGF-BA或PDGF-BB，并且包括其同种型、片段、变体或同源物。“PDGF受体”是指能够结合PDGF或其同种型、片段、变体或同源物的多肽或多肽复合物。在一些实施方案中，PDGF受体是PDGF-Rα、PDGF-Rβ、PDGF-Rα-α同二聚体、PDGF-Rβ-β同二聚体或PDGF-Rα-β异二聚体。在一些实施方案中，PDGF受体能够结合PDGF并在表达PDGF受体的细胞中诱导信号转导。

其他血管生成因子包括血管生成素(NP_001091046.1 GI：148277046)、血管生成素(AAD19608.1 GI：4378598)、整联蛋白(例如选自(NP_001004439.1 GI：52485853、NP_002194.2 GI：116295258、NP_002195.1 GI：4504747、NP_000876.3 GI：67191027、NP_002196.4 GI：1017029567、NP_001303235.1 GI：937834186、NP_001138468.1 GI：222418613、NP_003629.2 GI：612407851、NP_002198.2 GI：52485941、NP_001273304.1 GI：556503454、NP_001004439.1 GI：52485853、NP_001305114.1 GI：970949440、NP_001273304.1 GI：556503454、NP_002200.2 GI：167466215、NP_001139280.1 GI：224831239、NP_002201.1 GI：4504763、EAW51597.1 GI：119571982、NP_001273304.1 GI：556503454、NP_391988.1 GI：19743819、NP_001120963.2 GI：735367803、NP_000203.2 GI：47078292、NP_000204.3 GI：54607035、NP_001341694.1 GI：1269208512、NP_001269282.1GI：538916664、NP_000880.1 GI：4504777、NP_002205.1 GI：4504779)和TNFα(AQY77150.1GI：1159611449)。适用于本发明的TNFα抑制剂包括抗体英夫利昔单抗(infliximab)。

纤维化

如本文所用，“纤维化”是指由于细胞外基质组分，例如胶原蛋白的过量沉积而形成的过量纤维结缔组织。

纤维结缔组织的特征在于具有高胶原含量的细胞外基质(ECM)。所述胶原蛋白可以以链或纤维的形式提供，其排列不规则或排列整齐。纤维结缔组织的ECM也可以包括糖胺聚糖。

如本文所用，“过量的纤维结缔组织”是指在给定位置(例如，给定组织或器官，或给定组织或器官的部分)处的结缔组织的量大于没有纤维化(例如，在正常的非病理条件下)的该位置存在的结缔组织的量。如本文所用，“细胞外基质组分的过量沉积”是指一种或多种细胞外基质组分的沉积水平大于在没有纤维化的情况下的沉积水平，例如在正常的非病理条件下。

纤维化的细胞和分子机制在Wynn，J.Pathol.(2008)214(2):199-210，和Wynn和Ramalingam，自然医药(2012)18：1028-1040，其通过引用整体并入本文。

纤维化的重要细胞效应因子是肌成纤维细胞，它产生富含胶原的细胞外基质。

在对组织损伤的反应中，受损细胞和白细胞产生促纤维化因子，例如TGFβ、IL-13和PDGF，这些因子可激活成纤维细胞，使其转化为表达sma的肌成纤维细胞，并将肌成纤维细胞招募到损伤部位。肌成纤维细胞产生大量的细胞外基质，是帮助挛缩和愈合伤口的重要介质。然而，在持续感染或慢性炎症的情况下，肌成纤维细胞可能会过度激活和募集，从而产生过量的细胞外基质成分，导致过量纤维结缔组织的形成。

在一些实施例中，纤维化可能由病理条件触发，例如，导致促纤维化因子(如TGFβ1)产生的条件、感染或疾病状态。在一些实施方案中，纤维化可以由身体伤害/刺激、化学伤害/刺激或环境伤害/刺激引起。手术期间可能会发生物理伤害/刺激，例如医源性原因。化学损伤/刺激可能包括药物引起的纤维化，例如长期服用博来霉素、环磷酰胺、胺碘酮、普鲁卡因酰胺、青霉素、金和呋喃妥因等药物后(Daba等，Saudi Med J 2004年6月；25(6)：700-6)。环境伤害/刺激可能包括接触石棉纤维或二氧化硅。

纤维化可发生在身体的许多组织中。例如，纤维化可发生在肝脏(例如肝硬化)、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、肠、脑和骨髓中。纤维化也可能一次在多个器官中发生。

在一些实施方案中，纤维化可涉及胃肠系统的器官，例如肝脏、小肠、大肠或胰腺。在一些实施方案中，纤维化可涉及呼吸系统的器官，例如肺。在一些实施方案中，纤维化可涉及心血管系统的器官，例如心脏或血管。在一些实施方案中，纤维化可能涉及皮肤。在一些实施例中，纤维化可能涉及神经系统的器官，例如大脑。在一些实施方案中，纤维化可能涉及泌尿系统的器官，例如肾。在一些实施方案中，纤维化可涉及肌肉骨骼系统的器官，例如肌肉组织。

在一些实施方案中，纤维化可能是心脏或心肌纤维化，肝纤维化或肾纤维化。在一些实施方案中，心脏或心肌纤维化与心脏的肌组织功能障碍或心脏的电学性质或心脏的瓣膜壁增厚有关。在一些实施方案中，纤维化是心脏的心房和/或心室。治疗或预防房颤或心室纤维化可能有助于降低房颤、心室纤颤或心肌梗塞的风险或发作。在一些实施方案中，肝纤维化与慢性肝病或肝硬化有关。在一些实施方案中，肾纤维化与慢性肾脏疾病有关。

在一些实施方案中，纤维化可能与血管生成有关。在一些实施方案中，本文所述的治疗或预防纤维化的方法，确定受试者是否适合这种治疗/预防的方法以及诊断/预测纤维化的方法也适用于治疗/预防/诊断/预测血管生成，反之亦然。

根据本发明，以纤维化为特征的疾病/病状包括但不限于：眼病、例如格雷夫氏眼病、视网膜上纤维化、视网膜纤维化、特发性黄斑前纤维化、视网膜下纤维化(例如与视网膜脱离或黄斑变性相关(例如、湿性老年黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性视网膜病变、青光眼、地图样萎缩(老年性黄斑变性(AMD))、角膜纤维化、手术后纤维化(例如后囊白内障手术后、或青光眼小梁切除术后的水泡)、结膜纤维化或结膜下纤维化；呼吸系统疾病、如肺纤维化、囊性纤维化、特发性肺纤维化、进行性大块纤维化、硬皮病、闭塞性细支气管炎、赫曼斯基-普德拉克综合征、石棉肺、慢性肺动脉高压、艾滋病相关性肺动脉高压紧张、结节病、肺部肿瘤基质和哮喘；慢性肝病、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、血吸虫肝病、肝硬化；心血管疾病、例如肥厚型心肌病、扩张型心肌病(DCM)、心房纤维化、房颤、心室纤维化、心室纤颤、心肌纤维化、布鲁加综合征、心肌炎、心肌内膜纤维化、心肌梗塞、纤维化性血管病、致心律失常性右室心肌病(ARVC)、肾小管间质和肾小球纤维化、动脉粥样硬化、静脉曲张、脑梗塞；神经系统疾病、例如神经胶质病和阿尔茨海默氏病；肌营养不良症、例如杜兴氏肌营养不良症(DMD)或贝克尔肌营养不良症(BMD)；胃肠道疾病、例如慢性病、微观结肠炎和原发性硬化性胆管炎(PSC)；皮肤疾病如硬皮病、肾源性全身纤维化和皮肤瘢痕疙瘩；关节纤维化杜普伊特伦的挛缩；纵隔纤维化腹膜后纤维化；骨髓纤维化；佩罗尼氏病；粘膜囊炎肾脏疾病(例如、肾纤维化、肾病综合征、阿尔波特综合征、HIV相关性肾病、多囊肾、法布里氏病、糖尿病肾病、慢性肾小球肾炎、与系统性狼疮相关的肾炎)；进行性全身性硬化症(PSS)；慢性移植物抗宿主病；关节炎；纤维化前肿瘤性和纤维化肿瘤性疾病；以及化学或环境侮辱(例如癌症化学疗法、农药、放射/癌症放射疗法)引起的纤维化。

应当理解，上面列出的许多疾病/状况是相互关联的。例如，心室纤维化可在心肌梗塞后发生，并与DCM、HCM和心肌炎有关。

眼部纤维化

在一些实施方案中，本发明涉及治疗或预防眼部纤维化的方法、用于方法中的组合或组合物在治疗或预防眼部纤维化方法中的用途。眼部纤维化在Friedlander，眼部纤维化和疾病，临床研究杂志.2007年3月1日；117(3)：576-586中详细介绍，其通过引用全文纳入本文。

眼部纤维化可能是由于机械伤口或各种新陈代谢机能障碍引起的，包括对炎症、局部缺血和退行性疾病的反应。眼部纤维化可能是指眼前部或眼后部(即视网膜)发生的伤口愈合或疾病。

眼部纤维化可能是视网膜、视网膜上或视网膜下的纤维化。它可能是缺血性视网膜病变的结果或与缺血性视网膜病变有关。眼部纤维化可以是与视网膜表面上的局部缺血和/或新生血管相关的纤维化。眼部纤维化可能与视网膜下新生血管形成有关，例如脉络膜毛细血管起源的新血管形成。纤维化可能与纤维血管瘢痕形成有关，例如视网膜。眼部纤维化可能与脉络膜新生血管(CNV)有关。

眼部纤维化也可能发生在眼睛的前段。例如，纤维化可能会影响角膜或小梁网(眼内液通过其离开眼睛的区域)。纤维化的特征在于角膜表面上(例如小舌和翼状肉)的纤维血管生长。

眼部纤维化可能与疾病/紊乱有关，例如炎性或缺血性疾病。此类疾病/疾病包括格雷夫氏眼病、视网膜上纤维化、视网膜纤维化、特发性黄斑前纤维化、视网膜下纤维化(例如与视网膜脱离或黄斑变性相关(例如湿性年龄相关性黄斑变性(AMD))、糖尿病性视网膜病、青光眼、地图样萎缩(干性年龄相关性黄斑变性(AMD))、角膜纤维化、手术后纤维化(例如白内障手术后的后囊或青光眼小梁切除术后的水泡)、结膜纤维化或结膜下纤维化。

根据本发明的纤维化的治疗、预防或减轻可以是与IL-11的上调相关的纤维化，例如在发生或可能发生纤维化的细胞或组织中IL-11的上调，或细胞外IL-11或IL-11R的上调。

治疗或减轻纤维化可能有效地预防纤维化的进展，例如防止病情恶化或减慢纤维化的发展速度。在一些实施方案中，治疗或减轻可导致纤维化的改善，例如，减少胶原蛋白纤维的沉积量。

预防纤维化可以指预防病情恶化或预防纤维化的发展，例如防止早期纤维化发展到后期的慢性阶段。

IL-11介导的信号拮抗剂

本发明的一个方面涉及IL-11-介导的信号传导的拮抗作用(即抑制)。

在此，“抑制”是指相对于对照条件的降低、减少或减弱。例如，通过IL-11-介导的信号传导的拮抗剂抑制IL-11的作用是指，在没有试剂的情况和/或在适当的控制剂存在下，降低或减弱IL-11-介导的信号传导的范围/程度。

抑制在本文中也可以称为中和或拮抗作用。IL-11-介导的信号传导的拮抗剂(例如IL-11或含IL-11复合物介导的活性拮抗剂)相对于相关功能或过程可以称为“中和”或“拮抗”剂。例如，能够抑制IL-11-介导的信号传导的试剂可以被称为能够中和IL-11-介导的信号传导，或者可以被称为IL-11-介导的信号传导的拮抗剂。

IL-11信号传导途径提供了多种抑制IL-11信号传导的途径。IL-11-介导的信号传导的拮抗剂可以抑制IL-11的作用，例如，通过抑制IL-11受体信号传递中参与的或必需的一个或多个因子的作用。

例如，可以通过破坏IL-11(或包含IL-11的复合物，例如IL-11和IL-11Rα的复合物)和IL-11的受体(例如IL-11Rα，一种包含IL-11Rα、gp130受体复合物，或一种包含IL-11Rα和gp130受体复合物)之间的相互作用来抑制IL-11信号传导。在一些实施方案中，通过抑制，例如IL-11、IL-11Rα和gp130中的一种或多种的基因或蛋白质表达来抑制IL-11-介导的信号传导。

在实施方案中，通过破坏IL-11-介导的顺式信号传导而不破坏IL-11-介导的反式信号传导，例如抑制参与膜结合IL-11Rα中gp130介导的顺式复合物，来抑制IL-11-介导的信号传导。在实施方案中，通过破坏IL-11-介导的反式信号传导但不破坏IL-11-介导的顺式信号传导，来抑制IL-11-介导信号传导，即通过抑制gp130介导的反式信号复合物，例如与可溶性IL-11Rα结合的IL-11或与可溶性IL-6R结合的IL-6，来抑制IL-11-介导信号传导。在实施方案中，通过破坏IL-11-介导的顺式信号传导和IL-11-介导的反式信号传导来抑制IL-11-介导信号传导。如本文所述的任何试剂可用于抑制IL-11-介导的顺式和/或反式信号转导。

在其他实施例中，通过破坏IL-11/IL-11Rα/gp130下游的信号传导途径来抑制IL-11信号传导。

在一些实施方案中，本发明的方法采用能够抑制JAK/STAT信号传导的试剂。在一些实施方案中，能够抑制JAK/STAT信号传导的试剂能够抑制JAK1、JAK2、JAK3、TYK2、STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B和/或STAT6的作用。例如，药剂可能能够抑制JAK/STAT蛋白的活化，抑制JAK或STAT蛋白与细胞表面受体的相互作用，例如IL-11Rα或gp130，抑制JAK蛋白的磷酸化、抑制JAK和STAT蛋白之间的相互作用、抑制STAT蛋白的磷酸化、抑制STAT蛋白的二聚化、抑制STAT蛋白向细胞核的转运、抑制STAT蛋白与DNA的结合，和/或促进JAK和/或STAT蛋白的降解。在一些实施方案中，JAK/STAT抑制剂选自鲁索替尼(Ruxolitinib)(Jakafi/Jakavi；因塞特公司)，托法替尼(Xeljanz/Jakvinus；NIH/辉瑞)、奥拉西替尼(Apoquel)、巴瑞替尼(Baricitinib)(Olumiant；因塞特公司/礼来公司)、泊马度胺(Filgotinib)(G-146034/GLPG-0634；加拉帕戈斯群岛公司)、甘都替尼(Gandotinib)(LY-2784544；礼来公司)、来他替尼(Lestaurtinib)(CEP-701；梯瓦公司)、莫乐替尼(Momelotinib)(GS-0387/CYT-387；吉利德科学)，帕克替尼(Pacritinib)(SB1518；CTI)、PF-04965842(辉瑞)、阿普德西替尼(Upadacitinib)(ABT-494；艾伯维)、配非西替尼(Peficitinib)(ASP015K/JNJ-54781532；安斯泰来)，菲卓替尼(Fedratinib)(SAR302503；塞尔基因)，葫芦素I(JSI-124)和CHZ868。

在一些实施方案中，本发明的方法采用能够抑制MAPK/ERK信号传导的试剂。在一些实施方案中，能够抑制MAPK/ERK信号传导的试剂能够抑制ERK p42/44。在一些实施方案中，ERK抑制剂选自SCH772984、SC1、VX-11e和DEL-22379。在一些实施方案中，能够抑制MAPK/ERK信号传导的试剂能够抑制GRB2的作用、抑制RAF激酶的作用、抑制MEK蛋白的作用、抑制MAP3K/MAP2K/MAPK和/或Myc的活化，和/或抑制STAT蛋白的磷酸化。在一些实施方案中，ERK抑制剂选自索拉非尼(Sorafenib)(多吉美；Bayer/Onyx)、SB590885、PLX4720、XL281、RAF265(诺华)、康奈非尼(encorafenib)(LGX818/Braftovi；Array生物制药)、达拉非尼(dabrafenib)(Tafinlar；GSK)、威罗非尼(vemurafenib)(Zelboraf；罗氏)、康比每替尼(cobimetinib)(Cotellic；罗氏)、CI-1040、PD0325901、比美替尼(Binimetinib)(MEK162/MEKTOVI；Array生物制药)、司美替尼(selumetinib)(AZD6244；Array/阿斯利康)和曲美替尼(Trametinib)(GSK1120212/Mekinist；诺华)。

结合剂

在一些实施方案中，能够抑制IL-11-介导的信号传导的试剂可以结合IL-11。在一些实施方案中，能够抑制IL-11-介导的信号传导的试剂可以结合IL-11的受体(例如IL-11Rα、gp130或含有IL-11Rα和/或gp130的复合物)。此类试剂的结合可通过降低/阻止IL-11结合IL-11受体的能力来抑制IL-11-介导的信号传导，从而抑制下游信号传导。此类试剂的结合可通过降低/预防IL-11结合IL-11受体的能力，例如IL-11Rα和/或gp130，来抑制IL-11介导的顺式和/或反式信号转导，从而抑制下游信号传导。药物可以结合反式信号复合物，例如IL-11和可溶性IL-11Rα，并抑制gp130介导的信号传导。

能够结合IL-11/含IL-11的复合物或IL-11的受体的试剂可以是任何种类，但是在一些实施方案中，该试剂可以是抗体、其抗原结合片段、多肽、肽、核酸、寡核苷酸、适配体或小分子。这些试剂可以分离或纯化的形式提供，或者可以配制成药物组合物或药物。

IL-11结合剂的性质

能够结合IL-11/含IL-11的复合物或IL-11的受体的本发明试剂可以显示一种或多种以下性质：

·与包含IL-11/IL-11的复合物或IL-11受体特异性结合；

·结合到包含IL-11/IL-11的复合物或IL-11受体，其K_D为10μM或更小，优选≤5μM、≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤100pM；

·抑制IL-11和IL-11Rα之间的相互作用；

·抑制IL-11与gp130之间的相互作用；

·抑制IL-11和IL-11Rα：gp130受体复合物之间的相互作用；

·抑制IL-11：IL-11Rα复合物与gp130之间的相互作用；

·抑制IL-11和IL-11之间相互作用。

这些性质可以通过适当的试剂分析来确定，这可能包括比较试剂和适当的对照剂的性能。该技术人员能够为给定的分析确定适当的控制条件。

例如，用于分析结合至IL-11/含IL-11复合物/IL-11受体的试验抗体/抗原结合片段能力的合适阴性对照,可以是针对非靶蛋白的抗体/抗原结合片段(即对IL-11/含IL-11的复合物/IL-11受体非特异性的抗体/抗原结合片段)。合适的阳性对照可以是已知的，经过验证的(例如可商购的)IL-11-或IL-11受体结合抗体。对照可以为与所分析的含有推测的IL-11/包含IL-11复合物/IL-11受体结合抗体/抗原结合片段相同的同种型，并且可以是,例如有相同的恒定区域。

在一些实施方案中，所述试剂可能能够特异性结合IL-11或含有IL-11的复合物，或IL-11的受体(例如IL-11Rα、gp130或含有IL-11Rα和/或gp130的复合物)。相比于结合其他非靶分子，特异性结合给定靶分子的试剂优选以更大的亲和力结合靶分子，和/或更长的结合持续时间。

在一些实施方案中，该试剂可以与IL-11或含有IL-11的复合物结合，其亲和力大于与IL-6细胞因子家族(例如IL-6、白血病抑制因子(LIF)、抑癌素M(OSM)、心肌营养蛋白1(CT-1)、睫状神经营养因子(CNTF)和心肌营养蛋白样细胞因子(CLC))的一个或多个成员结合的亲和力。在一些实施方案中，所述试剂可能与IL-11受体(例如IL-11Rα、gp130或含有IL-11Rα和/或gp130的复合物)结合的亲和力比与IL-6受体家族的一个或多个成员结合的亲和力更强。在一些实施方案中，该试剂结合IL-11Rα的亲和力比与IL-11Rα、白血病抑制因子受体(LIFR)、制瘤素M受体(OSMR)和睫状神经营养因子受体α(CNTFRα)中的一种或多种结合的亲和力更大。

在一些实施方案中，结合剂与非靶标结合的程度小于所测试剂与靶标结合的10％，例如，通过ELISA、SPR、生物层干涉法(BLI)、微型热泳(MST)或放射免疫法(RIA)。或者，结合特异性可以结合亲和力来反映，其中结合剂结合IL-11、含有IL-11的复合物或IL-11的受体的K_D比另一个非靶分子的K_D至少大0.1个数量级(即0.1x10ⁿ，其中n是代表数量级的整数)。这可以任选地是至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0之一。

一种给定的结合剂对其目标物的结合亲和力通常用其解离常数来描述(K_D)。结合亲和力可以通过本领域已知的方法来测量，例如通过ELISA、表面等离振子共振(SPR；参见例如Hearty等，分子生物学方法(2012)907：411-442；或Rich等，分析生物化学.2008年2月1日；373(1)：112-20)，生物层干涉法(参见例如Lad等，(2015)生物分子筛选杂志20(4)：498-507；或Concepcion等，组合化学高通量筛选.2009年9月；12(8)：791-800)，微尺度热泳(MST)分析(参见例如Jerabek-Willemsen等，分析药物开发技术.2011年8月；9(4)：342–353)，或通过放射性标记的抗原结合测定(RIA)。

在一些实施方案中，所述试剂能够结合IL-11或含有IL-11的复合物，或IL-11的受体，K_D为50μM或更小，优选≤10μM、≤5μM、≤4μM、≤3μM、≤2μM、≤1μM、≤500nM、≤100nM、≤75nM、≤50nM、≤40nM、≤30nM、≤20nM、≤15nM、≤12.5nM、≤10nM、≤9nM、≤8nM、≤7nM、≤6nM、≤5nM、≤4nM、≤3nM、≤2nM、≤1nM、≤500pM、≤400pM、≤300pM、≤200pM，或≤100pM。

在一些实施方案中，该试剂结合IL-11、含有IL-11的复合物或IL-11的受体，其结合的亲和力为EC50＝10,000ng/ml或更小的结合亲和力(例如通过ELISA测定)优选为以下之一：≤5,000ng/ml、≤1000ng/ml、≤900ng/ml、≤800ng/ml、≤700ng/ml、≤600ng/ml、≤500ng/ml、≤400ng/ml、≤300ng/ml、≤200ng/ml、≤100ng/ml、≤90ng/ml、≤80ng/ml、≤70ng/ml、≤60ng/ml、≤50ng/ml、≤40ng/ml、≤30ng/ml、≤20ng/ml、≤15ng/ml、≤10ng/ml、≤7.5ng/ml、≤5ng/ml、≤2.5ng/ml或≤1ng/ml。这样的ELISA可以通过，例如《抗体工程》，第1卷(第二版)，施普林格实验方案，施普林格(2010)，第五部分，第657-665页中记载的进行。

在一些实施方案中，所述试剂结合IL-11或含有IL-11的复合物上对于结合IL-11或含IL-11复合物的受体，例如gp130或IL-11Rα非常重要的区域，从而抑制IL-11或含IL-11复合物与IL-11的受体之间的相互作用和/或通过该受体的信号传导。在一些实施方案中，所述试剂结合IL-11或含有IL-11的复合物上对于结合IL-11或含有IL-11的复合物的受体非常重要的区域，从而抑制IL-11或含有IL-11的复合物与IL-11受体之间的相互作用，以及/或通过受体发出信号。

给定结合剂(例如，能够结合IL-11/含有IL-11的复合物或IL-11受体的结合剂)抑制两种蛋白质之间相互作用的能力可以通过，例如分析结合剂存在时的相互作用，或通过分析一个或两个互作伴侣与结合剂孵育后的相互作用。确定给定结合剂是否能够抑制两个互作伴侣之间相互作用的合适测定法的一个例子是竞争ELISA。

能够抑制给定相互作用的结合剂(例如，IL-11与IL-11Rα之间，或IL-11与gp130之间，或IL-11与IL-11Rα：gp130之间，或IL-11：IL-1Rα与gp130之间)，与没有结合剂存在(或在适当的对照结合剂存在)时的互相作用水平相比，通过观测在结合剂的存在下，或通过分析一个或两个互作伴侣与结合剂孵育后的相互作用水平的降低/减少来确定的。合适的分析可以体外进行，例如使用重组互作伴侣或使用表达互作伴侣的细胞。表达互作伴侣的细胞可能是内源性的，也可能是通过引入细胞的核酸来表达的。为了这种测定的目的，可以将互作伴侣和/或结合剂之一或两者标记或与可检测实体结合使用，以检测和/或测量相互作用的水平。例如，该试剂可以用放射性原子或有色分子或荧光分子或易于以任何其他方式检测的分子标记。合适的可检测分子包括荧光蛋白、萤光素酶、酶底物和放射性标记。结合剂可以直接用可检测标记物标记，或者可以间接标记。例如，该结合剂可以是未标记的，并且由本身被标记的另一种结合剂检测。备选地，第二结合剂可以已经与生物素结合，并且标记的链霉亲和素与生物素的结合可以用于间接标记第一结合剂。

结合剂抑制两个结合配偶体之间相互作用的能力也可以通过分析这种相互作用的下游功能性后果来确定，例如，分析IL-11介导的信号传导。例如，IL-11与IL-11Rα：gp130之间或IL-11：IL-11Rα与gp130之间相互作用的下游功能后果可包括，例如由IL-11介导的过程、成纤维细胞产生的成纤维细胞、分泌性平滑肌细胞(SMC)的增殖或迁移、或例如胶原蛋白或IL-11的基因/蛋白表达。

结合剂抑制IL-11或含IL-11的复合物与IL-11受体之间相互作用的能力可以通过以下方法分析，例如用TGFβ1刺激成纤维细胞，在结合剂存在下孵育细胞，在一段确定的时间后，分析具有αSMA阳性表型的细胞比例。在这样的例子中，与没有结合剂的情况下(或在合适的对照结合剂的存在下)、或在合适的对照结合剂的存在下用TGFβ1处理细胞的阳性对照条件相比，IL-11或含有IL-11的复合物与IL-11的受体之间抑制作用可以通过观测具有αSMA阳性表型的细胞比例较低的细胞来鉴定。这样的测定法也适合分析结合剂抑制IL-11介导的信号传导的能力。还可以使用³H-胸苷掺入和/或Ba/F3细胞增殖测定法，例如在Curtis等，血液，1997，90(11)和Karpovich等.Mol.Hum.Reprod.2003 9(2):75-80.Ba/F3细胞共表达IL-11Rα和gp130中述及。

在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11和IL-11Rα之间的相互作用抑制到小于在没有结合剂的情况下(或在存在适当的对照结合剂的情况下)，IL-11和IL-11Rα之间相互作用的水平的100％，例如小于等于以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11和IL-11Rα之间的相互作用抑制到少于在没有结合剂的情况下(或在有适当的对照结合剂的情况下)，IL-11和IL-11R细胞间的相互作用水平的1倍，例如小于等于以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11和gp130之间的相互作用抑制到小于，在不存在结合剂的情况下(或在存在适当的对照结合剂的情况下)IL-11与gp130之间相互作用的水平的100％，例如小于等于以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11和gp130之间的相互作用抑制至小于，在没有结合剂的情况下(或在存在合适的对照结合剂的情况下)，IL-11和gp130之间的相互作用水平1倍，例如小于等于以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11和IL-11Rα：gp130之间的相互作用抑制到小于在没有结合剂的情况下(或在存在适当的对照结合剂的情况下)IL-11和IL-11Rα之间相互作用的水平的100％，例如小于等于以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11和IL-11Rα：gp130之间的相互作用抑制到少于在没有结合剂的情况下(或在有适当的对照结合剂的情况下)，IL-11和IL-11R细胞间的相互作用水平的1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11：IL-11Rα复合物和gp130之间的相互作用抑制到小于，在不存在结合剂的情况下(或在存在适当的对照结合剂的情况下)IL-11与gp130之间相互作用的水平的100％，例如小于等于以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，结合剂能将IL-11：IL-11Rα复合物和gp130之间的相互作用抑制至小于，在没有结合剂的情况下，IL-11和gp130之间的相互作用水平1倍，例如小于等于以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，结合剂可能能够将IL-11和IL-11之间的相互作用抑制到小于，在不存在结合剂的情况下(或在存在适当的对照结合剂的情况下)IL-11与IL-11之间相互作用的水平的100％，例如小于等于以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，结合剂可以将IL-11和IL-11之间的相互作用抑制至小于，在没有结合剂的情况下，IL-11和IL-11之间的相互作用水平1倍，例如小于等于以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

抗体和抗原结合片段

在一些实施方案中，能够结合IL-11/含有IL-11的复合物或IL-11的受体的试剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，能够结合IL-11/含有IL-11的复合物或IL-11的受体的试剂是多肽，例如诱饵受体分子。在一些实施方案中，能够结合IL-11/含有IL-11的复合物或IL-11的受体的试剂可以是适配体。

在一些实施方案中，能够结合IL-11/含有IL-11的复合物或IL-11的受体的试剂是抗体或其抗原结合片段。能够结合IL-11的抗体包括，例如单克隆小鼠抗人IL-11抗体克隆#22626；货号MAB218(安迪生物公司，明尼苏达州，美国)，例如用于Bockhorn等,自然通讯，(2013)4(0)：1393中，在US 2009/0202533 A1，WO 99/59608 A2和WO 2018/109174 A2中公开的克隆6D9A(Abbiotec)、克隆KT8(Abbiotec)、克隆M3103F11(BioLegend)、克隆1F1(Abnova Corporation)、克隆3C6(Abnova Corporation)、克隆GF1(寿命生物科学)，克隆13455(源生物科学)和抗IL-11抗体。

能够结合IL-11Rα的抗体包括例如，单克隆抗体克隆025(Sino生物)、克隆EPR5446(Abcam)、克隆473143(安迪生物公司)、US2014/0219919 A1中所述的克隆8E2和8E4，在Blanc等(免疫方法学杂志.2000年1月31；241(1-2)；43-59)中述及的单克隆抗体，在WO2014121325 A1和US 2013/0302277 A1中公开的抗体以及US 2009/0202533 A1、WO 99/59608 A2和WO 2018/109170 A2中公开的抗IL-11Rα抗体。

抗体/片段可以是抑制或降低IL-11的生物学活性的拮抗剂抗体/片段。抗体/片段可以是中和抗体，该中和抗体中和IL-11的生物学作用，例如通过IL-11受体刺激生产信号的能力。中和活性可以通过在T11小鼠浆细胞瘤细胞系中，测量中和IL-11诱导增殖的能力(Nordan，R.P.等.(1987)免疫学杂志.139：813)。

诱饵受体

能够结合包含IL-11或含IL-11的复合物的基于肽或多肽的试剂可以基于IL-11受体，例如IL-11受体的IL-11结合片段。

在一些实施方案中，结合剂可以包含IL-11Rα链的IL-11结合片段，并且可以优选地是可溶的和/或排除一个或多个或所有的跨膜结构域。在一些实施方案中，结合剂可以包含gp130的IL-11结合片段，并且可以优选地是可溶的和/或排除一个或多个，或所有的跨膜结构域。这样的分子可以被描述为诱饵受体。此类试剂的结合可通过降低/预防IL-11结合IL-11受体(例如IL-11Rα或gp130)的能力来抑制IL-11介导的顺式和/或反式信号转导，从而抑制下游信号传导。

Curtis等(血液1997年12月1日；90(11)：4403-12)报道，当在表达跨膜IL-11R和gp130的细胞上测试时，可溶性鼠IL-11受体α链(sIL-11R)能够拮抗IL-11的活性。他们提出，由sIL-11R观察到的IL-11拮抗作用取决于已表达跨膜IL-11R的细胞上gp130分子数量的限制。

还已经报道了将可溶性诱饵受体用作抑制信号转导和治疗干预的基础，用于其他信号分子：受体对，例如VEGF和VEGF受体(De-Chao Yu等，分子治疗(2012)；20 5，938-947；Konner和Dupont，临床结直肠癌，2004年10月；4增刊2：S81-5)。

因此，在一些实施方案中，结合剂可以是诱饵受体，例如含有IL-11和/或IL-11的复合物的可溶性受体。诱饵受体竞争提供的含有IL-11和/或含有IL-11的复合物的竞争据报道可导致IL-11拮抗作用(Curtis等，同上)。诱饵IL-11受体还在WO 2017/103108 A1和WO2018/109168 A1中述及，其通过引用整体并入本文。

诱饵IL-11受体优选结合含有IL-11和/或IL-11的复合物，从而使这些物质不能与gp130、IL-11Rα和/或gp130：IL-11Rα受体结合。因此，它们充当IL-11和含有IL-11的复合物的“诱饵”受体，与依那西普(etanercept)充当TNFα的诱饵受体的方式非常相似。与不存在诱饵受体时的信号水平相比，IL-11介导的信号水平降低。

诱饵IL-11受体优选通过一种或多种细胞因子结合模块(CBM)与IL-11结合。所述CBM是IL-11的天然存在受体分子的CBM，或由其衍生或与其同源。例如，诱饵IL-11受体可以包含，或由一种或多种的CBM组成，所述CBM为gp130和/或IL-11Rα来源、衍生自或与其同源。

在一些实施方案中，诱饵IL-11受体可包含，或由对应于gp130的细胞因子结合模块的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，诱饵IL-11受体可以包含对应于IL-11Rα的细胞因子结合模块的氨基酸序列。在本文中，“对应于”给定肽/多肽的参考区域或序列与该参考区域或序列的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％之一的序列相同性。

在一些实施方案中，诱饵受体可能能够结合IL-11，例如，结合亲和力至少为100μM或更小，可选为以下之一：小于等于10μM、小于等于1μM、小于等于100nM，或大约1至100nM。在一些实施方案中，诱饵受体可以包含全部或部分IL-11结合结构域，并且可以任选地缺少全部或部分跨膜结构域。诱饵受体可以任选地与免疫球蛋白恒定区融合，例如与IgG Fc区结合。

抑制剂类

本发明考虑了抑制剂分子的用途，其能够与IL-11、含有IL-11的复合物、IL-11Rα、gp130或含有IL-11Rα和/或gp130的复合物中的一种或多种结合，并抑制IL-11介导的信号传导。

在一些实施方案中，所述试剂是基于IL-11的肽或多肽的结合剂，例如IL-11的突变、变异或结合片段。合适的基于肽或多肽的试剂可以不引发信号转导的方式与IL-11受体(例如IL-11Rα、gp130或含有IL-11Rα和/或gp130的复合物)结合，或者产生次优信号。这种IL-11突变体可以作为内源性IL-11的竞争性抑制剂。

例如，W147A是一种IL-11拮抗剂，其中氨基酸147从色氨酸突变为丙氨酸，破坏了IL-11的所谓“位点III”。该突变体可以结合IL-11Rα，但是gp130同源二聚体的结合失败，导致IL-11信号传导的有效阻断(Underhill-Day等，2003；内分泌学2003年8月；144(8)：3406-14)。Lee等(美国呼吸细胞和分子生物学杂志.2008年12月；39(6)：739-746)还报道了能够特异性抑制IL-11与IL-11Rα结合的IL-11拮抗剂突变体(“突变蛋白”)的产生。IL-11突变蛋白也在WO 2009/052588 A1中述及。

Menkhorst等(2009年5月1日，第80卷，第5期，920-927页，生殖生物学)描述了一种聚乙二醇化的IL-11拮抗剂PEGIL11A(CSL限制，Parkvill，维多利亚，澳大利亚)，可在雌鼠中有效抑制IL-11的作用。

Pasqualini等，癌症(2015)121(14)：2411-2421描述了一种能够结合IL-11Rα的配体导向的拟肽药物靶向骨转移的拟肽11(BMTP-11)。

在一些实施方案中，可以以IL-11Rα、gp130或含有IL-11Rα和/或gp130的复合物之一的小分子抑制剂的形式提供能够结合IL-11受体的结合剂。在一些实施方案中，可以以IL-11或包含IL-11的复合物的小分子抑制剂的形式提供结合剂，例如在Lay等，J.Oncol.(2012)；41(2):759-764中述及的IL-11抑制剂，其全部内容通过引用合并于此。

适配体

在一些实施方案中，能够结合IL-11/含有IL-11的复合物或IL-11的受体(例如IL-11Rα、gp130或含有IL-11Rα和/或gp130的复合物)的试剂是适配体。

能够降低IL-11或IL-11受体表达的药物

在本发明的一个方面，IL-11介导的信号传导的拮抗剂，可能能够阻止或减少IL-11、IL-11Rα或gp130中的一种或多种的表达。

表达可以是基因或蛋白质表达，并且可以如本文所述确定。表达可以通过受试者的细胞/组织/器官/器官系统进行。例如，可以防止/减少平滑肌细胞中的表达。

合适的试剂可以是任何种类，但是在一些实施方案中，能够阻止或减少IL-11、IL-11Rα或gp130中的一种或多种表达的试剂可以是小分子或寡核苷酸。

能够阻止或减少IL-11、IL-11Rα或gp130中的一种或多种表达的试剂可以通过，例如通过抑制编码IL-11、IL-11Rα或gp130的基因的转录，抑制编码IL-11、IL-11Rα或gp130的RNA的转录后加工，降低编码IL-11、IL-11Rα或gp130的RNA的稳定性，促进编码IL-11、IL-11Rα或gp130的RNA降解，抑制IL-11、IL-11Rα或gp130多肽的翻译后加工，降低IL-11、IL-11Rα或gp130多肽的稳定性或促进降解IL-11、IL-11Rα或gp130多肽的降解。

Taki等.临床与实验免疫学(1998)4月；112(1)：133-138报告说，用消炎痛、地塞米松或干扰素-γ(IFNγ)处理后，类风湿性滑膜细胞中IL-11的表达减少。

本发明预期使用反义核酸来预防/减少IL-11、IL-11Rα或gp130的表达。在一些实施方案中，能够阻止或减少IL-11、IL-11Rα或gp130表达的试剂可通过RNA干扰(RNAi)引起表达降低。

在一些实施方案中，所述试剂可以是抑制性核酸，例如反义或小的干扰RNA，包括但不限于shRNA、dsRNA、miRNA或siRNA。

在一些实施方案中，抑制性核酸在载体中提供。例如，在一些实施方案中，所述试剂可以是编码针对IL-11、IL-11Rα或gp130中的一种或多种的shRNA的慢病毒载体。

考虑到IL-11、IL-11Rα和gp130的核酸序列已知(例如，从GenBank获得的已知mRNA序列登录号为：BC012506.1 GI：15341754(人IL-11)、BC134354.1 GI：126632002(小鼠IL-11)、AF347935.1 GI：13549072(大鼠IL-11)、NM_001142784.2 GI：391353394(人IL-11Rα)、NM_001163401.1 GI：254281268(小鼠IL-11Rα)、NM_139116.1 GI：20806172(大鼠IL-11Rα)、NM_001190981.1 GI：300244534(人gp130)、NM_010560.3 GI：225007624(小鼠gp130)、NM_001008725.3 Gi：300244570(大鼠gp130))，可以设计寡核苷酸以抑制或沉默IL-11、IL-11Rα或gp130的表达。

这样的寡核苷酸可以具有任何长度，但是可以优选是短的，例如，少于100个核苷酸，例如10-40个核苷酸或20-50个核苷酸,并且可以包含与靶寡核苷酸(例如IL-11、IL-11Rα或gp130 mRNA)中相应长度的核苷酸序列具有完全或接近互补性核苷酸序列(例如80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％或100％)。核苷酸序列的互补区可以具有任何长度，但是优选至少5个核苷酸长度，并且任选地不超过50个核苷酸长度，例如以下之一：6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50个核苷酸。

抑制IL-11、IL-11Rα或gp130的表达将优选导致由细胞/组织/器官/器官/器官系统/受试者表达的IL-11、IL-11Rα或gp130的量减少。例如，在给定的细胞中，通过施用合适的核酸来抑制IL-11、IL-11Rα或gp130，相对于未经处理的细胞，将导致该细胞表达的IL-11、IL-11Rα或gp130的量降低。抑制可能是部分的。优选的抑制度为至少50％，更优选为至少60％、70％、80％、85％或90％之一。90％到100％之间的抑制水平被认为是表达或功能的“沉默”。

另一个选择是在细胞中表达短发夹RNA分子(shRNA)。优选地，shRNA分子包含IL-11、IL-11Rα或gp130的部分序列。优选地，shRNA序列的长度为40至100个碱基，更优选地为40至70个碱基。发夹茎的长度优选为19至30个碱基对。茎可包含G-U配对以稳定发夹结构。

siRNA分子，更长的dsRNA分子或miRNA分子可以通过核酸序列(优选包含在载体中)的转录重组制备。优选地，siRNA分子，更长的dsRNA分子或miRNA分子包含IL-11、IL-11Rα或gp130的部分序列。

在一个实施方案中，siRNA、更长的dsRNA或miRNA通过从载体内源地(在细胞内)转录产生。合适的载体可以是配置成表达能抑制IL-11、IL-11Rα或gp130的寡核苷酸试剂的寡核苷酸载体。

在其他实施方案中，可以将载体配置为辅助将治疗性寡核苷酸递送至需要抑制IL-11、IL-11Rα或gp130表达的部位。

在其他实施方案中，本发明提供了这样的核酸，当被适当地引入哺乳动物或表达于哺乳动物，例如人，或表达IL-11、IL-11R或gp130的细胞中时，能够通过RNAi抑制IL-11、IL-11R或gp130的表达。

IL-11、IL-11Rα和gp130的核酸序列(例如，可从GenBank获得已知mRNA序列，登录号为BC012506.1 GI：15341754(人IL-11)、BC134354.1 GI：126632002(小鼠IL-11)、AF347935.1 GI：13549072(大鼠IL-11)、NM_001142784.2 GI：391353394(人IL-11Rα)、NM_001163401.1 GI：254281268(小鼠IL-11Rα)、NM_139116.1 GI：20806172(大鼠IL-11Rα)、NM_001190981.1 GI：300244534(人gp130)、NM_010560.3 GI：225007624(小鼠gp130)、NM_001008725.3 Gi：300244570(大鼠gp130))，可以设计寡核苷酸以抑制或沉默IL-11、IL-11Rα或gp130的表达。

所述核酸可与IL-11、IL-11Rα或gp130的mRNA的一部分具有实质序列同一性，例如根据GenBank登记号NM_000641.3 GI：391353405(IL-11)、NM_001142784.2 GI：391353394(IL-11Rα)、NM_001190981.1 GI：300244534(gp130)定义的或与上述mRNA的互补序列。

可选地，核酸可以是DNA(通常是双链DNA)，当在哺乳动物细胞中转录时，产生具有两个互补部分的RNA通过间隔子连接，使得当互补部分彼此杂交时，RNA采取发夹的形式。在哺乳动物细胞中，发夹结构可以被酶DICER从分子上切割下来，从而产生两个截然不同但杂交的RNA分子。

在一些优选的实施方案中，所述核酸通常靶向SEQ ID NO：4至7之一(IL-11)或SEQID NO：8至11之一(IL-11Rα)的序列。

mRNA转录物的仅单链(即非自杂交)区域预期是RNAi的合适靶标。因此建议在IL-11或IL-11RαmRNA转录物中非常接近由SEQ ID NO 4至7或8至11所示序列之一的其他序列也可以作为RNAi的靶标。这样的靶序列的长度优选为15-21个核苷酸，并且优选与SEQ IDNO 4至7或8至11之一重叠至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或全部19个核苷酸(在SEQ ID NO 4至7或8至11之一的任一末端)。

因此，本发明提供了一种核酸，当被适当地引入或表达于表达IL-11或IL-11Rα的哺乳动物细胞中时，能够通过RNAi抑制IL-11或IL-11Rα的表达，其中该核酸是一般靶向于SEQ ID NO 4至7或8至11之一的序列。

“一般靶向”是指核酸可以靶向与SEQ ID NO 4至7或8至11重叠的序列。特别地，该核酸可以靶向人IL-11或IL-11Rα的mRNA中的序列，该序列比SEQ ID NO 4至7或8至11之一稍长或稍短(优选长度为17-23个核苷酸)，但另外与SEQ ID NO 4至7或8至11之一相同。

本发明的核酸与靶序列之间期望有完美同一性/互补性，尽管这是优选的，但不是必需的。因此，与IL-11或IL-11Rα的mRNA相比，本发明的核酸可包括单个错配。然而，可以预料的是，即使存在单个错配也可能导致效率降低，因此不存在错配是优选的。如果存在3'的突出端，则不考虑错配的数量。

在一个实施方案中，该核酸(本文称为双链siRNA)包括SEQ ID NO：12至15中所示的双链RNA序列。在另一个实施方案中，所述核酸(本文称为双链siRNA)包括SEQ ID NO：16至19所示的双链RNA序列。

然而，还预期针对IL-11或IL-11RαmRNA相同区域的稍短或稍长的序列也将是有效的。特别地，预期长度在17和23bp之间的双链序列也将是有效的。

本发明还提供了DNA，当在哺乳动物细胞中转录时，该DNA产生具有两个互补部分的RNA(在本文中也称为shRNA)，所述两个互补部分能够自我杂交以产生双链基序，例如，包括选自下组由SEQ ID NO：12至15或16至19组成的序列，或与前述序列中的任一个序列有一个碱基对取代差别的序列。

互补部分可以由间隔子连接，该间隔子具有合适的长度和序列，以允许两个互补部分彼此杂交。优选地，间隔子的5'端(紧邻上游互补部分的3')由核苷酸-UU-或-UG-，同样优选地-UU-组成(尽管同样，这些特定的二核苷酸的使用不是必需的)。在OligoEngine(西雅图，华盛顿州，美国)的pSuper系统中推荐使用的合适间隔子为UUCAAGAGA。在这种情况和其他情况下，间隔子的末端可以彼此杂交，例如通过少量(例如1或2个)碱基对将双链基序延伸到SEQ ID NO 12至15或16至19的确切序列之外。

可以使用如下所述的已知技术将本发明的双链siRNA体外或体内引入哺乳动物细胞，以抑制IL-11或IL-11的受体的表达。

类似地，可以使用如下所述的已知技术将包含本发明DNA的转录载体体外或体内引入肿瘤细胞，以瞬时或稳定地表达RNA，再次抑制IL-11或IL-11受体的表达。

因此，本发明还提供了在哺乳动物中抑制IL-11或IL-11受体表达的方法，例如人、细胞，该方法包括向细胞施用本发明的双链siRNA或本发明的转录载体。

类似地，本发明进一步提供了一种治疗在病理学上牵涉血管生成的疾病/病症的方法，该方法包括给受试者联合施用本发明的双链siRNA或本发明的转录载体与IL-11信号传导拮抗剂。

本发明进一步提供了本发明的双链siRNA和本发明的转录载体，用于与IL-11信号转导拮抗剂联用的治疗方法。

本发明进一步提供了本发明的双链siRNA和本发明的转录载体的用途，用于与IL-11信号转导拮抗剂联合制备治疗疾病/病症的药物。

IL-11-介导的信号转导的抑制

在本发明的实施方案中，能够抑制IL-11作用的药剂可以具有以下一种或多种功能特性：

·抑制IL-11介导的信号传导；

·抑制IL-11结合IL-11Rα：gp130受体复合物介导的信号转导；

·抑制IL-11：IL-11Rα复合物结合gp130介导的信号转导(即IL-11反式信号转导)；

·抑制由IL-11介导的过程；

·抑制成肌纤维细胞生成；

·抑制SMC增殖/迁移；

·抑制胶原蛋白或IL-11的基因/蛋白质表达。

IL-11介导的信号传导和/或由IL-11介导的过程包括由IL-11的片段和包含IL-11或其片段的多肽复合物介导的信号传导。IL-11介导的信号传导可以是人IL-11和/或小鼠IL-11介导的信号传导。由IL-11介导的信号传导可在IL-11或含有IL-11的复合物结合IL-11或所述复合物结合的受体后发生。

在一些实施方案中，试剂可能能够抑制IL-11或含IL-11-复合物的生物活性。

在一些实施方案中，所述试剂是一种或多种信号传导途径的拮抗剂，所述信号传导途径通过包含IL-11Rα和/或gp130的受体，例如IL-11Rα：gp130的信号转导被激活。在一些实施方案中，该试剂能够抑制通过一种或多种包含IL-11Rα和/或gp130的免疫受体复合物，例如IL-11Rα：gp130的信号传导。在本发明的各个方面，本文提供的试剂能够抑制IL-11-介导的顺式和/或反式信号转导。

在一些实施方案中，该试剂可能能够将IL-11-介导的信号传导抑制至小于，在不存在该试剂的情况下(或在存在适当的对照试剂的情况下)信号水平的100％，例如以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。

在一些实施方案中，所述试剂能够将IL-11-介导的信号传导抑制至小于，在不存在该试剂的情况下(或存在适当的对照试剂的情况下)，信号水平的1倍，例如以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，IL-11-介导的信号传导可以是通过IL-11结合IL-11Rα：gp130受体介导的信号传导。这种信号传导可以通过，例如分析用IL-11处理表达IL-11Rα和gp130的细胞，或通过刺激表达IL-11Rα和gp130的细胞中IL-11的产生。

测定试剂抑制IL-11-介导的信号传导的IC₅₀可以通过，例如，通过在人IL-11和试剂存在下培养表达IL-11Rα和gp130的Ba/F3细胞，测量³H-胸腺嘧啶核苷掺入DNA。在一些实施方案中，所述试剂可以表现出10μg/ml或更低的IC₅₀，优选地选自≤5μg/ml、≤4μg/ml、≤3.5μg/ml、≤3μg/ml、≤2μg/ml、≤1μg/ml、≤0.9μg/ml、≤0.8μg/ml、≤0.7μg/ml、≤0.6μg/ml或≤0.5μg/ml之一。

在一些实施方案中，IL-11-介导的信号传导可以是通过IL-11：IL-11Rα复合物结合gp130介导的信号传导。在一些实施方案中，IL-11：IL-11Rα复合物可以是可溶的，例如，可溶的。IL-11Rα和IL-11的胞外域复合物，或可溶性IL-11Rα同种型/片段和IL-11的复合物。在一些实施方案中，可溶性IL-11Rα是IL-11Rα的可溶性(分泌的)同种型，或者是细胞膜结合的IL-11Rα的细胞外结构域的蛋白水解切割的释放产物。

在一些实施方案中，IL-11：IL-11Rα复合物可以是细胞结合的，例如，细胞膜结合的IL-11Rα和IL-11的复合体。利用IL-11：IL-11Rα复合物，例如包含通过肽接头与IL-11Rα的胞外域(例如本文所述的超IL-11)连接的IL-11的重组融合蛋白来处理表达gp130的细胞，可以分析IL-11：IL-11Rα复合物结合gp130介导的信号转导。

在一些实施方案中，该试剂可能抑制由IL-11：IL-11Rα复合物结合gp130所介导的信号传导，并且还能够抑制由IL-11结合IL-11Rα：gp130受体所介导的信号传导。

在一些实施方案中，该试剂可能抑制由IL-11介导的过程，例如在TGFβ1刺激后。由IL-11介导的过程包括例如，由成纤维细胞产生的成肌纤维细胞、SMC的增殖/迁移以及例如胶原蛋白和IL-11的基因/蛋白表达，并且可以在体外或体内评估。

在一些实施方案中，该试剂可能抑制由成纤维细胞产生的成肌纤维细胞，例如将成纤维细胞暴露于纤维化因子(例如TGFβ1)之后。可以通过分析成肌纤维细胞标志物来研究成纤维细胞产生的成肌纤维细胞。

成纤维细胞可来源于任何组织，包括肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓。在特定的实施方案中，成纤维细胞可以是心脏成纤维细胞(例如心房成纤维细胞)、皮肤成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾成纤维细胞或肝成纤维细胞。成纤维细胞的特征在于COL1A、ACTA2、脯氨酰-4-羟化酶、MAS516和FSP1中的一种或多种的基因或蛋白质表达。成肌纤维细胞标志物可包括αSMA、波形蛋白、细胞支架蛋白(palladin)、丝切蛋白(cofilin)或结蛋白(desmin)中的一种或多种增加(与可比较的成纤维细胞(例如，源自同一组织的成纤维细胞)中的表达水平相比)。

用TGFβ1刺激成纤维细胞后，可通过使用Operetta高含量成像系统测量αSMA蛋白表达水平来分析成纤维细胞产生的成肌纤维细胞；例如，参见WO 2017/103108A1，通过引用将其全部内容合并于本文。

在一些实施方案中，该试剂可能将从成纤维细胞产生的成肌纤维细胞抑制至小于，在不存在试剂的情况下(或在适当的对照试剂存在下)成纤维细胞产生的成肌纤维细胞的水平的100％，例如以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，所述试剂能够将从成纤维细胞产生的成肌纤维细胞生成抑制至小于，在不存在试剂的情况下(或在适当的对照试剂存在下)成纤维细胞产生的成肌纤维细胞的水平的1倍，例如以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，该试剂可能抑制SMC(例如分泌性SMC)的增殖，例如TGFβ1刺激后。SMC增殖可以通过使用，例如如本文所述，³H-胸苷掺入、CFSE稀释或EdU掺入测定。

在一些实施方案中，该试剂可能将SMC的增殖抑制到小于，在不存在该试剂的情况下(或在适当的对照试剂的情况下)增殖水平的100％，例如以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，所述试剂能够将SMC的增殖抑制至小于，在不存在试剂的情况下(或在适当的对照试剂的情况下)增殖水平的1倍，例如以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，所述试剂可能能够抑制SMC(例如分泌性SMC)的迁移，例如在TGFβ1刺激后。SMC迁移可以使用刮擦测定法，例如如实施例9和Liang等，自然方法.(2007)2(2)：329-33中所述，或使用Boyden小室测定，如实施例9和Chen，分子生物方法.2005；294:15-22中所述。

在一些实施方案中，该试剂可能将SMCs迁移抑制至小于，在没有试剂的情况下(或在适当的对照试剂的情况下)迁移水平的100％，例如以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，该试剂能够将SMC的迁移抑制到小于，在没有试剂的情况下(或在适当的对照试剂的情况下)迁移水平的1倍，例如以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，该试剂可能抑制胶原蛋白或IL-11的基因/蛋白质表达。基因和/或蛋白质表达可以如本文所述进行测量。

在一些实施方案中，该试剂可能将胶原蛋白或IL-11的基因/蛋白表达抑制至小于，在不存在该试剂的情况下(或在适当的控制试剂存在的情况下)表达水平的100％，例如以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，该试剂能够将胶原蛋白或IL-11的基因/蛋白表达抑制至小于，在不存在该试剂的情况下(或在适当的控制试剂存在的情况下)表达水平的1倍，例如以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

血管生成因子的拮抗剂

本发明的方面涉及血管生成的拮抗作用(即，抑制)，例如一种或多种血管生成因子的拮抗作用。

在此，“抑制”是指相对于对照条件的降低、减少或减弱。例如，通过血管生成信号的拮抗剂抑制血管生成因子的作用是指，在没有试剂的情况和/或在适当的控制剂存在下，降低或减弱血管生成信号介导的信号传导的范围/程度。

抑制在本文中也可以称为中和或拮抗作用。血管生成信号的拮抗剂(例如由血管生成因子介导的活性拮抗剂)相对于相关功能或过程可以称为“中和”或“拮抗”剂。例如，能够抑制血管生成信号的试剂可以被称为能够中和血管生成信号，或者可以被称为血管生成信号的拮抗剂。

血管生成信号通路为抑制信号传导提供了多种途径。血管生成信号的拮抗剂可以通过抑制一个或多个因子的作用来抑制血管生成因子的作用，这些因子参与或必须通过该因子受体进行信号传递。

例如，可以通过破坏血管生成因子(例如VEGF)和该因子的受体(例如VEGFR1、2或3)之间的相互作用来实现抑制。在一些实施方案中，通过抑制，例如VEGF、VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3中的一种或多种的基因或蛋白质表达，来实现对血管生成信号的抑制。

在一些实施方案中，血管生成的拮抗作用(即抑制)导致纤维化的拮抗作用的抑制或减少。

结合剂

在一些实施方案中，能够抑制血管生成因子介导的信号传导的试剂可以结合血管生成因子。在一些实施方案中，能够抑制血管生成因子介导的信号传导的试剂可以结合血管生成因子的受体(例如VEGF的VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3)。此类试剂的结合可通过降低/阻止血管生成因子配体与受体结合的能力来抑制血管生成因子介导的信号传导，从而抑制下游信号传导。

能够结合血管生成因子或血管生成因子互作伴侣的试剂可以是任何种类，但是在一些实施方案中，该试剂可以是抗体、其抗原结合片段、多肽、肽、核酸、寡核苷酸、适配体或小分子。这些试剂可以分离或纯化的形式提供，或者可以配制成药物组合物或药物。

血管生成因子结合剂的性质

根据本发明，能够结合血管生成因子/包含含有血管生成因子的复合物或给定血管生成因子的互作伴侣的试剂可表现出一种或多种以下性质：

·与血管生成因子/含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的互作伴侣的特异性结合；

·结合至血管生成因子/含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的互作伴侣，其K_D等于或小于10μM，优选≤5μM≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤100pM；

·抑制血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣之间的相互作用；

这些性质可以通过适当的试剂分析来确定，这可能包括比较试剂和适当的对照剂的性能。该技术人员能够为给定的分析确定适当的控制条件。如本文所解释的，血管生成因子的互作伴侣可以是，例如血管生成因子的配体(例如，其中血管生成因子是受体，例如VEGF受体、FGF受体或PDGF受体)，或者可以是血管生成因子的受体(例如，其中血管生成因子是配体，例如VEGF、FGF或PDGF)。

例如，用于分析测试抗体/抗原结合片段结合血管生成因子/含有血管生成因子的复合物/血管生成因子的互作伴侣的能力的合适的阴性对照可以是针对非靶蛋白(即，其对血管生成因子/含有血管生成因子的复合物/血管生成因子的互作伴侣是非特异性的)的抗体/抗原的结合片段。合适的阳性对照可以是已知的，经过验证的(例如可商购的)血管生成因子或互作伴侣结合抗体。对照可以与所分析的含有推测的血管生成因子/包含血管生成因子/互作伴侣结合抗体/抗原结合片段的复合物具有相同的同种型，并且可以是,例如有相同的恒定区域。

在一些实施方案中，所述试剂可能能够特异性结合血管生成因子或含有血管生成因子的复合物，或血管生成因子的互作伴侣。与结合其他非靶分子相比，特异性结合给定靶分子的试剂优选结合靶分子的亲和力更大，和/或持续时间更长。

在一些实施方案中，结合剂与非靶标结合的程度小于所测试剂与靶标结合的10％，例如，通过ELISA、SPR、生物层干涉法(BLI)、微型热泳(MST)或放射免疫法(RIA)。或者，结合特异性可以结合亲和力来反映，其中结合剂结合血管生成因子、含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的互作伴侣的K_D比另一个非靶分子的K_D至少大0.1个数量级(即0.1x10n，其中n是代表数量级的整数)。这可以任选地是至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0之一。

一种给定的结合剂对其目标物的结合亲和力通常用其解离常数来描述(K _D)。结合亲和力可以通过本领域已知的方法来测量，例如通过ELISA、表面等离振子共振(SPR；参见例如Hearty等，分子生物学方法(2012)907：411-442；或Rich等，分析生物化学.2008年2月1日；373(1)：112-20)，生物层干涉法(参见例如Lad等，(2015)生物分子筛选杂志20(4)：498-507；或Concepcion等，组合化学高通量筛选.2009年9月；12(8)：791-800)，微尺度热泳(MST)分析(参见例如Jerabek-Willemsen等，分析药物开发技术.2011年8月；9(4)：342–353)，或通过放射性标记的抗原结合测定(RIA)。

在一些实施方案中，所述试剂能够结合血管生成因子或含有血管生成因子的复合物，或血管生成因子的互作伴侣，以K_D为50μM或更小，优选以下之一：≤10μM、≤5μM、≤4μM、≤3μM、≤2μM、≤1μM、≤500nM、≤100nM、≤75nM、≤50nM、≤40nM、≤30nM、≤20nM、≤15nM、≤12.5nM、≤10nM、≤9nM、≤8nM、≤7nM、≤6nM、≤5nM、≤4nM、≤3nM、≤2nM、≤1nM、≤500pM、≤400pM、≤300pM、≤200pM，或≤100pM。

在一些实施方案中，所述试剂结合血管生成因子、含有血管生成因子复合物或该血管生成因子的互作伴侣，其结合亲和力(例如，如通过ELISA确定)为EC50＝10,000ng/ml或更小，优选以下之一：≤5,000ng/ml、≤1000ng/ml、≤900ng/ml、≤800ng/ml、≤700ng/ml、≤600ng/ml、≤500ng/ml、≤400ng/ml、≤300ng/ml、≤200ng/ml、≤100ng/ml、≤90ng/ml、≤80ng/ml、≤70ng/ml、≤60ng/ml、≤50ng/ml、≤40ng/ml、≤30ng/ml、≤20ng/ml、≤15ng/ml、≤10ng/ml、≤7.5ng/ml、≤5ng/ml、≤2.5ng/ml或≤1ng/ml。这样的ELISA可以通过，例如《抗体工程》，第1卷(第二版)，施普林格实验方案，施普林格(2010)，第五部分，第657-665页中记载的进行。

在一些实施方案中，所述试剂结合血管生成因子或含有血管生成因子的复合物中对于与血管生成因子或含有血管生成因子的复合物的互作受体结合重要的区域，从而抑制血管生成因子或含有血管生成因子的复合物与血管生成因子互作伴侣的相互作用(例如通过血管生成因子受体的信号传导)。在一些实施方案中，所述试剂结合至血管生成因子互作伴侣的一个区域，其对结合血管生成因子或含有血管生成因子的复合物很重要，从而抑制血管生成因子或含有血管生成因子的复合物与血管生成因子的互作伴侣的相互作用(例如通过血管生成因子受体的信号传导)。

给定结合剂(例如能够结合血管生成因子/含有血管生成因子的复合物或该血管生成因子的互作伴侣的试剂)抑制两种蛋白质之间相互作用的能力可以通过，例如分析结合剂存在时的相互作用，或通过分析一个或两个互作伴侣与结合剂孵育后的相互作用。确定给定结合剂是否能够抑制两个互作伴侣之间相互作用的合适测定法的一个例子是竞争ELISA。

能够抑制给定相互作用(例如，在血管生成因子和血管生成因子的互作伴侣之间，例如在VEGF与VEGFR1-3中的一种或多种之间)的结合剂，与没有结合剂存在(或在适当的对照结合剂存在)时的互相作用水平相比，通过观测在结合剂的存在下，或通过分析一个或两个互作伴侣与结合剂孵育后的相互作用水平的降低/减少来确定。合适的分析可以体外进行，例如使用重组互作伴侣或使用表达互作伴侣的细胞。表达互作伴侣的细胞可能是内源性的，也可能是通过引入细胞的核酸来表达的。为了这种测定的目的，可以将互作伴侣和/或结合剂之一或两者标记或与可检测实体结合使用，以检测和/或测量相互作用的水平。例如，该试剂可以用放射性原子或有色分子或荧光分子或易于以任何其他方式检测的分子标记。合适的可检测分子包括荧光蛋白、萤光素酶、酶底物和放射性标记。结合剂可以直接用可检测标记物标记，或者可以间接标记。例如，该结合剂可以是未标记的，并且由本身被标记的另一种结合剂检测。备选地，第二结合剂可以已经与生物素结合，并且标记的链霉亲和素与生物素的结合可以用于间接标记第一结合剂。

结合剂抑制两个结合伴侣之间相互作用的能力也可以通过分析这种相互作用的下游功能性后果来确定，例如，分析血管生成因子介导的信号传导。

在一些实施方案中，结合剂可能能够将血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣之间的相互作用抑制到小于，在不存在结合剂的情况下(或在存在适当的对照结合剂的情况下)血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣之间的相互作用的水平的100％，例如以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，结合剂可能能够将血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣之间的相互作用抑制至小于，在没有结合剂的情况下(或在存在合适的对照结合剂的情况下)，血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣之间的相互作用水平1倍，例如以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

抗体和抗原结合片段

在一些实施方案中，能够结合血管生成因子或该血管生成因子的互作伴侣的试剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，能够结合血管生成因子或该血管生成因子的互作伴侣的试剂是多肽，例如诱饵受体分子。在一些实施方案中，能够结合血管生成因子或该血管生成因子的互作伴侣的试剂可以是适配体。

在一些实施方案中，能够结合血管生成因子或该血管生成因子的互作伴侣的试剂是抗体或其抗原结合片段。能够结合血管生成因子的示例性抗体包括能够结合VEGF合的抗体，例如贝伐单抗(bevacizumab)和兰尼单抗(ranibizumab)。

抗体/片段可以是抑制或降低血管生成因子的生物学活性的拮抗剂抗体/片段。抗体/片段可以是中和抗体，中和血管生成因子的生物学作用，例如其通过血管生成因子受体刺激生产性信号的能力。

诱饵受体

能够结合血管生成因子或含有血管生成因子的复合物的基于肽或多肽的试剂可以基于血管生成因子受体，例如血管生成因子受体的血管生成因子结合片段。

在一些实施方案中，结合剂可以包含受体细胞外结构域的血管生成因子结合片段，并且可以优选地是可溶的和/或排除一个或多个或所有的跨膜结构域。这样的分子可以被描述为诱饵受体。

在一些实施方案中，结合剂可包含与人IgG1的恒定区(Fc)融合的VEGFR-1的第二免疫球蛋白(Ig)结构域和VEGFR-2的第三Ig结构域的重组融合蛋白。示例性的血管生成诱饵受体是阿柏西普(aflibercept)(艾力雅(Eylea)，SEQ ID NO：24)。

这样，在一些实施方案中，结合剂可以是诱饵受体，例如血管生成因子和/或含有血管生成因子的复合物的可溶性受体。

诱饵血管生成因子受体优选结合血管生成因子和/或含有血管生成因子的复合物，从而使这些物质不可用于结合其受体。这样，它们充当‘诱饵’受体，与没有诱饵受体时的信号水平相比，血管生成信号降低。

在一些实施方案中，诱饵受体可能能够结合血管生成因子，例如结合亲和力至少为100μM或更小，可选为以下之一：小于等于10μM、小于等于1μM、小于等于100nM，或大约1至100nM。在一些实施方案中，诱饵受体可以包含全部或部分血管生成因子结合结构域，并且可以任选地缺少全部或部分跨膜结构域。诱饵受体可以任选地与免疫球蛋白恒定区融合，例如与IgG Fc区结合。

抑制剂

本发明考虑了使用能够与血管生成因子，含有血管生成因子的复合物或血管生成因子的互作伴侣中的一种或多种结合的抑制剂分子，并抑制血管生成信号。

在一些实施方案中，所述试剂是基于血管生成因子的肽或多肽的结合剂，例如血管生成因子的突变、变异或结合片段。合适的基于肽或多肽的试剂可以不引发信号转导的方式与血管生成因子受体(例如VEGFR1、2和/或3)结合，或产生次优信号传导。这种突变体可以作为内源性血管生成因子的竞争性抑制剂。

在一些实施方案中，能够拮抗血管生成因子的结合剂可以采取小分子抑制剂的形式。

血管生成的小分子抑制剂可以是酪氨酸激酶抑制剂。已经开发了多种小分子酪氨酸激酶抑制剂。考虑到血管生成途径成分的功能冗余，这些药物靶向多种激酶，例如VEGFR。它们包括帕唑帕尼(pazopanib)

VEGF抑制剂、血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)和KIT；索拉非尼(sorafenib)

VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β和RAF1的抑制剂；舒尼替尼(sunitinib)

VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β和RET的抑制剂；凡德他尼(vandetanib)

VEGFR和表皮生长因子受体的抑制剂；卡博替尼(Cabozantinib)

MET和VEGFR2的抑制剂；阿西替尼(axitinib)

VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3的抑制剂；瓦他拉尼碱(vatalanib)，一种已知的VEGF受体的抑制剂，以及血小板衍生的生长因子受体β和c-kit，但对VEGFR-2的选择性最高。瑞格菲尼(regorafenib)

VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、TIE2、PDGFR、成纤维细胞生长因子受体、KIT、RET和RAFf的抑制剂。

其他血管生成的小分子抑制剂包括醋酸阿尼考特(anecortave acetate)和乳酸角鲨胺(squalamine lactate)。

适配体

在一些实施方案中，能够结合血管生成因子/含有血管生成因子的复合物或该血管生成因子的互作伴侣的试剂是适配体。

血管生成因子的示例性适配体抑制剂是抗VEGF适配体哌加他尼(pegaptanib)，其在WO9818480A1中描述，其通过引用整体并入本文。

能够减少血管生成因子或血管生成因子受体表达的药物

在本发明的一个方面，血管生成因子介导的信号传导的拮抗剂，可能能够阻止或减少血管生成因子或该血管生成因子的互作伴侣中的一种或多种的表达。

表达可以是基因或蛋白质表达，并且可以如本文所述确定。表达可以通过受试者的细胞/组织/器官/器官系统进行。

合适的试剂可以是任何种类，但是在一些实施方案中，能够阻止或减少一种或多种血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的表达的试剂可以是小分子或寡核苷酸。

能够阻止或减少一种或多种血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的表达的试剂可以通过，例如以下方式进行：通过抑制编码血管生成因子的基因或血管生成因子的互作伴侣的转录、抑制编码血管生成因子的RNA或血管生成因子的互作伴侣的转录后加工、降低编码血管生成因子的RNA的稳定性或血管生成因子的互作伴侣、促进编码血管生成因子的RNA的降解、或血管生成因子的互作伴侣、抑制血管生成因子的翻译后加工、或血管生成因子的互作伴侣、降低血管生成因子的稳定性血管生成因子、或血管生成因子的互作伴侣、或促进血管生成因子的降解、或血管生成因子的互作伴侣。

本发明预期使用反义核酸来预防/减少血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的表达。在一些实施方案中，能够阻止或减少血管生成因子表达或该血管生成因子的互作伴侣的试剂可通过RNA干扰(RNAi)引起表达降低。

在一些实施方案中，抑制性核酸通过载体提供。例如，在一些实施方案中，所述试剂可以是编码用于血管生成因子的shRNA或用于血管生成因子的互作伴侣中的一种或多种的慢病毒载体。

考虑到血管生成因子及其互作伴侣的核酸序列已知(例如，可从GenBank获得的已知mRNA序列登录号为：AY047581.1 GI：15422108(人类VEGF-A)、AF317892.1 GI：12802453(小鼠VEGF)、AY033508.1 GI：15822724(大鼠VEGF)、NM_002253.3 GI：1333881084(人类VEGF受体)、NM_025809.5 GI：237512936(小鼠VEGF受体)、NM_019306.2 GI：828178218(大鼠VEGF受体))，寡核苷酸可被设计用来抑制或沉默血管生成因子或血管生成因子受体的表达。

这样的寡核苷酸可以具有任何长度，但是可以优选较短，例如，少于100个核苷酸，例如10-40个核苷酸或20-50个核苷酸，并且可以包含与靶寡核苷酸(例如血管生成因子的mRNA或血管生成因子的互作伴侣的mRNA)中相应长度的核苷酸序列具有完全或接近互补性核苷酸序列(例如80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％或100％)。核苷酸序列的互补区可以具有任何长度，但是优选至少5个核苷酸长度，并且任选地不超过50个核苷酸长度，例如以下之一：6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50个核苷酸。

抑制血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的表达将优选导致由细胞/组织/器官/器官系统/受试者表达的血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的数量降低。例如，在给定的细胞中，通过施用合适的核酸来抑制血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣，相对于未处理的细胞而言，将导致血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的数量降低。抑制可能是部分的。优选的抑制度为至少50％，更优选为至少60％、70％、80％、85％或90％之一。90％到100％之间的抑制水平被认为是表达或功能的“沉默”。

另一个选择是在细胞中表达短发夹RNA分子(shRNA)。优选地，shRNA分子含有血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的部分序列。优选地，shRNA序列的长度为40至100个碱基，更优选地为40至70个碱基。发夹茎的长度优选为19至30个碱基对。茎可包含G-U配对以稳定发夹结构。

siRNA分子，更长的dsRNA分子或miRNA分子可以通过核酸序列(优选包含在载体中)的转录重组制备。优选地，siRNA分子、更长的dsRNA分子或miRNA分子含有血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的部分序列。

在一个实施方案中，siRNA、更长的dsRNA或miRNA通过从载体内源地(在细胞内)转录产生。合适的载体可以是寡核苷酸载体，其被配置为表达能够抑制血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的寡核苷酸试剂。这样的载体可以是病毒载体或质粒载体。

在其他实施方案中，本发明提供了这样的核酸，当被适当地引入哺乳动物或表达于哺乳动物，例如人，或表达血管生成因子或血管生成因子受体细胞中时，能够通过RNAi抑制血管生成因子或血管生成因子互作伴侣的表达。

考虑到血管生成因子及其互作伴侣的核酸序列已知(例如，可从GenBank获得的已知mRNA序列登录号为：AF437895.1 GI：16660685(人VEGF)，U41383.1 GI：1134964(小鼠VEGF)、NM_001287107.1 GI：560186576(大鼠VEGF)、NM_002253.3 GI：1333881084(人类VEGF受体)、NM_001001183.1 GI：47564089(小鼠VEGF受体)、NM_019306.2 GI：828178218(大鼠VEGF受体))，寡核苷酸可被设计用来抑制或沉默血管生成因子或血管生成因子受体的表达。

所述核酸可以与血管生成因子或血管生成因子互作伴侣的mRNA的一部分，例如在GenBank中的登记为181970(VEGF)、BC131822.1 GI：124297527(VEGF受体)或所述mRNA的互补序列具有实质性序列相同性。

可选地，核酸可以是DNA(通常是双链DNA)，当在哺乳动物细胞中转录时，产生具有通过间隔子连接的两个互补部分的RNA，使得当互补部分彼此杂交时，RNA采取发夹的形式。在哺乳动物细胞中，发夹结构可以被酶DICER从分子上切割下来，从而产生两个截然不同但杂交的RNA分子。

本发明还提供了DNA，当在哺乳动物细胞中转录时，该DNA产生具有两个互补部分的RNA(在本文中也称为shRNA)，所述两个互补部分能够自我杂交以产生双链基序，例如，包括选自下组由SEQ ID NO：14至17或18至21组成的序列，或与前述序列中的任一个序列有一个碱基对取代差别的序列。

互补部分通常通过间隔子连接，所述间隔子具有合适的长度和序列以允许两个互补部分彼此杂交。优选地，间隔子的5'端(紧邻上游互补部分的3')由核苷酸-UU-或-UG-，同样优选地-UU-组成(尽管同样，这些特定的二核苷酸的使用不是必需的)。在OligoEngine(西雅图，华盛顿州，美国)的pSuper系统中推荐使用的合适间隔子为UUCAAGAGA。在这种情况和其他情况下，间隔子的末端可以彼此杂交，例如通过少量(例如1或2个)碱基对将双链基序延伸到SEQ ID NO 14至17或18至21的确切序列之外。

可以使用如下所述的已知技术将本发明的双链siRNA体外或体内引入哺乳动物细胞中，以抑制血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的表达。

类似地，可以使用如下所述的已知技术将包含本发明DNA的转录载体体外或体内引入肿瘤细胞，以瞬时或稳定地表达RNA，再次抑制血管生成因子或血管生成因子互作伴侣的表达。

因此，本发明还提供了在哺乳动物，例如人、细胞中抑制血管生成因子或该血管生成因子的互作伴侣的表达的方法，该方法包括向细胞施用本发明的双链siRNA或本发明的转录载体。

类似地，本发明进一步提供了一种治疗在病理学上牵涉血管生成的疾病/病症的方法，该方法包括与结合血管生成因子传导拮抗剂联用，给受试者施用本发明的双链siRNA或本发明的转录载体。

本发明进一步提供了本发明的双链siRNA和本发明的转录载体，用于与血管生成因子的拮抗剂联用的治疗方法，优选一种治疗与纤维化和/或血管生成有病理关系的疾病/情况的方法。

本发明进一步提供了本发明的双链siRNA和本发明的转录载体与血管生成因子拮抗剂联用在制备用于治疗其中纤维化和/或在病理上牵涉血管生成的疾病/病症的药物中的用途。

血管生成因子介导的信号传导的抑制

在本发明的实施方案中，能够抑制(即拮抗)血管生成因子的作用的试剂可具有以下一种或多种功能特性：

·抑制由血管生成因子介导的信号传导；

·抑制由血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣结合介导的信号传导；

·抑制由血管生成因子介导的过程；

·抑制肠套叠；

·抑制毛细血管增生；

·抑制水肿。

血管生成因子介导的信号传导和/或由血管生成因子介导的过程包括由血管生成因子的片段和含有血管生成因子或其片段的多肽复合物介导的信号传导。血管生成因子介导的信号传导可以是人血管生成因子和/或小鼠血管生成因子介导的信号传导。由血管生成因子介导的信号可在血管生成因子或含有血管生成因子的复合物与血管生成因子或所述复合物结合的互作伴侣(例如受体或配体)结合后发生。

在一些实施方案中，试剂可以能够抑制血管生成因子或含有血管生成因子的复合物的生物活性。

在一些实施方案中，所述试剂是一种或多种信号传导途径的拮抗剂，所述信号传导途径通过含有血管生成因子受体的信号转导而被激活。

在一些实施方案中，该试剂可能能够将血管生成因子介导的信号传导抑制至小于，在不存在该试剂的情况下(或在存在适当的对照试剂的情况下)信号水平的100％，例如以下的一种：小于等于99％、小于等于95％、小于等于90％、小于等于85％、小于等于80％、小于等于75％、小于等于70％、小于等于65％、小于等于60％、小于等于55％、小于等于50％、小于等于45％、小于等于40％、小于等于35％、小于等于30％、小于等于25％、小于等于20％、小于等于15％、小于等于10％、小于等于5％、或1％。在一些实施方案中，所述试剂能够将血管生成因子介导的信号传导抑制至小于，在不存在该试剂的情况下(或存在适当的对照试剂的情况下)，信号水平的1倍，例如以下的一种：≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍。

在一些实施方案中，血管生成因子介导的信号传导可以是通过血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣(例如血管生成因子的受体或配体)结合而介导的信号传导。这种信号传导可以，例如通过用血管生成因子处理表达血管生成因子互作的伴侣的细胞，或通过刺激表达血管生成因子的互作伴侣的细胞中的血管生成因子产生来分析。

抑制血管生成因子介导的信号传导的试剂的IC₅₀可以如下确定，例如通过在血管生成因子和试剂存在下培养表达血管生成因子受体互作伴侣的细胞，并测量由血管生成因子介导的信号转导的功能结果。例如，可以在通过血管生成因子³H-胸腺嘧啶整合入DNA介导的细胞增殖的测定中分析。在一些实施方案中，所述试剂可以表现出10μg/ml或更低的IC₅₀，优选地选自≤5μg/ml、≤4μg/ml、≤3.5μg/ml、≤3μg/ml、≤2μg/ml、≤1μg/ml、≤0.9μg/ml、≤0.8μg/ml、≤0.7μg/ml、≤0.6μg/ml或≤0.5μg/ml之一。

在一些实施方案中，该试剂可能抑制由血管生成因子介导的过程(例如在用VEGF刺激后)。由血管生成因子介导的过程包括，例如肠套叠、毛细血管增生和基因/蛋白表达(例如胶原蛋白和血管生成因子)，可以通过在体外或体内评估。

在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂是选自以下的血管生成抑制剂：内皮抑素(NP_569711.2 GI：206597445)、催乳激素(CAA38264.1 GI：531103)、T2-TrpRS(如Otani A等，人TrpRS的片段作为眼血管生成的有效拮抗剂，美国国家科学院院刊.2002；99(1)：178-183中所述，或通过引用整体并入本文)，或血管抑制因子(vasostatin)(AAL13126.1 GI：16151097)，或其片段、同种型、同源物或变体。

治疗和预防方法

本发明提供了通过拮抗IL-11介导的信号传导和拮抗血管生成来治疗/预防纤维化(特别是眼纤维化)的方法和组合物。本发明还提供了通过拮抗IL-11介导的信号传导和拮抗血管生成作用来治疗/预防血管生成的方法和组合物。

在一些实施方案中，根据本发明待治疗/预防的疾病/病状的特征在于IL-11介导的信号传导和/或血管生成的水平增加，例如，在受疾病/状况影响的器官/组织中(例如，在其中的器官/组织表现疾病/病状的症状)。

在一些实施方案中，待治疗/预防的疾病/病症的特征可能是，例如与正常(即未患病)器官/组织/受试者相比，受疾病影响的器官/组织/受试者的下列一项或多项增加：IL-11、IL-11Rα、TGFβ、VEGF、FGF、PDGF、VEGFR、FGFR或PDGFR。

治疗可以有效地预防疾病/病症的发展，例如以减少/延迟/预防疾病/病症的恶化，或减少/延迟/预防疾病/病症的发展。在一些实施方案中，治疗可以导致疾病/病症的改善，例如减轻疾病/病症的严重性，和/或逆转疾病/病症的症状。在一些实施方案中，治疗可以提高存活率。预防可以指预防疾病/病症的发展，和/或预防疾病/病症的恶化，例如预防疾病/病情发展到晚期或慢性阶段。

在一些实施方案中，待治疗/预防的疾病/病状是脉络膜新血管形成(CNV)和/或年龄相关性黄斑变性(AMD)，例如“湿性”AMD。

施用

根据本发明的试剂的施用优选是“治疗有效”或“预防有效”的量，从而足以为对象显示出治疗或预防益处。

实际施用的量以及施用的速率和时间过程将取决于疾病/病症的性质和严重程度以及药剂的性质。治疗处方，例如剂量等的决定是由全科医生和其他医生负责的，并且通常考虑待治疗的疾病/病症、个体对象的状况、递送部位、给药方法和从业者已知的其它因素。上述技术和方案的例子可见于《雷明顿药物科学》(Remington’s PharmaceuticalSciences),第20版,2000,利平科特、威廉姆斯和威尔金斯出版社出版。Lippincott,Williams&Wilkins.

在治疗应用中，优选将能够拮抗IL-11-介导的信号传导的药物和能够拮抗血管生成因子的药物与本领域技术人员众所周知的一种或多种其他药学上可接受的成分一起配制为药物或药物，包括但不限于药学上可接受的载体、辅料、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如润湿剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

本文所用的术语“药学上可接受的”属于化合物、成分、材料、组合物、剂型等，在合理的医学判断范围内，适合与相关受试者(如人类)组织接触时使用，且无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理收益/风险比。从与制剂的其他成分相容的意义上讲，每种载体、佐剂、赋形剂等也必须是“可接受的”。

合适的载体、佐剂、赋形剂等可在标准药学教科书中找到，例如，《雷明顿的药学科学》，第18版，马克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚州,1990；《药物辅料手册》，第2版，1994年。

所述制剂可以通过药学领域公知的任何方法制备。这些方法包括使活性化合物与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。一般来说，所述配方是通过将活性化合物与载体均匀而紧密地结合而制备的(例如，液体载体、细分的固体载体等)，然后使产品成型来制备制剂。

可根据需要治疗的疾病/病症配制供使用的制剂。例如，可以配制制剂用于局部、肠胃外、全身、静脉内、动脉内、肌内、鞘内、眼内、局部眼(例如结膜下、玻璃体内、球后、前房内)、结膜内、皮下、口服或经皮途径施用，其可能包括注射。可注射制剂可以包括无菌或等渗介质中所选的药剂。在特定的实施方案中，将制剂配制成用于眼内给药。

本发明的各个方面包括包含/使用IL-11介导信号的拮抗剂和血管生成因子拮抗剂的组合物和方法。

如本文所用，“组合”包括含有该组合的组分的产品和组合物(例如，药物组合物)。“组合”还包括使用该组合的组分的治疗方案。

在一些实施方案中，组合的组分以分开的组合物提供。在一些实施方案中，组合物中提供了一种以上的组合的成分。在一些实施方案中，组合的组分在一个组合物中提供。

类似地，在一些实施方案中，组合的成分分开施用。在一些实施方案中，组合的组分与该组合的另一组分一起施用。在一些实施方案中，组合的组分共同施用。

举例来说，在包含拮抗剂抗IL-11抗体和拮抗剂抗VEGF抗体的组合的实施例中，抗IL-11抗体和抗VEGF抗体可以共同施用，或者可以分开施用(例如随后)。

当组合的组分共同施用时，施用可以是同时施用。当组合的组分分开施用时，施用可以是同时施用或顺序施用。

本文提供了IL-11介导的信号传导的拮抗剂，用于治疗或预防纤维化和/或血管生成的方法，该方法包括分别或同时给受试者施用IL-11介导信号的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂。

本发明还提供了血管生成因子的拮抗剂，用于治疗或预防纤维化和/或血管生成的方法，该方法包括向受试者分别或同时施用IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂。

本发明还提供了IL-11介导的信号传导的拮抗剂在制备药物中的用途，所述药物用于包括向受试者分别或同时施用IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的方法。

本发明还提供了血管生成因子拮抗剂在制备药物中的用途，所述药物用于包括向受试者分别或同时施用IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子拮抗剂的方法。

同时给药是指将试剂一起给药，例如作为包含试剂的药物组合物(即，组合制剂)，或紧接着彼此并任选地通过相同的给药途径，例如给药，到同一动脉，静脉或其他血管。在特定的实施方案中，溶瘤病毒和包含编码免疫调节因子的核酸的病毒可以在组合制剂中同时施用。在某些实施方案中，在同时施用两种或更多种试剂时，可以通过不同的施用途径来施用。在一些实施方案中，同时施用是指在同一时间施用或例如，在1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、8小时、12小时、24小时、36小时或48小时之内施用。

顺序给药是指给予一种或多种试剂，然后在给定的时间间隔之后分别施用另一种试剂。尽管在某些实施方式中是这种情况，但是不需要通过相同的途径来施用两种药剂。时间间隔可以是任何时间间隔，包括小时、天、周、月或年。在一些实施方案中，顺序施用是指以分开施用的间隔时间至少10分钟、30分钟、1小时、6小时、8小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、6周、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月。

在一些实施方案中，所述治疗可进一步包括其他治疗性或预防性干预，例如手术。这样的其他治疗性或预防性干预可以发生在本公开所包含的治疗之前，期间和/或之后，其他治疗性或预防性干预的提供可能通过相同或不同的给药途径作为公开的治疗。

本发明可以提供多种剂量的试剂(IL-11介导的信号拮抗剂、血管生成因子的拮抗剂、组合物、组合等)。一个或多个或各剂量可以同时或依次施用另一种治疗剂。

多个剂量可以以预定时间间隔分开，该预定时间间隔可以选择为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天，或1、2、3、4、5或6个月中的一种。举例来说，可以每7、14、21或28天(正负3、2或1天)给予一次剂量。

联合治疗的功能特性

本公开的组合物和方法可以通过参考一种或多种功能特性和/或效果来定义，并且可以针对这种特性/效果来进行评估，例如通过如实验实施例中所述进行分析。

在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的组合可具有以下一种或多种功能特性：

·与单独使用任一成分减少纤维化(例如视网膜纤维化)的能力相比，减少纤维化的能力(例如视网膜纤维化)被提高。

·与单独使用任一成分减少纤维化(例如视网膜纤维化)的能力相比，减少纤维化(例如视网膜纤维化)的能力是协同的(即，超级可加性的)。

·以剂量依赖的方式减少纤维化(例如视网膜纤维化)的能力。

·与单独使用任一成分预防纤维化(例如视网膜纤维化)的能力相比，预防纤维化的能力(例如视网膜纤维化)被提高。

·与单独使用任一成分减少血管生成的能力相比，减少血管生成的能力被提高。

·与单独使用任一成分减少血管生成的能力相比，减少血管生成的能力是协同的(即，超级可加性的)。

·以剂量依赖的方式减少血管生成的能力。

·与单独使用任一成分预防血管生成的能力相比，预防血管生成的能力被提高。

·与单独使用任一成分减少视网膜下新血管形成(例如脉络膜新血管形成(CNV))的能力相比，减少视网膜下新血管形成(例如脉络膜新血管形成(CNV))的能力被提高。

·与单独使用任一成分减少视网膜下新血管形成(例如脉络膜新血管形成(CNV))的能力相比，减少视网膜下新血管形成(例如脉络膜新血管形成(CNV))的能力是协同的(即，超级可加性的)。

·以剂量依赖的方式减少视网膜下新血管形成(例如脉络膜新血管形成(CNV))的能力。

·与单独使用任一成分预防视网膜下新血管形成(例如脉络膜新血管形成(CNV))的能力相比，预防视网膜下新血管形成(例如脉络膜新血管形成(CNV))的能力被提高。

例如，可以评估减少/预防纤维化、血管生成和/或视网膜下新生血管形成的能力，例如在体内，通过实验实施例中所述的分析。例如，如通过荧光素眼底血管造影(FFA)和/或后段光学相干断层扫描(PS-OCT)所评估的，IL-11介导的信号传导拮抗剂与血管生成因子拮抗剂的组合可减少脉络膜新血管形成(CNV))。如通过组织病理学检查或通过免疫荧光染色和检查所观察到的，该组合还可导致视网膜纤维化区域的减少。在一些实施方案中，与单独使用任一成分减少血管渗漏的能力相比，这种组合具有可以提高减少血管渗漏的能力。

在一些实施方案中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂能够改善IL-11或IL-11的受体的表达。在一些实施方案中，血管生成因子的拮抗剂能够改善IL-11介导的信号传导的拮抗剂的功效。

组合物/产品/试剂盒

本公开还提供了包含如本文所述的IL-11介导的信号传导的拮抗剂和如本文所述的血管生成因子的拮抗剂的组合物。本公开的组合可以以单一组合物提供，或者可以作为包含组合成分的多个组合物提供。

本公开还提供了多部件的试剂盒，其包含如本文所述的IL-11介导的信号传导的拮抗剂和如本文所述的血管生成因子的拮抗剂或根据本公开的组合物。

在一些实施方案中，试剂盒可具有至少一个容器，该容器具有预定量的如本文所述的IL-11介导的信号传导的拮抗剂，如本文所述的血管生成因子的拮抗剂或如本发明公开的组合物。试剂盒可以具有包含本公开的组合的各个组分的容器，或者可以具有包含本公开的组合的组分的组合的容器。

所述试剂盒可提供IL-11介导的信号传导拮抗剂、血管生成因子拮抗剂或组合物，以及向患者给药以治疗纤维化(例如眼部纤维化)的说明书。可以配制IL-11介导的信号传导的拮抗剂、血管生成因子的拮抗剂或组合物以适用于眼内给药。

受试者

受试者可以是动物或人。受试者优选是哺乳动物，更优选是人。受试者可以是非人类哺乳动物，但更优选是人。受试者可以是男性或女性。受试者可以是患者。患者可以患有本文所述的疾病/病症。受试者可能已经被诊断出患有需要治疗的疾病/病症，可能疑似患有此类疾病/病症，或者可能具有产生此类疾病/病症的危险。

在根据本发明的实施方式中，所述受试者优选是人类受试者。在一些实施方案中，根据本文的本发明的治疗或预防方法治疗的受试者是患有或具有发展如本文所述的疾病/病状或处于发展中的风险的受试者。在本发明的实施方式中，可以基于此类疾病/病状的某些标志物的表征，根据所述方法选择对象进行治疗。受试者可能已经被诊断出需要治疗的疾病或病症，或者疑似患有这种疾病或病症。

序列同一性

为了确定成对或多个氨基酸或核酸序列之间的相同性百分比，可以采用本领域技术人员已知的多种方式来实现成对和多序列比对，例如利用可公开获得的计算机软件，如ClustalOmega(

J.2005，生物信息学21，951-960)、T-coffee(Notredame等.2000，J.Mol.Biol.(2000)302,205-217)、Kalign(Lassmann和Sonnhammer 2005,“BMC生物信息学”BMC Bioinformatics,6(298))和MAFFT(Katoh和Standley 2013,“分子生物学和进化”Molecular Biology and Evolution,30(4)772780)软件。使用此类软件时，优选使用默认参数，例如空位罚分和延伸罚分。

序列

编号描述

以下编号的段落(段)描述了本发明的特定方面和实施方式：

1.一种在受试者中治疗或预防纤维化的方法，该方法包括向受试者施用治疗或预防有效量的IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂。

2.一种IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的组合，用于治疗或预防纤维化的方法。

3.IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的用途，用于制备用于治疗或预防纤维化的方法的药物。

4.根据段落1的方法，根据段落2使用的组合，或根据段落3的用途，其中纤维化是眼睛中的纤维化。

5.段落1至4中任一项的方法，使用的组合或用途，其中纤维化选自格雷夫氏眼病、视网膜上纤维化、视网膜纤维化、特发性黄斑前纤维化、视网膜下纤维化(例如与视网膜脱离或黄斑变性相关(例如湿性年龄相关性黄斑变性(AMD))、糖尿病性视网膜病、青光眼)、地理萎缩、角膜纤维化、手术后纤维化(例如白内障手术后的后囊或青光眼小梁切除术后的小泡)、结膜纤维化或结膜下纤维化。

6.根据段落1至5中任一项的方法，使用的组合或用途，其中所述纤维化是视网膜纤维化、视网膜上纤维化或视网膜下纤维化。

7.根据段落1的方法，根据段落2使用的组合，或根据段落3的用途，其中所述纤维化是心脏、肝脏或肾脏的纤维化。

8.根据段落7所述的方法、使用的组合或用途，其中纤维化为：

在肝脏中，与慢性肝病或肝硬化有关；

在肾脏中，与慢性肾脏疾病有关；或

在心脏中，与心肌纤维化与心脏的肌组织功能障碍或心脏的电学性质或心脏的瓣膜壁增厚有关。

9.根据段落1至8中任一项的方法、使用的组合或用途，其中所述血管生成因子选自血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)。

10.根据段落1至9中任一项的方法、使用的组合或用途，其中所述血管生成因子是VEGF。

11.根据段落1至10中任一项的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导拮抗剂是能够阻止或减少IL-11与IL-11受体结合的试剂。

12.根据第1至11段中任一项的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够结合IL-11或IL-11的受体的试剂。

13.根据段落12所述的方法，使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。

14.根据第13段的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是抗IL-11抗体或抗IL-11Rα抗体。

15.根据第13段的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是IL-11诱饵受体。

16.根据段落1至10中任一项的方法，使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂能够降低IL-11或IL-11的受体的表达。

17.根据段落16的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

18.根据段落1至17中任一项的方法，使用的组合或用途，其中血管生成因子的拮抗剂是能够阻止或减少血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣的结合的试剂。

19.根据段落1至18中任一项的方法，使用的组合或用途，其中血管生成因子的拮抗剂是能够结合血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的试剂。

20.根据第19段所述的方法、使用的组合或用途，其中所述血管生成因子的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。

21.根据第20段的方法，使用的组合或用途，其中血管生成因子的拮抗剂是抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体。

22.根据段落20的方法、使用的组合或用途，其中血管生成因子的拮抗剂是VEGF诱饵受体。

23.根据段落22的方法、使用的组合或用途，其中血管生成因子的拮抗剂是阿柏西普。

24.根据段落1至17中任一项的方法，使用的组合或用途，其中血管生成因子的拮抗剂能够减少血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的表达。

25.根据段落24的方法，使用的组合或用途，其中血管生成因子的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

26.一种包含IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的组合。

27.一种药物组合物，其包含IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂。

28.一种多部件试剂盒，其包含预定量的IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子拮抗剂、段落26的组合或段落27的药物组合物。

29.根据段落26所述的组合，根据段落27所述的药物组合物或段落28所述的多部件试剂盒，其中所述血管生成因子选自血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)或血小板衍生生长因子(PDGF)。

30.根据段落26至29中任一项的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中所述血管生成因子是VEGF。

31.根据段落26至30中任一项的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL-11与IL-11受体结合的试剂。

32.根据段落26至31中任一项的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够结合IL-11或IL-11的受体的试剂。

33.根据段落32的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号转导的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。

34.根据段落33的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号转导的拮抗剂是抗IL-11抗体或抗IL-11Rα抗体。

35.根据段落33的组合、药物组合物或成套试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是IL-11诱饵受体。

36.根据段落26至30中任一项的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂能够降低IL-11或IL-11的受体的表达。

37.根据段落36的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

38.根据段落26至37中任一项的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂是能够阻止或减少血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣结合的试剂。

39.根据段落26至38中任一项的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂是能够结合血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的试剂。

40.根据段落39段的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。

41.根据段落40的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂是抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体。

42.根据段落40的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂是VEGF诱饵受体。

43.根据段落42的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂是阿柏西普。

44.根据段落26至37中任一项的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂能够减少血管生成因子的互作伴侣的表达。

45.根据段落44段的组合、药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

***

本发明包括所描述诸方面和优选特征的组合，除非这种组合是明显不允许或明确避免的。

本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。。

现在将参考附图，借助实施例示出本发明的诸方面和实施方式。其它方面和实施方式对于本领域技术人员是显而易见的。本文中提及的所有文件均通过引用纳入本文。

除非上下文另有要求，否则在整个说明书，包括所附权利要求书中的词语“包括”以及诸如“包含”和“含有”等变体将理解为暗示包括所述整数或步骤或整数或步骤的组，但不排除任何其它整数或步骤或整数或步骤的组。

必须注意的是，除非上下文另外明确指出，说明书和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。范围可以在本文中表示为从“约”一个特定值和/或到“约”另一特定值。当表达此类范围时，另一实施方式包括从一个特定值和/或至另一特定值。类似地，当利用先行词“约”将数值表示为近似值时，将理解该特定值形成另一实施方式。

在本文公开了核酸序列的情况下，也明确考虑了其反向互补序列。

本文描述的方法可以优选地在体外进行。术语“体外”旨在涵盖用培养的细胞进行的程序，而术语“体内”旨在涵盖使用/在完整的多细胞生物上的程序。

附图简述

现在将参考附图讨论说明本发明原理的实施方式和实验。

图1.抗VEGF和抗IL-11抗体联合治疗的实验概述。

图2.在激光诱导的布鲁赫斯膜破裂后7和28天，在体内监测荧光素眼底血管造影(FFA)分析激光产生的脉络膜新生血管(CNV)。(a)测量结果显示抗VEGF和抗IL-11玻璃体内注射(IVT)前后的CNV程度，数据为平均值±标准误；(b)绘制a抗体处理后的漏损区，观察抗IL-11抗体联合艾力雅降低CNV的剂量依赖效应；(c)对照组(艾力雅+IGG)，高剂量(2μg)和低剂量(0.5μg)艾力雅+抗IL-11联合治疗在7天和第28天的FFA图像。

图3.受试者在对照组(艾力雅+IGG)、高剂量(2μg)或低剂量(0.5μg)艾力雅+抗IL-11联合治疗下的视网膜结构后段光学相干断层成像(PS-OCT)。

图4.实验第28天的纤维化的组织学图像。(a)是纤维化的代表性组织学图像，显示激光损伤导致纤维化疤痕，抗IL-11抗体治疗可明显缩小纤维化疤痕，并且在联合治疗中这种作用更为明显。(b)使用ImageJ软件量化纤维化面积；双尾Dunnetts检验；箱线图显示了中位数(中线)，第25至第75个百分位数(箱)和第10至第90个百分位数(线)。

图5.在实验的第28天，通过免疫荧光(Alpha-SMA，DAPI)对纤维化的图像进行了染色(40倍)，显示激光损伤导致了纤维化疤痕，使用抗IL-11抗体治疗后瘢痕明显缩小，这种效果在联合治疗中更为明显。(a)来自1-3个人的图像，分别接受艾力雅+IgG对照、低剂量联合治疗和高剂量联合治疗。(b)来自4-6个人的图像，分别接受艾力雅+IgG对照、低剂量联合治疗和高剂量联合治疗。

图6.实验第28天的纤维化定量Alpha-SMA染色图像(40X)，显示激光损伤导致纤维化瘢痕，抗IL-11抗体治疗后瘢痕明显缩小，这种效果在联合治疗中更为明显；虚线轮廓标记了纤维化区域。(a)来自1-3个人的图像，分别接受艾力雅+IgG对照、低剂量联合疗法和高剂量联合疗法；下部面板显示顶部面板，裁剪后仅显示纤维化区域。(b)来自4-6岁个体的图像，分别接受艾力雅+IgG对照、低剂量联合疗法和高剂量联合疗法；下图显示上图，经裁剪后仅显示纤维化区域。

实施例

实施例1：材料和方法

C57BL/6J野生型(WT)小鼠购自InVivos(新加坡)。动物按光照12小时/黑暗12小时的周期饲养，随时提供食物和水。所有动物的处理和护理均按照新加坡SingHealth机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的准则进行，并根据视觉和眼科研究协会(ARVO)对动物实验的建议进行。

激光诱导的CNV：

在双眼视盘周围集中放置4个激光光凝点以诱导CNV。使用相对效能等级为120mW、曝光时间为0.05秒、光斑尺寸为50μm二极管激光器(810nm)。用晶体盖聚焦激光点，以避免激光束散射。气泡的形成被证实是布鲁赫膜的破裂。

玻璃体内注射(IVT)：

将动物麻醉后，通过在结膜囊中滴入1％的卡洛卡因对眼睛进行局部麻醉。将5％聚维酮碘溶液放入结膜囊中。使用32号针头进行玻璃体内注射。将被测化合物IVT注射入右眼。每天对所有动物进行笼侧观察，以监测健康状况不佳的临床体征，包括任何眼部异常。

激光治疗后第8天和第16天通过IVT途径进行以下治疗：

艾力雅+IgG：抗VEGF剂艾力雅和IgG(同种型对照)。每次进样的总体积＝1μl。

艾力雅+抗IL-11(低)：艾力雅和抗IL-11抗体的组合(0.5μg/1μl)。每次进样的总体积＝1μl。

艾力雅+抗IL-11(高)：艾力雅和抗IL-11抗体的组合(2μg/1μl)。每次进样的总体积＝1μl。

每天两次观察动物的潜在不良事件迹象，每天一次观察动物的食物消耗定性评估。在选择激光损伤的动物时，记录动物的体重，并在接下来的研究中每周记录一次。

在第28天，通过过量的戊巴比妥对动物进行安乐死以收集血液和组织。

眼底荧光血管造影：

通过MICRON IV眼底照相机(美国凤凰实验室)进行眼底荧光血管造影术(FFA)成像。对于FFA，以每5-6克体重0.01毫升的剂量向动物腹膜内注射10％荧光素钠。

通过后段光学相干断层扫描(PS-OCT)实时监测视网膜结构。

组织病理学和免疫组织化学

摘除整只小鼠的眼睛(28天，n＝10)，并在4％多聚甲醛(PFA)(西格玛奥德里奇，圣路易斯)的混合物中24小时。小鼠全眼经增加的乙醇浓度脱水，二甲苯清除，石蜡包埋(徕卡-瑟金帕斯，徕卡生物系统里士满有限公司)。用旋转切片机(RM2255，徕卡生物系统努斯洛股份有限公司，德国)切出五微米的切片，并收集在POLYSINE^TM显微镜载玻片上(GerhardMenzel，赛默飞世尔科技，纽因顿，康涅狄格州)。将切片在37℃的烤箱中干燥至少24小时。为准备组织病理学和免疫组织化学检查的切片，在60℃热板上加热切片，二甲苯脱蜡，在低浓度乙醇中补充水分。还进行了Masson三色染色的推荐程序(26367系列，电子显微镜科学)以研究结缔组织和肌肉病理。使用光学显微镜(Axioplan 2；卡尔蔡司医学股份有限公司，奥伯考亨，德国)检查载玻片并捕获图像。

平行地，进行免疫荧光染色。将切片置于柠檬酸钠缓冲液(10mM柠檬酸钠，0.05％吐温20，pH 6.0)孵育进行热诱导抗原提取，在95-100℃中孵育20分钟。然后将切片在柠檬酸钠缓冲液中在室温下冷却20分钟，并用1X PBS洗涤3次，每次5分钟。在室温的湿化室下，在0.1％Triton X-100和1XPBS中的5％牛血清白蛋白(BSA)封闭溶液中封闭非特异性位点1小时。然后将载玻片用1XPBS短暂冲洗。应用表1中所示的特定一抗，并在封闭溶液孵育的加湿室中，4℃孵育过夜。用1XPBS洗2次，用1X含0.1％吐温的PBS洗1次，每次10分钟后，用表1所示的Alexa Fluro 594标记荧光素标记二抗(英杰公司-分子探针，尤金，俄勒冈州)，以1：1000的浓度在封闭液中，在室温下孵育90分钟。然后用1XPBS洗涤玻片两次，用0.1％吐温的1X PBS洗涤一次，每次5分钟，然后将玻片通过长效金刚石(Prolong Diamond)抗褪色DAPI5封片剂(英杰公司-分子探针，尤金，俄勒冈州)封闭在玻片上，以观察细胞核酸。对于阴性对照，省略了一抗。

使用荧光显微镜(Axioplan 2；卡尔蔡司医学股份有限公司，奥伯考亨，德国)检查载玻片并捕获图像。对抗体作一式两份的重复实验。

表1.

实施例2：眼底荧光血管造影(FFA)

将受试动物分为三组(每组10只动物)。在第0天，每组10只动物的每只眼睛四个烧伤斑诱导激光损伤。

在激光治疗后第8天和第16天，分别通过玻璃体内注射(IVT)途径对这三个队列分别进行以下治疗：

艾力雅+IgG分别于激光后1周、2周和3周注射3次，通过玻璃体内(IVT)途径注射抗VEGF剂艾力雅和IgG(同种型对照)，1ul体积0.5ug。

艾力雅+抗IL-11(低)在激光后第8天和第16天，通过玻璃体内(IVT)途径注射艾力雅和抗IL-11抗体的组合(1μl中0.5μg)，注射两次，体积为1ul。

艾力雅+抗IL-11(高)在激光后第8天和第16天，通过玻璃体内(IVT)途径注射艾力雅和抗IL-11抗体的组合(1μl中0.5μg)，注射两次，体积为1ul。

激光损伤后但治疗之前(第7天)和治疗结束时(第28天)，通过荧光素眼底血管造影(FFA)评估脉络膜新血管形成(CNV)。

FFA结果可参见图2。在所有三个治疗组中(图2a)，第28天的漏损面积均低于第7天，但是，艾力雅+抗IL-11联合治疗组的效果更为明显。此外，我们观察到抗IL-11抗体与艾力雅组合在降低CNV方面具有剂量依赖性作用(图2b)。在所有三个治疗组中，到28天时激光损伤显示漏损减少了。对于艾力雅+抗IL-11(低)组，此效果比IgG对照更为明显，其中艾力雅+抗IL-11(高)在28天后显示出最高的治愈率。图2a和2b显示在CNV的治疗中，IL-11介导的信号传导的拮抗作用和血管生成因子的拮抗作用的协同作用。

激光损伤后第7天和第28天，通过后段光学相干断层扫描(PS-OCT)实时监测视网膜结构。结果可在图3中看到，这些结果表明联合治疗队列中脉络膜新血管形成的减少呈剂量依赖性。

实施例3：纤维化区域

在治疗结束时(第28天)，通过组织病理学检查测量上述动物的纤维化面积。用Massons Trichrome染色剂对胶原蛋白染色，并量化纤维化区域，其结果可见图4。与艾力雅+IgG对照人群相比，低和高组合疗法人群的纤维化面积均较低，这些差异具有统计学意义。尽管低剂量联合疗法组的纤维化面积比艾力雅+IgG组小，但对于高剂量组，这种作用更为明显。因此，组织病理学数据证明联合疗法比单独的单一疗法更有效，并且这种作用是剂量依赖性的。

并行进行免疫荧光染色，其结果可见于图5和6，这证实了在联合治疗组中观察到纤维化区域减少。

实施例4：比较调查

将动物分为以下四个组：

(i)未经处理的对照

(ii)艾力雅治疗

(iii)抗IL-11抗体治疗

(iv)用艾力雅+抗IL-11抗体治疗

在第0天，每组10只动物的每只眼睛四个烧伤斑诱导激光损伤。

在激光治疗后第8天和第16天，通过玻璃体内(IVT)途径对动物进行指定的治疗。

激光损伤后但在治疗前(第7天)和治疗结束时(第28天)，通过荧光素眼底血管造影(FFA)评估脉络膜新生血管(CNV)。在第28天测量纤维化面积。

结果表明：

·与未治疗的对照组相比，所有治疗组在第28天的CNV和纤维化面积降低

·与单药治疗组相比，在接受艾力雅+抗IL-11抗体治疗的组中，第28天的CNV和纤维化区域降低

·观察到协同作用(即超级加和)作用，接受艾力雅+抗IL-11抗体治疗的组中CNV和纤维化面积的改善大于联合治疗时在单一疗法队列中观察到的总和。

总结

本文的结果表明IL-11拮抗剂疗法显著降低了视网膜纤维化(图3)。此外，用IL-11拮抗剂进行抗纤维化治疗似乎也对艾力雅的抗血管生成特性产生有益作用(图2)。因此，很明显，抗纤维化疗法与抗血管生成疗法具有协同作用，与接受抗纤维化单一疗法的患者相比，联合治疗组的视网膜纤维化和脉络膜新血管形成均有明显改善。

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序列表

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<213> 智人（Homo sapiens）VEGFR-1 (UniProtKB - P17948)

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1250 1255 1260

Thr Tyr Lys Gly Ser Val Asp Asn Gln Thr Asp Ser Gly Met Val

1265 1270 1275

Leu Ala Ser Glu Glu Phe Glu Gln Ile Glu Ser Arg His Arg Gln

1280 1285 1290

Glu Ser Gly Phe Ser Cys Lys Gly Pro Gly Gln Asn Val Ala Val

1295 1300 1305

Thr Arg Ala His Pro Asp Ser Gln Gly Arg Arg Arg Arg Pro Glu

1310 1315 1320

Arg Gly Ala Arg Gly Gly Gln Val Phe Tyr Asn Ser Glu Tyr Gly

1325 1330 1335

Glu Leu Ser Glu Pro Ser Glu Glu Asp His Cys Ser Pro Ser Ala

1340 1345 1350

Arg Val Thr Phe Phe Thr Asp Asn Ser Tyr

1355 1360

<210> 24

<211> 431

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 阿柏西普

<400> 24

Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu

1 5 10 15

Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val

20 25 30

Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr

35 40 45

Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe

50 55 60

Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu

65 70 75 80

Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg

85 90 95

Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile

100 105 110

Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr

115 120 125

Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys

130 135 140

His Gln His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly

145 150 155 160

Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr

165 170 175

Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met

180 185 190

Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr

195 200 205

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

210 215 220

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

225 230 235 240

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

245 250 255

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

260 265 270

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

275 280 285

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

290 295 300

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

305 310 315 320

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

325 330 335

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

340 345 350

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

355 360 365

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

370 375 380

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

385 390 395 400

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

405 410 415

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

420 425 430

Claims

3.一种IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂的用途，用于制备用于治疗或预防纤维化的方法的药物。

4.根据权利要求1所述的方法，根据权利要求2所述使用的组合，或根据权利要求3所述的用途，其中，所述纤维化是眼内的纤维化。

5.根据权利要求1至4中任一项的方法、使用的组合或用途，其中纤维化选自格雷夫氏眼病、视网膜上纤维化、视网膜纤维化、特发性黄斑前纤维化、视网膜下纤维化(例如与视网膜脱离或黄斑变性相关(例如湿性年龄相关性黄斑变性(AMD))、糖尿病性视网膜病、青光眼)、地理萎缩、角膜纤维化、手术后纤维化(例如白内障手术后的后囊或青光眼小梁切除术后的小泡)、结膜纤维化或结膜下纤维化。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中所述纤维化为视网膜纤维化、视网膜上纤维化或视网膜下纤维化。

7.根据权利要求1所述的方法、根据权利要求2所述使用的组合，或根据权利要求3所述的用途，其中，所述纤维化是心脏、肝脏或肾脏的纤维化。

8.根据权利要求7所述的方法、使用的组合或用途，其中所述纤维化为：

在肝脏中，与慢性肝病或肝硬化有关；

在肾脏中，与慢性肾脏疾病有关；或

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中，所述血管生成因子选自血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中所述血管生成因子是VEGF。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL-11与IL-11受体结合的药剂。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够与IL-11或IL-11的受体结合的试剂。

13.根据权利要求12所述的方法，使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。

14.根据权利要求13所述的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是抗IL-11抗体或抗IL-11Rα抗体。

15.根据权利要求13所述的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是IL-11诱饵受体。

16.根据权利要求1至10中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中，IL-11介导的信号传导的拮抗剂能够降低IL-11或IL-11的受体的表达。

17.根据权利要求16所述的方法、使用的组合或用途，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中，血管生成因子的拮抗剂是能够防止或减少血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣结合的药剂。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法、使用的组合或用途，其中，血管生成因子的拮抗剂是能够与血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣结合的药剂。

20.根据权利要求19所述的方法、使用的组合或用途，其中所述血管生成因子的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。

21.根据权利要求20所述的方法、使用的组合或用途，其中，血管生成因子的拮抗剂是抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体。

22.根据权利要求20所述的方法，使用的组合或用途，其中，血管生成因子的拮抗剂是VEGF诱饵受体。

23.根据权利要求22所述的方法，使用的组合或用途，其中，血管生成因子的拮抗剂为阿柏西普。

24.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，使用的组合或用途，其中，血管生成因子的拮抗剂能够降低血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的表达。

25.根据权利要求24所述的方法，使用的组合或用途，其中，血管生成因子的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

28.一种多部件试剂盒，其包含预定量的IL-11介导的信号传导的拮抗剂和血管生成因子的拮抗剂、根据权利要求26的组合或根据权利要求27的药物组合物。

29.根据权利要求26所述的组合，根据权利要求27所述的药物组合物或根据权利要求28所述的多部件试剂盒，其中所述血管生成因子选自血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)。

30.根据权利要求26至29中任一项所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中所述血管生成因子是VEGF。

31.根据权利要求26至30中任一项所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够阻止或减少IL-11与IL-11受体结合的试剂。

32.根据权利要求26至31中任一项所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是能够结合IL-11或IL-11的受体的试剂。

33.根据权利要求32所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段，多肽，肽，寡核苷酸，适配体或小分子。

34.根据权利要求33的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是抗IL-11抗体或抗IL-11Rα抗体。

35.根据权利要求33的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是IL-11诱饵受体。

36.根据权利要求26至30中任一项所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂能够降低IL-11或IL-11的受体的表达。

37.根据权利要求36所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中IL-11介导的信号传导的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。

38.根据权利要求26至37中任一项所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂是能够阻止或减少血管生成因子与血管生成因子的互作伴侣结合的试剂。

39.根据权利要求26至38中任一项所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂是能够结合血管生成因子或血管生成因子的互作伴侣的试剂。

40.根据权利要求39所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂选自：抗体或其抗原结合片段、多肽、肽、寡核苷酸、适配体或小分子。

41.根据权利要求40所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂是抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体。

42.根据权利要求40所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂是VEGF诱饵受体。

43.根据权利要求42的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中血管生成因子的拮抗剂是阿柏西普。

44.根据权利要求26至37中任一项所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂能够减少血管生成因子的互作伴侣的表达。

45.根据权利要求44所述的组合，药物组合物或多部件试剂盒，其中，血管生成因子的拮抗剂是寡核苷酸或小分子。