CN112384622A - 用于毛发护理应用的适配体 - Google Patents

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CN112384622A CN201980042900.3A CN201980042900A CN112384622A CN 112384622 A CN112384622 A CN 112384622A CN 201980042900 A CN201980042900 A CN 201980042900A CN 112384622 A CN112384622 A CN 112384622A
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Abstract

本发明涉及一种适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物；其中所述适配体组合物对选自下列的材料具有结合亲和力：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18‑甲基二十烷酸以及它们的混合物。

Description

用于毛发护理应用的适配体
技术领域
本发明一般涉及对受损人毛发具有高结合亲和力和特异性的核酸适配体。本发明还涉及此类适配体作为活性成分递送载体至毛发的用途。
背景技术
适配体是特异性且复杂的三维形状的短单链寡核苷酸，其结合至靶标分子。适配体的分子识别基于结构相容性和分子间相互作用，包括静电力、范德华相互作用、氢键以及芳环与靶材料的π-π堆叠相互作用。适配体的靶标包括但不限于肽、蛋白质、核苷酸、氨基酸、抗生素、低分子量有机或无机化合物、甚至全细胞。适配体的解离常数通常在微摩尔水平和皮摩尔水平之间变化，这与抗体对它们的抗原的亲和力相当。适配体也可被设计成具有高特异性，从而能够区分靶分子与密切相关的衍生物。
适配体通常通过指数富集的配体系统进化(SELEX)从大型随机核酸库中体外设计。当针对低分子量染料选择单链RNA时，在1990年首次引入了SELEX方法(Ellington,A.D.,Szostak,J.W.，1990年Nature 346:818-822)。几年后，还描述了单链DNA适配体和包含化学修饰的核苷酸的适配体(Ellington,A.D.，Szostak,J.W.，1992年，Nature 355:850-852；Green,L.S.等人，1995年，Chem.Biol.第2卷：第683页至695页)。自那时起，已选择用于数百个微观靶标诸如阳离子、小分子、蛋白质、细胞或组织的适配体。来自文献的实例汇编包括在以下网站的数据库中：http://www.aptagen.com/aptamer-index/aptamer-list.aspx。然而，仍然需要选择性地结合到毛发(包括受损毛发)的适配体。
发明内容
在本发明中，我们已证明了SELEX在针对受损毛发选择适配体中的用途以及使用此类适配体将活性成分递送至毛发的用途。
在本发明中，提供了一种适配体组合物。该适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物；其中所述适配体组合物对选自下列的材料具有结合亲和力：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。
在本发明中，提供了一种适配体组合物。根据权利要求1所述的适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 214至SEQ ID NO 220。
在本发明中，该适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含选自SEQ ID NO 201至SEQ ID NO 213的一个或多个基序。
在本发明中，提供了一种毛发护理组合物。该毛发护理组合物可包含至少一种核酸适配体；其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力。在本发明中，其中所述毛发组分选自：毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。
在本发明中，提供了一种用于将一种或多种毛发护理活性成分递送至毛发的方法。该方法可包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种毛发护理活性成分的毛发护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种毛发护理活性成分是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力。
在本发明中，提供了一种用于将一种或多种毛发护理活性成分递送至毛发的方法。该方法可包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种纳米材料的毛发护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种纳米材料是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力。
附图说明
为了更全面地理解本公开，对下列发明详述和附图应提供参考。
图1.适配体选择策略。
图2.每个选择库上的序列总数。
图3.通道A在不同选择轮的频率方面的前20个序列的富集轨迹。
图4.通道B在不同选择轮的频率方面的前20个序列的富集轨迹。
图5.通过聚类(Ward.D2方法)对通道A的前100个适配体的富集轨迹进行排序的相关矩阵。
图6.通过聚类(Ward.D2方法)对通道B的前100个适配体的富集轨迹进行排序的相关矩阵。
图7.不同适配体以50nM与不同毛发样品的结合。
图8.适配体浓度对结合到毛发样品1上的总量的影响。
图9.适配体浓度对结合到毛发样品1上的百分比的影响。
图10.毛发类型(发根与发梢)对结合到毛发样品#18上的适配体百分比的影响。
图11.适配体H-A1随机区域的基序分析。
图12.适配体H-A1的预测二级结构及其保守基序。
图13.适配体H-A2随机区域的基序分析。
图14.适配体H-A2的预测二级结构及其保守基序。
图15.适配体H-B1随机区域的基序分析。
图16.适配体H-B1的预测二级结构及其保守基序。
图17.适配体H-B2随机区域的基序分析。
图18.适配体H-B2的预测二级结构及其保守基序。
图19.在选择过程期间鉴定的具有至少50％的核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。
图20.截短的适配体H-A1.1(左侧)和H-A1.2(右侧)的预测二级结构。突出显示保守基序(SEQ ID NO 201)。
图21.截短的适配体H-A2.1(左侧)和H-A2.2(右侧)的预测二级结构。
图22.截短的适配体H-B1.1(左侧)和H-B1.2(右侧)的预测二级结构。突出显示保守基序(SEQ ID NO 204和SEQ ID NO 205)。
图23.截短的适配体H-B2.1的预测二级结构。突出显示保守基序(SEQ ID NO212)。
具体实施方式
I.定义
如本文所用，术语“适配体”是指对特定靶标具有结合亲和力的单链寡核苷酸或肽。
如本文所用，术语“核酸”是指核苷酸的聚合物或低聚物。当核苷酸的糖部分是D-核糖时，核酸也被称为“核糖核酸”，当糖部分为2-脱氧-D-核糖时，核酸也被称为“脱氧核糖核酸”。
如本文所用，术语“核苷酸”通常是指由经由糖部分的5-碳的羟基基团酯化成单磷酸、多磷酸或磷酸衍生基团的核苷组成的化合物。当糖部分是D-核糖时，核苷酸也被称为“核糖核苷酸”，当糖部分为2-脱氧-D-核糖时，核苷酸也被称为“脱氧核糖核苷酸”。
如本文所用，术语“核苷”是指由核碱基诸如嘌呤或嘧啶组成的糖胺，其通常通过β-糖苷键连接至5-碳糖(例如，D-核糖或2-脱氧-D-核糖)。当糖部分是D-核糖时，核苷也被称为“核糖核苷”，当糖部分为2-脱氧-D-核糖时，核苷也被称为“脱氧核糖核苷”。
如本文所用，术语“核碱基”是指具有碱基的化学性质的包含氮原子的化合物。核碱基的非限制性示例为包含吡啶、嘌呤或嘧啶部分的化合物，包括但不限于腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶。
如本文所用，术语“寡核苷酸”是指由核苷酸组成的低聚物。
如本文所用，在两种或更多种寡核苷酸、核酸或适配体的上下文中，术语“相同”或“序列同一性”是指当比较和比对以达到最大对应性时两个或更多个相同或具有指定百分比的相同核苷酸的序列，如使用序列比较算法或通过目测进行测量的。
如本文所用，在两种或更多种寡核苷酸、核酸或适配体的上下文中，术语“基本上同源”或“基本上相同”通常是指当比较和比对以达到最大对应性时两个或更多个具有至少40％、60％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％核苷酸同一性的序列，如使用序列比较算法或通过目测进行测量的。
如本文所用，术语“表位”是指靶标的与适配体相互作用的区域。表位可以是靶标内的邻接片段，或者可由在靶标的折叠形式中物理上邻近的多个点表示。
如本文所用，术语“基序”是指存在于具有与特定靶标(例如，毛发)的结合亲和力的适配体库中的连续的或一系列连续的核苷酸的序列，并且与随机寡核苷酸库相比表现出比预期的统计学显著更高的发生概率。基序序列通常是适配体选择过程的结果或驱动因素。
如本文所用，术语“受损毛发”是已暴露于以下处理的毛发(a)化学处理，诸如永久性或半永久性染色、永久性或半永久性定型、松弛剂、漂白等，(b)由重复使用刷洗或梳理造成的机械损伤，(c)由使用吹风机和/或热工具诸如直发电烫筒造成的热损伤，以及(d)环境暴露于UV日光、漂白水等。
众所周知，天然外毛发层(F层)通过化学处理或暴露于环境因素而被部分地或完全地移除，使得毛发纤维更具亲水性。因此，同时有助于密封水分并防止进一步损伤的天然耐候性也被移除，使得毛发更易于受到进一步的化学和/或机械损伤。
如本文所用，术语“未受损毛发”或“原始毛发”是处于其天然状态的尚未显著暴露于上述条件的毛发。原始毛发可从不使用化学处理、加热工具、过度刷洗或显著暴露于UV光、漂白水等的人收集。此外，消费者新出现的毛发(发根)具有比毛发发梢更多的原始毛发特性，因为它们较少暴露于上述损伤毛发的条件下。
如本文所用，术语“结合亲和力”是指：
结合亲和力＝与毛发样品结合的适配体的量/与毛发样品一起温育的适配体的总量×100％。
结合到毛发样品的适配体的量越高，在测试条件下的结合亲和力越高。
II.适配体组合物
核酸适配体是具有特定二级和三级结构的单链寡核苷酸，其能够以高亲和力和特异性结合到靶标。在本发明中，适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物；其中所述适配体组合物对选自下列的材料具有结合亲和力：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。在本发明中，所述适配体组合物可对受损毛发具有结合亲和力。在本发明中，所述适配体组合物可具有比未受损毛发更高的对受损毛发的结合亲和力。
在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO 213至SEQ ID NO 219的序列具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO213至SEQ ID NO 219的序列具有至少70％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO 213至SEQ ID NO219的序列具有至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO 213至SEQ ID NO 219。
在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自包含选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200的序列的至少10个连续的核苷酸的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自包含选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200的序列的至少20个连续的核苷酸的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自包含选自SEQID NO 1至SEQ ID NO 200的序列的至少30个连续的核苷酸的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自包含选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200的序列的至少40个连续的核苷酸的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自包含选自SEQ ID NO 1至SEQ IDNO 200的序列的至少60个连续的核苷酸的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自包含选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200的序列的至少70个连续的核苷酸的寡核苷酸。包含来自SEQ ID NO 1的至少30个连续的核苷酸的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO 213。包含来自SEQ ID NO 1的至少20个连续的核苷酸的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO 214。包含来自SEQ ID NO 2的至少20个连续的核苷酸的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO215。包含来自SEQ ID NO 2的至少30个连续的核苷酸的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO 216。包含来自SEQ ID NO 101的至少30个连续的核苷酸的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO 217。包含来自SEQ ID NO101的至少20个连续的核苷酸的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO 218。包含来自SEQID NO 102的至少40个连续的核苷酸的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO 219。
在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102和SEQ ID NO 213至SEQID NO 219。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102和SEQ ID NO213至SEQ ID NO 219的序列具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102和SEQ ID NO 213至SEQ ID NO 219的序列具有至少60％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102和SEQ ID NO 213至SEQ ID NO 219的序列具有至少70％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102和SEQ ID NO213至SEQ ID NO 219的序列具有至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。与SEQ ID NO 8具有至少60％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的一个非限制性示例是SEQ ID NO 79。与SEQID NO 46具有至少60％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的一个非限制性示例是SEQ ID NO156。与SEQ ID NO 52具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的一个非限制性示例是SEQ ID NO 53。
在本发明中，其中所述至少一种寡核苷酸可包含选自SEQ ID NO 201至SEQ ID NO212的一个或多个基序。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含与选自SEQ ID NO 201至SEQ ID NO 212的序列具有至少70％核苷酸序列同一性的核苷酸序列。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含与选自SEQ ID NO 201至SEQ ID NO 212的序列具有至少80％核苷酸序列同一性的核苷酸序列。在本发明中，所述适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含与选自SEQ ID NO 201至SEQ ID NO 212的序列具有至少90％核苷酸序列同一性的核苷酸序列。
化学改性可将新特征引入到适配体中，诸如与靶标的不同分子相互作用、改善的结合能力、增强的寡核苷酸构象稳定性或增加的核酸酶抗性。在本发明中，所述适配体组合物的所述至少一种寡核苷酸可包含天然或非天然核碱基。天然的核碱基为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶。非天然核碱基的非限制性示例为次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-氨基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-氨基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam、溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶以及它们的混合物。
寡核苷酸的磷酸酯主链的修饰也可増加对核酸酶消化的抗性。在本发明中，所述寡核苷酸的核苷酸可通过选自下列的化学基序连接：天然磷酸二酯、手性硫代磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚氨基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫甲醛、乙硫醚、氟磷酸酯以及它们的混合物。在本发明中，所述寡核苷酸的核苷可通过天然磷酸二酯连接。
在本发明中，所述寡核苷酸的核苷的糖部分可选自：核糖、脱氧核糖、2’-氟脱氧核糖、2’-O-甲基核糖、2’-O-(3-氨基)丙基核糖、2’-O-(2-甲氧基)乙基核糖、2’-O-2-(N,N-二甲基氨基氧)乙基核糖、2’-O-2-[2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基]乙基核糖、2’-O-N,N-二甲基乙酰胺基核糖、N-吗啉基膦酰二胺、α-脱氧呋喃核糖基、其他戊糖、己糖以及它们的混合物。
在本发明中，所述核糖核苷酸的衍生物或所述脱氧核糖核苷酸的衍生物可选自：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸以及它们的混合物。
在本发明中，所述至少一种寡核苷酸的5'-端和3'-端的核苷酸可为反向的。在本发明中，所述至少一种寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基团的2'位置上被氟化。在本发明中，所述至少一种寡核苷酸的嘧啶核苷酸在戊糖基团的2'位置上被氟化。在本发明中，所述适配体组合物还可包含至少一种聚合物材料，其中所述至少一种聚合物材料共价地连接到所述至少一种寡核苷酸。在本发明中，所述至少一种聚合材料可为聚乙二醇。
在本发明中，所述至少一种寡核苷酸的长度可介于约10个核苷酸和约200个核苷酸之间。在本发明中，所述至少一种寡核苷酸的长度可小于约100个核苷酸。在本发明中，所述至少一种寡核苷酸的长度可小于约50个核苷酸。
在本发明中，其中所述至少一种寡核苷酸可共价地或非共价地附接到一种或多种毛发护理活性成分。合适的毛发护理活性成分包括一般被认为是安全的并且对毛发特别是对此类毛发护理活性成分与之相互作用的毛发表面状况提供有益效果的任何材料。这些活性物质解决的毛发状况的示例包括但不限于毛发的外观和结构变化。在本发明中，所述一种或多种毛发护理活性成分可选自：调理剂、增白剂、强化剂、抗真菌剂、抗菌剂、抗微生物剂、去头皮屑剂、抗恶臭剂、香料、嗅觉增强剂、抗痒剂、凉爽剂、抗粘附剂、保湿剂、光滑剂、表面改性剂、抗氧化剂、天然提取物和精油、染料、颜料、漂白剂、营养物质、肽、维生素、酶、螯合剂以及它们的混合物。
在本发明中，所述至少一种寡核苷酸可经由分子相互作用非共价地附接到所述一种或多种毛发护理活性成分。分子相互作用的示例是芳环的静电力、范德华相互作用、氢键合和π—π堆积作用。
在本发明中，可使用一种或多种链接剂或间隔剂将所述至少一种寡核苷酸共价地附接到所述一种或多种毛发护理活性成分。链接剂的非限制性示例是化学上不稳定的链接剂、酶不稳定的链接剂和不可裂解的链接剂。化学上不稳定的链接剂的示例是酸可裂解的链接剂和二硫化物链接剂。酸可裂解的链接剂利用低pH来触发酸可裂解的键诸如腙键的水解，以释放活性成分或有效载荷。二硫化物链接剂可在还原环境下释放活性成分。酶不稳定的链接剂的示例为可在蛋白酶存在下裂解的肽链接剂和由释放有效载荷的葡糖苷酸酶裂解的β-葡糖苷酸链接剂。如果适配体通过核酸酶降解，则不可裂解的链接剂也可释放活性成分。
在本发明中，所述至少一种寡核苷酸可共价地或非共价地附接到一种或多种纳米材料。在本发明中，所述至少一种寡核苷酸和所述一种或多种毛发护理活性成分可共价地或非共价地附接到一种或多种纳米材料。在本发明中，所述一种或多种毛发护理活性成分可由所述一种或多种纳米材料携带。纳米材料的非限制性示例为金纳米粒子、纳米级铁氧化物、碳纳米材料(诸如单壁碳纳米管和石墨烯氧化物)、介孔二氧化硅纳米粒子、量子点、脂质体、聚(丙交酯-共-乙醇酸)纳米粒子、聚合物胶束、树枝状聚合物、血清白蛋白纳米粒子和基于DNA的纳米材料。这些纳米材料可用作大体积毛发护理活性成分的载体，而适配体可有利于将具有活性物质的纳米材料递送至预期靶标。
纳米材料可具有多种形状或形态。形状或形态的非限制性示例为球体、矩形、多边形、盘、环状、圆锥体、棱锥、杆/圆柱体和纤维。在本发明的上下文中，纳米材料通常具有至少一个小于约100μm并且更优选地小于约10μm的空间尺寸。纳米材料包括固相、半固相或液相的材料。
适配体也可以是以高亲和力和特异性结合靶标的肽。这些肽适配体可以是支架蛋白的一部分。肽适配体可从组合库分离，并通过定向突变或多轮可变区诱变和选择来改善。在本发明中，适配体组合物可包含至少一种肽或蛋白质；其中所述适配体组合物对选自下列的材料具有结合亲和力：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。
III.设计适配体组合物的方法
设计核酸适配体的方法被称为指数富集的配体系统进化(SELEX)，其已被广泛研究和改善，以用于针对小分子和蛋白质选择适配体(WO91/19813)。简而言之，在SELEX的常规型式中，该过程以合成由随机生成的固定长度序列组成的大型寡核苷酸库开始，该固定长度序列两侧为充当引物的恒定5'-端和3'-端。然后将库中的寡核苷酸暴露于靶标配体，并且移除不结合靶标的那些。通过PCR洗脱和扩增结合的序列以准备随后几轮选择，其中洗脱条件的严格性通常增加以鉴定最紧密结合的寡核苷酸。除了常规的SELEX之外，还存在改善的型式，诸如毛细管电泳SELEX、基于磁珠的SELEX、细胞SELEX、自动化的SELEX、复合靶标SELEX等。对适配体筛选方法的综述见于“Kim,Y.S.和M.B.Gu，2014年，Advances inAptamer Screening and Small Molecule Aptasensors.Adv.Biochem.Eng./Biotechnol.140(Biosensors based on Aptamers and Enzymes):29-67”和“Stoltenburg,R.,et al.2007年，SELEX-A(r)evolutionary method to generate high-affinity nucleic acid ligands.Biomol.Eng.24(4):381-403”，其内容通过引用并入本文。虽然已广泛应用SELEX方法，但对于每个靶标，它既非预测型的也非标准化的。相反，必须为每个特定靶标开发一种方法，以使该方法产生可行的适配体。
尽管选择了大量的适配体，但是SELEX尚未被常规地应用于选择对宏观材料和表面具有结合亲和力的适配体。为了成功地选择对宏观材料具有高结合亲和力和特异性的适配体，表位应当以足够的量和纯度存在，以使未特异性结合的寡核苷酸的富集最小化并且提高选择的特异性。另外，带正电基团(例如，伯氨基)的存在、氢键供体和受体的存在、以及平面性(芳族化合物)有利于适配体的选择。相比之下，带负电的分子(例如，包含磷酸酯基团)使得选择过程更困难。出乎意料的是，尽管受损毛发和未受损毛发之间的化学差异很小，但发明人已发现SELEX可用于设计对受损毛发具有高结合亲和力和特异性、同时对未受损毛发具有降低的结合能力的适配体。
选择库
在SELEX中，初始候选库通常为化学合成的DNA寡核苷酸的混合物，每个寡核苷酸包含n个核苷酸的长可变区，该长可变区在3’端和5'端两侧为该库的所有候选物的保守区或引物识别区。这些引物识别区允许在SELEX期间，具体地讲通过PCR手段来操纵中心可变区。
可变区的长度决定库的多样性，其等于4n，因为每个位置可由四个核苷酸A、T、G或C中的一个占据。对于长可变区，会产生巨大的库复杂性。例如，当n＝50时，理论多样性为450或1030，这在实践中是不可访问的值，因为它对应于库中超过105吨的材料，其中每个序列表示一次。实验极限为约1015个不同的序列，这是其中表示具有25个核苷酸的可变区的所有候选序列的库。如果选择操纵包含理论多样性为约1018的30个核苷酸的可变区的库，则将仅探索1/1000的可能性。实际上，这通常足以获得具有所需性质的适配体。此外，由于所用的聚合酶不可靠并且以大约10-4的速率引入错误，因此它们有助于在整个SELEX过程中显著丰富序列池的多样性：对于长度为100个核苷酸的随机区域的库，100个候选物中的一个候选物将在每个扩增循环中被修饰，从而导致整个库出现1013个新候选物。
在本发明中，寡核苷酸的起始混合物可包含多于约106个不同的寡核苷酸并且更优选地介于约1013个和约1015个之间的不同寡核苷酸。在本发明中，可变区的长度可介于约10个和约100个核苷酸之间。在本发明中，可变区的长度可介于约20个和约60个核苷酸之间。在本发明中，可变区的长度可为约40个核苷酸。可使用短于10个核苷酸的随机区域，但它们形成二级或三级结构的能力以及它们结合靶分子的能力可能受到限制。也可使用长于100个核苷酸的随机区域，但在合成成本方面可能存在困难。可变区的随机性不是对本发明的约束。例如，如果存在与结合到给定靶标的寡核苷酸有关的先前知识，则具有此类序列的库也可用作或优于完全随机的库。
设计引物识别序列时，应注意最小化序列间的潜在退火、序列内的折叠后区或相同序列本身的退火。在本发明中，引物识别序列的长度可介于约10个和约40个核苷酸之间。在本发明中，引物识别序列的长度可介于约12个和约30个核苷酸之间。在本发明中，引物识别序列的长度可介于约18个和约26个核苷酸之间，即约18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个或26个核苷酸。引物识别序列的长度和序列决定了它们的退火温度。在本发明中，所述寡核苷酸的引物识别序列可具有介于约60℃和约72℃之间的退火温度。
适配体可以是核糖核苷酸(RNA)、脱氧核苷酸(DNA)、或它们的衍生物。当适配体是核糖核苷酸时，第一SELEX步骤可包括经由引物识别序列在5'端转录化学合成的DNA寡核苷酸的初始混合物。在选择后，候选物在扩增前通过逆转录转化回DNA。具有能与之相比的特性的RNA和DNA适配体已经针对相同的靶标进行了选择，并且在本领域中有报道。另外，这两种类型的适配体可以是彼此竞争性抑制剂，从而表明相互作用位点的潜在重叠。
可通过在选择之前或之后修饰核碱基而将新的功能诸如疏水性或光反应性并入寡核苷酸中。在嘧啶的C-5位置或在嘌呤的C-8或N-7位置处的修饰尤其常见，并且与SELEX的扩増步骤期间使用的某些酶相容。在本发明中，所述寡核苷酸可包含天然或非天然核碱基。天然的核碱基为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶。非天然核碱基的非限制性示例为次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-胺基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-胺基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、以及它们的混合物。一些非天然的核碱基诸如5-溴尿嘧啶或5-碘尿嘧啶可用于产生可光交联的适配体，其可通过UV光活化以与靶标形成共价连接。
在本发明中，所述寡核苷酸的核苷酸可通过选自下列的化学基序连接：天然磷酸二酯、手性硫代磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚氨基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫甲醛、乙硫醚、氟磷酸酯以及它们的混合物。在本发明中，所述寡核苷酸的核苷可通过天然磷酸二酯连接。
在本发明中，所述寡核苷酸的核苷的糖部分可选自：核糖、脱氧核糖、2’-氟脱氧核糖、2’-O-甲基核糖、2’-O-(3-氨基)丙基核糖、2’-O-(2-甲氧基)乙基核糖、2’-O-2-(N,N-二甲基氨基氧)乙基核糖、2’-O-2-[2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基]乙基核糖、2’-O-N,N-二甲基乙酰胺基核糖、N-吗啉基膦酰二胺、α-脱氧呋喃核糖基、其他戊糖、己糖以及它们的混合物。
在本发明中，所述核糖核苷酸的衍生物或所述脱氧核糖核苷酸的衍生物可选自：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸以及它们的混合物。
当在SELEX过程中使用经修饰的核苷酸时，它们应当与扩増步骤期间使用的酶相容。与商业酶相容的修饰的非限制性示例包括在RNA库中糖的2'位置处的修饰。嘧啶核苷酸的核糖2'-OH基团可替换为2'-氨基、2'-氟、2'-甲基或2'-O-甲基，这些基团保护RNA不被核酸酶降解。磷酸链接剂中的另外改性诸如硫代磷酸酯和硼磷酸酯也与聚合酶相容并赋予核酸酶抗性。
在本发明中，所述寡核苷酸的至少一个核苷酸可在戊糖基团的2'位置上被氟化。在本发明中，所述寡核苷酸的嘧啶核苷酸可至少部分地在戊糖基团的2'位置上被氟化。在本发明中，所述寡核苷酸的所有嘧啶核苷酸可在戊糖基团的2'位置上被氟化。在本发明中，所述寡核苷酸的至少一个核苷酸可在戊糖基团的2'位置上被胺化。
另一种方法，最近描述为二维SELEX，同时应用体外寡核苷酸选择和动态组合化学(DCC)，例如寡核苷酸的某些基团(胺基)与醛化合物库之间的可逆反应。该反应产生以与常规SELEX相同的原理选择的亚胺寡核苷酸。因此，可以鉴定与天然适配体不同的靶向发夹RNA修饰的适配体。
一种非常不同的方法涉及光学异构体的使用。天然寡核苷酸是D-异构体。L-类似物具备核酸酶抗性，但不能由聚合酶合成。根据光学异构的规则，L-系列适配体可与其靶标(T)形成复合物，所述复合物具有与由D-系列异构体和靶标(T)的对映体(T')形成的复合物相同的特性。因此，如果化合物T'可为化学合成的，则其可用于进行天然适配体(D)的选择。一旦鉴定，该适配体可化学合成为L-系列。这一L-适配体是天然靶标(T)的配体。
选择步骤
单链寡核苷酸可折叠以产生二级结构和三级结构，类似于碱基对的形成。因此，初始序列库是三维形状的库，每个三维形状对应于可触发静电相互作用、产生氢键等的单元分布。选择变成了在库中鉴定适合靶标的形状的问题，即允许最大数量的相互作用和形成最稳定的适配体-靶标复合物的形状。对于小靶标(染料、抗生素等)，所鉴定的适配体的特征在于微摩尔范围内的平衡解离常数，而对于蛋白质靶标，低于10-9M的Kd值并不罕见。
在每一轮中的选择通过从游离寡核苷酸物理分离与靶标相关的寡核苷酸进行。可以应用多种技术(色谱法、过滤保留、电泳等)。调节选择条件(靶标/候选物的相对浓度、离子浓度、温度、洗涤等)，使得在寡核苷酸之间发生靶结合竞争。一般来讲，严格性随着轮检的进行而増加，以便促进捕获具有最高亲和力的寡核苷酸。此外，进行反向选择或阴性选择以消除识别载体或不需要的靶标(例如，过滤器、小珠等)的寡核苷酸。
用于选择靶标特异性适配体的SELEX方法的特征在于重复五个主要步骤：将寡核苷酸结合到靶标，分配或移除具有低结合亲和力的寡核苷酸，洗脱具有高结合亲和力的寡核苷酸，扩増或复制具有高结合亲和力的寡核苷酸，以及调节或制备用于下一个循环的寡核苷酸。设计该选择过程以鉴定对靶材料具有最大亲和力和特异性的寡核苷酸。
在本发明中，设计适配体组合物的方法可包括使以下物质接触的步骤：a)寡核苷酸的混合物、b)选择缓冲液和c)靶材料，所述靶材料选自：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。在本发明中，所述靶材料可选自：未受损毛发、受损毛发以及它们的混合物。在本发明中，所述靶材料可为受损毛发。在本发明中，所述寡核苷酸的混合物包括可选自脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物的寡核苷酸。
通常重复SELEX循环几次，直到鉴定出具有高结合亲和力的寡核苷酸。循环次数取决于多个变量，包括靶标特征和浓度、起始随机寡核苷酸库的设计、选择条件、靶标结合位点与寡核苷酸的比率、以及分配步骤的效率。在本发明中，所述接触步骤可进行至少5次。在本发明中，所述接触步骤可进行介于6次和15次之间。在本发明中，所述方法还可包括在所述接触步骤期间移除不结合所述靶材料的寡核苷酸的步骤。
寡核苷酸是寡阴离子，每个单元在特定pH下具有电荷和氢键供体/受体位点。因此，选择缓冲液的pH和离子强度是重要的并且应代表预期适配体应用的条件。在本发明中，所述选择缓冲液的pH可介于约2和约9之间。在本发明中，所述选择缓冲液的pH可介于约5和约8之间。
阳离子可不仅有利于寡核苷酸的正确折叠，而且还可为毛发或头皮提供有益效果。在本发明中，所述选择缓冲液可包含阳离子。阳离子的非限制性示例是Mg2+、Ca2+、Sn2+、Sn4+、Zn2+、Al3+、Cu2+、Fe2+和Fe3+。
为了使适配体在其应用期间保持其结构和功能，体外选择过程可在与其正在开发的那些条件类似的条件下进行。在本发明中，所述选择缓冲液可包括毛发护理组合物的溶液或悬浮液，该毛发护理组合物的溶液或悬浮液选自洗发剂、调理洗发剂、宠物洗发剂、免洗型处理剂、喷剂、液体、糊剂、牛顿或非牛顿流体、凝胶和溶胶。在本发明中，所述选择缓冲液可包含洗发剂的溶液。
在本发明中，所述选择缓冲液可包含至少一种表面活性剂。在本发明中，所述至少一种表面活性剂可选自阴离子表面活性剂、两性或两性离子表面活性剂以及它们的混合物。阴离子表面活性剂的非限制性示例为烷基和烷基醚硫酸盐或磺酸盐，包括月桂基硫酸铵、月桂基聚氧乙烯醚硫酸铵、月桂基硫酸三乙基胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸三乙基胺、月桂基硫酸三乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸三乙醇胺、月桂基硫酸单乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸单乙醇胺、月桂基硫酸二乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸二乙醇胺、月桂酸单甘油酯硫酸钠、月桂基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠、月桂基硫酸钾、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钾、月桂基肌氨酸钠、月桂酰肌氨酸钠、月桂基肌氨酸、椰油酰肌氨酸、椰油酰硫酸铵、月桂酰硫酸铵、椰油酰硫酸钠、月桂酰硫酸钠、椰油酰硫酸钾、月桂基硫酸钾、月桂基硫酸三乙醇胺、月桂基硫酸三乙醇胺、椰油酰硫酸单乙醇胺、月桂基硫酸单乙醇胺、十三烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、椰油酰羟乙磺酸钠、以及它们的组合。非限制性两性表面活性剂包括被广义描述为脂族仲胺和叔胺的衍生物的那些表面活性剂，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一包含约8个至约18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子基团，诸如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根、或膦酸根，包括椰油酰两性基乙酸盐、椰油酰两性基二乙酸盐、月桂酰两性基乙酸盐、月桂酰两性基二乙酸盐以及它们的混合物。两性离子表面活性剂的非限制性示例包括被广义地描述为脂族季铵、鏻鎓和锍化合物的衍生物的那些表面活性剂，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一包含约8个至约18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子基团，诸如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根和甜菜碱。
在本发明中，所述选择缓冲液可包含至少一种材料，该至少一种材料选自：含水载体、凝胶基质、硅氧烷调理剂、有机调理材料、非离子聚合物、沉积助剂、流变改性剂/悬浮剂、有益剂以及它们的混合物。含水载体的非限制性示例为水以及低级烷基醇和多元醇(包括乙醇、异丙醇、丙二醇、己二醇、甘油和丙二醇)的水溶液。凝胶基质的非限制性示例包含脂肪醇水溶液，包括鲸蜡醇、硬脂醇、二十二醇以及它们的混合物。硅氧烷调理剂的非限制性示例包含聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、环状硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、和具有各种官能团的改性硅氧烷，该官能团诸如氨基基团、季铵盐基团、脂族基团、醇基团、羧酸基团、醚基团、糖或多糖基团、氟改性的烷基基团、烷氧基基团、或此类基团的组合。有机调理材料的非限制性示例包括烃油、聚烯烃、脂肪酯、氟化调理化合物、脂肪醇、烷基葡糖苷和烷基葡糖苷衍生物、季铵化合物、具有至多约2,000,000分子量的聚乙二醇和聚丙二醇(包括CTFA名称为PEG-200、PEG-400、PEG-600、PEG-1000、PEG-2M、PEG-7M、PEG-14M、PEG-45M的那些)以及它们的混合物。非离子聚合物的非限制性示例包括聚亚烷基二醇，诸如聚乙二醇类。沉积助剂的非限制性示例包括具有阳离子胺或季铵官能团的乙烯基单体与水溶性间隔单体(诸如丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、烷基和二烷基丙烯酰胺、烷基和二烷基甲基丙烯酰胺、丙烯酸烷基酯、甲基丙烯酸烷基酯、乙烯基己内酯和乙烯基吡咯烷酮)的共聚物；乙烯基酯、乙烯醇(通过聚乙酸乙烯酯的水解制备)、马来酸酐、丙二醇和乙二醇、阳离子纤维素、阳离子淀粉和阳离子瓜尔胶。流变改性剂/悬浮剂的非限制性示例包括基于丙烯酸、甲基丙烯酸或其他相关衍生物的均聚物、基于藻酸的材料，以及纤维素衍生物。有益剂的非限制性示例包括增白剂、强化剂、抗真菌剂、抗菌剂、抗微生物剂、去头皮屑剂、抗恶臭剂、香料、嗅觉增强剂、抗痒剂、凉爽剂、抗粘附剂、保湿剂、光滑剂、表面改性剂、抗氧化剂、天然提取物和精油、染料、颜料、漂白剂、营养物质、肽、维生素、酶、螯合剂以及它们的混合物。
阴性选择或反向选择步骤可最小化与不期望的靶标或靶标内的不期望表位结合的寡核苷酸的富集。就毛发护理应用而言，可能希望适配体优先结合受损毛发而不是未受损毛发。在本发明中，所述设计适配体组合物的方法还可包括使以下物质接触的步骤：a)寡核苷酸的混合物、b)选择缓冲液和c)未受损毛发。用于针对未结合靶标对适配体进行阴性选择或反向选择的方法已于WO201735666公布，其内容以引用方式并入本文。
在本发明中，设计适配体组合物的方法可包括以下步骤：a)合成寡核苷酸的混合物；b)使以下物质接触：i.所述寡核苷酸的混合物、ii.选择缓冲液和iii.靶材料，所述靶材料选自：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物，以产生靶标悬浮液；c)从所述靶标悬浮液中去除液相以产生靶标-寡核苷酸混合物；d)使所述靶标-寡核苷酸混合物与洗涤缓冲液接触，并且移除液相以产生靶标-适配体混合物；以及e)使所述靶标-适配体混合物与洗脱缓冲液接触，并且回收液相以产生适配体混合物。在本发明中，所述步骤可重复进行至少5次。在本发明中，所述步骤可进行介于6次和15次之间。
在本发明中，设计适配体组合物的方法可包括以下步骤：a)合成包含寡核苷酸的脱氧核糖核苷酸的随机混合物，该寡核苷酸包含：i.位于5'端的T7启动子序列、ii.位于中部的可变40-核苷酸序列、以及iii.位于3'端的保守反向引物识别序列；b)使以下物质接触：i.所述脱氧核糖核苷酸的随机混合物、ii.选择缓冲液和iii.毛发样品，以产生靶标悬浮液；c)从所述靶标悬浮液中去除液相以产生毛发-寡核苷酸混合物；d)使所述毛发-寡核苷酸混合物与洗涤缓冲液接触，并且移除液相以产生毛发-适配体混合物；e)使所述毛发-适配体混合物与洗脱缓冲液接触，并且回收液相以产生DNA适配体混合物；f)扩增所述DNA适配体混合物以产生富集的脱氧核糖核苷酸混合物；以及g)对所述富集的脱氧核糖核苷酸混合物进行测序。
选择后的修饰
为了提高适配体的稳定性，可在选择过程之后在适配体中引入化学修饰。例如，核糖部分的2'-OH基团可替换为2'-氟、2'-氨基或2'-O-甲基。此外，适配体的3'-端和5'-端可用不同的基团封端，诸如链霉亲和素-生物素、反向胸腺嘧啶核苷、胺、磷酸根、聚乙二醇、胆固醇、脂肪酸、蛋白质、酶、荧光团等，从而使得寡核苷酸具有核酸外切酶抗性或提供一些附加有益效果。其他修饰描述于本公开的先前章节中。
与可导致适配体-靶标相互作用特性丧失的主链改性不同，有可能在寡核苷酸的3'-端或5'-端中的一者处缀合各种基团，以便将其转化成递送载体、工具、探针或传感器而不破坏其特性。这种灵活性构成了适配体的显著优点，尤其是它们在本发明中的应用。在本发明中，一种或多种毛发护理活性成分可共价地附接到所述至少一种寡核苷酸的3'-端。在本发明中，一种或多种毛发护理活性成分可共价地附接到所述至少一种寡核苷酸的5'-端。在本发明中，一种或多种毛发护理活性成分可共价地附接到所述至少一种寡核苷酸的随机位置。
对适配体的修饰的并入可使用酶法或化学方法进行。用于修饰适配体的酶的非限制性示例是末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)、T4 RNA连接酶、T4多核苷酸激酶(PNK)、DNA聚合酶、RNA聚合酶、以及本领域技术人员已知的其他酶。TdT为可向脱氧核糖核苷酸的3'末端添加修饰的脱氧核苷酸的模板非依赖性聚合酶。T4 RNA连接酶可用于通过使用经适当修饰的核苷3',5'-双膦酸酯来标记3'端的核糖核苷酸。PNK可用于磷酸化合成寡核苷酸的5'端，从而令其能够进行其他化学转化(参见下文)。DNA聚合酶和RNA聚合酶通常用于在整个序列中随机并入修饰的核苷酸，前提条件是此类核苷酸与酶相容。
用于改性适配体的化学方法的非限制性示例为本领域的技术人员已知的就本发明而言并入本文的核糖核苷酸的高碘酸盐氧化、5'-磷酸的EDC活化、随机化学标记方法以及其他化学方法。
在高碘酸盐氧化期间，偏高碘酸盐和原高碘酸盐裂解3'-核糖核苷酸的相邻二醇之间的C-C键，从而产生两个醛部分，这些醛部分使得能够在RNA适配体的3'-端处缀合标记或活性成分。所得的醛可容易地与含肼或含伯胺的分子反应。当使用胺时，可用氰基硼氢化钠(NaBH4)将产生的席夫碱还原为更稳定的仲胺。
当使用5'-磷酸的EDC活化时，寡核苷酸的5'-磷酸通常用EDC(1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐)和咪唑活化以产生反应性咪唑中间体，然后与伯胺反应以产生在5'端修饰的适配体。因为反应需要5'磷酸酯基团，所以可首先用激酶(例如，PNK)处理合成寡核苷酸。
可以用不同的方法进行随机化学标记。因为它们允许在沿着适配体的随机位点处进行标记，所以与末端标记方法相比可获得更高程度的修饰。然而，由于核碱基被修饰，因此可破坏适配体与其靶标的结合。最常见的无规化学修饰方法涉及使用光反应性试剂，诸如基于叠氮基苯的试剂。当叠氮基苯基团暴露于紫外光下时，其形成不稳定的氮宾，该氮宾与适配体的双键以及C-H和N-H位点反应。
关于修饰适配体的方法的附加信息汇总于“Hermanson G.T.(2008).Bioconjugate Techniques.第二版，第969-1002页，Academic Press,San Diego.”中，其内容通过引用并入本文。
在选择之后，除了化学改性之外，还可进行序列截短以移除对于结合或对于折叠成结构不是必需的区域。此外，可将适配体连接在一起以提供不同的特征或更好的亲和力。因此，本文所述的适配体的任何截短或组合均作为本发明的一部分并入。
IV.适配体组合物在毛发护理产品中的应用
本发明的适配体可用于个人护理组合物中以提供一种或多种有益效果。
洗发剂组合物
本发明的毛发护理组合物可为洗发剂。洗发剂组合物包含约.001％至约1％、或者约.01％至约0.5％、或者约0.1％至约0.3％的一种或多种适配体。
A.去污表面活性剂
洗发剂组合物可包含一种或多种去污表面活性剂，该去污表面活性剂向组合物提供清洁性能。一种或多种去污表面活性剂继而可包括阴离子表面活性剂、两性表面活性剂或两性离子表面活性剂、或它们的混合物。去污表面活性剂的各种示例和描述示于美国专利6,649,155；美国专利申请公布2008/0317698；和美国专利申请公布2008/0206355中，这些文献全文以引用方式并入本文。
去污表面活性剂组分在洗发剂组合物中的浓度应足以提供期望的清洁和发泡性能，并且一般在约2重量％至约50重量％、约5重量％至约30重量％、约8重量％至约25重量％、约10重量％至约20重量％、约5重量％、约10重量％、约12重量％、约15重量％、约17重量％、约18重量％、或约20重量％的范围内。
适用于组合物中的阴离子表面活性剂为烷基硫酸盐和烷基醚硫酸盐。其它合适的阴离子表面活性剂为有机硫酸反应产物的水溶性盐。其它合适的阴离子表面活性剂为用羟乙磺酸酯化并且用氢氧化钠中和的脂肪酸的反应产物。其它类似的阴离子表面活性剂描述于美国专利2,486,921；2,486,922；和2,396,278中，这些文献全文以引用方式并入本文。
用于洗发剂组合物中的示例性阴离子表面活性剂包括月桂基硫酸铵、月桂基聚氧乙烯醚硫酸铵、月桂基硫酸三乙基胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸三乙基胺、月桂基硫酸三乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸三乙醇胺、月桂基硫酸单乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸单乙醇胺、月桂基硫酸二乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸二乙醇胺、月桂酸单甘油酯硫酸钠、月桂基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠、月桂基硫酸钾、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钾、月桂基肌氨酸钠、月桂酰肌氨酸钠、月桂基肌氨酸、椰油酰肌氨酸、椰油酰硫酸铵、月桂酰硫酸铵、椰油酰硫酸钠、月桂酰硫酸钠、椰油酰硫酸钾、月桂基硫酸钾、月桂基硫酸三乙醇胺、月桂基硫酸三乙醇胺、椰油酰硫酸单乙醇胺、月桂基硫酸单乙醇胺、十三烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、椰油酰羟乙磺酸钠以及它们的组合。在本发明中，阴离子表面活性剂可为月桂基硫酸钠或月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠。
适用于本文洗发剂组合物中的两性表面活性剂或两性离子表面活性剂包括已知用于洗发剂或其它个人护理清洁的那些。此类两性表面活性剂的浓度在约0.5重量％至约20重量％，和约1重量％至约10重量％的范围内。合适的两性离子表面活性剂或两性表面活性剂的非限制性示例描述于美国专利5,104,646和5,106,609中，这些文献全文以引用方式并入本文。
适用于洗发剂组合物中的两性去污表面活性剂包括被广义描述为脂族仲胺和叔胺的衍生物的那些表面活性剂，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一包含约8至约18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子基团诸如羧酸根、磺酸根、硫酸根、磷酸根、或膦酸根。用于本发明洗发剂组合物中的示例性两性去污表面活性剂包括椰油酰两性基乙酸盐、椰油酰两性基二乙酸盐、月桂酰两性基乙酸盐、月桂酰两性基二乙酸盐、以及它们的混合物。
适用于所述洗发剂组合物中的两性离子去污表面活性剂包括被广泛地描述为脂族季铵、鏻和锍化合物的衍生物的那些表面活性剂，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一包含约8至约18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子基团诸如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。在本发明中，可选择两性离子表面活性剂，诸如甜菜碱。
适用于洗发剂组合物中的其它阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、两性表面活性剂或任选的附加表面活性剂的非限制性示例描述于McCutcheon的《Emulsifiersand Detergents》，1989年鉴，由M.C.Publishing Co.)出版和美国专利3,929,678、2,658,072；2,438,091；2,528,378中，这些文献全文以引用方式并入本文。
洗发剂组合物还可包含洗发剂凝胶基质、含水载体和本文所述的其它附加成分。
B.含水载体
洗发剂组合物包含含水载体。因此，洗发剂组合物的制剂可为可倾倒液体的形式(在环境条件下)。因此，此类组合物通常将包含含水载体，其以至少20重量％，约20重量％至约95重量％，或约60重量％至约85重量％的含量存在。含水载体可包含水，或水与有机溶剂的可混溶混合物，并且在一个方面可包含水和最小限度的或不显著浓度的有机溶剂，除了另外作为其它组分的微量成分附带地掺入组合物中的那些。
可用于洗发剂组合物中的含水载体包含水以及低级烷基醇和多元醇的水溶液。可用于本文的低级烷基醇是具有1至6个碳的一元醇，在一个方面，为乙醇和异丙醇。可用于本文的多元醇包括丙二醇、己二醇、甘油、和丙烷二醇。
调理剂组合物
本发明的毛发护理组合物可以是毛发调理剂。本文所述的毛发调理剂组合物包含(i)约.001％至约1％、或者约.01％至约0.5％、或者约0.1％至约0.3％的一种或多种适配体。调理剂组合物还可包含调理剂凝胶基质，该调理剂凝胶基质包含(1)一种或多种高熔点脂肪族化合物，(2)阳离子表面活性剂体系，以及(3)第二含水载体。
A.阳离子表面活性剂体系
调理剂组合物的调理剂凝胶基质包含阳离子表面活性剂体系。阳离子表面活性剂体系可为一种阳离子表面活性剂或者两种或更多种阳离子表面活性剂的混合物。阳离子表面活性剂体系可选自：单长链烷基季铵化铵盐；单长链烷基季铵化铵盐和二长链烷基季铵化铵盐的组合；单长链烷基酰胺基胺盐；单长链烷基酰胺基胺盐和二长链烷基季铵化铵盐的组合，单长链烷基酰胺基胺盐和单长链烷基季铵化铵盐的组合。
阳离子表面活性剂体系以按重量计约0.1％至约10％、约0.5％至约8％、约0.8％至约5％、以及约1.0％至约4％的水平包含在组合物中。
单长链烷基季铵化铵盐
可用于本文的单烷基季铵化铵盐阳离子表面活性剂是具有一条长烷基链的那些，该长烷基链具有约22个碳原子，并且其可为C22烷基基团。连接到氮的其余基团独立地选自1至约4个碳原子的烷基基团，或者具有至多约4个碳原子的烷氧基、聚氧化亚烷基、烷基酰氨基、羟烷基、芳基或烷基芳基基团。
可用于本文的单长链烷基季铵化铵盐是具有式(I)的那些：
Figure BDA0002857650600000231
其中R75、R76、R77和R78中的一者选自22个碳原子的烷基基团，或者具有至多约30个碳原子的芳族、烷氧基、聚氧化亚烷基、烷基酰胺基、羟烷基、芳基或烷基芳基基团；其中R75、R76、R77和R78中的其余部分独立地选自1至约4个碳原子的烷基基团，或者具有至多约4个碳原子的烷氧基、聚氧化亚烷基、烷基酰胺基、羟烷基、芳基或烷基芳基基团；并且X-为成盐阴离子，诸如选自卤素(例如氯离子、溴离子)、乙酸根、柠檬酸根、乳酸根、乙醇酸根、磷酸根、硝酸根、磺酸根、硫酸根、烷基硫酸根和烷基磺酸根基团的那些。除了碳原子和氢原子之外，烷基基团还可包含醚键和/或酯键，以及其它基团诸如氨基基团。较长链烷基基团例如约22个或更多个碳的那些可为饱和或不饱和的。R75、R76、R77和R78中的一者可选自约22个碳原子的烷基基团，R75、R76、R77和R78中的其余部分独立地选自CH3、C2H5、C2H4OH以及它们的混合物；并且X选自Cl、Br、CH3OSO3、C2H5OSO3、以及它们的混合物。
此类单长链烷基季铵化铵盐阳离子表面活性剂的非限制性示例包括：山嵛基三甲基铵盐。
单长链烷基酰胺基胺盐
单长链烷基胺也适合用作阳离子表面活性剂。脂肪族伯胺、脂肪族仲胺和脂肪族叔胺是可用的。尤其可用的是叔酰胺基胺，该叔酰胺基胺具有约22个碳的烷基基团。示例性叔酰胺基胺包括：二十二烷酰胺基丙基二甲基胺、二十二烷酰胺基丙基二乙基胺、二十二烷酰胺基乙基二乙基胺、二十二烷酰胺基乙基二甲基胺。本发明中可用的胺公开于Nachtigal等人的美国专利4,275,055中。这些胺也可与以下酸联合使用，如l-谷氨酸、乳酸、盐酸、苹果酸、琥珀酸、乙酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、l-谷氨酸盐酸盐、马来酸、以及它们的混合物；并且可为l-谷氨酸、乳酸、和/或柠檬酸。本文中的胺可用酸中的任一种部分中和，其中胺与酸的摩尔比为约1:0.3至约1:2，和/或约1:0.4至约1:1。
二长链烷基季铵化铵盐
二长链烷基季铵化铵盐可与单长链烷基季铵化铵盐或单长链烷基酰胺基胺盐组合。据信，与单独使用单烷基季铵化铵盐或单长链烷基酰胺基胺盐相比，此类组合可提供易于冲洗感。在具有单长链烷基季铵化铵盐或单长链烷基酰胺基胺盐的此类组合中，使用一定水平的二长链烷基季铵化铵盐，使得二烷基季铵化铵盐在阳离子表面活性剂体系中的重量％在约10％至约50％，和/或在约30％至约45％的范围内。
可用于本文的二长链烷基季铵化铵盐阳离子表面活性剂为具有含约22个碳原子的两个长烷基链的那些。连接到氮的其余基团独立地选自1至约4个碳原子的烷基基团，或者具有至多约4个碳原子的烷氧基、聚氧化亚烷基、烷基酰氨基、羟烷基、芳基或烷基芳基基团。
可用于本文的二长链烷基季铵化铵盐是具有式(II)的那些：
Figure BDA0002857650600000241
其中R75、R76、R77和R78中的两者选自22个碳原子的烷基基团，或者具有至多约30个碳原子的芳族、烷氧基、聚氧化亚烷基、烷基酰胺基、羟烷基、芳基或烷基芳基基团；其中R75、R76、R77和R78中的其余部分独立地选自1至约4个碳原子的烷基基团，或者具有至多约4个碳原子的烷氧基、聚氧化亚烷基、烷基酰胺基、羟烷基、芳基或烷基芳基基团；并且X-为成盐阴离子，诸如选自卤素(例如氯离子、溴离子)、乙酸根、柠檬酸根、乳酸根、乙醇酸根、磷酸根、硝酸根、磺酸根、硫酸根、烷基硫酸根和烷基磺酸根基团的那些。除了碳原子和氢原子之外，烷基基团还可包含醚键和/或酯键，以及其它基团诸如氨基基团。较长链烷基基团例如约22个或更多个碳的那些可为饱和或不饱和的。R75、R76、R77和R78中的一者可选自22个碳原子的烷基基团，R75、R76、R77和R78中的其余部分独立地选自CH3、C2H5、C2H4OH、以及它们的混合物；并且X选自Cl、Br、CH3OSO3、C2H5OSO3、以及它们的混合物。
此类二烷基季铵化铵盐阳离子表面活性剂包括例如二烷基(C22)二甲基氯化铵、二牛脂烷基二甲基氯化铵、二氢化牛脂烷基二甲基氯化铵。此类二烷基季铵化铵盐阳离子表面活性剂还包括例如不对称的二烷基季铵化铵盐阳离子表面活性剂。
B.高熔点脂肪族化合物
调理剂组合物的调理剂凝胶基质包含一种或多种高熔点脂肪族化合物。可用于本文的高熔点脂肪族化合物可具有25℃或更高的熔点，并且选自脂肪醇、脂肪酸、脂肪醇衍生物、脂肪酸衍生物、以及它们的混合物。本领域的技术人员应当理解，在说明书的这一部分中公开的化合物在某些情况下可能属于多于一种的类别，例如某些脂肪醇衍生物还可归类为脂肪酸衍生物。然而，给出的分类并不旨在对特定化合物进行限制，而是为了便于分类和命名。此外，本领域的技术人员应当理解根据双键的数目和位置以及支链的长度和位置，具有一定碳原子的某些化合物可具有低于25℃的熔点。不旨在将此类低熔点化合物包含在该部分中。高熔点化合物的非限制性示例可见于“International Cosmetic IngredientDictionary”，第五版，1993和“CTFA Cosmetic Ingredient Handbook”，第二版，1992中。
在多种高熔点脂肪族化合物中，脂肪醇适用于调理剂组合物中。可用于本文的脂肪醇是具有约14至约30个碳原子，约16至约22个碳原子的那些。这些脂肪醇是饱和的并可为直链醇或支链醇。合适的脂肪醇包括例如鲸蜡醇、硬脂醇、二十二醇、以及它们的混合物。
可使用高纯度的单一化合物的高熔点脂肪族化合物。还可使用选自纯鲸蜡醇、硬脂醇和二十二醇的单一的纯脂肪醇的化合物。本文所谓“纯的”意思是化合物具有至少约90％，和/或至少约95％的纯度。当消费者冲洗掉组合物时，这些单一的高纯度化合物提供从毛发上的优良的可冲洗性。
考虑到提供改善的调理有益效果，诸如向湿发施用期间的光滑感、柔软性和干发上的润湿感，高熔点脂肪族化合物可以按组合物的重量计约0.1％至约20％，或者约1％至约15％，以及或者约1.5％至约8％的水平包含在调理剂组合物中。
C.含水载体
调理剂组合物的调理剂凝胶基质包含含水载体。因此，调理剂组合物的制剂可为可倾倒液体的形式(在环境条件下)。因此，此类组合物通常将包含第二含水载体，所述第二含水载体以约20重量％至约95重量％，或约60重量％至约85重量％的含量存在。含水载体可包含水，或水与有机溶剂的可混溶混合物，并且在一个方面可包含水和最小限度的或不显著浓度的有机溶剂，除了另外作为其它组分的微量成分附带地掺入组合物中的那些。
可用于调理剂组合物中的含水载体包含水以及低级烷基醇和多元醇的水溶液。可用于本文的低级烷基醇是具有1至6个碳的一元醇，在一个方面，为乙醇和异丙醇。可用于本文的多元醇包括丙二醇、己二醇、甘油、和丙烷二醇。
免洗型处理物
本发明的毛发护理组合物可为免洗型处理物。本文所述的免洗型处理组合物可包含约.001％至约1％、或者约.01％至约0.5％、或者约0.1％至约0.3％的一种或多种适配体。免洗型处理物还可包含(1)一种或多种流变改性剂和(2)含水载体。
流变改性剂
免洗型处理物可包含一种或多种流变改性剂以调节组合物的流变特性来用于更好的感觉、应用特性和组合物的悬浮稳定性。例如，流变特性被调节成使得组合物在其储存和运输期间保持均匀，并且组合物并不在其使用期间不期望地滴到身体、衣服或家居装饰的其它区域上。可使用任何合适的流变改性剂。在本发明中，免洗型处理物可包含约0.01％至约3％的流变改性剂，或者约0.1％至约1％的流变改性剂，
一种或多种流变改性剂可选自聚丙烯酰胺增稠剂、阳离子改性的多糖、缔合增稠剂、以及它们的混合物。缔合增稠剂包括多种材料类别，诸如例如：疏水改性的纤维素衍生物；疏水改性的烷氧基化氨酯聚合物，诸如PEG-150/癸醇/SMDI共聚物、PEG-150/硬脂醇/SMDI共聚物、聚氨酯-39；疏水改性的碱性可溶胀乳液，诸如疏水改性的聚聚丙烯酸酯、疏水改性的聚丙烯酸以及疏水改性的聚丙烯酰胺；疏水改性的聚醚。这些材料可具有可选自鲸蜡基、硬脂基、油酰基、以及它们的组合的疏水性部分，以及具有10至300个，或者30至200个，以及或者40至150个重复单元的重复亚乙基氧基团的亲水性部分。该类型的示例包括PEG-120-甲基葡萄糖二油酸酯、PEG-(40或60)脱水山梨糖醇四油酸酯、PEG-150季戊四醇四硬脂酸酯、PEG-55丙二醇油酸酯、PEG-150二硬脂酸酯。
附加的流变改性剂的非限制性示例包括丙烯酰胺/丙烯酸铵共聚物(和)聚异丁烯(和)聚山梨酸酯20；丙烯酰胺/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物/异十六烷/聚山梨酸酯80；丙烯酸酯共聚物；丙烯酸酯/山嵛基聚氧乙烯醚-25甲基丙烯酸酯共聚物；丙烯酸酯/丙烯酸C10-C30烷基酯交联聚合物；丙烯酸酯/硬脂基聚氧乙烯醚-20衣康酸酯共聚物；聚丙烯酸铵/异十六烷/PEG-40蓖麻油；C12-16烷基PEG-2羟丙基羟乙基乙基纤维素(HM-EHEC)；卡波姆；交联的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；二亚苄基山梨醇；羟乙基乙基纤维素(EHEC)；羟丙基甲基纤维素(HPMC)；羟丙基甲基纤维素(HPMC)；羟丙基纤维素(HPC)；甲基纤维素(MC)；甲基羟乙基纤维素(MEHEC)；PEG-150/癸醇/SMDI共聚物；PEG-150/硬脂醇/SMDI共聚物；聚丙烯酰胺/C13-14异链烷烃/月桂基聚氧乙烯醚-7；聚丙烯酸酯13/聚异丁烯/聚山梨酸酯20；聚丙烯酸酯交联聚合物-6；聚酰胺-3；聚季铵盐-37(和)氢化的聚癸烯(和)十三烷基聚氧乙烯醚-6；聚氨酯-39；丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸盐/二甲基丙烯酰胺；交联聚合物(和)异十六烷(和)聚山梨酸酯60；聚丙烯酸钠。示例性可商购获得的流变改性剂包括ACULYNTM28、KlucelM CS、Klucel H CS、Klucel G CS、SYLVACLEAR AF1900V、SYLVACLEAR PA1200V、BenecelE10M、Benecel K35M、Optasense RMC70、ACULYNTM33、ACULYNTM46、ACULYNTM22、ACULYNTM44、Carbopol Ultrez 20、Carbopol Ultrez 21、Carbopol Ultrez 10、Carbopol 1342、SepigelTM305、SimulgelTM600、Sepimax Zen、和/或它们的组合。
B.含水载体
免洗型处理物可包含含水载体。因此，免洗型处理物的制剂可为可倾倒液体的形式(在环境条件下)。因此，此类组合物通常将包含含水载体，其以至少20重量％，约20重量％至约95重量％，或约60重量％至约85重量％的含量存在。含水载体可包含水，或水与有机溶剂的可混溶混合物，并且在一个方面可包含水和最小限度的或不显著浓度的有机溶剂，除了另外作为其它组分的微量成分附带地掺入组合物中的那些。
可用于免洗型处理物中的含水载体包括水以及低级烷基醇和多元醇的水溶液。可用于本文的低级烷基醇是具有1至6个碳的一元醇，在一个方面，为乙醇和异丙醇。可用于本文的多元醇包括丙二醇、己二醇、甘油、和丙烷二醇。
pH
本发明的毛发护理组合物在25℃下可具有约2至约10范围内的pH。更优选地，毛发护理组合物的pH可在约2至约6、或者约3.5至约5、或者约5.25至约7的范围内。
附加组分
本文所述的毛发护理组合物可任选地包含一种或多种已知用于毛发护理或个人护理产品的附加组分，前提条件是附加组分在物理和化学上与本文所述的基本组分相容，或不以其它方式不当地损害产品的稳定性、美观性或性能。此类附加组分最典型为描述于参考书诸如“CTFA Cosmetic Ingredient Handbook”第二版(The Cosmetic,Toiletries,and Fragrance Association，Inc.1988，1992)中的那些。按所述毛发护理组合物的重量计，此类附加组分的各个浓度可在约0.001重量％至约10重量％的范围内。
用于毛发护理组合物中的附加组分的非限制性示例包括调理剂、天然阳离子沉积聚合物、合成阳离子沉积聚合物、去头皮屑剂、颗粒、悬浮剂、石蜡烃、推进剂、粘度调节剂、染料、非挥发性溶剂或稀释剂(水溶性和水不溶性)、珠光助剂、泡沫促进剂、附加表面活性剂或非离子辅助表面活性剂、灭虱药、pH调节剂、香料、防腐剂、蛋白质、皮肤活性剂、防晒剂、紫外线吸收剂、以及维生素。
1.调理剂
毛发护理组合物可包含一种或多种调理剂。调理剂包括用于向毛发提供特定调理有益效果的材料。可用于本发明的毛发护理组合物中的调理剂通常包括水不溶性、水分散性、非挥发性、可形成乳化的液体颗粒的液体。可用于毛发护理组合物中的合适的调理剂为特征通常为硅氧烷、有机调理油或它们的组合的那些调理剂，或者在含水表面活性剂基质中以其它方式形成液体、分散颗粒的那些调理剂。
按所述组合物的重量计，一种或多种调理剂以约0.01重量％至约10重量％，约0.1重量％至约8重量％，和约0.2重量％至约4重量％的含量存在。
硅氧烷调理剂
本发明的毛发护理组合物可包含一种或多种硅氧烷调理剂。硅氧烷的示例包括聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、环状硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、和具有各种官能团的改性硅氧烷，该官能团诸如氨基基团、季铵盐基团、脂族基团、醇基团、羧酸基团、醚基团、环氧基团、糖或多糖基团、氟改性的烷基基团、烷氧基基团、或此类基团的组合。此类硅氧烷可溶于或不溶于含水(或非水)产品载体。在不溶性液体硅氧烷的情况下，聚合物可为乳化形式，其具有约10纳米至约30微米的液滴尺寸。
有机调理材料
本发明的组合物的调理剂还可包含单独或与其它调理剂诸如上述硅氧烷组合的至少一种有机调理材料诸如油或蜡。有机材料可以是非聚合的、低聚的或聚合的。它可为油或蜡的形式，并且可以纯制剂或以预乳化形式添加。有机调理材料的一些非限制性示例包括但不限于：i)烃油；ii)聚烯烃；iii)脂肪酯；iv)氟化调理化合物；v)脂肪醇；vi)烷基葡糖苷和烷基葡糖苷衍生物；vii)季铵化合物；viii)具有至多约2,000,000的分子量的聚乙二醇和聚丙二醇，包括具有CTFA名称PEG-20 200、PEG-400、PEG-600、PEG-1000、PEG-2M、PEG-7M、PEG-14M、PEG-45M的那些、以及它们的混合物。
附加有益剂
毛发护理组合物还可包含一种或多种附加有益剂。有益剂包括选自以下的材料：去头皮屑剂、抗真菌剂、抗痒剂、抗菌剂、抗微生物剂、保湿剂、抗氧化剂、维生素、脂溶性维生素、香料、增白剂、酶、感觉剂、诱虫剂、染料、颜料、漂白剂、以及它们的混合物。
本发明的毛发护理组合物可呈现为典型的毛发护理制剂形式。它们可为溶液、分散体、乳液、粉剂、滑石、封装体、球体、海绵、固体剂型、泡沫、以及其它递送机制的形式。
毛发护理组合物可以多孔可溶解固体结构的形式提供，诸如美国专利申请公布2009/0232873；和2010/0179083中公开的那些，这些文献全文以引用方式并入本文。因此，毛发护理组合物包含螯合剂，含有有机酸的缓冲体系，约23％至约75％的表面活性剂；约10％至约50％的水溶性聚合物；和任选地，约1％至约15％的增塑剂；使得毛发护理组合物为柔性多孔可溶解固体结构的形式，其中所述结构具有约80％至约100％的开孔百分含量。
毛发护理组合物可为粘滞液体的形式，该粘滞液体包含一种或多种异构体、20％表面活性剂和聚羧酸酯流变改性剂；其中特定选择聚羧酸酯以在由掺入本发明所用的关键缓冲体系和螯合剂所得的高电解质水平下有效。非限制性示例包括丙烯酸酯/丙烯酸C10-C30烷基酯交联聚合物诸如来自Lubrizol的Carbopol EDT2020、1342、1382等。这些活性物质的流变特性有益效果可包括稳定性、易于分配、铺展流畅等。
毛发护理组合物一般由常规方法制备，诸如制备组合物的领域已知的方法。此类方法通常包括在一个或多个步骤中将各成分混合至相对均一的状态，可使用或不使用加热、冷却、施加真空等。制备该组合物以便优化稳定性(物理稳定性、化学稳定性、光稳定性)和/或活性材料的递送。毛发护理组合物可为单相或单一产品，或者毛发护理组合物可为单独的相或单独的产品。如果使用两种产品，则可同时或按顺序一起使用产品。按顺序使用可发生在一个短的时间段内，诸如使用一种产品之后立即，或者它可能会发生在超过数小时或数天的一段时间后。
实施例
以下实施例说明了本文所述的本发明的非限制性实施例。示例性的毛发护理组合物可通过常规制剂和混合技术来制备。应当理解，在不脱离本发明的实质和范围的情况下，这些制剂领域内的技术人员可对毛发护理组合物进行其他的改性。除非另外指明，否则本文中所有份数、百分比和比率均按重量计。一些组分可作为稀释溶液来自供应商。除非另外指明，否则所示量反映了活性材料的重量百分比。
以下为本文所述的毛发护理组合物的非限制性实施例。
洗发剂组合物实施例
洗发剂实施例1 洗发剂实施例2
成分 重量％ 重量％
纯化的水 适量至100 适量至100
月桂基聚氧乙烯醚-3硫酸钠 21.6 21.6
月桂基硫酸钠 34.5 34.5
月桂基聚氧乙烯醚-4 0.9 0.9
聚二甲基硅氧烷330M厘泊 0.5 0.5
乙二醇二硬脂酸酯 1.5 1.5
聚季铵盐-6 0.32 0.32
H-A1适配体 0.01 0.001
苯甲酸钠 0.27 0.27
柠檬酸50％溶液 0.52 0.52
甲基氯异噻唑啉酮/甲基异噻唑啉酮： 0.035 0.035
氯化钠 1.66 1.66
芳香剂 0.65 0.65
56％的DL-泛醇溶液 0.05 0.05
泛醇乙醚 0.03 0.03
乙二醇二硬脂酸酯 1.5 1.5
附加的洗发剂实施例
Figure BDA0002857650600000311
Figure BDA0002857650600000321
1衍生自具有低含水粘度的天然胶的阳离子聚合物
2阳离子合成聚合物
3植物来源的阳离子聚合物
洗去型调理剂制剂
Figure BDA0002857650600000322
Figure BDA0002857650600000331
1.得自Lipo的Lipowax P(在互联网中查看)
洗去型毛发调理组合物的附加实施例
Figure BDA0002857650600000332
Figure BDA0002857650600000333
Figure BDA0002857650600000341
Figure BDA0002857650600000342
1二十二烷基三甲基甲酯硫酸铵，得自Feixiang
2二十二烷基三甲基氯化铵，Genamin KDMP，得自Clariant
3 HY-3050，得自Dow Corning
4 HY-3051，得自Dow Corning
5 Y-14945；10,000厘泊氨基封端的聚二甲基硅氧烷，得自Momentive
6 ABC1459，得自Mitsubishi Chemical
免洗型处理(LOT)组合物的实施例
Figure BDA0002857650600000351
1衍生自多乙氧基化脱水山梨糖醇和油酸的非离子表面活性剂和乳化剂
2乙烯基吡咯烷酮和季铵化的甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的共聚物
3 1,3-双(羟甲基)-5,5-二甲基咪唑啉-2,4-二酮
4包含甲基异噻唑啉酮的防腐剂
V.实施例
实施例1.适配体设计。
A.库准备
将约1015种不同序列(10nmol)的DNA库溶解于100μL的H2O中，并且拆分成16.6μL(约1.66nmol DNA)的等分试样，该DNA库包含40个核苷酸的随机区域，该随机区域两侧为两个保守区域，即5'-正向引物识别序列(5’-AACTACATGGTATGTGGTGAACT-3’)和3'反向引物识别序列(5’-GACGTACAATGTACCC-3’)。向每个库等分试样加入50μL的10X选择缓冲液(100mMHEPES、1.2M NaCl、50mM KCl、50mM MgCl2；pH8.2)和383.4μL H2O。
然后将库溶液在95℃下加热10分钟，并立即置于冰乙醇浴中15分钟。最后，将库在室温下温育10分钟，产生在选择期间使用的快速冷却库。当需要时，将50μL的商业体积洗发剂添加到库中。
B.毛发样品表征
毛发来源于白人女性，为长度约30cm的马尾辫，得自美国纽约(New York,USA)的International Hair Importers。在用于适配体选择之前，将每根马尾辫用日本产的潘婷丝滑柔顺洗发水和护发素(Pantene Silky Smooth Shampoo and Conditioner)洗3次。洗发剂以0.1g洗发剂/g毛发加入，并且在毛发中乳化30秒。然后将其冲洗30秒钟并重复。调理剂也以0.1g调理剂/g毛发加入，乳化30秒并冲洗30秒。这完成了一个完整的循环并重复三次。然后使毛发干燥过夜。
还对每根马尾辫在发根和发梢端进行表征，以评估化学和物理损伤。所有马尾辫均来自未进行染色、烫发或松弛处理但已暴露于物理损伤(洗涤、刷洗等)和紫外线暴露的女性。使用SEM(扫描电子显微镜)测量发根和发梢处的角质层质量。以0至5的等级评估五十根纤维，其中0＝无角质层损坏，1＝较小角质层损坏，3＝高角质层损坏，5＝剥离角质层。然后将来自每根纤维的得分相加得出总损伤得分(最大得分＝100)。使用角质层半胱氨酸的FT-IR测量在发根和发梢处测量氧化性损伤的程度。已确定该方法适于通过定量由胱氨酸氧化产生的半胱氨酸的量来研究氧化处理对毛发的影响(Strassburger，J.,J.Soc.Cosmet.Chem.，第36卷，第61-74页，1985年；Joy,M.和Lewis,D.M.，Int.J.Cosmet.Sci.，第13卷，第249-261页，1991年；Signori,V.和Lewis,D.M.，Int.J.Cosmet.Sci.，第19卷，第1-13页，1997年)。使用配备有金刚石衰减全内反射(ATR)单元的Perkin Elmer
Figure BDA0002857650600000361
1傅立叶变换红外(FTIR)系统来测量人毛发中的半胱氨酸浓度。每个发簇读取四个读数(沿着发簇两侧向下约1/3和2/3)并计算平均值。如Signori和Lewis在1997年规定的，使用归一化双导数分析程序。原始光谱首先转换为吸光度，然后再归一化为1450cm-1谱带(特征性和不变性蛋白CH2拉伸)。然后对该归一化的吸光度进行两次推导，并且将1040cm-1处的吸光度作为半胱氨酸的相对浓度。
C.适配体选择
适配体选择使用一个包含约1015个序列的库等分试样。向该库等分试样加入50μL的10X选择缓冲液(100mM HEPES、1.2M NaCl、50mM KCl、50mM MgCl2；pH 8.2)和383.4μLH2O。通过将库在95℃下加热10分钟并将溶液立即置于冰乙醇浴中15分钟来快速冷却库溶液。最后，将库在室温下温育10分钟，产生在选择期间使用的快速冷却库。在库初始快速冷却后，将50μL的商业体积洗发剂(澄清洗发剂，无硅氧烷)等分试样加入库中。
对浸入包含适配体库的溶液中的毛发样品进行适配体选择。在第一轮选择中，将由松紧带保持在一起并且重约0.03g的3cm长的发绺置于快速冷却库溶液中。将毛发在库溶液中在室温下温育20分钟。温育后，取出毛发并置于新的2mL塑料Eppendorf管中，该管装有1mL选择缓冲液(100mM HEPES，1.2M NaCl，50mM KCl，50mM MgCl2；pH 8.2)并置于旋转器上5分钟。将毛发从结合缓冲液中取出并置于新的2mL塑料Eppendorf管中，该管装有1mL新鲜选择缓冲液(100mM HEPES，1.2M NaCl，50mM KCl，50mM MgCl2；pH 8.2)并置于旋转器上5分钟，总共进行两次洗涤。为了移除已成功结合到毛发样品的序列，然后将经洗涤的毛发样品置于装有500μL 6M脲的2mL Eppendorf管中并在85℃下温育10分钟。加热后，回收该第一洗脱溶液。然后将毛发置于装有500μL新鲜6M脲的新的2mL Eppendorf管中，并且将样品在85℃下加热10分钟。回收该第二洗脱溶液并与第一洗脱溶液合并。来自合并溶液的DNA使用GeneJET PCR纯化试剂盒(ThermoFisher Scientific，目录号K0702)按照制造商的说明书纯化。
对纯化的DNA进行测试PCR，其中将库等分试样扩增增加的循环数，以确定在10％聚丙烯酰胺凝胶上产生1.5ng条带的最佳循环数。使用标准Taq聚合酶缓冲液(New EnglandBioLabs，目录号B9014S)、脱氧核糖核苷酸(dNTP)溶液混合物(New England BioLabs，目录号N0447L)、10μM正向引物(5’-AACTACATGGTATGTGGTGAACT-3’)(TriLink，目录号NA)、10μM反向引物(5’-GACGTACAATGTACCC-3’)(TriLink，目录号NA)和taq聚合酶(New EnglandBioLabs，目录号M0273X)进行PCR。一旦确定了最佳循环数，将来自第一轮选择的库扩增并用GeneJET PCR纯化试剂盒(ThermoFisher Scientific，目录号K0702)纯化。
在第一轮选择之后，将库拆分成两个通道。在通道B中，仅针对毛发发梢进行选择。在通道A中，对于每轮选择，对来自发根附近的一撮毛发进行反向选择，然后对相同样品的发梢毛发进行正向选择。在9轮选择后，将来自每个通道的库进一步拆分成4个等分试样。然后，使用这些子库对严重受损、中度受损、轻度受损或未受损(根部毛发)的毛发再进行两轮正向选择，如图1所示。
在每个正向选择实验期间，将由松紧带保持在一起的发绺(长度3cm，重约0.03g)置于装有快速冷却库溶液的等分试样(500μL)的2mL管中，确保毛发样品完全浸没。将样品在室温下温育20分钟。然后取出该发绺，置于新的2mL管中，该管装有1mL的1X选择缓冲液(10mM HEPES、120mM NaCl、5mM KCl、5mM MgCl2；pH 7.4)并使用旋转器混合5分钟，以洗涤毛发样品并从毛发样品移除未结合的序列。再一次重复该清洗步骤。接着，将该发绺置于装有500μL 6M脲的新的2mL管中，并在85℃下温育10分钟以洗脱结合的序列。重复这一洗脱过程，合并两次的洗脱溶液(总共1000μL)。洗脱的库用GeneJET PCR纯化试剂盒(ThermoFisher Scientific，目录号K0702)根据制造商的说明书纯化。
在每次正向选择后，对纯化的库进行测试PCR，其中在增加的循环中PCR扩增5μL回收的库，以确定在10％聚丙烯酰胺凝胶上可见的最佳循环数(参见表1)。使用标准Taq聚合酶缓冲液(New England BioLabs，目录号B9014S)、脱氧核糖核苷酸(dNTP)溶液混合物(NewEngland BioLabs，目录号N0447L)、10μM正向引物(5’-AACTACATGGTATGTGGTGAACT-3’)(TriLink，目录号NA)、10μM反向引物(5’-GACGTACAATGTACCC-3’)(TriLink，目录号NA)和taq聚合酶(New England BioLabs，目录号M0273X)进行PCR反应。一旦确定了最佳循环数，就在若干反应管中PCR扩增完整库以产生所需量的DNA用于下一轮选择。在选择过程中，通过减少反应管的数量直至达到最少五个反应管来减少每轮选择中携带的DNA库的量，从而增加适配体选择严格性(参见表1)。
使用GeneJET PCR纯化试剂盒(ThermoFisher Scientific，目录号K0702)纯化PCR反应的产物。然后使用T7 RNA聚合酶与RNAPol反应缓冲液(New England BioLabs，目录号M0251)、核糖核苷酸溶液组(New England BioLabs，目录号N0450)和RNA酶抑制剂(小鼠源)(New England BioLabs，目录号M0314)转录该库。将DNA模板和转录溶液混合并在37℃下温育16小时。转录产生与所选择的库反义的RNA。在转录后，使用DNA酶I(New EnglandBioLabs-M0303，加拿大(Canada))消化DNA模板。然后，使用RNeasy MinElute纯化试剂盒(Qiagen，目录号74204)纯化RNA。使用A260值计算RNA收率，并且使用M-MuLV逆转录酶试剂盒(New England BioLabs，目录号M0253)以及100μM正向引物(5’-AACTACATGGTATGTGGTGAACT-3’)(TriLink，目录号NA)、脱氧核糖核苷酸(dNTP)溶液混合物(New England BioLabs，目录号N0447)和RNA酶抑制剂(New England BioLabs，目录号M0314)。为了移除剩余的RNA模板，使用RNase H反应试剂盒(New England BioLabs，目录号M0297L)将逆转录溶液转入RNase H反应，之后使用GeneJET PCR纯化试剂盒(ThermoFisherScientific，目录号K0702)纯化该溶液。在纯化后，将所产生的单链有义DNA用于下一轮选择。
在每个反向选择实验期间，用1mL无菌HPLC级水的连续三次施用来冲洗预洗涤的毛发样品。将库溶液(500μL)和选择缓冲液(10mM HEPES、120mM NaCl、5mM KCl、5mM MgCl2；pH 7.4)吸移到管中，并且将约1cm的一撮毛发浸没到管中。将样品在50rpm、37℃下温育20分钟。取出该撮毛发并置于2mL管中，该管装有1mL的1X选择缓冲液(10mM HEPES、120mMNaCl、5mM KCl、5mM MgCl2；pH 7.4)，并置于50rpm的旋转器上5分钟。将该洗涤再重复1次。将含有未结合的DNA的溶液合并，并用GeneJET PCR纯化试剂盒(ThermoFisherScientific，目录号K0702)纯化，然后如上所述制备正向选择实验(实施例1.适配体设计，A.库制备)。
表1示出了适配体选择如何进行，在一轮选择完成后回收适配体库所需的PCR循环数，以及选择严格性如何在选择轮之间通过减少反应管的数量并因此减少携带的库的量而提高。
表1.发根和发梢的适配体选择汇总
Figure BDA0002857650600000401
在通道A和通道B两者中完成9轮选择后，扩增从第9轮选择回收的库，并平均拆分成4个等分试样。将这些拆分库分配到每个通道中的以下拆分子通道之一：严重受损、中度受损、轻度受损和未受损(发根)毛发样品。以与进行先前选择轮相同的方式进行拆分轮。如表2所示进行选择拆分轮，其中基于适配体与严重受损、中度受损、轻度受损或未受损(根部毛发)样品结合的能力来选择适配体。
表2.对严重受损、中度受损、轻度受损或未受损(根部毛发)样品的拆分选择轮以 及在10％聚丙烯酰胺凝胶上获得1.5ng条带所需的对应PCR循环数。
Figure BDA0002857650600000402
Figure BDA0002857650600000411
D.适配体测序
每个通道中的选择库7至9以及针对特定毛发类型的所有拆分选择通过两步PCR过程准备用于下一代测序(NGS)。在第一步中，将不同的HEX代码(6碱基序列)和通用测序引物的一部分加到每个适配体库的5'端。在第二步中，将完整的通用测序引物加到两端。在第二个PCR步骤之后，通过丙烯酰胺电泳纯化这些库并且相对量是平衡的。然后将这些库合并，并将这些库发送到多伦多的病童医院使用Illumina HiSeq仪器进行NGS。
将测序数据制成表格并进行分析。对总计96,464,333个序列进行分析，并且每个库包含超过2,000,000个不同序列(参见图2)。每个通道中来自第9轮选择的序列按拷贝数排序并按降序命名，其中最高拷贝数的序列对通道A命名为H-A1，对于通道B命名为H-B1。这些顶部序列在表1中列出。
对于每个通道，在从其他选择轮获得的库上测定第9轮选择的顶部序列的拷贝数(表1)。最后，通过将观察到的拷贝数除以在特定库中观察到的序列总数来计算每个序列的频率。绘制前20个序列在不同选择轮的频率方面的富集轨迹(参见图3和图4)。
在图3和图4中，显然，就第9轮选择中的丰度而言，顶部序列比其他序列显著富集得多。此外，似乎存在两种类型的轨迹，一种从第7轮到第8轮增加，然后达到平稳状态，而一种在所有三轮选择中相对平坦。
实施例2.序列的协方差分析。
对实验A和B的前100个适配体进行序列频率变化的协方差分析。首先，对于每个选择轮，通过所观察到的每个适配体的频率除以前100个适配体的频率的平均值而归一化频率数据。这一归一化允许消除在不同选择轮之间的NGS分析之前由PCR扩増引起的潜在差异。然后，从第8至11轮选择中对应适配体的归一化值减去第7轮选择中的每一个适配体的归一化值。使用所得到的矩阵进行相关性分析。
执行选择轮间的Pearson相关性。由于在每轮选择中使用了不同的毛发样品，因此可以合理地假定，适配体频率之间的协方差将是由于它们所结合的毛发样品内的表位丰度的协方差。因此，共变适配体的每个簇对应于与毛发内不同表位结合的一组适配体。生成距相关矩阵的欧几里得距离矩阵，并将其用作使用Ward.D2算法进行聚类的基础(参见图5和图6)。这些分析用软件R执行。图5和图6中的适配体的顺序在x轴上与在y轴上相同，因此沿着对角线(深蓝色)存在+1.0的相关性。基于该分析，至少两个不同表位可能是所选择的适配体的结合位点。
实施例3.适配体的结合
合成四种适配体(H-A1、H-A2、H-B1和H-B2)(Integrated DNA Technologies,Inc.)，其5'端具有HEX荧光团，并溶解于水中至最终浓度1μM作为储备溶液。
将五种毛发样品(发梢的2.5mg，3cm长度)与四种适配体中的每一种以50nM在1mL的1X选择缓冲液(10mM HEPES、120mM NaCl、5mM KCl、5mM MgCl2；pH 7.4)中在室温下温育30分钟。移除并收集上清液。然后，用1X选择缓冲液洗涤毛发样品两次以移除任何未结合的适配体，并且收集上清液。然后通过在85℃下将毛发样品在6M脲溶液中温育10分钟来洗脱结合的适配体。洗脱的适配体的量通过荧光光谱法进行定量(激发λ＝535nm，发射λ＝555nm)。该测定表明：H-A1和H-B2的表现始终优于其他两种适配体。
在确定表现最佳的适配体后，测试不同浓度的适配体溶液以确定结合毛发的饱和点。将10nM、50nM和100nM适配体在1X选择缓冲液(10mM HEPES、120mM NaCl、5mM KCl、5mMMgCl2；pH 7.4)中的溶液用上述相同方法与毛发样品一起温育。将量介于5％和15％(以摩尔计)之间的H-A1和H-B2适配体与发梢样品结合。基于该分析，显然针对2.5mg毛发的饱和浓度为约50nM或者说20nM/mg(参见图8)，并且较高比例的适配体在较低浓度下结合(参见图9)。
最后，确认了这些适配体对于发梢毛发相较于发根毛发的优先结合能力(参见图10)。用适配体溶液(50nM)和毛发样品#18进行分析。
实施例4.基序分析。
测定来自第11轮选择的库(仅高度受损的毛发)的所有序列内的前四个适配体(H-A1、H-A2、H-B1和H-B2)的随机区域的六个核苷酸的基序的频率。然后，从每个基序的频率中减去平均基序频率，并且将该值除以该选择轮中所有基序频率的标准偏差，从而得到每个基序的Z值(参见图11、图13、图15和图17)。据信，包含高频基序的序列也可与受损的毛发结合。
适配体的二级结构的预测用DINAmelt(http://unafold.rna.albany.edu/？q＝DINAMelt/Quickfold)进行，并且基序在这些结构内突出显示(参见图12、图14、图16和图18)。
A.适配体H-A1随机区域的分析：
基序：
SEQ ID NO 201：5’-CGAGCAC-3’
SEQ ID NO 202：5’-ACAAGT-3’
来自适配体H-A1的可变区(SEQ ID NO 1)：
5’-GAATATGGATTACAAGTTTCAGATCGAGCACTCCCATTCA-3’
出现频率显著高于随机预期的频率。这意味着这些特定基序在这个基于毛发的适配体选择过程中被正向选择。包含这些基序的任何序列也可预期与受损毛发结合。
图12.适配体H-A1的预测二级结构及其保守基序。
B.适配体H-A2随机区域的分析：
基序：
SEQ ID NO 203:5’-AAACCACGAC-3’
来自适配体H-A2的可变区(SEQ ID NO 2)：
5’-AGGGGAACCTTAGTAAACCACGACCCAGGATGTGCTATCG-3’
出现频率显著高于随机预期的频率。这意味着该特定基序在这个基于毛发的适配体选择过程中被正向选择。包含该基序的任何序列也可预期与受损毛发结合。
C.适配体H-B1随机区域的分析：
基序：
SEQ ID NO 204:5’-ATTCAC-3’
SEQ ID NO 205:5’-ACACCGA-3’
SEQ ID NO 206:5’-GACAACAG-3’
SEQ ID NO 207:5’-ACACCGANGACAACA-3’
来自适配体H-B1的可变区(SEQ ID NO 101)：
5’-TAGTGGGATTTATTCACTATGTACACCGATGACAACAGTA-3’
其中N代表任何核苷酸，其出现频率显著高于随机预期的频率。这意味着这些特定基序在这个基于毛发的适配体选择过程中被正向选择。包含这些基序中的任一个基序的任何序列也可预期与受损毛发结合。
D.适配体H-B2随机区域的分析：
基序：
SEQ ID NO 208:5’-GCAGAACA-3’
SEQ ID NO 209:5’-AACATGA-3’
SEQ ID NO 210:5’-TGACCAAAAGAGGAAAGG-3’
SEQ ID NO 211：5’-AAGAGGAAAGG-3’
SEQ ID NO 212：5’-GCAGAACATGACCAAAAGAGGAAAGG-3’
来自适配体H-B2的可变区(SEQ ID NO 102)：
5’-GCAGAACATGACCAAAAGAGGAAAGGTATAGCTGCTATCA-3’
出现频率显著高于随机预期的频率。这意味着这些特定基序在这个基于毛发的适配体选择过程中被正向选择。包含这些基序的任何序列也可预期与受损毛发结合。
E.对适配体库内常见基序的分析：
在来自通道A和B的频率方面，对前10,000个序列内的常见基序进行了搜索。在与随机分布的显著偏差方面，领头基序是SEQ ID NO 213。
SEQ ID NO 213:5’-AACCACAA-3’
例如，该基序存在于以下序列中，其中为了简单起见省略了5’引物识别序列和3'引物识别序列。寡核苷酸可包含基序SEQ ID NO 213。
SEQ ID NO 150，H-B50：5’-GGCCCTGTATAAAGATTCGACTCTGTCAACCACAAACCTA-3’
实施例5.序列相似性分析。
使用软件Align X进行SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200的比对，该软件是Invitrogen的Vector NTI Advanced 11.5.4的组件。多个序列组具有至少60％或至少50％的核苷酸序列同一性，如图19中的比对所示。在这些比对中，为了简单起见，仅包括适配体的中心可变区。因此，与序列具有至少50％或至少60％核苷酸序列同一性的寡核苷酸可选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200。
实施例6.适配体的截短。
从顶部适配体(H-A1、H-A2、H-B1和H-B2)的预测二级结构开始，设计了包含一些二级结构元件的较小的寡核苷酸。例如，适配体H-A1.1和H-A1.2来源于适配体H-A1(参见图12)。H-A1.1包括结构的顶部部分，而HA-1.2包括二级结构的大部分(参见图20)。适配体H-A2.1和H-A2.2来源于适配体H-A2(参见图14)。H-A2.1包括结构的中间部分，而H-A2.2包括结构的顶部(参见图21)。适配体H-B1.1和H-B1.2来源于适配体H-B1(参见图16)并包括结构的顶部部分(参见图22)。适配体H-B2.1来源于适配体H-B2(参见图18)并包括结构的顶部部分(参见图23)。
表3提供了这些截短的适配体中的每一个与三种毛发样品的结合结果。用所有截短的适配体分析毛发样品#26两次，因为该样品提供最高的结合亲和力。以与先前针对全长度适配体所述相同的方式进行和分析这些结合测定(参见实施例3)。
表3.结合到不同毛发样品的截短的适配体的百分比。
Figure BDA0002857650600000451
由于毛发的高度可变性，比较这些适配体在不同毛发样品上的性能是困难的。为了克服这一限制，通过将特定适配体的结合值与相应毛发样品的所有适配体的平均结合值进行比较来确定每种适配体针对每种毛发样品的相对性能(参见表4)。
表4.截短的适配体针对不同毛发样品的相对性能。
Figure BDA0002857650600000461
显然，针对所有毛发样品，截短的适配体HA-1.1比截短的适配体HA-1.2表现好得多，表明基序ACAAGT提供比基序CGAGCAC更高的结合亲和力。
对于来自HA-2的截短的适配体，两种截短均表现良好，其中HA-2.1在受损毛发样品#26上表现更好。推测由该基序实现的结构的存在是该适配体优异结合特性的原因。截短的适配体HB-1.1比截短的适配体HB-1.2表现更好。这种性能改善与该适配体中两个保守基序的存在相关，而HB-1.2中只有一个保守基序。截短的适配体HB-2.1的结合性能表明，结构的该部分是保持完整HB-2适配体的结合亲和力所必需的。
实施例7.递送具有适配体的毛发护理活性成分。
本发明的适配体为化学合成的。制备包含游离胺基团(0.25M)和咪唑(0.1M)的毛发护理活性成分的水(pH 6)溶液。然后，在反应小瓶中称量EDC(1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐)并与适配体溶液的等分试样混合。将胺/咪唑溶液的等分试样立即加入该反应小瓶中并涡旋，直至所有组分溶解。将另外的咪唑溶液等分试样(0.1M，pH 6)加入该反应小瓶中，并且将反应混合物在室温下温育至少2小时。温育后，通过透析或通过使用旋转脱盐柱和合适的缓冲液(例如，10mM磷酸钠、0.15M NaCl、10mM EDTA，pH 7.2)将未反应的EDC及其副产物和咪唑与修饰的适配体分离。关于缀合方案的其他细节描述于“Hermanson G.T.(2008).Bioconjugate Techniques.第二版，第969-1002页，AcademicPress,San Diego.”中，其内容通过引用并入本文。
所制备的与毛发护理活性成分缀合的改性适配体可配制在毛发护理组合物(例如洗发剂或调理剂)中以在与毛发接触时提供有益效果。
表5.选择实验A和B的顶部序列的列表。
Figure BDA0002857650600000471
Figure BDA0002857650600000481
Figure BDA0002857650600000491
Figure BDA0002857650600000501
Figure BDA0002857650600000511
Figure BDA0002857650600000521
Figure BDA0002857650600000531
Figure BDA0002857650600000541
Figure BDA0002857650600000551
表6.示例性的截短的适配体的列表。
Figure BDA0002857650600000552
附加实施例/组合
A.一种适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物；其中所述适配体组合物对选自下列的材料具有结合亲和力：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。
B.根据段落A所述的适配体组合物，其中所述适配体组合物对受损毛发具有结合亲和力。
C.根据段落A至B所述的适配体组合物，其中所述适配体组合物对受损毛发的结合亲和力高于对未受损毛发的结合亲和力。
D.根据段落A至C所述的适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO 214至SEQ ID NO 220的序列具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。
E.根据段落A至D所述的适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO 214至SEQ IDNO 220。
F.根据段落A至E所述的适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO102、SEQ ID NO 214至SEQ ID NO 220。
G.根据段落A至F所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸包含选自SEQID NO 201至SEQ ID NO 213的一个或多个基序。
H.根据段落A至G所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸包含天然或非天然核碱基。
I.根据段落A至H所述的适配体组合物，其中所述非天然核碱基选自：次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-氨基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-氨基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam以及它们的混合物。
J.根据段落A至I所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的核苷通过选自下列的化学基序连接：天然磷酸二酯、手性硫代磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚氨基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫甲醛、乙硫醚以及它们的混合物。
K.根据段落A至J所述的适配体组合物，其中所述核糖核苷酸的衍生物或所述脱氧核糖核苷酸的衍生物选自：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸以及它们的混合物。
L.根据段落A至K所述的适配体组合物，所述适配体组合物还包含至少一种聚合物材料，其中所述至少一种聚合物材料共价地连接到所述至少一种寡核苷酸。
M.根据段落A至L所述的适配体组合物，其中所述至少一种聚合物材料为聚乙二醇。
N.根据段落A至M所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的5'-端和3'-端处的核苷酸为反向的。
O.根据段落A至N所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基团的2'位置上被氟化。
P.根据段落A至O所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的嘧啶核苷酸在所述戊糖基团的所述2'位置上被氟化。
Q.根据段落A至P所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸共价地或非共价地附接到一种或多种毛发护理活性成分；其中所述一种或多种毛发护理活性成分选自：调理剂、增白剂、强化剂、抗真菌剂、抗菌剂、抗微生物剂、去头皮屑剂、抗恶臭剂、香料、嗅觉增强剂、抗痒剂、凉爽剂、抗粘附剂、保湿剂、光滑剂、表面改性剂、抗氧化剂、天然提取物和精油、染料、颜料、漂白剂、营养物质、肽、维生素、酶、螯合剂以及它们的混合物。
R.根据段落A至Q所述的适配体组合物，其中所述毛发护理活性成分选自调理剂。
S.根据段落A至R所述的适配体组合物，其中所述毛发护理活性成分为硅氧烷。
T.根据段落A至S所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸共价地或非共价地附接到一种或多种纳米材料。
U.一种根据段落A至T所述的毛发护理组合物，所述毛发护理组合物包含至少一种核酸适配体；其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力。
V.根据段落A至U所述的毛发护理组合物，其中所述毛发组分选自：毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。
W.根据段落A至V所述的毛发护理组合物，其中所述毛发组分为毛发角质层。
X.根据段落A至W所述的毛发护理组合物，其中所述组合物包含至少两种不同的核酸适配体；并且其中所述至少两种不同的核酸适配体对所述毛发组分的不同表位具有结合亲和力。
Y.一种根据段落A至X所述的用于将一种或多种毛发护理活性成分递送至毛发的方法，所述方法包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种毛发护理活性成分的毛发护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种毛发护理活性成分是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力。
Z.根据段落A至Y所述的方法，其中所述毛发组分为毛发角质层。
AA.一种根据段落A至Z所述的用于将一种或多种毛发护理活性成分递送至毛发的方法，所述方法包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种纳米材料的毛发护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种纳米材料是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力。
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
本发明的具体实施方式中所引用的所有文件的相关部分均以引用方式并入本文；对于任何文件的引用均不应当被解释为承认其是有关本发明的现有技术。当本文件中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文件中相同术语的任何含义或定义相冲突时，应当服从在本文件中赋予该术语的含义或定义。
虽然已举例说明和描述了本发明，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可作出多个其他变化和修改。因此，本文旨在于所附权利要求中涵盖属于本发明范围内的所有此类变化和修改。
序列表
<110> 宝洁公司(THE PROCTER & GAMBLE COMPANY)
J·E·维拉斯奎茨(Velasquez, Juan E.)
A·V·特乔(Amy, Trejo V.)
J·M·马什(Jennifer, March M.)
G·A·朋那(Gregory, Penner A.)
<120> 用于毛发护理应用的适配体
<130> 15926P
<140> 62/692068
<141> 2018-06-29
<160> 220
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 1
aactacatgg tatgtggtga actgaatatg gattacaagt ttcagatcga gcactcccat 60
tcagacgtac aatgtaccc 79
<210> 2
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 2
aactacatgg tatgtggtga actaggggaa ccttagtaaa ccacgaccca ggatgtgcta 60
tcggacgtac aatgtaccc 79
<210> 3
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 3
aactacatgg tatgtggtga actcaacttt taagcaagct gtctaccacg gaggcagtat 60
cacgacgtac aatgtaccc 79
<210> 4
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 4
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gcggacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 5
aactacatgg tatgtggtga actgccccga cgaaccaagg agatcgcagt tactactacc 60
gtagacgtac aatgtaccc 79
<210> 6
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actcagcacg agaagttcgc gccacagaca gtgcctaagc 60
caggacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
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aactacatgg tatgtggtga actgagaatg aaacagcagt tttgcgacac ggccaacgta 60
ttagacgtac aatgtaccc 79
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actcagacaa cctgctcagt tagaccgatt tgacgagcaa 60
cacgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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ggagacgtac aatgtaccc 79
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<400> 11
aactacatgg tatgtggtga actagttcca caagatgcag aagcatacac cgcgtctaga 60
agcgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 12
aactacatgg tatgtggtga acttcaaagt tatagcacta tcagacagca gagaccatga 60
caagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
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ccagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
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atcgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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ctagacgtac aatgtaccc 79
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<220>
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aactacatgg tatgtggtga actaccagag aacataccca ggcaatttat atcgctctaa 60
tgagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actgagcgat gacgaaaagt gtaatgccaa gaccacgcgg 60
ttagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 18
aactacatgg tatgtggtga acttacgaag gcagctgcat aagatacaga gagatccacc 60
actgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actttaatga ttaacgatta acttcaatgt ttaccacgcc 60
gaggacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 20
aactacatgg tatgtggtga actgacctat atccctgcga tctgcagagg aatagtgaag 60
ttcgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 21
aactacatgg tatgtggtga actacaaaga ccgcatcgat ctatgccatg gactaattca 60
gcagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<223> 合成的适配体序列
<400> 22
aactacatgg tatgtggtga actgatagcg ggctccagca attaccaaaa cttaccagcg 60
tcagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actctatcac ccacgttact acgtcactac gagcaactca 60
tgagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 24
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aaagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actctgattt cagaatctcg gaacccgccc gtcatccatt 60
atggacgtac aatgtaccc 79
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<220>
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catgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actgctttga actataaagc aaatcagcac gcgttgccac 60
gaagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 28
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acagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 29
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ccagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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acagacgtac aatgtaccc 79
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000
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 合成的适配体序列
<400> 32
aactacatgg tatgtggtga actggagcgt gacaaacact ggtccgacgc agcacactca 60
cctgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<223> 合成的适配体序列
<400> 33
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 34
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 35
aactacatgg tatgtggtga actcgcgcat tcttgaacag ataatactcg gcgcaagata 60
ccggacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 36
aactacatgg tatgtggtga actactttga cggtgccaag agaactagct taagtccgtg 60
ttcgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 37
aactacatgg tatgtggtga actaataaca aggtgccaaa aacctctcag aaacaagaac 60
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 38
aactacatgg tatgtggtga acttcaacgc gggagtcgac aaccaactac caaactgcgg 60
agagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 39
aactacatgg tatgtggtga acttaatgag cgcacatata caagtaagta gcagcgagaa 60
tcagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 40
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acagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 41
aactacatgg tatgtggtga actggacaac gtttaaatgt gccgaaaccg catagacgta 60
ttggacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 42
aactacatgg tatgtggtga actcggacaa agagctcaat cctggacagc acgtaggtat 60
gtagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 43
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accgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 44
aactacatgg tatgtggtga actcctcgac tgtcatcgca tccaagcgtg caccagaagc 60
tcagacgtac aatgtaccc 79
<210> 45
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 45
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<211> 79
<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 46
aactacatgg tatgtggtga actgtgttga actgatcatg gccctgatcg ctcaacggct 60
caagacgtac aatgtaccc 79
<210> 47
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 47
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 48
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 49
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 50
aactacatgg tatgtggtga actaaagagg cagacgcgta atcatagcag ccaaaataga 60
cacgacgtac aatgtaccc 79
<210> 51
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 51
aactacatgg tatgtggtga actgtaagtc ccacaaatgc attcaggcta gctcatgtag 60
cacgacgtac aatgtaccc 79
<210> 52
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 52
aactacatgg tatgtggtga actttcattg cctgcgtaaa ccacacggtc cgttataaac 60
ttagacgtac aatgtaccc 79
<210> 53
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 53
aactacatgg tatgtggtga acttgaccaa accagcctat gagtgataag cttctgtgca 60
gtagacgtac aatgtaccc 79
<210> 54
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 54
aactacatgg tatgtggtga actggctgag acgaaccact agggtgatca ccaaacccgc 60
tcagacgtac aatgtaccc 79
<210> 55
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 55
aactacatgg tatgtggtga acttgacaaa taaggataga atcaacatca caagcaggca 60
gttgacgtac aatgtaccc 79
<210> 56
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 56
aactacatgg tatgtggtga acttaaattt gccacaatat cttggcccca tagaagggcc 60
gtcgacgtac aatgtaccc 79
<210> 57
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 57
aactacatgg tatgtggtga actaataaca cataacacac gcgaaccaat ctcccggccc 60
aaagacgtac aatgtaccc 79
<210> 58
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 58
aactacatgg tatgtggtga acttgatgcc aatgacaacg ccacacgttc gacacacata 60
cacgacgtac aatgtaccc 79
<210> 59
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 59
aactacatgg tatgtggtga actaaaacgg gtttagatca tcacgaggac tcatgcggga 60
tttgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 60
aactacatgg tatgtggtga actgaaatcg ccacagagtc tttgcggaag agcgtgaaaa 60
gcagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 61
aactacatgg tatgtggtga actccccgat ctccatcgat cttcaagata ggaaaggaca 60
ccagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 62
aactacatgg tatgtggtga actgtctcga ggttcataag ctatggaaac aagcaccgca 60
tatgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actaccgtca aatggtgact ttcgagtttg ccacacctaa 60
gaggacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 64
aactacatgg tatgtggtga actgtcccgc aatccaaaat cgcgcacaag agcccacagc 60
caggacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 65
aactacatgg tatgtggtga actggccccg tctaggacga ccaacacctg ccgtcgactg 60
tgagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 66
aactacatgg tatgtggtga actcgtctga gccaccttaa ccagatttga taacccacag 60
cgagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<223> 合成的适配体序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actggaggac gtcgtaagat gttacaaagg cactcccgaa 60
ctagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 70
aactacatgg tatgtggtga actaactttg cggcacccac aagagttcgt aaaagcagac 60
accgacgtac aatgtaccc 79
<210> 71
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 71
aactacatgg tatgtggtga acttgtggcg gcgaacacac catgagcacc tcacatgacc 60
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 72
aactacatgg tatgtggtga actcaacgaa cagtagctat gataacagcc ttcgacgtgt 60
ccagacgtac aatgtaccc 79
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<220>
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<220>
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aactacatgg tatgtggtga actgtagcat tgccgagagc tcacctgttt tacacgcgag 60
ttagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 75
aactacatgg tatgtggtga actgatccgt aggtcacacc tttatgccat ccgggaccaa 60
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<212> DNA
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<223> 合成的适配体序列
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 80
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 81
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 85
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<213> 人工序列
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<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 89
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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agagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 98
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 99
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 101
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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cgagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 105
aactacatgg tatgtggtga actctgaatg atgaactgta tccgaacacc aaaccaaatc 60
cctgacgtac aatgtaccc 79
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<223> 合成的适配体序列
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<220>
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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ttagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 112
aactacatgg tatgtggtga actacgaagg gaactgctca ccaacaacac gcccgtagga 60
ctcgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 113
aactacatgg tatgtggtga actagatgaa gacaccgact taagccgacg taatcttcta 60
gaagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 114
aactacatgg tatgtggtga actacattat gataagccga gtccacgtgc ttcatacaat 60
ctagacgtac aatgtaccc 79
<210> 115
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 115
aactacatgg tatgtggtga acttgtaaaa gttgaggaca taccaacgct aaagaacgag 60
ctagacgtac aatgtaccc 79
<210> 116
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 116
aactacatgg tatgtggtga actatcccct cgactccagc gtttcagaat cgcttaccag 60
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<210> 117
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 117
aactacatgg tatgtggtga actatcggag cgacgacgcg ctaataagcc cactatggat 60
gtagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 118
aactacatgg tatgtggtga actggataac tggatcaccg actttgaaac gctccatgtg 60
gatgacgtac aatgtaccc 79
<210> 119
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 119
aactacatgg tatgtggtga actaccaaaa agcagagcct ggcacagcgc tacaaggcag 60
atagacgtac aatgtaccc 79
<210> 120
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 120
aactacatgg tatgtggtga acttgcacta tgacaacctc tagactgctg catttgaaac 60
cacgacgtac aatgtaccc 79
<210> 121
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 121
aactacatgg tatgtggtga actagttaga ccactcacag tccattaagg cagctaggag 60
ccagacgtac aatgtaccc 79
<210> 122
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 122
aactacatgg tatgtggtga acttgagcag agacgttcag cgaaggtctc cgccttcgaa 60
tccgacgtac aatgtaccc 79
<210> 123
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 123
aactacatgg tatgtggtga actcctctga gcataagtcg aggaaaaacc gccgaccaat 60
atagacgtac aatgtaccc 79
<210> 124
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 124
aactacatgg tatgtggtga acttccaaat ggacacaccc gcatagaccg agttgtacct 60
gaagacgtac aatgtaccc 79
<210> 125
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 125
aactacatgg tatgtggtga actatgagag aacacgggca tacttgcatc ccatatacgt 60
ttagacgtac aatgtaccc 79
<210> 126
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 126
aactacatgg tatgtggtga acttatcgcc gtaagattct gacaaaccca cggaatcacc 60
caagacgtac aatgtaccc 79
<210> 127
<211> 79
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<223> 合成的适配体序列
<400> 127
aactacatgg tatgtggtga actcgagaag cagcgccata cctactgacg gacacatacg 60
aaggacgtac aatgtaccc 79
<210> 128
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 128
aactacatgg tatgtggtga acttcagact taaggatacg ctgagccaac accacatcat 60
cgagacgtac aatgtaccc 79
<210> 129
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 129
aactacatgg tatgtggtga actcggattt cgcagaggaa ttgagctgca gatcccgagc 60
agagacgtac aatgtaccc 79
<210> 130
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 130
aactacatgg tatgtggtga actcaatgag ctcgaaacgc ggaaatccat gccatggaag 60
acggacgtac aatgtaccc 79
<210> 131
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 131
aactacatgg tatgtggtga actaattcca cggaaagagt taagcagccc gcgttacatg 60
agtgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 132
aactacatgg tatgtggtga actattacga cagaactgtt gcccagtctc cagcgcgctc 60
acggacgtac aatgtaccc 79
<210> 133
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 133
aactacatgg tatgtggtga actgaggcga aaaagcgcac aattaagacc acaagtcagt 60
gcagacgtac aatgtaccc 79
<210> 134
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 134
aactacatgg tatgtggtga actaaaatag tttggtctta tcccaaatac gcaaagtgtc 60
ttggacgtac aatgtaccc 79
<210> 135
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 135
aactacatgg tatgtggtga actttaagta gtcacgttag agtccacggc acccgcatac 60
aatgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 136
aactacatgg tatgtggtga acttgctagg ttaggaagaa agacattttt agtcaccaca 60
caggacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 137
aactacatgg tatgtggtga actcagctag ctccgccaga acagtaacca ccacatcagc 60
agagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga acttgacaca aatcatggga tggaatcata aaggttgttc 60
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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caagacgtac aatgtaccc 79
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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gcagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actaagagat atatttccca agtcccacag aaccccgata 60
gaggacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 143
aactacatgg tatgtggtga actgacgcga gtgcccaatg cataaaggga gcgccctaac 60
cgtgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga acttaagtca gcatcataca gtcatggatg tgccaagtca 60
gatgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 147
aactacatgg tatgtggtga actactagga cacgaagacg cacagcgatc ctaaagagcc 60
aacgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 148
aactacatgg tatgtggtga acttggcgga aaccaacctt gagcactgta ccatgttcga 60
gcagacgtac aatgtaccc 79
<210> 149
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actcaaggcg ataagaccat ataaatggaa tcacattaag 60
atcgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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aactacatgg tatgtggtga actggccctg tataaagatt cgactctgtc aaccacaaac 60
ctagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 151
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acagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 152
aactacatgg tatgtggtga actcggaaga gctactcaca ccgccaagga ccataagttc 60
tttgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 153
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gttgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 154
aactacatgg tatgtggtga actgtccgaa aagacgatca gacgaccata tgttaactga 60
gctgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 155
aactacatgg tatgtggtga actctgctca aataaaccca tcaactgaga aagccaaatg 60
ttcgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 156
aactacatgg tatgtggtga acttcgggtt gagaccacgt ccatgcattg cgcacggttc 60
agtgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 157
aactacatgg tatgtggtga actaaggcgg gagatccttg ttaacaggcc acccaaccga 60
gtagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 158
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gcagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 159
aactacatgg tatgtggtga actatccaag gaatcgaaaa cctgtctcca cgtgggcatc 60
tctgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 160
aactacatgg tatgtggtga actgtccatt cttgaccact aacaatccca ccaggcgagg 60
tgtgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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aacgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 164
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gtagacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 165
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accgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 166
aactacatgg tatgtggtga actcggcaca gaactaccct ccaacaagag agcgccttta 60
tcagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 167
aactacatgg tatgtggtga actcccactc gctcagtcgg gaagaccggt ggtaggagcc 60
ttagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 171
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ctagacgtac aatgtaccc 79
<210> 172
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 172
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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ttagacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 174
aactacatgg tatgtggtga actcggaagg aaccaagtta atctttgaac tggtccgaga 60
cttgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 175
aactacatgg tatgtggtga actgctcgta tacaaactat ccttgtccgc cacttgttgc 60
accgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 176
aactacatgg tatgtggtga actatcggtt gtttaccacg gaaactgcgc agtttcgaaa 60
ggcgacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 177
aactacatgg tatgtggtga actactcaac aattcagaca gcacgtgtta agtatattgc 60
atagacgtac aatgtaccc 79
<210> 178
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 178
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gaggacgtac aatgtaccc 79
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 181
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 182
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 183
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 184
aactacatgg tatgtggtga actgttactt ggtagagcca aggctttaca aagttcgaac 60
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 185
aactacatgg tatgtggtga actgtataac gaaatccagc cacgtactgc gatacgcgaa 60
aatgacgtac aatgtaccc 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 186
aactacatgg tatgtggtga actctctcag tgaagcctgg aatagaatac cacgcacgcg 60
gtcgacgtac aatgtaccc 79
<210> 187
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 187
aactacatgg tatgtggtga actcaacgag agtgggagca cctacagacg catgggcaaa 60
tgagacgtac aatgtaccc 79
<210> 188
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 188
aactacatgg tatgtggtga acttaaaggc ataggacatg ctcaggaggt caccgccaaa 60
ccagacgtac aatgtaccc 79
<210> 189
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 189
aactacatgg tatgtggtga actactcgaa gcgttccaat tttggagtct tctgacacca 60
gccgacgtac aatgtaccc 79
<210> 190
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 191
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 192
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<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 193
aactacatgg tatgtggtga actatcatca caccgtggaa ggattgagtc cgacggagat 60
cacgacgtac aatgtaccc 79
<210> 194
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 194
aactacatgg tatgtggtga actttccatc tataactgtc aaaagcacac ctcgactacc 60
cgagacgtac aatgtaccc 79
<210> 195
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 195
aactacatgg tatgtggtga actacatggc gagacgatga tgagtgcacc agatccatta 60
gatgacgtac aatgtaccc 79
<210> 196
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 196
aactacatgg tatgtggtga actagagtct aagaataggt taaacctggt caagctcagc 60
ccagacgtac aatgtaccc 79
<210> 197
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 197
aactacatgg tatgtggtga actagccaaa tccttccctg tcgccagagt gattggttcc 60
caagacgtac aatgtaccc 79
<210> 198
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 198
aactacatgg tatgtggtga actaagcacg gataatgcgt caaagtgagg acaagccaag 60
aatgacgtac aatgtaccc 79
<210> 199
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 199
aactacatgg tatgtggtga actgcaaagt atttccaagc accgtagtag ggaatcaatg 60
tgagacgtac aatgtaccc 79
<210> 200
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 200
aactacatgg tatgtggtga acttgccatt aatagcgcgg ctagaacaca tttcacacac 60
aacgacgtac aatgtaccc 79
<210> 201
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 201
ncgagcacnn 10
<210> 202
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(2)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 202
nnacaagtnn 10
<210> 203
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 203
aaaccacgac 10
<210> 204
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(2)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 204
nnattcacnn 10
<210> 205
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 205
nacaccgann 10
<210> 206
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 206
ngacaacagn 10
<210> 207
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> n为a、c、g或t
<400> 207
acaccganga caaca 15
<210> 208
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 208
ngcagaacan 10
<210> 209
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 209
naacatgann 10
<210> 210
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 210
tgaccaaaag aggaaagg 18
<210> 211
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 211
aagaggaaag g 11
<210> 212
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 212
gcagaacatg accaaaagag gaaagg 26
<210> 213
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n为a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> n为a、c、g或t
<400> 213
naaccacaan 10
<210> 214
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 214
aaagtgaact gaatatggat tacaagtttc agatcgaaa 39
<210> 215
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 215
aaactacatg gtatgtggtg aaccaaagga tcgagcactc ccattcagaa a 51
<210> 216
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 216
ctacatggta tgtggaaacc acgacccagg atgtgc 36
<210> 217
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 217
aaagtggtga actaggggaa ccttagtaaa ccacaaa 37
<210> 218
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 218
aaaggtgaac ttagtgggat ttattcacta tgtacaccga t 41
<210> 219
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 219
aattagtggg atttattcac tataa 25
<210> 220
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的适配体序列
<400> 220
actgcagaac atgaccaaaa gaggaaaggt atagctgcta 40

Claims (15)

1.一种适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物；其中所述适配体组合物对选自下列的材料具有结合亲和力：未受损毛发、受损毛发、毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。
2.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述适配体组合物对受损毛发具有结合亲和力。
3.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述适配体组合物对受损毛发的结合亲和力高于对未受损毛发的结合亲和力。
4.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸选自与选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO214至SEQ ID NO 220的序列具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。
5.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，所述适配体组合物包含选自SEQID NO 1至SEQ ID NO 200和SEQ ID NO 214至SEQ ID NO 220的至少一种寡核苷酸，优选地其中所述寡核苷酸为SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102和SEQ IDNO 214至SEQ ID NO 220中的至少一者。
6.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸包含选自SEQ ID NO 201至SEQ ID NO 213的一个或多个基序。
7.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸包含天然或非天然核碱基；优选地其中所述非天然核碱基选自：次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-氨基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-氨基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam以及它们的混合物。
8.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的核苷通过选自下列的化学基序连接：天然磷酸二酯、手性硫代磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚氨基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫甲醛、乙硫醚以及它们的混合物。
9.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述核糖核苷酸的衍生物或所述脱氧核糖核苷酸的衍生物选自：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸以及它们的混合物。
10.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，所述适配体组合物还包含至少一种聚合物材料，其中所述至少一种聚合物材料共价地连接到所述至少一种寡核苷酸，优选地其中所述至少一种聚合物材料为聚乙二醇。
11.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的5’-端和3’-端处的核苷酸为反向的。
12.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基的2'位置上被氟化，优选地其中所述至少一种寡核苷酸的嘧啶核苷酸在所述戊糖基的所述2'位置上被氟化。
13.根据前述权利要求中任一项所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸共价地或非共价地附接到一种或多种毛发护理活性成分；其中所述一种或多种毛发护理活性成分选自：调理剂、增白剂、强化剂、抗真菌剂、抗菌剂、抗微生物剂、去头皮屑剂、抗恶臭剂、香料、嗅觉增强剂、抗痒剂、凉爽剂、抗粘附剂、保湿剂、光滑剂、表面改性剂、抗氧化剂、天然提取物和精油、染料、颜料、漂白剂、营养物质、肽、维生素、酶、螯合剂以及它们的混合物，优选地其中所述毛发护理活性成分选自调理剂，优选地其中所述毛发护理活性成分为硅氧烷。
14.一种根据前述权利要求中任一项所述的毛发护理组合物，所述毛发护理组合物包含至少一种核酸适配体；其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力，优选地其中所述毛发组分选自：毛发角质层、毛发上角质层、毛发外角质层、毛发内角质层、毛发皮层、毛发角蛋白、毛发F层、毛发脂质、18-甲基二十烷酸以及它们的混合物。
15.一种根据前述权利要求中任一项所述的用于将一种或多种毛发护理活性成分递送至毛发的方法，所述方法包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种毛发护理活性成分的毛发护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种毛发护理活性成分是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体对毛发组分具有结合亲和力。
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