CN112368560A - 细胞检查装置及细胞检查方法 - Google Patents
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Abstract
细胞检查方法是使用光源和观察部来检查细胞悬浮液所包含的细胞的细胞检查方法，具备：准备工序，在载玻片上形成腔室；浓缩液制作工序，向所述腔室内注入细胞悬浮液来制作细胞浓缩液；染色工序，向所述细胞浓缩液注入染色液，对细胞进行染色；细胞沉降工序，使所述细胞沉降在所述载玻片上；以及观察工序，利用所述光源进行照明并通过所述观察部对所述细胞进行观察。
Description
技术领域
本发明涉及细胞检查装置及细胞检查方法。
背景技术
作为一边通过超声波内窥镜进行观察一边迅速地诊断由穿刺针等采集的细胞的方法，已知有迅速病理诊断(Rapid on-site evaluation，以下称为ROSE)。在通常的ROSE中，利用细胞保存液对由穿刺针采集的细胞进行稀释来制作细胞悬浮液。在通过过滤器过滤细胞悬浮液而将细胞形成为标本之后，利用显微镜来观察细胞。通过ROSE，能够在采集了细胞的场所判断是否采集到需要的细胞。
在未使用ROSE的情况下，将由穿刺针等采集的细胞搬运到与采集细胞的场所不同的检查场所而进行病理诊断等检查。其结果是，在未采集到需要的细胞的情况下，需要再次采集细胞。在使用了ROSE的检查中，能够在采集到细胞的现场判断是否采集到需要的细胞，因此，能够容易地追加细胞的采集。因此，ROSE能够降低重新检查率，因此，期望各设施中的ROSE的实施。
在细胞标本的制作中，已知有使细胞沉降在载玻片上的方法(例如参照专利文献1)。在专利文献1中，具备在内侧具有空间的中空管、载置中空管的显微镜载玻片、以及形成有供显微镜载玻片嵌入的凹部的基板。
向基板的凹部嵌入显微镜载玻片，在显微镜载玻片上载置中空管。向中空管的空间放入规定的样本细胞悬浊液，等待细胞通过重力而沉降。细胞沉降到显微镜载玻片之后，通过抽吸而取出上清液，在将细胞染色之后，观察显微镜载玻片上的细胞。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开平6-213789号公报
发明内容
发明要解决的问题
在专利文献1所公开的方法中，需要等待细胞在显微镜载玻片上自然地沉降，因此，在所需要的量的细胞沉降是需要长时间。
此外，通常在对沉降到载玻片上的细胞进行染色时，将载玻片浸入染色液，因此，存在载玻片上的细胞脱落到染色液内这样的问题。
本发明是鉴于上述问题点而完成的，其目的在于，提供一种能够可靠地确保细胞且能够顺畅且迅速地检查细胞的细胞检查装置及细胞检查方法。
用于解决问题的手段
本发明的第1方案的细胞检查方法是使用光源和观察部来检查细胞悬浮液所包含的细胞的细胞检查方法，其中，所述细胞检查方法具备：准备工序，在载玻片上形成腔室；浓缩液制作工序，向所述腔室内注入所述细胞悬浮液来制作细胞浓缩液；染色工序，向所述细胞浓缩液注入染色液，对所述细胞进行染色；细胞沉降工序，使所述细胞沉降在所述载玻片上；以及观察工序，利用所述光源进行照明并通过所述观察部对所述细胞进行观察。
本发明的第2方案的细胞检查方法在上述第1方案的基础上也可以是，在所述准备工序中，通过将形成有贯通孔的外筒配置在所述载玻片上而形成所述腔室，在所述浓缩液制作工序中，使在底面设置有过滤器且具有内部空间的内筒从所述底面侧进入所述外筒的所述贯通孔，并使所述内筒接近所述载玻片，由此来制作所述细胞浓缩液。
本发明的第3方案的细胞检查方法在上述第1方案或上述第2方案的基础上也可以是，还具备抽吸工序，在该抽吸工序中，抽吸所述内筒的所述内部空间内的染色液。
本发明的第4方案的细胞检查方法在上述第2方案或上述第3方案的基础上也可以是，在所述观察工序中，与所述载玻片隔开间隔地配置所述内筒的所述过滤器。
本发明的第5方案的细胞检查方法在上述第2方案或上述第3方案的基础上也可以是，在所述观察工序中，使所述内筒的所述过滤器与所述载玻片接触。
本发明的第6方案的细胞检查方法在上述第1方案至上述第5方案中的任意一个方案的基础上也可以是，在所述浓缩液制作工序中，从所述腔室的侧壁注入所述细胞悬浮液，在所述染色工序中，从所述腔室的所述侧壁注入所述染色液。
本发明的第7方案的细胞检查装置具备：外筒，其形成有贯通孔，且配置在载玻片上；内筒，其在底面设置有过滤器，具有内部空间，能够贯穿插入所述外筒的所述贯通孔内；以及观察部，其设置在相对于所述载玻片而与所述外筒相反的一侧，通过所述载玻片和所述外筒的所述贯通孔，形成用于注入细胞悬浮液的腔室。
本发明的第8方案的细胞检查装置在上述第7方案的基础上也可以是，在所述外筒的侧壁设置有连通孔，该连通孔将所述外筒的所述贯通孔与外部连通。
本发明的第9方案的细胞检查装置在上述第7方案或上述第8方案的基础上也可以是，还具备载置所述载玻片的基板，在所述基板上形成有能够供所述观察部贯穿插入的贯通孔。
本发明的第10方案的细胞检查装置在上述第7方案至上述第9方案中的任意一个方案的基础上也可以是，还具备光源，该光源能够贯穿插入所述内筒的所述内部空间。
本发明的第11方案的细胞检查装置在上述第7方案至上述第10方案中的任意一个方案的基础上也可以是，所述过滤器由具有比所述细胞悬浮液的折射率高的折射率的材料构成。
发明的效果
根据上述各方案的细胞检查装置及细胞检查方法，能够可靠地确保细胞，并且，能够顺畅且迅速地检查细胞。
附图说明
图1是示出本发明的一实施方式的细胞检查装置的整体图。
图2是示出图1的外筒的立体图。
图3是示出图1的内筒的立体图。
图4是示出图1的基板的俯视图。
图5是示出在图1的基板上安装了外筒的状态的主要部分剖视图。
图6是示出本发明的细胞检查方法的流程图。
图7是示出在本发明的细胞检查方法中使用的细胞悬浮液的制作步骤的图。
图8是示出在本发明的细胞检查方法中使用的细胞悬浮液的制作步骤的图。
图9是示出在本发明的细胞检查方法中使用的细胞悬浮液的制作步骤的图。
图10是示出在本发明的细胞检查方法中使用的细胞悬浮液的制作步骤的图。
图11是示出本发明的细胞检查方法的图。
图12是示出本发明的细胞检查方法的图。
图13是示出本发明的细胞检查方法的图。
图14是示出本发明的细胞检查方法的图。
图15是示出本发明的细胞检查方法的图。
图16是示出本发明的细胞检查方法的图。
图17是示出本发明的一实施方式的细胞检查装置的变形例的整体图。
图18是示出本发明的一实施方式的细胞检查装置的变形例的整体图。
具体实施方式
[一实施方式]
参照图1至图16对本发明的一实施方式的细胞检查装置进行说明。
细胞检查装置1是观察细胞悬浮液所包含的细胞的装置。另外，细胞也可以包括细菌。如图1所示，细胞检查装置1具备配置在基板30上的外筒10及内筒20、以及观察部50。
如图2所示，外筒10在外筒10的长度方向上具备上部11、底部12、以及将上部11与底部12连接的圆筒状的筒部13。在外筒10中，沿着外筒10的长度方向形成有贯通孔14。在筒部13的外壁(侧壁)13a上形成有将外筒10的贯通孔14与外部连通的连通孔16。
上部11在与外筒10的长度方向垂直的方向上扩径。在上部11形成有朝向上部11的上表面11a开口的凹部11b。从凹部11b注入细胞悬浮液。贯通孔14的第1端14a在凹部11b的底面11c开口，贯通孔14的第2端14b在底部12的底面12a开口。由此，贯通孔14从上部11的凹部11b贯穿至底部12的底面12a。
底部12在与外筒10的长度方向垂直的方向上扩径。在底部12的底面12a设置有圆环状的槽12b。在槽12b中配置有由橡胶等弹性构件形成的O型环15。能够供后述的螺钉33贯穿插入的螺纹孔12c在底部12的厚度方向上贯穿形成于在底部12。螺纹孔12c隔着外筒10的长度轴而对称地设置有一对。
如图3所示，内筒20具备上部21和圆筒状的筒部22。
上部21在与外筒10的长度方向垂直的方向上扩径。在上部21形成有朝向上部21的上表面21a开口的凹部21b。如图1所示，凹部21b朝向筒部22缩径。
如图3所示，在筒部22中，沿着筒部22的长度方向而形成有内部空间23。内部空间23的第1端23a在凹部21b开口，内部空间23的第2端23b在内筒20的底面20a开口。由此，内部空间23从上部21贯穿到筒部22的底面20a。
在筒部22的底面20a粘接有过滤器24。过滤器24覆盖筒部22的底面20a。过滤器24具有比细胞小的孔径。过滤器24的滤材没有特别限定，但例如由织布或无纺布构成。过滤器24由具有透光性的材料构成。过滤器24由具有比细胞悬浮液的折射率高的折射率的材料构成。
在筒部22的外侧面20b设置有圆环状的槽20c。在槽20c中配设有由橡胶等弹性构件形成的O型环25。O型环25比筒部22靠径向外侧突出。
与筒部22的长度轴方向垂直的方向上的筒部22的前端部26(与配置有上部21的一侧相反的一侧)的外径尺寸L1小于与筒部22的长度轴方向垂直的方向上的筒部22的外径尺寸L2。由此，在筒部22的前端部26形成有台阶部27。
如图1所示，外筒10安装于与通常使用的显微镜的载台(省略图示)嵌合的基板30。如图4所示，基板30具备凹陷31和观察孔(贯通孔)32。
在基板30上形成有贯穿至厚度方向(从上表面30a到下表面30b)的螺纹孔30c。凹陷31呈大致长方形状，用于载置载玻片40。观察孔32形成在凹陷31中，如图1所示，从凹陷31贯穿至下表面30b。观察部50能够进入观察孔32。
如图5所示，以外筒10的底部12的底面12a与载玻片40接触的方式将外筒10配置在载玻片40上。由此，由外筒10的贯通孔14和载玻片40形成腔室P。向腔室P注入细胞悬浮液。外筒10与基板30通过使螺钉33贯穿插入螺纹孔12c及螺纹孔30c而被固定。在外筒10固定于基板30的状态下，通过O型环15，能够在外筒10的贯通孔14与载玻片40之间确保液密。即，注入到腔室P的细胞悬浮液不会从外筒10的底部12的底面12a泄漏到腔室P的外部。
灌注器60经由管61而与外筒10的连通孔16连接。管61相对于外筒10能够装卸。从灌注器60通过管61向腔室P注入染色液。除了染色液之外，也可以从灌注器60向腔室P注入将细胞固定在载玻片40上的固定液。
如图1所示，内筒20的筒部22贯穿插入外筒10的贯通孔14。具体而言，图2所示的与外筒10的长度轴方向垂直的方向上的贯通孔14的内径尺寸L3比图3所示的筒部22的外径尺寸L2大。内径尺寸L3与外径尺寸L2之差很小。如图1所示，在将内筒20的筒部22贯穿插入外筒10的贯通孔14时，O型环25被按压，O型环25成为在贯通孔14内被施力的状态。即，由内筒20与外筒10的贯通孔14包围的空间P1被O型环25确保了液密。
此外，内筒20的筒部22能够进入外筒10的贯通孔14内，直至扩径的内筒20的上部21与外筒10的上部11的凹部11b抵接。在该抵接状态下，过滤器24与载玻片40隔开间隔而配置。过滤器24至载玻片40的距离D为内筒20不堵塞连通孔16的程度即可，例如，为3mm以上且小于5mm。此外，在该抵接状态下，连通孔16位于台阶部27，因此，通过连通孔16的液体被注入到空间P1。
如图1所示，细胞检查装置1具备观察部50。在使基板30嵌合于显微镜的载台(省略图示)时，观察部50能够贯穿插入观察孔32。观察部50能够在接近载玻片40的方向或者远离载玻片40的方向上移动。观察部50通过接近载玻片40或远离载玻片40，能够使焦点对准细胞。
细胞检查装置1还具备监视器(省略图示)。监视器与观察部50连接。由观察部50取得的细胞的图像显示在监视器中。
接着，使用图6的流程图对本实施方式的细胞检查方法进行说明。
首先，如图5所示，通过螺钉33将外筒10固定于基板30，形成腔室P(准备工序：步骤S1)。使固定有外筒10的基板30嵌合于显微镜的载台(省略图示)。
接着，一边通过超声波内窥镜对患者的体内进行观察，一边将穿刺针等刺入组织，采集细胞。如图7所示，将采集到的细胞T向培养皿90排出，向培养皿90内注入细胞保存液，使细胞T松动。在使细胞T松动后，如图8所示，将在底部设置有过滤器91的容器92向培养皿90内插入。如图9所示，当向培养皿90内压入容器92时，如图10所示，分离为容器92内的细胞悬浮液C与培养皿90内的细胞Ta。由此，制作出细胞悬浮液C。
将制作出的细胞悬浮液C抽吸到滴管或灌注器等中，从外筒10的凹部11b注入。如图11所示，包括细胞T的细胞悬浮液C积存在腔室P内。
接着，如图12所示，使内筒20从底面20a进入外筒10的贯通孔14。当压入内筒20的筒部22时，由于在内筒20的底面20a设置有过滤器24，因此，细胞T以外的液体C1通过过滤器24向筒部22的内部空间23流入，包括细胞T的细胞浓缩液C2残留在空间P1内。这样，制作出细胞浓缩液C2(浓缩液制作工序：步骤S2)。虽然也可以仅将内筒20的筒部22一次性压入外筒10的贯通孔14，但也可以使内筒20在外筒10的长度轴方向上进退数次。通过使内筒20相对于外筒10进退，从而更快地制作细胞浓缩液C。
接着，从灌注器60通过管61及连通孔16向空间P1内的细胞浓缩液C2注入染色液S。如图13所示，染色液S滞留在空间P1内，细胞T被染色(染色工序：步骤S3)。在内筒的筒部22未形成台阶部27的情况下或者在连通孔16被堵塞的情况下，暂时提起内筒20之后再注入染色液。也可以使内筒20在外筒10的长度轴方向上进退数次。通过使内筒20相对于外筒10进退，能够使细胞T更快地染色。当向空间P1注入染色液时，内部空间23内的液体C1与染色液S混合而着色的液体C3积存在内部空间23内。
接着，如图14所示，将液体C3向内部空间23外排出。液体C3的排出方法没有特别限定，但例如通过抽吸器70排出。抽吸器70具有能够贯穿插入内部空间23的管71。即，管71的外径尺寸比内部空间23的内径尺寸小。通过将管71贯穿插入内部空间23并抽吸内部空间23的液体C3而将液体C3排出(抽吸工序：步骤S4)。
如图15所示，染色后的细胞T不久后沉降到载玻片40上(细胞沉降工序：步骤S5)。
接着，如图16所示，使用具有光纤81的光源80向细胞T照射光。光纤81能够贯穿插入内部空间23。即，光纤81的外径尺寸比内部空间23的内径尺寸小。将光纤81贯穿插入内部空间23，一边利用光源80对光进行照明，一边通过观察部50，利用监视器(省略图示)来观察载玻片40上的细胞T(观察工序：步骤S6)。根据需要，使观察部50进入观察孔32内并接近载玻片40。如果采集到所需的细胞，则将图10所示的细胞Ta搬运到病理检查。另一方面，在未采集到所需的细胞的情况下，使用内窥镜再次采集细胞。
根据本实施方式的细胞检查装置1，通过使内筒20的筒部22贯穿插入外筒10的贯通孔14，来制作细胞浓缩液C2。由此，能够在载玻片40上确保更多的细胞T。
此外，由于注入染色液S的连通孔16设置于筒部22的外壁13a，因此，不会妨碍到观察部50的观察。
细胞检查装置1具备载置载玻片40的基板30，因此，能够固定外筒10和载玻片40。由此，能够更加稳定地观察细胞T。
细胞检查装置1具备能够贯穿插入内筒20的内部空间23的光纤81(光源)，因此，能够清楚地观察细胞T。
过滤器24由具有比细胞悬浮液C的折射率高的折射率的材料构成，因此，能够将从光源80照射的光扩散。由此，能够有效地利用从光源80照射的光。
根据本实施方式的细胞检查方法，在显微镜的载台上、即相同的场所进行准备工序(步骤S1)、浓缩液制作工序(步骤S2)、染色工序(步骤S3)、细胞沉降工序(步骤S5)、观察工序(步骤S6)，因此，能够顺畅且迅速地检查细胞T。
由于将内筒20的过滤器24与载玻片40隔开间隔而配置，因此，在通过观察部50观察细胞T时，能够防止过滤器24映入。
由于在外筒10的外壁13a形成有注入染色液S的连通孔16，因此，积存染色液S的灌注器60不会妨碍到观察部50的观察。
基板30仅是嵌合于通常使用的显微镜的载台，且灌注器60的管61相对于外筒10能够装卸，因此，能够构成为每次使用时更换基板30、外筒10以及内筒20的一次性类型。另外，通过取下螺钉33，也能够重新利用基板30。
这里，对使用了在底面20a未设置过滤器24的内筒时的载玻片40上所确保的细胞的量(面积)与使用了本实施方式的具有过滤器24的内筒20时的载玻片40上所确保的细胞的量(面积)进行了比较。将向腔室P注入细胞悬浮液C时设为开始时刻，比较了在使用了没有过滤器的内筒的情况下直接经过了3分钟时的载玻片40上的细胞的面积、以及在使用了具有过滤器24的内筒20的情况下包含向外筒10的贯通孔14压入内筒20的筒部22的时间在内而经过了3分钟时的载玻片40上的细胞的面积。其结果是，使用了具有过滤器24的内筒20的情况下的面积为使用了没有过滤器的内筒的情况下的面积的约4.7倍。即，根据本实施方式的细胞检查装置1及细胞检查方法，可知与以往相比，能够在短时间内使所需的细胞沉降在载玻片40上。
此外，比较了在步骤S2的浓缩液制作工序后从基板30取下而将载玻片40浸入染色液的情况下的细胞的量(面积)、以及通过本实施方式的细胞检查装置1而染色后的细胞的量(面积)。其结果是，使用了具有过滤器24的内筒20的情况下的面积为使用了没有过滤器的内筒的情况下的面积的约3.5倍。即，根据本实施方式的细胞检查装置1及细胞检查方法，可知能够防止细胞脱落到染色液内。
另外，虽然将内筒20的过滤器24与载玻片40隔开间隔而配置，但如图17的变形例所示，也可以在内筒20的长度轴方向上，使筒部22比本实施方式的筒部22长，使内筒20的过滤器24与载玻片40接触。由此，能够将细胞T固定到载玻片40上。
此外，虽然将连通孔16形成于筒部13，但也可以在外筒10的底部12形成将贯通孔14与外部连通的连通孔。此外，也可以在外筒10不设置连通孔16，而如图18所示，使设置于灌注器65的软管66贯穿插入内筒20的内部空间23，从内部空间23通过过滤器24向空间P1注入染色液S。
此外，虽然过滤器24由比细胞悬浮液的折射率高的材料构成，但也可以不必由比细胞悬浮液的折射率高的材料构成。
虽然外筒10构成为具备上部11、底部12以及筒部13，但至少为具备具有贯通孔14的筒部13的结构即可。
虽然利用螺钉33将外筒10固定于基板30，但外筒10与基板30的固定不限于此。此外，也可以仅将外筒10载置到基板30上。
此外，虽然细胞检查方法不是必须具备将液体C3向内部空间23外排出的抽吸工序(步骤S4)，但由于液体C3被着色，因此，当内部空间23不存在液体C3时，能够有效地利用来自光纤81的光。例如，也可以从外筒10取出内筒20，将内筒20上下颠倒，将内部空间23内的液体C3排出。
此外，虽然利用监视器(省略图示)观察了由观察部50取得的细胞T的图像，但也可以通过目视来观察细胞T。
以上，说明了本发明的优选实施方式，但本发明不限于这些实施方式。在不脱离本发明的主旨的范围内能够进行结构的附加、省略、置换、以及其他的变更。本发明不通过上述说明来限定，而是仅通过附加的权利要求书来限定。
产业利用性
根据上述各实施方式的细胞检查装置及细胞检查方法，在过滤器上积存了细胞的状态下进行染色、显微镜观察，因此，能够可靠地确保细胞，并且，能够顺畅且迅速地检查细胞。另外，本发明通过减小过滤器的孔径，也能够应用于细菌的检查。
标号说明
C细胞浓缩液；S染色液；P腔室；1细胞检查装置；10外筒；14贯通孔；16连通孔；20内筒；20a底面；20b外侧面；23内部空间；24过滤器；30基板；32观察孔(贯通孔)；40载玻片；50观察部；60灌注器；80光源；81光纤。
Claims (11)
1.一种细胞检查方法，使用光源和观察部来检查细胞悬浮液所包含的细胞，其中，所述细胞检查方法具备：
准备工序，在载玻片上形成腔室；
浓缩液制作工序，向所述腔室内注入所述细胞悬浮液来制作细胞浓缩液；
染色工序，向所述细胞浓缩液注入染色液，对所述细胞进行染色；
细胞沉降工序，使所述细胞沉降在所述载玻片上；以及
观察工序，利用所述光源进行照明并通过所述观察部对所述细胞进行观察。
2.根据权利要求1所述的细胞检查方法，其中，
在所述准备工序中，通过将形成有贯通孔的外筒配置在所述载玻片上而形成所述腔室，
在所述浓缩液制作工序中，使在底面设置有过滤器且具有内部空间的内筒从所述底面侧进入所述外筒的所述贯通孔，并使所述内筒接近所述载玻片，由此来制作所述细胞浓缩液。
3.根据权利要求2所述的细胞检查方法，其中，
所述细胞检查方法还具备抽吸工序，在该抽吸工序中，抽吸所述内筒的所述内部空间内的染色液。
4.根据权利要求2或3所述的细胞检查方法，其中，
在所述观察工序中，与所述载玻片隔开间隔地配置所述内筒的所述过滤器。
5.根据权利要求2或3所述的细胞检查方法，其中，
在所述观察工序中，使所述内筒的所述过滤器与所述载玻片接触。
6.根据权利要求1至5中的任意一项所述的细胞检查方法，其中，
在所述浓缩液制作工序中，从所述腔室的侧壁注入所述细胞悬浮液，
在所述染色工序中，从所述腔室的所述侧壁注入所述染色液。
7.一种细胞检查装置，其中，
所述细胞检查装置具备：
外筒，其形成有贯通孔，且配置在载玻片上；
内筒，其在底面设置有过滤器，具有内部空间，能够贯穿插入所述外筒的所述贯通孔内；以及
观察部，其设置在相对于所述载玻片而与所述外筒相反的一侧，
通过所述载玻片和所述外筒的所述贯通孔，形成用于注入细胞悬浮液的腔室。
8.根据权利要求7所述的细胞检查装置，其中，
在所述外筒的侧壁设置有连通孔，该连通孔将所述外筒的所述贯通孔与外部连通。
9.根据权利要求7或8所述的细胞检查装置，其中，
所述细胞检查装置还具备载置所述载玻片的基板，
在所述基板上形成有能够供所述观察部贯穿插入的贯通孔。
10.根据权利要求7至9中的任意一项所述的细胞检查装置，其中，
所述细胞检查装置还具备光源，该光源能够贯穿插入所述内筒的所述内部空间。
11.根据权利要求7至10中的任意一项所述的细胞检查装置，其中，
所述过滤器由具有比所述细胞悬浮液的折射率高的折射率的材料构成。
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