CN112368263A - 二肽基酮酰胺间甲氧基苯基衍生物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及二肽基酮酰胺间甲氧基苯基衍生物及它们在治疗与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病和状况中的用途，所述疾病和状况例如由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。

Description

二肽基酮酰胺间甲氧基苯基衍生物及其用途
发明领域
本发明涉及二肽基酮酰胺间甲氧基苯基衍生物(dipeptidyl ketoamide m-methoxyphenyl derivative)及它们在治疗与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病和状况中的用途，所述疾病和状况例如由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
发明背景
钙蛋白酶是属于钙依赖性非溶酶体半胱氨酸蛋白酶(蛋白水解酶)的家族的细胞内蛋白质，该细胞内蛋白质在哺乳动物和许多其他有机体中非常普遍地(ubiquitously)表达。已经描述了两种主要形式，钙蛋白酶1和钙蛋白酶2，它们还被称为μ-钙蛋白酶和m-钙蛋白酶，但是还假定(postulate)另外的钙蛋白酶同工酶(M.E.Saez et al.；Drug DiscoveryToday 2006,11(19/20),pp.917-923)。
钙蛋白酶在多种生理学过程中起着重要作用，所述生理学过程包括不同调节蛋白质的裂解(K.K.Wang et al.,Trends in Pharmacol.Sci.1994,15,pp.412-419)。
升高的钙蛋白酶水平已经在多种病理生理学过程中得到测量，例如：心脏、肾脏、肺、肝脏或中枢神经系统的局部缺血，炎症，肌肉营养不良，眼睛的白内障，糖尿病，HIV紊乱，中枢神经系统的损伤(例如脑创伤(brain trauma))，阿尔茨海默病，亨廷顿氏病，帕金森氏病，多发性硬化等(参见上文的K.K.Wang)和传染病例如疟疾(IM Medana et al.,Neuropath and Appl.Neurobiol.2007,33,pp.179-192)。设想在这些疾病与普遍地或持续地升高的细胞内钙水平之间存在关联。这导致钙依赖性过程变得过度激活(hyperactivate)并且不再经历正常生理学控制。钙蛋白酶的相应的过度激活还可以触发病理生理学过程。为此，假定钙蛋白酶的抑制剂对于治疗这些疾病可能是有用的。
Yoshida,Ken Ischi等人(Jap.Circ.J.1995,59(1),pp.40-48)教导，钙蛋白酶抑制剂在由局部缺血或再灌注产生的心脏损伤后具有有利的作用。最近，已经公开的是，钙蛋白酶在心肌缺血-再灌注(myocardial ischemia-reperfusion)期间激活，并且促进再灌注损伤，以及钙蛋白酶参与梗塞后重塑(post-infarction remodeling)和心力衰竭。在急性心肌梗塞之后，整个心脏经历一系列的结构变化，这被称为梗塞后心肌重塑，导致心力衰竭的发生。心室重塑包括扩张(dilatation)、肥大(hypertrophy)和离散的胶原疤痕(discrete collagen scar)的形成。钙蛋白酶活性的失调在再灌注损伤和心肌重塑中起重要作用，这提示钙蛋白酶的抑制是潜在的治疗策略(Ye et al.,PLoS ONE,2015,10(3),e0120178；Kudo-Sakamoto et al.,Journal Biological Chemistry,2014,289(28),pp.19408-19419)。Neuhof等人已经报告了(World J Cardiol,2014,6(7),638-652)作为对于具有心肌梗塞、血管重建和冠状动脉外科手术(coronary surgery)的患者的新的预防和治疗可能性的钙蛋白酶抑制剂。Poncelas等人报告的研究(Cardiovascular Research,2017,113(8),pp.950-961)证实了钙蛋白酶的这种作用，并且示出钙蛋白酶的持续药理学抑制剂是对抗不利的梗塞后重塑的有希望的治疗策略。
钙蛋白酶抑制剂还已经示出在急性神经退行性受损或局部缺血中提供神经保护作用，例如在脑中风之后发生的急性神经退行性受损或局部缺血(Seung-Chyul Hong etal.,Stroke 1994,25(3),pp.663-669,和R.T.Bartus et al.,Neurological Res.1995,17,pp.249-258)。
还已经示出，在实验性脑创伤后，钙蛋白酶抑制剂改善记忆功能缺损(memoryperformance deficit)和神经运动受损(neuromotor impairment)的恢复(K.E.Saatmanet al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1996,93,pp.3428-3433)，并且钙蛋白酶抑制剂对缺氧损伤的肾脏(hypoxia-damaged kidney)具有保护作用(C.L.Edelstein et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1995,92,pp.7662-6)。
更近期的研究已经示出，钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)(钙蛋白酶的天然抑制剂)显著地减弱激活的钙蛋白酶在许多疾病中的病理生理学作用，所述疾病例如a)实验性肾小球肾炎(J.Peltier et al.,J A,Soc Nephrol.2006,17,pp.3415-3423)，b)在血管紧张素II诱导的高血压中的心血管重塑，c)在慢通道先天性肌无力综合征中的受损的突触传递(Groshong JS et al.,J Clin Invest.2007,117(10),pp 2903-2912)，d)经由线粒体途径的兴奋毒性DNA断裂(excitotoxic DNA fragmentation)(J Takano et al.,J BiolChem.2005,280(16)pp.16175-16184)，以及e)营养不良肌肉(dystrophic muscle)的坏死过程(M J Spencer et al.,Hum Mol Gen,2002,11(21),pp 2645-2655)。
还已知的是，钙蛋白酶与阿尔茨海默病(AD)有关(Nixon R.A.,“The calpains inaging and aging-related diseases”,Ageing Res Rev.2003Oct；2(4):407-18)。钙蛋白酶1在AD脑中被异常地激活(Saito K,et al.“Widespread activation of calcium-activated neutral proteinase(calpain)in the brain in Alzheimer disease:apotential molecular basis for neuronal degeneration”,Proc Natl Acad SciUSA.1993Apr 1；90(7):2628-32)。钙蛋白酶抑制蛋白，钙蛋白酶的内源性抑制剂，在相同的神经退行性紊乱中显著减少(Nixon R.A.,“The calpains in aging and aging-relateddiseases”,Ageing Res Rev.2003Oct；2(4):407-18)。由异常高的钙水平和钙蛋白酶抑制蛋白损耗(calpastatin depletion)触发的钙蛋白酶过度激活(overactivation)导致在AD中关键神经元蛋白质的有限的裂解或降解(Wang KK,“Calpain and caspase:can youtell the difference？”,Trends Neurosci.2000Jan；23(1):20-6)。钙蛋白酶间接地调节淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白水解过程，所述淀粉样前体蛋白是被认为在AD中起着重要作用的多肽(Siman R.et al.“Proteolytic processing of beta-amyloid precursor bycalpain I”,J Neurosci.1990Jul；10(7):2400-11)。
在AD中受影响的其他钙蛋白酶底物(calpain substrate)包括：CaM-激酶IIα(CaMK-IIα)和PKC，这两种酶调节APP磷酸化并且影响其代谢(Wang KK et al,“Development and therapeutic potential of calpain inhibitors”Adv.Pharmacol.1996；37:117-52)；第二信使相关的酶，例如磷脂酶C-1、C-2、C-β3(BannoY.et al,“Endogenous cleavage of phospholipase C-beta 3 by agonist-inducedactivation of calpain in human platelets”,J Biol Chem.1995Mar 3；270(9):4318-24)，和细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdk-5)(Lee MS.et al,“Neurotoxicity inducescleavage of p35 to p25 by calpain”,Nature.2000May 18；405(6784):360-4)；转录因子，例如c-Jun、c-Fos和IκB(Carillo S,“Differential sensitivity of FOS and JUNfamily members to calpains”,Oncogene.1994Jun；9(6):1679-89and Lin YC,”Activation of NF-kappa B requires proteolysis of the inhibitor I kappa B-alpha:signal-induced phosphorylation of I kappa B-alpha alone does notrelease active NF-kappa B”,Proc Natl Acad Sci U S A.1995Jan 17；92(2):552-6)；以及记忆相关的基因(memory-related gene)，cAMP调节元件结合蛋白(CREB)(Mbebi C,“Amyloid precursor protein family-induced neuronal death is mediated byimpairment of the neuroprotective calcium/calmodulin protein kinase IV-dependent signalling pathway”,J Biol Chem.2002Jun 7；277(23):20979-90)。最近，钙蛋白酶对AMPA受体(24)、双载蛋白I(amphiphysin I)(25)和视交叉上核昼夜节律振荡蛋白(suprachiasmatic nucleus circadian oscillatory protein)(26)的GluR1亚单元的作用已经被示出调节突触活动(synaptic activity)和记忆形成。
越来越多的证据表明，AD的认知受损在神经元死亡很久之前开始，并且神经元之间的信号传送在疾病的早期被中断。突触改变在AD中的重要性已经通过对以下的研究被证实：AD的转基因小鼠模型(Sant'Angelo A,“Usefulness of behavioral andelectrophysiological studies in transgenic models of Alzheimer's disease”,Neurochem Res.2003Jul；28(7):1009-15)，以及淀粉样β多肽诱导的(Aβ诱导的)长时程增强(LTP)的受损，一种广泛研究的学习和记忆的细胞模型(Bliss TV.et al,“A synapticmodel of memory:long-term potentiation in the hippocampus”；Collingridge GLNature.1993Jan7；361(6407):31-9)。
此外，钙蛋白酶影响与AD相关的另一种蛋白tau的磷酸化和蛋白水解(Wang KK,“Calpain and caspase:can you tell the difference？”,Trends Neurosci.2000Jan；23(1):20-6)。磷酸化的tau的积聚另外导致所谓的神经原纤维缠结(neurofibrillarytangle)(NFT)的形成，神经原纤维缠结与众所周知的淀粉样斑块一起，代表阿尔茨海默病的病理学特征。tau蛋白的类似变化，通常被称为tau蛋白病变(tauopathy)的重要特征，还在其他(神经)退行性紊乱中被观察到，诸如例如中风后、脑的炎症、帕金森病、正常压力脑积水和克-雅病(Creutzfeldt-Jakob disease)。
钙蛋白酶在神经退行性过程中的参与已经在转基因小鼠中借助于钙蛋白酶抑制蛋白被证实，钙蛋白酶抑制蛋白是钙蛋白酶的特异性且天然的抑制剂(Higuchi et al.；J.Biol.Chem.2005,280(15),pp.15229-15237)。在钙蛋白酶抑制剂的帮助下，显著地减少在多发性硬化的小鼠模型中的急性自身免疫性脑脊髓炎的临床体征是可能的(F.Mokhtarian et al.；J.Neuroimmunology 2006,Vol.180,pp.135-146)。还已经示出的是，钙蛋白酶抑制剂在一方面阻断A@-诱导的神经元变性(Park et al.；J.Neurosci.2005,25,pp.5365-5375)，并且此外，减少β-淀粉样前体蛋白(βAPP)的释放(J.Higaki et al.,Neuron,1995,I4,pp.651-659)。
在这种背景下，钙蛋白酶抑制剂代表一种用于治疗神经退行性紊乱的新颖的治疗原则，所述神经退行性紊乱通常并且特别是阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病。
已经证明HIV诱导的神经毒性是由钙蛋白酶介导的(O'Donnell et al.；J.Neurosci.2006,26(3),pp.981-990)并且还已经示出钙蛋白酶参与HIV病毒的复制(Teranishi et al.；Biochem.Biophys.Res.Comm.2003,303(3),pp.940-946)。
最近还证实，钙蛋白酶参与肾脏疾病的发展，例如慢性肾脏疾病，诸如糖尿病肾病。因此，Y.Shi等人已经证明，在动物模型中，天然钙蛋白酶抑制剂，钙蛋白酶抑制蛋白，在肾缺血再灌注(renal ischemia reperfusion)期间被下调(Am.J.Physiol.RenalPhysiol.2000,279,pp.509-517)。此外，A Dnyanmote et al.,Toxicology and AppliedPharmacology 2006,215,pp.146-157，已经示出，经由钙蛋白酶抑制蛋白的过表达的钙蛋白酶的抑制减少(reduce)在急性肾衰竭模型中DCVC诱导的肾损伤的进展。此外，Peltier等人已经证明，钙蛋白酶的激活和分泌促进实验性肾小球肾炎的肾小球损伤(J.Am.Soc.Nephrol.2006,17,pp.3415-3423)。还已经示出，钙蛋白酶抑制剂减少肾功能障碍和由肾缺血-再灌注引起的损伤，并且因此可以用于增强肾脏针对与主动脉血管外科手术(aortovascular surgery)或肾移植相关的肾损伤的耐受性(P.Chatterjee et al.,Biochem.Pharmacal.2005,7,pp.1121-1131)。在此基础上，钙蛋白酶抑制可以被认为是在治疗肾脏疾病，例如慢性肾脏疾病，诸如糖尿病肾病中有用的治疗原则。
钙蛋白酶还已经被确定为是对于寄生活动必要的中心介导物(centralmediator)。像恶性疟原虫和刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)这样的寄生虫利用宿主细胞钙蛋白酶来促进从细胞内纳虫泡(intracellular parasitophorous vacuole)和/或宿主质膜中逃逸。在低张力溶解的(hypotonically lysed)和重新密封的红细胞中抑制钙蛋白酶-1防止恶性疟原虫寄生虫的逃逸，通过添加纯化的钙蛋白酶-1恢复所述逃逸。类似地，刚地弓形虫从哺乳动物的成纤维细胞中的有效排出被小干扰RNA介导的抑制或钙蛋白酶活性的遗传缺失所阻断，并且可以通过遗传互补来恢复(D.Greenbaum et al.,Science 324,794(2009))。因为无法从它们的宿主细胞中逃逸的寄生虫不能增殖，这表明一种抗寄生虫治疗的策略。对钙蛋白酶的药理学抑制已经示出发挥抗疟疾活性，并且因此提供抗寄生虫策略的新颖策略，例如由抗议性感染(protest infection)诸如疟疾或弓形体病引起的疾病(Li et al.,Mol Biochem Parasitol.2007；155(1):26-32；Jung et al.Archives ofPharmacal Research(2009),32(6),899-906,Chandramohanadas et al.Science(2009),324,794)。
还已经报告的是(Leloup and Wells,Expert Opin Ther Targets.,2011,15(3),309-323；Storr et al.,Nat Rev Cancer.,2011,11(5),364-374；Storr et al.,Pathobiology.,2015,82(3-4),133-141；Selvakumar and Sharma,ExperimentalTherapeutic Medicine,2010,1,413-417；Storr et al.,Oncotarget,2016,30(7),47927-47937；以及Guan et al.,Proc Amer Assoc Cancer Res.,2005,46)，钙蛋白酶，特别是钙蛋白酶1和钙蛋白酶2，与很多种常见的癌症例如乳腺癌、结肠直肠癌和白血病有关。钙蛋白酶1和钙蛋白酶2通过允许细胞转化、肿瘤细胞的迁移和侵入以及肿瘤的新血管形成而参与癌症的发展和进展。这些报告还提及，许多肿瘤细胞呈现这些钙蛋白酶的异常高的活性。因此，抑制钙蛋白酶活性将是通过阻断细胞的转化和增殖以及肿瘤的血管形成来阻断肿瘤发展的有效方式。
纤维化指的是构成疤痕组织的细胞外基质分子(富含胶原的细胞外基质)的积聚，并且是纤维化疾病的共同特征。纤维化疾病可以影响任何器官，例如肾脏、肝脏、肺、皮肤、心脏和眼睛，导致器官功能障碍和衰竭，并且可能导致死亡。在上皮器官(epithelialorgan)尤其是肺、肝脏、皮肤和肾脏中，用富含胶原的疤痕组织替代细胞的正常功能单位以及由疤痕回缩引起的结构扭曲是器官功能的进行性损失和最终衰竭的主要因素[Friedmanet al.Science Translational Medicine,2013,5,167]。钙蛋白酶活性已经被描述为在伤口愈合和疤痕形成中是必要的[Nassar et al.,PLoS ONE,2012,7(5),e37084]。钙蛋白酶还已经被报告为参与纤维化疾病[WO 2017/156074 A1；Buckman et al.,Am J RespirCrit Care Med,2018,197,A5747；Potz et al.,J Nat Sci 2016,2(9),e218；Ono et al.,Nature Reviews Drug Discovery,2016,15,854-876]，例如肝纤维化(酒精性疾病、病毒性疾病、自身免疫性疾病、代谢病和遗传性慢性疾病)、肾纤维化(例如由慢性炎症、感染或II型糖尿病引起的肾纤维化)、肺纤维化(特发性(idiopathic)肺纤维化或由环境损害(environmental insult)引起的肺纤维化，包括毒性颗粒、结节病、石棉尘肺、过敏性肺炎(hypersensitivity pneumonitis)、细菌感染，包括结核病，以及其他)、间质纤维化、系统性硬皮病(其中许多器官变成纤维化的自身免疫性疾病)、黄斑变性(眼睛的纤维化疾病)、胰腺纤维化(由例如酒精滥用引起的胰腺纤维化和胰腺的慢性炎性疾病)、脾纤维化(由镰状细胞性贫血和其他血液紊乱引起的脾纤维化)、心脏纤维化(由感染、炎症和肥大引起的心脏纤维化)、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化(endomyocardial fibrosis)、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化(progressive massive fibrosis)、肾源性系统性纤维化、外科手术(尤其是外科手术植入物)的纤维化并发症、注射纤维化以及纤维化的继发性状况和疾病状态，例如肝硬化、弥漫性实质性肺疾病、输精管结扎术后疼痛综合征(post-vasectomy pain syndrome)和关节纤维化，以及其他。一种特定的钙蛋白酶抑制剂，BLD-2660，目前正在经历用于纤维化的1期临床试验。因此，抑制钙蛋白酶活性将是用于管理纤维化疾病的有效策略。
WO 2004/078908 A2和WO 2005/056519 A1公开了钙蛋白酶抑制剂，其在治疗包括阿尔茨海默病的不同疾病中具有抑制钙蛋白酶1的潜力。特别地，已被指定为代号SNJ-1945的、WO 2005/056519 A1的实施例17已经证明在降低体内的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的临床评分中是有效的(Trager N.et al.,“Effects of a novel orallyadministered calpain inhibitor SNJ-1945on immunomodulation andneurodegeneration in a murine model of multiples sclerosis”,J.Neurochem.2014July；130(2):268-279)。
对用于管理与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病或状况的新的策略仍然存在需要，所述疾病或状况例如由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
发明概述
本发明的作者已经惊奇地发现，在苯基环的间位处具有甲氧基基团的式(I)的化合物是强效的钙蛋白酶-1抑制剂。如比较实施例中示出的，该基团的位置对于实现钙蛋白酶-1抑制的高效力是最重要的。因此，这些式(I)的化合物可用于治疗和/或预防与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病或状况，例如由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；以及癌症。
在第一方面中，本发明涉及式(I)的化合物：
Figure BDA0002880743370000081
其中
R1选自由以下组成的组：C1-C6烷基和C3-C6环烷基，
R2选自由以下组成的组：H和C1-C6烷基，
R3选自由以下组成的组：C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基，
或其药学上可接受的盐或立体异构体，用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的疾病或状况：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
在第二方面中，本发明涉及包含如第一方面中限定的式(I)的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物，该药物组合物用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的疾病或状况：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
在另一个方面中，本发明涉及如第一方面中限定的式(I)的化合物或包含所述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物用于制造用于治疗和/或预防疾病或状况的药物的用途，该疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
在另一个方面中，本发明涉及治疗和/或预防疾病或状况的方法，所述疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症，以及纤维化疾病；所述方法包括将治疗有效量的如第一方面中限定的式(I)的化合物或包含所述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物施用于有相应需要的受试者。
在另外的方面中，本发明涉及式(II)的化合物：
Figure BDA0002880743370000101
其中
R1a选自由以下组成的组：C1-C6烷基和C3-C6环烷基，
R2a选自由以下组成的组：H和C1-C6烷基，
R3a是C3-C6环烷基，
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
在另一个方面中，本发明涉及包含如在第三方面中限定的式(II)的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
在另一方面中，本发明涉及如在第三方面中限定的式(II)的化合物或如在第四方面中限定的药物组合物，用于医疗，特别是用于治疗和/或预防与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病或状况；所述疾病或状况优选地选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
发明详述
定义
出于便于理解本发明的目的，包括了一些定义。
如本文中单独地或作为另一基团的一部分使用的术语“烷基”指在每种情况下包含所指示的碳原子数的直链或支链的饱和单价烃链，碳原子数通常为从1个至6个碳原子，并且优选地从1个至3个。烷基的实例是甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基等。
如本文中单独地或作为另一基团的一部分使用的术语“烷氧基”指通过氧连接的如上文定义的烷基基团，即烷基-O-。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、叔丁氧基及类似基团。
如本文单独使用的或作为另一基团的一部分使用的术语“环烷基”是指饱和或部分饱和的，优选地饱和的，并且仅由碳原子和氢原子组成的单环基团，并且在每种情况下含有所指示的碳原子数，碳原子数通常为从3至6并且优选地从3至5。环烷基的实例是环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
术语“盐”必须被理解为根据本发明的化合物的任何形式，其中所述化合物呈离子形式或是带电荷的并且与反离子(阳离子或阴离子)偶联或处于溶液中。此定义还包括季铵盐。定义特别地包括药学上可接受的盐。
术语“药学上可接受的盐”包括与药学上可接受的酸或碱的盐，其通过药学上可接受的碱的加成由包含酸性部分的母体化合物来合成，或通过药学上可接受的酸的加成由包含碱性部分的母体化合物来合成。药学上可接受的酸包括无机酸和有机酸二者，无机酸例如盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸、氢碘酸和硝酸，有机酸例如柠檬酸、富马酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、抗坏血酸、草酸、琥珀酸、酒石酸、苯甲酸、乙酸、甲烷磺酸(methanesulfonic)(甲磺酸(mesylate))、乙烷磺酸、苯磺酸(benzenesulfonic)(苯磺酸(besylate))或对甲苯磺酸(p-toluenesulfonic)(对甲苯磺酸(tosylate))。药学上可接受的碱包括碱金属(例如钠或钾)氢氧化物和碱土金属(例如钙或镁)氢氧化物和有机碱，诸如烷基胺、芳基烷基胺和杂环胺。例如，本文提供的化合物的药学上可接受的盐通过常规化学方法由包含碱性部分或酸部分的母体化合物合成。通常，这样的盐，例如，通过使这些化合物的游离碱或游离酸形式分别与化学计量量的合适的酸或碱在水或有机溶剂或二者的混合物中反应来制备。
预期本发明的化合物的所有立体异构体，或单独的或作为其混合物。制备方法可以使用外消旋体、对映异构体或非对映异构体作为起始材料。当制备非对映异构体或对映异构体产物时，它们可以通过常规方法，例如色谱或功能结晶(functionalcrystallization)来分离。
除非另有说明，否则本发明的化合物还意指包括仅在一个或更多个同位素富集的原子的存在方面不同的化合物。例如，除了由氘或氚替换氢原子或由13C-或14C-富集的碳或15N-富集的氮替换碳，具有本发明的结构的化合物在本发明的范围内。
本发明的某些化合物可以以未溶剂化的形式以及溶剂化的形式，包括水合形式存在。通常，溶剂化的形式等效于未溶剂化的形式并且被涵盖在本发明的范围内。
本发明的某些化合物可以以多晶形或无定形形式存在。通常，所有物理形式对于本发明所预期的用途是等同的并且被意图在本发明的范围内。
如本文使用的，术语“预防”指在疾病或状况的初始或早期阶段施用本发明的化合物，或也指预防疾病或状况的发作。
使用术语“治疗”指在出现临床体征之前或之后，施用本发明的化合物来控制紊乱进展。控制紊乱进展意指指定有益的或期望的临床结果，包括但不限于减轻症状、减少紊乱长度、稳定病理学状态(特别是避免进一步恶化)、推迟紊乱的进展、改善病理学状态和免除(部分和全部二者)。
如本文使用的，术语“受试者”指罹患本文公开的疾病或状况中的一种的任何动物或人。优选地，受试者是哺乳动物。如本文使用的，术语“哺乳动物”指任何哺乳动物物种，包括但不限于家养动物和农场动物(牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫或啮齿动物)、灵长类动物和人。优选地，哺乳动物是人类。
如本文使用的，术语“心脏损伤”指的是由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏组织的任何损害，例如重塑。
如本文使用的，术语“重塑”指的是一组分子、细胞和间质的变化，其在临床上表现为由心脏损伤导致的心脏的大小、形状和功能的变化，例如腔直径、质量(肥大和萎缩)、几何形状(心脏壁厚度和形状)、疤痕的面积、纤维化和炎性浸润(inflammatory infiltrate)的变化。心脏功能障碍是心脏重塑的主要后果，心脏重塑由用于心室功能障碍的发作和发展的病理生理学底物组成。这种相互作用开始于响应于心脏损伤的基因变化，以及胎儿基因的重新表达。因此，发生细胞和分子的变化，这导致心室功能的进行性损失，最初无症状，演变为心力衰竭的体征和症状。心脏重塑与恶性心室心律失常有关，恶性心室心律失常包括持续的心室心动过速和心室颤动(ventricular fibrillation)。在冠状动脉闭塞之后最初几小时期间，纤维间胶原的崩解可以与肌原纤维的坏死同时地发生。支撑组织的损失使这个区域更易于肿胀和变形。由于坏死的肌肉细胞的滑动和肌细胞在梗塞的壁上的重新排列，发生梗塞区域的变薄和腔的扩张。这种以梗塞的变薄和变长为特征的急性心室扩张被称为梗塞膨胀(infarct expansion)。梗塞膨胀增加心肌破裂的可能性，并且代表动脉瘤的解剖学底物。
如本文使用的，术语“神经退行性紊乱”指的是导致神经元细胞的进行性退化和/或死亡的紊乱。神经退行性紊乱的实例是阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病。
如本文使用的，术语“癌症”或“肿瘤”指的是一大类涉及未调节的细胞生长并且还被称为恶性赘生物的疾病。该术语通常适用于这样的疾病，其特征是不受控制的细胞分裂(或存活或凋亡抗性的增加)和所述细胞以下的能力：侵入其他邻近组织(侵入)，以及通过淋巴管和血管扩散到所述细胞通常不定位的身体的其他区域(转移)，通过血流循环，并且然后侵入身体中其他地方的正常组织。取决于肿瘤是否能够通过侵入和转移进行扩散，肿瘤被分类为良性的或恶性的：良性肿瘤是不能通过侵入或转移进行扩散的肿瘤，即它们仅局部地生长；而恶性肿瘤是能够通过侵入和转移进行扩散的肿瘤。已知与癌症相关的生物学过程包括血管生成、免疫细胞浸润、细胞迁移和转移。癌症通常共享以下特征中的一些：维持增殖性信号传送、逃避生长阻遏剂、抵抗细胞死亡、实现无限复制(replicativeimmortality)、诱导血管生成以及激活侵入和最终转移。癌症侵入附近的身体部分，并且还可能通过淋巴系统或血流扩散到更远的身体部分。癌症通过与肿瘤细胞相似的细胞的类型来分类，因此该类型的细胞被假定是肿瘤的起源。
可以通过本发明的医疗用途来治疗或预防的癌症是实体瘤，例如结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、喉癌、舌癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、食道癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、胚胎癌、Wilms瘤、宫颈癌、睾丸肿瘤、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤以及白血病；优选地乳腺癌、结肠直肠癌和白血病。
如本文使用的，术语“白血病”指的是一种血液或骨髓的癌症类型，其特征是被称为胚细胞(blast)的未成熟的白血细胞的异常增多，并且起源于造血组织。白血病始于骨髓，在骨髓中，发育中的血细胞，通常是发育中的白细胞，经历恶性的(癌性的)变化。这意味着它们以不受控制的方式繁殖，群集在骨髓并且干扰正常的血细胞产生。越来越多数目的被称为胚细胞或白血病胚细胞的异常细胞最终从骨髓中溢出，并且在血流中围绕身体行进。在一些情况下，这些异常细胞积聚在多个器官中，包括淋巴结、脾、肝脏和中枢神经系统(脑和脊髓)。存在四种主要的白血病：急性淋巴细胞白血病，或ALL；急性骨髓性白血病，或AML；慢性淋巴细胞白血病，或CLL；慢性髓细胞性白血病，或CML。
如本文使用的，术语“纤维化疾病”指的是一组涉及在器官或组织中过量纤维结缔组织的形成的疾病。纤维化导致受影响的组织的结疤和增厚。纤维化可以发生在身体的许多组织中，导致多种纤维化疾病，例如心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、腹膜后纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、进行性大块纤维化、肾原性系统性纤维化、外科手术的纤维化并发症、慢性同种异体移植血管病变(chronic allograft vasculopathy)和/或被移植器官的慢性排斥、局部缺血-再灌注损伤相关的纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺疾病、输精管结扎术后疼痛综合征和关节纤维化。优选地，纤维化疾病指的是心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化或腹膜后纤维化。
式(I)的化合物
在第一方面中，本发明提供一种式(I)的化合物：
Figure BDA0002880743370000151
其中
R1选自由以下组成的组：C1-C6烷基和C3-C6环烷基，
R2选自由以下组成的组：H和C1-C6烷基，
R3选自由以下组成的组：C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基，
或其药学上可接受的盐或立体异构体，用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的疾病或状况：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
在特定实施方案中，R1选自由C1-C3烷基和C3-C5环烷基组成的组；优选地选自由甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基和环戊基组成的组；更优选地选自由甲基、异丙基和环丙基组成的组；还更优选地选自由异丙基和环丙基组成的组；最优选的是环丙基。
在另一种特定实施方案中，R2选自由H和C1-C3烷基组成的组；优选地选自由H、甲基、乙基、丙基和异丙基组成的组；更优选地选自由H和甲基组成的组；最优选的是H。
在另一种特定实施方案中，R3选自由C1-C3烷氧基和C3-C5环烷基组成的组；优选地选自由甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙基、环丁基和环戊基组成的组；还更优选地选自由甲氧基和环丙基组成的组；最优选的是环丙基。在另一种特定实施方案中，R3是C3-C6环烷基；优选地C3-C5环烷基；优选地环丙基、环丁基或环戊基；最优选的是环丙基。
在特定实施方案中，R1选自由C1-C3烷基和C3-C5环烷基组成的组；R2选自由H和C1-C3烷基组成的组；并且R3选自由C1-C3烷氧基和C3-C5环烷基组成的组。
在另一种特定实施方案中，R1选自由C1-C3烷基和C3-C5环烷基组成的组；R2选自由H和C1-C3烷基组成的组；并且R3是C3-C5环烷基。
在另一种特定实施方案中，R1选自由异丙基和环丙基组成的组；R2是H；并且R3是环丙基。
在特定实施方案中，式(I)的化合物是式(Ia)的化合物：
Figure BDA0002880743370000161
其中R1、R2和R3具有与式(I)的化合物中相同的含义，或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在特定实施方案中，式(I)的化合物的具体立体异构体是式(Ib)的化合物：
Figure BDA0002880743370000162
其中R1、R2和R3具有与式(I)的化合物中相同的含义，或其药学上可接受的盐。
在优选的实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0002880743370000171
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在特定实施方案中，式(Ia)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0002880743370000172
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在特定实施方案中，式(Ib)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0002880743370000181
或其药学上可接受的盐。
在特定实施方案中，式(I)的化合物用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的疾病或状况：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；以及癌症。
在优选的实施方案中，式(I)的化合物用于治疗和/或预防由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤，优选地在心肌梗塞之后的重塑。
在特定实施方案中，式(I)的化合物用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的神经退行性紊乱：阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病。
在另一种特定实施方案中，式(I)的化合物用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的癌症：乳腺癌、结肠直肠癌和白血病。
在另一种特定实施方案中，式(I)的化合物用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的纤维化疾病：心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化和腹膜后纤维化。
在第二方面中，本发明涉及包含如第一方面中限定的式(I)的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物，该药物组合物用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的疾病或状况：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
在另一个方面中，本发明涉及如上文限定的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体用于制造用于治疗和/或预防疾病或状况的药物的用途，所述疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
在另外的方面中，本发明涉及治疗和/或预防疾病或状况的方法，所述疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病；所述方法包括将治疗有效量的如上文限定的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体施用于有相应需要的受试者。
在上文限定的用途和治疗方法的特定实施方案中，疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；以及癌症。
在上文限定的用途和治疗方法的其他特定实施方案中，疾病或状况是由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤，优选地在心肌梗塞之后的重塑。
在上文限定的用途和治疗方法的其他特定实施方案中，神经退行性紊乱选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病。
在上文限定的用途和治疗方法的其他特定实施方案中，癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、结肠直肠癌和白血病。
在上文限定的用途和治疗方法的其他特定实施方案中，纤维化疾病选自由以下组成的组：心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化和腹膜后纤维化。
式(II)的化合物
在第三方面中，本发明提供了式(II)的化合物：
Figure BDA0002880743370000201
其中
R1a选自由以下组成的组：C1-C6烷基和C3-C6环烷基，
R2a选自由以下组成的组：H和C1-C6烷基，
R3a是C3-C6环烷基，
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
式(II)的化合物是式(I)的化合物的亚组。
在特定实施方案中，R1a选自由C1-C3烷基和C3-C5环烷基组成的组；优选地选自由甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基和环戊基组成的组；更优选地选自由甲基、异丙基和环丙基组成的组；还更优选地选自由异丙基和环丙基组成的组；最优选的是环丙基。
在另一种特定实施方案中，R2a选自由H和C1-C3烷基组成的组；优选地选自由H、甲基、乙基、丙基和异丙基组成的组；更优选地选自由H和甲基组成的组；最优选的是H。
在另一种特定实施方案中，R3a是C3-C6环烷基；优选地C3-C5环烷基；优选地环丙基、环丁基或环戊基；最优选的是环丙基。
在特定实施方案中，R1a选自由C1-C3烷基和C3-C5环烷基组成的组；R2a选自由H和C1-C3烷基组成的组；并且R3a是C3-C5环烷基。
在另一种特定实施方案中，R1a选自由异丙基和环丙基组成的组；R2a是H；并且R3a是环丙基。
在特定实施方案中，式(II)的化合物是式(IIa)的化合物：
Figure BDA0002880743370000211
其中R1a、R2a和R3a具有与式(II)的化合物中相同的含义，或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在特定实施方案中，式(II)的化合物的具体立体异构体是式(IIb)的化合物：
Figure BDA0002880743370000212
其中R1a、R2a和R3a具有与关于式(II)的化合物定义的相同的含义，或其药学上可接受的盐。
在优选的实施方案中，式(II)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0002880743370000213
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在特定实施方案中，式(IIa)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0002880743370000221
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在特定实施方案中，式(IIb)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0002880743370000222
或其药学上可接受的盐。
药物组合物
在另一个方面中，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含如上文定义的式(II)的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐和一种或更多种药学上可接受的赋形剂。
术语“药学上可接受的赋形剂”指与活性成分一起施用的媒介物、稀释剂或佐剂。这样的药学赋形剂可以是无菌液体，诸如水和油，包括石油、动物、植物和合成来源的那些，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油和类似物。特别是用于可注射溶液的水或盐水溶液和右旋糖(dextrose)水溶液和甘油水溶液，优选地被用作媒介物。合适的药学媒介物在E.W.Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"第21版，2005中描述。
本发明的式(II)的化合物可以通过口服、舌下、肠胃外、皮下、肌肉内、静脉内、经皮、鼻内、眼内和/或直肠途径施用。化合物可以单独地施用或与本发明的一种或更多种其他化合物或一种或更多种其他药物组合施用。
本发明的药物组合物可以包含在脂质体或微囊中的式(II)的化合物，并且可以呈分散体、溶液、洗剂、凝胶等的形式，包括局部制品。
上文的定义确实也适用于包含式(I)的化合物的药物组合物。
式(II)的化合物的用途
如上文所解释的，式(II)的化合物是式(I)的化合物的亚组。因此，式(II)的化合物也是钙蛋白酶-1的抑制剂。
因此，在第四方面中，本发明涉及用于医疗的式(II)的化合物，特别是用于治疗和/或预防与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病或状况的式(II)的化合物。优选的疾病或状况是选自由以下组成的组的疾病或状况：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病；更优选的疾病或状况是由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤，优选地在心肌梗塞之后的重塑。
在另一个方面中，本发明涉及如上文限定的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体用于制造用于治疗和/或预防与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病或状况的药物的用途；所述疾病或状况优选地选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病；更优选地选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤，还更优选地在心肌梗塞之后的重塑。
在另外的方面中，本发明涉及治疗和/或预防与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病或状况的方法，该方法包括将治疗有效量的如上文限定的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体施用于有相应需要的受试者。优选地，与升高的钙蛋白酶活性相关的疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病；更优选地选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤，还更优选地在心肌梗塞之后的重塑。
在特定实施方案中，疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；以及癌症。
在其他特定实施方案中，疾病或状况是由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤，优选地在心肌梗塞之后的重塑。
在其他特定实施方案中，神经退行性紊乱选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病。
在其他特定实施方案中，癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、结肠直肠癌和白血病。
在其他特定实施方案中，纤维化疾病选自由以下组成的组：心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化和腹膜后纤维化。
用于制备式(I)和式(II)的化合物的方法
按照以下示出的合成方案，可以从式(VIII)的N-取代的3-氨基-2-羟基-酰胺盐酸盐开始，制备式(I)和式(II)的化合物，优选地其中R3是环烷基基团：
Figure BDA0002880743370000251
在第一步中，将式(VII)的被保护的氨基酸、HOBt(羟基苯并三唑)、EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)和式(VIII)的N-取代的3-氨基-2-羟基-酰胺盐酸盐溶解于溶剂诸如二氯甲烷(DCM)中。然后加入DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)并使混合物进行反应以得到式(VI)的化合物。其他酰胺偶联剂是同样有效的，例如在二甲基甲酰胺(DMF)中DIPEA的存在下的HATU(1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐)，或在DMF中的NEt3的存在下的T3P(丙基膦酸酐)。使式(VI)的化合物在溶剂诸如1,4-二氧六环或DCM中与强酸诸如盐酸反应，并用三氟乙酸(TFA)处理以得到式(V)的化合物。将式(III)的化合物、HOBt、EDC和式(V)的化合物溶解于溶剂诸如DCM中。然后加入DIPEA并使混合物进行反应以得到式(IV)的化合物。其他酰胺偶联剂是同样有效的，诸如在DMF中的DIPEA的存在下的HATU，或在DMF中的NEt3的存在下的T3P。最后，将式(IV)的化合物溶解于溶剂诸如DCM、DMF或它们的混合物中，并加入戴斯-马丁过碘烷以得到式(I)的化合物。其他氧化剂诸如在DMSO(二甲基亚砜)中的DCC(N,N’-二环己基碳二亚胺)是同样有用的。
按照以下示出的合成方案，可以由式(XIII)的被保护的氨基醛开始获得式(VIII)的N-取代的3-氨基-2-羟基-酰胺盐酸盐：
Figure BDA0002880743370000261
在第一步中，将式(XIII)的被保护的氨基醛溶解于溶剂诸如1,4-二氧六环中，并且加入亚硫酸氢钠，然后加入氰化钾水溶液以得到式(XII)的化合物。将式(XII)的化合物溶解于浓酸水溶液诸如浓盐酸中并回流以得到式(XI)的化合物。例如用氢氧化钠将式(XI)的化合物的水溶液调至碱性pH(优选地在10-12的范围内)，并且加入Boc2O(二碳酸二叔丁酯)。在完全转化之后，例如用KHSO4将混合物酸化，并用与水不混溶的溶剂诸如乙酸乙酯萃取式(X)的化合物。将式(X)的化合物、HOBt和EDC溶解于溶剂诸如无水DCM中。然后加入DIPEA和式(XV)的胺并使混合物进行反应持续8至24小时反应以得到式(VIII)的化合物。也可以使用T3P或HATU代替EDC和HOBt，获得良好的结果。使式(IX)的化合物在溶剂诸如1,4-二氧六环中与强酸诸如盐酸反应以得到式(VIII)的化合物。
在还在先前的方案中说明的可选择的合成途径中，将式(XIII)的被保护的氨基醛溶解于溶剂诸如无水DCM中，并加入酸诸如乙酸和式(XIV)的异氰化物化合物，并在惰性气氛诸如氩气气氛中、在室温进行反应。然后除去溶剂，并且所得到的化合物用乙酸乙酯萃取并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。然后将产物溶解于THF(四氢呋喃)和MeOH(甲醇)的混合物中，并用氢氧化锂水溶液处理以得到式(IX)的化合物。然后，如以上描述的，使式(IX)的化合物在溶剂诸如1,4-二氧六环中与强酸诸如盐酸反应以得到式(VIII)的化合物。
按照以下示出的合成方案，可以从式(VIII)的N-取代的3-氨基-2-羟基-酰胺盐酸盐开始，制备其中R3是烷氧基基团的式(I)的化合物：
Figure BDA0002880743370000271
在第一步中，将式(VII)的被保护的氨基酸、HOBt和式(XXII)的化合物溶解于溶剂诸如二氯甲烷(DCM)中。然后加入DIPEA并使混合物进行反应以得到式(XXI)的化合物。其他酰胺偶联剂是同样有效的，诸如在DMF中的DIPEA的存在下的HATU，或在DMF中的NEt3的存在下的T3P。使式(XXI)的化合物在溶剂诸如1,4-二氧六环或DCM中与强酸诸如盐酸反应，并用三氟乙酸(TFA)处理以得到式(XX)的化合物。将式(III)的化合物、HOBt、EDC和式(XX)的化合物溶解于溶剂诸如DCM中。然后加入DIPEA并使混合物进行反应以得到式(XIX)的化合物。其他酰胺偶联剂是同样有效的，诸如在DMF中的DIPEA的存在下的HATU，或在DMF中的NEt3的存在下的T3P。然后将式(XIX)的化合物在THF/MeOH/水的混合物中用LiOH处理，并且随后用含水酸溶液例如HCl处理，以得到式(XVIII)的化合物。将式(XVII)的化合物、HOBt、EDC和式(XVIII)的化合物溶解于溶剂诸如DCM中。然后加入DIPEA并使混合物进行反应以得到式(XVI)的化合物。其他酰胺偶联剂是同样有效的，诸如在DMF中的DIPEA的存在下的HATU，或在DMF中的NEt3的存在下的T3P。最后，将式(XVI)的化合物溶解于溶剂诸如DCM、DMF或它们的混合物中，并加入戴斯-马丁过碘烷以得到式(I)的化合物。其他氧化剂诸如在DMSO(二甲基亚砜)中的DCC(N,N’-二环己基碳二亚胺)是同样有用的。
如下文的合成方案中所示，式(XXII)的化合物可以通过用在甲醇中的草酰氯处理，由式(X)的化合物获得，所述式(X)的化合物的合成已在上文被描述：
Figure BDA0002880743370000281
式(XVII)、式(XIII)、式(XIV)、式(XV)、式(VII)和式(III)的起始化合物是商购可得的或可以通过文献中描述的方法获得。
以下实施例仅仅是本发明的某些实施方案的说明，并且不能被认为是以任何方式限制本发明。
实施例
缩写
在实施例中使用以下缩写：
Boc：叔丁氧羰基
conc：浓缩
Boc2O：二碳酸二叔丁酯
DCM：二氯甲烷
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺
DMSO：二甲基亚砜
EDC·HCl：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
EtOAc：乙酸乙酯
HBTU：N,N,N',N'-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐
HCl：盐酸
HEPES：4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸
HOBt：羟基苯并三唑
LC-MS：液相色谱-质谱
Leu-OH：亮氨酸
MeOH：甲醇
Min：分钟
Phe-OH：苯丙氨酸
Sat：饱和的
T3P＝丙基膦酸酐
TBME：叔丁基甲基醚
THF：四氢呋喃
tR：保留时间
Val-OH：缬氨酸
材料与方法
LC-MS：使用液相色谱偶联质谱法(LC-MS)表征实施例的产物。使用以下程序进行HPLC-MS分析：在配备有2996光电二极管阵列检测器并偶联至mass 3100检测器LC/MS的Alliance HT 2795(Waters)色谱仪中，使用XBridge C18柱(50x4.6 mm，S-3.5μm)并使用pH＝9的10mM NH4CO3水溶液(A)和乙腈(B)的混合物作为洗脱液在50℃和以1.6mL/min流量，使用以下洗脱条件实现分离：在3.5min内，5％至100％B。在100-700的质量范围内，将检测器设置为电喷雾正模式(ESI+)。锥电压10V。源T：120℃。去溶剂化T：350℃。
试剂：2-甲氧基苯甲酸(Sigma Aldrich)；3-甲氧基苯甲酸(Sigma Aldrich)；4-甲氧基苯甲酸(Sigma Aldrich)；乙酸(VWR)；Boc-L-Phe-OH(Fluorochem)；Boc-L-Leu-OH(Fluorochem)；Boc-L-Val-OH(Fluorochem)；环丙胺(Sigma Aldrich)；环丙基异氰化物(Fluorochem)；在DCM中的戴斯-马丁过碘烷15％溶液(Acros)；EDC(Iris Biotech)；HBTU(Iris Biotech)；1,4-二氧六环中的HCl 4N(TCI Europe Organic Chem)；HOBt(Carbosynth)；LiOH·H2O(Sigma Aldrich)；在四氢呋喃中的氢化铝锂溶液1.0M(SigmaAldrich)；N,O-二甲基羟胺盐酸盐(Fluorochem)；(S)-2-(Boc-氨基)-3-环丙基丙酸(Fluorochem)。
溶剂：DCM(Scharlab)；乙醇(Panreac)；EtOAc(Scharlab)；己烷(Scharlab)；MeOH(Scharlab)；TBME(SDS)；THF(Panreac)。
中间体的合成
中间体1：(S)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0002880743370000301
向Boc-L-Phe-OH(10.0g,37.7mmol,1.0当量)在DCM(150ml)的溶液中加入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(4.0g,41.1mmol,1.1当量)、HBTU(III)(15.7g,41.1mmol,1.1当量)和DIPEA(20ml，113.0mmol,3.0当量)。将反应混合物在室温搅拌持续1小时。然后，在真空下除去挥发物，并且粗混合物用EtOAc萃取，用饱和NaHCO3溶液洗涤(2x20 mL)。粗材料通过快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/EtOAc作为洗脱剂，EtOAc从0％至40％，产物在35％时被洗脱。获得11.6g(37.7mmol,收率100％)。
LC-MS：tR＝2.58min；m/z＝309
中间体2：(S)-(1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0002880743370000311
将在四氢呋喃中的氢化铝锂溶液1.0M(37.7ml,37.7mmol,1.0当量)加入到被冷却至0℃的、中间体1(11.6g,37.7mmol,1.0当量)在THF(250ml)中的溶液。将混合物搅拌过夜至室温。将反应混合物用EtOAc稀释并且将溶剂蒸发。粗材料通过硅胶色谱法来纯化，该硅胶色谱法使用己烷/EtOAc作为溶剂，EtOAc从0％至60％，产物在25％时被洗脱。获得6.7g期望的产物(26.9mmol,收率68％)。
LC-MS：tR＝2.48min；m/z＝250
中间体3：((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨基甲酸叔丁 酯的合成
Figure BDA0002880743370000312
将乙酸(0.35ml,8.0mmol,2.0当量)和环丙基异氰化物(0.30ml,4.4mmol,1.1当量)加入到中间体2(1.0g,4.0mmol,1.0当量)在DCM(20ml)中的溶液，并且混合物在rt搅拌。在15min之后，向该混合物中加入THF/MeOH/H2O(7/5/3)的混合物，然后加入LiOH·H2O(0.67g,16.0mmol,4当量)。在15min之后，在真空下除去溶剂。将产物萃取到EtOAc中，并且溶液用饱和NaHCO3溶液洗涤，并且基于快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/己烷：乙醇(8:2)作为溶剂，己烷：乙醇(8:2)从0％至50％，产物在25％时被洗脱。获得0.31g的产物(收率23％)。
LC-MS：tR＝2.32min；m/z＝335
中间体4：(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基-4-苯基丁酰胺盐酸盐的合成
Figure BDA0002880743370000321
将HCl在1,4-二氧六环中的4N溶液(1ml,4.1mmol,4当量)加入到中间体3(0.31g,0.9mmol,1.0当量)。将混合物在室温搅拌持续1h，并且然后蒸发至干。产物被用于下一步骤而无需进一步纯化。
LC-MS：tR＝1.50min；m/z＝235
中间体5：((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨 基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0002880743370000322
将中间体4(251mg,0.9mmol,1.0当量)和DIPEA(0.6ml,3.7mmol,4当量)在DCM(5mL)中的溶液加入到Boc-L-Leu-OH(300mg,1.2mmol,1.2当量)、EDC(249mg,1.3mmol,1.5当量)和HOBt(199mg,1.3mmol,1.5当量)在DCM(5mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时。在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并用饱和NaHCO3溶液洗涤(2x10mL)，并且通过快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/TBME作为洗脱剂，TBME从0％至80％，产物在60％时被洗脱。获得298mg产物(0.7mmol,收率72％)。
LC-MS(方法A)：tR＝2.60min；m/z＝448
中间体6：(2S)-2-氨基-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2- 基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐
Figure BDA0002880743370000331
将HCl在1,4-二氧六环中的(4N)溶液(3,3ml,13.2mmol,20当量)加入到中间体5(298mg,0,6mmol,1.0当量)。将混合物在室温搅拌持续1h，并且然后蒸发至干。产物被用于下一步骤而无需进一步纯化。
LC-MS：tR＝1.92min-2.03min；m/z＝348
中间体7：N-((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2-基) 氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺
Figure BDA0002880743370000332
将中间体6(115mg,0.3mmol,1.0当量)和DIPEA(231μl,1.3mmol,4.0当量)在DCM(5mL)中的溶液加入到3-甲氧基苯甲酸(60.4mg,0.4mmol,1.2当量)、EDC(108mg,0.6mmol,1.7当量)和HOBt(86mg,0.6mmol,1.5当量)在DCM(4mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时。在真空下除去挥发物，并且粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤(2x20 mL)。该材料通过快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/己烷：乙醇(8:2)作为洗脱剂，己烷：乙醇(8:2)从0％至60％，产物在40％时被洗脱。获得100mg产物(0.2mmol,100％)。
LC-MS：tR＝2.47min；m/z＝482
中间体8：((2S)-1-((4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨基)-3- 甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0002880743370000341
将中间体4(1.06g,3.91mmol,1.0当量)和DIPEA(2.74ml,15.66mmol,4当量)在DCM(5mL)中的溶液加入到Boc-L-Val-OH(1.28g,5.87mmol,1.5当量)、EDC(1.13g,5.87mmol,1.5当量)和HOBt(0.9g,5.87mmol,1.5当量)在DCM(5mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续45分钟，并且然后在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。该粗材料通过快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用DCM/DCM:甲醇(8:2)作为洗脱剂，DCM:甲醇(8:2)从0％至50％，产物在15％时被洗脱。获得600mg的产物(1.384mmol,35％收率)。
LC-MS：tR＝2.47min；m/z＝434
中间体9：3-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-N-环丙基-2-羟基-4-苯基丁酰胺盐 酸盐的合成
Figure BDA0002880743370000342
将HCl在1,4-二氧六环中的4N溶液(6.9ml,27.7mmol,20当量)加入到中间体8(600mg,1.384mmol,1.0当量)。将混合物在室温搅拌持续1h，并且然后蒸发至干。产物被用于下一步骤而无需进一步纯化。
LC-MS：tR＝1.77min-1.88min；m/z＝334
中间体10：N-((2S)-1-((4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨 基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002880743370000351
将中间体9(461mg,0.3mmol,1.0当量)和DIPEA(0.97ml,5.53mmol,4.0当量)在DCM(9mL)中的溶液加入到3-甲氧基苯甲酸(316mg,2.07mmol,1.5当量)、EDC(398mg,2.07mmol,1.5当量)和HOBt(318mg,2.07mmol,1.5当量)在DCM(9mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时，并且然后在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。该粗材料通过快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用DCM/DCM:甲醇(8:2)作为洗脱剂，DCM:甲醇(8:2)从0％至20％，产物在15％时被洗脱。获得470mg的产物(1mmol,73％)。
LC-MS：tR＝2.32min；m/z＝468
中间体11：((2S)-3-环丙基-1-((4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2- 基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0002880743370000361
将中间体4(530mg,1.96mmol,1.0当量)和DIPEA(1.37ml,7.83mmol,4当量)在DCM(3mL)中的溶液加入到(S)-2-(Boc-氨基)-3-环丙基丙酸(673mg,2.94mmol,1.5当量)、EDC(563mg,2.94mmol,1.5当量)和HOBt(450mg,2.94mmol,1.5当量)在DCM(2mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续一个半小时。在真空下除去挥发物，并且粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。粗混合物基于快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用DCM/DCM:甲醇(8:2)作为洗脱剂，DCM:甲醇(8:2)从0％至20％，产物在12％时被洗脱。获得430mg的产物(0.96mmol,49％收率)。
LC-MS：tR＝2.5min；m/z＝446
中间体12：3-((S)-2-氨基-3-环丙基丙酰胺基)-N-环丙基-2-羟基-4-苯基丁酰胺 盐酸盐的合成
Figure BDA0002880743370000362
将HCl在1,4-二氧六环中的4N溶液(4.83ml,19.3mmol,20当量)加入到中间体11(430mg,0.96mmol,1.0当量)。将混合物在室温搅拌持续1h，并且然后蒸发至干。产物被用于下一步骤而无需进一步纯化。
LC-MS(方法A)：tR＝1.82min-1.92min；m/z＝346
中间体13：N-((2S)-3-环丙基-1-((4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁- 2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002880743370000371
将中间体12(333mg,0.3mmol,1.0当量)和DIPEA(0.67ml,3.86mmol,4.0当量)在DCM(6mL)中的溶液加入到3-甲氧基苯甲酸(220mg,1.45mmol,1.5当量)、EDC(277mg,1.45mmol,1.5当量)和HOBt(221mg,1.45mmol,1.5当量)在DCM(6mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时，并且然后在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。该粗材料基于快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用DCM/DCM:甲醇(8:2)作为洗脱剂，DCM:甲醇(8:2)从0％至50％，产物在38％时被洗脱。获得440mg的产物(0.88mmol,91％)。
LC-MS：tR＝2.37min；m/z＝480
中间体14：((2S)-1-氰基-1-羟基-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0002880743370000372
在0℃，将硫酸氢钠(11.2g,107.0mmol,4当量)加入到中间体2(6.7g,26.9mmol,1.0当量)在1,4-二氧六环(150ml)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌持续10分钟，并且加入溶解于水(45mL)中的氰化钾(7.0g,107.0mmol,4当量)。将反应混合物在室温搅拌过夜。蒸发有机溶剂，加入水和EtOAc，并且将层分离。合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥并且在减压下浓缩。获得7.0g的产物(23.5mmol,94％收率)。
LC-MS：tR＝2.83min；m/z＝277
中间体15：(3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-羟基-4-苯基丁酸的合成
Figure BDA0002880743370000381
将中间体14(6.5g,23.5mmol,1.0当量)溶解于20ml的浓HCl溶液中并且回流持续1小时。然后，将粗混合物冷却并且用DCM洗涤。向水层加入NaOH 10N直至pH 11，并且用DCM洗涤。向水层加入Boc2O(5.6g,25.8mmol,1.1当量)。将混合物在室温搅拌过夜。在实现完全转化之后，将混合物用KHSO4酸化至pH 2并且用EtOAc萃取。将有机层蒸发，并且将产物用于下一步骤，而无需进一步纯化。获得5.1g(17.2mmol,73％收率，两步)。
LC-MS：tR＝1.62min；m/z＝296
中间体16：(3S)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸甲酯盐酸盐的合成
Figure BDA0002880743370000382
在0℃，将草酰氯(6ml,69.9mmol,4.0当量)缓慢地加入到中间体15(5.1g,17.26mmol,1.0当量)在MeOH(300ml)中的溶液。将混合物在室温搅拌过夜。将粗混合物蒸发并然后与MeOH共蒸发，并且将产物用于下一步骤，而无需进一步纯化。获得4.2g(17.26mmol,定量收率)。
LC-MS：tR＝1.58min-1.65min；m/z＝210
中间体17：3-((S)-2-(叔丁氧羰基)氨基)-3-环丙基丙酰胺基)-2-羟基-4-苯基丁 酸甲酯的合成
Figure BDA0002880743370000391
将中间体16(3g,12.21mmol,1.0当量)和DIPEA(8.53ml,48.8mmol,4当量)在DCM(15mL)中的溶液加入到(S)-2-(Boc-氨基)-3-环丙基丙酸(2.8g,12.21mmol,1当量)、EDC(3.51g,18.31mmol,1.5当量)和HOBt(2.8g,18.31mmol,1.5当量)在DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时。在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。粗产物基于快速色谱法(Biotage)来纯化，该快速色谱法使用DCM/DCM:甲醇(8:2)作为洗脱剂，DCM:甲醇(8:2)从0％至30％，产物在20％时被洗脱。获得2.2g的产物(5.23mmol,43％收率)。
LC-MS：tR＝2.64min；m/z＝421
中间体18：3-((S)-2-氨基-3-环丙基丙酰胺基)-2-羟基-4-苯基丁酸甲酯盐酸盐 的合成
Figure BDA0002880743370000392
将HCl在1,4-二氧六环中的4N溶液(26.2ml,105mmol,20当量)加入到中间体17(2.2g,5.23mmol,1.0当量)。将混合物在室温搅拌持续1h，并且然后蒸发至干。产物被用于下一步骤而无需进一步纯化。
LC-MS：tR＝1.78min；m/z＝321
中间体19：3-((S)-3-环丙基-2-(3-甲氧基苯甲酰胺基)丙酰胺基)-2-羟基-4-苯 基丁酸甲酯的合成
Figure BDA0002880743370000401
将中间体18(1.87g,5.23mmol,1.0当量)和DIPEA(3.66ml,3.86mmol,4.0当量)在DCM(10mL)中的溶液加入到3-甲氧基苯甲酸(0.955g,6.28mmol,1.2当量)、EDC(1.5g,7.85mmol,1.5当量)和HOBt(1.2g,7.85mmol,1.5当量)在DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时，并且然后在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。粗产物通过快速色谱法(Biotage)来纯化，该快速色谱法使用DCM/DCM:甲醇(8:2)作为洗脱剂，DCM:甲醇(8:2)从0％至50％，产物在25％时被洗脱。获得1g的产物(2.2mmol,42％)。
LC-MS：tR＝2.47min；m/z＝455
中间体20：3-((S)-3-环丙基-2-(3-甲氧基苯甲酰胺基)丙酰胺基)-2-羟基-4-苯 基丁酸的合成
Figure BDA0002880743370000402
将LiOH·H2O(111mg,2.64mmol,3.0当量)加入到溶解于13.5ml的混合物THF/MeOH/H2O(5/3/1)中的中间体19(400mg,0.88mmol,1.0当量)的溶液。在实现完全转化之后，在真空下除去溶剂。将粗材料溶解在1M HCl中，并且用DCM萃取，直到所有中间体20已经被萃取到有机层。将有机层蒸发至干。中间体20被用于下一步骤而无需进一步纯化。
LC-MS：tR＝1.85min；m/z＝441
中间体21：N-((2S)-3-环丙基-1-((3-羟基-4-(甲氧基氨基)-4-氧代-1-苯基丁- 2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002880743370000411
向中间体20(470mg,1.07mmol,1.0当量)和邻甲基羟胺盐酸盐(134mg,1.6mmol，1.5当量)在DCM(20mL)中的溶液加入EDC(307mg,1.6mmol,1.5当量)和HOBt(245mg,1.6mmol,1.5当量)和DIPEA(0.75ml,4.27mmol,4.0当量)。将反应混合物在室温搅拌持续1小时。在此时之后，加入0.1ml的DIPEA，并且将反应在室温搅拌过夜。加入0.5当量的EDC和HOBt两者，并且在室温继续搅拌持续2小时。在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液和柠檬酸水溶液5％洗涤。粗产物基于快速色谱法(Biotage)来纯化，该快速色谱法使用DCM/DCM:甲醇(8:2)作为洗脱剂，DCM:甲醇(8:2)从0％至50％，产物在20％时被洗脱。获得170mg的产物。(0.37mmol,35％收率)。
LC-MS：tR＝2.18min；m/z＝470
中间体22：N-((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2-基) 氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基苯甲酰胺
Figure BDA0002880743370000412
将中间体6(200mg,0.6mmol,1.0当量)和DIPEA(392μl,2.3mmol,4.0当量)在DCM(6mL)中的溶液加入到4-甲氧基苯甲酸(105mg,0.7mmol,1.2当量)、EDC(188mg,1.0mmol,1.7当量)和HOBt(150mg,1.0mmol,1.7当量)在DCM(6mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时，并且在真空下除去挥发物。粗品用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液(3x10ml)和柠檬酸水溶液5％(3x10 ml)洗涤。粗混合物通过快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/己烷：乙醇(8:2)作为洗脱剂，己烷：乙醇(8:2)从0％至100％，产物在35％时被洗脱。获得115mg的产物(0.2mmol,41％)。
LC-MS：tR＝2.35min；m/z＝482
中间体23：N-((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁-2-基) 氨基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺
Figure BDA0002880743370000421
将中间体6(200mg,0.5mmol,1.0当量)和DIPEA(350μl,2.0mmol,4.0当量)在DCM(6mL)中的溶液加入到2-甲氧基苯甲酸(95mg,0.6mmol,1.2当量)、EDC(169mg,0.9mmol,1.7当量)和HOBt(135mg,0.9mmol,1.7当量)在DCM(5mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌持续1小时，并且然后在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液(3x10 ml)和柠檬酸水溶液5％(3x10 ml)洗涤。粗产物基于快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/己烷：乙醇(8:2)作为洗脱剂，己烷：乙醇(8:2)从0％至100％，产物在35％时被洗脱。获得250mg(0.5mmol,100％)。
LC-MS：tR＝2.47min；m/z＝482。
实施例和比较实施例的制备
实施例1：N-((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代-1-苯基丁-2-基)氨基)- 4-甲基-1-氧代戊-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺
Figure BDA0002880743370000431
将5μl水加入到在DCM中的戴斯-马丁过碘烷15％溶液(640μl，0.3mmol，1.5当量)。然后将混合物加入到中间体7(100mg，0.2mmol，1.0当量)在DCM(4ml)中的溶液。将混合物在室温搅拌持续15分钟，并且然后在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤(2x10mL)。粗产物通过快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/己烷∶乙醇(8∶2)作为溶剂，己烷∶乙醇(8∶2)从0％至60％，产物在己烷∶乙醇(8∶2)30％时被洗脱。获得47.6mg的产物(0.1mmol，47％收率)。
LC-MS：tR＝2.63min；m/z＝480
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.75(dd，J＝26.3，5.1Hz，1H)，8.38(dd，J＝18.9，8.1Hz，1H)，8.33(d，J＝7.7Hz，1H)，7.49-7.31(m，3H)，7.27-7.15(m，5H)，7.09(m，1H)，5.22-5.13(m，1H)，4.54(m，1H)，3.80(s，3H)，3.13(m，1H)，2.88-2.77(m，1H)，2.76-2.70(m，1H)，1.67-1.55(m，1H)，1.53-1.43(m，1H)，1.29(m，1H)，0.91-0.78(m，6H)，0.65(m，2H)，0.61-0.53(m，2H).
实施例2：N-((S)-1-((4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代-1-苯基丁-2-基)氨基)-3-甲 基-1-氧代丁-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002880743370000432
将在DCM中的戴斯-马丁过碘烷15％溶液(3.13ml，1.51mmol，1.5当量)加入到中间体10(470mg，1mmol，1.0当量)和水(5μl)的溶液，中间体10溶解于预先制备的在DCM(10ml)中的溶液中。将混合物在室温搅拌持续15分钟。在此时之后，加入1，5当量的戴斯-马丁过碘烷15％溶液，并且混合物在室温搅拌持续另外的15分钟。在真空下除去挥发物，并且粗混合物用EtOAc萃取并且用1M NaOH溶液洗涤。将粗产物使用己烷磨碎并且过滤。获得352mg的产物(0.76mmol，76％收率)。
LC-MS：tR＝2.52min；m/z＝466
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.61(s，2H)，0.61-0.68(m，2H)，0.73(dd，J＝23.0，6.7Hz，3H)，0.87(dd，J＝6.7，1.8Hz，3H)，1.92-2.10(m，1H)，2.68-2.85(m，2H)，3.07-3.18(m，1H)，3.81(d，J＝1.1Hz，3H)，4.32(td，J＝8.3，5.6Hz，1H)，5.18-5.28(m，1H)，7.10(dddd，J＝8.0，2.8，1.9，1.1Hz，1H)，7.15-7.25(m，5H)，7.34-7.46(m，3H)，8.15(dd，J＝11.8，9.0Hz，1H)，8.45(dd，J＝14.4，7.2Hz，1H)，8.76(dd，J＝21.8，5.1Hz，1H).
实施例3：N-((S)-3-环丙基-1-((4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代-1-苯基丁-2-基) 氨基)-1-氧代丙-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002880743370000441
将在DCM中的戴斯-马丁过碘烷15％溶液(2.73ml，1.31mmol，1.5当量)加入到中间体13(420mg，0.88mmol，1.0当量)和5μl水的溶液，中间体13溶解于8ml预先制备的基于DCM(10ml)的溶液中。将混合物在室温搅拌持续15分钟。在此时之后，加入1.5当量的戴斯-马丁过碘烷15％溶液，并且混合物在室温搅拌持续另外的15分钟。在真空下除去挥发物，并且粗混合物用EtOAc萃取并且用1M NaOH溶液洗涤。将粗产物使用己烷磨碎并且过滤。获得274mg的产物(0.57mmol，65％收率)。
LC-MS：tR＝2.57min；m/z＝478
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ-0.01-0.20(m，2H)，0.25-0.43(m，1H)，0.54-0.70(m，4H)，0.70-0.79(m，1H)，1.18-1.35(m，1H)，1.47-1.68(m，2H)，2.69-2.88(m，2H)，3.12(td，J＝13.5，4.2Hz，1H)，3.80(d，J＝1.2Hz，3H)，4.55(td，J＝8.7，5.1Hz，1H)，5.20(dtd，J＝9.0，7.8，4.1Hz，1H)，7.08-7.12(m，1H)，7.16-7.25(m，5H)，7.34-7.46(m，3H)，8.29-8.45(m，2H)，8.75(dd，J＝27.7，5.1Hz，1H).
实施例4：N-((S)-3-环丙基-1-((4-(甲氧基氨基)-3，4-二氧代-1-苯基丁-2-基) 氨基)-1-氧代丙-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002880743370000451
将在DCM中的戴斯-马丁过碘烷15％溶液(0.827ml，0.4mmol，1.5当量)以4份加入到中间体21(170mg，0.36mmol，1.0当量)在DMSO(2.5ml)中的溶液，在加入之间搅拌混合物持续10分钟。将混合物在室温搅拌持续2小时，并且然后在真空下除去挥发物。粗混合物用EtOAc萃取并且用1M NaOH溶液洗涤。蒸发挥发物，并且粗混合物基于反相色谱法(Biotage)来纯化，该反相色谱法使用H2O/乙腈作为溶剂，乙腈从0％至100％，产物在20％时被洗脱。获得14.2mg的产物(0.03mmol，8％收率)。
LC-MS：tR＝2.03min；m/z＝468
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ-0.04-0.23(m，1H)，0.34(ddd，J＝17.7，9.1，5.5Hz，1H)，1.43-1.68(m，1H)，2.52(d，J＝1.9Hz，1H)，2.67-2.83(m，1H)，3.10-3.22(m，2H)，3.65(d，J＝13.1Hz，2H)，3.79(d，J＝2.2Hz，3H)，4.53(tt，J＝9.0，4.6Hz，1H)，5.32(s，1H)，6.95-7.33(m，6H)，7.33-7.46(m，3H)，8.09(d，J＝72.5Hz，1H)，8.34(dd，J＝26.3，8.3Hz，1H).
比较实施例5：N-((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代-1-苯基丁-2-基)氨 基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基苯甲酰胺
Figure BDA0002880743370000461
将5μL水加入到在DCM中的戴斯-马丁过碘烷15％溶液(744μl，0.3mmol，1.5当量)。然后将混合物加入到中间体22(115mg，0.2mmol，1.0当量)在DCM(5ml)中的溶液。将混合物在室温搅拌持续15分钟。在真空下除去挥发物。粗品用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤(2x10mL)。粗品基于快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/己烷∶乙醇(8∶2)作为溶剂，己烷∶乙醇(8∶2)从0％至30％，产物在20％时被洗脱。获得31.2mg(0.2mmol，27％)。
LC-MS：tR＝2.60min；m/z＝480
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.74(dd.J＝25.5，5.1Hz，1H)，8.33(dd，J＝34.8，7.4Hz，1H)，8.19(dd，J＝14.2，8.4Hz，1H)，7.88-7.82(m，2H)，7.24-7.14(m，5H)，7.03-6.95(m，2H)，5.17(m，1H)，4.52(m，1H)，3.81(s，3H)，3.12(m，1H)，2.91-2.74(m，1H)，2.74-2.65(m，1H)，1.60(m，1H)，1.48(m，1H)，1.30(m，1H)，0.92-0.78(m，6H)，0.68-0.61(m，2H)，0.58(m，2H).
比较实施例6：N-((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代-1-苯基丁-2-基)氨 基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺
Figure BDA0002880743370000462
将5μL水加入到在DCM中的戴斯-马丁过碘烷15％溶液(1.6ml，0.7mmol，1.5当量)。然后将混合物加入到中间体23(250mg，0.5mmol，1.0当量)在DCM(10ml)中的溶液。将混合物在室温搅拌持续15分钟。在真空下除去挥发物，并且粗混合物用EtOAc萃取并且用饱和NaHCO3溶液洗涤(2x10mL)。粗产物基于快速色谱法(ISCO Rf)来纯化，该快速色谱法使用己烷/己烷∶乙醇(8∶2)作为溶剂，己烷∶乙醇(8∶2)从0％至30％，产物在20％时被洗脱。获得89.2mg的产物(0.2mmol，35％)。
LC-MS：tR＝2.68min；m/z＝480
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.78(dd，J＝19.7，5.1Hz，1H)，8.51(dd，J＝32.3，7.5Hz，1H)，8.26(dd，J＝8.2，6.1Hz，1H)，7.79(m，1H)，7.49(m，1H)，7.25-7.21(m，4H)，7.20-7.13(m，2H)，7.05(m，1H)，5.24-5.17(m，1H)，4.63-4.55(m，1H)，3.86(s，3H)，3.15(m，1H)，2.85-2.75(m，1H)，2.75-2.70(m，1H)，1.66-1.46(m，2H)，1.36(m，1H)，0.91-0.77(m，6H)，0.67-0.62(m，2H)，0.61-0.55(m，2H).
生物学数据
用于确定抑制钙蛋白酶1的能力的测定
钙蛋白酶1的活性通过使用来自Promega的钙蛋白酶-Glo蛋白酶试剂盒来测量。在具有透明底部的384孔黑板中进行测定。将在10mM HEPES和1mM EDTA水溶液中的5μl的化合物与15μL的16ng/mL钙蛋白酶1(Sigma Aldrich)的溶液一起孵育持续2分钟，并且然后向每个孔加入提供在试剂盒中的20μL的钙蛋白酶-GloTM试剂。由钙蛋白酶1诱导的底物裂解引起的发光在Hamamatsu FDSS 7000读取器中被测量，并且数据由最大发光峰计算。钙蛋白酶抑制由下式计算：
％抑制＝(LT-LB)*100/(LC-LB)；
其中LT是在测试化合物中观察到的发光，LB是从没有钙蛋白酶1的孔中获得的空白发光，并且LC是在不存在抑制剂的情况下在包括钙蛋白酶1的对照孔中观察到的发光。
使用至少6种浓度来测试所有化合物，以允许计算IC50(将钙蛋白酶1的活性抑制50％的浓度)。
在所有测定中，钙蛋白酶抑制蛋白和ALLN作为对照抑制剂被包括。
化合物 钙蛋白酶1抑制活性IC<sub>50</sub>(nM)
实施例1 0.03
实施例2 2.2
实施例3 0.008
实施例4 7.1
比较实施例5 255
比较实施例6 110

Claims (32)

1.一种式(I)的化合物：
Figure FDA0002880743360000011
其中
R1选自由以下组成的组：C1-C6烷基和C3-C6环烷基，
R2选自由以下组成的组：H和C1-C6烷基，
R3选自由以下组成的组：C1-C6烷氧基和C3-C6环烷基，
或其药学上可接受的盐或立体异构体，
或包含所述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物，用于治疗和/或预防选自由以下组成的组的疾病或状况：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
2.根据权利要求1所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中
R1选自由以下组成的组：C1-C3烷基和C3-C5环烷基，
R2选自由以下组成的组：H和C1-C3烷基，
R3选自由以下组成的组：C1-C3烷氧基和C3-C5环烷基。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中R1选自由以下组成的组：甲基、异丙基和环丙基。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中R2选自由以下组成的组：H和甲基。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中R3选自由以下组成的组：环丙基和甲氧基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中所述式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002880743360000021
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中所述式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002880743360000022
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中所述式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002880743360000031
或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中所述疾病或状况是由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤。
10.根据权利要求9所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中所述心脏损伤是在心肌梗塞之后的重塑。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中所述神经退行性紊乱选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病；和/或癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、结肠直肠癌和白血病。
12.根据权利要求1至8中任一项所述的用于使用的式(I)的化合物或药物组合物，其中所述纤维化疾病选自由以下组成的组：心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化和腹膜后纤维化。
13.根据权利要求1至8中任一项所定义的式(I)的化合物或包含所述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物用于制造用于治疗和/或预防疾病或状况的药物的用途，所述疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述疾病或状况是由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述心脏损伤是在心肌梗塞之后的重塑。
16.根据权利要求13所述的用途，其中所述神经退行性紊乱选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病；和/或癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、结肠直肠癌和白血病。
17.根据权利要求13所述的用途，其中所述纤维化疾病选自由以下组成的组：心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化和腹膜后纤维化。
18.治疗和/或预防疾病或状况的方法，所述疾病或状况选自由以下组成的组：由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤；神经退行性紊乱；疟疾；糖尿病肾病；由HIV病毒诱导的神经毒性；癌症；以及纤维化疾病；所述方法包括将治疗有效量的根据权利要求1至8中任一项所定义的式(I)的化合物或包含所述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物施用于有相应需要的受试者。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述疾病或状况是由梗塞、具有或没有再灌注的局部缺血引起的心脏损伤。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述心脏损伤是在心肌梗塞之后的重塑。
21.根据权利要求18所述的方法，其中所述神经退行性紊乱选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、急性自身免疫性脑炎和克-雅病；和/或癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、结肠直肠癌和白血病。
22.根据权利要求18所述的方法，其中所述纤维化疾病选自由以下组成的组：心脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化和腹膜后纤维化。
23.一种式(II)的化合物：
Figure FDA0002880743360000051
其中
R1a选自由以下组成的组：C1-C6烷基和C3-C6环烷基，
R2a选自由以下组成的组：H和C1-C6烷基，
R3a是C3-C6环烷基，
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
24.根据权利要求23所述的式(I)的化合物，其中
R1选自由以下组成的组：C1-C3烷基和C3-C5环烷基，
R2选自由以下组成的组：H和C1-C3烷基，
R3是C3-C5环烷基。
25.根据权利要求23或24中任一项所述的式(II)的化合物，其中R1选自由以下组成的组：甲基、异丙基和环丙基。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的式(II)的化合物，其中R2选自由以下组成的组：H和甲基。
27.根据权利要求23至26中任一项所述的式(II)的化合物，其中R3是环丙基。
28.根据权利要求23至27中任一项所述的式(II)的化合物，所述式(II)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002880743360000061
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
29.根据权利要求23至28中任一项所述的式(II)的化合物，所述式(II)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002880743360000062
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
30.根据权利要求23至29中任一项所述的式(II)的化合物，所述式(II)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0002880743360000071
或其药学上可接受的盐。
31.药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求23至30中任一项所定义的式(II)的化合物和药学上可接受的赋形剂。
32.根据权利要求23至30中任一项所定义的式(II)的化合物或根据权利要求31定义的药物组合物，用于医疗。
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