CN112367861A

CN112367861A - 包含明串珠菌属菌株的用于改善肠道功能的组合物

Info

Publication number: CN112367861A
Application number: CN201980041190.2A
Authority: CN
Inventors: 金润根; 廉圭镇
Original assignee: Coenbio Co ltd
Current assignee: Coenbio Co ltd
Priority date: 2018-06-19
Filing date: 2019-06-12
Publication date: 2021-02-12
Also published as: US20210268038A1; KR20190143337A; KR102173168B1; JP2021527414A

Abstract

本发明涉及用于改善肠道功能的贺氏明串珠菌菌株及其用途，本发明的贺氏明串珠菌菌株可以有效地改善肠道功能，因此,期待可适用于包含功能性食品组合物的各种食品组合物、药学组合物、动物饲料组合物等多种领域。

Description

包含明串珠菌属菌株的用于改善肠道功能的组合物

技术领域

本发明涉及一种包含明串珠菌属菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物的用于改善肠道功能的组合物。

背景技术

肠道(intestine)由小肠和大肠组成，是负责消化、吸收、排泄的主要消化器官，近来，由于摄取加工肉类的增加、吸烟、缺乏运动等原因，肠道中的炎症反应增加，结果，结肠癌、溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠炎、小肠癌等各种与肠道有关的疾病正在增加。结肠癌(colon cancer)是一种发生在大肠中的肿瘤，据报道在韩国结肠癌的发病率为每10万人中有45人，世界排名第一。由于这种结肠癌在发展为癌症的阶段不容易治疗，因此通过定期检查来预防是最好的对策。另外，克罗恩病(Crohn's disease)、溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis)等的炎症性肠病(inflammatory bowel disease；IBD)为原因不明的慢性炎症疾病，其发生在大肠或消化道的任何地方，是最近发生率剧增的疾病之一。是在20至40岁的年轻人中也经常发生的疾病，但目前缺乏有效的治疗方法(韩国专利授权号10-0481300)。

随着由此类肠道疾病引起的弊端增加，最近不仅疾病治疗剂市场，而且对可以改善肠道功能的功能改善用产品的关心度及消费者的需求也在增加。

发明内容

本发明是为解决如上所述的现有技术问题而提出的，其目的在于，提供一种包含明串珠菌属菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物的用于改善肠道功能的组合物等。

然而，本发明所要达成的技术问题不限于上述问题，本领域的普通技术人员从以下记载将明确地理解未提及的其他问题。

本发明提供一种用于改善肠道功能的食品组合物，其中，包括贺氏明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物。

而且，本发明提供一种用于预防或治疗肠道相关疾病的药学组合物，其中，包含贺氏明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物作为有效成分。

在本发明的一具体例中，其特征在于，所述培养液可以包含来源于贺氏明串珠菌的细胞外囊泡(extracellular vesicle)，其可以天然地从贺氏明串珠菌分泌，或者可以附加添加。所述细胞外囊泡可从贺氏明串珠菌的培养液、或包含贺氏明串珠菌的食品或通过加热或超声波死灭贺氏明串珠菌后获得的上清液中分离，可以为自然或人为地分泌，但不限于此。

在本发明的其他具体例中，所述组合物可以具有预防或改善肠道相关疾病的效果，所述肠道相关疾病优选为不动杆菌属(Acinetobacter)及假单胞菌属(Pseudomonas)细菌的减少及/或与肠道的炎症有关的疾病，更优选为结肠癌、溃疡性结肠炎、克罗恩病、炎症性肠病等，只要是在肠道发生的疾病，不限于此。

在本发明的其他另一具体例中，所述贺氏明串珠菌的一日给药量优选为5×10⁴至5×10¹⁰CFU(菌落形成单位)/mL，只要是给药量不引起副作用，就不限于此。

在本发明的其他另一具体例中，所述组合物优选还可以包括明串珠菌(Leuconostoc)属、乳杆菌(Lactobacillus)属、肠球菌(Enterococcus)属、短芽孢杆菌(Brevibacillus)属、乳球菌(Lactococcus)属、丙酸杆菌(Propionibacterium)属或双歧杆菌(Bifidobacterium)属的菌株，只要是周知为可包含于食品组合物的菌株，不限于此。

在本发明的其他另一具体例中，所述组合物还可以包括食品学上可接受的载体或药学上可接受的载体。

而且，本发明提供一种肠道相关疾病的预防、改善或治疗方法，其中，包括对个体给药包含贺氏明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物作为有效成分的组合物的步骤。

而且，本发明提供一种组合物的肠道相关疾病的预防、改善或治疗用途，其中，包含贺氏明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物作为有效成分。

发明效果

本发明涉及用于改善肠道功能的贺氏明串珠菌(Leukonostoc holzapfelii)菌株及其用途，由于本发明的贺氏明串珠菌菌株可以在无副作用的状态下有效地改善肠道功能，而且，可以通过摄入有效地减轻炎症，因此，具有预防及/或治疗肠道疾病尤其炎症性肠道疾病的效果，所以，期待适用于包括功能性食品组合物的各种食品组合物、药学组合物、动物饲料用组合物等各种组合物。

附图说明

图1是示出根据本发明的一实施例的结肠癌、溃疡性结肠炎或克罗恩病患者的粪便细菌宏基因组结果的图。

图2是示出确认根据本发明的一实施例的贺氏明串珠菌菌株的肠道功能改善效果的结果的图。

图3是示出确认根据本发明的一实施例的来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡的细胞毒性的结果的图。

图4是示出确认根据本发明的一实施例的来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡是否诱导炎症反应的结果的图。

图5是示出确认根据本发明的一实施例的来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡的抗炎效果的结果的图。

具体实施方式

本发明的贺氏明串珠菌菌株通过摄入或给药该菌株来增加体内有益细菌，从而，不仅在无副作用的情况下可以有效地改善肠道功能，而且，通过摄入有效地抑制炎症的发生，由于显示肠道内不动杆菌属(Acinetobacter)及假单胞菌属(Pseudomonas)细菌的减少及预防或治疗肠道疾病的效果，因此，期待可以有效地使用于药物、食品、饲料等各种领域。

在本说明书中，所谓“贺氏明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)”是在形态学上为革兰氏阳性菌，作为贺氏明串珠菌Ceb-kc-003，于2016年4月11日保藏在韩国微生物保藏中心，保藏号为KCCM11830P，并且16s rDNA的存在，与现有的贺氏明串珠菌具有99％的同源性。本发明的贺氏明串珠菌通常可以通过芽孢杆菌属或明串珠菌属菌株的培养方法来培养，培养基可以使用天然培养基或合成培养基。作为培养基的碳源，例如可以使用葡萄糖、蔗糖、糊精、甘油、淀粉等，作为氮源可以使用蛋白胨、肉类提取物、酵母提取物、干酵母、大豆、铵盐、硝酸盐及其他含有机或无机氮的化合物，但不限于这些成分。作为包含于培养基的无机盐，可以使用镁、锰、钙、铁、钾等，但不限于此。除了所述碳源、氮源及无机盐的成分之外，还可将氨基酸、维生素、核酸及与其相关的化合物添加到培养基中。本发明的菌株的培养温度条件是在20至40℃的温度范围内可以培养12小时至4天。此外，在培养基中添加小黑豆、熟地黄、甘草、川芎、杜仲、肉桂、当归、石菖蒲、何首乌、侧柏叶、生姜、柏子仁、川椒、升麻、蔓荆子等中药制剂、其提取物或其混合物进行培养，通过使用该培养物，可以更加改善本菌株的改善肝或肠道功能的效果。

在本说明书中，“培养液(culture broth)”可以为包含菌体的培养原液，并且可以是去除或浓缩培养上清液的菌体(浓缩物)。或者，可以为包含来源于贺氏明串珠菌的细胞外囊泡的培养上清液。所述培养液的组成不仅包含培养通常的贺氏明串珠菌菌株所需的成分，还可以附加包含对贺氏明串珠菌菌株的生长起上升作用的成分，根据此的组成可通过本领域的普通技术人员容易选择。所述细胞外囊泡(extracellular vesicle)是指由各种细菌分泌的纳米尺寸的膜构成的结构，在本发明中，其可以从贺氏明串珠菌菌株的培养液或包含贺氏明串珠菌菌株的食品中分离，可以为自然或人工分泌的，但不限于此。从培养液或食物中分离细胞外囊泡的方法，只要可以分离细胞外囊泡就没有特别限制。例如，可通过离心分离、超高速离心分离、通过过滤器的过滤、凝胶过滤色谱法、预流电泳或毛细管电泳等方法以及它们的组合分离细胞外囊泡，还可以包括洗涤清除杂质及浓缩所获得的细胞外囊泡的过程。

在本说明书中，“组合物(composition)”可以为包含贺氏明串珠菌作为有效成分的药物、食品、动物饲料用、药学、饮料用、乳酸菌制剂等，只要是包含本发明的贺氏明串珠菌菌株的组合物就没有特别限制。所述药学组合物可以为准药物或药物制剂，所述食品组合物可以为食品、保健食品、保健补品或保健功能食品，但不限于此。

而且，菌株的状态可以为液体状态或干燥状态，干燥方法可以为空气干燥、自然干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等，但不限于此。

在本说明书中，“预防(prevention)”是指通过施用根据本发明的组合物，抑制肝或肠道疾病等的疾病或延迟发病的所有行为。

在本说明书中，“治疗(treatment)”是指通过施用根据本发明的组合物，肝脏或肠道疾病的症状好转或有利地变更的所有行为。

在本说明书中，“改善(improvement)”是与所治疗的状态有关的参数，如指至少降低症状的程度的所有行为。

在本说明书中，“个体(individual)”是指需要预防或治疗疾病的对象，具体指人类或非人类的灵长类、小鼠(mouse)，大鼠(rat)、狗、猫、马、牛等哺乳动物。

在本发明中，所述食品组合物可以用于各种食品类，例如饮料、口香糖、茶、维生素复合制剂、乳酸菌复合制剂、保健食品类、功能性食品类等，可以以丸剂、粉剂、颗粒剂、针剂、片剂、胶囊或饮料形态使用。此时，食品或饮料中的贺氏明串珠菌菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物的量相对于本发明的食品组合物的食品总重量可以添加0.01至15重量％，在健康饮料组合物的情况下，基于100mL，可以以0.02至10g，优选以0.3至1g的比例添加。

本发明的食品组合物可以包含本领域中常规的食品添加剂，例如可以包括香味剂、调味剂、着色剂、填充剂、稳定剂等。根据本发明的食品组合物作为必需成分，除了所述贺氏明串珠菌菌株、其培养液、其地浓缩物或其干燥物之外对添加的成分没有特别限制，作为附加成分可以与常规的食品一起含有各种香味剂或天然碳水化合物等。作为所述天然碳水化合物的例为常规的糖，如葡萄糖、果糖等的单糖；麦芽糖、蔗糖等的二糖；糊精、环糊精等的多糖；以及木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等的糖醇。作为除上述之外的香味剂，可以有利地使用天然香味剂(索马甜、甜菊提取物(例如莱包迪苷A(levaudioside A)、甘草苷等)及合成香味剂(糖精、天冬甜素等)。所述天然碳水化合物的比例，对每100mL的本发明的组合物，通常为约1至20g，优选为约5至12g。

除此之外，本发明的食品组合物，可以含有各种营养剂、维生素、矿物质(电解质)、合成调味剂及天然调味剂的调味剂、着色剂及增稠剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、防护性胶质增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇类、用于软饮料的碳化剂等。这些成分可以单独或组合使用。这些添加剂的比例不是很重要，但是通常在每100重量份的本发明的组合物中选择0至约20重量份的范围内。

在本说明书中，“药学组合物(pharmaceutical composition)”的特征在于，可以为胶囊、片剂、颗粒、注射剂、软膏剂、散剂或饮料形态，所述药学组合物的对象为人。所述药学组合物不限于此，可按照常规方法制成粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、水性悬浮液等的口服剂型、外用药、栓剂和灭菌注射溶液的形态制剂化使用。本发明的药学组合物可以包含药学上可接受的载体。药学上可接受的载体，在口服给药时可以使用粘合剂、润滑剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、悬浮剂、色素、香料等，注射剂的情况下，可以混合缓冲剂、保存剂、止痛剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等而使用，在局部给药的情况下，可以使用基质、赋形剂、润滑剂、保存剂等。本发明的药学组合物的制剂可以与如上所述的药学上可接受的载体混合多样地制备。例如，在口服给药时，可以制成片剂、锭剂、胶囊、酏剂(elixir)、混悬剂、糖浆、干胶片等的形态，在注射剂的情况下，可以制成单位给药安瓿或多次给药形态。可以制成其他、溶液、悬浮剂、片剂、胶囊、长效制剂。

另外，作为适合制剂化的载体、赋形剂及稀释剂的例，可以使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油等。此外，还可以包含填充剂、抗凝剂、润滑剂、保湿剂、香料、乳化剂、防腐剂等。

根据本发明的药学组合物的给药途径不限于此，包括口服给药、静脉给药、肌内给药、动脉内给药、髓内给药、鞘内给药、心脏内给药、经皮给药、皮下给药、腹腔内给药、鼻腔内给药、肠内给药、局部给药、舌下给药或直肠给药。优选口服给药或非口服给药。本发明中使用的术语“非口服”包括皮下给药、皮内给药、静脉内给药、肌内给药、关节内给药、滑液囊内给药、胸骨内给药、鞘内给药、病变内给药及颅内注射或输注技术。本发明的药学组合物还可以栓剂的形态用于直肠给药。

本发明的药学组合物可以根据包括所使用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般的健康、性别、膳食、给药时间、给药途径、排出率、药物配合以及所要预防或治疗的特定疾病的重症在内的多种要素进行多种变化，所述药学组合物的给药量根据患者的状态、体重、疾病的程度、药物形态、给药途径及期限而不同，但可以由本领域技术人员进行适当的选择，一天可以给药0.0001至50mg/kg或0.001至50mg/kg。每天可以给药一次，或者也可以分多次给药。所述给药量不会以任何方式对本发明的范围进行限定。本发明的药学组合物可以剂型化为丸剂、糖衣片、胶囊、液剂、凝胶、糖浆、浆料、悬浮剂。

本发明的贺氏明串珠菌的施用量或摄入量为，例如将5×10⁴至5×10⁸CFU/mL的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)菌株，优选以1×10⁶至1×10⁸CFU/ml的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)的量，每次30至100mL每天给药1次至4次。在一例中，以1×10⁶至1×10⁸CFU/ml的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)的量，每次50mL每天给药2次至4次。更具体地，以1×10⁶至1×10⁸CFU/ml的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)的量，每次50至100mL每天给药1次至2次。更具体地，将1×10⁶至1×10⁸CFU/ml的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)，早餐30分钟前给药一次50至100mL，晚餐30分钟前或睡觉前给药一次50至100mL。但是，所述施用量或摄入量可以根据个人的体重、年龄、性别、健康状况、要治疗、预防或改善的主要症状、给药时间、给药方法、严重程度等而不同。

下面，提出以下实施例以帮助理解本发明。然而，以下实施例是为了更容易理解本发明而提供的，本发明的内容不限定以下实施例。

实施例

实施例1：肠道相关疾病患者的粪便细菌宏基因组分析

为了肠道相关疾病患者的粪便中细菌的宏基因组分析，从38名结肠癌患者和64名溃疡性结肠炎患者、65名克罗恩病患者中采集了粪便。作为对照组利用了74名正常人的粪便。为了从粪便去除细菌，先用医用纱布去除粪便内存在的大粒。然后，将去除大粒的粪便放入10mL的试管中，在4℃的温度下以3500×g离心分离10分钟分离沉淀物(pellet)和上清液(supernatant)，将分离的沉淀物和上清液添加到每个新的10mL的试管中。对上清液使用0.22μm的过滤器除去细菌和异物后转移至离心过滤器(Centrifugal filter)50kD，在4℃的温度下以1,500×g离心分离15分钟去除小于50kD的物质，然后浓缩至总容量为10mL。然后，再次使用0.22μm过滤器干净地除去细菌和异物后，使用90ti型转子在4℃的温度下以150,000×g超高速离心分离3小时。超高速离心分离后除去上清液，将沉淀物重悬于磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)中并保存。然后，将100μL的重悬沉淀物添加至新的试管中，在100℃的加热块(heat block)加热，使来源于细菌的细胞外囊泡(extracellular vesicle)内部的DNA释放到脂质外。然后，在用冰冷却之后，在4℃的温度下以10,000×g离心分离30分钟以仅分离上清液，然后使用分光光度计(Nanodrop)定量上清液中的DNA量。为了确认从粪便分离的DNA中是否存在来源于细菌的DNA，使用表1所记载的16s rDNA引物进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction)来扩增DNA。

【表1】

经扩增的DNA使用Illumina MiSeq测序仪进行碱基序列分析，并以标准流程图格式(SFF)文件输出结果。对所输出的SFF文件使用GS FLX软件(v2.9)转换为碱基序列文件(fasta)和核苷酸质量分数(nucleotide quality score)文件，以确认阅读的信用评级。除去窗口(window 20bps)平均碱基响应(base call)准确度(accuracy)小于99％(Phred质量分数(Phred quality score)<20)的部分，仅利用阅读的长度为300bps以上的部分(Sickle版本1.33)。为了分析结果，使用UCLUST和USEARCH根据碱基序列相似性进行聚类，并使用BLASTN和GreenGenes的16s rDNA碱基序列数据库(108,453个序列)分析具有97％以上的碱基序列相似性的细菌(QIIME)，进行操作分类单元(operational Taxonomy Unit；OTU)分析。为了统计分析，使用了t-test，当各组的平均分布比例不同2倍以上且p值为0.05以下时，使用t检验选择在对照组和实验组中以明显不同的比例存在的细菌。将其结果示于图1及表2。

【表2】

如图1及表2所示，确认与对照组(正常人)相比，患有肠道疾病的患者，即结肠癌、溃疡性结肠炎及克罗恩病患者中不动杆菌属(Acinetobacter)及假单胞菌属(Pseudomonas)细菌明显减少。通过以上结果，可以确认通过粪便中的不动杆菌属及假单胞菌属细菌的减少可以诊断是否为肠道疾病。

实施例2：贺氏明串珠菌菌株的粉末和培养液的制备

为了确认贺氏明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)菌株的肠道或肝功能的改善能力，获得保藏在韩国微生物保藏中心的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003(KCCM11830P)菌株，在加入3％氯化钠的BHI固体培养基中进行培养。通过冷冻干燥培养的菌株来制备贺氏明串珠菌的粉末，为制备培养液，将2kg的葡萄糖、1.5kg的全脂奶粉及0.05kg的酵母提取物添加到100L的纯净水后，在121℃的高温及高压下灭菌15分钟至30分钟后，将其冷却至室温。并且，在无菌状态下接种0.2至0.4L的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003菌株后，在35℃左右的温度下培养2～3天，制备贺氏明串珠菌培养物。

实施例3：确认贺氏明串珠菌菌株的肠道功能改善效果

为了确认贺氏明串珠菌菌株的肠道功能改善效果，招募了20名志愿者(男8名，女12名)，志愿者的平均年龄为32.0±5.4岁，其中，男性的平均年龄为31.8±3.6岁(26岁至37岁)，女性的平均年龄为32.2±6.3岁(21岁至47岁)。将1×10⁶至1×10⁸CFU(colony formingunit：菌落形成单位)/mL的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003菌株培养液给对象每天口服两次，共4周。以与实施例1相同的方法，在临床试验开始当天(摄入前)和4周后(摄入后)采集志愿者的粪便，并确认粪便中包含的不动杆菌属及假单胞菌属细菌的变化。将结果示于图2及表3。

【表3】

如图2及表3所示，确认了摄入贺氏明串珠菌菌株后，结肠癌、溃疡性结肠炎及克罗恩病的生物标志的不动杆菌属及假单胞菌属细菌的数量明显增加。通过以上结果可知，通过摄入贺氏明串珠菌菌株可以抑制诱发结肠癌、溃疡性结肠炎、克罗恩病等的肠道疾病，而且通过肠道内有益细菌的增加可以预防、改善及/或抑制肠道疾病的症状。

除了所述贺氏明串珠菌菌株之外，将包含肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)KCCM11827P、清酒乳酸菌(Lactobacillussakei sacui)KCCM11841P、屎肠球菌(Enterococcus Faecium)KCCM11909P、茹氏短芽孢杆菌(Brevibacillus reuszeri)KCCM11911P、及发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)KCCM11910P的混合菌株粉末给20名志愿者相同地经口给药4周，一天两次，并确认粪便中包含的细菌的变化。其结果可以确认与单独给药贺氏明串珠菌菌株的情况相比，粪便中不动杆菌属及假单胞菌属细菌的数量更加增加。

实施例4：确认来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡的抗炎效果

4.1.来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡的细胞毒性的确认

为了确认来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡的细胞毒性，准备以与实施例2相同的方法准备的贺氏明串珠菌Ceb-kc-003菌株培养液。并且，利用孔径为0.45μm的瓶顶真空过滤器(Corning)获得从培养液中去除细胞的上清液。再次将获得的上清液通过0.22μm的瓶顶真空过滤器(Corning)去除残留在上清液中的细胞残留物，并分离来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡。将所分离的细胞外囊泡使用磷酸盐缓冲液制备成0.01、0.1、1及10μg/mL的浓度之后，对小鼠腹腔巨噬细胞(Raw264.7)处理，培养12小时后测量细胞存活率(cell viability)。细胞存活率是用锥虫蓝对培养的细胞染色后，使用Neubauer槽测量存活细胞的数量，并以阴性对照组中存活细胞数的百分比计算细胞存活率。向阴性对照组(negative control；NC)，添加磷酸盐缓冲液进行培养，向阳性对照组(positive control；PC)添加1μg/mL的来源于大肠杆菌(Escherichia coli)的细胞外囊泡(E.coli EV)进行培养。为了分离细胞外囊泡，将大肠杆菌接种到LB(Luria-Bertani)培养基中，并在37℃的温度下以200rpm的速度培养24小时。另外，使用孔径为0.45μm的瓶顶真空过滤器(Corning)获得去除细胞的上清液。再次将获得的上清液通过0.22μm的瓶顶真空过滤器(Corning)去除残留在上清液的细胞残留物，并分离大肠杆菌的细胞外囊泡来准备。将结果示于图3。

如图3所示，确认到来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡在高浓度下也没有表现出细胞毒性，因此，可以稳定地使用。

4.2.确认来源于贺氏明串珠菌的细胞外囊泡是否诱导炎症反应

为了确认来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡是否诱导细胞的炎症反应，将与实施例4.1相同的方法准备的来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡使用磷酸盐缓冲液制备成0.01、0.1、1及10μg/mL的浓度后，对Raw264.7细胞进行处理，培养12小时后，通过ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)确认炎症细胞因子的所谓IL-6及TNF-α的分泌量。向阴性对照组添加磷酸盐缓冲液进行培养，向阳性对照组添加1μg/mL的来源于大肠杆菌的细胞外囊泡(E.coli EV)进行培养。将结果示于图4。

如图4所示，确认阳性对照组的所谓来源于大肠杆菌的细胞外囊泡可明显增加Raw264.7细胞系的炎症细胞因子的分泌量，但对于来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡而言，仅在用10μg/mL的高浓度处理时，才稍微增加。

4.3.确认来源于贺氏明串珠菌的细胞外囊泡的抗炎效果

为了确认来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡的抗炎效果，将与实施例4.1相同的方法准备的来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡使用磷酸盐缓冲液制备成0.01μg/mL、0.1μg/mL、1μg/mL、1μg/mL的浓度，并对Raw264.7细胞系进行处理后培养12小时，然后以1μg/mL的浓度进一步处理来源于大肠杆菌的细胞外囊泡，并培养6小时后使用ELISA确认IL-6及TNF-α的分泌量。对对照组(Cont)使用现有周知为具有抗炎效果的1μg/mL的来源于植物乳杆菌(Lactococcus plantarum)的细胞外囊泡以相同的方法进行实验。将其结果示于图5。

如图5所示，确认到来源于贺氏明串珠菌培养液的细胞外囊泡的预处理可以有效地预防和抑制炎症反应。

通过以上结果，可以确认到由于本发明的贺氏明串珠菌菌株没有细胞毒性，因此，不仅可以稳定地使用，而且，通过肠道功能的改善效果，可以有效地预防或抑制相关疾病的发生。另外，可以确认到通过摄入贺氏明串珠菌菌株、培养液或来源于培养液的细胞外囊泡可以有效地预防发生肠道的炎症发生，从而，可以显著降低溃疡性结肠炎、克罗恩病等炎症性肠道疾病的发生率。另外，可以确认到除了贺氏明串珠菌菌株之外，还可以混合具有已知的其他功效的物质、化合物、菌株等来获得更加改善的效果。

以上对本发明的说明仅出于示例性目的，本发明所属领域的普通技术人员在不改变本发明的技术精神或必须特征的情况下可容易变形为其他的具体形态。因此，应理解上述实施例是在所有方面都是示例性的，而非限制性的。

工业利用可能性

本发明涉及一种用于改善肠道功能的贺氏明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)菌株及其用途，本发明的贺氏明串珠菌菌株在无副作用的情况下不仅可以有效地改善肠道功能，而且，通过摄入可以有效地减少炎症，因此，可以广泛用于肠道疾病尤其与炎症有关的肠道疾病的改善、预防及/或治疗。

Claims

1.一种用于改善肠道功能的食品组合物，其特征在于，包括贺氏明串珠菌菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物。

2.根据权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，所述培养液包括来源于贺氏明串珠菌的细胞外囊泡。

3.根据权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，所述组合物具有预防肠道疾病的效果。

4.根据权利要求3所述的食品组合物，其特征在于，所述肠道疾病为与肠道内不动杆菌属及假单胞菌属细菌的减少或炎症性肠道疾病有关的疾病。

5.根据权利要求4所述的食品组合物，其特征在于，所述疾病为结肠癌、溃疡性结肠炎或克罗恩病。

6.根据权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，所述组合物还包括明串珠菌属、乳杆菌属、肠球菌属、短芽孢杆菌属、乳球菌属、丙酸杆菌属或双歧杆菌属的菌株。

7.一种用于预防或治疗肠道疾病的药学组合物，其特征在于，包括贺氏明串珠菌菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物。

8.根据权利要求7所述的药学组合物，其特征在于，所述培养液包括来源于贺氏明串珠菌的细胞外囊泡。

9.根据权利要求7所述的药学组合物，其特征在于，所述肠道疾病为与肠道内不动杆菌属及假单胞菌属细菌的减少或炎症性肠道疾病有关的疾病。

10.根据权利要求9所述的药学组合物，其特征在于，所述疾病为结肠癌、溃疡性结肠炎或克罗恩病。

11.一种肠道疾病的预防、改善或治疗方法，其特征在于，包括对个体给药包含贺氏明串珠菌菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物作为有效成分的组合物的步骤。

12.一种组合物的肠道疾病的预防、改善或治疗用途，其特征在于，包含贺氏明串珠菌菌株、其培养液、其浓缩物或其干燥物作为有效成分。