CN112358534B - 一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因及其应用，涉及生物技术领域。PagARF6.1的核苷酸序列如序列表中的序列1所示；PagARF6.1的表达蛋白的氨基酸序列如序列表中序列2所示；PagARF6.1的载体PMDC32‑PagARF6.1的核苷酸序列如序列表中的序列3所示。本发明通过将PagARF6.1基因转入杨树，过量表达PagARF6.1的转基因杨树与野生型比较纤维长度显著增加，说明杨树生长素响应因子基因PagARF6.1是调控杨树纤维长度的关键调节因子，为纤维长度的调控手段提供了新的选择，在林木基因工程领域有重要应用价值。

Description

一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因及其应用

技术领域

本发明涉及一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1及其应用，属于植物基因工程技术领域。

背景技术

目前，我国纸及纸板的生产量和消费量均居世界第一位，但造纸纤维原料自给率严重不足，杨木作为重要的纸浆原料来源，在制浆造纸产业发展中发挥着重要作用。杨树是重要的速生丰产林树种，具有生长快、成材早，材色浅、易漂白，纸张具有白色度高、不透明，吸收能力强等优良特性，被普遍认为是制造中、高档纸的重要原料。纤维形态特征直接决定着木材的物理、力学性质，尤其是制浆造纸方面，纤维长度与宽度以及壁厚与腔径等形态特征是制浆造纸过程中评价纤维质量的重要依据。通过分子育种培育纤维长度增长、细胞腔径比小、速生高产的杨树纸浆林优良无性系，满足当前造纸产业发展对杨树育种工作的迫切需求，是摆在林木遗传育种工作者面前的重要任务，也是林业生产和造纸产业发展中急需解决的重要问题。

生长素是形成层活动和木材形成的重要调控因子，对木材产量和品质具有重要调控作用，这些调控是通过信号转导系统调节下游基因的表达和蛋白的活性来实现的。生长素响应因子(ARFs)是生长素信号转导系统中关键转录因子家族，在生长素信号转导中起着转录“开关”作用，通过促进或抑制生长素响应基因的表达，调控形成层活动和木质部不同类型细胞的分化，进而影响木材形成和材性理化性质。当前，有关ARF基因家族功能的阐释主要来源于拟南芥、水稻、玉米等草本植物，木本植物因为在进化过程中存在与草本植物不同的基因组复制事件，部分基因家族发生了扩张或丢失，部分基因功能发生了分化。所以，利用模式木本植物杨树，研究生长素及其信号途径关键转录因子ARF调控木材形成的分子机制，筛选调控形成层活动和木材形成的特异ARF基因，通过分子育种培育纤维细胞形态显著改良的人工林新品种，对制浆造纸业具有重要意义。

发明内容

本发明的目的之一是，针对现有技术中存在的不足，提供一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1。

一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1，其核苷酸序列如序列表中的序列1所示。

本发明的另一目的是提供一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1的表达蛋白。

一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1的表达蛋白，其氨基酸序列如序列表中序列2所示。

本发明的另一目的是提供一种含有调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1的载体PMDC32-PagARF6.1。

一种含有调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1的载体PMDC32-PagARF6.1，其核苷酸序列如序列表中的序列3所示。

所述载体在PagARF6.1基因的5’端组装组成型强表达启动子P35S；在PagARF6.1基因的3’端组装有强终止子NOS。

一种由上述载体组装的HPT基因可作为转基因杨树的筛选标记，用潮霉素进行转基因杨树的筛选。所述的载体上组装有LB序列和RB序列，LB序列和RB序列能促使组装于其间的PagARF6.1基因整合至杨树受体细胞染色体中。

本发明的另一目的是提供一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1的应用。

所述的调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1在调控杨树生长发育过程中的应用，具体为在调控杨树纤维长度生长发育过程中的应用。该基因可调控杨树纤维的发育，明显促进杨树纤维长度的增加。

有益效果：

本发明以银腺杨84k为材料，克隆了PagARF6.1基因，同时，构建过量表达载体PMDC32-PagARF6.1，该基因位于启动子P35S之后，在启动子P35S的驱动下，PagARF6.1可在杨树体内高效表达，从而调控杨树纤维的发育。与现有技术相比，本发明通过将PagARF6.1基因转入杨树，过量表达PagARF6.1的转基因杨树与野生型比较，纤维长度明显增加，说明PagARF6.1基因是调控杨树纤维发育的关键调节因子，为纤维长度的调控手段提供了新的选择，在林木基因工程领域有重要应用价值。

下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明，但并不意味着对本发明保护范围的限制。

附图说明

图1是本发明实施例1中过量表达载体PMDC32-PagARF6.1的结构示意图。

图2是本发明实施例4中野生型84K杨树与过量表达PagARF6.1的转基因杨树株高表型比较图。

图3是本发明实施例4中野生型84K杨树与过量表达PagARF6.1的转基因杨树的转录水平定量检测图。

图4-1是本发明实施例4中野生型84K杨树木质部的结构示意图。

图4-2是本发明实施例4中转基因杨树木质部的结构示意图。

图5-1是本发明实施例4中野生型84K杨树纤维的结构示意图。

图5-2是本发明实施例4中转基因杨树纤维的结构示意图。

图6是本发明实施例4中过量表达PagARF6.1的转基因杨树与野生型84K杨树纤维长度统计比较图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，以下实施例中未进行详细说明的操作可参照分子克隆，相关试剂盒使用说明的操作实现。

实施例1克隆PagARF6.1基因

以银腺杨84K(P.alba X P.glandulosa)为材料，使用RNeasy Plant Mini试剂盒和RNase-free DNase I试剂盒(Qiagen，Hilden，Germany)提取84K形成层区域总RNA；每个样品取大约2.0μg RNA，通过使用SuperScript III first-strand synthesis system(Life Technologies，Carlsbad，CA，USA)合成cDNA第一链，参考已发表毛果杨基因组序列，使用Primer3软件设计引物(扩增子包含起始密码子及终止密码子)，进行基因全长扩增(引物中引入GATEWAY接头)；

其中，PagARF6.1 ORF正向引物如序列表中序列4所示，PagARF6.1 ORF反向引物如序列表中序列5所示；

高保真PCR反应体系如下：TaKaRa高保真扩增酶PrimeSTAR 12.5μl，正向引物(10μM)1μl，反向引物(10μM)1μl，模板(84K杨cDNA)1μl，无菌ddH₂O补足至25μl；反应程序：预变性98℃，5min；98℃，30s；56℃，30s；72℃，3min，10个循环；98℃，30s；60℃，30s；72℃，3min，25个循环；72℃10min；

最终获得基因全长cDNA序列为2694bp，命名为PagARF6.1基因，序列如序列表中序列1所示，其所编译表达蛋白序列如序列表中序列2所示。

实施例2PagARF6.1基因植物表达载体构建

利用GATEWAY技术构建PagARF6.1基因的过量表达载体，使用特异PCR引物(实施例1的PagARF6.1ORF引物)，以84K cDNA为模板，进行PCR扩增，将PagARF6.1基因ORF构建到入门载体，入门载体为PDNOR222.1，其序列如序列表中序列6所示；反应体系为Fresh PCRproduct 80ng；PDNOR222.1 vector 0.4μl；BP Clonase Ⅱ enzyme mix 0.6μl；无菌ddH₂O补足至5μl，反应程序为：25℃反应5h。

从筛选培养板上挑取阳性克隆进行PCR检测及测序验证，带PagARF6.1基因的入门载体通过Mlu I限制性内切酶线性化后，与植物表达载体PMDC32进行LR反应(PMDC32序列如序列表中序列7所示)，反应体系为：Linearized entry clone50ng；purified destinationvector 75ng；LR Clonase Ⅱ enzyme mix 0.6μl；TE buffer(pH8.0)补足5μl，反应条件：25℃反应5h；经LR反应后，PagARF6.1基因导入植物表达载体PMDC32中，在PagARF6.1基因的5’端组装组成型强表达启动子P35S，它能使PagARF6.1基因在杨树体内高效表达；在PagARF6.1基因的3’端组装有强终止子NOS，可有效终止PagARF6.1基因的转录，如图1所示，是本发明实施例1中过量表达载体PMDC32-PagARF6.1的结构示意图。

在载体质粒上组装潮霉素磷酸转移酶HPT，作为转基因杨树的筛选标记，用潮霉素进行转基因杨树的筛选；在载体质粒组装LB和RB序列，促使组装于其间的PagARF6.1基因表达框架和筛选标记基因HPT整合至杨树受体染色体中，通过PCR检测及测序验证，确认过量表达载体构建成功，命名为PMDC32-PagARF6.1(如序列表中序列3所示)，该基因位于启动子P35S之后，在启动子P35S的驱动下，PagARF6.1基因可在杨树体内高效表达。

实施例3PagARF6.1基因的遗传转化

通过电击法，将所构建的过量表达载体PMDC32-PagARF6.1转入农杆菌GV3101中，通过农杆菌介导的遗传转化将PagARF6.1基因转入杨树，转化步骤如下：用于遗传转化的杂交杨克隆84K组培苗在培养温度为23-25℃、光照为16/8h(白天/黑夜)、光照强度为50μM m-2s-1的条件下培养，含有PMDC32-PagARF6.1表达载体的农杆菌在OD600＝0.6～0.8时侵染84K叶盘，感染后的叶盘，在不定芽诱导培养基(SIM，Murashige-Skoog(MS)基本培养基添加0.5mg/l 6-benzyl aminopurine(6-BA)和0.05mg/l naphthaleneacetic acid(NAA))上，在温度为22±2℃的黑暗条件下共培养3天，共培养后的叶盘转移至含有3mg/L hygromycinB和200mg/L Timentin的SIM上，在培养温度为23-25℃、光照为16/8h(白天/黑夜)、光照强度为50μM m-2s-1的条件下，诱导和筛选抗性不定芽，经过约30天的诱导培养，将抗性不定芽转移至含有3mg/L hygromycin B和200mg/LTimentin的生根培养基中(RIM，1/2MS基本培养基添加0.05mg/L IBA和0.02mg/L NAA)，直至诱导生根，提取已生根植株叶片DNA，PCR验证；

实施例4PagARF6.1转基因植株纤维离析分析

取培养室培养2个月大小的野生型(84k)和过量表达PagARF6.1的转基因杨树苗木，第十一节间去皮茎段，径向和弦向宽约为1mm、纵向长为10mm的细棒状，选取5-10根，置于2mL离心管中，加入1.8mL离析液(30％的过氧化氢∶冰醋酸∶水＝1∶5∶4)，将离心管置于56℃金属浴中3-5天，定期观察样品；离析好的样品用蒸馏水清洗3遍以上，番红染色后置于ZESS Imager A1显微镜下观察，并用Axiovision图像处理软件进行测量试样纤维长度和中部较宽部位的尺寸，每个试样测量3次，每次选取300根纤维进行测量。

如图2所示，是本发明实施例4中野生型84K杨树与过量表达PagARF6.1的转基因杨树株高表型比较图；其中，左侧两株是野生型84K杨树株高表型，右侧两株是过量表达PagARF6.1的转基因杨树株高表型；过量表达PagARF6.1的转基因杨树株高显著高于野生型84K杨树。

如图3所示，是本发明实施例4中野生型84K杨树与过量表达PagARF6.1的转基因杨树的转录水平定量检测图，图3中，柱形图显示PagARF6.1基因分别在野生型(84k)和转基因杨树(line3、line5、line17)中的表达量；

如图4-1所示，是本发明实施例4中野生型84K杨树木质部的结构示意图；如图4-2所示，是本发明实施例4中转基因杨树木质部的结构示意图；如图5-1所示，是本发明实施例4中野生型84K杨树纤维的结构示意图；如图5-2所示，是本发明实施例4中转基因杨树纤维的结构示意图；如图6所示，是本发明实施例4中过量表达PagARF6.1的转基因杨树与野生型84K杨树纤维长度统计比较图；其中，左图为野生型(84k)的纤维长度，右图是转基因杨树的纤维长度。

从结果可以看出，过量表达PagARF6.1的转基因杨树与野生型84K杨树比较，株高增高，纤维显著增长，说明杨树生长素响应因子基因PagARF6.1是控制杨树纤维发生发育的关键调节因子，在林木基因工程和无性系林业领域有重要应用价值。

序列表

<110> 中国林业科学研究院林业研究所

<120> 一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因及其应用

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2694

<212> DNA

<213> 84K银腺杨(Populus.alba × Populus.glandulosa生长素响应因子PagARF6.1)

<400> 1

atgaggcact cttcagctgg ttttaatcca caaacccacg aagtggaaaa gcgggtgctg 60

aattctgaac tatggcacgc atgtgcgggt cctcttgttt ctctacctgc tgttggaagc 120

cgcgctgttt atttcccaca aggtcacagt gagcaggttg ccgcatcaac gaacaaggaa 180

gtggatgccc agattccaag ctacccaagc ttgcctgcac aacttatctg tcagcttcac 240

aatgtgacca tgcatgcaga tgttgaaaca gatgaagttt atgcacaaat gaccttgcag 300

ccactaagtc cacaagagca aaaggatgcc taccttccag cagatatggg cacccctagc 360

aaacagccaa ccaattattt ctgtaagact ttgactgcca gtgacacgag tactcacgga 420

ggattctctg tccctcggcg ggcagccgag aaagtgttcc caccattgga tttttctcag 480

caacctccag ctcaagagtt gattgctagg gatttgcatg ataatgaatg gaaattcaga 540

cacatatttc gcggccagcc aaaaagacac cttcttacaa ctgggtggag tgtgtttgtg 600

agtgctaaaa gacttgttgc tggggattca gtgattttta tctggaatga aaagaatcag 660

ctactacttg gcattaggcg cgctactcga ccacaaacag tgatgccttc atcagtctta 720

tcaagcgata gcatgcactt gggccttctt gctgctgcag ctcatgcggc tgcaacaaat 780

agccgtttta ccgtatttta caatccaagg gctagtccat cagagttcgt cataccactg 840

gccaaatatc ttaaagctgt ttattatagt cgagtgtctg ttggcatgcg ctttaggatg 900

atgttcgaaa cagaagaatc aagtgtccgt cgctacatgg gtacaataac tggcataagt 960

gacttggatg ttgttaagtg gccaaattca caatggcgtt cagtcaaggt tggctgggat 1020

gagtctacgg atggggagag gcagccaaga gtttctcttt gggagattga accactaacc 1080

actttcccaa catatccatc tccatttccc ctaaggctca agcggccatg gccaccagga 1140

ctaccctctt tctatggcat caaggatgat gatctaggaa agaactcgtc ccttatgtgg 1200

ctacgaggag atggagactg tggaattcaa tctttgaact ttcagggaac tggagtttca 1260

ccgtgggtga agccaagagt tgatgcttac atgctaggtt tgcaaaatga tgtctaccaa 1320

actatggcta ctgctgcctt tcaggagatg aggactctag atccttccaa atcatcagct 1380

gcatcccttt tgcaattcca gcaacaccag aatctctcaa ccaggagtgc tgctttaatg 1440

cagccgcata tgttgcagca gtctccttct caacagacct ttcttcaagg tgttcaagag 1500

aataaacatc agtctcagac tccatcccag tcacacctta ttcagcaaca actgctgcat 1560

catcacttac ttgacagtcc acagcagcag cagcagcagc agccatttct gcaacagcag 1620

caactggctg acaaacagat cccaaatggt gcctctgcaa tatctcaata tgcttcagcc 1680

tctcaatccc tgacaccacc attgcaagct atttcactgt gccagcagca cagctattct 1740

gactcaaatg ggaacccagc gatgatccct gttgtttctt ccctgcaaag tctgttggac 1800

tcatttcccc caaatgaatc atctcatttg ctaagttcgc ctagaataaa tcccttggta 1860

acttcttctg gctggccctc aaagcgagct gctgttgaat cgcttacttc ctctggagct 1920

cctcaatgca tggtgaccca agtggagcag ctggggccac ttcagacaag catcactcct 1980

agttctgttt ctttgccacc ctttcctgga agagaatgtt caatagaccg ggatggtggc 2040

actgatcaac aaaaccatct tctattcggt gtcaacatag agccatcatc tcttctactg 2100

cagaatggaa tgtcaagtct caggggagtt ggaagtgata gtgattccac aactatactc 2160

tcttctaatt acatgagtgc tgcaggcacc aatttctctc ttaatccagc aatgacacct 2220

tcaagttaca ttgatgaatc atttttcctg caatccacag aaaatgtgag ccaaggaaat 2280

ccaccaacca gaacctttgt taaggtttac aagtcagggt cctttggtag gtcactggat 2340

atcaccaaat tcagcaacta caatgagttg cgcggagagc tttctcgcat gtttggcctc 2400

gaaggccaac tggaggaccc cctgagatca ggctggcagc ttgtattcat cgaccgggag 2460

aatgatgttc ttctccttgg tgatggcccc tggccggaat ttgtaaacag tgtgtggtgc 2520

atcaaaatac tctcaccaca agaagtacag caaatgggaa aacgaggttt agagcttcta 2580

aactcttttc caattcagag gctttccaat ggcagctgtg atgactatgc aaaccggcag 2640

gattcaaaat ccttgagcac tggtataact tctgtggggt ctttggacta ctga 2694

<210> 2

<211> 897

<212> PRT

<213> 84K银腺杨(Populus.alba × Populus.glandulosa生长素响应因子PagARF6.1表达蛋白)

<400> 2

Met Arg His Ser Ser Ala Gly Phe Asn Pro Gln Thr His Glu Val Glu

1 5 10 15

Lys Arg Val Leu Asn Ser Glu Leu Trp His Ala Cys Ala Gly Pro Leu

20 25 30

Val Ser Leu Pro Ala Val Gly Ser Arg Ala Val Tyr Phe Pro Gln Gly

35 40 45

His Ser Glu Gln Val Ala Ala Ser Thr Asn Lys Glu Val Asp Ala Gln

50 55 60

Ile Pro Ser Tyr Pro Ser Leu Pro Ala Gln Leu Ile Cys Gln Leu His

65 70 75 80

Asn Val Thr Met His Ala Asp Val Glu Thr Asp Glu Val Tyr Ala Gln

85 90 95

Met Thr Leu Gln Pro Leu Ser Pro Gln Glu Gln Lys Asp Ala Tyr Leu

100 105 110

Pro Ala Asp Met Gly Thr Pro Ser Lys Gln Pro Thr Asn Tyr Phe Cys

115 120 125

Lys Thr Leu Thr Ala Ser Asp Thr Ser Thr His Gly Gly Phe Ser Val

130 135 140

Pro Arg Arg Ala Ala Glu Lys Val Phe Pro Pro Leu Asp Phe Ser Gln

145 150 155 160

Gln Pro Pro Ala Gln Glu Leu Ile Ala Arg Asp Leu His Asp Asn Glu

165 170 175

Trp Lys Phe Arg His Ile Phe Arg Gly Gln Pro Lys Arg His Leu Leu

180 185 190

Thr Thr Gly Trp Ser Val Phe Val Ser Ala Lys Arg Leu Val Ala Gly

195 200 205

Asp Ser Val Ile Phe Ile Trp Asn Glu Lys Asn Gln Leu Leu Leu Gly

210 215 220

Ile Arg Arg Ala Thr Arg Pro Gln Thr Val Met Pro Ser Ser Val Leu

225 230 235 240

Ser Ser Asp Ser Met His Leu Gly Leu Leu Ala Ala Ala Ala His Ala

245 250 255

Ala Ala Thr Asn Ser Arg Phe Thr Val Phe Tyr Asn Pro Arg Ala Ser

260 265 270

Pro Ser Glu Phe Val Ile Pro Leu Ala Lys Tyr Leu Lys Ala Val Tyr

275 280 285

Tyr Ser Arg Val Ser Val Gly Met Arg Phe Arg Met Met Phe Glu Thr

290 295 300

Glu Glu Ser Ser Val Arg Arg Tyr Met Gly Thr Ile Thr Gly Ile Ser

305 310 315 320

Asp Leu Asp Val Val Lys Trp Pro Asn Ser Gln Trp Arg Ser Val Lys

325 330 335

Val Gly Trp Asp Glu Ser Thr Asp Gly Glu Arg Gln Pro Arg Val Ser

340 345 350

Leu Trp Glu Ile Glu Pro Leu Thr Thr Phe Pro Thr Tyr Pro Ser Pro

355 360 365

Phe Pro Leu Arg Leu Lys Arg Pro Trp Pro Pro Gly Leu Pro Ser Phe

370 375 380

Tyr Gly Ile Lys Asp Asp Asp Leu Gly Lys Asn Ser Ser Leu Met Trp

385 390 395 400

Leu Arg Gly Asp Gly Asp Cys Gly Ile Gln Ser Leu Asn Phe Gln Gly

405 410 415

Thr Gly Val Ser Pro Trp Val Lys Pro Arg Val Asp Ala Tyr Met Leu

420 425 430

Gly Leu Gln Asn Asp Val Tyr Gln Thr Met Ala Thr Ala Ala Phe Gln

435 440 445

Glu Met Arg Thr Leu Asp Pro Ser Lys Ser Ser Ala Ala Ser Leu Leu

450 455 460

Gln Phe Gln Gln His Gln Asn Leu Ser Thr Arg Ser Ala Ala Leu Met

465 470 475 480

Gln Pro His Met Leu Gln Gln Ser Pro Ser Gln Gln Thr Phe Leu Gln

485 490 495

Gly Val Gln Glu Asn Lys His Gln Ser Gln Thr Pro Ser Gln Ser His

500 505 510

Leu Ile Gln Gln Gln Leu Leu His His His Leu Leu Asp Ser Pro Gln

515 520 525

Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Phe Leu Gln Gln Gln Gln Leu Ala Asp

530 535 540

Lys Gln Ile Pro Asn Gly Ala Ser Ala Ile Ser Gln Tyr Ala Ser Ala

545 550 555 560

Ser Gln Ser Leu Thr Pro Pro Leu Gln Ala Ile Ser Leu Cys Gln Gln

565 570 575

His Ser Tyr Ser Asp Ser Asn Gly Asn Pro Ala Met Ile Pro Val Val

580 585 590

Ser Ser Leu Gln Ser Leu Leu Asp Ser Phe Pro Pro Asn Glu Ser Ser

595 600 605

His Leu Leu Ser Ser Pro Arg Ile Asn Pro Leu Val Thr Ser Ser Gly

610 615 620

Trp Pro Ser Lys Arg Ala Ala Val Glu Ser Leu Thr Ser Ser Gly Ala

625 630 635 640

Pro Gln Cys Met Val Thr Gln Val Glu Gln Leu Gly Pro Leu Gln Thr

645 650 655

Ser Ile Thr Pro Ser Ser Val Ser Leu Pro Pro Phe Pro Gly Arg Glu

660 665 670

Cys Ser Ile Asp Arg Asp Gly Gly Thr Asp Gln Gln Asn His Leu Leu

675 680 685

Phe Gly Val Asn Ile Glu Pro Ser Ser Leu Leu Leu Gln Asn Gly Met

690 695 700

Ser Ser Leu Arg Gly Val Gly Ser Asp Ser Asp Ser Thr Thr Ile Leu

705 710 715 720

Ser Ser Asn Tyr Met Ser Ala Ala Gly Thr Asn Phe Ser Leu Asn Pro

725 730 735

Ala Met Thr Pro Ser Ser Tyr Ile Asp Glu Ser Phe Phe Leu Gln Ser

740 745 750

Thr Glu Asn Val Ser Gln Gly Asn Pro Pro Thr Arg Thr Phe Val Lys

755 760 765

Val Tyr Lys Ser Gly Ser Phe Gly Arg Ser Leu Asp Ile Thr Lys Phe

770 775 780

Ser Asn Tyr Asn Glu Leu Arg Gly Glu Leu Ser Arg Met Phe Gly Leu

785 790 795 800

Glu Gly Gln Leu Glu Asp Pro Leu Arg Ser Gly Trp Gln Leu Val Phe

805 810 815

Ile Asp Arg Glu Asn Asp Val Leu Leu Leu Gly Asp Gly Pro Trp Pro

820 825 830

Glu Phe Val Asn Ser Val Trp Cys Ile Lys Ile Leu Ser Pro Gln Glu

835 840 845

Val Gln Gln Met Gly Lys Arg Gly Leu Glu Leu Leu Asn Ser Phe Pro

850 855 860

Ile Gln Arg Leu Ser Asn Gly Ser Cys Asp Asp Tyr Ala Asn Arg Gln

865 870 875 880

Asp Ser Lys Ser Leu Ser Thr Gly Ile Thr Ser Val Gly Ser Leu Asp

885 890 895

Tyr

<210> 3

<211> 12791

<212> DNA

<213> 人工序列(PMDC32- PagARF6.1)

<400> 3

cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca 60

acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca 120

cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc 180

attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattggctag agcagcttgc 240

caacatggtg gagcacgaca ctctcgtcta ctccaagaat atcaaagata cagtctcaga 300

agaccaaagg gctattgaga cttttcaaca aagggtaata tcgggaaacc tcctcggatt 360

ccattgccca gctatctgtc acttcatcaa aaggacagta gaaaaggaag gtggcaccta 420

caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc tatcgttcaa gatgcctctg ccgacagtgg 480

tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac 540

gtcttcaaag caagtggatt gatgtgataa catggtggag cacgacactc tcgtctactc 600

caagaatatc aaagatacag tctcagaaga ccaaagggct attgagactt ttcaacaaag 660

ggtaatatcg ggaaacctcc tcggattcca ttgcccagct atctgtcact tcatcaaaag 720

gacagtagaa aaggaaggtg gcacctacaa atgccatcat tgcgataaag gaaaggctat 780

cgttcaagat gcctctgccg acagtggtcc caaagatgga cccccaccca cgaggagcat 840

cgtggaaaaa gaagacgttc caaccacgtc ttcaaagcaa gtggattgat gtgatatctc 900

cactgacgta agggatgacg cacaatccca ctatccttcg caagaccttc ctctatataa 960

ggaagttcat ttcatttgga gaggacacgc tgaaatcacc agtctctctc tacaaatcta 1020

tctctctcga gctttcgcag atcccggggg gcaatgagat atgaaaaagc ctgaactcac 1080

cgcgacgtct gtcgagaagt ttctgatcga aaagttcgac agcgtctccg acctgatgca 1140

gctctcggag ggcgaagaat ctcgtgcttt cagcttcgat gtaggagggc gtggatatgt 1200

cctgcgggta aatagctgcg ccgatggttt ctacaaagat cgttatgttt atcggcactt 1260

tgcatcggcc gcgctcccga ttccggaagt gcttgacatt ggggagttta gcgagagcct 1320

gacctattgc atctcccgcc gtgcacaggg tgtcacgttg caagacctgc ctgaaaccga 1380

actgcccgct gttctacaac cggtcgcgga ggctatggat gcgatcgctg cggccgatct 1440

tagccagacg agcgggttcg gcccattcgg accgcaagga atcggtcaat acactacatg 1500

gcgtgatttc atatgcgcga ttgctgatcc ccatgtgtat cactggcaaa ctgtgatgga 1560

cgacaccgtc agtgcgtccg tcgcgcaggc tctcgatgag ctgatgcttt gggccgagga 1620

ctgccccgaa gtccggcacc tcgtgcacgc ggatttcggc tccaacaatg tcctgacgga 1680

caatggccgc ataacagcgg tcattgactg gagcgaggcg atgttcgggg attcccaata 1740

cgaggtcgcc aacatcttct tctggaggcc gtggttggct tgtatggagc agcagacgcg 1800

ctacttcgag cggaggcatc cggagcttgc aggatcgcca cgactccggg cgtatatgct 1860

ccgcattggt cttgaccaac tctatcagag cttggttgac ggcaatttcg atgatgcagc 1920

ttgggcgcag ggtcgatgcg acgcaatcgt ccgatccgga gccgggactg tcgggcgtac 1980

acaaatcgcc cgcagaagcg cggccgtctg gaccgatggc tgtgtagaag tactcgccga 2040

tagtggaaac cgacgcccca gcactcgtcc gagggcaaag aaatagagta gatgccgacc 2100

ggatctgtcg atcgacaagc tcgagtttct ccataataat gtgtgagtag ttcccagata 2160

agggaattag ggttcctata gggtttcgct catgtgttga gcatataaga aacccttagt 2220

atgtatttgt atttgtaaaa tacttctatc aataaaattt ctaattccta aaaccaaaat 2280

ccagtactaa aatccagatc ccccgaatta attcggcgtt aattcagtac attaaaaacg 2340

tccgcaatgt gttattaagt tgtctaagcg tcaatttgtt tacaccacaa tatatcctgc 2400

caccagccag ccaacagctc cccgaccggc agctcggcac aaaatcacca ctcgatacag 2460

gcagcccatc agtccgggac ggcgtcagcg ggagagccgt tgtaaggcgg cagactttgc 2520

tcatgttacc gatgctattc ggaagaacgg caactaagct gccgggtttg aaacacggat 2580

gatctcgcgg agggtagcat gttgattgta acgatgacag agcgttgctg cctgtgatca 2640

ccgcggtttc aaaatcggct ccgtcgatac tatgttatac gccaactttg aaaacaactt 2700

tgaaaaagct gttttctggt atttaaggtt ttagaatgca aggaacagtg aattggagtt 2760

cgtcttgtta taattagctt cttggggtat ctttaaatac tgtagaaaag aggaaggaaa 2820

taataaatgg ctaaaatgag aatatcaccg gaattgaaaa aactgatcga aaaataccgc 2880

tgcgtaaaag atacggaagg aatgtctcct gctaaggtat ataagctggt gggagaaaat 2940

gaaaacctat atttaaaaat gacggacagc cggtataaag ggaccaccta tgatgtggaa 3000

cgggaaaagg acatgatgct atggctggaa ggaaagctgc ctgttccaaa ggtcctgcac 3060

tttgaacggc atgatggctg gagcaatctg ctcatgagtg aggccgatgg cgtcctttgc 3120

tcggaagagt atgaagatga acaaagccct gaaaagatta tcgagctgta tgcggagtgc 3180

atcaggctct ttcactccat cgacatatcg gattgtccct atacgaatag cttagacagc 3240

cgcttagccg aattggatta cttactgaat aacgatctgg ccgatgtgga ttgcgaaaac 3300

tgggaagaag acactccatt taaagatccg cgcgagctgt atgatttttt aaagacggaa 3360

aagcccgaag aggaacttgt cttttcccac ggcgacctgg gagacagcaa catctttgtg 3420

aaagatggca aagtaagtgg ctttattgat cttgggagaa gcggcagggc ggacaagtgg 3480

tatgacattg ccttctgcgt ccggtcgatc agggaggata tcggggaaga acagtatgtc 3540

gagctatttt ttgacttact ggggatcaag cctgattggg agaaaataaa atattatatt 3600

ttactggatg aattgtttta gtacctagaa tgcatgacca aaatccctta acgtgagttt 3660

tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt 3720

tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt 3780

ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag 3840

ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta 3900

gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat 3960

aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg 4020

ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg 4080

agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac 4140

aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga 4200

aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt 4260

ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta 4320

cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat 4380

tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg 4440

accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcctgatgcg gtattttctc 4500

cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc atatggtgca ctctcagtac aatctgctct 4560

gatgccgcat agttaagcca gtatacactc cgctatcgct acgtgactgg gtcatggctg 4620

cgccccgaca cccgccaaca cccgctgacg cgccctgacg ggcttgtctg ctcccggcat 4680

ccgcttacag acaagctgtg accgtctccg ggagctgcat gtgtcagagg ttttcaccgt 4740

catcaccgaa acgcgcgagg cagggtgcct tgatgtgggc gccggcggtc gagtggcgac 4800

ggcgcggctt gtccgcgccc tggtagattg cctggccgta ggccagccat ttttgagcgg 4860

ccagcggccg cgataggccg acgcgaagcg gcggggcgta gggagcgcag cgaccgaagg 4920

gtaggcgctt tttgcagctc ttcggctgtg cgctggccag acagttatgc acaggccagg 4980

cgggttttaa gagttttaat aagttttaaa gagttttagg cggaaaaatc gccttttttc 5040

tcttttatat cagtcactta catgtgtgac cggttcccaa tgtacggctt tgggttccca 5100

atgtacgggt tccggttccc aatgtacggc tttgggttcc caatgtacgt gctatccaca 5160

ggaaagagac cttttcgacc tttttcccct gctagggcaa tttgccctag catctgctcc 5220

gtacattagg aaccggcgga tgcttcgccc tcgatcaggt tgcggtagcg catgactagg 5280

atcgggccag cctgccccgc ctcctccttc aaatcgtact ccggcaggtc atttgacccg 5340

atcagcttgc gcacggtgaa acagaacttc ttgaactctc cggcgctgcc actgcgttcg 5400

tagatcgtct tgaacaacca tctggcttct gccttgcctg cggcgcggcg tgccaggcgg 5460

tagagaaaac ggccgatgcc gggatcgatc aaaaagtaat cggggtgaac cgtcagcacg 5520

tccgggttct tgccttctgt gatctcgcgg tacatccaat cagctagctc gatctcgatg 5580

tactccggcc gcccggtttc gctctttacg atcttgtagc ggctaatcaa ggcttcaccc 5640

tcggataccg tcaccaggcg gccgttcttg gccttcttcg tacgctgcat ggcaacgtgc 5700

gtggtgttta accgaatgca ggtttctacc aggtcgtctt tctgctttcc gccatcggct 5760

cgccggcaga acttgagtac gtccgcaacg tgtggacgga acacgcggcc gggcttgtct 5820

cccttccctt cccggtatcg gttcatggat tcggttagat gggaaaccgc catcagtacc 5880

aggtcgtaat cccacacact ggccatgccg gccggccctg cggaaacctc tacgtgcccg 5940

tctggaagct cgtagcggat cacctcgcca gctcgtcggt cacgcttcga cagacggaaa 6000

acggccacgt ccatgatgct gcgactatcg cgggtgccca cgtcatagag catcggaacg 6060

aaaaaatctg gttgctcgtc gcccttgggc ggcttcctaa tcgacggcgc accggctgcc 6120

ggcggttgcc gggattcttt gcggattcga tcagcggccg cttgccacga ttcaccgggg 6180

cgtgcttctg cctcgatgcg ttgccgctgg gcggcctgcg cggccttcaa cttctccacc 6240

aggtcatcac ccagcgccgc gccgatttgt accgggccgg atggtttgcg accgtcacgc 6300

cgattcctcg ggcttggggg ttccagtgcc attgcagggc cggcagacaa cccagccgct 6360

tacgcctggc caaccgcccg ttcctccaca catggggcat tccacggcgt cggtgcctgg 6420

ttgttcttga ttttccatgc cgcctccttt agccgctaaa attcatctac tcatttattc 6480

atttgctcat ttactctggt agctgcgcga tgtattcaga tagcagctcg gtaatggtct 6540

tgccttggcg taccgcgtac atcttcagct tggtgtgatc ctccgccggc aactgaaagt 6600

tgacccgctt catggctggc gtgtctgcca ggctggccaa cgttgcagcc ttgctgctgc 6660

gtgcgctcgg acggccggca cttagcgtgt ttgtgctttt gctcattttc tctttacctc 6720

attaactcaa atgagttttg atttaatttc agcggccagc gcctggacct cgcgggcagc 6780

gtcgccctcg ggttctgatt caagaacggt tgtgccggcg gcggcagtgc ctgggtagct 6840

cacgcgctgc gtgatacggg actcaagaat gggcagctcg tacccggcca gcgcctcggc 6900

aacctcaccg ccgatgcgcg tgcctttgat cgcccgcgac acgacaaagg ccgcttgtag 6960

ccttccatcc gtgacctcaa tgcgctgctt aaccagctcc accaggtcgg cggtggccca 7020

tatgtcgtaa gggcttggct gcaccggaat cagcacgaag tcggctgcct tgatcgcgga 7080

cacagccaag tccgccgcct ggggcgctcc gtcgatcact acgaagtcgc gccggccgat 7140

ggccttcacg tcgcggtcaa tcgtcgggcg gtcgatgccg acaacggtta gcggttgatc 7200

ttcccgcacg gccgcccaat cgcgggcact gccctgggga tcggaatcga ctaacagaac 7260

atcggccccg gcgagttgca gggcgcgggc tagatgggtt gcgatggtcg tcttgcctga 7320

cccgcctttc tggttaagta cagcgataac cttcatgcgt tccccttgcg tatttgttta 7380

tttactcatc gcatcatata cgcagcgacc gcatgacgca agctgtttta ctcaaataca 7440

catcaccttt ttagacggcg gcgctcggtt tcttcagcgg ccaagctggc cggccaggcc 7500

gccagcttgg catcagacaa accggccagg atttcatgca gccgcacggt tgagacgtgc 7560

gcgggcggct cgaacacgta cccggccgcg atcatctccg cctcgatctc ttcggtaatg 7620

aaaaacggtt cgtcctggcc gtcctggtgc ggtttcatgc ttgttcctct tggcgttcat 7680

tctcggcggc cgccagggcg tcggcctcgg tcaatgcgtc ctcacggaag gcaccgcgcc 7740

gcctggcctc ggtgggcgtc acttcctcgc tgcgctcaag tgcgcggtac agggtcgagc 7800

gatgcacgcc aagcagtgca gccgcctctt tcacggtgcg gccttcctgg tcgatcagct 7860

cgcgggcgtg cgcgatctgt gccggggtga gggtagggcg ggggccaaac ttcacgcctc 7920

gggccttggc ggcctcgcgc ccgctccggg tgcggtcgat gattagggaa cgctcgaact 7980

cggcaatgcc ggcgaacacg gtcaacacca tgcggccggc cggcgtggtg gtgtcggccc 8040

acggctctgc caggctacgc aggcccgcgc cggcctcctg gatgcgctcg gcaatgtcca 8100

gtaggtcgcg ggtgctgcgg gccaggcggt ctagcctggt cactgtcaca acgtcgccag 8160

ggcgtaggtg gtcaagcatc ctggccagct ccgggcggtc gcgcctggtg ccggtgatct 8220

tctcggaaaa cagcttggtg cagccggccg cgtgcagttc ggcccgttgg ttggtcaagt 8280

cctggtcgtc ggtgctgacg cgggcatagc ccagcaggcc agcggcggcg ctcttgttca 8340

tggcgtaatg tctccggttc tagtcgcaag tattctactt tatgcgacta aaacacgcga 8400

caagaaaacg ccaggaaaag ggcagggcgg cagcctgtcg cgtaacttag gacttgtgcg 8460

acatgtcgtt ttcagaagac ggctgcactg aacgtcagaa gccgactgca ctatagcagc 8520

ggaggggttg gatcaaagta ctttgatccc gaggggaacc ctgtggttgg catgcacata 8580

caaatggacg aacggataaa ccttttcacg cccttttaaa tatccgttat tctaataaac 8640

gctcttttct cttaggttta cccgccaata tatcctgtca aacactgata gtttaaactg 8700

aaggcgggaa acgacaatct gatccaagct caagctgctc tagcattcgc cattcaggct 8760

gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa 8820

agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg 8880

ttgtaaaacg acggccagtg ccaagcttgg cgtgcctgca ggtcaacatg gtggagcacg 8940

acacacttgt ctactccaaa aatatcaaag atacagtctc agaagaccaa agggcaattg 9000

agacttttca acaaagggta atatccggaa acctcctcgg attccattgc ccagctatct 9060

gtcactttat tgtgaagata gtggaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc catcattgcg 9120

ataaaggaaa ggccatcgtt gaagatgcct ctgccgacag tggtcccaaa gatggacccc 9180

cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg 9240

attgatgtga taacatggtg gagcacgaca cacttgtcta ctccaaaaat atcaaagata 9300

cagtctcaga agaccaaagg gcaattgaga cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc 9360

tcctcggatt ccattgccca gctatctgtc actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag 9420

gtggctccta caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg 9480

ccgacagtgg tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg 9540

ttccaaccac gtcttcaaag caagtggatt gatgtgatat ctccactgac gtaagggatg 9600

acgcacaatc ccactatcct tcgcaagacc cttcctctat ataaggaagt tcatttcatt 9660

tggagaggac ctcgactcta gaggatcccc gggtaccggg ccccccctcg aggcgcgcca 9720

agctatcaaa caagtttgta caaaaaagtt ggaatgaggc actcttcagc tggttttaat 9780

ccacaaaccc acgaagtgga aaagcgggtg ctgaattctg aactatggca cgcatgtgcg 9840

ggtcctcttg tttctctacc tgctgttgga agccgcgctg tttatttccc acaaggtcac 9900

agtgagcagg ttgccgcatc aacgaacaag gaagtggatg cccagattcc aagctaccca 9960

agcttgcctg cacaacttat ctgtcagctt cacaatgtga ccatgcatgc agatgttgaa 10020

acagatgaag tttatgcaca aatgaccttg cagccactaa gtccacaaga gcaaaaggat 10080

gcctaccttc cagcagatat gggcacccct agcaaacagc caaccaatta tttctgtaag 10140

actttgactg ccagtgacac gagtactcac ggaggattct ctgtccctcg gcgggcagcc 10200

gagaaagtgt tcccaccatt ggatttttct cagcaacctc cagctcaaga gttgattgct 10260

agggatttgc atgataatga atggaaattc agacacatat ttcgcggcca gccaaaaaga 10320

caccttctta caactgggtg gagtgtgttt gtgagtgcta aaagacttgt tgctggggat 10380

tcagtgattt ttatctggaa tgaaaagaat cagctactac ttggcattag gcgcgctact 10440

cgaccacaaa cagtgatgcc ttcatcagtc ttatcaagcg atagcatgca cttgggcctt 10500

cttgctgctg cagctcatgc ggctgcaaca aatagccgtt ttaccgtatt ttacaatcca 10560

agggctagtc catcagagtt cgtcatacca ctggccaaat atcttaaagc tgtttattat 10620

agtcgagtgt ctgttggcat gcgctttagg atgatgttcg aaacagaaga atcaagtgtc 10680

cgtcgctaca tgggtacaat aactggcata agtgacttgg atgttgttaa gtggccaaat 10740

tcacaatggc gttcagtcaa ggttggctgg gatgagtcta cggatgggga gaggcagcca 10800

agagtttctc tttgggagat tgaaccacta accactttcc caacatatcc atctccattt 10860

cccctaaggc tcaagcggcc atggccacca ggactaccct ctttctatgg catcaaggat 10920

gatgatctag gaaagaactc gtcccttatg tggctacgag gagatggaga ctgtggaatt 10980

caatctttga actttcaggg aactggagtt tcaccgtggg tgaagccaag agttgatgct 11040

tacatgctag gtttgcaaaa tgatgtctac caaactatgg ctactgctgc ctttcaggag 11100

atgaggactc tagatccttc caaatcatca gctgcatccc ttttgcaatt ccagcaacac 11160

cagaatctct caaccaggag tgctgcttta atgcagccgc atatgttgca gcagtctcct 11220

tctcaacaga cctttcttca aggtgttcaa gagaataaac atcagtctca gactccatcc 11280

cagtcacacc ttattcagca acaactgctg catcatcact tacttgacag tccacagcag 11340

cagcagcagc agcagccatt tctgcaacag cagcaactgg ctgacaaaca gatcccaaat 11400

ggtgcctctg caatatctca atatgcttca gcctctcaat ccctgacacc accattgcaa 11460

gctatttcac tgtgccagca gcacagctat tctgactcaa atgggaaccc agcgatgatc 11520

cctgttgttt cttccctgca aagtctgttg gactcatttc ccccaaatga atcatctcat 11580

ttgctaagtt cgcctagaat aaatcccttg gtaacttctt ctggctggcc ctcaaagcga 11640

gctgctgttg aatcgcttac ttcctctgga gctcctcaat gcatggtgac ccaagtggag 11700

cagctggggc cacttcagac aagcatcact cctagttctg tttctttgcc accctttcct 11760

ggaagagaat gttcaataga ccgggatggt ggcactgatc aacaaaacca tcttctattc 11820

ggtgtcaaca tagagccatc atctcttcta ctgcagaatg gaatgtcaag tctcagggga 11880

gttggaagtg atagtgattc cacaactata ctctcttcta attacatgag tgctgcaggc 11940

accaatttct ctcttaatcc agcaatgaca ccttcaagtt acattgatga atcatttttc 12000

ctgcaatcca cagaaaatgt gagccaagga aatccaccaa ccagaacctt tgttaaggtt 12060

tacaagtcag ggtcctttgg taggtcactg gatatcacca aattcagcaa ctacaatgag 12120

ttgcgcggag agctttctcg catgtttggc ctcgaaggcc aactggagga ccccctgaga 12180

tcaggctggc agcttgtatt catcgaccgg gagaatgatg ttcttctcct tggtgatggc 12240

ccctggccgg aatttgtaaa cagtgtgtgg tgcatcaaaa tactctcacc acaagaagta 12300

cagcaaatgg gaaaacgagg tttagagctt ctaaactctt ttccaattca gaggctttcc 12360

aatggcagct gtgatgacta tgcaaaccgg caggattcaa aatccttgag cactggtata 12420

acttctgtgg ggtctttgga ctactgatac ccaactttct tgtacaaagt ggttcgataa 12480

ttccttaatt aactagttct agagcggccg cccaccgcgg tggagctcga atttccccga 12540

tcgttcaaac atttggcaat aaagtttctt aagattgaat cctgttgccg gtcttgcgat 12600

gattatcata taatttctgt tgaattacgt taagcatgta ataattaaca tgtaatgcat 12660

gacgttattt atgagatggg tttttatgat tagagtcccg caattataca tttaatacgc 12720

gatagaaaac aaaatatagc gcgcaaacta ggataaatta tcgcgcgcgg tgtcatctat 12780

gttactgaat t 12791

<210> 4

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列(PagARF6.1 ORF正向引物)

<400> 4

ggggacaact ttgtacaaaa aagttggaat gaggcactct tcagctgg 48

<210> 5

<211> 55

<212> DNA

<213> 人工序列(PagARF6.1 ORF反向引物)

<400> 5

ggcggccgca caactttgta caagaaagtt gggtatcagt agtccaaaga cccca 55

<210> 6

<211> 4719

<212> DNA

<213> 人工序列(入门载体PDNOR222.1)

<400> 6

gtctgacgct cagggaacga cgcgtaccgc tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa 60

aggccatccg tcaggatggc cttctgctta gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt 120

cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc acaacgttca aatccgctcc cggcggattt 180

gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc 240

gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg gcagttccct actctcgcgt taacgctagc 300

atggatgttt tcccagtcac gacgttgtaa aacgacggcc agtcttaagc tcgggcccca 360

aataatgatt ttattttgac tgatagtgac ctgttcgttg caacaaattg atgagcaatg 420

cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa agctgaacga gaaacgtaaa atgatataaa 480

tatcaatata ttaaattaga ttttgcataa aaaacagact acataatact gtaaaacaca 540

acatatccag tcactatgaa tcaactactt agatggtatt agtgacctgt agtcgaccga 600

cagccttcca aatgttcttc gggtgatgct gccaacttag tcgaccgaca gccttccaaa 660

tgttcttctc aaacggaatc gtcgtatcca gcctactcgc tattgtcctc aatgccgtat 720

taaatcataa aaagaaataa ggaaaagagg tgcgagcctc ttttttgtgt gacaaaataa 780

aaacatctac ctattcatat acgctagtgt catagtcctg aaaatcatct gcatcaagaa 840

caatttcaca actcttatac ttttctctta caagtcgttc ggcttcatct ggattttcag 900

cctctatact tactaaacgt gataaagttt ctgtaatttc tactgtatcg acctgcagac 960

tggctgtgta taagggagcc tgacatttat attccccaga acatcaggtt aatggcgttt 1020

ttgatgtcat tttcgcggtg gctgagatca gccacttctt ccccgataac ggagaccggc 1080

acactggcca tatcggtggt catcatgcgc cagctttcat ccccgatatg caccaccggg 1140

taaagttcac gggagacttt atctgacagc agacgtgcac tggccagggg gatcaccatc 1200

cgtcgcccgg gcgtgtcaat aatatcactc tgtacatcca caaacagacg ataacggctc 1260

tctcttttat aggtgtaaac cttaaactgc atttcaccag cccctgttct cgtcagcaaa 1320

agagccgttc atttcaataa accgggcgac ctcagccatc ccttcctgat tttccgcttt 1380

ccagcgttcg gcacgcagac gacgggcttc attctgcatg gttgtgctta ccagaccgga 1440

gatattgaca tcatatatgc cttgagcaac tgatagctgt cgctgtcaac tgtcactgta 1500

atacgctgct tcatagcata cctctttttg acatacttcg ggtatacata tcagtatata 1560

ttcttatacc gcaaaaatca gcgcgcaaat acgcatactg ttatctggct tttagtaagc 1620

cggatccacg cggcgtttac gccccccctg ccactcatcg cagtactgtt gtaattcatt 1680

aagcattctg ccgacatgga agccatcaca aacggcatga tgaacctgaa tcgccagcgg 1740

catcagcacc ttgtcgcctt gcgtataata tttgcccatg gtgaaaacgg gggcgaagaa 1800

gttgtccata ttggccacgt ttaaatcaaa actggtgaaa ctcacccagg gattggctga 1860

gacgaaaaac atattctcaa taaacccttt agggaaatag gccaggtttt caccgtaaca 1920

cgccacatct tgcgaatata tgtgtagaaa ctgccggaaa tcgtcgtggt attcactcca 1980

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aaaagtctca atagcccttt ggtcttctga gactgtatct ttgatattct tggagtagac 11160

gagagtgtcg tgctccacca tgttatcaca tcaatccact tgctttgaag acgtggttgg 11220

aacgtcttct ttttccacga tgctcctcgt gggtgggggt ccatctttgg gaccactgtc 11280

ggcagaggca tcttgaacga tagcctttcc tttatcgcaa tgatggcatt tgtaggtgcc 11340

accttccttt tctactgtcc ttttgatgaa gtgacagata gctgggcaat ggaatccgag 11400

gaggtttccc gatattaccc tttgttgaaa agtctcaata gccctttggt cttctgagac 11460

tgtatctttg atattcttgg agtagacgag agtgtcgtgc tccaccatgt tggcaagctg 11520

ctctagccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg 11580

cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtgagttag 11640

ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc cggctcgtat gttgtgtgga 11700

attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg accatgatta cg 11752

Claims (2)

1.一种调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1在调控杨树纤维长度生长发育过程中的应用，PagARF6.1的核苷酸序列如序列表中的序列1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：调控杨树纤维长度的生长素响应因子基因PagARF6.1的表达蛋白的氨基酸序列如序列表中序列2所示。

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