CN112342242A - sting敲除猪源细胞的构建方法及应用 - Google Patents

sting敲除猪源细胞的构建方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112342242A
CN112342242A CN201910720572.XA CN201910720572A CN112342242A CN 112342242 A CN112342242 A CN 112342242A CN 201910720572 A CN201910720572 A CN 201910720572A CN 112342242 A CN112342242 A CN 112342242A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sting
cells
cell
pig
derived
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910720572.XA
Other languages
English (en)
Inventor
秦晓东
杨洋
赵帅阳
张瑞
张志东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Original Assignee
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS filed Critical Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority to CN201910720572.XA priority Critical patent/CN112342242A/zh
Publication of CN112342242A publication Critical patent/CN112342242A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及sting敲除猪源细胞的构建方法及应用，属于细胞构建技术领域。本发明利用CRISPR‑Cas9载体及慢病毒包装技术构建猪源细胞Sting敲除细胞株。本发明所述构建方法能够成功构建猪源Sting蛋白缺失的稳定细胞株，该细胞株可作为工具细胞，用于研究Sting蛋白在细胞抗病毒感染过程中的作用抑制；探索其作为疫苗生产细胞株，保护易感动物免受口蹄疫病毒感染的可能性。

Description

sting敲除猪源细胞的构建方法及应用
技术领域
本发明涉及细胞构建技术领域，具体涉及sting敲除猪源细胞的构建方法及应用。
背景技术
Sting蛋白在细胞抗病毒感染过程具有重要作用，然而目前Sting蛋白在猪源病毒感染中的作用研究较少；主要原因是在猪源细胞中缺乏研究sting蛋白功能的相应工具，如抗体、特异性激活剂和抑制剂；由于猪源Sting蛋白和人源Sting蛋白的氨基酸序列存在差异，针对人源Sting蛋白开发的抗体、特异性激活剂和抑制剂往往不能识别猪源Sting蛋白。开发针对猪源Sting蛋白的修饰抗体以及特异性抑制剂周期漫长，需要不同研究方向的课题组共同合作，目前实施难度很大。
发明内容
本发明的目的在于提供sting敲除猪源细胞的构建方法及应用。本发明所述方法能够成功构建猪源Sting蛋白缺失的稳定细胞株，该细胞株可作为工具细胞，用于研究Sting蛋白在细胞抗病毒感染过程中的作用抑制；探索其作为疫苗生产细胞株，保护易感动物免受口蹄疫病毒感染的可能性。
本发明提供了sting敲除猪源细胞的构建方法，包括以下步骤：
1)针对核苷酸序列如SEQ ID NO.1～5所示的sgRNA序列中的任意一条，设计引物，合成引物，退火，得到引物二聚体，将所述引物二聚体连入慢病毒CRISPR-Cas9载体，得到靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体；
2)提取无内毒素步骤1)所述靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，得到无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，将无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体与包装质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2混合，共转染293T包装细胞，收获慢病毒；
3)将步骤2)得到的慢病毒感染猪源细胞后在细胞培养液中培养，24小时后更换细胞培养液，加入puromycin或者hygromycin B进行筛选，筛选存活的细胞；
4)加入puromycin或者hygromycin B 48小时后，消化细胞，以每孔1个细胞的密度接种于96孔板，使用完全培养液连续培养1～2周后，将细胞传代至12孔板；细胞长满后传代，传代同时取部分细胞提取核酸和蛋白，通过western blot和DNA测序鉴定筛选出sting敲除猪源细胞。
优选的是，步骤1)所述退火的条件为：将引物稀释成100mM浓度，按照体积比为1:1，与含ATP的缓冲溶液混合，95℃孵育5min，降温。
优选的是，步骤1)所述连入的方法为：使用T4连接酶将引物二聚体与经酶切后的慢病毒CRISPR-Cas9载体进行连接。
优选的是，步骤2)所述无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体与包装质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2的混合比例为4:1:2或3:1:2或3:0.75:1.5。
优选的是，步骤2)所述共转染用试剂包括Fugene HD、Lipofectamine 2000或Lipofectamine 3000。
优选的是，步骤2)所述慢病毒包括直接收获的慢病毒液，或经高速离心浓缩的慢病毒液；所述高速离心条件为20000g/min高速离心1小时以上。
优选的是，步骤3)所述猪源细胞包括PK15或ST40。
优选的是，步骤3)所述puromycin的终浓度为1～10g/ml，所述hygromycin B的终浓度为200～500g/ml。
本发明还提供了上述技术方案所述构建方法构建得到的sting敲除猪源细胞。
本发明还提供了上述技术方案所述构建方法得到的sting敲除猪源细胞或上述技术方案所述sting敲除猪源细胞在研究Sting蛋白在细胞抗病毒感染过程中的作用抑制中的应用。
本发明提供了sting敲除猪源细胞的构建方法。本发明所述构建方法利用CRISPR-Cas9载体及慢病毒包装技术构建猪源细胞Sting敲除细胞株，敲除猪源细胞Sting基因后，可以直接研究Sting蛋白在各种猪源病毒感染中的作用，本发明所述构建对于研究猪源病毒感染后天然免疫系统响应具有广泛应用，鉴于Sting蛋白在抗病毒感染过程具有重要作用，敲除Sting蛋白有利于病毒的复制，因而，本发明所述方法得到的基因敲除细胞株具有作为疫苗生产细胞株的潜在价值。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的Sting敲除PK-15细胞单克隆鉴定结果。
具体实施方式
本发明提供了sting敲除猪源细胞的构建方法，包括以下步骤：
1)针对核苷酸序列如SEQ ID NO.1～5所示的sgRNA序列中的任意一条，设计引物，合成引物，退火，得到引物二聚体，将所述引物二聚体连入慢病毒CRISPR-Cas9载体，得到靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体；
2)提取无内毒素步骤1)所述靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，得到无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，将无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体与包装质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2混合，共转染293T包装细胞，收获慢病毒；
3)将步骤2)得到的慢病毒感染猪源细胞后在细胞培养液中培养，24小时后更换细胞培养液，加入puromycin或者hygromycin B进行筛选，筛选存活的细胞；
4)加入puromycin或者hygromycin B 48小时后，消化细胞，以每孔1个细胞的密度接种于96孔板，使用完全培养液连续培养1～2周后，将细胞传代至12孔板；细胞长满后传代，传代同时取部分细胞提取核酸和蛋白，通过western blot和DNA测序鉴定筛选出sting敲除猪源细胞。
本发明针对核苷酸序列如SEQ ID NO.1～5所示的sgRNA序列中的任意一条，设计引物，合成引物，退火，得到引物二聚体，将所述引物二聚体连入慢病毒CRISPR-Cas9载体，得到靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体。本发明对引物的设计合成方法均没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规引物设计合成方法即可。在本发明中，五条sgRNA序列的核苷酸序列如下：CAGCAGTCCTATCTGCTGGG(SEQ ID NO.1)、CCCTGAGGCCCCTGGGCTGT(SEQ ID NO.2)、AGCCACCGGAGCGTGTATTC(SEQ ID NO.3)、GCCCTGAGGCCCCTGGGCTG(SEQ ID NO.4)和CCCCCAAAGGGCCACCAAG(SEQ ID NO.5)。在本发明中，所述退火的条件为：将引物稀释成100mM浓度，按照体积比为1:1，与含ATP的缓冲溶液混合，95℃孵育5min，降温。在本发明中，所述降温优选缓慢进行。在本发明中，所述连入的方法为：使用T4连接酶将引物二聚体与经酶切后的慢病毒CRISPR-Cas9载体进行连接。本发明对所述慢病毒CRISPR-Cas9载体的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的商品化慢病毒CRISPR-Cas9载体即可。
得到靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体后，本发明提取无内毒素靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，得到无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，将无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体与包装质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2混合，共转染293T包装细胞，收获慢病毒。在本发明中，所述无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体与包装质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2的混合比例为4:1:2或3:1:2或3:0.75:1.5。在本发明中，所述共转染用试剂包括Fugene HD、Lipofectamine 2000或Lipofectamine 3000。本发明对所述共转染用试剂的来源没有特殊限定，采用商品化共转染用试剂即可。在本发明中，所述慢病毒包括直接收获的慢病毒液，或经高速离心浓缩的慢病毒液；所述高速离心条件为20000g/min高速离心1小时以上。
得到慢病毒后，本发明将慢病毒感染猪源细胞后在细胞培养液中培养，24小时后更换细胞培养液，加入puromycin或者hygromycin B进行筛选，筛选存活的细胞。在本发明中，所述猪源细胞包括PK15或ST40。在本发明中，所述puromycin的终浓度为1～10g/ml，所述hygromycin B的终浓度为200～500g/ml。
本发明在加入puromycin或者hygromycin B 48小时后，消化细胞，以每孔1个细胞的密度接种于96孔板，使用完全培养液连续培养1～2周后，将细胞传代至12孔板；细胞长满后传代，传代同时取部分细胞提取核酸和蛋白，通过westernblot和DNA测序鉴定筛选出sting敲除猪源细胞。
本发明还提供了上述技术方案所述构建方法构建得到的sting敲除猪源细胞。
本发明还提供了上述技术方案所述构建方法得到的sting敲除猪源细胞或上述技术方案所述sting敲除猪源细胞在研究Sting蛋白在细胞抗病毒感染过程中的作用抑制中的应用。
下面结合具体实施例对本发明所述的sting敲除猪源细胞的构建方法及应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
靶向猪源Sting蛋白的CRISPR-Cas9慢病毒感染PK15细胞后获得10个单细胞克隆，对每个细胞克隆提取细胞蛋白，进行Westernblot分析检测Sting蛋白在不同克隆中的表达水平。使用b-tubulin抗体作为内参抗体，指示蛋白上样量一致。Sting敲除PK-15细胞单克隆鉴定结果如图1所示，4号和9号克隆完全检测不到Sting蛋白，说明这两个克隆发生了基因标记，Sting基因被敲除。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国农业科学院兰州兽医研究所
<120> sting敲除猪源细胞的构建方法及应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cagcagtcct atctgctggg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ccctgaggcc cctgggctgt 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
agccaccgga gcgtgtattc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gccctgaggc ccctgggctg 20
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cccccaaagg gccaccaag 19

Claims (10)

1.sting敲除猪源细胞的构建方法，包括以下步骤：
1)针对核苷酸序列如SEQ ID NO.1～5所示的sgRNA序列中的任意一条，设计引物，合成引物，退火，得到引物二聚体，将所述引物二聚体连入慢病毒CRISPR-Cas9载体，得到靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体；
2)提取无内毒素步骤1)所述靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，得到无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体，将无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体与包装质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2混合，共转染293T包装细胞，收获慢病毒；
3)将步骤2)得到的慢病毒感染猪源细胞后在细胞培养液中培养，24小时后更换细胞培养液，加入puromycin或者hygromycin B进行筛选，筛选存活的细胞；
4)加入puromycin或者hygromycin B 48小时后，消化细胞，以每孔1个细胞的密度接种于96孔板，使用完全培养液连续培养1～2周后，将细胞传代至12孔板；细胞长满后传代，传代同时取部分细胞提取核酸和蛋白，通过western blot和DNA测序鉴定筛选出sting敲除猪源细胞。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1)所述退火的条件为：将引物稀释成100mM浓度，按照体积比为1:1，与含ATP的缓冲溶液混合，95℃孵育5min，降温。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1)所述连入的方法为：使用T4连接酶将引物二聚体与经酶切后的慢病毒CRISPR-Cas9载体进行连接。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2)所述无内毒素的靶向猪源Sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒载体与包装质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2的混合比例为4:1:2或3:1:2或3:0.75:1.5。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2)所述共转染用试剂包括FugeneHD、Lipofectamine 2000或Lipofectamine 3000。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2)所述慢病毒包括直接收获的慢病毒液，或经高速离心浓缩的慢病毒液；所述高速离心条件为20000g/min高速离心1小时以上。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤3)所述猪源细胞包括PK15或ST40。
8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤3)所述puromycin的终浓度为1～10g/ml，所述hygromycin B的终浓度为200～500g/ml。
9.权利要求1～8任一项所述构建方法构建得到的sting敲除猪源细胞。
10.权利要求1～8任一项所述构建方法得到的sting敲除猪源细胞或权利要求9所述sting敲除猪源细胞在研究Sting蛋白在细胞抗病毒感染过程中的作用抑制中的应用。
CN201910720572.XA 2019-08-06 2019-08-06 sting敲除猪源细胞的构建方法及应用 Pending CN112342242A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910720572.XA CN112342242A (zh) 2019-08-06 2019-08-06 sting敲除猪源细胞的构建方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910720572.XA CN112342242A (zh) 2019-08-06 2019-08-06 sting敲除猪源细胞的构建方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112342242A true CN112342242A (zh) 2021-02-09

Family

ID=74366469

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910720572.XA Pending CN112342242A (zh) 2019-08-06 2019-08-06 sting敲除猪源细胞的构建方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112342242A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113278619A (zh) * 2021-07-19 2021-08-20 广东省农业科学院动物科学研究所 双sgRNA、基因敲除载体、基因敲除STING基因的猪成纤维细胞系及其构建方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016197355A1 (zh) * 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪SALL1基因的方法及用于特异性靶向SALL1基因的sgRNA
CN113278619A (zh) * 2021-07-19 2021-08-20 广东省农业科学院动物科学研究所 双sgRNA、基因敲除载体、基因敲除STING基因的猪成纤维细胞系及其构建方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016197355A1 (zh) * 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪SALL1基因的方法及用于特异性靶向SALL1基因的sgRNA
CN113278619A (zh) * 2021-07-19 2021-08-20 广东省农业科学院动物科学研究所 双sgRNA、基因敲除载体、基因敲除STING基因的猪成纤维细胞系及其构建方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GENBANK：MK302493.1: "Sus scrofa STING mRNA, complete cds", 《NCBI》 *
XIAOHONG DU ET AL.: "Noncanonical Role of FBXO6 in Regulating Antiviral Immunity", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》 *
樊爽爽: "STING基因敲除猪肺巨噬细胞系的构建及验证", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113278619A (zh) * 2021-07-19 2021-08-20 广东省农业科学院动物科学研究所 双sgRNA、基因敲除载体、基因敲除STING基因的猪成纤维细胞系及其构建方法
CN113278619B (zh) * 2021-07-19 2021-10-15 广东省农业科学院动物科学研究所 双sgRNA、基因敲除载体、基因敲除STING基因的猪成纤维细胞系及其构建方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107435051B (zh) 一种通过CRISPR/Cas9系统快速获得大片段缺失的细胞系基因敲除方法
CN107502608B (zh) 用于敲除人ALDH2基因的sgRNA、ALDH2基因缺失细胞株的构建方法及应用
Seibel et al. The role of pheromone receptors for communication and mating in Hypocrea jecorina (Trichoderma reesei)
Kenney et al. The lysine residues within the human ribosomal protein S17 sequence naturally inserted into the viral nonstructural protein of a unique strain of hepatitis E virus are important for enhanced virus replication
CN109321584B (zh) 一种简单定性/定量检测单碱基基因编辑技术工作效率的报告系统
US20200055925A1 (en) Method for preparing whole bovine-derived broadly neutralizing antibody against serotype o foot-and-mouth disease virus
CN106755089B (zh) 表达山羊淋巴细胞活化分子的细胞系及其构建方法与应用
Yokomizo et al. Rabies virus glycoprotein expression in Drosophila S2 cells. I. Functional recombinant protein in stable co‐transfected cell line
CN105973854A (zh) 一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒
Zhou et al. Mapping RNA–capsid interactions and RNA secondary structure within virus particles using next-generation sequencing
CN112342243A (zh) 表达人源sting蛋白的猪源细胞的构建方法和应用
CN106755110B (zh) 一种用于增强PPRV复制的敏感细胞亚克隆Vero/Slam/V的制备方法
CN107779474A (zh) 一个表达乳头瘤病毒hpv16的e6和e7自剪切慢病毒载体
CN112342242A (zh) sting敲除猪源细胞的构建方法及应用
CN104560865A (zh) 抗a亚群禽白血病病毒的细胞系及其构建方法与应用
CN113025579A (zh) 一种稳定敲低猪abhd16a基因的ST-KDABHD16A细胞系及其构建方法
CN110244039B (zh) 一种检测j亚群禽白血病病毒抗体的elisa试剂盒及其应用
WO2023144206A1 (en) Modified vero cells and methods of using the same for virus production
JP6384685B2 (ja) 組換えタンパク質の発現増進のための遺伝子断片を含むベクター及びその用途
CN116003624B (zh) Sirt1融合蛋白及其用途
CN103388001A (zh) 一种含凝血酶切割位点gst膜型表达载体及转染阳性细胞的方法
Paget-Bailly et al. Pervasive translation of the downstream ORF from bicistronic mRNAs by human cells: impact of the upstream ORF codon usage and splicing
CN115572714A (zh) 一种快速检测SARS-CoV-2病毒中和抗体有效性的方法
CN105219775B (zh) 一种用于对虾细胞的病毒启动子
CN113025630A (zh) 狐源犬瘟热病毒强毒HBF-1株的感染性cDNA克隆及反向遗传系统的建立

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210209