CN112300290A - 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗 - Google Patents

一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗 Download PDF

Info

Publication number
CN112300290A
CN112300290A CN202011060514.8A CN202011060514A CN112300290A CN 112300290 A CN112300290 A CN 112300290A CN 202011060514 A CN202011060514 A CN 202011060514A CN 112300290 A CN112300290 A CN 112300290A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
protein
papillomavirus
loop
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011060514.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112300290B (zh
Inventor
蒋敦泉
伍树明
刘永江
张海江
张士彬
陈晓
王学红
银飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Kangleweishi Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Beijing Kangleweishi Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Kangleweishi Biological Technology Co ltd filed Critical Beijing Kangleweishi Biological Technology Co ltd
Priority to CN202011060514.8A priority Critical patent/CN112300290B/zh
Publication of CN112300290A publication Critical patent/CN112300290A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112300290B publication Critical patent/CN112300290B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20023—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Abstract

本公开涉及例如由包括嵌合多肽表位的乳头瘤病毒(例如人类乳头瘤病毒，或者BPV)L1主要衣壳蛋白组装而成的类病毒颗粒(VLP)组合物，所述乳头瘤病毒L1主要衣壳蛋白中插入了新型冠状病毒SARS‑COV‑2的表面刺突蛋白(Spike)表位多肽。本公开涉及还涉及包括VLP的疫苗组合物。

Description

一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多 肽疫苗
技术领域
本公开涉及生物技术领域，尤其涉及一种使用乳头瘤病毒(PV)类病 毒颗粒(VLP)递呈抗原的新型冠状病毒(SARS-COV-2)多肽疫苗。
背景技术
COVID-19的病原体SARS-COV-2属于冠状病毒(Coronaviruses,CoVs) 家族成员。冠状病毒是一类包膜正链单链RNA病毒，可感染人和动物。 它们可进一步基于基因型和血清特点，细分为四个属类：α-、β-、γ- 和δ-冠状病毒。迄今，所有已确认可感染人的冠状病毒都属于前两种属， 即Alpha-和Beta-冠状病毒。其中，Beta-冠状病毒尤其引起人们注意，因为Beta-冠状病毒家族成员在过去20年内已经引发了三次大流行，包 括2003年爆发的SARS(由SARS-CoV引起)，2012年流行的MERS(由 MERS-CoV引起)，以及当前肆虐全球的COVID-19(由SARS-CoV-2导致)。 SARS-CoV-2在基因序列上与2003年发现的SARS-CoV高度相似，也很可 能源于蝙蝠，但应该在跳跃至人宿主前经历了某一中间宿主的适应过程。
综合当前全球流行病学数据来看，大部分COVID-19病患无明显症状 或仅呈现轻度至中度病理状态，在大约20％的病例中发生重症现象。 COVID-19导致的病死率(Casefatality rate,CFR)和年龄相关，年长者， 尤其是65岁以上的老人更容易因COVID-19死亡。COVID-19总体病死率 大概在1％～3％之间。当前尚无针对COVID-19的抗病毒药物或者疫苗获得 监管批准。
疫苗是当代医学最伟大的发明之一，也是人类对抗病毒和病毒引发 疾病最经济、最有效的武器。因为疫苗的使用，人类已成功消灭了天花， 基本根除了脊髓灰质炎，及成功控制了绝大多数曾经折磨人类的疾病， 比如结核、麻疹、白喉和破伤风等。自COVID-19爆发以来，各国实验室 纷纷开启了新冠疫苗的研发工作。当前新冠疫苗主要围绕5种技术路线展开，包括灭活病毒疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗及重 组蛋白(多肽)疫苗。据WHO统计，目前已有48种疫苗进入临床研究阶段， 150多种疫苗仍然处于临床前研究中。部分疫苗的研发充分借鉴了 SARS-CoV和MERS-CoV等病毒疫苗的研发经验。
SARS-CoV-2的表面刺突蛋白(Spike)是I类融合蛋白(Class I fusion protein)，介导了病毒附着并侵染宿主细胞的过程，是冠状病毒疫苗研 发的主要抗原靶标。在研亚单位疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗和重组 蛋白(多肽)疫苗均主要是以SARS-CoV-2的表面刺突蛋白为目标抗原。然 而此前SARS-CoV病毒疫苗研究表明，以表面刺突蛋白整个蛋白做抗原制 备的疫苗或者用化学方法灭活的全病毒疫苗在小鼠和雪貂等动物模型中 诱发了抗体依赖的感染增强效应(Antibody-dependent enhancement)。 同时，另有针对SARS-CoV病毒表面刺突蛋白的多肽疫苗研究结果显示， 刺突蛋白中的S597-603多肽可在细胞水平和猕猴中诱发ADE反应，提示多肽 S597-603可能通过表位序列依赖(Epitope-sequencedependent,ESD)机制 诱导ADE效应。
因此，若能通过设计针对SARS-CoV-2表面刺突蛋白抗原表位的多肽 疫苗来规避某些可能触发ADE效应的区域，同时能诱导抗病毒感染的有 效中和抗体，那么人类将拥有一项安全有效的抗新型冠状病毒 SARS-CoV-2利器。本专利申请的研究主要集中在开发一种使用乳头瘤病 毒(PV)类病毒颗粒(VLP)递呈抗原的新型冠状病毒(SARS-COV-2)多肽疫苗。
发明内容
本公开的一个目的为：提供多个来自SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽， 例如SARS-CoV-2表面刺突蛋白的S485-517、S618-639和S1182-1209。当插入乳头瘤 病毒(PV)L1蛋白的DE/BC/FG/HI表面环中时，形成重组嵌合蛋白并组装 成VLP；当这些嵌合表面刺突蛋白多肽的VLP接种动物时，可诱导针对新 型冠状病毒SARS-CoV-2的中和抗体应答。
本公开提供了一种由含嵌合多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成 的类病毒颗粒VLP组合物，其中该乳头瘤病毒L1蛋白中嵌合了新型冠 状病毒SARS-COV-2刺突蛋白(Spike)表位多肽，所述新型冠状病毒 SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽和/或乳头瘤病毒L1蛋白中插入的相 应表位多肽的位点，是有助于本发明所述VLP诱导强烈持久抗病毒中和 反应的因素。
在一个优选的实施方案中，所述表面刺突蛋白多肽插入至乳头瘤 病毒L1蛋白的DE环、BC环、FG环或者HI环中。
在一个优选的实施方案中，
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环中的氨基酸第137-138位之间 (SEQ ID NO:4)；或
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的BC环中的氨基酸第56-57位之间 (SEQ ID NO:5)；或
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的FG环中的氨基酸第280-281位之间 (SEQ ID NO:6)；或
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的HI环中的氨基酸第350-351位之间 (SEQ ID NO:7)。
在一个优选的实施方案中，
SEQ ID NO:4：SAYAANAGV HPV16-L1(aa.133-141)；
SEQ ID NO:5：FPIKKPNNNKILVPK HPV16-L1(aa.50-64)；
SEQ ID NO:6：YIKGSGSTAN HPV16-L1(aa.276-285)；
SEQ ID NO:7：AISTSETTY HPV16-L1(aa.347-355)。
在一个优选的实施方案中，所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环中插 入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
在一个优选的实施方案中，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的BC环 中插入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
在一个优选的实施方案中，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的FG环 中插入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
在一个优选的实施方案中，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的HI环 中插入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
在一个优选的实施方案中，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白来自人 乳头瘤病毒HPV16。
在一个优选的实施方案中，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白来自牛 乳头瘤病毒BPV。
在一个优选的实施方案中，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白来自人 乳头瘤病毒以外的乳头瘤病毒。
在一个优选的实施方案中，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白为变 体，以致所述乳头瘤病毒L1蛋白能够耐受合适新型冠状病毒 SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽的插入而不破坏其结构及失去其抗原 性，并且能够组装成VLP，或至少组装成五聚体壳颗粒。
在一个优选的实施方案中，类病毒颗粒VLP组合物为免疫原性组 合物。
在一个优选的实施方案中，类病毒颗粒VLP组合物具有新型冠状 病毒SARS-COV-2特异的免疫原性。
在一个优选的实施方案中，类病毒颗粒VLP组合物进一步包括佐 剂。
本公开还提供了一种疫苗，包括类病毒颗粒VLP组合物和佐剂。
在一个优选的实施方案中，所述疫苗对新型冠状病毒SARS-COV-2 病毒有中和效力。
在一个优选的实施方案中，其中所述组合物被配制成通过吸入、 口服，在病毒或细菌载体中的方式给予。
在一个优选的实施方案中，其中所述组合物被用于肌肉内(i.m.) 注射的配方中。
在一个优选的实施方案中，其中所述组合物为冻干或粉末形式。
本公开还提供了一种嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白，插入了 新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽，所述刺突蛋白表位多肽 选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列，
或者
一种嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白，在其DE/BC/FG/HI环中 插入了表位多肽，所述表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
本公开还提供了一种编码所述嵌合多肽的核酸。
本公开还提供了一种包括所述核酸序列的表达载体，其连接于表 达控制序列。
本公开还提供了一种宿主细胞，包括所述嵌合多肽、核酸，或表 达载体。
本公开还提供了一种制备VLP或者五聚体壳颗粒组合物的方法， 包括在合适条件下温育所述嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白可自组 装。
本公开还提供了一种用于免疫或接种受试者以对抗新型冠状病毒 SARS-COV-2的方法，包括给予所述受试者有效剂量的所述VLP组合物。
本公开还提供了一种用于诱导受试者体内针对新型冠状病毒 SARS-COV-2的免疫应答的方法，包括给与受试者有效量的所述VLP组 合物。
在一个优选的实施方案中，其中所述免疫应答为抗原特异性的体 液免疫应答、细胞免疫应答。
本公开还提供了一种用于预防具有暴露风险的受试者感染新型冠 状病毒SARS-COV-2的方法，包括给予所述受试者有效量的所述VLP 组合物。
本公开还提供了一种通过接种所述VLP组合物而产生的预防性抗 体或者免疫血清。
本公开还提供了一种用于分别治疗或预防健康或患病受试者的新 型冠状病毒SARS-COV-2感染的方法，包括给予所述受试者所述预防性 或治疗性抗体或免疫血清。
本公开还提供了一种五聚体壳粒组合物，由包括嵌合多肽的乳头 瘤病毒PV L1蛋白组装而成，其中所述乳头瘤病毒PV L1蛋白中插入 了由来自新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽，所述刺突蛋白 表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列，
或者
由含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白组装而成，所述乳头瘤病 毒PV L1蛋白在DE/BC/FG/HI环中插入了表位多肽，所述表位多肽选 自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
如本文所使用，除非本文另有明确规定，单数形式的“一个”，“一 个”和“这个”包括复数指代对象。
根据本发明，术语“载体”是指，可将某编码蛋白质的核苷酸序 列插入其中并使蛋白质获得表达的一种核酸运载工具。载体可以通过 转化、转导或者转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞 中获得表达。
有益效果
本公开提供了一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠 状病毒多肽疫苗，在能够诱导抗病毒感染的有效中和抗体的同时，可规 避冠状病毒疫苗开发中潜在的抗体依赖的感染增强效应(ADE)，免疫后抗 病毒效果好。
本公开的疫苗安全性好，本公开是基因工程产品，不是灭活疫苗， 不存在因痕量活病毒泄露而引起疾病爆发的危险。以较高剂量对小鼠 进行皮下注射，小鼠在较长时间内均健康存活。
本公开的疫苗能够通过基因工程的方法大规模生产，生产成本能 够降低。
在生产本公开的疫苗疫苗过程中安全性高，没有泄露的危险，也 不必担心对环境污染的问题。
本公开的疫苗可在常温下稳定保持活性，无需低温保存，也相应 地降低了运输成本。
附图说明
附图示出了本公开的示例性实施方式，并与其说明一起用于解释本 公开的原理，其中包括了这些附图以提供对本公开的进一步理解，并且 附图包括在本说明书中并构成本说明书的一部分。
图1示出了代表性HPV L1蛋白中BC环、DE环、FG环和DE环位置。
图2示出了嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的HPV16 L1的表达 纯化样品电泳结果；其中M：marker；1：硫铵沉淀复溶上清；2：硫铵沉 淀复溶沉淀；3：离子交换层析流穿；4：离子交换层析峰1；5：离子交 换层析峰2；6：分子筛层析峰；7：组装后VLP分子筛层析峰。
图3示出了嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的HPV16 VLP粒径 检测结果。
图4示出了嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的HPV16 VLP电镜 观察结果。
图5示出了嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的多肽疫苗免疫小 鼠后诱发的免疫应答。
具体实施方式
下面结合附图和实施方式对本公开作进一步的详细说明。可以理解 的是，此处所描述的具体实施方式仅用于解释相关内容，而非对本公开 的限定。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本公开中的实施方式及实施方 式中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施方式来详细说明 本公开。
通过文献调研和生物信息学分析，结合动物免疫学试验结果，本发 明人确定了新型冠状病毒SARS-CoV-2表面刺突蛋白的多肽表位序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3。
来自新型冠状病毒SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽序列S485-517，其具 有氨基酸序列：GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL(SEQ ID NO:1)
来自新型冠状病毒SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽序列S618-639，其具 有氨基酸序列：TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG(SEQ ID NO:2)
来自新型冠状病毒SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽序列S1182-1209，其具 有氨基酸序列：EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY(SEQ ID NO:3)
在本发明的一个实施方式中，将SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽序列 插入至乳头瘤病毒L1蛋白的环中，以使SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽 序列展示在所形成的嵌合VLP表面。例如，可将SARS-CoV-2刺突蛋白表 位多肽序列插入至乳头瘤病毒L1蛋白的DE、BC、FG和HI环中。
在本发明的实施方式中，乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，SARS-CoV-2 刺突蛋白表位多肽序列插入至乳头瘤病毒L1蛋白的DE环的氨基酸 137-138间；或
在本发明的实施方式中，乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，SARS-CoV-2 刺突蛋白表位多肽序列插入至乳头瘤病毒L1蛋白的BC环的氨基酸56-57 间；或
在本发明的实施方式中，乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，SARS-CoV-2 刺突蛋白表位多肽序列插入至乳头瘤病毒L1蛋白的FG环的氨基酸280-281间；或
在本发明的实施方式中，乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，SARS-CoV-2 刺突蛋白表位多肽序列插入至乳头瘤病毒L1蛋白的DE环的氨基酸 350-351间。
嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白类病毒颗 粒(VLP)的形态和颗粒分布性质。
实施例
实施例1：密码子优化后的基因的设计与合成
参照大肠杆菌对基因转录密码子的偏好，使用生物信息学软件优化 SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽编码序列，以适应在大肠杆菌中高效表达， 然后将编码序列分别克隆至表达乳头瘤病毒(PV)L1蛋白的重组质粒中， 插入位点可以是DE环、BC环、FG环或者HI环。之后，将嵌合SARS-CoV-2 刺突蛋白表位多肽编码序列的L1重组质粒转化至大肠杆菌中进行表达。
具体为：首先使用在线生物信息学软件CodonAdaptationTool(JCAT) (http://www.jcat.de/)优化编码SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3的密码子序列。将密码子优化后的基 因序列外包合成后亚克隆至表达乳头瘤病毒(PV)L1蛋白的重组质粒中。 特别地，对于HPV16 L1，所使用的插入位点包括DE环的氨基酸137-138 间、BC环的氨基酸56-57间、FG环的氨基酸280-281间和DE环的氨基 酸350-351间。
在图1中示出了代表性HPV L1蛋白中BC环、DE环、FG环和DE环 位置。
实施例2：嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV L1蛋白的表 达和纯化
鉴定正确的重组质粒，将嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的重组 质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21中。挑取单克隆接种到含氨苄抗性的 LB液体培养基中，37℃培养过夜，按1:100的体积比将培养物接种于含 氨苄抗性的新鲜LB培养基中，37℃振荡培养至OD600nm约为0.8时加入 终浓度为1mM的IPTG，37℃诱导表达6h，或25℃诱导过夜。离心收集37℃下诱导表达融合蛋白的菌体。使用高压破碎仪裂解细胞后高速 (12,000g)离心1小时，取上清并加入20％的硫铵进行目的蛋白初级捕获。 硫铵沉淀所获目的蛋白进一步经过Source15Q阴离子交换和Superdex200 分子筛层析纯化后，在室温下蛋白自组装1小时。组装后对所得样品再 次进行分子筛层析。图2示出了嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的HPV16 VLP的表达纯化样品电泳结果。
实施例3：嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV L1-VLP的鉴定
完成所有纯化步骤后，对所获得的嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多 肽的HPV L1-VLP样品进行动态光散射和电镜观察来鉴定其颗粒大小和形 态。
具体地，纯化后获得的嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV L1-VLP溶液经0.22μm滤膜过滤后，使用马尔文动态光散射仪分析颗粒 的粒径分布和颗粒均一度情况。图3示出了嵌合新型冠状病毒刺突蛋白 表位多肽的HPV16 VLP粒径检测结果。
Z均粒径(d.nm):51.48；PdI:0.012；截距:0.961；产物质量：好。
表1：嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的HPV16 VLP的强度力径 分布。
尺寸(d.nm) 密度％ 标准偏差(d.nm)
峰1： 53.71 100.0 11.87
同时，用磷酸钨负染纯化后获得的嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多 肽的HPV L1-VLP，并置于Hitachi-H7500透射电镜下观察制备好的嵌合 HPV L1-VLP形态结构。图4示出了嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽 的HPV16 VLP电镜观察结果。
实施例4：疫苗组合物的制备和小鼠免疫试验
分别用10μg HPV L1-VLPs混合氢氧化铝佐剂，经腹腔注射免疫8 周龄成年雌性BALB/c小鼠，初次免疫后二周加强免疫一次。初次免疫前、 初次免疫后二周(加强免疫前)及初次免疫后四周采用眶后静脉丛刺破法 采血，共三次。
实施例5：酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中SARS-CoV-2刺 突蛋白表位多肽特异性抗体水平
使用化学合成的SARS-CoV-2表面刺突蛋白多肽SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQID NO:3(偶联至钥孔虫戚血兰素上)包被微量滴定板，通过 ELISA测定所培育的抗嵌合对应SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV16 L1-VLP血清中的特异性抗体效价。结果在图5中示出。
从图5可以看出，通过本公开制备的嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表 位多肽的多肽疫苗在免疫小鼠2周后产生了较高的特异性抗体水平，并 且在第2-4周保持了该抗体水平，从而对小鼠本身产生较好的新冠病毒 防护作用。这说明本公开制备的多肽疫苗有良好的免疫原性，并且在刺 激机体后产生的抗体足以维持一段时间，从而能够为机体提供一定的病 毒防护作用，为后续人体试验提供了良好的基础。
实施例6：疫苗的安全性实验(小鼠实验)
取8周龄成年雌性BALB/c小鼠，每只体重20g左右。分为五组，一 组为对照组，另外四组为分别在DE/BC/FG/HI环嵌合SARS-CoV-2刺突蛋 白表位多肽的HPV L1-VLP。
对照组注射1ml生理盐水，治疗组分别取1mg纯化的嵌合SARS-CoV-2 刺突蛋白表位多肽的HPV L1-VLP用1ml无菌水悬浮。对小鼠进行腹腔注 射，观察1周。所有小鼠均存活，说明本公开的新型冠状病毒多肽疫苗 是安全的。存活率见下表2。
表2：安全性实验
存活率
对照组 10/10
在DE环嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV L1-VLP 10/10
在BC环嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV L1-VLP 10/10
在FG环嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV L1-VLP 10/10
在HI环嵌合SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽的HPV L1-VLP 10/10
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例/方式”、“一些实施例 /方式”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实 施例/方式或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本申请的 至少一个实施例/方式或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表 述不必须针对的是相同的实施例/方式或示例。而且，描述的具体特征、 结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例/方式或示例中以合适的 方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本 说明书中描述的不同实施例/方式或示例以及不同实施例/方式或示例的 特征进行结合和组合。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示 或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定 有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。 在本申请的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除 非另有明确具体的限定。
本领域的技术人员应当理解，上述实施方式仅仅是为了清楚地说明 本公开，而并非是对本公开的范围进行限定。对于所属领域的技术人员 而言，在上述公开的基础上还可以做出其它变化或变型，并且这些变化 或变型仍处于本公开的范围内。
序列表
<110> 北京康乐卫士生物技术股份有限公司
<120> 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗
<130> 20P05211CN
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ggtttcaact gctacttccc gctgcagtct tacggtttcc agccgaccaa cggtgttggt 60
taccagccgt accgtgttgt tgttctgtct ttcgaactg 99
<210> 2
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
accgaagttc cggttgctat ccacgctgac cagctgaccc cgacctggcg tgtttactct 60
accggt 66
<210> 3
<211> 84
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gaaatcgacc gtctgaacga agttgctaaa aacctgaacg aatctctgat cgacctgcag 60
gaactgggta aatacgaaca gtac 84
<210> 4
<211> 1515
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人乳头瘤病毒
<400> 4
atgtctctgt ggctgccgtc tgaagctacc gtttacctgc cgccggttcc ggtttctaaa 60
gttgtttcta ccgacgaata cgttgctcgt accaacatct actaccacgc tggtacctct 120
cgtctgctgg ctgttggtca cccgtacttc ccgatcaaaa aaccgaacaa caacaaaatc 180
ctggttccga aagtttctgg tctgcagtac cgtgttttcc gtatccacct gccggacccg 240
aacaaattcg gtttcccgga cacctctttc tacaacccgg acacccagcg tctggtttgg 300
gcttgcgttg gtgttgaagt tggtcgtggt cagccgctgg gtgttggtat ctctggtcac 360
ccgctgctga acaaactgga cgacaccgaa aacgcttctg cttacgctgc taacgctggt 420
gttgacaacc gtgaatgcat ctctatggac tacaaacaga cccagctgtg cctgatcggt 480
tgcaaaccgc cgatcggtga acactggggt aaaggttctc cgtgcaccaa cgttgctgtt 540
aacccgggtg actgcccgcc gctggaactg atcaacaccg ttatccagga cggtgacatg 600
gttgacaccg gtttcggtgc tatggacttc accaccctgc aggctaacaa atctgaagtt 660
ccgctggaca tctgcacctc tatctgcaaa tacccggact acatcaaaat ggtttctgaa 720
ccgtacggtg actctctgtt cttctacctg cgtcgtgaac agatgttcgt tcgtcacctg 780
ttcaaccgtg ctggtgctgt tggtgaaaac gttccggacg acctgtacat caaaggttct 840
ggttctaccg ctaacctggc ttcttctaac tacttcccga ccccgtctgg ttctatggtt 900
acctctgacg ctcagatctt caacaaaccg tactggctgc agcgtgctca gggtcacaac 960
aacggtatct gctggggtaa ccagctgttc gttaccgttg ttgacaccac ccgttctacc 1020
aacatgtctc tgtgcgctgc tatctctacc tctgaaacca cctacaaaaa caccaacttc 1080
aaagaatacc tgcgtcacgg tgaagaatac gacctgcagt tcatcttcca gctgtgcaaa 1140
atcaccctga ccgctgacgt tatgacctac atccactcta tgaactctac catcctggaa 1200
gactggaact tcggtctgca gccgccgccg ggtggtaccc tggaagacac ctaccgtttc 1260
gttacctctc aggctatcgc ttgccagaaa cacaccccgc cggctccgaa agaagacccg 1320
ctgaaaaaat acaccttctg ggaagttaac ctgaaagaaa aattctctgc tgacctggac 1380
cagttcccgc tgggtcgtaa attcctgctg caggctggtc tgaaagctaa accgaaattc 1440
accctgggta aacgtaaagc taccccgacc acctcttcta cctctaccac cgctaaacgt 1500
aaacagcgta aactg 1515

Claims (25)

1.一种由含嵌合多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中该乳头瘤病毒L1蛋白中嵌合了新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白(Spike)表位多肽，所述新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。
2.根据权利要求1所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环、BC环、FG环或者HI环中。
3.根据权利要求1所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环中的氨基酸第137-138位之间(SEQ ID NO:4)；或
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的BC环中的氨基酸第56-57位之间(SEQ ID NO:5)；或
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的FG环中的氨基酸第280-281位之间(SEQ ID NO:6)；或
所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的HI环中的氨基酸第350-351位之间(SEQ ID NO:7)。
4.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环中插入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。
5.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的BC环中插入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。
6.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的FG环中插入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。
7.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的HI环中插入由以下序列组成的肽：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。
8.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白来自人乳头瘤病毒HPV16。
9.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白来自牛乳头瘤病毒BPV。
10.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白来自人乳头瘤病毒以外的乳头瘤病毒。
11.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述的L1蛋白为变体，以致所述乳头瘤病毒L1蛋白能够耐受新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽的插入而不丧失其结构和抗原特性，并且能够组装成VLP，或至少组装成五聚体壳颗粒。
12.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物，其为免疫原性组合物。
13.根据权利要求12所述的类病毒颗粒VLP组合物，其具有新型冠状病毒SARS-COV-2特异的免疫原性。
14.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物，进一步包括佐剂。
15.一种疫苗，包括根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物和佐剂。
16.根据权利要求15所述的疫苗，其对新型冠状病毒SARS-COV-2病毒有中和效力。
17.根据权利要求15所述的疫苗，其中所述组合物被配制成通过吸入、口服，在病毒或细菌载体中的方式给予。
18.根据权利要求15所述的疫苗，其中所述组合物被用于肌肉内(i.m.)注射的配方中。
19.根据权利要求15所述的疫苗，其中所述组合物为冻干或粉末形式。
20.一种含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白，插入新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽，所述刺突蛋白表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVA IHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列，
或者
一种含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白，包括在DE/BC/FG/HI环中插入了表位多肽，所述表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。
21.一种编码根据权利要求20所述的含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白的核酸。
22.一种包括根据权利要求21所述的核酸的表达载体，其连接于表达控制序列。
23.一种宿主细胞，包括根据权利要求20所述的含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白、根据权利要求21所述的核酸，或根据权利要求22所述的表达载体。
24.一种制备VLP或者五聚体壳颗粒组合物的方法，包括在合适条件下温育根据权利要求20所述的含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白以自组装。
25.一种五聚体壳颗粒组合物，由含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白组装而成，其中所述的乳头瘤病毒PV L1蛋白中插入了新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽，所述刺突蛋白表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列，
或者
由含嵌合多肽的乳头瘤病毒PV L1蛋白组装而成，所述乳头瘤病毒PV L1蛋白在DE/BC/FG/HI环中插入了表位多肽，所述表位多肽选自由以下序列组成的组：
a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。
CN202011060514.8A 2020-09-30 2020-09-30 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗 Active CN112300290B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011060514.8A CN112300290B (zh) 2020-09-30 2020-09-30 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011060514.8A CN112300290B (zh) 2020-09-30 2020-09-30 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112300290A true CN112300290A (zh) 2021-02-02
CN112300290B CN112300290B (zh) 2022-04-01

Family

ID=74488476

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011060514.8A Active CN112300290B (zh) 2020-09-30 2020-09-30 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112300290B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022263451A1 (en) * 2021-06-15 2022-12-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Peptides derived from the spike protein of sars-cov-2 and uses thereof for diagnosis and vaccine purposes

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060258577A1 (en) * 2003-04-28 2006-11-16 Erickson John W Antiviral agents for the treatment, control and prevention of infections by coronaviruses
CN102497880A (zh) * 2009-06-25 2012-06-13 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 新的人乳头状瘤病毒(hpv)蛋白构建体及其在预防hpv疾病中的用途
CN111363860A (zh) * 2020-05-27 2020-07-03 吴江近岸蛋白质科技有限公司 一种检测新型冠状病毒covid-19的核酸组合物及应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060258577A1 (en) * 2003-04-28 2006-11-16 Erickson John W Antiviral agents for the treatment, control and prevention of infections by coronaviruses
CN102497880A (zh) * 2009-06-25 2012-06-13 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 新的人乳头状瘤病毒(hpv)蛋白构建体及其在预防hpv疾病中的用途
CN111363860A (zh) * 2020-05-27 2020-07-03 吴江近岸蛋白质科技有限公司 一种检测新型冠状病毒covid-19的核酸组合物及应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SYED FARAZ AHMED等: "Preliminary identification of potential vaccine targets for the COVID-19 coronavirus (SARS-CoV-2) based on SARS-CoV immunological studies", 《VIRUSES》 *
曹雪涛等: "《医学免疫学》", 31 December 2018, 中国协和医科大学出版社 *
王璐: "抗击病毒的武器专家——记北京康乐卫士生物技术股份有限公司总经理刘永江", 《投资北京》 *
窦骏等: "《疫苗工程学》", 30 October 2007, 东南大学出版社 *
陈万涛等: "《口腔临床免疫学》", 31 January 2010, 上海交通大学出版社 *
马福宝等: "《社区预防接种实用手册》", 31 January 2016, 苏州大学出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022263451A1 (en) * 2021-06-15 2022-12-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Peptides derived from the spike protein of sars-cov-2 and uses thereof for diagnosis and vaccine purposes

Also Published As

Publication number Publication date
CN112300290B (zh) 2022-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111217918B (zh) 一种基于2,4-二氧四氢喋啶合酶的新型冠状病毒s蛋白双区域亚单位纳米疫苗
CN113151312B (zh) 新型冠状病毒SARS-CoV-2 mRNA疫苗及其制备方法和应用
CN113817029B (zh) 一种新型冠状病毒s-rbd三聚体蛋白疫苗、其制备方法和应用
CN111217919A (zh) 一种基于火球菌铁蛋白的新型冠状病毒s蛋白双区域亚单位纳米疫苗
CN111560074A (zh) 一种基于幽门螺旋杆菌铁蛋白的新型冠状病毒s蛋白单区域亚单位纳米疫苗
WO2021147025A1 (en) Anti 2019-ncov vaccine
CN105934441A (zh) 新型sars免疫原性组合物
CN112023035A (zh) 一种以SARS-CoV-2病毒S蛋白RBD区为抗原的纳米疫苗及其制备
US8512711B2 (en) VLP based vaccine delivery system
CN115246874A (zh) 一种重组新型冠状病毒s-rbd三聚体蛋白、其制备方法和应用
CN113666990A (zh) 一种诱导广谱抗冠状病毒的t细胞疫苗免疫原及其应用
WO2023138334A1 (zh) 一种重组新型冠状病毒蛋白疫苗、其制备方法和应用
CN115850396A (zh) 一种rsv纳米颗粒疫苗及其制备方法与应用
CN112552413A (zh) 新型冠状病毒重组蛋白亚单位疫苗
CN112300290B (zh) 一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗
CN109966483A (zh) 一种基于铁蛋白的多抗原通用流感疫苗及其制备方法和应用
CN114213548A (zh) 同时诱导抗多种病毒的免疫应答的方法
TW202206598A (zh) 對抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２之疫苗及其製品
WO2023138333A1 (zh) 一种重组新型冠状病毒蛋白疫苗、其制备方法和应用
WO2022085648A1 (ja) 融合タンパク質及びワクチン
CN113862284B (zh) 一种编码重组禽流感病毒ha蛋白的基因、病毒样颗粒、疫苗及制备与应用
CN101134781A (zh) 携带被插入到乙肝核心抗原蛋白或其片段内的炭疽保护性抗原表位的重组融合蛋白及其用途
JP2024512575A (ja) 弱毒化されたレオウイルスベースのワクチン組成物及びその用途
CN113801206A (zh) 利用受体识别域诱导抗新冠病毒中和抗体的方法
WO2023207717A1 (zh) H5n8禽流感广谱性疫苗的开发及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant