CN112300264A - 一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法 - Google Patents

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陈月华
王振光
李大成
杨光杰
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Abstract

本发明涉及一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法，具体包括以下步骤：1)通过固相多肽合成法合成多肽序列为AYEEQNPFARCLEFLFPTETLLLEL的PHILP(var7)LP；2)对PHILP(var7)LP进行圆二色检测；3)荧光标记多肽FITC‑PHILP(var7)LP乳腺癌细胞荧光显像；4)通过氯胺T法对三阴乳腺癌MDA‑MB‑231细胞进行碘131标记，进行肿瘤模型治疗研究。本发明优点在于：本发明所合成的PHLIP(var7)LP具有靶向酸性微环境的特点，碘131发生的β射线对肿瘤有杀伤效果，对于癌症肿瘤的治疗具有指导性依据。

Description

一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法
技术领域
本发明涉及一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法。
背景技术
低pH值插入肽PHLIP能够靶向酸性肿瘤微环境，但其插入区存在能于碘131结合的酪氨酸与色氨酸，用碘131标记可能会影响PHLIP插入细胞膜的效率。为了便于碘标，对PHILP(var7)结构进行以下优化：在不改变多肽电荷情况下对插入区个别氨基酸进行调整，非电离的极性氨基酸C和Y位置互换；用非极性氨基酸F替换W，结构相似度较高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法，具体包括以下步骤：
1)通过固相多肽合成法合成多肽序列为AYEEQNPFARCLEFLFPTETLLLEL的PHILP(var7)LP；
2)对PHILP(var7)LP进行圆二色检测；
3)荧光标记多肽FITC-PHILP(var7)LP乳腺癌细胞荧光显像：将DMEM培养基与1mol/L盐酸溶液混合来模拟7.4/6.0/5.0的梯度PH值的细胞外培养环境；在24孔板中每孔铺5.0×104个三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞，向每个孔中加入含终质量浓度50μg/ml的FITC-PHILP(var7)LP的梯度pH值培养液0.4ml，设置3个复孔；温育30min后将培养液吸除，并用相同pH值的25mmol/L的PBS清洗5遍以除去未结合的探针；随后，在×200荧光显微镜下观察细胞并进行拍摄；
4)通过氯胺T法对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞进行碘131标记，进行肿瘤模型治疗研究。
本发明优点在于：本发明所合成的PHLIP(var7)LP具有靶向酸性微环境的特点，碘131发生的β射线对肿瘤有杀伤效果，对于癌症肿瘤的治疗具有指导性依据。
附图说明
图1是PHILP(var7)LP的HPLC分析曲线图。
图2是PHILP(var7)LP的ESI-MS分析曲线图。
图3是PHILP(var7)LP在不同pH值下圆二色检测曲线图。
图4是荧光标记多肽FITC-PHILP(var7)LP在不同pH值下乳腺癌细胞荧光显微镜显像图像。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。
实施例
一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法，具体包括以下步骤：
1)通过固相多肽合成法合成多肽序列为AYEEQNPFARCLEFLFPTETLLLEL的PHILP(var7)LP；
2)对PHILP(var7)LP进行圆二色检测；
3)荧光标记多肽FITC-PHILP(var7)LP乳腺癌细胞荧光显像：将DMEM培养基与1mol/L盐酸溶液混合来模拟7.4/6.0/5.0的梯度PH值的细胞外培养环境；在24孔板中每孔铺5.0×104个三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞，向每个孔中加入含终质量浓度50μg/ml的FITC-PHILP(var7)LP的梯度pH值培养液0.4ml，设置3个复孔；温育30min后将培养液吸除，并用相同pH值的25mmol/L的PBS清洗5遍以除去未结合的探针；随后，在×200荧光显微镜下观察细胞并进行拍摄；
4)通过氯胺T法对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞进行碘131标记，进行肿瘤模型治疗研究。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种新型放射性标记抗癌药的合成标记方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)通过固相多肽合成法合成多肽序列为AYEEQNPFARCLEFLFPTETLLLEL的PHILP(var7)LP；
2)对PHILP(var7)LP进行圆二色检测；
3)荧光标记多肽FITC-PHILP(var7)LP乳腺癌细胞荧光显像：将DMEM培养基与1mol/L盐酸溶液混合来模拟7.4/6.0/5.0的梯度PH值的细胞外培养环境；在24孔板中每孔铺5.0×104个三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞，向每个孔中加入含终质量浓度50μg/ml的FITC-PHILP(var7)LP的梯度pH值培养液0.4ml，设置3个复孔；温育30min后将培养液吸除，并用相同pH值的25mmol/L的PBS清洗5遍以除去未结合的探针；随后，在×200荧光显微镜下观察细胞并进行拍摄；
4)通过氯胺T法对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞进行碘131标记，进行肿瘤模型治疗研究。
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