CN112294946A

CN112294946A - 可溶性重组蛋白cd226-ecd抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的制药应用

Info

Publication number: CN112294946A
Application number: CN202011176640.XA
Authority: CN
Inventors: 庄然; 张圆; 卞卡; 金伯泉
Original assignee: Air Force Medical University of PLA
Current assignee: Air Force Medical University of PLA
Priority date: 2020-10-28
Filing date: 2020-10-28
Publication date: 2021-02-02
Anticipated expiration: 2040-10-28
Also published as: CN112294946B

Abstract

本发明提供了一种可溶性重组蛋白CD226‑ECD在抑制过敏性鼻炎哮喘综合征中的应用。该可溶性蛋白能够抑制嗜酸性粒细胞向呼吸道的募集和增殖，发挥免疫保护作用。本发明公开的可溶性重组蛋白CD226‑ECD，其可以通过干预CD226/TIGIT‑CD155信号通路，有效的调控IgE类抗体的产生、嗜酸性粒细胞向肺组织的募集浸润、以及Th细胞分化关键细胞因子IFN‑γ、IL‑5和IL‑13的表达，降低促炎因子IL‑17的水平，有助于抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的发生发展。

Description

可溶性重组蛋白CD226-ECD抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的制药应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种可溶性重组蛋白CD226-ECD 分子抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的制药应用。

背景技术

呼吸道过敏是由多种免疫细胞参与的慢性气道炎症，尤其是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞发挥着重要的效应和调节作用。分别发生于鼻黏膜和支气管黏膜的过敏性炎症，形成了上、下呼吸道的免疫学和病理学改变，在发病诱因、遗传学改变、局部的病理学改变、机体免疫功能异常和发病机制等方面均非常相似。早在上世纪60年代，临床医生就观察到了过敏性鼻炎和过敏性哮喘之间的联系。流行病学统计数据显示，正常人群中哮喘病发病率约为2％-5％，而过敏性鼻炎患者中哮喘的发病率则可高达20％-40％，较正常人高4-20倍；有60％的过敏性鼻炎患者可能伴有下呼吸道症状，甚至发展成为哮喘病。鼻腔和支气管在解剖结构、生理功能以及免疫学微环境上的连续性决定了过敏性鼻炎与哮喘病的关系。目前世界变态反应组织(WAO)及Allergy&Clinical Immunology International杂志和International Archives of Allergy and Immunology杂志正式提出采用“过敏性鼻炎哮喘综合征”的诊断术语。有学者提出了“联合呼吸道”、“过敏性鼻支气管炎”和“全气道炎症过敏征”等概念，认为上下呼吸道疾病需要联合诊断和联合治疗，应该从全身角度进行预防、诊断和治疗。过敏性鼻炎哮喘综合征引起反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状，多在接触过敏原后迅速发作，或在夜间及凌晨发生，主要表现为气道对多种刺激因子反应性增高。一直以来，美国、英国、澳大利亚、新西兰等西方发达国家哮喘患病率和死亡率显著高于亚非拉等经济欠发达地区。近年来，随着我国经济实力和国民生活水平的提高，过敏性鼻炎哮喘综合征的患病率有上升趋势。传统意义上的哮喘患者，目前全世界约有一亿，成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病。中国哮喘的患病率总体约为1％，儿童较成人略高，全国范围年发病人数已经超过1千万。

过敏性鼻炎哮喘综合征是多种炎症细胞参与，以气道嗜酸性粒细胞浸润为特征的慢性气道变态反应性炎症性疾病。人体吸入过敏原后，由气道抗原呈递细胞摄取和提呈过敏原给T细胞后，促使T细胞过度活化和增殖，启动过敏性鼻炎和哮喘的发生。其中CD4⁺T细胞的过度活化被认为在哮喘发病中起重要作用。CD4 ⁺T细胞活化后向Th2细胞分化增多，Th2细胞的过度活化导致了Th2反应为主的免疫反应，最终导致嗜酸性粒细胞等炎症细胞在气道聚集，引起气道变态反应性炎症。T细胞的活化、分化和效应水平受到多种膜表面免疫分子的精细调控；反之，通过调控共刺激/共抑制分子活性，诱导T细胞无能或抑制其向Th2分化的方法也有望用于哮喘等免疫性疾病的治疗。

CD226是一种存在于免疫细胞和内皮细胞上的共刺激黏附分子，又称 DNAM-1(DNAX accessory molecule 1)或PTA-1(platelet and T cell activation antigen 1)，属于Ⅰ型跨膜糖蛋白，是免疫球蛋白超家族成员之一，分子量为67kD。 CD226分子是细胞膜上一种重要的活化型受体，已知的功能主要参与调控淋巴细胞的分化与杀伤、细胞间黏附等细胞免疫学过程。随着研究的深入与实验技术手段的发展，该分子在多种免疫细胞上新的功能和调控效应不断被发现，在临床应用、特别是肿瘤和炎症相关疾病的机制研究方面获得了越来越多的重视。CD226 的主要配体是CD155分子，同时CD155还与TIGIT、CD96两个分子存在相互作用；在同一细胞表面，3个分子竞争性结合同一配体CD155。CD155、CD96和TIGIT胞质区含有ITIM基序，可传递抑制性信号，CD226传递活化性信号，构成了复杂的调控网络。CD226分子通过与其配体相互作用影响免疫突触形成、细胞间黏附，调控造血发育和免疫细胞的分化与杀伤等生物学过程，参与了多种类型临床疾病的发生发展。

近年来，CD226分子日益受到广泛关注，其在临床实践中的机制和应用研究也日渐深入。CD226分子是一个在进化上保守的分子，不同种属间CD226分子在核苷酸水平和氨基酸水平高度同源，在组织和细胞类型的表达分布也极为相似，提示该分子在机体免疫应答过程和其他生物学功能中可能扮演了重要的角色。目前已知CD226胞质区有三类活化型信号传递的基序：1.EDIYVNY基序可作为非受体型蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosinekinase，PTK)的底物，并与蛋白酪氨酸磷酸酶2(protein tyrosine phosphatase 2,PTP2)氨基端的SH2结构域结合；2.S/T 结构(丝氨酸/苏氨酸)可以作为酪蛋白激酶II(caseinkinase II)和蛋白激酶C (protein kinase C，PKC)的作用底物；3.胞质区C端还有一段被PDZ结构域识别的KTRV基序，可能也参与了CD226与下游其他信号分子的相互作用。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种可溶性重组蛋白CD226-ECD分子抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的制药应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了可溶性重组蛋白CD226-ECD在制备防治过敏性鼻炎哮喘综合征反应的药物中的应用，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD为CD226蛋白的胞膜外区，C端融合表达有人IgG蛋白的Fc段。

优选地，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD还包括基于CD226分子胞膜外区序列进行修饰或氨基酸突变的蛋白。

优选地，所述的药物为能够干预CD226/TIGIT-CD155信号通路的药物。

优选地，所述的药物为减轻肺组织纤维化及减少炎症细胞浸润的药物。

优选地，所述的药物为降低呼吸道嗜酸性粒细胞浸润的药物。

优选地，所述的药物为减轻血清和肺泡灌洗液中IgE类抗体水平的药物。

优选地，所述的药物为增加Th1类细胞因子水平、减少Th2类细胞因子水平的药物。

优选地，所述的药物为降低促炎因子IL-17水平的药物。

优选地，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD的动物给药量为0.5～2mg/kg。

本发明还公开了可溶性重组蛋白CD226-ECD在制备过敏性鼻炎哮喘综合征抑制剂中的应用，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD为CD226蛋白的胞膜外区， C端融合表达有人IgG蛋白的Fc段，或者为基于CD226分子胞膜外区序列进行修饰或氨基酸突变的蛋白。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明首次公开了重组蛋白CD226-ECD在抑制过敏性鼻炎哮喘综合征方面的制药用途，其可以通过干预CD226/TIGIT-CD155信号通路，有效的抑制嗜酸性粒细胞在呼吸道的浸润，有助于诱导对过敏原的耐受，减轻过敏性鼻炎哮喘综合征。本发明利用OVA免疫小鼠诱导哮喘模型，通过流式细胞术、组织病理学检测和RT-PCR等实验手段，检测CD226-ECD可溶性蛋白对肺组织炎症、T淋巴细胞分化的影响、嗜酸性粒细胞浸润及细胞因子产生水平。结果显示：

可溶性CD226-ECD重组蛋白处理显著减轻过敏性鼻炎哮喘综合征小鼠肺脏纤维化，减少炎细胞在肺脏局部的浸润。与IgG对照相比，采用CD226-ECD处理组小鼠的肺脏病理损伤明显减轻，炎性渗出、淋巴细胞浸润和纤维化都显著较轻。由OVA诱导的过敏性鼻炎哮喘综合征动物肺泡灌洗液中，有大量的嗜酸性粒细胞浸润，髓系细胞中巨噬细胞比例降低；而CD226-ECD处理组中，嗜酸性粒细胞浸润显著减轻，髓系细胞中主要是巨噬细胞。模型小鼠肺组织中， CD226-ECD处理组Th1型的细胞因子γ干扰素(IFN-γ)水平显著上调，而Th2型的细胞因子IL-5、IL-13和促炎因子IL-17的表达水平显著降低。特别重要的是，CD226-ECD重组蛋白处理，可以显著降低血清中IgE类抗体、尤其是OVA 特异性IgE的水平，有效的抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的发生。

附图说明

图1为CD226-ECD重组蛋白的结构模式图；

图2为CD226-ECD重组蛋白减轻肺纤维化、减少炎症细胞浸润的实验结果图；

图3为CD226-ECD重组蛋白下调肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞浸润的流式分析结果图；

图4为CD226-ECD重组蛋白下调肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比例、上调巨噬细胞比例的实验结果图；其中，(a)为上调结果；(b)为下调结果；

图5为CD226-ECD重组蛋白处理增加肺组织中IFN-γ细胞因子的表达水平，下调IL-5和IL-13细胞因子表达水平的实验结果图；其中，(a)为IFN-γ细胞因子表达水平；(b)为IL-5细胞因子表达水平；(c)为IL-13细胞因子表达水平；

图6为CD226-ECD重组蛋白处理降低肺组织中促炎细胞因子IL-17表达水平的实验结果图；

图7为CD226-ECD重组蛋白处理降低血清中总IgE和OVA特异性IgE类抗体水平的实验结果图；其中，(a)为总IgE；(b)为OVA特异性IgE类抗体。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

下面结合附图对本发明做进一步详细描述：

本发明首先利用生物信息学分析，将CD226胞膜外区(ECD)序列插入真核表达载体pSectag2-Fc，常规基因测序方法确定该融合基因序列正确；转染细胞后收集细胞培养上清，利用抗Fc亲和层析技术纯化出CD226重组融合蛋白。使用OVA免疫C57小鼠，建立过敏性鼻炎哮喘综合征模型，观察CD226-ECD对疾病的影响；对模型小鼠肺组织进行组织病理学观察，检测小鼠肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞比例，检测肺组织中Th细胞分化相关的关键细胞因子的表达水平及血清中总IgE和OVA特异性IgE的水平。

1、可溶性CD226-ECD重组融合蛋白的设计与表达载体构建

CD226-ECD融合基因序列，利用生物信息学分析，将胞膜外区序列插入真核表达载体pSectag2-Fc，基因测序确定该融合基因序列。具体而言，含有3c酶切位点和人IgG分子Fc段融合基因的表达载体pSectag2-Fc(该载体有公开文献记载：《CD226及其配体CD112/CD155分子相互作用机制的研究(第四军医大学)》，公众可以联系作者索取或根据该发表文献自行合成制备)；检测人IgG和可溶性 Fc融合蛋白的夹心ELISA试剂盒、小鼠抗人IgG分子Fc段单克隆抗体(mAb) 可以为本单位既往实验研究中自行制备，也可以用市面上商品化供应的试剂，只要能够达到同样的技术要求、实现同样的实验目的即可。中国仓鼠卵巢上皮细胞CHO细胞系培养于10％NCS DMEM培养基(Hyclone公司产品)中。 CNBr-activatedSepharose 4B层析柱填料购自GE公司。RNA提取试剂Trizol购自Gibco公司。用于逆转录合成cDNA的AMV逆转录酶、逆转录引物oligo(dT)， rTaq DNA聚合酶、Pyrobest高保真聚合酶、dNTPs、pMD18-T载体及连接试剂盒 (DNA Ligation Kit Ver.2.0)等购自宝生物工程(大连)有限公司。序列特异性引物由北京奥科公司合成。胰蛋白胨、酵母提取物和低熔点琼脂糖购自英国 OXOID公司。DNA快速纯化试剂盒、胶回收试剂盒、质粒小量提取试剂盒购自上海天根生物技术有限公司。

分离获得T细胞，PBS洗涤2次并计数细胞，按每1×10⁷个细胞样品加1ml Trizol裂解细胞。酚-氯仿法抽提1次，以提取得到的总RNA为模板，以oligo(dT)15 为引物，逆转录合成cDNA。根据GenBank登录的CD226基因序列设计扩增胞膜外区基因。以T细胞cDNA为模板，加入高保真DNA聚合酶Pyrobest和引物混匀后进行PCR。反应条件为：94℃变性10min，94℃30s，58℃30s，72℃40s，共35个循环后，再于72℃延伸10min。扩增得到的DNA片段利用rTaqDNA聚合酶给DNA片段3’端添加“A”：反应体系包括扩增所得到的DNA片段、rTaq 酶、dNTP、PCR buffer，反应参数：94℃变性10min，72℃40min。反应产物经 1％琼脂糖凝胶电泳确认长度，胶回收试剂盒溶胶回收目的片段，连接入pMD18-T 载体中并转化大肠杆菌DH5α，参数：16℃连接2h，与感受态DH5α菌轻柔混合后冰浴10min，42℃热休克90s，涂布于Amp抗性(Amp浓度120μg/ml)LB 琼脂平板，过夜培养后挑取阳性转化子克隆进行PCR鉴定，阳性克隆再转入含氨苄青霉素的液体LB培养基(Amp浓度120μg/ml)扩大培养、小量提取质粒 DNA进行酶切鉴定，挑取阳性克隆进行DNA测序。将含有正确序列的克隆扩大培养，提取质粒，进一步将目的片段亚克隆连接入pSectag2-Fc载体，测序确定融合基因序列的正确性。

CD226-ECD重组蛋白的结构模式如图1所示。CD226-ECD重组蛋白的序列，人CD226-ECD序列如SEQ.ID.NO.1所示，小鼠CD226-ECD序列如SEQ.ID.NO.2 所示。

2、CD226-ECD重组蛋白的大量制备和纯化：

在24孔细胞培养板中按2×10⁵/well密度接种CHO细胞，培养过夜后细胞达到约90％汇合率。将pSectag2-CD226-ECD质粒与具有新霉素抗性的质粒 (pEGFP-N1)按10:1(2μg:0.2μg)比例混合后，脂质体LF3000法转染CHO细胞。培养48h后转种至25cm²细胞培养瓶，加入终浓度为0.8g/L的G418进行选择性培养，以获取G418抗性克隆。

用含5％NCS的RPMI 1640培养基大规模培养CHO/CD226-ECD细胞株，生长至约95％汇合率时消化并按1:4比例传代培养；收获上清：细胞自传代至约 90％汇合率约需时4d，此时收获一次上清，换为新鲜培养基继续培养4-5d后收获一次上清并添加新鲜培养基继续培养至大多数细胞死亡时收集培养上清。平均每个75cm²细胞培养瓶可以收获上清35ml。此过程中每日取样，采用夹心ELISA 法测定上清中Fc融合蛋白含量。每批收获上清均立即冻存于-30℃。

将抗人Fc单克隆抗体(mAb，本教研室制备，克隆号WT6)交联 CNBr-activatedSepharose 4B琼脂糖凝胶，制备亲和层析柱。注意：此处所用小鼠抗人Fc单克隆抗体(mAb)和对应的亲和层析柱均为本单位自行制备，市面上有类似的商品化试剂供应(mAb和亲和层析柱都有)，只要能够达到同样的技术要求、实现同样的实验目的即可。

简言之，CNBr-activated Sepharose 4B琼脂糖先经1mmol/L盐酸活化，立即与纯化的mAb在pH8.3交联缓冲液中室温轻柔混合2h，比例为每ml溶胀凝胶加 8mg纯化mAb，随后转至pH8.3甘氨酸溶液中封闭剩余活性位点，pH4.0和pH8.3 缓冲液交替洗涤3次，PBS洗涤2次，加入终浓度为0.01％NaN₃后装塑料层析柱，置于4℃冰箱保存。

CHO/CD226-ECD细胞培养上清经8500rpm高速低温离心，0.22μm滤膜过滤除去细胞碎片和颗粒，使用医用输液器缓慢上柱，流速控制在1-1.5ml/min，上样完成后以10倍柱床体积的PBS冲洗亲和层析柱，加入洗脱缓冲液洗脱目的蛋白，用Eppendorf管收集洗脱液，迅速加入碱性中和液中和，预先滴定中和比例为每 12滴洗脱液加75μl中和液。上样前上清、穿过液均留样品待测。洗脱液用截留分子量为30kDa的超滤离心管浓缩蛋白并更换缓冲体系至0.15mol/L PBS，紫外分光光度法定量蛋白。SDS-PAGE鉴定蛋白纯度及其分子量。检测可溶型人Fc 段融合蛋白的夹心ELISA试剂盒检测上样前上清和穿过液含量。

3、可溶性重组蛋白CD226-ECD减轻过敏性鼻炎哮喘综合征

采用卵清蛋白(OVA)免疫法建立C57小鼠过敏性鼻炎哮喘综合征模型，观察CD226-ECD对过敏性鼻炎哮喘综合征反应的调控和治疗作用。简要来说，使用C57小鼠作为免疫动物，在第0、7、14天，分别给予腹腔注射50μg OVA+2mg 氢氧化铝佐剂致敏。CD226-ECD给药方案：在实验的第1、3、5、8、10、12、 15、17、19、22、24、26天腹腔注射CD226-ECD(实验组)或人IgG(对照组)，剂量为1mg/kg体重。随后在第21至27天，小鼠腹腔麻醉后，经鼻吸入50μgOVA，每日1次。第28天，小鼠行安乐死，取样检测模型动物肺脏组织病理损伤情况，呼吸道灌洗液中各类免疫细胞的比例、嗜酸性粒细胞浸润，检测肺组织中重要细胞因子的水平，ELSIA法检测血清中总IgE类抗体和OVA特异性IgE抗体的水平。

实验发现：可溶性CD226-ECD重组蛋白处理显著减少炎细胞在肺脏局部的浸润，减轻过敏性鼻炎哮喘综合征小鼠肺脏纤维化，结果参见图2。可以看出，与IgG对照组相比，CD226-ECD处理组小鼠的肺脏病理损伤明显减轻，炎性渗出、淋巴细胞浸润和纤维化都显著较轻。收集模型动物肺泡灌洗液，进行免疫荧光染色和流式细胞术分析，实验结果如图3和图4所示。由OVA诱导的过敏性鼻炎哮喘综合征动物肺泡灌洗液中，有大量的嗜酸性粒细胞(Eos：CD170⁺CD11c^-) 浸润，髓系细胞中巨噬细胞(F4/80⁺)比例降低；而CD226-ECD处理组中，嗜酸性粒细胞浸润显著减轻，髓系细胞中主要是巨噬细胞，基本上都属于正常肺泡巨噬细胞(alveolarMac)，而非间质巨噬细胞(interMac)。模型小鼠肺组织中， CD226-ECD处理组IFN-γ水平显著上调，而Th2型的细胞因子IL-5和IL-13的表达水平显著降低，结果参见图5。同时，肺组织中炎症细胞因子IL-17的水平也显著降低，结果见图6。特别重要的是，CD226-ECD重组蛋白处理，可以降低血清中IgE类抗体、尤其是显著降低OVA特异性IgE的水平，有效的抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的发生，结果参见图7。

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

序列表

<110> 中国人民解放军空军军医大学

<120> 可溶性重组蛋白CD226-ECD抑制过敏性鼻炎哮喘综合征的制药应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 250

<212> PRT

<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum

<400> 1

Met Asp Tyr Pro Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu His Val Tyr Arg Ala

1 5 10 15

Leu Cys Glu Glu Val Leu Trp His Thr Ser Val Pro Phe Ala Glu Asn

20 25 30

Met Ser Leu Glu Cys Val Tyr Pro Ser Met Gly Ile Leu Thr Gln Val

35 40 45

Glu Trp Phe Lys Ile Gly Thr Gln Gln Asp Ser Ile Ala Ile Phe Ser

50 55 60

Pro Thr His Gly Met Val Ile Arg Lys Pro Tyr Ala Glu Arg Val Tyr

65 70 75 80

Phe Leu Asn Ser Thr Met Ala Ser Asn Asn Met Thr Leu Phe Phe Arg

85 90 95

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100 105 110

Tyr Pro Gln Gly Thr Trp Gln Lys Val Ile Gln Val Val Gln Ser Asp

115 120 125

Ser Phe Glu Ala Ala Val Pro Ser Asn Ser His Ile Val Ser Glu Pro

130 135 140

Gly Lys Asn Val Thr Leu Thr Cys Gln Pro Gln Met Thr Trp Pro Val

145 150 155 160

Gln Ala Val Arg Trp Glu Lys Ile Gln Pro Arg Gln Ile Asp Leu Leu

165 170 175

Thr Tyr Cys Asn Leu Val His Gly Arg Asn Phe Thr Ser Lys Phe Pro

180 185 190

Arg Gln Ile Val Ser Asn Cys Ser His Gly Arg Trp Ser Val Ile Val

195 200 205

Ile Pro Asp Val Thr Val Ser Asp Ser Gly Leu Tyr Arg Cys Tyr Leu

210 215 220

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225 230 235 240

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245 250

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<211> 226

<212> PRT

<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum

<400> 2

Met Ala Tyr Val Thr Trp Leu Leu Ala Ile Leu His Val His Lys Ala

1 5 10 15

Leu Cys Glu Glu Thr Leu Trp Asp Thr Thr Val Arg Leu Ser Glu Thr

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85 90 95

Tyr Asn Ala Ser Glu Ala Asp Ile Gly Ile Tyr Ser Cys Leu Phe His

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165 170 175

Leu Ala Ser Cys Asn Leu Ser Gln Glu Thr Arg Tyr Thr Ser Lys Tyr

180 185 190

Leu Arg Gln Thr Arg Ser Asn Cys Ser Gln Gly Ser Met Lys Ser Ile

195 200 205

Leu Ile Ile Pro Asn Ala Met Ala Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Arg Cys

210 215 220

Arg Ser

225

Claims

1.可溶性重组蛋白CD226-ECD在制备防治过敏性鼻炎哮喘综合征反应的药物中的应用，其特征在于，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD为CD226蛋白的胞膜外区，C端融合表达有人IgG蛋白的Fc段。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD还包括基于CD226分子胞膜外区序列进行修饰或氨基酸突变的蛋白。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的药物为能够干预CD226/TIGIT-CD155信号通路的药物。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为减轻肺组织纤维化及减少炎症细胞浸润的药物。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物为降低呼吸道嗜酸性粒细胞浸润的药物。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为减轻血清和肺泡灌洗液中IgE类抗体水平的药物。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为增加Th1类细胞因子水平、减少Th2类细胞因子水平的药物。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为降低促炎因子IL-17水平的药物。

9.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD的动物给药量为0.5～2mg/kg。

10.可溶性重组蛋白CD226-ECD在制备过敏性鼻炎哮喘综合征抑制剂中的应用，其特征在于，所述可溶性重组蛋白CD226-ECD为CD226蛋白的胞膜外区，C端融合表达有人IgG蛋白的Fc段，或者为基于CD226分子胞膜外区序列进行修饰或氨基酸突变的蛋白。