CN112294795B - 蒿甲醚在治疗和预防柯萨奇病毒感染中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了蒿甲醚在治疗和预防柯萨奇病毒感染中的应用。本发明提供了蒿甲醚或其衍生物或其药学上可接受的盐或以蒿甲醚或其衍生物或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在如下任一中的应用：抑制柯萨奇病毒、治疗和/或预防由于柯萨奇病毒感染所致疾病、改善由于柯萨奇病毒感染所致症状。本发明基于柯萨奇病毒药物筛选模型从抗病毒药物中筛选出了具有抗柯萨奇病毒的活性药物蒿甲醚。本发明对于感染柯萨奇病毒后疾病的治疗和预防具有重要临床应用价值。

Description

蒿甲醚在治疗和预防柯萨奇病毒感染中的应用

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及蒿甲醚在治疗和预防柯萨奇病毒感染中的应用。

背景技术

柯萨奇病毒(Coxsackievirus)是一种肠道病毒(enterovirus)，它属于小RNA病毒科，肠道病毒属。其生物学性状和脊髓灰质炎病毒相似，病毒体直径为28nm，无包膜结构且核酸为单正链RNA。柯萨奇病毒为一类常见的经呼吸道和消化道感染人体的病毒，感染后人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状，严重时可引起无菌性脑膜炎。根据新生小鼠感染病毒早期的致病性观察，柯萨奇病毒可分为A和B两类，其中A类多见于儿童感染，倾向于感染皮肤和粘膜，引起疱疹性咽峡炎，急性出血性结膜炎和手足口病，对婴幼儿健康造成了严重的威胁；B类病毒倾向于感染心脏、胸膜、胰腺和肝脏，引起胸膜痛，心肌炎，心包炎和肝炎。

柯萨奇病毒A9型(CV-A9)属于柯萨奇病毒A类(CVA)，但是与其它柯萨奇病毒B类(CVB)同属于肠道病毒B族。CV-A9被认为是病毒性脑炎的重要病原体之一，但目前还未有针对肠道病毒的特效药。

蒿甲醚，为一种高效、速效的疟原虫红细胞内期杀灭剂。用于抗氯喹恶性疟及凶险型疟疾的治疗，显效迅速，近期疗效好。

目前尚未有蒿甲醚抑制柯萨奇病毒的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供蒿甲醚在治疗和预防柯萨奇病毒感染中的应用。

第一方面，本发明要求保护蒿甲醚或其衍生物或其药学上可接受的盐或以蒿甲醚或其衍生物或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在如下任一中的应用：

(A1)制备抑制柯萨奇病毒的产品，或抑制柯萨奇病毒。

(A2)制备能够治疗和/或预防由于柯萨奇病毒感染所致疾病的产品，或治疗和/或预防由于柯萨奇病毒感染所致疾病。

(A3)制备能够改善由于柯萨奇病毒感染所致症状的产品，或改善由于柯萨奇病毒感染所致症状。

其中，所述抑制柯萨奇病毒可为在机体水平或细胞水平抑制柯萨奇病毒。

所述抑制柯萨奇病毒为抑制柯萨奇病毒复制。

所述由于柯萨奇病毒感染所致疾病可为疱疹性咽峡炎，急性出血性结膜炎、手足口病、胸膜痛，心肌炎，心包炎和肝炎等。所述由于柯萨奇病毒感染所致症状可为发热、打喷嚏、咳嗽、出疹等。

所述抑制柯萨奇病毒是在柯萨奇病毒进入宿主或宿主细胞的全过程(即全感染周期)发挥作用。所以蒿甲醚既适于制备用于治疗由于柯萨奇病毒感染所致疾病的产品，也适于制备用于预防由于柯萨奇病毒感染所致疾病的产品。

在本发明中，所述柯萨奇病毒可为柯萨奇病毒A类或其它柯萨奇病毒。

进一步地，所述柯萨奇病毒A类可为柯萨奇病毒A类9型或其它型的柯萨奇病毒A类。

在本发明的具体实施方式中，所述柯萨奇病毒A类9型的全基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。对应于基因组，所述柯萨奇病毒A类9型的全基因组序列如SEQ IDNo.1所示。更加具体地，所述柯萨奇病毒A类9型为所述柯萨奇病毒A类9型毒株BUCT01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.20091。

在本发明中，所述蒿甲醚来源“三药三方”中的热毒宁注射液或透解祛瘟颗粒或金花清感颗粒。

在所述应用中，所述产品具体可为药物。

第二方面，本发明要求保护一种产品。

本发明要求保护的产品，其活性成分为蒿甲醚或其衍生物或其药学上可接受的盐或以蒿甲醚或其衍生物或其药学上可接受的盐；所述产品具有如下任一用途：

(a1)抑制柯萨奇病毒；

(a2)治疗和/或预防由于柯萨奇病毒感染所致疾病；

(a3)改善由于柯萨奇病毒感染所致症状。

其中，所述抑制柯萨奇病毒可为在机体水平或细胞水平抑制柯萨奇病毒。

所述抑制柯萨奇病毒为抑制柯萨奇病毒复制。

所述由于柯萨奇病毒感染所致疾病可为疱疹性咽峡炎，急性出血性结膜炎、手足口病、胸膜痛，心肌炎，心包炎和肝炎等。所述由于柯萨奇病毒感染所致症状可为发热、打喷嚏、咳嗽、出疹等。

所述抑制柯萨奇病毒是在柯萨奇病毒进入宿主或宿主细胞的全过程(即全感染周期)发挥作用。所以蒿甲醚既适于制备用于治疗由于柯萨奇病毒感染所致疾病的产品，也适于制备用于预防由于柯萨奇病毒感染所致疾病的产品。

在本发明中，所述柯萨奇病毒可为柯萨奇病毒A类或其它柯萨奇病毒。

进一步地，所述柯萨奇病毒A类可为柯萨奇病毒A类9型或其它型的柯萨奇病毒A类。

在本发明的具体实施方式中，所述柯萨奇病毒A类9型的全基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。对应于基因组，所述柯萨奇病毒A类9型的全基因组序列如SEQ IDNo.1所示。更加具体地，所述柯萨奇病毒A类9型为所述柯萨奇病毒A类9型毒株BUCT01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.20091。

在本发明中，所述蒿甲醚来源“三药三方”中的热毒宁注射液或透解祛瘟颗粒或金花清感颗粒。

在所述应用中，所述产品具体可为药物。

在本发明中，所述柯萨奇病毒也可以为其它的肠道病毒B族。

在本发明中，所述蒿甲醚的结构式如式I所示：

本发明基于柯萨奇病毒药物筛选模型从抗病毒药物中筛选出了具有抗柯萨奇病毒的活性药物蒿甲醚。本发明对于感染柯萨奇病毒后疾病的治疗和预防具有重要临床应用价值。

附图说明

图1为siRNA敲降FcRn的亚基B2M后mRNA的表达情况。图中siNC为阴性对照。

图2为siRNA敲降FcRn的亚基FCGRT后mRNA的表达情况。图中siNC为阴性对照。

图3为siRNA敲降FcRn两个亚基B2M或FCGRT后对CV-A9病毒感染的影响。

图4为不加病毒培养72小时后，不加药时的293T细胞形态图。

图5为感染复数为0.01的CV-A9毒株BUCT01感染72小时后，不加药时的293T细胞形态图。

图6为加入终浓度10μM(微摩尔每升)的蒿甲醚和感染复数为0.01的CV-A9毒株BUCT01感染72小时后的293T细胞形态图。

图7为终浓度10μM(微摩尔每升)的蒿甲醚对柯萨奇病毒CV-A9的病毒复制抑制率。

图8为蒿甲醚的EC₅₀、CC₅₀和SI。

图9为蒿甲醚的加药时间实验结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

柯萨奇病毒A类9型毒株BUCT01：从患手足口病的幼儿粪便中分离并培养所得，经高通量测序鉴定，确认其为一株柯萨奇病毒A类9型，全基因组序列分析结果显示其与2013年中国分离出的一株柯萨奇病毒(GenBank accession number：KP289434)的核苷酸同源性最高为91.38％，与2013年中国分离出来的一株柯萨奇病毒A类9型(GenBank accessionnumber：KP290111)氨基酸同源性最高为97.91％。CV-A9毒株BUCT01的全基因组核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，全基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。CV-A9毒株BUCT01已经于2020年10月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.20091；参椐的生物材料为BUCT01；分类命名：柯萨奇病毒。

实施例1、从中药化合物库中筛选具有抗柯萨奇病毒活性的药物单体

一、实验方法

1、细胞培养和病毒培养

人肾上皮细胞系293T是从美国模式培养物集存库(ATCC，CRL-3216TM)中获得的，在37℃、5％CO₂的条件下，在含有10％胎牛血清(FBS；Gibco Invitrogen)的DMEM培养基(Gibco)中培养。

将柯萨奇病毒A类9型毒株BUCT01在293T细胞中繁殖，用RD细胞(ATCC CCL-136)做噬斑实验测定病毒滴度。所有感染实验均在生物安全2级(BLS-2)实验室进行。

抗COVID-19中药化合物库(产品号L6720，含从“三药三方”分离纯化得到的389种中药单体)为上海陶素生化科技有限公司产品。所有药物的初始浓度均为10mM(毫摩尔每升)。

2、探究B2M或FcRn是否为CV-A9感染细胞受体

转染前一天，在24孔细胞培养板中每孔接种1×10⁵个RD细胞。第二天，当细胞贴壁好时利用B2M和FCGRT siRNA smart pool(苏州吉玛基因，具体序列见表1)通过RNAi Max转染试剂反式转染的方式沉默FcRn基因表达。将细胞分别与0.8、4和20nM的siRNAs转染液在37℃条件下孵育48小时。48小时后，将细胞与CV-A9毒株BUCT01在37℃共孵育2小时。用PBS洗去未结合的病毒，加入新鲜培养基继续培养72小时。用PBS洗去未结合的病毒，提取总RNA，采用两步法qRT-PCR测定B2M和FCGRT mRNA和病毒感染情况(引物参见表1)。

3、利用柯萨奇病毒A类9型毒株BUCT01从中药化合物库中筛选潜在的抗柯萨奇病毒药物

96孔细胞板中种上2.5×10⁴个293T细胞，24小时后用MOI＝0.01的CV-A9毒株BUCT01感染293T细胞，同时向每孔中分别加入终浓度为10μM的389种中药单体，在第3天时通过显微镜镜下观察细胞病变，对没有明显细胞病变的培养孔提取细胞和上清中的RNA，用qRT-PCR测定细胞和上清中的病毒复制情况以及细胞内参基因GAPDH的表达情况(引物参见表1)。在没有明显细胞毒性的情况下，对病毒复制抑制率达90％以上视为潜在抗柯萨奇病毒药物。

4、潜在抗病毒药物EC₅₀及CC₅₀测定

96孔细胞板中种上2.5×10⁴个293T细胞，24小时后用MOI＝0.01的CV-A9毒株BUCT01感染293T细胞，同时向其中加入终浓度分别为100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM、0.78125μM、0.390625μM和0.1953125μM的药物单体，在第3天时通过显微镜镜下观察细胞病变，对没有明显细胞病变的培养孔提取细胞和上清中的RNA，用qRT-PCR测定细胞和上清中的病毒复制情况以及细胞内参基因GAPDH的表达情况。

EC₅₀是指能够有效抑制50％细胞感染病毒的药物浓度，数值越小说明对病毒的抑制效果越好。

CC₅₀是使得50％的细胞发生病变时的药物浓度，数值越高说明对细胞的毒性越低。

SI：选择性指数，为CC₅₀与EC₅₀的比值，数值越大说明成药的可能性越高。

5、加药时间实验

24孔细胞板中种上2.5×10⁵个293T细胞，24小时后用MOI＝0.01的CV-A9毒株BUCT01感染293T细胞，分别在全感染周期(加病毒时和加病毒孵育2h后)、入胞前(加入病毒时)、入胞后(加病毒孵育2h后)向其中加入浓度为25μM的潜在有效药物，在第3天时通过显微镜镜下观察细胞病变，对没有明显细胞病变的培养孔提取细胞和上清中的RNA，用qRT-PCR测定细胞和上清中的病毒复制情况以及细胞内参基因GAPDH的表达情况。

6、实时定量RT-PCR(qRT-PCR)

SYBR-Green法扩增程序如下：95℃5min，40个循环，95℃10s，55℃20s，72℃31s。

Taqman法：50℃2min，95℃10min，40个循环，95℃10s，60℃1min。使用GraphPad-Prism 8.3.0软件分析数据。

表1研究中使用的引物序列

二、实验结果

通过实时定量PCR技术检测发现，通过加入不同浓度的siRNA特异性敲降B2M和FCGRT的表达，发现随着B2M和FCGRT mRNA表达水平逐渐降低(图1，图2)，CV-A9感染细胞的能力显著逐渐下降，强烈提示FcRn是CV-A9进入细胞的受体(图3)。

不加病毒培养72小时后，不加药时的293T细胞形态如图4所示，感染复数为0.01的CV-A9毒株BUCT01感染72小时后，不加药时的293T细胞形态如图5所示，加入终浓度10μM(微摩尔每升)的蒿甲醚和感染复数为0.01的CV-A9毒株BUCT01感染72小时后的293T细胞形态如图6所示。

初筛时10μM的蒿甲醚在感染复数0.01的柯萨奇病毒感染细胞72小时后，对病毒复制抑制率为97.6％(图7)。

蒿甲醚的EC₅₀、CC₅₀和SI分别为2.23μM，>100μM，>44.84(图8)。

加药时间实验表明，蒿甲醚在病毒全感染周期都起作用(图9)。

三、讨论

在本发明中，发明人在293T细胞感染分离培养的柯萨奇病毒A类9型毒株BUCT01后加入蒿甲醚发现有较好的剂量依赖的抗柯萨奇病毒效果和较低的细胞毒性。目前没有针对柯萨奇病毒A类9型或其它类似柯萨奇病毒或其它肠道病毒B族的特异性药物，该发明对之后柯萨奇病毒A类9型或其它类似柯萨奇病毒或其它肠道病毒B族在临床用药具有重要参考意义。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

<110> 北京化工大学

<120> 蒿甲醚在治疗和预防柯萨奇病毒感染中的应用

<130> GNCLN202688

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 7437

<212> DNA

<213> 柯萨奇病毒（Coxsackie virus）

<400> 1

ctgtgggttg ttcccaccca tagggcccaa tgggcgccag cacactggta tcacggtacc 60

tttgtgcgcc tgttttatac accctccctg aatgtaactt agaagtttta ccaagatggt 120

caatagaaag tccagcacac cagttggatt ccgaccaagc acttctgtta ccccggactg 180

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caaatctgtg aacaggtcaa tctccttaag gagtcactgg tgggccagga ttccatccta 3900

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gaggatgctg tctatggtac tgagggtttg gaggctttag atctgaccac aagtgcaggg 6300

tacccatacg ttgccctagg cattaaaaag agagacattc tgtcaaagaa gactaaggat 6360

ttgacaaagc tcaaggagtg tatggataag tacggtttga acctccccat ggtcacgtat 6420

gtgaaggatg aattgagatc agcagagaag gtggcgaaag gcaaatccag gttgattgaa 6480

gcatcaagct taaatgactc ggtggctatg agacagactt ttggaaactt gtacaaaact 6540

ttccacctga acccaggcat agtgacgggc agtgcagttg gatgtgaccc cgacctcttt 6600

tggagcaaaa tcccagtcat gctcgatggt catctcattg cctttgacta cagtggctat 6660

gatgccagct taagtcccgt gtggtttgca tgcttaaaac tgttgttaga gaaattggga 6720

tacacccaca aagaaactaa ctatatagat tacctatgca actcacacca cttatacaga 6780

gacaaacact actttgtaag agggggaatg ccatctgggt gttcgggaac tagcattttc 6840

aattcgatga tcaataatat tatcatcaga acactaatgt tgagagtgta taaagggatt 6900

gatctggacc aattcaggat gatagcatat ggggacgatg ttatcgcgtc gtacccacat 6960

cctatcgatg ccgccttgct ggcggaagca gggaaagggt acggtctgat catgacacca 7020

gctgataagg gggagtgttt caacgaagta acttggacca atgtcacctt tctgaaaaga 7080

tacttcagag cagatgagca gtacccattc cttattcatc ctgtaatgcc aatgaaggat 7140

attcatgaat ctatcaggtg gactaaagac cccagaaaca cacaagatca cgtgcgctcg 7200

ttgtgcctat tggcttggca caatggggag cacgagtatg aagagtttat ccgaaagatt 7260

agaagcgtgc ccgtagggcg ctgcctgact ctgcctgcgt tctcaacctt gcgcaggaaa 7320

tggttagact cattctaaaa ctagagcaca atttaatgta ttatgattgg cttaacccta 7380

ccgcatgaac cgaactcgac aaaagtgcgg taggggtaaa ttctccgcat tcggtgc 7437

<210> 2

<211> 2201

<212> PRT

<213> 柯萨奇病毒（Coxsackie virus）

<400> 2

Met Gly Ala Gln Val Ser Thr Gln Lys Thr Gly Ala His Glu Thr Gly

1 5 10 15

Leu Asn Ala Ser Gly Asn Ser Ile Ile His Tyr Thr Asn Ile Asn Tyr

20 25 30

Tyr Lys Asp Ala Ala Ser Asn Ser Ala Asn Arg Gln Asp Phe Thr Gln

35 40 45

Asp Pro Ser Lys Phe Thr Glu Pro Val Lys Asp Val Met Ile Lys Ser

50 55 60

Leu Pro Ala Leu Asn Ser Pro Thr Val Glu Glu Cys Gly Tyr Ser Asp

65 70 75 80

Arg Val Arg Ser Ile Thr Leu Gly Asn Ser Thr Ile Thr Thr Gln Glu

85 90 95

Cys Ala Asn Val Val Val Gly Tyr Gly Arg Trp Pro Thr Tyr Leu Arg

100 105 110

Asp Asp Glu Ala Thr Ala Glu Asp Gln Pro Thr Gln Pro Asp Val Ala

115 120 125

Thr Cys Arg Phe Tyr Thr Leu Asp Ser Ile Lys Trp Glu Lys Gly Ser

130 135 140

Val Gly Trp Trp Trp Lys Phe Pro Glu Ala Leu Ser Asp Met Gly Leu

145 150 155 160

Phe Gly Gln Asn Met Gln Tyr His Tyr Leu Gly Arg Ala Gly Tyr Thr

165 170 175

Ile His Val Gln Cys Asn Ala Ser Lys Phe His Gln Gly Cys Leu Leu

180 185 190

Val Val Cys Val Pro Glu Ala Glu Met Gly Gly Ala Val Val Gly Gln

195 200 205

Ala Phe Pro Ser Thr Ala Val Ala Asp Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Phe

210 215 220

Thr Ser Thr Thr Gln Thr Glu Gln Thr Lys Val Gln Thr Ala Val His

225 230 235 240

Asn Ala Gly Met Gly Val Gly Val Gly Asn Leu Thr Ile Phe Pro His

245 250 255

Gln Trp Ile Asn Leu Arg Thr Asn Asn Ser Ala Thr Ile Val Met Pro

260 265 270

Tyr Ile Asn Ser Val Pro Met Asp Asn Met Phe Arg His Tyr Asn Phe

275 280 285

Thr Leu Met Val Ile Pro Phe Val Lys Leu Asp Tyr Ala Asp Thr Ala

290 295 300

Ser Thr Tyr Val Pro Ile Thr Val Thr Val Ala Pro Met Cys Ala Glu

305 310 315 320

Tyr Asn Gly Leu Arg Leu Ala Gln Ala Gln Gly Leu Pro Thr Met Asn

325 330 335

Thr Pro Gly Ser Thr Gln Phe Leu Thr Ser Asp Asp Phe Gln Ser Pro

340 345 350

Cys Ala Leu Pro Gln Phe Asp Val Thr Pro Ser Met Asn Ile Pro Gly

355 360 365

Glu Val Lys Asn Leu Met Glu Val Ala Glu Val Asp Ser Val Val Pro

370 375 380

Val Asn Asn Val Gln Asp Thr Thr Asp Gln Met Glu Met Phe Arg Ile

385 390 395 400

Pro Val Thr Ile Asn Ala Pro Leu Gln Gln Gln Val Phe Gly Leu Arg

405 410 415

Leu Gln Pro Gly Leu Asp Ser Val Phe Lys His Thr Leu Leu Gly Glu

420 425 430

Ile Leu Asn Tyr Tyr Ala His Trp Ser Gly Ser Met Lys Leu Thr Phe

435 440 445

Val Phe Cys Gly Ser Ala Met Ala Thr Gly Lys Phe Leu Ile Ala Tyr

450 455 460

Ser Pro Pro Gly Ala Asn Pro Pro Lys Thr Arg Lys Asp Ala Met Leu

465 470 475 480

Gly Thr His Ile Ile Trp Asp Ile Gly Leu Gln Ser Ser Cys Val Leu

485 490 495

Cys Val Pro Trp Ile Ser Gln Thr His Tyr Arg Leu Val Gln Gln Asp

500 505 510

Glu Tyr Thr Ser Ala Gly Phe Val Thr Cys Trp Tyr Gln Thr Gly Met

515 520 525

Ile Val Pro Pro Gly Thr Pro Asn Ser Ser Ser Ile Met Cys Phe Ala

530 535 540

Ser Ala Cys Asn Asp Phe Ser Val Arg Met Leu Arg Asp Thr Pro Phe

545 550 555 560

Ile Ser Gln Asp Asn Lys Leu Gln Gly Asp Val Glu Glu Ala Val Glu

565 570 575

Arg Ala Ile Val His Val Ala Asp Thr Leu Arg Ser Gly Pro Ser Asn

580 585 590

Ser Glu Ser Ile Pro Ala Leu Thr Ala Val Glu Thr Gly His Thr Ser

595 600 605

Gln Val Thr Pro Ser Asp Thr Met Gln Thr Arg His Val Lys Asn Tyr

610 615 620

His Thr Arg Ser Glu Ser Thr Val Glu Asn Phe Leu Gly Arg Ser Ala

625 630 635 640

Cys Val Tyr Met Glu Glu Tyr Lys Thr Thr Asp Asn Asp Val Asn Lys

645 650 655

Lys Phe Val Ala Trp Pro Ile Asn Thr Lys Gln Met Val Gln Met Arg

660 665 670

Arg Lys Leu Glu Met Phe Thr Tyr Leu Arg Phe Asp Met Glu Val Thr

675 680 685

Phe Val Ile Thr Ser Arg Gln Asp Pro Gly Thr Lys Leu Ala Gln Asp

690 695 700

Met Pro Val Leu Thr His Gln Ile Met Tyr Val Pro Pro Gly Gly Pro

705 710 715 720

Ile Pro Ala Lys Val Asp Asp Tyr Ala Trp Gln Thr Ser Thr Asn Pro

725 730 735

Ser Ile Phe Trp Thr Glu Gly Asn Ala Pro Ala Arg Met Ser Ile Pro

740 745 750

Phe Ile Ser Ile Gly Asn Ala Tyr Ser Asn Phe Tyr Asp Gly Trp Ser

755 760 765

Asn Phe Asp Gln Lys Gly Ser Tyr Gly Tyr Asn Thr Leu Asn Asn Leu

770 775 780

Gly His Ile Tyr Val Arg His Val Ser Gly Ser Ser Pro His Pro Ile

785 790 795 800

Thr Ser Thr Ile Arg Ile Tyr Phe Lys Pro Lys His Thr Arg Ala Trp

805 810 815

Val Pro Arg Pro Pro Arg Leu Cys Gln Tyr Lys Lys Ala Phe Ser Val

820 825 830

Asp Phe Thr Pro Thr Pro Ile Thr Asp Thr Arg Lys Asp Ile Asn Thr

835 840 845

Val Thr Thr Ile Glu Gln Ser Glu His Arg Gly Asp Leu Ala Thr Leu

850 855 860

Asn Thr His Gly Ala Phe Gly His Gln Ser Gly Ala Val Tyr Val Gly

865 870 875 880

Asn Tyr Arg Val Val Asn Arg His Leu Ala Thr Arg Gly Asp Trp Gln

885 890 895

Asn Cys Val Trp Glu Asp Tyr Asn Arg Asp Ile Leu Val Ser Thr Thr

900 905 910

Thr Ala His Gly Cys Asp Thr Ile Ala Arg Cys Gln Cys Thr Thr Gly

915 920 925

Val Tyr Phe Cys Ala Ser Arg Asn Lys His Tyr Pro Val Ser Phe Glu

930 935 940

Gly Pro Gly Leu Val Glu Val Gln Glu Ser Glu Tyr Tyr Pro Lys Arg

945 950 955 960

Tyr Gln Ser His Val Leu Leu Ala Ala Gly Phe Ser Glu Pro Gly Asp

965 970 975

Cys Gly Gly Ile Leu Arg Cys Glu His Gly Val Ile Gly Leu Val Thr

980 985 990

Met Gly Gly Glu Gly Val Val Gly Phe Ala Asp Val Arg Asp Leu Leu

995 1000 1005

Trp Leu Glu Asp Asp Ala Met Glu Gln Gly Val Lys Asp Tyr Val

1010 1015 1020

Glu Gln Leu Gly Asn Ala Phe Gly Ser Gly Phe Thr Ser Gln Ile

1025 1030 1035

Cys Glu Gln Val Asn Leu Leu Lys Glu Ser Leu Val Gly Gln Asp

1040 1045 1050

Ser Ile Leu Glu Lys Ser Leu Lys Ala Leu Val Arg Ile Ile Ser

1055 1060 1065

Ala Leu Val Ile Val Val Arg Asn His Asp Asp Leu Ile Thr Val

1070 1075 1080

Ser Ala Thr Leu Ala Leu Ile Gly Cys Thr Ser Ser Pro Trp Arg

1085 1090 1095

Trp Leu Lys Gln Lys Val Ser Gln Tyr Tyr Gly Ile Pro Met Ala

1100 1105 1110

Val Arg Gln Asn Asn Gly Trp Leu Lys Lys Phe Thr Glu Met Thr

1115 1120 1125

Asn Ala Cys Lys Gly Met Glu Trp Ile Ala Ile Lys Ile Gln Lys

1130 1135 1140

Phe Ile Glu Trp Leu Lys Val Lys Ile Leu Pro Glu Val Lys Glu

1145 1150 1155

Lys His Glu Phe Leu Thr Arg Leu Lys Gln Leu Pro Leu Leu Glu

1160 1165 1170

Ser Gln Ile Ala Thr Ile Glu Gln Ser Ala Pro Ser Gln Ser Asp

1175 1180 1185

Gln Glu Gln Leu Phe Ser Asn Val Gln Tyr Phe Ala His Tyr Cys

1190 1195 1200

Arg Lys Tyr Ala Pro Leu Tyr Ala Ala Glu Ala Lys Arg Val Phe

1205 1210 1215

Ser Leu Glu Lys Lys Met Ser Asn Tyr Ile Gln Phe Lys Ser Lys

1220 1225 1230

Cys Arg Ile Glu Pro Val Cys Leu Leu Leu His Gly Ser Pro Gly

1235 1240 1245

Ala Gly Lys Ser Val Ala Thr Asn Leu Ile Gly Arg Ser Leu Ala

1250 1255 1260

Glu Lys Leu Asn Ser Ser Val Tyr Ser Leu Pro Pro Asp Pro Asp

1265 1270 1275

His Phe Asp Gly Tyr Lys Gln Gln Ala Val Val Ile Met Asp Asp

1280 1285 1290

Leu Cys Gln Asn Pro Asp Gly Lys Asp Val Ser Leu Phe Cys Gln

1295 1300 1305

Met Val Ser Ser Val Asp Phe Val Pro Pro Met Ala Ala Leu Glu

1310 1315 1320

Glu Lys Gly Ile Leu Phe Thr Ser Pro Phe Val Leu Ala Ser Thr

1325 1330 1335

Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Pro Thr Val Ser Asp Ser Arg Ala

1340 1345 1350

Leu Ala Arg Arg Phe His Phe Asp Met Asn Ile Glu Val Ile Ser

1355 1360 1365

Met Tyr Ser Gln Asn Gly Lys Val Asn Met Pro Met Ser Val Lys

1370 1375 1380

Thr Cys Asp Glu Glu Cys Cys Pro Val Asn Phe Lys Lys Cys Cys

1385 1390 1395

Pro Leu Val Cys Gly Lys Ala Ile Gln Phe Ile Asp Arg Arg Thr

1400 1405 1410

Gln Val Arg Tyr Ser Leu Asp Met Leu Val Thr Glu Met Phe Arg

1415 1420 1425

Glu Tyr Thr His Arg His Ser Val Gly Ala Thr Leu Glu Ala Leu

1430 1435 1440

Phe Gln Gly Pro Pro Val Tyr Arg Glu Ile Lys Ile Ser Val Ala

1445 1450 1455

Pro Glu Thr Pro Pro Pro Pro Ala Ile Ala Asp Leu Leu Arg Ser

1460 1465 1470

Val Asp Ser Glu Ala Val Arg Glu Tyr Cys Lys Glu Lys Gly Trp

1475 1480 1485

Leu Val Pro Glu Thr Asn Ser Thr Leu Gln Ile Glu Lys His Val

1490 1495 1500

Ser Arg Ala Phe Ile Cys Leu Gln Ala Leu Thr Thr Phe Val Ser

1505 1510 1515

Val Ala Gly Ile Ile Tyr Ile Ile Tyr Lys Leu Phe Ala Gly Phe

1520 1525 1530

Gln Gly Ala Tyr Thr Gly Met Pro Asn Gln Lys Pro Arg Val Pro

1535 1540 1545

Thr Leu Arg Gln Ala Lys Val Gln Gly Pro Ala Phe Glu Phe Ala

1550 1555 1560

Val Ala Met Met Lys Arg Asn Ala Ser Thr Val Lys Thr Glu Tyr

1565 1570 1575

Gly Glu Phe Thr Met Leu Gly Ile Tyr Asp Arg Trp Ala Val Leu

1580 1585 1590

Pro Arg His Ala Lys Pro Gly Pro Thr Ile Leu Met Asn Asp Gln

1595 1600 1605

Glu Val Gly Val Ile Asp Ala Lys Glu Leu Val Asp Lys Asp Gly

1610 1615 1620

Thr Asn Leu Glu Leu Thr Leu Leu Lys Leu Ser Arg Asn Glu Lys

1625 1630 1635

Phe Arg Asp Ile Arg Gly Phe Leu Ala Arg Glu Glu Val Glu Val

1640 1645 1650

Asn Glu Ala Val Leu Ala Ile Asn Thr Ser Lys Phe Pro Asn Met

1655 1660 1665

Tyr Ile Pro Val Gly Gln Val Thr Asp Tyr Gly Phe Leu Asn Leu

1670 1675 1680

Gly Gly Thr Pro Thr Lys Arg Met Leu Met Tyr Asn Phe Pro Thr

1685 1690 1695

Arg Ala Gly Gln Cys Gly Gly Val Leu Met Ser Thr Gly Lys Val

1700 1705 1710

Leu Gly Ile His Val Gly Gly Asn Gly His Gln Gly Phe Ser Ala

1715 1720 1725

Ala Leu Leu Arg His Tyr Phe Asn Asp Glu Gln Gly Glu Ile Glu

1730 1735 1740

Phe Ile Glu Ser Ser Lys Glu Ala Gly Phe Pro Val Ile Asn Thr

1745 1750 1755

Pro Ser Lys Thr Lys Leu Glu Pro Ser Val Phe His Gln Val Phe

1760 1765 1770

Glu Gly Asn Lys Glu Pro Ala Val Leu Lys Asn Gly Asp Pro Arg

1775 1780 1785

Leu Lys Ala Asn Phe Glu Glu Ala Ile Phe Ser Lys Tyr Ile Gly

1790 1795 1800

Asn Val Asn Thr His Val Asp Glu Tyr Met Leu Glu Ala Val Asp

1805 1810 1815

His Tyr Ala Gly Gln Leu Ala Thr Leu Asp Ile Ser Ala Glu Pro

1820 1825 1830

Met Lys Leu Glu Asp Ala Val Tyr Gly Thr Glu Gly Leu Glu Ala

1835 1840 1845

Leu Asp Leu Thr Thr Ser Ala Gly Tyr Pro Tyr Val Ala Leu Gly

1850 1855 1860

Ile Lys Lys Arg Asp Ile Leu Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Thr

1865 1870 1875

Lys Leu Lys Glu Cys Met Asp Lys Tyr Gly Leu Asn Leu Pro Met

1880 1885 1890

Val Thr Tyr Val Lys Asp Glu Leu Arg Ser Ala Glu Lys Val Ala

1895 1900 1905

Lys Gly Lys Ser Arg Leu Ile Glu Ala Ser Ser Leu Asn Asp Ser

1910 1915 1920

Val Ala Met Arg Gln Thr Phe Gly Asn Leu Tyr Lys Thr Phe His

1925 1930 1935

Leu Asn Pro Gly Ile Val Thr Gly Ser Ala Val Gly Cys Asp Pro

1940 1945 1950

Asp Leu Phe Trp Ser Lys Ile Pro Val Met Leu Asp Gly His Leu

1955 1960 1965

Ile Ala Phe Asp Tyr Ser Gly Tyr Asp Ala Ser Leu Ser Pro Val

1970 1975 1980

Trp Phe Ala Cys Leu Lys Leu Leu Leu Glu Lys Leu Gly Tyr Thr

1985 1990 1995

His Lys Glu Thr Asn Tyr Ile Asp Tyr Leu Cys Asn Ser His His

2000 2005 2010

Leu Tyr Arg Asp Lys His Tyr Phe Val Arg Gly Gly Met Pro Ser

2015 2020 2025

Gly Cys Ser Gly Thr Ser Ile Phe Asn Ser Met Ile Asn Asn Ile

2030 2035 2040

Ile Ile Arg Thr Leu Met Leu Arg Val Tyr Lys Gly Ile Asp Leu

2045 2050 2055

Asp Gln Phe Arg Met Ile Ala Tyr Gly Asp Asp Val Ile Ala Ser

2060 2065 2070

Tyr Pro His Pro Ile Asp Ala Ala Leu Leu Ala Glu Ala Gly Lys

2075 2080 2085

Gly Tyr Gly Leu Ile Met Thr Pro Ala Asp Lys Gly Glu Cys Phe

2090 2095 2100

Asn Glu Val Thr Trp Thr Asn Val Thr Phe Leu Lys Arg Tyr Phe

2105 2110 2115

Arg Ala Asp Glu Gln Tyr Pro Phe Leu Ile His Pro Val Met Pro

2120 2125 2130

Met Lys Asp Ile His Glu Ser Ile Arg Trp Thr Lys Asp Pro Arg

2135 2140 2145

Asn Thr Gln Asp His Val Arg Ser Leu Cys Leu Leu Ala Trp His

2150 2155 2160

Asn Gly Glu His Glu Tyr Glu Glu Phe Ile Arg Lys Ile Arg Ser

2165 2170 2175

Val Pro Val Gly Arg Cys Leu Thr Leu Pro Ala Phe Ser Thr Leu

2180 2185 2190

Arg Arg Lys Trp Leu Asp Ser Phe

2195 2200

Claims (6)

1.蒿甲醚或其药学上可接受的盐或以蒿甲醚或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在如下任一中的应用：

(A1)制备抑制柯萨奇病毒的产品；

(A2)制备能够治疗和/或预防由于柯萨奇病毒感染所致疾病的产品；

(A3)制备能够改善由于柯萨奇病毒感染所致症状的产品；

所述柯萨奇病毒为柯萨奇病毒A类；

所述柯萨奇病毒A类为柯萨奇病毒A类9型。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述抑制柯萨奇病毒为抑制柯萨奇病毒复制。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述抑制柯萨奇病毒是在柯萨奇病毒进入宿主或宿主细胞的全过程发挥作用。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述柯萨奇病毒A类9型的全基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述柯萨奇病毒A类9型的全基因组序列如SEQ ID No.1所示。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述柯萨奇病毒A类9型为所述柯萨奇病毒A类9型毒株BUCT01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.20091。

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