CN112279933A - 菊花多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用 - Google Patents

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徐学军
康文艺
梁琼心
赵青春
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Abstract

本发明公开了一种菊花多糖的提取方法，将菊花用直饮水浸泡后，煎煮，过滤，滤液中加入乙醇至终浓度为60‑80%，静置，过滤，收集沉淀并干燥即得菊花多糖。本发明还公开了所述菊花多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。本发明经试验发现：菊花多糖能显著升高血清中的胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）及显著降低P物质含量，还能增加排便量和肠推动率，改善功能性便秘。说明：菊花多糖是治疗功能性便秘的理想药物。

Description

菊花多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的 应用
技术领域
本发明属于多糖药物技术领域，具体涉及一种菊花多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
背景技术
功能性便秘（functional constipation，FC）是一种功能性肠病，是指症状起源于中、下胃肠道的功能性胃肠病。由于不良的生活习惯、情绪抑郁、饮食规律改变、排便习惯不良、药物作用等因素所致的便秘。例如，由于生活习惯、周围环境的改变，以及劳累等因素的影响，多会出现便秘，这种便秘则属于功能性便秘。
一般来讲，功能性便秘临床表现为持续的排便困难、频率减少、排便费力或排便不尽感，便秘对患者的生活质量造成了极大的影响。功能性便秘的病人，可通过生活规律化、改善饮食习惯、调畅情志、养成良好排便习惯以及去除其他病因等手段达到治愈便秘的目的。目前，市场上用于治疗功能性便秘的药物多存在疗效不佳、有毒副作用等缺陷。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种可用于治疗功能性便秘的菊花多糖，其治疗效果显著，且无毒副作用，不会引起耐药性。
本发明还提供了上述菊花多糖的提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种菊花多糖的提取方法，其将菊花用直饮水浸泡后，煎煮，过滤，滤液中加入95%乙醇至终浓度为60-80%，静置，过滤，收集沉淀并干燥，即得菊花多糖。
进一步优选的，煎煮2次，过滤（菊花吸水量多可挤压），合并两次滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05-1.10，然后加入95%乙醇至终浓度为70%，静置12-24 h以使沉淀沉降完全，过滤。
上述菊花多糖的提取方法，浸泡时加入菊花重量30倍直饮水浸泡60 min，第一次煎煮60 min（即大火加热至沸腾后改为小火，保持微沸状态60 min），过滤；第二次煎煮时在滤渣中加入菊花重量20倍直饮水煎煮60 min。
本发明提供了采用上述提取方法制备得到的菊花多糖。
本发明还提供了上述菊花多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。菊花多糖具体用量可以是：900mg/kg、450mg/kg等。
菊花（Chrysanthemum morifolium Ramat.）为菊科植物菊的干燥头状花序, 其性凉，味苦、辛，具有疏散风热，消肿解毒的功效。菊花的生物活性成分主要有黄酮类化合物、多糖、挥发油类、有机酸及微量元素等。现代研究表明，菊花具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗炎、保肝、抗病毒等作用，此外，在心血管系统、免疫调节等方面也有显著的作用。多糖是菊花中重要的活性物质之一，具有免疫调节、抗氧化等活性。
目前，尚无中药菊花多糖对大鼠功能性便秘治疗的报道。本发明通过测定中药菊花多糖对大鼠功能性便秘各项生化指标，考察其治疗功能性便秘的效果。实验结果证明：菊花多糖疗效显著，且无毒副作用。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1
一种菊花多糖的提取方法，具体步骤如下：
取菊花29.6kg，加入菊花重量30倍直饮水浸泡60min后，然后进行煎煮。煎煮2次，第一次煎煮，先大火加热至沸腾后改为小火，保持微沸状态60 min，过滤。第二次煎煮时，滤渣中加入菊花重量20倍直饮水，按前述方法煎煮60 min，过滤。合并两次滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05-1.10，然后加入95%乙醇至终浓度为70%（体积百分比），静置12h待沉淀沉降完全，过滤，收集沉淀，冷冻干燥（-40℃冰箱冷冻12 h，在干燥机中烘干）后即为菊花多糖，约19.37kg。
应用试验
一、大鼠功能性便秘模型的建立
（1）试验动物
SPF级的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠，体重180g-200g。动物购买于河南省实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2017-0001。
（2）试验试剂
氯化钠注射液（辰欣药业股份有限公司，批号：1910012706）；盐酸洛哌丁胺：2 mg/片，西安杨森制药有限公司；福松（聚乙二醇4000散）：博福-益普生工业公司；大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒、大鼠胃泌素(GAS) ELISA试剂盒、大鼠P物质(SP) ELISA试剂盒、大鼠生长抑素（SS）ELISA试剂盒，均由上海纪宁实业有限公司提供。
（3）试验方法
SPF级的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠适应性饲养一周（温度25±2 ℃，光照12 h/d，湿度40-45%），喂养标准饲料，自由饮水。给药前一天称量每只大鼠的体重，按体重随机分组，共分为5组，每组9只。即：空白组，模型组，阳性对照组，菊花多糖高、低剂量组。进行实验的大鼠按照分组分笼饲养。以1.5mg·kg·d的盐酸洛哌丁胺与生理盐水配制成2 ml的悬浮液。
除空白组外，盐酸洛哌丁胺以1.5 mg·kg与生理盐水配制成2 mL的溶液进行灌胃造模，2次/d。空白组每天以2 mL生理盐水进行灌胃，造模进行14 d。在便秘模型建立期间每天收集大鼠6 h便粒，称取湿重，放入电热干燥箱，60℃干燥5 h，称取便粒干重，计算含水率。每天观察各组大鼠的饮食、便粒形状与大鼠活动情况。
实验结果显示：空白组大鼠饮食、活动均为正常，其它各组大鼠活动、饮食减少，毛色变暗，便粒缩小，粪质偏硬、无光泽。其它各组大鼠的便粒与空白组相比，排便量减少，含水率下降。表1中可以看出，与空白组相比，其余各组6 h便粒重量均显著降低（**P﹤0.05），且含水率均下调。表明便秘模型成功。
表1 造模药对大鼠6 h便粒和含水率的影响
Figure 749157DEST_PATH_IMAGE001
注：与空白组比：***P＜0.001，**P﹤0.01，*P﹤0.05
（4）实验方法：菊花多糖的给药治疗
大鼠功能性便秘模型建立成功后，将造模成功的大鼠进行给药治疗。空白组与模型组每天以1mL/100g体重灌胃生理盐水。阳性对照组：福松（聚乙二醇4000散）每天以3g/kg的剂量溶于生理盐水，以1mL/100g灌胃给药。菊花多糖高、低剂量组分别按900mg/kg、450mg/kg，每天一次，均以1 mL/100g灌胃给药。给药7 d。
给药治疗期间每天收集6 h便粒，称取湿重，放入电热干燥箱，60℃干燥 5 h，称取便粒干重，计算含水率。给药结束后，禁食不禁水12 h后，全部以2 mL灌胃活性炭悬浮液，灌胃30 min后，用10%水合氯醛对大鼠进行麻醉，将大鼠剪取幽门至下端盲肠处的小肠轻拉平铺至直线。测量剪取的小肠长度（即小肠全长）及其幽门一直到活性炭运动前端的长度（即墨汁推进长度），计算小肠推进率。腹主动脉取血，3000转离心10 min，离心得到血清并检测大鼠的胃动素MTL、胃泌素GAS、生长抑素SS及P物质的含量。
小肠推进率（%）=（墨汁推进长度/小肠全长）×100%。
结果经过算术平均值和标准差表示，数据统计采用SPSS19.0软件单因素方差分析法(One-Way ANOVA)比较其显著性差异。测定结果见下表。
表2 多糖对便秘大鼠6 h便粒含水率和肠蠕动率的影响
Figure 118827DEST_PATH_IMAGE002
注：与空白组比：***P＜0.001，**P﹤0.01，*P﹤0.05，与模型组比：### P＜0.001 , ## P﹤0.01，# P﹤0.05
由表2可知，造模成功后通过给药治疗，与模型组相比，菊花多糖高、低剂量组和阳性对照组中便粒含水率和小肠推进率均显著升高（## P﹤0.01，# P﹤0.05），且菊花多糖高剂量组优于阳性对照组。说明菊花多糖高、低剂量组均能有效促进便秘大鼠肠道蠕动，增加便粒含水率，改善便秘，且菊花多糖高剂量组效果更佳。
表3 菊花多糖对便秘大鼠MTL、GAS、SS及P物质的含量的影响
Figure 836248DEST_PATH_IMAGE003
注：与空白组比：***P＜0.001，**P﹤0.01，*P﹤0.05，与模型组比：### P＜0.001 , ## P﹤0.01，# P﹤0.05
由表3可知，与空白组相比，模型组中MTL、GAS、P物质均显著降低（P﹤0.01 ，P﹤0.05），SS显著升高（P﹤0.01）。与模型组相比，阳性对照组的MTL、GAS和菊花多糖高、低剂量组的MTL、GAS、P物质含量均显著增加（P＜0.001，P﹤0.01），菊花多糖高、低剂量组和阳性对照组的SS含量均低于模型组，且菊花多糖高剂量组（P﹤0.05）和阳性对照组（P﹤0.01）达到显著水平。说明菊花多糖高、低剂量组均能改善大鼠便秘，且高剂量组效果更佳。
结论：综上可以看出，菊花多糖能显著升高血清中胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、P物质含量和显著降低生长抑素（SS）含量，改善功能性便秘，其中菊花多糖高剂量组效果更显著。说明：菊花多糖具有显著治疗功能性便秘的作用，是治疗功能性便秘的理想药物。

Claims (5)

1.一种菊花多糖的提取方法，其特征在于，将菊花用直饮水浸泡后，煎煮，过滤，滤液中加入乙醇至终浓度为60-80%，静置，过滤，收集沉淀并干燥，即得菊花多糖。
2.如权利要求1所述菊花多糖的提取方法，其特征在于，煎煮2次，过滤，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05-1.10，然后加入95%乙醇至终浓度为70%，静置12-24 h，过滤。
3.根据权利要求2所述菊花多糖的提取方法，其特征在于，浸泡时加入菊花重量30倍直饮水浸泡60 min，第一次煎煮60 min，过滤；第二次煎煮时在滤渣中加入菊花重量20倍直饮水煎煮60 min。
4.采用权利要求1至3所述提取方法制备得到的菊花多糖。
5.权利要求4所述菊花多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
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