CN112220825A - 桑树叶水提物粉末,其制备,免疫增强作用及应用 - Google Patents

桑树叶水提物粉末,其制备,免疫增强作用及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种鲜桑树叶水提物粉末,其制备方法,以及在增强免疫力中的应用。通过本发明所述的制备方法制得的鲜桑树叶水提物粉末中含有11种奎尼酸类化合物和12种懈皮素类化合物。实验证明,本发明的鲜桑树叶水提物粉末具有良好的免疫增强作用。因而提出本发明为免疫增强治疗提供了有效的技术手段。

Description

桑树叶水提物粉末,其制备,免疫增强作用及应用
技术领域
本发明涉及一种制备鲜桑树叶水提物粉末的方法,涉及由该方法制得的鲜桑树叶水提物粉末在制备免疫增强药物中的应用。本发明属于生物医药领域。
背景技术
免疫功能低下可造成各种后果,例如诱发感染性疾病(各种流行性感冒)和皮肤病(尖锐湿疣,扁平疣,银屑病,生殖器疱疹,过敏性紫癜和慢性特发性血小板减少性紫癜)。各种肿瘤患者(肺癌,肝癌,卵巢癌,肾癌,乳腺癌,宫颈癌,骨肉癌,消化系统肿瘤和血液系统肿瘤)患者都面临免疫功能低下而容易继发感染性疾病的境况。虽然临床有多种非特异性免疫增强剂(卡介苗,核酪注射液,左旋咪唑,聚肌胞,胸腺素,胸腺五肽和胎盘脂多糖)及多种被动性免疫增强剂(丙种球蛋白或胎盘球蛋白注射剂,干扰素,转移因子和新鲜血浆),但是这些免疫增强剂因各自的副作用或禁忌症而被局限。寻找新免疫增强剂一直是新药研究的兴趣之一。
桑树叶通常在春季枝叶茂盛时采摘,晒干或新鲜食用。例如晒干的桑树叶可以泡茶,鲜嫩的桑树叶可以炖汤或凉拌。民间认为桑树叶具有疏散风热,清肺润燥及清肝明目功效。
发明人长期从事鲜桑树叶水提物粉末的化学成分及治疗作用研究。发明人对鲜桑树叶水提物粉末的化学组分进行质谱分析,发现了23种未见报道的组分,主要包括桂皮酰奎尼酸和多取代懈皮素。虽然报道过鲜桑树叶水提物粉末单一组分的生物活性,但是全组分联合的生物活性并不知情。通过反复研究发明人发现,这23种组分联合可增强免疫力。与所有桑树叶的已知发明相比,本发明的鲜桑树叶水提物粉末可增强免疫力的发明达到了一个全新高度。根据这些认识,发明人提出了本发明。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种制备鲜桑树叶水提物粉末的方法以及由该方法制备得到的鲜桑树叶水提物粉末,实验证明,由本发明制备得到的鲜桑树叶水提物粉末具有免疫增强作用。为了达到所述目的,本发明采用了以下四方面的技术手段。
第一方面的技术手段是提供了一种鲜桑树叶水提物粉末,分析鲜桑树叶水提物粉末的质谱总离子流图谱及对应的质谱峰的23种组分认定这种鲜桑树叶水提物粉末中含有11种奎尼酸类化合物及12种懈皮素类化合物；其中,所述的11种奎尼酸类化合物为3-O-[E-2-羧基正戊羰氧-3-羟基正丁酰氧-4-羧基正丙酰氧-5-羟基-6-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羧基正丙烯羰氧-3-羟基-4-羟基正丙羰氧-5-羧基乙酰氧-6-(6-羟基-1,3-己二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羟基乙酰氧-3-(5-羧基-1-正戊烯羰氧)-4,5,6-三(4-羧基-1-正丁烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羟基-3-羧基乙酰氧-4-羧基正丙烯羰氧-5,6-二(4-羧基正丁羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-甲氧-3-羟基正丁烯酰氧-4-羧基正丁烯酰氧-5-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)-6-(6-羟基-1-正己烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羟基正丙烯酰氧-3,4-二羧基正丙酰氧-5-(6-羟基-1,3,5-正己三烯羰氧)-6-(5-羟基-1,3-正戊二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,5-二(5-羧基-1,3-正戊二烯羰氧)-3-(6-羧基-1,3,5-正己三烯羰氧)-4-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-6-(8-羟基-1,3,5,7-正辛四烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,3,6-三(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-4-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,5-二羟基正丙烯酰氧-3-羧基正丙烯酰氧)-4-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6-羧基正丙羰氧桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,5-二甲氧-3-(4-羧基正丁羰氧)-4-(6-羟基-1-正己烯羰氧)-6-(5-羧基正戊羰氧)桂皮酰]奎尼酸和3-O-[E-2,5-二甲氧-3-羧基正丙羰氧-4,5-二(5-羧基正戊羰氧)桂皮酰]奎尼酸；其中,所述的12种懈皮素类化合物为3-O-葡萄糖苷-2’,3’-二甲氧-4’,5’-二(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6’-(6-羟基-1,3-正己二烯羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(6-羧基正己羰氧)-4’-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)-5’-(3-羧基正丁羰氧)-6’-(5-羧基正戊羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(4-羟基正丁羰氧)-4’-(5-羟基正戊羰氧)-5’-羧基乙酰氧-6’-羟基乙酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’,6’-二甲氧基-3’-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’,5’-二(4-羟基-1-正丁烯羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-甲氧基-3’-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5’-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6’-甲酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5’,6’-二(3-羧基正丙羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-甲酰氧-3’-(3-羟基正丙羰氧)-4’-(3-羧基正丙羰氧)-5’-羧基正丙酰氧-6’-羟甲氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-甲氧基-3’-(6-羧基-1,3,5-正己三烯羰氧)-4’,5’-二(3-羧基-1-正丁烯羰氧)-6’-甲酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’,3’,6’-三甲氧基-4’-羟甲基-5’-(6-羟基正己羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-4’-(3-羟基正丙羰氧)-5’,6’-二羟基正丙酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’,3’-二甲氧基-4’-羟甲基-5’-(6-羟基正己羰氧)-6’-(3-羟基正丙羰氧)懈皮素和3-O-葡萄糖苷-2’-甲酰氧-3’,4’-二羧基乙酰氧基-5’-(7-羧基-1,3,5-正庚三烯羰氧)-6’-(9-羧基-1,3,5-正壬三烯羰氧)懈皮素。
第二方面的技术手段是提出一种制备所述的鲜桑树叶水提物粉末的方法,使鲜桑树叶水提物粉末可以这样制得:鲜桑树叶用自来水洗净,在蒸馏水中于60℃-90℃加热0.5-4小时,过滤,残饼用蒸馏水洗,合并的滤液减压浓缩,得到的粉末即为鲜桑树叶水提物粉末。
第三方面的技术手段是提出一种制备所述的鲜桑树叶水提物粉末的优选方法,其特征在于取鲜桑树叶,用自来水洗净,在蒸馏水中于70℃加热2小时,过滤,残饼用蒸馏水洗,合并的滤液减压浓缩,得到的粉末即为鲜桑树叶水提物粉末。
第四方面的技术手段是提出了鲜桑树叶水提物粉末在制备免疫增强药物中的应用。
附图说明
图1.鲜桑叶水提物粉末的UPLC-质谱总离子流图谱。
图2.3-O-[E-2-羧基正戊羰氧-3-羟基正丁酰氧-4-羧基正丙酰氧-5-羟基-6-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图3.3-O-[E-2-羧基正丙烯羰氧-3-羟基-4-羟基正丙羰氧-5-羧基乙酰氧-6-(6-羟基-1,3-己二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图4.鲜桑叶水提物粉末中的3-O-[E-2-羟基乙酰氧-3-(5-羧基-1-正戊烯羰氧)-4,5,6-三(4-羧基-1-正丁烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图5.3-O-[E-2-羟基-3-羧基乙酰氧-4-羧基正丙烯羰氧-5,6-二(4-羧基正丁羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图6.3-O-[E-2-甲氧-3-羟基正丁烯酰氧-4-羧基正丁烯酰氧-5-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)-6-(6-羟基-1-正己烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图7.3-O-[E-2-羟基正丙烯酰氧-3,4-二羧基正丙酰氧-5-(6-羟基-1,3,5-正己三烯羰氧)-6-(5-羟基-1,3-正戊二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图8.3-O-[E-2,5-二(5-羧基-1,3-正戊二烯羰氧)-3-(6-羧基-1,3,5-正己三烯羰氧)-4-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-6-(8-羟基-1,3,5,7-正辛四烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图9.3-O-[E-2,3,6-三(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-4-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图10.3-O-[E-2,5-二羟基正丙烯酰氧-3-羧基正丙烯酰氧)-4-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6-羧基正丙羰氧桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图11.3-O-[E-2,5-二甲氧-3-(4-羧基正丁羰氧)-4-(6-羟基-1-正己烯羰氧)-6-(5-羧基正戊羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图12.3-O-[E-2,5-二甲氧-3-羧基正丙羰氧-4,5-二(5-羧基正戊羰氧)桂皮酰]奎尼酸及裂解产物。
图13.3-O-葡萄糖苷-2’,3’-二甲氧-4’,5’-二(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6’-(6-羟基-1,3-正己二烯羰氧)懈皮素及裂解产物。
图14.3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(6-羧基正己羰氧)-4’-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)-5’-(3-羧基正丁羰氧)-6’-(5-羧基正戊羰氧)懈皮素及裂解产物。
图15.3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(4-羟基正丁羰氧)-4’-(5-羟基正戊羰氧)-5’-羧基乙酰氧-6’-羟基乙酰氧懈皮素及裂解产物。
图16.3-O-葡萄糖苷-2’,6’-二甲氧基-3’-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’,5’-二(4-羟基-1-正丁烯羰氧)懈皮素及裂解产物。
图17.3-O-葡萄糖苷-2’-甲氧基-3’-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5’-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6’-甲酰氧懈皮素及裂解产物。
图18.3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5’,6’-二(3-羧基正丙羰氧)懈皮素及裂解产物。
图19.3-O-葡萄糖苷-2’-甲酰氧-3’-(3-羟基正丙羰氧)-4’-(3-羧基正丙羰氧)-5’-羧基正丙酰氧-6’-羟甲氧懈皮素及裂解产物。
图20.3-O-葡萄糖苷-2’-甲氧基-3’-(6-羧基-1,3,5-正己三烯羰氧)-4’,5’-二(3-羧基-1-正丁烯羰氧)-6’-甲酰氧懈皮素及裂解产物。
图21.3-O-葡萄糖苷-2’,3’,6’-三甲氧基-4’-羟甲基-5’-(6-羟基正己羰氧)懈皮素及裂解产物。
图22.3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-4’-(3-羟基正丙羰氧)-5’,6’-二羟基正丙酰氧懈皮素及裂解产物。
图23.3-O-葡萄糖苷-2’,3’-二甲氧基-4’-羟甲基-5’-(6-羟基正己羰氧)-6’-(3-羟基正丙羰氧)懈皮素及裂解产物。
图24.3-O-葡萄糖苷-2’-甲酰氧-3’,4’-二羧基乙酰氧基-5’-(7-羧基-1,3,5-正庚三烯羰氧)-6’-(9-羧基-1,3,5-正壬三烯羰氧)懈皮素及裂解产物。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明,下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的,它们仅用来对本发明进行具体描述,不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备鲜桑树叶水提物粉末
鲜桑树叶用自来水洗净,取100g洗净的鲜桑树叶在900mL蒸馏水中于60℃-90℃加热0.5-4小时,优选为70℃加热2小时,过滤,残饼用蒸馏水洗,合并的滤液减压浓缩,得到的7.3g粉末即为鲜桑树叶水提物粉末。
实施例2测定鲜桑树叶水提物粉末的色谱和质谱离子流谱
2-1.样品溶液的制备(10mg/mL)
称取26.7mg鲜桑树叶水提物粉末,用2.67mL超纯水中将粉末溶解。得到的溶液经超声震荡1分钟,之后再于13000r/min离心10分钟。取上清液,过0.22μm滤膜,置于样品瓶中供色谱和质谱测定用。
2-2.色谱条件
色谱条件
色谱柱:Waters，Acquity
Figure BDA0002129256210000052
HSS T3柱(2.1×100mm i.d.,1.7μm)；
进样体积:2μL；
流动相:水(0.1％甲酸),乙腈；
按照表1的梯度用流动相洗色谱柱。
表1流动相梯度表
Figure BDA0002129256210000051
2-3.测定色谱图
按照上面的色谱测定条件测定并记录鲜桑树叶水提物粉末的UPLC色谱图(见图1)。
2-4.测定离子流谱和质谱的条件
电喷雾离子化模式为正(PI)及负(NI)模式。离子模式参数:毛细管电压为1000V,去溶剂气流速为800L/h,温度450℃,源温度为120℃,锥孔气流速为50L/h,喷雾气压为6bar,碎裂电压为20-45V,取样锥电压为6V,采集模式为MSE continuum分辨率模式,带电粒子的质量数与电荷数之比(m/z)数据采集范围为100-1500,低能量通道Trap碎裂电压为6V,高能量通道Trap碎裂电压选择梯度电压为20-60V,选取LE(亮氨酸脑啡肽)为质量锁采集m/z,范围为100-1500。
实施例3指定鲜桑树叶水提物粉末中23种组分的结构
将实施例2的UPLC色谱与质谱联接,测定鲜桑树叶水提物粉末的UPLC-质谱。质谱条件是电喷雾离子化的正离子和负离子两种模式。离子模式参数:毛细管电压为1000V,去溶剂气流速为800L/h,温度450℃,源温度为120℃,锥孔气流速为50L/h,喷雾气压为6bar,碎裂电压为20-45V,取样锥电压为6V,采集模式为MSE continuum分辨率模式,带电粒子的质量数与电荷数之比(m/z)数据采集范围为100-1500,低能量通道Trap碎裂电压为6V,高能量通道Trap碎裂电压选择梯度电压为20-60V,选取LE(亮氨酸脑啡肽)为质量锁采集m/z,范围为100-1500。在45分钟内分出23个独立峰。根据质谱裂解规律,这些峰(按照总离子流图谱从左到右的峰顺序)的指定见表2。这23种组分在质谱条件下的裂解产物见说明书附图2-24。
表2总离子流图谱中峰对应组分保留时间,负离子质量数,结构及名称
Figure BDA0002129256210000061
Figure BDA0002129256210000071
Figure BDA0002129256210000081
Figure BDA0002129256210000091
Figure BDA0002129256210000101
实施例4评价鲜桑树叶水提物粉末对脾细胞增殖的影响
为考察鲜桑树叶水提物粉末的免疫增强作用,本发明按照MTT,3-(4,5-dime-thylthiazol-2-yl)2,5-dipHenyl-tetrazolium bromide,法测定了鲜桑树叶水提物粉末对ICR雄性小鼠的脾细胞增殖的影响。桑树叶水提物粉末用RPMI-1640培养基配成终浓度为0.1mg/mL的溶液测定脾细胞增殖活性。阳性对照为胸腺五肽,购自深圳翰宇药业股份有限公司,用RPMI-1640培养基配制成浓度为50μM的溶液(终浓度是10μM)。空白对照RPMI-1640培养基购自Gibco公司。
体重为22g的ICR雄性小鼠(购于北京维通利华动物实验技术有限公司),乙醚麻醉后脱颈牺牲,并在无菌条件下取脾。该脾用200目钢网和玻璃注射器芯研磨,得到的匀浆样脾组织用HANK’S液洗两次。1500转/分离心10分钟,计数,用完全RPMI-1640培养液配成5×106个脾细胞/mL培养液的细胞悬液.后接种于96孔板中,每孔加入100μL(每孔含5×105个脾细胞,96孔板外围每孔加100μL PBS液封)。PBS由8.00g NaCl,0.20g KCl,1.56g Na2HPO4·12H2O及0.20g KH2PO4用三蒸水溶解定容至1000mL,经高压灭菌锅灭菌制备。96孔板在37℃下在5％CO2的孵箱中孵育4h,给药孔每孔加25μL桑树叶水提物粉末的RPMI-1640培养基溶液或加25μL胸腺五肽的RPMI-1640培养基配溶液,轻轻晃动均匀(每板均设置RPMI-1640培养基对照)。孵育48h后,每孔加25μL MTT溶液(5mg/mL),继续孵育4h后吸去上清液,每孔加入100μLDMSO,振荡15min,使生成的蓝色formazan结晶充分溶解于DMSO中。5min内使用酶标仪于490nm波长下测定每孔formazan光密度值。该值用标准公式换算为促使小鼠脾淋巴细胞增殖的百分率,用均值±SD％表示,代表在细胞层面的免疫增强活性。表3说明在0.1mg/mL浓度下桑树叶水提物粉末促进小鼠脾淋巴细胞增殖的百分率显著性强于RPMI-1640培养基对照。表3还说明浓度为0.1mg/mL的桑叶水提物粉末促进小鼠脾淋巴细胞增殖的百分率与浓度为10μM的胸腺五肽促进小鼠脾淋巴细胞增殖的活性无显著性差异。可见,桑叶水提物粉末有优秀的促进小鼠脾淋巴细胞增殖活性。
表3鲜桑树叶水提物粉末对脾细胞增殖的影响
化合物 浓度 脾淋巴细胞增殖的百分率(均值±SD％)
RPMI-1640培养基 - 0
桑树叶水提物粉 0.1mg/mL 0.56±0.041<sup>a</sup>
胸腺五肽 10μM 0.53±0.040
a)与RPMI-1640培养基比P<0.01,与胸腺五肽比P>0.05；n＝9
实施例5评价鲜桑树叶水提物粉末对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响
为考察鲜桑树叶水提物粉末在动物层面的免疫增强作用,本发明采用小鼠碳廓清实验模型评价了鲜桑树叶水提物粉末对ICR雄性小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响。雄性ICR小鼠(20±2g,购于北京维通利华动物实验技术有限公司)。静息饲养1天后随机分为鲜桑树叶水提物粉末组,10只小鼠,口服剂量为12.5mg/kg/天,连续给药3天；胸腺五肽组,10只小鼠,腹腔注射剂量为2μmol/kg/天,连续给药3天；生理盐水组,10只小鼠,口服剂量为0.1mL/10g/天,连续给药3天。末次给药24小时后小鼠尾静脉注射5倍生理盐水稀释的印度墨水(meilunbio)。分别于注射后5min,15min两个时间点断尾取10μL血,加至2mL浓度为0.1％的NaHCO3水溶液中,混匀,于660nm波长下测定样本的吸光度。小鼠处死,取肝,脾称重。用吞噬指数表示小鼠的免疫能力。按照吞噬指数＝体重/(肝重+脾重)×[(logOD1-logOD2)/(t2-t1)]1/3计算各组小鼠巨噬细胞吞噬指数。结果见表4。数据表明在口服剂量为12.5mg/kg/天时连续给药3天,鲜桑树叶水提物粉末不仅可显著性增强小鼠免疫功能,而且活性明显强于腹腔注射剂量为2μmol/kg/天连续给药3天的胸腺五肽(这里使用的胸腺五肽的腹腔注射剂量是临床使用的剂量)。可见,鲜桑树叶水提物粉末对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能具有优秀的增强活性。
表4鲜桑树叶水提物粉末对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
化合物 剂量(给药途径) 吞噬指数(均值±SD)
生理盐水 0.1mL/10g/天(口服) 3.69±0.746
鲜桑树叶水提物粉末 12.5mg//kg/天(口服) 5.17±0.556<sup>a</sup>
胸腺五肽 2μmol/kg/天(腹腔注射) 4.42±0.669
a)与生理盐水比P<0.01,与胸腺五肽比P<0.05；n＝10。

Claims (5)

1.一种鲜桑树叶水提物粉末,其特征在于所述的鲜桑树叶水提物粉末含11种奎尼酸类化合物，所述的11种奎尼酸类化合物为3-O-[E-2-羧基正戊羰氧-3-羟基正丁酰氧-4-羧基正丙酰氧-5-羟基-6-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羧基正丙烯羰氧-3-羟基-4-羟基正丙羰氧-5-羧基乙酰氧-6-(6-羟基-1,3-己二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羟基乙酰氧-3-(5-羧基-1-正戊烯羰氧)-4,5,6-三(4-羧基-1-正丁烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羟基-3-羧基乙酰氧-4-羧基正丙烯羰氧-5,6-二(4-羧基正丁羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-甲氧-3-羟基正丁烯酰氧-4-羧基正丁烯酰氧-5-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)-6-(6-羟基-1-正己烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2-羟基正丙烯酰氧-3,4-二羧基正丙酰氧-5-(6-羟基-1,3,5-正己三烯羰氧)-6-(5-羟基-1,3-正戊二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,5-二(5-羧基-1,3-正戊二烯羰氧)-3-(6-羧基-1,3,5-正己三烯羰氧)-4-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-6-(8-羟基-1,3,5,7-正辛四烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,3,6-三(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-4-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,5-二羟基正丙烯酰氧-3-羧基正丙烯酰氧)-4-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6-羧基正丙羰氧桂皮酰]奎尼酸,3-O-[E-2,5-二甲氧-3-(4-羧基正丁羰氧)-4-(6-羟基-1-正己烯羰氧)-6-(5-羧基正戊羰氧)桂皮酰]奎尼酸和3-O-[E-2,5-二甲氧-3-羧基正丙羰氧-4,5-二(5-羧基正戊羰氧)桂皮酰]奎尼酸。
2.权利要求1所述一种鲜桑树叶水提物粉末,其特征在于所述的鲜桑树叶水提物粉末还包括12种懈皮素类化合物，所述的12种懈皮素类化合物为3-O-葡萄糖苷-2’,3’-二甲氧-4’,5’-二(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6’-(6-羟基-1,3-正己二烯羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(6-羧基正己羰氧)-4’-(4-羧基-1-正丁烯羰氧)-5’-(3-羧基正丁羰氧)-6’-(5-羧基正戊羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(4-羟基正丁羰氧)-4’-(5-羟基正戊羰氧)-5’-羧基乙酰氧-6’-羟基乙酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’,6’-二甲氧基-3’-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’,5’-二(4-羟基-1-正丁烯羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-甲氧基-3’-(4-羟基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5’-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-6’-甲酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-4’-(4-羧基-1,3-正丁二烯羰氧)-5’,6’-二(3-羧基正丙羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-甲酰氧-3’-(3-羟基正丙羰氧)-4’-(3-羧基正丙羰氧)-5’-羧基正丙酰氧-6’-羟甲氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-甲氧基-3’-(6-羧基-1,3,5-正己三烯羰氧)-4’,5’-二(3-羧基-1-正丁烯羰氧)-6’-甲酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’,3’,6’-三甲氧基-4’-羟甲基-5’-(6-羟基正己羰氧)懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’-羟基-3’-(3-羧基-1-正丙烯羰氧)-4’-(3-羟基正丙羰氧)-5’,6’-二羟基正丙酰氧懈皮素,3-O-葡萄糖苷-2’,3’-二甲氧基-4’-羟甲基-5’-(6-羟基正己羰氧)-6’-(3-羟基正丙羰氧)懈皮素和3-O-葡萄糖苷-2’-甲酰氧-3’,4’-二羧基乙酰氧基-5’-(7-羧基-1,3,5-正庚三烯羰氧)-6’-(9-羧基-1,3,5-正壬三烯羰氧)懈皮素。
3.一种制备权利要求1或2所述的鲜桑树叶水提物粉末的方法,其特征在于鲜桑树叶水提物粉末可以这样制得:鲜桑树叶用自来水洗净,在蒸馏水中于60℃-90℃加热0.5-4小时,过滤,残饼用蒸馏水洗,合并的滤液减压浓缩,得到的粉末即为鲜桑树叶水提物粉末。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于取鲜桑树叶,用自来水洗净,在蒸馏水中于70℃加热2小时,过滤,残饼用蒸馏水洗,合并的滤液减压浓缩,得到的粉末即为鲜桑树叶水提物粉末。
5.权利要求1或2的鲜桑树叶水提物粉末在制备增强免疫力药物中的应用。
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黄剑林等: "桑叶多糖的提取分离及其对小鼠免疫功能的影响", 《第四军医大学学报》 *

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