CN112203511B - 提高植物的非生物胁迫抗性的大环四吡咯化合物、组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法。该方法包括对植物施用包括以下的组合物:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及油,其选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组。本发明提供了另一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法。该方法包括将选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的大环四吡咯化合物施用于植物的种子和幼苗中的至少一种。本发明还提供了相应的组合物。
Description
技术领域
本发明的技术领域一般涉及用于提高植物的非生物胁迫抗性或耐受性的大环四吡咯化合物及其组合物。更具体地,该大环四吡咯化合物可以是卟啉化合物或还原卟啉化合物。
背景技术
生长中的植物要经受各种非生物来源的环境胁迫,在本文中称为非生物胁迫。非生物胁迫的非限制性实例包括低温胁迫、高温胁迫、干旱胁迫、过剩水分胁迫、光氧化胁迫和由过量盐暴露引起的胁迫。当植物暴露于非生物胁迫时,由于该植物将能量转移到生物防御机制以试图应对胁迫条件,生长可能被抑制。这些胁迫中的一种或全部可以削弱植物的健康、质量和/或发育,并且可能损害作物产量和/或作物质量。非生物胁迫源的影响尤其重要,因为其与气候变化有关,因为植物和种植者必须快速适应以应付意外的新的或扩大的非生物胁迫条件。
仍然需要可以有助于提高植物的非生物胁迫抗性的化合物、组合物和/或组合。
发明内容
在一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法,所述方法包括向所述植物施用包含以下的组合:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及油,其选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的组合物,所述组合物包含:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及油,其选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法,所述方法包括将选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的大环四吡咯化合物施用于所述植物的种子和幼苗中的至少一种。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法,所述方法包括向所述植物施用包含以下的组合:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及螯合剂。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的组合物,所述组合物包含:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及螯合剂。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法,所述方法包括向所述植物施用包含以下的组合:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及油,其选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组;其中所述大环四吡咯化合物和所述油以协同有效地提高所述植物对所述一种或多种非生物胁迫中的至少一种的抗性的量存在。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的组合物,所述组合物包含:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及油,其选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组;其中所述大环四吡咯化合物和所述油以协同有效地提高所述植物对所述一种或多种非生物胁迫中的至少一种的抗性的量存在。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法,所述方法包括向所述植物施用包含以下的组合:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及螯合剂,其包括氨基羧酸化合物或其盐;其中所述大环四吡咯化合物和所述螯合剂以协同有效地提高所述植物对所述一种或多种非生物胁迫中的至少一种的抗性的量存在。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的组合物,所述组合物包含:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;以及螯合剂,其包括氨基羧酸化合物或其盐;其中所述大环四吡咯化合物和所述螯合剂以协同有效地提高所述植物对所述一种或多种非生物胁迫中的至少一种的抗性的量存在。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法,所述方法包括向所述植物施用包含以下的组合:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;油,其选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组;以及螯合剂,其包括氨基羧酸化合物或其盐;其中所述大环四吡咯化合物、所述油和所述螯合剂以协同有效地提高所述植物对所述一种或多种非生物胁迫中的至少一种的抗性的量存在。
在另一个方面,本发明提供了一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的组合物,所述组合物包含:大环四吡咯化合物,其选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组;油,其选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组;以及螯合剂,其包括氨基羧酸化合物或其盐;其中所述大环四吡咯化合物、所述油和所述螯合剂以协同有效地提高所述植物对所述一种或多种非生物胁迫中的至少一种的抗性的量存在。
具体实施方案
本文所述的化合物、组合和制剂涉及大环四吡咯化合物在提高植物对一种或多种非生物胁迫引起的损害的抗性中的用途。大环四吡咯化合物可以单独使用或与其它添加剂如油、螯合剂和/或表面活性剂组合使用。
如本文所用,术语“非生物胁迫”是指对作物和其他植物的生长、发育、产量和/或种子质量产生低于最佳水平的负面影响的环境条件。非生物胁迫的非限制性实例包括,例如:光氧化条件、干旱(水分亏缺)、过量浇水(淹水和浸没)、极端温度(寒冷、冰冻和热)、极端光照水平(高和低)、辐射(UV-B和UV-A)、过量Na+(碱度)导致的盐度、化学因素(例如pH)、矿物质(金属和类金属)毒性、必需营养素的缺乏或过量、气态污染物(臭氧、二氧化硫)、风、机械因素和其它胁迫源。
如本文所用,术语“提高胁迫抗性”(等)是指提高植物在胁迫条件下存活或茁壮成长的能力。提高的抗性或耐受性可以是针对特定的胁迫源,例如干旱、过量水、营养缺乏、盐、低温、遮荫或高温,或多种胁迫源。在一些情况下,可以通过与经受相同胁迫的未经处理的植物相比,植物质量退化的减少来举例证明对一种或多种非生物胁迫的抗性的提高。在其他情况下,可以通过与经受相同胁迫的未经处理的植物相比,保持植物质量或改善植物质量来举例证明对一种或多种非生物胁迫的抗性的提高。
如本文所用,树、草、作物或植物的耐性是指其在不利的环境(非生物)条件下(例如低温、高温、干旱、淹水、遮荫、土壤营养过剩或土壤营养缺乏以及风)存活的能力。对给定的不利的非生物条件的天然抗性可以根据属、种和栽培品种而变化。例如,某一品种的果树可能无法在温度降至5℃的冬季存活。因此,处于冬季温度平均为10℃的气候中的种植者可能会因为害怕异常寒冷的冬季会显著地减少其作物并可能破坏其果园,而对种植第一品种的果树有所迟疑。同样地,一个居住区的蔬菜农场主可以基于遮荫和日照的量来规划他的园地,在阳光充足的地方种植耐热植物,在遮荫区域种植耐阴植物。
由于气候条件可能随时间而变化,种植者可能希望根据一种或多种预测的非生物胁迫或意外的非生物胁迫来提高植物、草、树或作物的耐性,以将经济损失的风险最小化。此外,种植者可能希望尝试种植预期并不会在其地理区域和当地土壤条件下茁壮成长的作物。在这些情况下,通常鼓励种植者仔细地监测环境条件,以减轻这些条件可能导致植物或作物产量损失的风险。例如,寒冷气候中的种植者可能在冬季覆盖植物或灌木、可能用肥料或其它化学品补充差的土壤质量、或者可能建造挡风板。普遍改善植物对非生物胁迫源的耐受性的方法将使得种植者能够避免这些步骤或减少这些步骤,并且将使种植者能够将环境条件的自然限制扩展到超过其本地地理位置所共有的环境条件的范围。
将所述化合物或包含所述化合物的组合物施用于植物,例如灌木、草、观果植物或蔬菜植物、花、树、藤本植物或作物(本文中通常称为植物),可以改善植物的耐性,并且可以使植物经受超出该植物自然生长条件范围的生长条件。这样的条件被认为是非生物胁迫源。具体的非生物胁迫条件的实例描述如下。
通过施用本文所述的大环四吡咯化合物可以提高植物经受非生物胁迫的能力。大环四吡咯化合物可以是光敏的或非光敏的、金属化的或非金属化的。大环四吡咯化合物可以作为单独的化合物添加或与其它添加剂组合添加,或作为包含其他添加剂的组合物的一部分添加。其它添加剂包括油、螯合剂、表面活性剂、水或其组合。大环四吡咯化合物和添加剂也将在下面更详细地描述。
大环四吡咯化合物
在本说明书中,增强非生物胁迫抗性的化合物是大环四吡咯化合物。大环四吡咯化合物可以包括四个连接在一起的含氮杂环。在一些实施方案中,含氮杂环选自由吡咯和吡咯啉组成的组,并且通过次甲基(即,=CH-基团)连接在一起形成四吡咯。大环四吡咯化合物可以例如包括卟啉化合物(四个吡咯基团通过次甲基连接在一起)、二氢卟吩化合物(三个吡咯基团和一个吡咯啉基团通过次甲基连接在一起)、菌绿素化合物或异菌绿素化合物(两个吡咯基团和两个吡咯啉基团通过次甲基连接在一起)、或其具有杂环芳香环核或部分芳香环核(即,在环的整个外围上不都是芳香的的环核)的功能等同物。还应当理解,本文所用的术语“还原卟啉”是指由二氢卟吩、菌绿素、异菌绿素和其它类型的还原卟啉如咔咯、咕啉和corphin组成的组。应当理解,大环四吡咯化合物可以是金属配合物(例如Mg-卟啉)或非金属大环(例如二氢卟吩E6、原卟啉IX或四苯基卟啉)。大环四吡咯化合物可以是提取的天然存在的化合物或合成化合物。
在卟啉化合物或还原卟啉化合物是金属化的实施方案中,可以选择金属使金属化的大环四吡咯化合物产生活性氧(ROS)、或者可以选择使得金属化的大环四吡咯化合物不产生ROS或不产生单线态氧、和/或为非光敏性的。金属的非限制性实例包括Mg、Zn、Pd、Sn、Al、Pt、Si、Ge、Ga、In、Ni、Cu、Co、Fe和Mn。应当理解,如本领域技术人员所理解的,当提及金属种类而没有其氧化程度时,将考虑该金属种类的所有合适的氧化态。在其它实施方案中,该金属选自由Mg、Zn、Pd、Sn、Al、Pt、Si、Ge、Ga和In组成的组,或选自由Mg(II)、Zn(II)、Pd(II)、Sn(IV)、Al(III)、Pt(II)、Si(IV)、Ge(IV)、Ga(III)和In(III)组成的组。在其它实施方案中,所述金属选自由Cu、Co、Fe和Mn组成的组,或选自由Cu(II)、Co(II)、Co(III)、Fe(II)、Fe(III)、Mn(II)和Mn(III)组成的组。
应当理解,用于本说明书的方法和组合物中的大环四吡咯化合物也可以基于其对人的毒性或基于其对环境的影响来选择。例如,当与其它类型的大环四吡咯化合物(如酞菁)相比时,卟啉和还原卟啉对人具有的毒性较低并且具有增强的环境生物降解性。
以下化学式示出了大环四吡咯化合物的一些非限制性实例:
大环四吡咯化合物如叶绿酸铜(在本文也被称为CuChln或CuChl)和叶绿酸镁(在本文也被称为MgChln或MgChl)可以从各种化学品供应商如Organic Herb Inc.、SigmaAldrich或Frontier Scientific处获得。在一些情况下,大环四吡咯化合物的纯度不是100%,并且可以包含其它组分,例如有机酸和胡萝卜素。在其它情况下,大环四吡咯化合物可以具有高纯度。
添加剂
在一些实施方案中,大环四吡咯化合物可以与一种或多种农业上合适的助剂组合施用于植物。一种或多种农业上合适的助剂中的每一种可以独立地选自由以下组成的组:一种或多种活化剂助剂(例如,一种或多种表面活性剂;例如,一种或多种油性助剂,例如,一种或多种渗透剂)和一种或多种效用助剂(例如,一种或多种润湿剂或分散剂;一种或多种湿润剂;一种或多种乳化剂;一种或多种漂移控制剂;一种或多种增稠剂;一种或多种沉积剂;一种或多种水质改善剂;一种或多种缓冲剂;一种或多种消泡剂;一种或多种UV阻断剂;一种或多种抗氧化剂;一种或多种肥料、营养素和/或微量营养素;和/或一种或多种除草安全剂)。Hazen,J.L.Weed Technology 14:773-784(2000)中提供了示例性的助剂,其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中,大环四吡咯化合物可以与油组合施用于植物。该油可以选自由矿物油(例如石蜡油)、植物油、精油及其混合物组成的组。在一些情况下,将大环四吡咯化合物与油组合可以改善大环四吡咯化合物与植物接触时的溶解性。在有载液(如水)或没有载液的情况下,油可以与大环四吡咯化合物一起添加或分别添加。
植物油的非限制性实例包括含有中链甘油三酯(MCT)的油和从坚果中提取的油。植物油的其它非限制性实例包括椰子油、芥花油、大豆油、菜籽油、葵花油、红花油、花生油、棉籽油、棕榈油、米糠油及其混合物。矿物油的非限制性实例包括石蜡油、带支链的石蜡油、环烷油、芳烃油及其混合物。
石蜡油的非限制性实例包括各种等级的聚α-烯烃(PAO)。例如,石蜡油可以包括HT60TM、HT100TM、High Flash Jet、LSRDTM和N65DWTM。石蜡油可以包括碳原子数范围为约12至约50个或约16至35个的石蜡。在一些情况下,石蜡的平均碳原子数可以为23。在一些实施方案中,油可以具有至少80重量%、或至少90重量%或至少99重量%的石蜡含量。
大环四吡咯化合物和油可以顺序加入或同时加入。当同时加入时,大环四吡咯化合物和油可以作为同一组合物的部分或作为两个单独组合物的部分来添加。在一些实施方案中,大环四吡咯化合物和油可以以水包油乳液组合。也就是说,该组合可以包括与油和水组合的大环四吡咯化合物,以便将大环四吡咯化合物配制成水包油乳液。水包油乳液还可以包括其它添加剂,例如螯合剂、表面活性剂或其组合。
如本文中所用的,术语“水包油乳液”是指其中油(例如,石蜡油)和水中的一种以液滴形式分散在另一种(例如,水)中的混合物。在一些实施方案中,水包油乳液通过包括以下的方法来制备:将石蜡油、水和任何其它组分组合,并施加剪切直至获得乳液。在其它实施方案中,水包油乳液通过包括以下的方法来制备:将石蜡油、水和任何其它组分在混合罐中组合,并通过喷枪的喷嘴喷洒。
在一些实施方案中,大环四吡咯化合物是包括载液的组合物的一部分。合适的载液可以允许在载液中获得组合物的组分稳定的溶液、悬浮液和/或乳液。在一些实施方案中,载液是水。在其它实施方案中,载液是水和其它溶剂或油的混合物,所述其它溶剂或油是不可混溶的或仅部分可溶于水中。
在一些实施方案中,大环四吡咯化合物和油的组合可以用于提高植物对非生物胁迫的抗性。该组合可以是水包油乳液,其中选择表面活性剂以使得大环四吡咯化合物保持分散在水包油乳液中以输送至植物。
该组合可以包括表面活性剂(也称为乳化剂或表面活化剂)。表面活性剂通常具有包含疏水基团和亲水基团(即两亲性质结构)的特征性分子结构。疏水基团可以是长链烃,而亲水基团通常是离子基团或高极性基团。根据亲水基团的性质,表面活性剂可以分为阴离子型、阳离子型、非离子型和两性型。本说明书的组合可以包括阴离子型、阳离子型、非离子型和两性型表面活性剂中的至少一种。表面活性剂可以包括各种类型的疏水基团和亲水基团。疏水基团的非限制性实例包括C8-C20直链烷基链或带支链的烷基链、C8-C20烷基苯残基、C8-C20直链乙氧基化链或带支链的乙氧基化链、C8-C20烷基酚残基、C8-C20氨基-丙胺残基。亲水基团的非限制性实例包括羧酸根基团、磺酸根基团、硫酸根基团、四烷基铵基团、PEG基团、PEG酯基团、PEG酚酯基团、PEG胺基团、葡萄糖基团或其它糖类、氨基酸两性基团。
在一些实施方案中,表面活性剂可以选自由以下组成的组:乙氧基化醇、聚合物表面活性剂、脂肪酸酯、聚乙二醇、乙氧基化烷基醇、单甘油酯、烷基单甘油酯及其混合物。例如,脂肪酸酯可以是山梨聚糖脂肪酸酯。表面活性剂可以作为助剂存在以帮助覆盖植物叶子。表面活性剂可以是可接受的聚山梨酯型的表面活性剂(例如,吐温80)、非离子表面活性剂共混物(例如AtloxTM3273)、或其它合适的表面活性剂。在一些实施方案中,聚乙二醇可以包括下式的聚乙二醇:
R1-O-(CH2CH2O)f-R2,
其中R1=H、CH2=CH-CH2或COCH3;R2=H、CH2=CH-CH2或COCH3;并且f≥1。
该组合还可以包括螯合剂。在一些实施方案中,螯合剂可以包括至少一个羧基、至少一个羟基、至少一个酚基、和/或至少一个氨基或其农业上可接受的盐。在一些实施方案中,螯合剂可以包括氨基羧酸化合物或其农业上可接受的盐。氨基羧酸或其农业上可接受的盐可以包括氨基多羧酸或其农业上可接受的盐。例如,氨基多羧酸可以包含两个氨基和与每个氨基结合的两个烷基羧基。烷基羧基可以是甲基羧基。
在一些实施方案中,所述螯合剂选自由以下组成的组:氨基多羧酸、芳香族羧酸或脂肪族羧酸、氨基酸、膦酸和羟基羧酸或其农业上可接受的盐。
在一些实施方案中,本文所述的方法和组合物包括一种或多种氨基多羧酸螯合剂。氨基多羧酸螯合剂的实例包括但不限于:乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、羟基乙二胺三乙酸(HEDTA)、和乙二胺二琥珀酸(EDDS)、环己二胺四乙酸(CDTA)、N-(2-羟基乙基)乙二胺三乙酸(HEDTA)、乙二醇醚二胺四乙酸(GEDTA)、丙氨酸二乙酸(ADA)、烷酰基乙二胺三乙酸(例如月桂酰基乙二胺三乙酸(LED3A))、天冬氨酸二乙酸(ASDA)、天冬氨酸单乙酸、二氨基环己烷四乙酸(CDTA)、1,2-二氨基丙烷四乙酸(DPTA-OH)、1,3-二氨基-2-丙醇四乙酸(DTPA)、二亚乙基三胺环戊烷膦酸(DTPMP)、二甘醇酸、吡啶二羧酸(DPA)、乙醇胺二乙酸、乙醇二甘油(EDG)、乙二胺二戊二酸(EDDG)、乙二胺二(羟基苯乙酸(EDDHA)、乙二胺二丙酸(EDDP)、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、乙二胺单琥珀酸(EDMS)、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺四丙酸(EDTP)和乙二醇氨基乙基醚四乙酸(EGTA)及其农业上可接受的盐(例如钠盐、钙盐和/或钾盐)。
螯合剂的一个非限制性实例是乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐。氨基羧酸盐可以例如是钠盐或钙盐。
螯合剂的另一个非限制性实例是聚天冬氨酸或其盐(即聚天冬氨酸盐),例如聚天冬氨酸钠,其通常可表示如下。聚天冬氨酸盐的分子量可以为例如2,000至3,000。
因此,螯合剂可以是聚合物,其可以包括天冬氨酸单元、羧基和聚天冬氨酸中发现的其它特征。聚天冬氨酸可以是具有α键和β键的共聚物,该α键和β键可以是各种比例(例如,30%α,70%β,沿聚合物链随机分布)。聚天冬氨酸钠的一个非限制性实例是DS100。
螯合剂的其它非限制性实例包括EDDS(乙二胺-N,N′-二琥珀酸)、IDS(亚氨基二琥珀酸(N-1,2-二羧乙基)-D,L-天冬氨酸)、异丙胺、三乙醇胺、三乙胺、氢氧化铵、四丁基氢氧化铵、六胺、GLDA(L-谷氨酸N,N-二乙酸)或其农业上可接受的盐。螯合剂可以是金属化的或非金属化的。在一些实施方案中,IDS可以用作IDS的四钠盐(例如,亚氨基二琥珀酸四钠),其可以是CXl00。在一些实施方案中,EDDS可以用作EDDS的三钠盐。在一些实施方案中,GLDA可以用作GLDA的四钠盐。
在一些实施方案中,螯合剂可以包括一种或多种氨基酸螯合剂。氨基酸螯合剂的实例包括但不限于丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸或其盐(例如钠盐、钙盐和/或钾盐)及其组合。
在一些实施方案中,螯合剂可以包括一种或多种芳香族羧酸螯合剂或脂肪族羧酸螯合剂。芳香族羧酸螯合剂或脂肪族羧酸螯合剂的实例包括但不限于草酸、琥珀酸、丙酮酸、苹果酸、丙二酸、水杨酸和邻氨基苯甲酸及其盐(例如钠盐、钙盐和/或钾盐)。在一些实施方案中,本文所述的方法和组合物包括一种或多种多酚螯合剂。多酚螯合剂的一个非限制性实例是单宁酸类,例如鞣酸。
在一些实施方案中,螯合剂可以包括一种或多种羟基羧酸螯合剂。羟基羧酸型螯合剂的实例包括但不限于苹果酸、柠檬酸、乙醇酸、庚酸、酒石酸及其盐(例如钠盐、钙盐和/或钾盐)。
应当理解,一种或多种螯合剂可以游离酸、农业上可接受的盐或其组合的形式提供。在一些实施方案中,一种或多种螯合剂中的每一种都以游离酸的形式施用。在其它实施方案中,螯合剂可以以盐的形式施用。示例性的盐包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、胺盐、酰胺盐及其组合。在其它实施方案中,当存在一种以上的螯合剂时,至少一种螯合剂以游离酸的形式施用,而至少一种螯合剂以盐的形式施用。
还应该理解,大环四吡咯化合物和其它试剂(例如螯合剂、油、表面活性剂等)可以分别提供给植物或作为同一组合物的一部分一起提供给植物。在一些实施方案中,组合物的组分可以以没有载液的浓缩形式包装,并且操作者可以直接添加载液(例如,水)以形成组合物,然后可以将组合物施用于植物。
当组分作为单个组合物的一部分提供时,可以提供具有一定浓度和相对比例的组分的组合物。例如,组合物可以具有约100nM至约50mM、约5μM至约100mM、约5μM至约50mM、约5μM至约10mM、约1μM至约1000μM、约5μM至约200μM的大环四吡咯化合物,约10μM至约150μM的大环四吡咯化合物,约25μM至约100μM的大环四吡咯化合物,或约50μM至约75μM的大环四吡咯化合物。
例如但并非限定,所述组合物还可以包含约2μM至约10,000μM的螯合剂、约5μM至约5,000μM的螯合剂、约10μM至约1,000μM的螯合剂、约25μM至约500μM的螯合剂、约50μM至约100μM的螯合剂。
例如但并非限定,大环吡咯化合物和螯合剂在组合物中的相对比例按重量计可以为约50∶1至约1∶1000、约20∶1至约1∶500、约10∶1至约1∶100、或约1∶1至约1∶10。
例如但并非限定,大环四吡咯化合物和油按重量计可以以约50∶1至约1∶1000,约20∶1至约1∶500,约10∶1至约1∶100,或约1∶1至约1∶10的相对比例施用。
施用方式
大环四吡咯化合物可以施用于植物以提高其经受非生物胁迫的能力。可以将该化合物与其它添加剂同时或分别施用于植物。例如,组合物可以制备为包括大环四吡咯化合物和其它任选的添加剂(例如油、螯合剂和/或表面活性剂),以及输送液体(例如水或水-油乳液)。
本文所述的大环四吡咯化合物或组合物可以施用于植物的叶、种子、根和/或茎。化合物或组合物可以通过浸种或种子包衣、根浸、幼苗根浸、土壤浸透、移液、灌溉、喷洒、喷雾、喷灌、倾倒、叶面喷洒、在植物基部喷洒或任何其它合适的方法施用于植物。
在一些实施方案中,大环四吡咯化合物可以用于处理种子或幼苗。在一些情况下,种子或幼苗的处理可以刺激发芽和生长,和/或可以增加植物对非生物胁迫的抗性。在一些实施方案中,种子或幼苗可以在种植到生长基质中之前用大环四吡咯化合物处理。在一些实施方案中,种子或幼苗可以在种植到生长基质中之后用大环四吡咯化合物处理。
可以将大环四吡咯化合物直接表面包衣在种子、种子或幼苗叶(叶面施用于幼苗)上。在一些实施方案中,可以将含有大环四吡咯化合物的溶液或乳液直接喷洒到种子或幼苗上。在一些实施方案中,可以将种子或幼苗浸入含有大环四吡咯化合物的溶液或乳液中。在一些实施方案中,可以将幼苗的根浸入含有大环四吡咯化合物的溶液或乳液中。在一些实施方案中,可以就种子放入容器中,并且将含有大环四吡咯化合物的溶液引入该容器中。然后可以将该容器摇动适当的时间(例如,约1分钟至几分钟),使得溶液与种子接触。然后,可以将经摇动的种子在种植之前干燥(例如,风干)。
大环四吡咯化合物可以使用各种施用方式,一次、两次或两次以上地将施用于种子或幼苗。例如,种子可以在种植到生长基质中之后进行处理。在另一个实例中,种子/或幼苗可以在种植之前和种植之后进行处理(例如,犁沟内处理和/或叶面施用)。在另一个实例中,种子可以在种植之前和/或种植之后进行处理,并且随后的幼苗可以进一步被处理(例如,根处理和/或叶面处理)。
用树脂包衣的组合物
在一些实施方案中,包括卟啉化合物或还原卟啉化合物和树脂的水基组合物可以用于包衣种子或包衣幼苗。树脂可以包括任何合适的可分散在水性载体介质中的聚合物种类。例如,树脂可以选自由丙烯酸树脂(例如,聚甲基丙烯酸)、聚氨酯、聚氨酯丙烯酸树脂、聚酯和聚氨酯醇酸树脂(uralkyd)组成的组。
应当理解,可以改变树脂的化学结构或组成以获得所需的包衣性质。例如,控制树脂的亲水性和疏水性可以改变包衣的水渗透性。改变各种聚合物相(例如,当树脂是多相聚合物时)的玻璃化转变温度(Tg)可以控制包衣的硬度和附着力。也可以将另外的官能团(例如(聚)胺、酰胺、环状脲基、酸、羟基、乙酰乙酰氧基、叔胺)引入树脂中以改变包衣对种子或幼苗的附着性。在一些情况下,包含树脂的包衣组合物可以成膜。
在一些实施方案中,包衣组合物可以包含约30重量%至约60重量%的水、约0.001重量%至约40重量%的卟啉化合物或还原卟啉化合物和约5重量%至约30重量%的树脂。例如,包衣组合物可以包括约50重量%的水、约40重量%的卟啉化合物或还原卟啉化合物和约10重量%的树脂。
植物的类型
本发明的组合可以用于受非生物胁迫影响的各种类型的植物。所述植物可以是非木本作物、木本植物或草皮草。该植物可以选自由以下组成的组的植物:作物、观果植物、蔬菜植物、豆科植物、谷类植物、饲料植物、油料种子植物、田间植物、园林植物、温室植物、室内植物、花卉植物、草坪植物、草皮草、树(如果树)和其它可能受非生物胁迫影响的植物。
在一些实施方案中,植物是选自由以下组成的组的作物:甘蔗、小麦、水稻、玉米(玉蜀黍)、马铃薯、甜菜、大麦、甘薯、木薯、大豆、番茄和豆类(菜豆和豌豆)。
在其它实施方案中,植物是选自由落叶树和常绿树组成的组的树。树的实例包括但不限于枫树、果树(诸如柑橘树、苹果树和梨树)、橡树、白蜡树、松树和云杉树。
在其它实施方案中,植物是灌木。
在其他实施方案中,植物是观果植物或坚果植物。这种植物的非限制性实例包括:针叶樱桃(acerola)(巴巴多斯樱桃)、释迦凤梨(atemoya)、杨桃(星果)、红毛丹、杏仁、杏、樱桃、油桃、桃、开心果、苹果、鳄梨、香蕉、芭蕉(platain)、蓝莓、灌木浆果、蔓越莓、树莓、无花果、葡萄、芒果、橄榄、木瓜、梨、菠萝、李子、草莓、葡萄柚、柠檬、莱檬、橙子(例如,脐橙和柳橙(Valencia orange))、橘柚(tangelo)、橘子(tangerine)、柑。
在其他实施方案中,植物是蔬菜植物。这种植物的非限制性实例包括:芦笋、豆类、甜菜、西兰花、芥兰(Chinese broccoli)、束球花甘蓝(broccoli raab)、抱子甘蓝、卷心菜、菜花、大白菜(例如小白菜和纳帕(napa))、中国芥菜(Chinese mustard cabbage)(芥菜)、卡瓦卢西兰花(Cavalo broccoli)、羽衣甘蓝、无头甘蓝(kale)、球茎甘蓝(kohlrabi)、水菜(mizuna)、芥菜(mustard greens)、芥末菠菜(mustard spinach)、油菜(rape greens)、芹菜、佛手瓜、冬瓜(Chinese waxgourd)、枸橼西瓜(citron melon)、黄瓜、小黄瓜、hyotan、cucuzza、丝瓜、中国秋葵、胶苦瓜(balsam apple)、苦瓜(balsam pear)、苦瓜(bittermelon)、中国黄瓜、真哈密瓜(true cantaloupe)、哈密瓜、卡萨巴甜瓜(casaba)、克伦肖瓜(crenshaw melon)、黄金培肖瓜(golden pershaw melon)、白兰瓜、蜜瓜(honey galls)、柑瓜(mango melon)、波斯香瓜(Persian melon)、南瓜、西葫芦、笋瓜(winter squash)、西瓜、芋头(芋艿)、茄子、姜、人参、草药和香料(例如卷叶罗勒、香蜂叶、芫荽、墨西哥牛至,薄荷)、日本萝卜(白萝卜)、生菜、秋葵、辣椒、土豆、水萝卜、甘薯、中国洋蓟(日本洋蓟)、玉米和番茄。
在其它实施方案中,植物是花卉植物,例如玫瑰、观花灌木或观赏植物。这种植物的非限制性实例包括:花卉植物和观叶植物(包括玫瑰和其它观花灌木、观叶植物和花坛植物),果树(如苹果树、樱桃树、桃树和梨树),非果树,庭荫树,观赏树和灌木(例如针叶林、落叶阔叶常绿植物和木质观赏植物)。
在一些实施方案中,植物是室内植物。这种植物的非限制性实例包括:菊花(chrysanthemum)、万年青(dieffenbachia)、龙血树(dracaena)、蕨类植物(ferns)、栀子(gardenias)、天竺葵(geranium)、玉树(jade plant)、棕榈、喜林芋(philodendron)和鹅掌柴(schefflera)。
在一些实施方案中,植物是在温室中生长的植物。这种植物的非限制性实例包括:霍香(ageratum)、麒麟花(crown of thorns)、花叶万年青属(dieffenbachia)、山茱萸(dogwood)、龙血树(dracaena)、蕨类(ferns)、榕属类(ficus)、冬青(holly)、桔梗(lisianthus)、木兰(magnolia)、兰花、棕榈、矮牵牛花(petunia)、一品红(poinsettia)、鹅掌柴(schefflera)、向日葵、粗肋草属(aglaonema)、紫菀属(aster)、杜鹃花属(azaleas)、秋海棠属(begonias)、紫水晶属(browallia)、山茶花(camellias)、康乃馨、青葙属(celosia)、菊属(chrysanthemum)、鞘蕊花属(coleus)、大波斯菊(cosmos)、紫薇(crepemyrtle)、银叶菊(dusty miller)、复活节百合(easter lilies)、倒挂金钟属(fuchsia)、栀子属(gardenias)、非洲菊(gerbera)、蜡菊属(helichrysum)、木槿属(hibiscus foliage)、绣球花属(hydrangea)、凤仙花属(impatiens)、玉树(jade plant)、金盏花(marigold)、新几内亚属(new guinea)、凤仙花属(impatiens)、烟草属(nicotiana)、喜林芋(philodendron)、马齿苋属(portulaca)、丽格海棠(rieger begonias)、金鱼草(snapdragon)和百日草属(zinnias)。
在一些实施方案中,所述植物是草皮草。如本文所用,术语“草皮草”是指提供地面覆盖的栽培草,例如定期割草或刈草以保持一致高度的草皮或草坪。草属于禾本(Poaceae)科,其被细分为六个亚科,其中三个亚科包括常见的草皮草:冷季型草皮草的羊茅亚科(Festucoideae);以及暖季型草皮草的黍亞科(Panicoideae)和画眉草亚科(Eragrostoideae)。数量有限的种被广泛用作草皮草,其通常满足形成均匀的土壤覆盖和耐受刈草和交通的标准。通常,草皮草具有被压平的冠,便于刈草而不会切断生长点。在本文中,术语“草皮草”包括其中栽培一种或多种草种以形成相对均匀的土壤覆盖的区域,包括作为相同种的不同栽培品种的组合的共混物,或作为不同种和/或不同栽培品种的组合的混合物。
耐寒性
当非生物胁迫是低温胁迫时,单独施用大环四吡咯化合物或与添加剂(如油、表面活性剂和/或螯合剂)组合施用大环四吡咯化合物可以改善植物的耐寒性。也就是说,施用大环四吡咯化合物可以允许植物经受比在植物的最佳生长条件或天然生长条件下通常所经历的温度条件更冷的温度条件。各种类型的低温胁迫是可能的,例如意外的霜冻(例如当健康作物、果实、谷物、种子或叶子仍在植物上时的早秋霜冻,或春季植物生长已经开始后发生的晚春霜冻)、比平均生长季节更冷的季节、比自然冬季条件更冷的条件、最少的冬季雪盖层、积冰等。
应当注意,构成一种植物的低温胁迫条件的可能不是另一种植物的低温胁迫条件。参考USDA地域图,地域9的植物的低温胁迫条件实际上可能是地域8的植物的天然生长条件。同样地,一种类型的植物存活所需的雪盖层厚度对第二种类型的植物可能是不需要。因此,应当理解,根据所讨论的植物的类型,各种类型的低温胁迫都是可能的。
本文描述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以用于保护植物(包括木本植物、非木本植物和草皮草)免受霜冻损伤。霜冻可以是早期霜冻,例如在收获前、收获后和休眠前。霜冻可以是晚期霜冻,例如在出芽之后。低温损害也可以是由冬季温度引起的冻死,这可能带来活的枝或芽的损失,并导致植物死亡。通过本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合处理的植物可以是霜冻敏感性植物或低温敏感性植物,因为它们天然容易受到霜冻的、冰冻的或低温的经济上或美学上显著量的损害或损伤。
可以通过休眠开始的延迟来证明对低温胁迫的抗性增强。可以通过温度下降(例如低温胁迫的开始)来触发植物休眠。通过增加植物对低温胁迫的抗性,植物的休眠可以被延迟直到由温度的进一步下降而触发。
本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以定期(从春季打破休眠开始以2周或3周的间隔)使用和/或通过实施一种或多种处理(例如,秋季2次),以提供缩短或延迟某些植物休眠期的响应。
如本文所用,术语“减少休眠期”是指相对于对照物(例如未经处理的植物),具有减少的休眠期或延长的生长期的植物。
在一些实施方案中,收获步骤可以在最后一次施用本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合之后一周、一个月、两个月或更长时间进行,其中活性剂在中间时期仍然有效降低了低温胁迫对植物的影响。
在一些情况下,对低温胁迫的抗性包括对早期霜冻或晚期霜冻或冬季损害的抗性。在一些情况下,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以用于保护早期生长在温度波动期间(例如,在早春)免受寒冷。在一些情况下,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以用于保护植物在低温月份(例如,在冬季)免受寒冷。
在一些情况下,当树木具有完全健康和旺盛的叶子时,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在开始暴露于低温(例如,深秋)时或暴露于低温之前通过土壤浸透和/或叶面施用(例如,喷洒直至流下)来施用。在一些情况下,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在深秋和冬季期间通过土壤浸透和/或叶面施用(例如,喷洒直至流下)来施用。在一些情况下,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在深秋通过土壤浸透来施用,随后在冬季通过叶面施用(例如,喷洒直至流下)已达到最大的耐性。
在一些情况下,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以以1个月至6个月的间隔(例如,每2个月至3个月)施用1次至4次(例如2次至4次)。可以在春季和/或生长季节期间进行进一步处理,以改善对随后的低温胁迫条件的抗性。在一些情况下,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在11月、1月、2月和3月施用于某些类型的植物(例如,苹果树)而在11月和1月施用于其他类型的植物(例如桃树)。
耐热性
当非生物胁迫是高温胁迫时,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合的施用可以改善在生长季节期间对高温的耐受性。也就是说,施用本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以允许植物经受比在植物的最佳生长条件或天然生长条件下通常所经历的温度条件更高的温度条件。高温胁迫可以有各种原因,例如通常需要遮荫的生长条件的植物缺乏遮荫,或高于正常夏季温度。
应当注意,构成一种植物的高温胁迫条件的可能不是另一个植物的高温胁迫条件。
耐光氧化性
当非生物胁迫是光氧化胁迫时,施用本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在活性氧生成增加的期间改善对胁迫性光照条件的耐受性。也就是说,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合的施用允许植物经受比在植物的最佳生长条件或天然生长条件下通常所经历的更强的光暴露条件(例如,紫外照射条件)。光氧化胁迫可以有各种原因,例如强光条件或诱导自由基形成的某些类型的光照。
应当注意,构成一种植物的光氧化胁迫条件的可能不是另一种植物的光氧化胁迫条件。
耐荫性
遮荫胁迫或“弱光(LL)胁迫”可能是影响植物生长和质量的问题。当非生物胁迫是遮荫胁迫时,施用本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以改善植物的耐荫性。也就是说,施用本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以允许植物经受植物的遮荫条件,所述植物的最佳生长条件或天然生长条件通常需要部分日照或充分日照。各种类型的遮荫胁迫是可能的,例如长时间多云的天气、相邻植物或树的过度生长将阴影投射到植物上、或缺少阳光充足的种植位置。
遮荫可能是周期性的问题。例如,在一年的某些月份中,位于植物附近的结构可能会将阴影投射到植物上,从而导致遮荫胁迫。随着地球在一年中移动,该结构可能在另几个月内不再将阴影投射到植物上,然后在下一年周期中该情况可能重复。在这种情况下,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在遮荫胁迫期开始之前施用于植物,并且也可以在遮荫胁迫期间施用。可以防止或减少通常由于遮荫胁迫期而导致的对植物的损害。
对于许多类型的植物,遮荫条件不被认为是非生物胁迫条件,因为一些植物需要遮荫作为其最佳生长条件的一部分。还应注意,构成一个植物的遮荫胁迫条件可能不是另一植物的遮荫胁迫条件。
耐旱性
干旱可以定义为在足以耗尽土壤水分和伤害植物的一段时间内没有降雨或灌溉。当植物的水分流失超过植物根部吸收水分的能力和/或当植物的含水量降低到足以干扰正常植物过程时,就会产生干旱胁迫。干旱条件的影响的严重性可能因植物而变化,因为植物对水的需求可以随植物类型、植物年龄、根深度、土壤质量等而变化。
本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在干旱开始之前和/或在干旱期间施用于植物。施用本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以提高植物对干旱胁迫的抗性。与经受相同干旱胁迫的未经处理的植物相比,提高抗性可以包括维持或提高植物的质量。与经受相同干旱胁迫的未经处理的植物相比,提高抗性可以包括减少植物质量的退化。如果植物没有获得足够的降雨或灌溉,则所产生的干旱胁迫对生长的减慢可能比所有其它环境胁迫加在一起更多。
还应注意,构成一种植物的干旱胁迫条件可能不是另一种植物的干旱胁迫条件。
防止盐损害
盐可以天然存在于植物的生长环境中。盐度胁迫是指当植物在盐沼中或在其他盐分过高的条件下生长时,施加在植物上的渗透力。例如,在盐水体附近生长的植物可能暴露于空气中存在的盐或暴露于用于浇灌植物的水中存在的盐。在另一个实例中,在冬季期间施加到道路、人行道和车道表面用于改善驾驶条件的盐可能会转移和/或渗入到附近生长植物的土壤中。植物生长环境中这种增加的盐含量会导致盐度胁迫,从而损害植物。
将本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合施用到植物中可以提高植物对盐度胁迫的抗性,并且防止或减少如果不处理将导致的植物质量的劣化。该组合可以在盐度胁迫之前或期间施用。
还应注意,构成一种植物的盐度胁迫条件可能不是另一种植物的盐度胁迫条件。
耐移植冲击性
从一种生长环境移植到另一种生长环境(例如从花盆到花坛或花园)的植物,可能由于暴露于新的环境条件(如风、直射阳光或新的土壤条件)而受到移植冲击胁迫。将本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合施用于植物的根部可以减少由移植引起的对植物的影响。在一些情况下,可以通过应用本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合减少或预防对移植植物的植物生长和/或发育的障碍。
应当注意,构成一种植物的移植冲击胁迫条件可能不是另一种植物的移植冲击胁迫条件。
对过量水分的耐性或耐涝性
尽管植物需要一定量的水以用于健康的植物生长和发育,但是植物暴露于过量的水(“水分胁迫”)则会损害植物。在过量水分条件开始之前将本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合施用于植物可以增加植物对水分胁迫的抗性。本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合可以在水分胁迫期间施用,然而,本文所述的大环四吡咯化合物、组合物或组合的可能由于过量水分发生稀释。因此,在过量水分时期之前的预处理可以更有效。
应当注意,构成一个植物的过度水分胁迫条件可能不是另一个植物的过度水分胁迫条件。
组合物的协同效应
在一些实施方式中,所述组合可以表现出协同反应,以增加对植物中一种或多种非生物胁迫的抗性或耐受性。应当理解,本文中所用的“协同”或“协同的”是指组合(或组合物)中的两种或多种组分的相互作用,使得它们的组合效应大于它们的个体效应的总和,在本说明书的上下文中,这可以包括大环四吡咯试剂、油和螯合剂中的两种或多种的作用。在一些情况下,大环四吡咯试剂和油可以以协同有效的量存在。在一些情况下,大环四吡咯试剂和螯合剂可以以协同有效的量存在。在一些情况下,油和螯合剂可以以协同有效的量存在。在一些情况下,大环四吡咯试剂、油和螯合剂可以以协同有效的量存在。
在一些情况下,可以用S.R.Colby,“Calculating synergistic andantagonistic responses of herbicide combinations”,Weeds 15,20-22(1967)中提出的方法来评估协同作用。预期功效(E)可以表示为:E=X+Y(100-X)/100,其中X是组合中第一组分的功效,以未处理的对照的%表示,而Y是组合中第二组分的功效,以未处理的对照的%表示。当观察到的功效高于预期功效时,这两种组分被认为以协同有效量存在。
实施例和实验
实施例1:处理对盐胁迫下的拟南芥幼苗初生根长度的影响。
实验通过测量初生根的长度来评估金属化的二氢卟吩化合物对经盐胁迫处理的幼苗的影响。将叶绿酸铜(CuChln)补充到使拟南芥(Arabidopsis thaliana)种子发芽的培养基中。结果显示,这些植物比未处理的植物更耐盐。
拟南芥种子在50%漂白剂中振荡来表面灭菌12分钟,并用无菌水洗涤五次。将种子接种在含有0.8%琼脂和1%蔗糖的半强度Murashige和Skoog(MS)培养基上,用KOH缓冲至pH 5.7。为了暴露于盐,将培养基调整为含有100mM NaCl。为了暴露于CuChln,将CuChln在水中制备为1mM的储备液,并以10μM CuChln的最终浓度加入培养基中。种子在黑暗中于4℃分层放置2天。拟南芥幼苗于24±1℃的温度,在LED灯(PAR 24μmol m-2s-1)和16小时:8小时的光照:黑暗的光周期下垂直生长。
通过测定初生根长度的减少来测量对盐胁迫的耐受性。通过用Image JTM软件分析图片来测量发芽10天后的根长度(mm)。结果总结于下表1中。
表1:叶绿酸铜对在盐胁迫下经处理的拟南芥幼苗的初生根长度的影响。
结果表示为代表18至20个幼苗/条件的平均值±标准误差。
结果显示补充了CuChln的植物比未处理的植物更耐盐。结果还显示,在对照实验中,施用10μM CuChln不影响根长度。
实施例2:处理对盐胁迫引发的植物衰老的影响。
在本实施例中,通过反映叶片逐渐衰老症状的视觉评级量表,测量金属化的二氢卟吩化合物和各种添加剂对由盐胁迫引发的拟南芥衰老的影响。具体地,该实施例显示出CuChln提供了针对由盐胁迫引发的衰老的保护。该实施例还显示出油(特别是聚α-烯烃(PAO))、螯合剂或其组合的加入进一步增强了保护。
在长期暴露于盐胁迫之后,幼苗地上部(shoot)中Na+的积累导致细胞毒性作用,由此,因叶片的衰老和死亡的最明显的症状是变黄,随后是叶片干燥。可以通过反映叶片逐渐衰老症状的视觉评分来评估叶片衰老。
表2A:反映叶片逐渐衰老症状的视觉评分。
得分 | 观察报告 |
9 | 生长正常,无叶片症状 |
7 | 生长接近正常,有一些叶片和叶梢变黄和卷曲 |
4 | 生长严重受抑制,叶片明显变黄并且大多数叶片卷曲 |
2 | 生长完全停止,大部分叶片干燥并且一些植物死亡 |
在本实验中,种子被直接播种在土壤上,给盆浇水并放置于16小时:8小时的光照:黑暗的光周期的LED灯(PAR 24μmol m-2s-1)下,于25℃±3℃的温度和65%的相对湿度中。14天后,用处理液灌溉幼苗,24小时后用100mM NaCl,4天后用200mM NaCl,并且最终每4天用300mM NaCl浇灌至持水量,直至实验结束。制剂和结果列于下表2B中。表中所有的百分比值均以总组合物的重量%表示。
表2B:叶绿酸铜和其它添加剂对盐胁迫引发的植物衰老的影响。
*值为相对于未处理对照的衰老改善%
**PAO7395:(93重量%PAO 4cSt+7重量%表面活性剂(乙氧基化烷基醇和烷基单甘油酯的混合物))
这些结果显示,CuChln提供了针对盐胁迫引发的植物衰老的保护。向CuChln中添加油或螯合剂可以使对植物的保护提高20%至70%,而油和螯合剂单独使用并不能显著提高对盐胁迫引发的衰老的抗性。结果还显示出当施用CuChln和油的组合时的协同效应,以及当施用CuChln和螯合剂的组合时的协同效应。
实施例3:处理对盐胁迫下白三叶(Trifolium repens)幼苗初生根长度的影响。
在本实施例中,评价了卟啉化合物对幼苗的盐胁迫敏感性的影响。具体地,评价了在盐胁迫条件下原卟啉-IX(PP9)、锌原卟啉-IX(ZnPP9)和四苯基卟啉锌(ZnTPP)处理的白三叶幼苗的影响。
将白三叶种子在50%漂白剂中振荡表面灭菌12分钟,并用无菌水洗涤五次。种子在10ml水中于室温,在LED灯(PAR 24μmol m-2/s-1)和16小时:8小时的光照:黑暗的光周期下发芽。
为了暴露于盐,将水调节至含有100mM NaCl。卟啉化合物在二甲基亚砜(DMSO)中制备成0.1%的储备液。添加来自储备液的卟啉化合物至0.01体积%的最终浓度,用于测定。
通过用Image JTM软件分析图片确定初生根长度的减少来测量对盐胁迫的耐受性。测量在发芽后7天的根长度(mm)。下表3总结了结果。
表3:各种氨基-大环化合物对盐胁迫下白三叶幼苗的初生根长度的影响。
结果表示为平均值±标准误差。
这些结果显示所有测试的卟啉化合物均降低了白三叶幼苗对盐胁迫的敏感性。
实施例4:处理对草地早熟禾(Kentucky Bluegrass)针对盐胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了金属化的二氢卟吩化合物和制剂对草地早熟禾栽培品种“Granit”的影响。实验在温室中进行。进行该测试来确定化合物对草针对盐胁迫的耐受性的活性。
在实验中,将草地早熟禾栽培品种“Granit”种在装有专用土壤混合物(SunshineLC 1,Sun Gro Horticulture Canada Ltd.)的6英寸塑料盆中。将盆放置于雾室中7天至10天以促进植物均匀的出苗和生长,然后在温室条件下保持4周至6周。将植物定期修剪至4cm至5cm的高度,并定期用肥水灌溉。用下表中所示的不同制剂对草地早熟禾植物实施一次叶面处理,使用手持喷洒瓶以提供均匀覆盖。在初次喷洒24小时后,通过将盆浸没至170mM氯化钠溶液中直至饱和,使植物暴露于盐度胁迫,然后将盆转移到温室工作台上。在实验期间,每隔5天至7天进行加盐。在此期间,评估草地早熟禾对盐胁迫的耐受性并且每周对草皮质量评级。根据来自全美草坪评价体系(NTEP)的指导,使用1至9的改良量表(基于植物活力、颜色、衰老、密度、叶片质地和大小以及均匀度)对草皮质量(TQ)进行视觉评级。评级为1的植物完全干枯且具有完全死亡的草皮冠层。评级为9代表具有深绿色、饱满的叶片和浓密的草皮冠层的健康植物。评级为6被认为是最低可接受的TQS(草皮质量评分)。未处理的胁迫对照(盐对照)分别用作每个评级的参照。本实验采用完全随机设计,每种处理重复四次。结果总结在下表4A、4B和4C中。
表4A:叶绿酸铜和各种油对草地早熟禾针对盐胁迫的耐受性的影响。
草皮质量评分,评级量表1-9(初始分数:8)。
*表面活性剂:(60%的乙氧基化烷基醇和40%的烷基单甘油酯的混合物)。
结果表明,各种植物油和各种矿物油都可以用于提高叶绿酸铜的影响并且增强草地早熟禾针对盐胁迫的耐受性。
表4B:处理对草地早熟禾针对盐胁迫的耐受性的影响。草皮质量评分,评级1-9(初始分数:8)。
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
结果表明,各种金属化的叶绿酸可以与矿物油一起使用,以增强草地早熟禾针对盐胁迫的耐受性。
表4C:处理对草地早熟禾针对盐胁迫的耐受性的影响。草皮质量评分,评级1-9(初始分数:8)。
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物);表面活性剂80**=乙氧基化脱水山梨醇三油酸酯;表面活性剂3273***=60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物。
结果表明,各种金属化的叶绿酸可以与矿物油一起使用,以增强草地早熟禾针对盐胁迫的耐受性。
实施例5:处理对草莓植物(Fragaria x ananassa)针对盐胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对草莓植物(Fragaria xananassa)(栽培品种,Bragg Pink)的影响。实验在温室中进行。测试旨在测定化合物对草莓植物针对盐胁迫的耐受性的活性。
在实验中,草莓植物的幼苗在装有专用土壤混合物(Sunshine LC1,Sun GroHorticulture Canada Ltd.)的5英寸塑料盆中生长,并且定期用肥水灌溉。用不同制剂对4叶期至5叶期的草莓植物实施4次叶面处理,使用手持喷洒瓶来提供均匀覆盖。每7天喷洒一次植物。在初次喷洒24小时后,通过用25mM氯化钠溶液浇灌植物,使植物暴露于盐度胁迫。盐度水平逐渐增加到50mM NaCl,并且每隔5天至7天施用盐溶液。本实验采用完全随机设计,每个处理重复四次。结果总结于下表5中。
表5:处理对草莓植物(Fragaria x ananassa)针对盐胁迫的耐受性的影响。
*PAO=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(30%乙氧基化烷基醇、20%烷基单甘油酯和50%乙氧基化脱水山梨醇油酸酯的混合物)。
对叶面实施处理使得植物生物量积累更高并且提高了草莓植物针对盐胁迫的耐受性。
实施例6:处理对光氧化条件下的色素含量的影响。
在本实施例中,评估了二氢卟吩化合物对光氧化条件下生长的幼苗中色素含量的影响。具体地,评估了CuChln对光氧化条件下生长的拟南芥幼苗中色素含量的影响。为此,对色素进行提取和量化。结果表明补充了CuChln的植物在这种类型的胁迫下保留了更多的色素。
拟南芥暴露于光氧化条件导致色素含量逐渐降低。在本实验中,为了测定CuChln对色素含量的影响,幼苗如实施例1中那样生长,除了在发芽一周后将植物转移到LED灯(PAR 142μmol m-2s-1)下。然后收获14日龄幼苗并称重。将组织在液氮中研磨。于4℃的温度在100%甲醇中过夜来提取色素。用分光光度法测定色素浓度,并使用本领域技术人员已知的以下公式计算(即Sumanta et al.,2014):Ch-a=16.72A665.2-9.16A652.(对于叶绿素a);Ch-b=34.09A652.-15.28A665(对于叶绿素b);C x+c=(1000A470-1.63Ca-104.96Cb)/221(对于类胡萝卜素)以及A530-(1/4×A657)(对于花青素)(A=吸光度)。结果总结于下表6中。数据表示为平均值±标准误差。
表6:叶绿酸铜对光氧化条件下的色素含量的影响。
色素 | 未处理的对照 | 20μM CuChln |
Ch-a(μg/ml) | 1.65±0.7 | 6.62±0.8 |
Ch-b(μg/ml) | 1.62±0.31 | 2.28±0.14 |
Cx+c(类胡萝卜素)(μg/ml) | 0.21±0.35 | 1.56±0.25 |
花青素(μg/ml) | 0.06±0.01 | 0.08±0.05 |
这些结果显示,经CuChln处理的植物在光氧化条件下比未处理的植物保留更多的色素。
实施例7:处理对草地早熟禾针对干旱胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对草地早熟禾植物(栽培品种,“Wildhorse”)的影响。测试旨在测定化合物对草地早熟禾植物(栽培品种,“Wildhorse”)对于干旱胁迫的耐受性的活性。
在实验中,从田间地块收集成熟的草地早熟禾(栽培品种,“Wildhorse”)土坨(plugs)(直径10cm,深5cm),并移植到装有USGA规格的砂子(含10%的泥炭)的盆(直径15cm,深14cm,底部有8个孔)中。将一片塑料筛网放在盆底以防止砂子滤出。该草在白天温度为22℃,夜间温度为18℃,相对湿度为70%,LED灯(PAR 400μmol m-2s-1)并且光照周期为12小时的生长室中生长。在移植时以2g m-2(0.4lbs N/1000ft2)(含有微量营养素N-P-K的28-8-18完全肥料)施氮,然后每两周以1g m-2施氮,直到试验结束。将草修剪至7cm,并且每周灌溉两次达到田间持水量。
第一次施用后最初24小时,草经受两种土壤湿度水平:不干旱(无胁迫对照,充分浇水-WW)和不充分灌溉(干旱)。通过每隔一天称量盆的重量,根据蒸散(ET)损失来确定灌溉水量,并且提供灌溉以补偿50%至25%的ET损失。实验在胁迫诱导后28天完成。在第0天、4天(3天胁迫)、7天、14天、21天和28天收集叶片样品,用液氮冷冻并储存于-80℃用于代谢物含量分析。生理测量与常规采样的同时进行。
实验采用完全随机区组设计,重复四次。另外还包括两种用于取样的施用。
数据用方差分析进行分析,并且采用费舍尔的保护最小显著差数法(LSD)检验以0.05概率水平(SAS Institute,2010)进行平均值的分离,结果总结在下表7A至7H中。
表7A:移植后四周,对叶片实施如下处理:
*PAO=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(乙氧基化烷基醇和烷基单甘油酯的混合物)
表7B:处理对草地早熟禾针对干旱胁迫的反应的影响。充分浇水(WW)和干旱胁迫条件。
表7C:草地早熟禾叶片的相对含水量(RWC)。植物在充分浇水(WW)和干旱胁迫条件下对处理的反应。
表7D:草地早熟禾叶片的电解质渗出率(EL)。植物在充分浇水(WW)和干旱胁迫条件下对处理的反应。
表7E:草地早熟禾叶片的叶绿素(Chl)含量。植物在充分浇水(WW)和干旱胁迫条件下对处理的反应。
表7F:草地早熟禾叶片的类胡萝卜素含量。植物在充分浇水(WW)和干旱胁迫条件下对处理的反应。
表7G:在充分浇水(WW)和干旱胁迫条件下草地早熟禾的叶片过氧化氢酶活性对处理的反应。
表7H:草地早熟禾叶片的脯氨酸含量。植物在充分浇水(WW)和干旱胁迫条件下对处理的反应。
实施例8:处理对草莓植物(Fragaria x ananassa)针对干旱胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了叶绿酸化合物和制剂对草莓植物(Fragaria x ananassa)栽培品种Basket Pink的影响。实验在温室中进行。测试旨在测定化合物对草莓植物针对盐胁迫的耐受性的活性。
在实验中,草莓植物的幼苗在装有专用土壤混合物(Sunshine LC1,Sun GroHorticulture Canada Ltd.)的5英寸塑料盆中生长,并定期用肥水灌溉。用不同的Suncor制剂对4叶期至5叶期的草莓植物实施4次叶面处理,使用手持喷洒瓶来提供均匀覆盖。每7天喷洒一次植物。在第一次叶面处理后和实验期间,将草莓植物暴露于水分降低的状况(干旱胁迫)直至萎蔫点(20%至30%土壤持水量(SMC)),并且浇水至50%SMC。在密集结果期,给植物浇水至50%SMC至60%SMC。
本实验采用完全随机设计,每种处理重复五次。
表9B:处理对番茄植物对长期干旱胁迫的耐受性的影响(实施:土壤浸透20ml/细胞-3次,间隔为7天)。
*PAO488=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(30%乙氧基化烷基醇、20%烷基单甘油酯和50%乙氧基化脱水山梨醇油酸酯的混合物)
表9C:处理对番茄植物针对长期干旱胁迫的耐受性的影响(实施:叶面喷洒-3次,间隔为7天)。
*PAO 488=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(30%乙氧基化烷基醇、20%烷基单甘油酯和50%乙氧基化脱水山梨醇油酸酯的混合物)
实施例10:多次对叶面实施处理对番茄植物针对长期干旱胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对番茄植物栽培品种Tumbling Tom的影响。该实验在温室中进行。设计测试以确定化合物对番茄植物针对长期干旱胁迫的耐受性的活性。
番茄植物在6英寸盆中生长至5叶期至6叶期,将植物分成4组并且分别处理1次、2次、3次和四次,间隔为7天。在第一次叶片处理后,番茄植物经受长期干旱胁迫。在第一次处理的6周后,收获植物,并记录植物干重。
表10:多次对叶面实施处理对番茄植物针对长期干旱胁迫的耐受性的影响。
*PAO7395=93%PAO 4cst+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单酸甘油酯的混合物)。
结果表明,对叶面施用2次至4次CuChln 0.11%+PAO 7395*0.5%制剂,增加了番茄植物的生物量。
实施例11:处理对草地早熟禾对高温胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对草地早熟禾栽培品种“Granit”的影响。实验在温室中进行。设计测试以测定化合物对草对高温胁迫的耐受性的活性。
在实验中,将草地早熟禾栽培品种“Granit”种在装有专用土壤混合物(SunshineLC 1,Sun Gro Horticulture Canada Ltd.)的6英寸塑料盆中。将盆放置于雾室中7天至10天以促进均匀的植物出苗和植物生长,然后保持在温室中4周至6周。将植物定期修剪至4cm至5cm的高度,并定期用肥水灌溉。用不同Suncor制剂对草地早熟禾植物实施一次叶面处理,使用手持喷洒瓶来提供均匀覆盖。在叶面喷洒24小时后,将植物置于生长室中并暴露于高温胁迫。将生长室设定在28℃(16小时白天/8小时夜晚的光周期,PAR为350μmol·m-2s-1)和75%湿度。每天白天将植物逐渐暴露于36℃的高温胁迫8小时。定期给草地早熟禾植物浇水以避免水分亏缺。通过每周对草皮质量进行评级来评估草地早熟禾的耐热性。使用改良的NTEP草坪评价指南,根据植物活力、颜色、衰老、密度、叶片大小对草皮质量(TQ)进行视觉评级,1至9级。草皮评级为1的植物完全干枯且具有完全死亡的草皮冠层。评级为9代表具有深绿色、饱满的叶片和健康的草皮冠层的健康植物。评级为6被认为是最低可接受的TQ。未处理的高温胁迫对照(高温对照)分别用作每个等级的参照。本实验采用完全随机设计,每个处理重复四次。
表11A:处理对草地早熟禾针对高温胁迫的耐受性的影响。草皮质量评分,评级1-9(初始分数:8)。
N65DW*=石蜡油
表面活性剂**=30%乙氧基化烷基醇,20%烷基单甘油酯和50%乙氧基化脱水山梨醇油酸酯的混合物
表11B:处理对草地早熟禾针对高温胁迫的耐受性的影响。草皮质量评分,评级1-9(初始分数:8)。
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
表11C:处理对草地早熟禾针对高温胁迫的耐受性的影响。草皮质量评分,评级1-9(初始分数:8)。
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物);表面活性剂80**=乙氧基化脱水山梨醇三油酸酯;表面活性剂3273***=60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物。
实施例12:处理对大豆种子的出苗、生长、产量和质量的影响。
在沙质土壤上进行田间试验。与未处理的对照相比,某些处理会使得出苗时的苗数量(stand counts)更高和生长期中的植物生长更好。所有使苗更好的处理还会得到更高的产量、种子蛋白质含量和更大的种子尺寸。在种植前以种子处理、在种植时于犁沟内和以叶面喷洒对种子实施处理。
于5月23日使用John Deere 7000(4行免耕玉米播种机)种植大豆。种植地块(plots)至少长6m,在重复试验的地块之间有3m的通道,并且在收获前将地块末端修剪至6m长。于5月30日施撒肥料。
在种植之前,将接受种上处理的种子铺在种子仓库地板上的塑料布上,使用喷洒瓶进行适当喷雾处理,翻转并再次喷雾,然后让种子干燥并随后插入播种机的种子料斗中之。喷洒种子直到处理液开始流下,然后翻转并再次喷洒。总比率为约30ml/kg种子。
在犁沟内处理实施期间,液体正好输送到种植的种子上。每个种植机单元被校准,以使它向每排种子的每米输送10mL的犁沟内处理液体。
大豆于9月24日使用Wintersteiger Elite联合收割机收获。所述处理如下表12中所示。
表12A:处理列表
A:CuChln
B:*PAO=93%PAO 4cst+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
M:MgChln
从出苗开始,各处理之间就有明显的差异。处理对出苗时苗数量的影响(植物于种植后11天计数,于出苗后14天再次计数)显示于下表12B和12C中。
表12B:种植后11天的植物出苗。大豆苗数量。
Trt | 种子处理 | 犁沟内处理 | 出苗% | 苗株数/m2 |
1 | 水 | 水 | 100 | 27.7 |
2 | A 0.11%+B 2% | A 0.11%+B 2% | 151.6 | 41.8 |
3 | A 0.11%+B 2% | A 0.11%+B 2% | 158.2 | 43.7 |
4 | A 0.11%+B 2% | A 0.11%+B 2% | 156.4 | 43.2 |
5 | A 0.22% | A 0.11%+B 2% | 115.9 | 32 |
6 | M 0.11%+B 2% | M 0.11%+B 2% | 167.9 | 46.3 |
7 | M 0.22% | M 0.11%+B 2% | 154 | 42.5 |
表12C:植物出苗后14天的大豆苗数量。
在V3植物生长阶段(4个节有叶片),从1行中挖出5个连续的代表性植物,并且评估每株植物的根的根瘤发育。每株植物的根瘤数和根瘤干重示出于表12D。
表12D:处理对每株植物在V3植物阶段的根瘤数和干重(mg)的影响。
在V3阶段(3片有三小叶的叶片),处理3、4、6和7中的根瘤明显多于对照。这表明这四种处理具有良好的苗(stands)和良好的活力,比所有其他处理支持更多的根瘤。没有一种经处理的根瘤干重与对照的根瘤干重显著不同。最大的重量来自处理3、4和7。
R1(开始开花)和R4(长满豆荚)的株高、颜色等级和SPAD读数
表12E:处理对R1植物阶段的大豆株高(cm)和视觉颜色评分以及R1和R4植物阶段的SPAD读数(植物绿度)的影响。
在大豆生长的R1开花阶段,经处理方法处理的植物显示出改善的出苗和早期生长,且都明显高于对照地块的植物。
在R1,所有处理均导致颜色评分高于对照地块的植物。
同样在R1,处理3和处理4的SPAD读数显著高于对照。SPAD读数结果表明处理2、3、4、6和7具有较高的叶绿素含量。
在R4发展阶段(长满豆英),没有SPAD读数与对照不同。
收获大豆:种子产量和水分
表12F.处理对产量和种子水分的影响
对照和处理之间的产量差异显著。产量是根据13%的水分调整计算的。
处理对大豆种子的蛋白质和油含量以及100粒种子重量的影响示出于表12G。
表12G:处理对大豆种子的蛋白质和油含量*以及100粒种子重量的影响。
*将大豆的蛋白质和油含量调整至相同的水分,100粒种子重量表示种子的大小。
高产量地块的蛋白质含量均高于对照。所有高产量处理的油含量都略低。如果蛋白质含量较高,大豆油含量低是正常的。100粒种子重量值表明,高产量地块的种子始终大于来自对照的大豆植物的种子。
总结
处理改善了每个地块的初始植物苗。所有6次重复的效果都非常一致。与在R1的未处理的对照相比,这些处理还使得植株更高。它们还具有更高的产量、更高的蛋白质含量和收获时更大的种子。
实施例13:处理对苹果幼苗针对长期干旱胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了叶绿酸化合物和制剂对苹果植物(Malus pumila)栽培品种Northern spy的影响。实验在温室中进行。设计测试以确定化合物对苹果幼苗针对干旱胁迫的耐受性的效力。
在实验中,从苹果种子(栽培品种,Northern spy)中繁殖出苹果幼苗,移植到装有专用土壤混合物(Sunshine LC 1,Sun Gro Horticulture Canada Ltd.)的6英寸塑料盆中,并定期用肥水灌溉。
用下表所示不同制剂对40cm至43cm高的苹果幼苗实施叶面处理,使用手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)并提供彻底均匀的覆盖。喷洒植物两次,间隔为7天。
在第一次叶面处理之后和实验期间,苹果幼苗暴露于水分降低的状况(长期干旱胁迫),直到萎蔫点(20%至30%土壤持水量SMC),然后重新浇水至50%SMC。限水状况持续到实验结束。
该实验采用多因素实验设计。实验以完全随机的设计进行,每个处理重复6次。
表13:处理对苹果(栽培品种,Northern spy)幼苗生长的影响。两次叶面施用。
这些结果表明,CuChln和PAO 7395的叶面处理提高了苹果植物的枝条生长,并增强了苹果幼苗针对长期干旱胁迫的耐受性。
实施例14:叶面处理对葡萄藤幼苗对长期干旱胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了叶绿酸化合物和制剂对葡萄藤(Vitis vinifera)栽培品种雷司令(Riesling)的影响。实验在温室中进行。设计测试以确定化合物对葡萄藤幼苗针对干旱胁迫的耐受性的活性。
在实验中,由根茎材料繁殖出Pixie葡萄幼苗并在温室中生长。将植物移植到装有专用土壤混合物(Sunshine LC 1,Sun Gro Horticulture Canada Ltd.)的1加仑塑料盆中,并定期用肥水灌溉。将幼苗修剪成3个枝以提供均匀性。
当在每个枝上形成5片至8片叶子时,用叶绿酸制剂处理葡萄藤幼苗3次,间隔为7天。用下表所示不同制剂对葡萄藤幼苗实施叶面处理,使用手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)并提供彻底均匀的覆盖。
在第一次叶面处理之后,植物暴露于长期干旱胁迫(限制水分直到萎蔫点(20%至25%土壤持水量SMC)),并在该点处重新浇水至50%SMC。限水状况持续到实验结束。在最后一次处理后3个月收获葡萄藤植物。
实验以完全随机的设计进行,每个处理重复6次。
表14A:处理对葡萄藤生长的影响。植物生物量(鲜重)。
表14B:处理对葡萄藤生长的影响。植物生物量(干重)。
表14C:处理对葡萄藤产量的影响。
结果表明,与干旱对照植物相比,处理促进了葡萄藤植物的生长。实施处理得到更多的枝条、叶片生物量(鲜重和干重)和葡萄产量,并且提高了植物对长期干旱胁迫的耐受性。
实施例15:叶面处理对葡萄藤针对盐度胁迫的耐受性的影响。
在本实施例中,测试了叶绿酸化合物和制剂对葡萄藤Pixie葡萄(Vitisvinifera)栽培品种品丽珠(Cabernet Franc)的影响。实验在温室中进行。设计测试以确定化合物对葡萄藤幼苗针对盐度胁迫的耐受性的活性。
在实验中,自温室中由根茎材料繁殖出葡萄幼苗。将植物种植在装有专用土壤混合物(Sunshine LC 1,Sun Gro Horticulture Canada Ltd.)的1加仑的塑料盆中,并定期用肥水灌溉。将所有的植物都修剪成3枝。当在每个枝上形成5片至6片叶子时,用CuChln制剂处理葡萄藤植物3次,间隔为7天。使用手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)将下表中的制剂以叶面喷洒实施,并且提供彻底均匀的植物覆盖。
在第一次处理后,通过用50mM(2次)至100mM(1次)的NaCl溶液浇灌,随后用50mMNaCl定期加盐保持,使植物暴露于逐步增加的盐胁迫下。
表15A:CuChln处理对葡萄藤针对盐胁迫的耐受性的影响。葡萄藤生物量(鲜重)。
*PAO7395:(93重量%的PAO 4cSt+7重量%的表面活性剂(乙氧基化烷基醇和烷基单甘油酯的混合物))
表15B:CuChln处理对葡萄藤针对盐胁迫的耐受性的影响。葡萄藤生物量(干重)。
结果表明,基于CuChln的叶面处理能增强植物活力并且缓解盐度胁迫。最佳制剂是CuChln和MgChln与PAO 7395的混合物。在CuChln中添加0.1%的Ca2EDTA能增强植物活力并且使得植物生物量的增加。d施例16:大豆种子处理对在低温胁迫条件下的大豆植物出苗的影响。
在本实施例中,测试了叶绿酸化合物和制剂对大豆的影响。实验在生长室(Conviron,Canada)中以受控条件进行。设计测试以确定化合物对在低温胁迫下的大豆植物出苗的活性。
在本实验中,对大豆种子栽培品种Pioneer P06T28R进行了以下所列的处理,并且将20粒种子/处理播种在装有潮湿的专用土壤混合物(Sunshine LC 1,Sun GroHorticulture Canada Ltd.)的塑料单元格(cell)中2cm的深度处。将单元格置于光周期为16小时光照/8小时黑暗,温度为15℃和相对湿度为65%的生长室中。每天早晨和晚上(处理后天数(DAT))评估植物的出苗(子叶暴露),并记录出苗的数量。种子处理:将100克种子放入塑料袋中,将2ml处理溶液加入种子中,将种子摇动1分钟,然后风干。制剂和结果列于下表16A和表16B中。
表16A:大豆种子处理对在低温胁迫条件下的植物出苗的影响。
*PAO:(93重量%的PAO 4cSt+7重量%的表面活性剂(乙氧基化烷基醇和烷基单甘油酯的混合物))
表16B:大豆种子处理对在低温胁迫条件下的植物出苗的影响。
这些结果表明,叶绿酸制剂刺激大豆种子发芽,并导致大豆幼苗在低温胁迫条件下更早出现。油(PAO)的添加促进种子更早发芽和植物出苗。
实施例17:处理对草莓植物(Fragaria x ananassa)针对盐胁迫的耐受性的影响
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对草莓植物(Fragaria xananassa)栽培品种Temptation(Ball Seeds,USA)的影响。实验在温室中进行。设计该测试以确定化合物对草莓植物针对盐胁迫的耐受性活性。
在该实验中,草莓植株的幼苗在装有专用土壤混合物(Sunshine LC 1,Sun GroHorticulture Canada Ltd.)的5英寸塑料盆中生长,并定期用肥水灌溉。用不同的Suncor制剂对4叶期至5叶期的草莓植物实施4次叶面处理,使用手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)来提供均匀覆盖。每7天喷洒植物一次。初次喷洒后24小时,用25mM氯化钠溶液以5天至7天的时间间隔浇灌植物,使植物暴露于盐度胁迫下。实验采用完全随机的设计,每种处理重复6次。结果总结于下表17中。
表17:处理对草莓植物(Fragaria x ananassa)针对盐胁迫的耐受性的影响。
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%Atlox 3273(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物);Atlox 3273**=60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物。
结果表明,各种金属化叶绿酸可以与矿物油和螯合物一起使用,以提高草莓植物针对盐胁迫的耐受性。在叶绿酸中添加PAO 7395和螯合物增强了植物针对盐胁迫的耐受性。
实施例18:处理对草莓植物(Fragaria x ananassa)针对干旱胁迫的耐受性的影响
在本实施例中,测试了叶绿酸化合物和制剂对草莓植物(Fragaria x ananassa)栽培品种Temptation(Ball Seeds,USA)的影响。实验在温室中进行。设计测试以确定化合物对草莓植物针对干旱胁迫的耐受性的活性。
在实验中,草莓植株的幼苗在装有专用土壤混合物Sunshine LC 1,Sun GroHorticulture Canada Ltd.)的5英寸塑料盆中生长,并定期用肥水灌溉。用不同的Suncor制剂对4叶期至5叶期的草莓植物实施2次叶面处理,使用手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)来提供均匀覆盖。间隔7天喷洒植物。在第一次叶面处理之后和实验期间,草莓植物暴露于干旱胁迫(减少水分的状况)直到萎蔫点(20%至30%土壤持水量SMC),然后重新浇灌至50%SMC。实验采用完全随机的设计,每种处理重复6次。在最后一次叶面喷洒三周后,收获草莓植物并记录植物生物量。结果总结于下表18中。
表18:处理对草莓植物(Fragaria x ananassa)针对干旱胁迫的耐受性的影响
实施例19:处理对番茄植株针对高温胁迫的耐受性的影响
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对番茄栽培品种“Tiny Tim”(Stokes Seeds,Ontario,Canada)的影响。在温室和生长室中进行了几个实验。设计测试以确定化合物对番茄植物针对高温胁迫的耐受性的活性。
在实验中,在22℃至25℃且光周期分别为8小时黑暗/16小时光照的温室中,番茄移植物在装有专用土壤混合物的6英寸塑料盆中生长至5叶期至6叶期。处理前,将植物浇水至100%土壤持水量(soil mix capacity,SMC)。用不同制剂对番茄植物实施2次叶面处理,使用手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)来提供均匀覆盖(直至流下)。
用化合物处理植物两次,间隔为7天。第一次叶面喷洒的24小时后,将植物置于生长室中,并暴露于温度胁迫(高温胁迫)10天。在第二次处理之前,将番茄植物于25℃保持两天,并浇水至100%SMC。在第二次叶面喷洒后,将植物第二次置于生长室中,并再暴露于温度胁迫(高温胁迫)10天。定期给番茄植物浇水以避免水分亏缺。
将生长室设置为16小时光照/8小时黑暗的光周期,在光照周期期间照度为300μmol·m-2S-1和相对湿度为70%。将生长室中的温度范围设置为黑暗期间25℃。在白天(光照)期间,植物暴露于温度胁迫,温度在4小时内从25℃逐渐升高到38℃,然后暴露于高温胁迫(38℃,8小时),并且随后温度在4小时内从38℃逐渐降低到25℃。
将植物从生长室移至温室,并在收获前在温室中保持4天。第一次处理完27天后,收获植物并且记录生物量。未处理的植物-高温胁迫对照分别用作每次测定的参考。实验采用完全随机的设计,每种处理重复6次。实验结果总结在下表19A、19B和19C中。
表19A:通过枝条鲜重测定处理对番茄针对高温胁迫的耐受性的影响
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
表19B:通过枝条干重测定处理对番茄针对高温胁迫的耐受性的影响
表19C:通过根干重测定处理对番茄针对高温胁迫的耐受性的影响
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)
叶绿酸铜制剂与PAO 7395(0.15%CuChln+0.5%PAO 7395)和螯合物(0.15%CuChln+0.5%PAO+0.05%Ca2EDTA)的叶面施用显著增加植物生物量新鲜物质和干物质(叶片、枝条、根)的积累以及对高温胁迫的耐受性。
实施例20:处理对植物针对干旱胁迫的耐受性的影响
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对番茄栽培品种“Tiny Tim”(Stokes Seeds,Ontario,Canada)的影响。实验在生长室中进行。设计该测试以确定化合物在可控条件下对番茄植物针对干旱胁迫的耐受性的活性。
在实验中,在22℃至25℃并且光周期分别为8小时黑暗/16小时光照的温室中,番茄移植物在装有专用土壤混合物(Sunshine LC 1,Sun Gro Horticulture Canada Ltd.)的6英寸塑料盆中生长至4叶期至5叶期。处理前,将植物浇水至100%SMC。用化合物处理植物两次,间隔为7天。使用手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)来提供均匀覆盖(叶面喷洒直至流下)。第一次叶面喷洒的20小时后,将植物置于生长室中10天并暴露于干旱胁迫。将生长室设置为25℃,16小时光照/8小时黑暗的光周期,光照周期期间照度为300μmol·m-2S-1,以及相对湿度为70%。在萎蔫点(20%SMC至30%SMC)给番茄植物浇水至50%SMC。在第二次处理之前,给番茄植物浇水至100%的田间持水量。在第二次叶面喷洒后,将植物放入生长室,再次暴露于干旱胁迫10天。
然后将植物从生长室移至温室,并在收获前在温室中保持4天。第一次处理完25天后,收获植物,记录植物鲜重和植物干重(生物量)。未处理的植物-干旱胁迫对照分别用作每次测定的参考。实验采用完全随机的设计,每种处理重复6次。结果总结在下表20中。
表20:处理对植物针对干旱胁迫的耐受性的影响
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单酸甘油酯的混合物)。
结果表明叶绿酸可以与矿物油和螯合物一起使用。将PAO 7395和螯合物加入叶绿酸提高了植物针对干旱胁迫的耐受性并增加了植物生物量的产生。
实施例21:处理对番茄植物针对干旱胁迫的耐受性的影响
在本实施例中,测试了二氢卟吩化合物和制剂对番茄植物栽培品种“Tiny Tim”(Stokes Seeds,Ontario,Canada)的影响。实验在温室中进行。设计测试以确定化合物对番茄植物针对干旱胁迫的耐受性的活性。
在实验中,将番茄植物的栽培品种“Tiny Tim”移植到装有工业土壤混合物(Sunshine LC 1,Sun Gro Horticulture Canada Ltd.)的6英寸塑料盆中,并保持在温室中。在5叶期至6叶期,给植物浇水至100%土壤持水量(SMC),并且通过手持喷洒瓶(Continental E-Z喷洒器)用测试溶液进行处理(叶面喷洒直至流下)。然后植物在生长期间经受长期干旱胁迫。在萎蔫点(20%SMC至30%SMC)给植物浇水达到50%SMC。实施2次叶面处理,间隔为7天。植物在温室中生长,并以完全随机的设计排列,每种处理重复6次。第二次叶面处理完三周后,收获番茄植物并评估植物生物量(果实、枝条)。结果总结于下表21中。
表21:处理对番茄植物对长期干旱胁迫的耐受性的影响。
*PAO7395=93%PAO 4cSt+7%Atlox 3273;Atlox 3273=60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物。
实施例22:处理对大豆种子的出苗、生长、产量和质量的影响。
在沙质土壤上进行田间试验。与未处理的对照相比,几种处理使得生长季节中植物生长提前,1000粒种子的重量更重和产量更高。在种植前将处理以种子处理实施于种子,在种植时将处理实施于犁沟内,以及在V3、R1和R3大豆植物阶段将处理以叶面喷洒进行实施。
使用John Deere 70004行(免耕玉米播种机)种植大豆的栽培品种AsgrowAG33X8。地块以完全随机的区组设计,重复4次。每个地块长6m,有4排大豆并且在地块之间有3m的通道。在种植之前施撒肥料。
在种植之前,种子会接受种上处理。将种子置于大袋中并且将均匀覆盖种子所需量的处理浆液引入袋中。将袋子摇动几分钟,然后将种子在仓库地板上的塑料布上风干。
在犁沟内处理期间,液体恰好输送到种植的种子上。校准每个播种机单元,以使它向每排种子的每米输送10mL的犁沟内处理液体。使用Kinkaid*XP地块联合收割机收获大豆。将大豆产量数据调整至13%水分含量。处理列表示于下表22A中。
表22A:处理列表
*PAO=93%PAO 4cst+7%Atlox 3273(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
Atlox 3273**:表面活性剂(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
从出苗之时起,各处理之间就存在明显的差异。使用1至9的评级(在种植3周后,1=严重受损的植物,3=可接受的植物,9=健康的植物)评估种子处理和犁沟内处理对植物活力的影响。结果总结在表22B中。收集产量数据并示于下表22C中。
表22B:处理对植物活力的影响
表22C:处理对产量的影响
产量显示出对照和处理之间的差异。所有处理都使得产量增加。
实施例23:土壤浸透和实施叶面处理对番茄植物针对长期干旱胁迫的耐受性的影响。
该研究评估了在长期干旱下对叶面实施含油的二氢卟吩化合物和不含油的二氢卟吩化合物对番茄生理适应性的影响。
将番茄“Tiny Tim”种植在装有盆栽混合土的单元格(cell)中,并移植到装有具有等量土壤/盆的常规温室土壤混合物(表层土壤:细沙,2∶1(v/v))的1加仑盆中。通过于105℃干燥48小时来测定土壤湿度。土壤湿度为14.6%(在50%持水量时)和29.2%(在100%持水量时)。移植后,通过亏缺灌溉(50%持水量)使植物经受干旱胁迫。以叶面喷洒实施处理。在移植后7天进行第一次叶面施用,并且在移植后14天(在第一次施用后7天)进行第二次叶面施用。使用手动喷洒器均匀地对叶面实施处理直至刚好流下(每盆约5mL)。
在第一次实施处理后2个月测量番茄植物的枝条生物量和根生物量。结果示于表23A中。
表23A:在长期干旱条件下处理对番茄枝条生物量和根生物量的影响
*PAO7395=93%PAO 4cst+7%表面活性剂3272(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
在长期干旱下,与未处理的对照相比,两种处理都增加了生物量。此外,CuChln与PAO和表面活性剂的组合比CuChln单独与表面活性剂的组合进一步改善了生物量。
在测试过程中还测量了叶片脯氨酸含量。简而言之,用1.8mL 3%磺基水杨酸将叶片(50)匀浆并于100℃煮沸10分钟,将1mL上清液与1mL乙酸和1mL酸性茚三酮混合并于在100℃加热40分钟,冷却后用2mL甲苯提取反应混合物并读取520nm处的吸光度。脯氨酸在受胁迫的植物中的积累具有保护作用。已知对干旱胁迫和盐胁迫具有抗性的植物显示出高脯氨酸含量。在胁迫下,高脯氨酸含量为细胞提供渗透保护并稳定细胞内的稳态,因此在胁迫期间细胞膜和细胞机体受到的损伤较少。此外,较高的细胞脯氨酸含量已经显示有助于从胁迫中恢复。
脯氨酸含量的结果示于表23B。本实施例显示出将二氢卟吩化合物与油一起施用会激活较高的脯氨酸积累,从而在干旱胁迫下诱导渗透调节。
表23B:长期干旱胁迫下番茄植物中脯氨酸含量
*PAO7395=93%PAO 4cst+7%表面活性剂3272(60%乙氧基化烷基醇和40%烷基单甘油酯的混合物)。
实施例24:不同油对拟南芥的盐胁迫的影响
本实验方案与实施例2的相同。
在本实施例中,通过反映叶片逐渐衰老症状的视觉评级,测量了金属化二氢卟吩化合物和各种油对由盐胁迫引发的拟南芥衰老的影响。具体地,该实施例显示CuChln提供了针对由盐胁迫引发的衰老的保护。该实施例还表明,油的加入进一步增强了保护作用。
在长期暴露于盐胁迫之后,Na+在枝条中的积累导致细胞毒性作用,其中最明显的症状是变黄,随后由于叶片的衰老和死亡而使叶片干燥。叶子衰老可以通过反映叶片逐渐衰老症状的视觉评分来评估。
为了确定CuChl对盐胁迫引发的植物衰老的影响,将种子直接播种在土壤上,给盆浇水并放置于16小时/8小时的光周期、PAR 24微摩尔/m2/s、25℃±3℃的温度和65%的相对湿度下。14天后,用半强度制剂灌溉幼苗,并在24小时后用100mM NaCl浇灌达到持水量,四天后用200mM NaCl浇灌,并然后每4天用300mM NaCl浇灌,直至实验结束。改善%是两次独立实验的平均值。结果总结于下表24A和24B中。
表24A:CuChln与不饱和油结合的影响。
处理 | 改善%* |
0.05%CuChln+0.0175%表面活性剂3273 | 26.5 |
0.12%鲨烯** | 37.5 |
0.05%CuChln+0.12%鲨烯** | 108 |
*值是相对于未经处理的对照的衰老改善%
**角鲨烷=93重量%鲨烯+7重量%表面活性剂3273(乙氧基化烷基醇和烷基单甘油酯的混合物)
表24B:CuChln与茂金属聚α-烯烃(mPAO)结合的影响
处理 | 增加%* |
0.05%CuChln+0.0175%表面活性剂3273 | 36.5 |
0.25%SpectraSyn Elite 150** | 27.5 |
0.05%CuChln+0.12%SpectraSyn Elite 150** | 54.6 |
*值是相对于未经处理的对照的衰老改善%
**SpectraSyn Elite 150(93重量%SpectraSyn Elite 150+7重量%表面活性剂3273(乙氧基化烷基醇和烷基单甘油酯的混合物))
Claims (28)
1.一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的方法,所述方法包括向所述植物施用包括以下的组合,以所述组合的总重量计:
(a)0.05%-0.25%叶绿酸铜;
(b)0.125%-2%的聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂;和
(c)任选地,0.05%-0.25%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
或者
(a)0.1%叶绿酸铜;和
(b)0.1%的选自椰子油、菜籽油或花生油的植物油和表面活性剂;
或者
(a)0.1%-0.15%叶绿酸镁;
(b)0.5%-2%的聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂;和
(c)任选地,0.05%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
其中,所述表面活性剂选自脂肪酸酯、乙氧基化烷基醇、烷基单甘油酯及其混合物;
其中所述一种或多种非生物胁迫选自由干旱胁迫、盐度胁迫、低温胁迫、高温胁迫、水分胁迫、移植冲击胁迫和弱光胁迫组成的组。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述组合包括以所述组合的总重量计的:
(a)0.1%-0.15%叶绿酸铜;
(b)0.5%-1%的聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂,其中PAO与表面活性剂的比例为93:7;和
(c)任选地,0.05%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
其中,所述表面活性剂选自脂肪酸酯、乙氧基化烷基醇、烷基单甘油酯及其混合物。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合包括以所述组合的总重量计的:
(a)0.12%-0.15%叶绿酸铜和0.12%-0.15%叶绿酸镁;
(b)0.5%的聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂,其中PAO与表面活性剂的比例为93:7;和
(c)任选地,0.05%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
其中,所述表面活性剂选自脂肪酸酯、乙氧基化烷基醇、烷基单甘油酯及其混合物。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中在所述非生物胁迫开始时或在所述非生物胁迫开始前将所述组合施用于所述植物。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中在所述非生物胁迫开始后将所述组合施用于所述植物。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中通过土壤浸透、移液、灌溉、喷洒、喷雾、喷灌、倾倒、叶面喷洒和在所述植物基部喷洒中的至少一种将所述组合施用于所述植物。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中将组分(a)和组分(b)同时施用于所述植物。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中将组分(a)和组分(b)顺序施用于所述植物。
9.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中将所述组合施用于所述植物包括施用包含组分(a)和组分(b)的组合物。
10.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中将所述组合施用于所述植物包括将组分(a)和组分(b)顺序施用于所述植物。
11.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述植物是非木本作物、木本植物或草皮草。
12.根据权利要求11所述的方法,其中所述木本植物是树。
13.根据权利要求12所述的方法,其中所述树是果树。
14.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述植物是所述植物是非木本作物。
15.一种用于提高植物对一种或多种非生物胁迫的抗性的组合物,所述组合物包含以所述组合物的总重量计的:
(a)0.05%-0.25%叶绿酸铜;
(b)0.125%-2%的聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂;和
(c)任选地,0.05%-0.25%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
或者
(a)0.1%叶绿酸铜;和
(b)0.1%的选自椰子油、菜籽油或花生油的植物油和表面活性剂;
或者
(a)0.1%-0.15%叶绿酸镁;
(b)0.5%-2%的聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂;和
(c)任选地,0.05%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
其中,所述表面活性剂选自脂肪酸酯、乙氧基化烷基醇、烷基单甘油酯及其混合物;
其中所述一种或多种非生物胁迫选自由低温胁迫、高温胁迫、水分胁迫、移植冲击胁迫、弱光胁迫、干旱胁迫和盐度胁迫组成的组。
16.根据权利要求15所述的组合物,其中,所述组合物包括以所述组合物的总重量计的:
(a)0.1%-0.15%叶绿酸铜;
(b)0.5%-1%聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂,其中PAO与表面活性剂的比例为93:7;和
(c)任选地,0.05%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
其中,所述表面活性剂选自脂肪酸酯、乙氧基化烷基醇、烷基单甘油酯及其混合物。
17.根据权利要求15所述的组合物,其中所述组合物包括以所述组合物的总重量计的:
(a)0.12%-0.15%叶绿酸铜和0.12%-0.15%叶绿酸镁;
(b)0.5%聚α-烯烃(PAO)和表面活性剂,其中PAO与表面活性剂的比例为93:7;和
(c)任选地,0.05%乙二胺四乙酸(EDTA)或其钠盐或钙盐作为螯合剂;
其中,所述表面活性剂选自脂肪酸酯、乙氧基化烷基醇、烷基单甘油酯及其混合物。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的组合物,其中所述组合物用于在所述非生物胁迫开始时或在所述非生物胁迫开始前施用于所述植物。
19.根据权利要求15-17中任一项所述的组合物,其中所述组合物用于在所述非生物胁迫开始后施用于所述植物。
20.根据权利要求15-17中任一项所述的组合物,其中所述组合物用于通过土壤浸透、移液、灌溉、喷洒、喷雾、喷灌、倾倒、叶面喷洒和在所述植物基部喷洒中的至少一种施用于所述植物。
21.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物,其中将组分(a)和组分(b)同时施用于所述植物。
22.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物,其中将组分(a)和组分(b)顺序施用于所述植物。
23.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物,其中将所述组合物施用于所述植物包括施用包含组分(a)和组分(b)的组合物。
24.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物,其中将所述组合物施用于所述植物包括将组分(a)和组分(b)顺序施用于所述植物。
25.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物,其中所述植物是非木本作物、木本植物或草皮草。
26.根据权利要求25所述的组合物,其中所述木本植物是树。
27.根据权利要求26所述的组合物,其中所述树是果树。
28.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物,其中所述植物是非木本作物。
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