CN112198145A - 一种原料糯米农药残留检测方法 - Google Patents

一种原料糯米农药残留检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及米粉加工技术领域，尤其是一种原料糯米农药残料检测方法，包括：样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.12‑0.18mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；检测；本发明中的原料糯米农药残留检测方法，通过采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取有机磷农药，对有机磷农药的回收率高达95%，且萃取条件温和，提取效率高，步骤少，避免了其他操作对提取物的污染，且采用荧光法进行检测，采用从淡水鲫鱼肝脏中提取乙酰胆碱酯酶和β‑乙酸萘酯作为酶液和底物，大大降低了有机磷农药的检出限。

Description

一种原料糯米农药残留检测方法
技术领域
本发明涉及米粉加工技术领域，尤其是一种原料糯米农药残料检测方法。
背景技术
糯米经除砂、洗净、浸泡、磨浆、脱水、干燥、筛理和包装等工序，即可加工成糯米粉。糯米粉除了制作汤圆外，还广泛应用在食品行业，如丰富多彩的各色糯米糕点、糯米小吃和糯米膨化食品等，这些糯米制品的市场需求正快速增长，发展前景十分广阔。
为了避免水稻减产，农药被高浓度甚至高频次的使用，可导致稻谷农药残留超标，食用农残超标食品可导致急慢性农药中毒，引起神经功能紊乱，甚至可威胁生命安全。因此，糯米粉的原料糯米中农药残留检测技术的进步直接关系到消费者的身体健康。
有机磷农药具有广谱、高效、用量小以及作用方式多、使用方便、半衰期短等优点，广泛应用于农业、工业、医药等领域。然而这类农药长期施用，会发生残留，不仅对土壤、水、食品、大气、生态环境造成极其严重的污染和影响，还严重威胁人类的健康和生存。
农药残留检测技术包括样品前处理技术和检测技术，目前农药残留检测中90%的误差来源于样品前处理过程，近年来农药品种的更新速度快，需检测的残留农药种类多，检出限也越来越低，传统的样品前处理技术方法无法满足农药残留快速准确检测的需要。同时农药残留检测是痕量的，且存在同系物、降解产物、代谢产物、机制等的影响，因此为减少检测过程中的干扰峰，避免检测器和色谱柱的污染，对前处理技术提出了更高的要求。
发明内容
本发明的目的是：克服现有技术中的不足，提供一种样品处理时间短、检测结果精确性和准确性高的原料糯米农药残留检测方法。
一种原料糯米农药残留检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.12-0.18mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；
检测：在上述装有有机磷农药的试管中加入50μl酶液，混合10min后，再加入底物50μl，在激发波长310nm、发射波长365nm下测定3min的荧光变化值△F’；
另取一只试管作无农药的空白试验，测出△F；
结果判断：按下列公式计算有机磷农药抑制的百分率：抑制率（%）=（1-△F’/△F）*100；
当抑制率小于50%，则认为不存在农药抑制，即没有有机磷农药残留；
当抑制率在50-60%，则可能存在农药抑制，即可能有机磷农药残留；
当抑制率大于60%，则认为有存在农药抑制，即有有机磷农药残留。
进一步的，所述糯米粉与石英砂的质量比为1:1.2-1.5，所述石英砂的粒径大小为0.21-0.25mm。
进一步的，所述丙酮正己烷中丙酮与正己烷的体积比为（1:1）-（1:4）。
进一步的，所述密闭式微波萃取体系为压力温度自控微波系统。
进一步的，所述有机磷农药包括甲拌磷3911、内吸磷1059、对硫磷1605、特普TEPP、高毒类：敌敌畏、甲基对硫磷、甲基内吸磷、敌百虫、乐果、马拉硫磷。
进一步的，所述酶液选用乙酰胆碱酯酶，所述乙酰胆碱酯酶从淡水鲫鱼肝脏中提取，底物为β-乙酸萘酯。
进一步的，所述乙酰胆碱酯酶液的浓度为0.5mg/ml。
进一步的，所述有机磷农药与酶液混合的温度为25℃，pH值为7-8。
进一步的，所述检测方法的最低检出限为1.24 μg/kg-3.25 μg/kg。
采用本发明的技术方案的有益效果是：
本发明中的原料糯米农药残留检测方法，通过采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取有机磷农药，对有机磷农药的回收率高达95%，且萃取条件温和，提取效率高，步骤少，避免了其他操作对提取物的污染，且采用荧光法进行检测，采用从淡水鲫鱼肝脏中提取乙酰胆碱酯酶和β-乙酸萘酯作为酶液和底物，大大降低了有机磷农药的检出限。
具体实施方式
现在结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。下面的实施例可以使 本专业技术人员更全面地理解本发明，但是这些实施例不是对本发明保护范围 的限制。此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现 方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例 中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的 实施例。
实施例1
本实施例中是对原料糯米中农药甲拌磷3911残留的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
S1样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.12mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；
糯米粉与石英砂的质量比为1:1.2，所述石英砂的粒径大小为0.21mm，丙酮正己烷中丙酮与正己烷的体积比为1:1，密闭式微波萃取体系为压力温度自控微波系统，酶液选用乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶从淡水鲫鱼肝脏中提取，底物为β-乙酸萘酯，乙酰胆碱酯酶液的浓度为0.5mg/ml，有机磷农药与酶液混合的温度为25℃，pH值为7-8；
S2检测：在上述装有有机磷农药的试管中加入50μl酶液，混合10min后，再加入底物50μl，在激发波长310nm、发射波长365nm下测定3min的荧光变化值△F’；
另取一只试管作无农药的空白试验，测出△F；
按下列公式计算有机磷农药抑制的百分率：抑制率（%）=（1-△F’/△F）*100，得到抑制率45%。
制率小于50%，则认为不存在农药抑制，即没有有机磷农药残留。
检测方法的最低检出限为3.25 μg/kg。
实施例2
本实施例中是对原料糯米中农药甲拌磷3911残留的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
S1样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.13mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；
糯米粉与石英砂的质量比为1:1.2，所述石英砂的粒径大小为0.21mm，丙酮正己烷中丙酮与正己烷的体积比为1:1，密闭式微波萃取体系为压力温度自控微波系统，酶液选用乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶从淡水鲫鱼肝脏中提取，底物为β-乙酸萘酯，乙酰胆碱酯酶液的浓度为0.5mg/ml，有机磷农药与酶液混合的温度为25℃，pH值为7-8；
S2检测：在上述装有有机磷农药的试管中加入50μl酶液，混合10min后，再加入底物50μl，在激发波长310nm、发射波长365nm下测定3min的荧光变化值△F’；
另取一只试管作无农药的空白试验，测出△F；
按下列公式计算有机磷农药抑制的百分率：抑制率（%）=（1-△F’/△F）*100，抑制率为46%，抑制率小于50%，则认为不存在农药抑制，即没有有机磷农药残留。
检测方法的最低检出限为2.85 μg/kg。
实施例3
本实施例中是对原料糯米中农药甲拌磷3911残留的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
S1样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.15mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；
糯米粉与石英砂的质量比为1:1.3，所述石英砂的粒径大小为0.23mm，丙酮正己烷中丙酮与正己烷的体积比为1:2，密闭式微波萃取体系为压力温度自控微波系统，酶液选用乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶从淡水鲫鱼肝脏中提取，底物为β-乙酸萘酯，乙酰胆碱酯酶液的浓度为0.5mg/ml，有机磷农药与酶液混合的温度为25℃，pH值为7-8；
S2检测：在上述装有有机磷农药的试管中加入50μl酶液，混合10min后，再加入底物50μl，在激发波长310nm、发射波长365nm下测定3min的荧光变化值△F’；
另取一只试管作无农药的空白试验，测出△F；
按下列公式计算有机磷农药抑制的百分率：抑制率（%）=（1-△F’/△F）*100，抑制率为36%，抑制率小于50%，则认为不存在农药抑制，即没有有机磷农药残留。
检测方法的最低检出限为2.5 μg/kg。
实施例4
本实施例中是对原料糯米中农药甲拌磷3911残留的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
S1样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.16mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；
糯米粉与石英砂的质量比为1:1.4，所述石英砂的粒径大小为0.23mm，丙酮正己烷中丙酮与正己烷的体积比为1:3，密闭式微波萃取体系为压力温度自控微波系统，酶液选用乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶从淡水鲫鱼肝脏中提取，底物为β-乙酸萘酯，乙酰胆碱酯酶液的浓度为0.5mg/ml，有机磷农药与酶液混合的温度为25℃，pH值为7-8；
S2检测：在上述装有有机磷农药的试管中加入50μl酶液，混合10min后，再加入底物50μl，在激发波长310nm、发射波长365nm下测定3min的荧光变化值△F’；
另取一只试管作无农药的空白试验，测出△F；
按下列公式计算有机磷农药抑制的百分率：抑制率（%）=（1-△F’/△F）*100，抑制率为46%，抑制率小于50%，则认为不存在农药抑制，即没有有机磷农药残留。
检测方法的最低检出限为1.8 μg/kg。
实施例5
本实施例中是对原料糯米中农药甲拌磷3911残留的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
S1样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.18mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；
糯米粉与石英砂的质量比为1:1.5，所述石英砂的粒径大小为0.25mm，丙酮正己烷中丙酮与正己烷的体积比为1:4，密闭式微波萃取体系为压力温度自控微波系统，酶液选用乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶从淡水鲫鱼肝脏中提取，底物为β-乙酸萘酯，乙酰胆碱酯酶液的浓度为0.5mg/ml，有机磷农药与酶液混合的温度为25℃，pH值为7-8；
S2检测：在上述装有有机磷农药的试管中加入50μl酶液，混合10min后，再加入底物50μl，在激发波长310nm、发射波长365nm下测定3min的荧光变化值△F’；
另取一只试管作无农药的空白试验，测出△F；
按下列公式计算有机磷农药抑制的百分率：抑制率（%）=（1-△F’/△F）*100，抑制率为45%，抑制率小于50%，则认为不存在农药抑制，即没有有机磷农药残留。
检测方法的最低检出限为1.24μg/kg。
本发明中除了上述实验之外，还对内吸磷1059、对硫磷1605、特普TEPP、高毒类：敌敌畏、甲基对硫磷、甲基内吸磷、敌百虫、乐果、马拉硫磷这些有机磷农药进行了同样的试验方法，结果是上述检测方法同样适用。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。

Claims (9)

1.一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：
样品前处理：称取5g糯米样品，将其粉碎至0.12-0.18mm，按比例加入石英砂，加入800μl的丙酮正己烷的混合溶剂，并置于密闭式微波萃取体系内采用微波辅助水蒸汽蒸馏法进行提取，收集含有有机磷农药的提取液30ml，然后浓缩至5ml，并将其转移至试管中；
检测：在上述装有有机磷农药的试管中加入50μl酶液，混合10min后，再加入底物50μl，在激发波长310nm、发射波长365nm下测定3min的荧光变化值△F’；
另取一只试管作无农药的空白试验，测出△F；
结果判断：按下列公式计算有机磷农药抑制的百分率：抑制率（%）=（1-△F’/△F）*100；
当抑制率小于50%，则认为不存在农药抑制，即没有有机磷农药残留；
当抑制率在50-60%，则可能存在农药抑制，即可能有机磷农药残留；
当抑制率大于60%，则认为有存在农药抑制，即有有机磷农药残留。
2.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述糯米粉与石英砂的质量比为1:1.2-1.5，所述石英砂的粒径大小为0.21-0.25mm。
3.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述丙酮正己烷中丙酮与正己烷的体积比为（1:1）-（1:4）。
4.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述密闭式微波萃取体系为压力温度自控微波系统。
5.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述有机磷农药包括甲拌磷3911、内吸磷1059、对硫磷1605、特普TEPP、高毒类：敌敌畏、甲基对硫磷、甲基内吸磷、敌百虫、乐果、马拉硫磷。
6.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述酶液选用乙酰胆碱酯酶，所述乙酰胆碱酯酶从淡水鲫鱼肝脏中提取，底物为β-乙酸萘酯。
7.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述乙酰胆碱酯酶液的浓度为0.5mg/ml。
8.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述有机磷农药与酶液混合的温度为25℃，pH值为7-8。
9.根据权利要求1所述的一种原料糯米农药残留检测方法，其特征在于：所述检测方法的最低检出限为1.24 μg/kg-3.25 μg/kg。
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