CN112175913A - SARS-CoV-2减毒株及其在预防新冠肺炎中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了一株SARS‑CoV‑2减毒株及其在预防和/或治疗新冠肺炎中的应用。本发明提供的SARS‑CoV‑2减毒株在体内和体外的复制能力相比野生型毒株有所降低，从而降低了对该病毒进行操作所需的生物安全要求。将本发明提供的SARS‑CoV‑2减毒株应用于新冠肺炎治疗和预防研究，以及新冠疫苗开发和生产时，能够在保证研究人员安全的情况下，加快研究进程。另外，本发明提供的SARS‑CoV‑2减毒株还具有作为新冠肺炎减毒活疫苗候选株的可行性，该可行性已经在动物实验中得到了验证。

Description

SARS-CoV-2减毒株及其在预防新冠肺炎中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一株SARS-CoV-2减毒株及其在预防和/或治疗新冠肺炎中 的应用。
背景技术
SARS-CoV-2与SARS-CoV、MERS-CoV同为冠状病毒科冠状病毒属成员。SARS-CoV-2是一 种有包膜的RNA病毒，其基因组全长近30kb，两端为5’和3’非编码区，中间为单一开放读码框， 编码4个结构蛋白(刺突蛋白S，膜蛋白E，基质蛋白M和核衣壳蛋白N)和16个非结构蛋白。结 构蛋白S位于病毒颗粒的表面，呈刺突状，由S1和S2两部分亚基组成。S1主要负责与细胞表面受 体结合，S2则参与后续的病毒膜与细胞膜融合过程。在此过程中，S蛋白被宿主蛋白酶切割为S1和 S2也是病毒完成侵入的关键步骤。
然而，野生型SARS-CoV-2的感染力和病毒毒性强，基于野生型SARS-CoV-2的研究需要较高 生物安全等级的实验室和研究设备，由于符合条件的实验室和设备有限，使得对新冠病毒的研究和疫 苗开发进程受阻。并且，对于研究人员而言，在使用野生型SARS-CoV-2进行研究的过程中也需要面 对较高的风险。因此，亟需获取SARS-CoV-2减毒株用于实验研究和疫苗开发生产，提高研究安全性， 加快研究进程。另一方面，SARS-CoV-2减毒株还可模拟真实的病毒感染，激活宿主的免疫系统，有 望成为新冠肺炎的减毒活疫苗候选株。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的野生型SARS-CoV-2研究风险大，对实验室、设备和 研究人员的要求高等问题，提供一株SARS-CoV-2减毒病毒株，该减毒病毒株具有复制能力显著降低， 体现出明确的减毒特征等特点。进一步评价了其对动物的免疫保护效果，探索其作为新冠肺炎减毒活 疫苗候选株的可行性。
为了实现上述目的，本发明一方面提供一株SARS-CoV-2减毒株，相比于野生型SARS-CoV-2， 所述减毒株的基因组RNA对应的cDNA具有自5’末端起第23597-23617位核苷酸的缺失。
本发明第二方面提供一种包含SARS-CoV-2减毒病毒株的全基因组cDNA的DNA分子，所述 cDNA自5’末端起第23597-23617位核苷酸缺失。
本发明第三方面提供上述减毒株和/或DNA分子在治疗和/或预防新冠肺炎中的应用。
本发明第四方面提供上述减毒株和/或DNA分子在研究和/或制备SARS-CoV-2病毒疫苗中的应 用。
本发明第五方面提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物中含有活性成分和辅料，所述活性成分 包括上述减毒株和/或DNA分子。
本发明提供的SARS-CoV-2减毒株在体内和体外的复制能力相比野生型毒株有所降低，从而使 得对该病毒进行操作的生物安全要求降低，为在生物安全等级较低的(例如可以降低至2级)实验室 中完成对SARS-CoV-2的研相关研究和生物安全等级较低的(例如可以降低至2级)实验室中完成新 冠灭活和/或减活疫苗的研发和生产提供了可能。同时，该减毒株能够为地鼠提供有效的免疫保护。
附图说明
图1为缺失病毒DEL-7aa的S1/S2连接区序列比对图；
图2为缺失病毒DEL-7aa在细胞中的增殖特征图；
图3为显示缺失病毒DEL-7aa感染细胞后的病毒蛋白表达情况的间接免疫荧光结果图；
图4为缺失病毒DEL-7aa在hACE小鼠肺中的复制能力测试结果图；
图5为灭活后的缺失病毒DEL-7aa对小鼠的免疫保护效果图；
图6为DEL-7aa免疫地鼠后的中和抗体滴度；
图7为DEL-7aa免疫地鼠后，地鼠对病毒感染的保护效果。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当能够理解的是，以下具体实施方式仅用于 解释和说明本发明的内容，而不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为 包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独 的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被 视为在本文中具体公开。
本发明的发明人在研究过程中发现，新冠病毒临床分离株(野生型SARS-CoV-2)在Vero细胞 中连续传代后，其基因组核苷酸序列发生突变，具体表现为其S蛋白编码区中的S1/S2切割位点的上 游缺失了21个核苷酸，导致S蛋白缺失7个氨基酸残基(也即所述减毒株的基因组RNA对应的cDNA 编码的S蛋白第678-685位氨基酸缺失)。经试验发现，该发生缺失突变的病毒株在细胞和小鼠体内 的复制能力显著降低，体现明确的减毒特征。
本发明第一方面提供一株SARS-CoV-2减毒株，相比于野生型SARS-CoV-2，所述减毒株的基 因组RNA对应的cDNA具有自5’末端起第23597-23617位核苷酸的缺失。
本发明的SARS-CoV-2减毒株中，除了以上缺失突变，还可以包括一些沉默的点突变，如 G11083T和A17829G，以及疏水性无明显变化的氨基酸突变，如A21768G和G25785T。上述点突变 对于该毒株的性能不会产生影响。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述减毒株的基因组RNA对应的cDNA如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示。
本发明中，在已知病毒基因组序列的基础上，本领域技术人员能够利用全基因合成等方法构建 出相应的减毒株，在此不再赘述。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述减毒株中，S蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。
根据本发明的优选实施方式，其中，减毒株的基因组RNA对应的cDNA中，自5’末端起第 23597-23617位缺失的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
本发明第二方面提供一种包含SARS-CoV-2减毒病毒株的全基因组cDNA的DNA分子，所述 DNA分子自5’末端起第23597-23617位核苷酸缺失。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述cDNA的序列如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述DNA分子自5’末端起第23597-23617位缺失的核苷 酸序列如SEQ ID NO:3所示。
本发明第三方面提供如上所述的减毒株和/或DNA分子在治疗和/或预防新冠肺炎中的应用。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述应用可以以任意本领域现有的方式或形式进行。例如， 利用该减毒株和/或DNA分子通过体外实验(例如细胞实验等)进行SARS-CoV-2致病机理的研究， 利用该减毒株和/或DNA分子通过模式生物(例如小鼠等)进行治疗和/或预防新冠肺炎的方法研究， 利用该减毒株和/或DNA分子和/或方法通过模式生物(例如小鼠等)进行治疗和/或预防新冠肺炎的 药物研究等。
本发明第四方面提供如上所述的减毒株和/或DNA分子在研究和/或制备SARS-CoV-2病毒疫苗 中的应用。
由于该减毒株在体内和/体外实验中显示出复制能力降低的特征，提示对该毒株进行操作的生物 安全要求可能降低(例如，对其进行研究的实验室生物安全等级要求可能降低至生物安全2级水平等)。
本发明第五方面提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物中含有活性成分和辅料，所述活性成分 包括如上所述的减毒株和/或DNA分子。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述活性成分为灭活后的所述减毒株和/或所述DNA分子。
所述灭活可以通过任意本领域现有的制备灭活疫苗的方式进行。例如，根据本发明的优选实施 方式，其中，所述灭活的方式可以选自甲醛灭活和/或β-丙内酯灭活。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述活性成分为减活后的所述减毒株和/或所述DNA分子。
所述减活可以通过任意本领域现有的制备减活疫苗的方式进行。例如，根据本发明的优选实施 方式，其中，所述减活的方式可以选自连续传代和/或基因工程改造。
所述辅料可以为任意本领域现有用于疫苗制备的辅料。根据本发明的优选实施方式，其中，所 述辅料可以选自：吸附剂、防腐剂、稳定剂和乳化剂中的至少一种。
优选地，所述吸附剂选自铝佐剂，例如氢氧化铝凝胶、磷酸铝、硫酸铝、铵明矾和钾明矾等。
优选地，所述防腐剂选自硫柳汞等。
优选地，所述稳定剂选自明胶、山梨糖醇、糖分子蔗糖和乳糖等。
优选地，所述乳化剂选自泊洛沙姆、聚氧乙烯蓖麻油、吐温等。
以下将通过具体实施例对本发明进行进一步详细描述。应当能够理解的是，以下实施例仅用于 进一步解释和说明本发明，而不用于限制本发明。
以下实施例中，所述新冠病毒临床分离株V34分离自新冠病毒感染的患者的鼻拭子样本。该研 究已获得相关人员的知情同意。Vero细胞和Caco-2细胞购自美国生物样本培养物保藏中心(ATCC)。 Huh7细胞购自日本细胞保藏中心(JCRB)。SARS-CoV-2的S蛋白的特异抗体购自Sino Biological 公司。PFA购自武汉塞维尔科技有限公司。hACE2基因敲入小鼠由中国食品药品检定研究院提供。 BALB/c小鼠和地鼠均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。Alexa Fluor 488标记的羊抗鼠IgG 抗体购自中杉金桥公司。DAPI(6-二脒基-2-苯基吲哚)购自Sigma公司。
以下实施例中采用的其他试剂、材料等均购自正规生物或化学试剂/耗材供应商。
以下实施例中，实时定量RT-PCR通过Roche公司的LightCycler480 Il PCR仪完成。
以下实施例中，所述“室温”在未做特殊说明的情况下指的是25±5℃。
实施例1
本实施例用于说明本发明提供的SARS-CoV-2减毒株(缺失突变株)的发现及其基因组特征。
本实施例中，所述空斑试验的方式为：将含有病毒的细胞培养上清用无血清的DMEM培养基 进行10倍系列稀释，将各稀释度液体以250ul/孔加入铺于24孔板中的Vero细胞，于37℃，5％CO2条件下培养吸附50min，移去上清，加入含1体积％低熔点琼脂糖和2体积％FBS的DMEM(500ul/ 孔)，于37℃，5％CO2条件下进行培养。感染后第3天，加入4体积％甲醛固定液(1ml/孔)，室 温固定30min，移除琼脂盖，加入结晶紫，室温染色30min，PBS清洗3次后计数空斑数。
将新冠病毒临床分离株V34(其全基因组RNA对应的cDNA序列如核苷酸序列SEQ IDNO:4 所示)以MOI＝0.1的接种剂量感染铺于6孔板中的Vero细胞(约200000个细胞/孔)。于37℃，5％ CO2条件下进行培养。感染后第3天收取细胞上清，通过空斑试验确定上清中的病毒滴度，作为第一 代毒株，命名为P1。
将P1毒株以MOI＝0.1的接种剂量感染6孔板中的Vero细胞(约2×105个细胞/孔)，于37℃， 5％CO2条件下进行培养。于感染后第3天收取细胞上清，通过空斑试验确定上清中的病毒滴度，作 为第二代毒株，命名为P2。
依照上述方式将该病毒连续在Vero细胞中传代5次，获得第五代毒株，命名为P5(其全基因 组RNA对应的cDNA序列如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示)。
使用病毒核酸提取试剂盒Viral RNA mini(购自Qiagen)，按照试剂盒操作说明提取V34和P5 毒株的病毒RNA，采用Invitrogen SuperScript III One-Step RT-PCR试剂盒扩增获得其S蛋白基因序列。
相关引物名称和序列为：
S22-F(上游引物，SEQ ID NO:6)：
5’-GATTACGCCAAGCTTTACAATCTAGTCAAGCGTGGCAACCG-3’；
S22-R(下游引物，SEQ ID NO:7)：
5’-GATTACGCCAAGCTTCAATAAGTAGGGACTGGGTCTTC-3’；
S23-F(上游引物，SEQ ID NO:8)：
5’-GATTACGCCAAGCTTCTGGGACCAATGGTACTAAGAGG-3’；
S23-R(下游引物，SEQ ID NO:9)：
5’-GATTACGCCAAGCTTGCACCAAGTGACATAGTGTAGGC-3’；
S24-F(上游引物，SEQ ID NO:10)：
5’-GATTACGCCAAGCTTCCGTGATCCACAGACACTTGAGA-3’；
S24-R(下游引物，SEQ ID NO:11)：
5’-GATTACGCCAAGCTTCAGCAACTGGTCATACAGCAAAGC-3’；
S25-F(上游引物，SEQ ID NO:12)：
5’-GATTACGCCAAGCTTCGCCTCAATGAGGTTGCCAAGAA-3’；
S25-R(下游引物，SEQ ID NO:13)：
5’-GATTACGCCAAGCTTGAGCCACATCAAGCCTACAAGACA-3’。
具体方法为：利用上述引物，采用表1中的反应体系，按照表2中的条件进行RT-PCR扩增。
表1 RT-PCR反应体系
反应体系组成 体积(ul)
2x Taq buffer 25
上游引物 1
下游引物 1
病毒RNA 2
Platium mix 2
RNase Free dH<sub>2</sub>O 19
总体积 50
表2 RT-PCR反应条件
Figure BDA0002748177510000051
Figure BDA0002748177510000061
*该时间根据扩增序列长度，按照1000bp/60s计算获得。
扩增获得的目的片段由北京诺赛基因公司完成测序。利用Lasergen软件对V34和P5病毒的S 基因进行序列比对，结果如图1所示。从中可以看出，与V34相比，P5毒株S蛋白中的S1/S2切割 位点上游缺失21个核苷酸(如SEQ ID NO:3所示)，导致缺失7个氨基酸残基(NSPRRAR)。V34 和P5的S蛋白氨基酸序列分别如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:2所示。
以下实施例中，为表述清晰，分别将V34和P5毒株分别命名为WT和DEL-7aa。
实施例2
本实施例用于说明SARS-CoV-2缺失突变毒株DEL-7aa在不同细胞中的复制能力。
将WT和DEL-7aa毒株以MOI＝0.1的接种剂量分别感染铺于24孔板中的Vero(绿猴肾细胞， 约200000个细胞/孔)、Huh7(人肝癌细胞，约200000个细胞/孔)和Caco-2(人肺上皮细胞，约200000 个细胞/孔)。于感染后24h、48h和72h收取上述三种细胞培养上清，同时于各收样时间点用4％PFA 固定细胞，用于后续的间接免疫荧光法检测病毒蛋白表达。使用病毒核酸提取试剂盒Viral RNA mini (购自Qiagen)，按照试剂盒操作说明提取培养上清中的病毒RNA，通过实时定量RT-PCR检测病 毒RNA拷贝数，引物和探针的序列如下：
CoV-F3(上游引物，SEQ ID NO:14)：
5’-TCCTGGTGATTCTTCTTCAGGT-3’；
CoV-R3(下游引物，SEQ ID NO:15)：
5’-TCTGAGAGAGGGTCAAGTGC-3’；
CoV-P3(探针，SEQ ID NO:16)：
5’-FAM-AGCTGCAGCACCAGCTGTCCA-BHQ1-3’。
反应体系如表3所示，反应条件如表4所示。
表3实时定量RT-PCR反应体系
Figure BDA0002748177510000062
Figure BDA0002748177510000071
表4实时定量RT-PCR反应条件
温度/℃ 时间/s 循环数
42 300 1
95 10 1
95 5 40
60 20 /
本实施例中，间接免疫荧光试验的方法如下：将感染了病毒的细胞上清移去，用PBS清洗2次， 加入4％多聚甲醛，室温固定4h，将24孔板中的铺有细胞的玻片移入新的24孔板中。将SARS-CoV-2 的S蛋白单抗用PBS缓冲液按1:1500稀释后，与抗原片中的细胞在37℃孵育约1.5h，用PBS缓冲 液(10mM K2HPO4，2mM KH2PO4，135mM NaCl，2.7mM KCl，pH7.4)300rpm振荡洗涤3次，每 次10min；在病毒抗原片上加入用PBS缓冲液1:200倍稀释的AlexaFluor 488标记的羊抗鼠IgG抗体， 37℃作用1h，然后将病毒抗原玻片放入PBS缓冲液振荡洗涤3次，每次5min，将DAPI稀释为终 浓度为100ng/ml，与抗原片细胞室温孵育约4min后弃去，用PBS缓冲液洗涤5min，荧光显微镜下 观察结果。
不同时间点培养上清中的病毒RNA拷贝数的结果如图2所示。从中可以看出，WT和DEL-7aa 在Vero细胞中的增殖能力无明显差异，均能在48h达到1011拷贝数/ml以上；但在Huh7和Caco-2 细胞中，WT仍然具有较高的复制效率，在48h分别可以达到108拷贝数/ml以上，而DEL-7aa在整 个观察周期内无法有效复制。上述结果表明，在S蛋白中的7个氨基酸的缺失可能会影响病毒在Huh7 和Caco-2这两种人类细胞中的复制效率。
进一步利用SARS-CoV-2的S蛋白的特异抗体，通过间接免疫荧光试验检测感染后48h细胞内 病毒蛋白的表达情况，结果如图3所示。从中可以看出，感染后48h，接种了WT和DEL-7aa的Vero 细胞中均能检测到强烈的荧光信号；同时，WT接种的Huh7和Caco-2中也能检测到明显的荧光信号， 但接种了DEL-7aa后，均未在上述2种细胞中检测到荧光信号。上述结果表明，病毒在S蛋白中缺失 了7个氨基酸后，其在Huh7和Caco-2这2种人类细胞中的病毒蛋白表达能力受到显著抑制。
实施例3
本实施例用于说明SARS-CoV-2缺失突变株DEL-7aa在小鼠体内的增殖能力。
将WT和DEL-7aa以30000PFU/只的剂量，经滴鼻途径接种6周龄的hACE2基因敲入小鼠， 于感染后第5天处死小鼠并取出小鼠的肺组织。用1ml DMEM将肺组织(约0.1g)重悬并研磨，7000 rpm离心10min，留取组织研磨液上清。使用病毒核酸提取试剂盒Viral RNAmini(购自Qiagen)， 按照试剂盒操作说明提取上清中的病毒RNA，通过实时定量RT-PCR检测病毒RNA拷贝数。结果如 图4所示，从中可以看出，WT在小鼠肺中能增殖到108.4拷贝数/ml，而DEL-7aa的滴度为107.5拷贝 数/ml，降低约8倍。该结果显示，与WT相比，DEL-7aa在小鼠肺中的复制能力显著降低，表明S 蛋白中7个氨基酸的缺失显著降低了病毒在小鼠肺中的复制效率。
实施例4
本实施例用于说明灭活的SARS-CoV-2缺失突变株DEL-7aa能够为小鼠提供有效的免疫保护。
将β-丙内脂以1:3000的体积比加入含有SARS-CoV-2缺失突变株DEL-7aa的细胞培养上清(其 中DEL-7aa的滴度为20000000PFU/ml)，置4℃处理16h。再通过分子筛和亲和纯化层析获取灭活 病毒颗粒，进一步与铝佐剂(氢氧化铝)混合，制备获得灭活病毒制剂。将灭活病毒以1.25ug/只和 2.5ug/只的剂量，经肌肉注射途径免疫4周龄BALB/c雌鼠，免疫后第14天，再以相同剂量加强免疫 一次。同时设立PBS组作为对照，以与灭活病毒制剂等量的PBS对该组小鼠进行给药。首次免疫后 第30天，经滴鼻途径接种新冠病毒株p6(60000PFU/只)至各组小鼠。于感染后第5天取小鼠肺组 织和气管。用1ml DMEM将肺组织(约0.1g)和气管组织(约0.03g)重悬并研磨，7000rpm离心 10min，留取组织研磨液上清。使用病毒核酸提取试剂盒Viral RNA mini(购自Qiagen)，按照试剂 盒操作说明提取上清中的病毒RNA，通过实时定量RT-PCR检测病毒RNA拷贝数。结果如图5所示， 从中可以看出，1.25ug和2.5ug组的小鼠肺组织中的病毒核酸分别比PBS组降低约1000倍和3000倍， 气管中的病毒核酸分别降低10倍和1000倍，呈现出明显的保护效果。这说明本发明提供的减毒株 DEL-7aa具有制备用于预防新冠肺炎的疫苗制品的前景。
实施例5
本实施例用于说明SARS-CoV-2缺失突变株DEL-7aa能够为地鼠提供有效的免疫保护。
将104PFU和106PFU的SARS-CoV-2缺失突变株DEL-7aa经滴鼻途径接种6-8周龄的地鼠， 同时设立PBS组作为对照。于接种后28天采血，通过空斑法测定血清中的SARS-CoV-2中和抗体的 滴度(半数空斑减少中和试验，PRNT50)。具体步骤如下，将Vero细胞以200000个细胞/孔的密度 铺于24孔板，置于37℃，5％CO2培养箱培养16h以上，至细胞长满单层(90-100％覆盖度)；将免 疫血清置于56℃灭活30min，以3倍比的梯度制备血清稀释液，与等体积的SARS-CoV-2悬液混合 (终浓度为250PFU/ml)，并用PBS替代病毒悬液作为阴性对照组，置于37℃，5％CO2培养箱孵 育60min；将病毒/血清混合液加至铺于24孔板中的Vero细胞(250ul/孔)，置于37℃，5％CO2培 养箱孵育60min，期间每20min晃动培养板1次，确保混合液与细胞充分结合；移去病毒/血清混合 液，将含1％低熔点琼脂糖的细胞维持液加至细胞板(500ul/孔)，室温静置10min至凝固，置于37℃， 5％CO2培养箱培养72h；将4％甲醛加入细胞板(500ul/孔)，室温固定30min以上；移去4％甲醛 及琼脂糖盖，PBS清洗细胞孔1次；将结晶紫加入细胞孔(300ul/孔)，室温染色30min，移去结晶 紫，PBS清洗细胞孔1次，移去PBS后在吸水纸上拍干残留液体；计数各稀释度组空斑，按照Spearman-Karber法(HubertJ.1984.Spearman-Karber method,p65–66.In Bioassay,2nd ed.Hunt Publishing,Dubuque,IA.)计算PRNT50。
进一步于接种后30天经滴鼻途径感染野生型SARS-CoV-2，于感染后第5天取地鼠肺组织，用 1ml DMEM将肺组织(约0.1g)重悬并研磨，7000rpm离心10min，留取组织研磨液上清。使用病 毒核酸提取试剂盒Viral RNA mini(购自Qiagen)，按照试剂盒操作说明提取上清中的病毒RNA， 通过实时定量RT-PCR检测病毒RNA拷贝数。结果如图6和图7所示，接种了缺失突变株DEL-7aa 的地鼠血清中的中和抗体滴度的几何平均值(GMT)分别为776和933，攻毒后PBS组地鼠的肺组 织中的病毒核酸含量为109.64RNA拷贝数/g，而免疫组地鼠的肺中未检测到病毒核酸。上述结果表 明，SARS-CoV-2缺失突变株DEL-7aa接种地鼠后能产生高水平的中和抗体，并能够为地鼠提供有效 的免疫保护。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围 内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合， 这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
<120> SARS-CoV-2减毒株及其在预防新冠肺炎中的应用
<130> YXI64293JSY
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 29882
<212> DNA
<213> 减毒株DEL-7aa的全基因组cDNA
<400> 1
attaaaggtt tataccttcc caggtaacaa accaaccaac tttcgatctc ttgtagatct 60
gttctctaaa cgaactttaa aatctgtgtg gctgtcactc ggctgcatgc ttagtgcact 120
cacgcagtat aattaataac taattactgt cgttgacagg acacgagtaa ctcgtctatc 180
ttctgtaggc tgcttacggt ttcgtccgtg ttgcagccga tcatcagcac atctaggttt 240
cgtccgggtg tgaccgaaag gtaagatgga gagccttgtc cctggtttca acgagaaaac 300
acacgtccaa ctcagtttgc ctgttttaca ggttcgcgac gtgctcgtac gtggctttgg 360
agactccgtg gaggaggtct tatcagaggc acgtcaacat cttaaagatg gcacttgtgg 420
cttagtagaa gttgaaaaag gcgttttgcc tcaacttgaa cagccctatg tgttcatcaa 480
acgttcggat gctcgaactg cacctcatgg tcatgttatg gttgagctgg tagcagaact 540
cgaaggcatt cagtacggtc gtagtggtga gacacttggt gtccttgtcc ctcatgtggg 600
cgaaatacca gtggcttacc gcaaggttct tcttcgtaag aacggtaata aaggagctgg 660
tggccatagt tacggcgccg atctaaagtc atttgactta ggcgacgagc ttggcactga 720
tccttatgaa gattttcaag aaaactggaa cactaaacat agcagtggtg ttacccgtga 780
actcatgcgt gagcttaacg gaggggcata cactcgctat gtcgataaca acttctgtgg 840
ccctgatggc taccctcttg agtgcattaa agaccttcta gcacgtgctg gtaaagcttc 900
atgcactttg tccgaacaac tggactttat tgacactaag aggggtgtat actgctgccg 960
tgaacatgag catgaaattg cttggtacac ggaacgttct gaaaagagct atgaattgca 1020
gacacctttt gaaattaaat tggcaaagaa atttgacacc ttcaatgggg aatgtccaaa 1080
ttttgtattt cccttaaatt ccataatcaa gactattcaa ccaagggttg aaaagaaaaa 1140
gcttgatggc tttatgggta gaattcgatc tgtctatcca gttgcgtcac caaatgaatg 1200
caaccaaatg tgcctttcaa ctctcatgaa gtgtgatcat tgtggtgaaa cttcatggca 1260
gacgggcgat tttgttaaag ccacttgcga attttgtggc actgagaatt tgactaaaga 1320
aggtgccact acttgtggtt acttacccca aaatgctgtt gttaaaattt attgtccagc 1380
atgtcacaat tcagaagtag gacctgagca tagtcttgcc gaataccata atgaatctgg 1440
cttgaaaacc attcttcgta agggtggtcg cactattgcc tttggaggct gtgtgttctc 1500
ttatgttggt tgccataaca agtgtgccta ttgggttcca cgtgctagcg ctaacatagg 1560
ttgtaaccat acaggtgttg ttggagaagg ttccgaaggt cttaatgaca accttcttga 1620
aatactccaa aaagagaaag tcaacatcaa tattgttggt gactttaaac ttaatgaaga 1680
gatcgccatt attttggcat ctttttctgc ttccacaagt gcttttgtgg aaactgtgaa 1740
aggtttggat tataaagcat tcaaacaaat tgttgaatcc tgtggtaatt ttaaagttac 1800
aaaaggaaaa gctaaaaaag gtgcctggaa tattggtgaa cagaaatcaa tactgagtcc 1860
tctttatgca tttgcatcag aggctgctcg tgttgtacga tcaattttct cccgcactct 1920
tgaaactgct caaaattctg tgcgtgtttt acagaaggcc gctataacaa tactagatgg 1980
aatttcacag tattcactga gactcattga tgctatgatg ttcacatctg atttggctac 2040
taacaatcta gttgtaatgg cctacattac aggtggtgtt gttcagttga cttcgcagtg 2100
gctaactaac atctttggca ctgtttatga aaaactcaaa cccgtccttg attggcttga 2160
agagaagttt aaggaaggtg tagagtttct tagagacggt tgggaaattg ttaaatttat 2220
ctcaacctgt gcttgtgaaa ttgtcggtgg acaaattgtc acctgtgcaa aggaaattaa 2280
ggagagtgtt cagacattct ttaagcttgt aaataaattt ttggctttgt gtgctgactc 2340
tatcattatt ggtggagcta aacttaaagc cttgaattta ggtgaaacat ttgtcacgca 2400
ctcaaaggga ttgtacagaa agtgtgttaa atccagagaa gaaactggcc tactcatgcc 2460
tctaaaagcc ccaaaagaaa ttatcttctt agagggagaa acacttccca cagaagtgtt 2520
aacagaggaa gttgtcttga aaactggtga tttacaacca ttagaacaac ctactagtga 2580
agctgttgaa gctccattgg ttggtacacc agtttgtatt aacgggctta tgttgctcga 2640
aatcaaagac acagaaaagt actgtgccct tgcacctaat atgatggtaa caaacaatac 2700
cttcacactc aaaggcggtg caccaacaaa ggttactttt ggtgatgaca ctgtgataga 2760
agtgcaaggt tacaagagtg tgaatatcac ttttgaactt gatgaaagga ttgataaagt 2820
acttaatgag aagtgctctg cctatacagt tgaactcggt acagaagtaa atgagttcgc 2880
ctgtgttgtg gcagatgctg tcataaaaac tttgcaacca gtatctgaat tacttacacc 2940
actgggcatt gatttagatg agtggagtat ggctacatac tacttatttg atgagtctgg 3000
tgagtttaaa ttggcttcac atatgtattg ttctttctac cctccagatg aggatgaaga 3060
agaaggtgat tgtgaagaag aagagtttga gccatcaact caatatgagt atggtactga 3120
agatgattac caaggtaaac ctttggaatt tggtgccact tctgctgctc ttcaacctga 3180
agaagagcaa gaagaagatt ggttagatga tgatagtcaa caaactgttg gtcaacaaga 3240
cggcagtgag gacaatcaga caactactat tcaaacaatt gttgaggttc aacctcaatt 3300
agagatggaa cttacaccag ttgttcagac tattgaagtg aatagtttta gtggttattt 3360
aaaacttact gacaatgtat acattaaaaa tgcagacatt gtggaagaag ctaaaaaggt 3420
aaaaccaaca gtggttgtta atgcagccaa tgtttacctt aaacatggag gaggtgttgc 3480
aggagcctta aataaggcta ctaacaatgc catgcaagtt gaatctgatg attacatagc 3540
tactaatgga ccacttaaag tgggtggtag ttgtgtttta agcggacaca atcttgctaa 3600
acactgtctt catgttgtcg gcccaaatgt taacaaaggt gaagacattc aacttcttaa 3660
gagtgcttat gaaaatttta atcagcacga agttctactt gcaccattat tatcagctgg 3720
tatttttggt gctgacccta tacattcttt aagagtttgt gtagatactg ttcgcacaaa 3780
tgtctactta gctgtctttg ataaaaatct ctatgacaaa cttgtttcaa gctttttgga 3840
aatgaagagt gaaaagcaag ttgaacaaaa gatcgctgag attcctaaag aggaagttaa 3900
gccatttata actgaaagta aaccttcagt tgaacagaga aaacaagatg ataagaaaat 3960
caaagcttgt gttgaagaag ttacaacaac tctggaagaa actaagttcc tcacagaaaa 4020
cttgttactt tatattgaca ttaatggcaa tcttcatcca gattctgcca ctcttgttag 4080
tgacattgac atcactttct taaagaaaga tgctccatat atagtgggtg atgttgttca 4140
agagggtgtt ttaactgctg tggttatacc tactaaaaag gctggtggca ctactgaaat 4200
gctagcgaaa gctttgagaa aagtgccaac agacaattat ataaccactt acccgggtca 4260
gggtttaaat ggttacactg tagaggaggc aaagacagtg cttaaaaagt gtaaaagtgc 4320
cttttacatt ctaccatcta ttatctctaa tgagaagcaa gaaattcttg gaactgtttc 4380
ttggaatttg cgagaaatgc ttgcacatgc agaagaaaca cgcaaattaa tgcctgtctg 4440
tgtggaaact aaagccatag tttcaactat acagcgtaaa tataagggta ttaaaataca 4500
agagggtgtg gttgattatg gtgctagatt ttacttttac accagtaaaa caactgtagc 4560
gtcacttatc aacacactta acgatctaaa tgaaactctt gttacaatgc cacttggcta 4620
tgtaacacat ggcttaaatt tggaagaagc tgctcggtat atgagatctc tcaaagtgcc 4680
agctacagtt tctgtttctt cacctgatgc tgttacagcg tataatggtt atcttacttc 4740
ttcttctaaa acacctgaag aacattttat tgaaaccatc tcacttgctg gttcctataa 4800
agattggtcc tattctggac aatctacaca actaggtata gaatttctta agagaggtga 4860
taaaagtgta tattacacta gtaatcctac cacattccac ctagatggtg aagttatcac 4920
ctttgacaat cttaagacac ttctttcttt gagagaagtg aggactatta aggtgtttac 4980
aacagtagac aacattaacc tccacacgca agttgtggac atgtcaatga catatggaca 5040
acagtttggt ccaacttatt tggatggagc tgatgttact aaaataaaac ctcataattc 5100
acatgaaggt aaaacatttt atgttttacc taatgatgac actctacgtg ttgaggcttt 5160
tgagtactac cacacaactg atcctagttt tctgggtagg tacatgtcag cattaaatca 5220
cactaaaaag tggaaatacc cacaagttaa tggtttaact tctattaaat gggcagataa 5280
caactgttat cttgccactg cattgttaac actccaacaa atagagttga agtttaatcc 5340
acctgctcta caagatgctt attacagagc aagggctggt gaagctgcta acttttgtgc 5400
acttatctta gcctactgta ataagacagt aggtgagtta ggtgatgtta gagaaacaat 5460
gagttacttg tttcaacatg ccaatttaga ttcttgcaaa agagtcttga acgtggtgtg 5520
taaaacttgt ggacaacagc agacaaccct taagggtgta gaagctgtta tgtacatggg 5580
cacactttct tatgaacaat ttaagaaagg tgttcagata ccttgtacgt gtggtaaaca 5640
agctacaaaa tatctagtac aacaggagtc accttttgtt atgatgtcag caccacctgc 5700
tcagtatgaa cttaagcatg gtacatttac ttgtgctagt gagtacactg gtaattacca 5760
gtgtggtcac tataaacata taacttctaa agaaactttg tattgcatag acggtgcttt 5820
acttacaaag tcctcagaat acaaaggtcc tattacggat gttttctaca aagaaaacag 5880
ttacacaaca accataaaac cagttactta taaattggat ggtgttgttt gtacagaaat 5940
tgaccctaag ttggacaatt attataagaa agacaattct tatttcacag agcaaccaat 6000
tgatcttgta ccaaaccaac catatccaaa cgcaagcttc gataatttta agtttgtatg 6060
tgataatatc aaatttgctg atgatttaaa ccagttaact ggttataaga aacctgcttc 6120
aagagagctt aaagttacat ttttccctga cttaaatggt gatgtggtgg ctattgatta 6180
taaacactac acaccctctt ttaagaaagg agctaaattg ttacataaac ctattgtttg 6240
gcatgttaac aatgcaacta ataaagccac gtataaacca aatacctggt gtatacgttg 6300
tctttggagc acaaaaccag ttgaaacatc aaattcgttt gatgtactga agtcagagga 6360
cgcgcaggga atggataatc ttgcctgcga agatctaaaa ccagtctctg aagaagtagt 6420
ggaaaatcct accatacaga aagacgttct tgagtgtaat gtgaaaacta ccgaagttgt 6480
aggagacatt atacttaaac cagcaaataa tagtttaaaa attacagaag aggttggcca 6540
cacagatcta atggctgctt atgtagacaa ttctagtctt actattaaga aacctaatga 6600
attatctaga gtattaggtt tgaaaaccct tgctactcat ggtttagctg ctgttaatag 6660
tgtcccttgg gatactatag ctaattatgc taagcctttt cttaacaaag ttgttagtac 6720
aactactaac atagttacac ggtgtttaaa ccgtgtttgt actaattata tgccttattt 6780
ctttacttta ttgctacaat tgtgtacttt tactagaagt acaaattcta gaattaaagc 6840
atctatgccg actactatag caaagaatac tgttaagagt gtcggtaaat tttgtctaga 6900
ggcttcattt aattatttga agtcacctaa tttttctaaa ctgataaata ttataatttg 6960
gtttttacta ttaagtgttt gcctaggttc tttaatctac tcaaccgctg ctttaggtgt 7020
tttaatgtct aatttaggca tgccttctta ctgtactggt tacagagaag gctatttgaa 7080
ctctactaat gtcactattg caacctactg tactggttct ataccttgta gtgtttgtct 7140
tagtggttta gattctttag acacctatcc ttctttagaa actatacaaa ttaccatttc 7200
atcttttaaa tgggatttaa ctgcttttgg cttagttgca gagtggtttt tggcatatat 7260
tcttttcact aggtttttct atgtacttgg attggctgca atcatgcaat tgtttttcag 7320
ctattttgca gtacatttta ttagtaattc ttggcttatg tggttaataa ttaatcttgt 7380
acaaatggcc ccgatttcag ctatggttag aatgtacatc ttctttgcat cattttatta 7440
tgtatggaaa agttatgtgc atgttgtaga cggttgtaat tcatcaactt gtatgatgtg 7500
ttacaaacgt aatagagcaa caagagtcga atgtacaact attgttaatg gtgttagaag 7560
gtccttttat gtctatgcta atggaggtaa aggcttttgc aaactacaca attggaattg 7620
tgttaattgt gatacattct gtgctggtag tacatttatt agtgatgaag ttgcgagaga 7680
cttgtcacta cagtttaaaa gaccaataaa tcctactgac cagtcttctt acatcgttga 7740
tagtgttaca gtgaagaatg gttccatcca tctttacttt gataaagctg gtcaaaagac 7800
ttatgaaaga cattctctct ctcattttgt taacttagac aacctgagag ctaataacac 7860
taaaggttca ttgcctatta atgttatagt ttttgatggt aaatcaaaat gtgaagaatc 7920
atctgcaaaa tcagcgtctg tttactacag tcagcttatg tgtcaaccta tactgttact 7980
agatcaggca ttagtgtctg atgttggtga tagtgcggaa gttgcagtta aaatgtttga 8040
tgcttacgtt aatacgtttt catcaacttt taacgtacca atggaaaaac tcaaaacact 8100
agttgcaact gcagaagctg aacttgcaaa gaatgtgtcc ttagacaatg tcttatctac 8160
ttttatttca gcagctcggc aagggtttgt tgattcagat gtagaaacta aagatgttgt 8220
tgaatgtctt aaattgtcac atcaatctga catagaagtt actggcgata gttgtaataa 8280
ctatatgctc acctataaca aagttgaaaa catgacaccc cgtgaccttg gtgcttgtat 8340
tgactgtagt gcgcgtcata ttaatgcgca ggtagcaaaa agtcacaaca ttgctttgat 8400
atggaacgtt aaagatttca tgtcattgtc tgaacaacta cgaaaacaaa tacgtagtgc 8460
tgctaaaaag aataacttac cttttaagtt gacatgtgca actactagac aagttgttaa 8520
tgttgtaaca acaaagatag cacttaaggg tggtaaaatt gttaataatt ggttgaagca 8580
gttaattaaa gttacacttg tgttcctttt tgttgctgct attttctatt taataacacc 8640
tgttcatgtc atgtctaaac atactgactt ttcaagtgaa atcataggat acaaggctat 8700
tgatggtggt gtcactcgtg acatagcatc tacagatact tgttttgcta acaaacatgc 8760
tgattttgac acatggttta gccagcgtgg tggtagttat actaatgaca aagcttgccc 8820
attgattgct gcagtcataa caagagaagt gggttttgtc gtgcctggtt tgcctggcac 8880
gatattacgc acaactaatg gtgacttttt gcatttctta cctagagttt ttagtgcagt 8940
tggtaacatc tgttacacac catcaaaact tatagagtac actgactttg caacatcagc 9000
ttgtgttttg gctgctgaat gtacaatttt taaagatgct tctggtaagc cagtaccata 9060
ttgttatgat accaatgtac tagaaggttc tgttgcttat gaaagtttac gccctgacac 9120
acgttatgtg ctcatggatg gctctattat tcaatttcct aacacctacc ttgaaggttc 9180
tgttagagtg gtaacaactt ttgattctga gtactgtagg cacggcactt gtgaaagatc 9240
agaagctggt gtttgtgtat ctactagtgg tagatgggta cttaacaatg attattacag 9300
atctttacca ggagttttct gtggtgtaga tgctgtaaat ttacttacta atatgtttac 9360
accactaatt caacctattg gtgctttgga catatcagca tctatagtag ctggtggtat 9420
tgtagctatc gtagtaacat gccttgccta ctattttatg aggtttagaa gagcttttgg 9480
tgaatacagt catgtagttg cctttaatac tttactattc cttatgtcat tcactgtact 9540
ctgtttaaca ccagtttact cattcttacc tggtgtttat tctgttattt acttgtactt 9600
gacattttat cttactaatg atgtttcttt tttagcacat attcagtgga tggttatgtt 9660
cacaccttta gtacctttct ggataacaat tgcttatatc atttgtattt ccacaaagca 9720
tttctattgg ttctttagta attacctaaa gagacgtgta gtctttaatg gtgtttcctt 9780
tagtactttt gaagaagctg cgctgtgcac ctttttgtta aataaagaaa tgtatctaaa 9840
gttgcgtagt gatgtgctat tacctcttac gcaatataat agatacttag ctctttataa 9900
taagtacaag tattttagtg gagcaatgga tacaactagc tacagagaag ctgcttgttg 9960
tcatctcgca aaggctctca atgacttcag taactcaggt tctgatgttc tttaccaacc 10020
accacaaacc tctatcacct cagctgtttt gcagagtggt tttagaaaaa tggcattccc 10080
atctggtaaa gttgagggtt gtatggtaca agtaacttgt ggtacaacta cacttaacgg 10140
tctttggctt gatgacgtag tttactgtcc aagacatgtg atctgcacct ctgaagacat 10200
gcttaaccct aattatgaag atttactcat tcgtaagtct aatcataatt tcttggtaca 10260
ggctggtaat gttcaactca gggttattgg acattctatg caaaattgtg tacttaagct 10320
taaggttgat acagccaatc ctaagacacc taagtataag tttgttcgca ttcaaccagg 10380
acagactttt tcagtgttag cttgttacaa tggttcacca tctggtgttt accaatgtgc 10440
tatgaggccc aatttcacta ttaagggttc attccttaat ggttcatgtg gtagtgttgg 10500
ttttaacata gattatgact gtgtctcttt ttgttacatg caccatatgg aattaccaac 10560
tggagttcat gctggcacag acttagaagg taacttttat ggaccttttg ttgacaggca 10620
aacagcacaa gcagctggta cggacacaac tattacagtt aatgttttag cttggttgta 10680
cgctgctgtt ataaatggag acaggtggtt tctcaatcga tttaccacaa ctcttaatga 10740
ctttaacctt gtggctatga agtacaatta tgaacctcta acacaagacc atgttgacat 10800
actaggacct ctttctgctc aaactggaat tgccgtttta gatatgtgtg cttcattaaa 10860
agaattactg caaaatggta tgaatggacg taccatattg ggtagtgctt tattagaaga 10920
tgaatttaca ccttttgatg ttgttagaca atgctcaggt gttactttcc aaagtgcagt 10980
gaaaagaaca atcaagggta cacaccactg gttgttactc acaattttga cttcactttt 11040
agttttagtc cagagtactc aatggtcttt gttctttttt ttttatgaaa atgccttttt 11100
accttttgct atgggtatta ttgctatgtc tgcttttgca atgatgtttg tcaaacataa 11160
gcatgcattt ctctgtttgt ttttgttacc ttctcttgcc actgtagctt attttaatat 11220
ggtctatatg cctgctagtt gggtgatgcg tattatgaca tggttggata tggttgatac 11280
tagtttgtct ggttttaagc taaaagactg tgttatgtat gcatcagctg tagtgttact 11340
aatccttatg acagcaagaa ctgtgtatga tgatggtgct aggagagtgt ggacacttat 11400
gaatgtcttg acactcgttt ataaagttta ttatggtaat gctttagatc aagccatttc 11460
catgtgggct cttataatct ctgttacttc taactactca ggtgtagtta caactgtcat 11520
gtttttggcc agaggtattg tttttatgtg tgttgagtat tgccctattt tcttcataac 11580
tggtaataca cttcagtgta taatgctagt ttattgtttc ttaggctatt tttgtacttg 11640
ttactttggc ctcttttgtt tactcaaccg ctactttaga ctgactcttg gtgtttatga 11700
ttacttagtt tctacacagg agtttagata tatgaattca cagggactac tcccacccaa 11760
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aactattttc tttgctggca tactaattgt tacgactatt gtatacctta caatagtgta 25860
acttcttcaa ttgtcattac ttcaggtgat ggcacaacaa gtcctatttc tgaacatgac 25920
taccagattg gtggttatac tgaaaaatgg gaatctggag taaaagactg tgttgtatta 25980
cacagttact tcacttcaga ctattaccag ctgtactcaa ctcaattgag tacagacact 26040
ggtgttgaac atgttacctt cttcatctac aataaaattg ttgatgagcc tgaagaacat 26100
gtccaaattc acacaatcga cggttcatcc ggagttgtta atccagtaat ggaaccaatt 26160
tatgatgaac cgacgacgac tactagcgtg cctttgtaag cacaagctga tgagtacgaa 26220
cttatgtact cattcgtttc ggaagagaca ggtacgttaa tagttaatag cgtacttctt 26280
tttcttgctt tcgtggtatt cttgctagtt acactagcca tccttactgc gcttcgattg 26340
tgtgcgtact gctgcaatat tgttaacgtg agtcttgtaa aaccttcttt ttacgtttac 26400
tctcgtgtta aaaatctgaa ttcttctaga gttcctgatc ttctggtcta aacgaactaa 26460
atattatatt agtttttctg tttggaactt taattttagc catggcagat tccaacggta 26520
ctattaccgt tgaagagctt aaaaagctcc ttgaacaatg gaacctagta ataggtttcc 26580
tattccttac atggatttgt cttctacaat ttgcctatgc caacaggaat aggtttttgt 26640
atataattaa gttaattttc ctctggctgt tatggccagt aactttagct tgttttgtgc 26700
ttgctgctgt ttacagaata aattggatca ccggtggaat tgctatcgca atggcttgtc 26760
ttgtaggctt gatgtggctc agctacttca ttgcttcttt cagactgttt gcgcgtacgc 26820
gttccatgtg gtcattcaat ccagaaacta acattcttct caacgtgcca ctccatggca 26880
ctattctgac cagaccgctt ctagaaagtg aactcgtaat cggagctgtg atccttcgtg 26940
gacatcttcg tattgctgga caccatctag gacgctgtga catcaaggac ctgcctaaag 27000
aaatcactgt tgctacatca cgaacgcttt cttattacaa attgggagct tcgcagcgtg 27060
tagcaggtga ctcaggtttt gctgcataca gtcgctacag gattggcaac tataaattaa 27120
acacagacca ttccagtagc agtgacaata ttgctttgct tgtacagtaa gtgacaacag 27180
atgtttcatc tcgttgactt tcaggttact atagcagaga tattactaat tattatgagg 27240
acttttaaag tttccatttg gaatcttgat tacatcataa acctcataat taaaaattta 27300
tctaagtcac taactgagaa taaatattct caattagatg aagagcaacc aatggagatt 27360
gattaaacga acatgaaaat tattcttttc ttggcactga taacactcgc tacttgtgag 27420
ctttatcact accaagagtg tgttagaggt acaacagtac ttttaaaaga accttgctct 27480
tctggaacat acgagggcaa ttcaccattt catcctctag ctgataacaa atttgcactg 27540
acttgcttta gcactcaatt tgcttttgct tgtcctgacg gcgtaaaaca cgtctatcag 27600
ttacgtgcca gatcagtttc acctaaactg ttcatcagac aagaggaagt tcaagaactt 27660
tactctccaa tttttcttat tgttgcggca atagtgttta taacactttg cttcacactc 27720
aaaagaaaga cagaatgatt gaactttcat taattgactt ctatttgtgc tttttagcct 27780
ttctgctatt ccttgtttta attatgctta ttatcttttg gttctcactt gaactgcaag 27840
atcataatga aacttgtcac gcctaaacga acatgaaatt tcttgttttc ttaggaatca 27900
tcacaactgt agctgcattt caccaagaat gtagtttaca gtcatgtact caacatcaac 27960
catatgtagt tgatgacccg tgtcctattc acttctattc taaatggtat attagagtag 28020
gagctagaaa atcagcacct ttaattgaat tgtgcgtgga tgaggctggt tctaaatcac 28080
ccattcagta catcgatatc ggtaattata cagtttcctg tttacctttt acaattaatt 28140
gccaggaacc taaattgggt agtcttgtag tgcgttgttc gttctatgaa gactttttag 28200
agtatcatga cgttcgtgtt gttttagatt tcatctaaac gaacaaacta aaatgtctga 28260
taatggaccc caaaatcagc gaaatgcacc ccgcattacg tttggtggac cctcagattc 28320
aactggcagt aaccagaatg gagaacgcag tggggcgcga tcaaaacaac gtcggcccca 28380
aggtttaccc aataatactg cgtcttggtt caccgctctc actcaacatg gcaaggaaga 28440
ccttaaattc cctcgaggac aaggcgttcc aattaacacc aatagcagtc cagatgacca 28500
aattggctac taccgaagag ctaccagacg aattcgtggt ggtgacggta aaatgaaaga 28560
tctcagtcca agatggtatt tctactacct aggaactggg ccagaagctg gacttcccta 28620
tggtgctaac aaagacggca tcatatgggt tgcaactgag ggagccttga atacaccaaa 28680
agatcacatt ggcacccgca atcctgctaa caatgctgca atcgtgctac aacttcctca 28740
aggaacaaca ttgccaaaag gcttctacgc agaagggagc agaggcggca gtcaagcctc 28800
ttctcgttcc tcatcacgta gtcgcaacag ttcaagaaat tcaactccag gcagcagtag 28860
gggaacttct cctgctagaa tggctggcaa tggcggtgat gctgctcttg ctttgctgct 28920
gcttgacaga ttgaaccagc ttgagagcaa aatgtctggt aaaggccaac aacaacaagg 28980
ccaaactgtc actaagaaat ctgctgctga ggcttctaag aagcctcggc aaaaacgtac 29040
tgccactaaa gcatacaatg taacacaagc tttcggcaga cgtggtccag aacaaaccca 29100
aggaaatttt ggggaccagg aactaatcag acaaggaact gattacaaac attggccgca 29160
aattgcacaa tttgccccca gcgcttcagc gttcttcgga atgtcgcgca ttggcatgga 29220
agtcacacct tcgggaacgt ggttgaccta cacaggtgcc atcaaattgg atgacaaaga 29280
tccaaatttc aaagatcaag tcattttgct gaataagcat attgacgcat acaaaacatt 29340
cccaccaaca gagcctaaaa aggacaaaaa gaagaaggct gatgaaactc aagccttacc 29400
gcagagacag aagaaacagc aaactgtgac tcttcttcct gctgcagatt tggatgattt 29460
ctccaaacaa ttgcaacaat ccatgagcag tgctgactca actcaggcct aaactcatgc 29520
agaccacaca aggcagatgg gctatataaa cgttttcgct tttccgttta cgatatatag 29580
tctactcttg tgcagaatga attctcgtaa ctacatagca caagtagatg tagttaactt 29640
taatctcaca tagcaatctt taatcagtgt gtaacattag ggaggacttg aaagagccac 29700
cacattttca ccgaggccac gcggagtacg atcgagtgta cagtgaacaa tgctagggag 29760
agctgcctat atggaagagc cctaatgtgt aaaattaatt ttagtagtgc tatccccatg 29820
tgattttaat agcttcttag gagaatgaca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 29880
aa 29882
<210> 2
<211> 1266
<212> PRT
<213> 减毒株DEL-7aa的S蛋白
<400> 2
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile Arg Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Val Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr
675 680 685
Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser
690 695 700
Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu
705 710 715 720
Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys
725 730 735
Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe
740 745 750
Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp
755 760 765
Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr
770 775 780
Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro
785 790 795 800
Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe
805 810 815
Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp
820 825 830
Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe
835 840 845
Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala
850 855 860
Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr
865 870 875 880
Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala
885 890 895
Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn
900 905 910
Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln
915 920 925
Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val
930 935 940
Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser
945 950 955 960
Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg
965 970 975
Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly
980 985 990
Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala
995 1000 1005
Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser
1010 1015 1020
Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys
1025 1030 1035
Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly Val
1040 1045 1050
Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe
1055 1060 1065
Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro
1070 1075 1080
Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr
1085 1090 1095
Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr
1100 1105 1110
Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn
1115 1120 1125
Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp
1145 1150 1155
Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln
1160 1165 1170
Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile
1190 1195 1200
Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile
1205 1210 1215
Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys
1220 1225 1230
Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys
1235 1240 1245
Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys Gly Val Lys Leu
1250 1255 1260
His Tyr Thr
1265
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 减毒株DEL-7aa的S基因发生缺失突变的核苷酸序列
<400> 3
aattctcctc ggcgggcacg t 21
<210> 4
<211> 29903
<212> DNA
<213> 分离株V34的全基因组cDNA
<400> 4
attaaaggtt tataccttcc caggtaacaa accaaccaac tttcgatctc ttgtagatct 60
gttctctaaa cgaactttaa aatctgtgtg gctgtcactc ggctgcatgc ttagtgcact 120
cacgcagtat aattaataac taattactgt cgttgacagg acacgagtaa ctcgtctatc 180
ttctgtaggc tgcttacggt ttcgtccgtg ttgcagccga tcatcagcac atctaggttt 240
cgtccgggtg tgaccgaaag gtaagatgga gagccttgtc cctggtttca acgagaaaac 300
acacgtccaa ctcagtttgc ctgttttaca ggttcgcgac gtgctcgtac gtggctttgg 360
agactccgtg gaggaggtct tatcagaggc acgtcaacat cttaaagatg gcacttgtgg 420
cttagtagaa gttgaaaaag gcgttttgcc tcaacttgaa cagccctatg tgttcatcaa 480
acgttcggat gctcgaactg cacctcatgg tcatgttatg gttgagctgg tagcagaact 540
cgaaggcatt cagtacggtc gtagtggtga gacacttggt gtccttgtcc ctcatgtggg 600
cgaaatacca gtggcttacc gcaaggttct tcttcgtaag aacggtaata aaggagctgg 660
tggccatagt tacggcgccg atctaaagtc atttgactta ggcgacgagc ttggcactga 720
tccttatgaa gattttcaag aaaactggaa cactaaacat agcagtggtg ttacccgtga 780
actcatgcgt gagcttaacg gaggggcata cactcgctat gtcgataaca acttctgtgg 840
ccctgatggc taccctcttg agtgcattaa agaccttcta gcacgtgctg gtaaagcttc 900
atgcactttg tccgaacaac tggactttat tgacactaag aggggtgtat actgctgccg 960
tgaacatgag catgaaattg cttggtacac ggaacgttct gaaaagagct atgaattgca 1020
gacacctttt gaaattaaat tggcaaagaa atttgacacc ttcaatgggg aatgtccaaa 1080
ttttgtattt cccttaaatt ccataatcaa gactattcaa ccaagggttg aaaagaaaaa 1140
gcttgatggc tttatgggta gaattcgatc tgtctatcca gttgcgtcac caaatgaatg 1200
caaccaaatg tgcctttcaa ctctcatgaa gtgtgatcat tgtggtgaaa cttcatggca 1260
gacgggcgat tttgttaaag ccacttgcga attttgtggc actgagaatt tgactaaaga 1320
aggtgccact acttgtggtt acttacccca aaatgctgtt gttaaaattt attgtccagc 1380
atgtcacaat tcagaagtag gacctgagca tagtcttgcc gaataccata atgaatctgg 1440
cttgaaaacc attcttcgta agggtggtcg cactattgcc tttggaggct gtgtgttctc 1500
ttatgttggt tgccataaca agtgtgccta ttgggttcca cgtgctagcg ctaacatagg 1560
ttgtaaccat acaggtgttg ttggagaagg ttccgaaggt cttaatgaca accttcttga 1620
aatactccaa aaagagaaag tcaacatcaa tattgttggt gactttaaac ttaatgaaga 1680
gatcgccatt attttggcat ctttttctgc ttccacaagt gcttttgtgg aaactgtgaa 1740
aggtttggat tataaagcat tcaaacaaat tgttgaatcc tgtggtaatt ttaaagttac 1800
aaaaggaaaa gctaaaaaag gtgcctggaa tattggtgaa cagaaatcaa tactgagtcc 1860
tctttatgca tttgcatcag aggctgctcg tgttgtacga tcaattttct cccgcactct 1920
tgaaactgct caaaattctg tgcgtgtttt acagaaggcc gctataacaa tactagatgg 1980
aatttcacag tattcactga gactcattga tgctatgatg ttcacatctg atttggctac 2040
taacaatcta gttgtaatgg cctacattac aggtggtgtt gttcagttga cttcgcagtg 2100
gctaactaac atctttggca ctgtttatga aaaactcaaa cccgtccttg attggcttga 2160
agagaagttt aaggaaggtg tagagtttct tagagacggt tgggaaattg ttaaatttat 2220
ctcaacctgt gcttgtgaaa ttgtcggtgg acaaattgtc acctgtgcaa aggaaattaa 2280
ggagagtgtt cagacattct ttaagcttgt aaataaattt ttggctttgt gtgctgactc 2340
tatcattatt ggtggagcta aacttaaagc cttgaattta ggtgaaacat ttgtcacgca 2400
ctcaaaggga ttgtacagaa agtgtgttaa atccagagaa gaaactggcc tactcatgcc 2460
tctaaaagcc ccaaaagaaa ttatcttctt agagggagaa acacttccca cagaagtgtt 2520
aacagaggaa gttgtcttga aaactggtga tttacaacca ttagaacaac ctactagtga 2580
agctgttgaa gctccattgg ttggtacacc agtttgtatt aacgggctta tgttgctcga 2640
aatcaaagac acagaaaagt actgtgccct tgcacctaat atgatggtaa caaacaatac 2700
cttcacactc aaaggcggtg caccaacaaa ggttactttt ggtgatgaca ctgtgataga 2760
agtgcaaggt tacaagagtg tgaatatcac ttttgaactt gatgaaagga ttgataaagt 2820
acttaatgag aagtgctctg cctatacagt tgaactcggt acagaagtaa atgagttcgc 2880
ctgtgttgtg gcagatgctg tcataaaaac tttgcaacca gtatctgaat tacttacacc 2940
actgggcatt gatttagatg agtggagtat ggctacatac tacttatttg atgagtctgg 3000
tgagtttaaa ttggcttcac atatgtattg ttctttctac cctccagatg aggatgaaga 3060
agaaggtgat tgtgaagaag aagagtttga gccatcaact caatatgagt atggtactga 3120
agatgattac caaggtaaac ctttggaatt tggtgccact tctgctgctc ttcaacctga 3180
agaagagcaa gaagaagatt ggttagatga tgatagtcaa caaactgttg gtcaacaaga 3240
cggcagtgag gacaatcaga caactactat tcaaacaatt gttgaggttc aacctcaatt 3300
agagatggaa cttacaccag ttgttcagac tattgaagtg aatagtttta gtggttattt 3360
aaaacttact gacaatgtat acattaaaaa tgcagacatt gtggaagaag ctaaaaaggt 3420
aaaaccaaca gtggttgtta atgcagccaa tgtttacctt aaacatggag gaggtgttgc 3480
aggagcctta aataaggcta ctaacaatgc catgcaagtt gaatctgatg attacatagc 3540
tactaatgga ccacttaaag tgggtggtag ttgtgtttta agcggacaca atcttgctaa 3600
acactgtctt catgttgtcg gcccaaatgt taacaaaggt gaagacattc aacttcttaa 3660
gagtgcttat gaaaatttta atcagcacga agttctactt gcaccattat tatcagctgg 3720
tatttttggt gctgacccta tacattcttt aagagtttgt gtagatactg ttcgcacaaa 3780
tgtctactta gctgtctttg ataaaaatct ctatgacaaa cttgtttcaa gctttttgga 3840
aatgaagagt gaaaagcaag ttgaacaaaa gatcgctgag attcctaaag aggaagttaa 3900
gccatttata actgaaagta aaccttcagt tgaacagaga aaacaagatg ataagaaaat 3960
caaagcttgt gttgaagaag ttacaacaac tctggaagaa actaagttcc tcacagaaaa 4020
cttgttactt tatattgaca ttaatggcaa tcttcatcca gattctgcca ctcttgttag 4080
tgacattgac atcactttct taaagaaaga tgctccatat atagtgggtg atgttgttca 4140
agagggtgtt ttaactgctg tggttatacc tactaaaaag gctggtggca ctactgaaat 4200
gctagcgaaa gctttgagaa aagtgccaac agacaattat ataaccactt acccgggtca 4260
gggtttaaat ggttacactg tagaggaggc aaagacagtg cttaaaaagt gtaaaagtgc 4320
cttttacatt ctaccatcta ttatctctaa tgagaagcaa gaaattcttg gaactgtttc 4380
ttggaatttg cgagaaatgc ttgcacatgc agaagaaaca cgcaaattaa tgcctgtctg 4440
tgtggaaact aaagccatag tttcaactat acagcgtaaa tataagggta ttaaaataca 4500
agagggtgtg gttgattatg gtgctagatt ttacttttac accagtaaaa caactgtagc 4560
gtcacttatc aacacactta acgatctaaa tgaaactctt gttacaatgc cacttggcta 4620
tgtaacacat ggcttaaatt tggaagaagc tgctcggtat atgagatctc tcaaagtgcc 4680
agctacagtt tctgtttctt cacctgatgc tgttacagcg tataatggtt atcttacttc 4740
ttcttctaaa acacctgaag aacattttat tgaaaccatc tcacttgctg gttcctataa 4800
agattggtcc tattctggac aatctacaca actaggtata gaatttctta agagaggtga 4860
taaaagtgta tattacacta gtaatcctac cacattccac ctagatggtg aagttatcac 4920
ctttgacaat cttaagacac ttctttcttt gagagaagtg aggactatta aggtgtttac 4980
aacagtagac aacattaacc tccacacgca agttgtggac atgtcaatga catatggaca 5040
acagtttggt ccaacttatt tggatggagc tgatgttact aaaataaaac ctcataattc 5100
acatgaaggt aaaacatttt atgttttacc taatgatgac actctacgtg ttgaggcttt 5160
tgagtactac cacacaactg atcctagttt tctgggtagg tacatgtcag cattaaatca 5220
cactaaaaag tggaaatacc cacaagttaa tggtttaact tctattaaat gggcagataa 5280
caactgttat cttgccactg cattgttaac actccaacaa atagagttga agtttaatcc 5340
acctgctcta caagatgctt attacagagc aagggctggt gaagctgcta acttttgtgc 5400
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gagttacttg tttcaacatg ccaatttaga ttcttgcaaa agagtcttga acgtggtgtg 5520
taaaacttgt ggacaacagc agacaaccct taagggtgta gaagctgtta tgtacatggg 5580
cacactttct tatgaacaat ttaagaaagg tgttcagata ccttgtacgt gtggtaaaca 5640
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tagtttgtct ggttttaagc taaaagactg tgttatgtat gcatcagctg tagtgttact 11340
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gaatgtcttg acactcgttt ataaagttta ttatggtaat gctttagatc aagccatttc 11460
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aatgtcgata gatatcctgc taattccatt gtttgtagat ttgacactag agtgctatct 19260
aaccttaact tgcctggttg tgatggtggc agtttgtatg taaataaaca tgcattccac 19320
acaccagctt ttgataaaag tgcttttgtt aatttaaaac aattaccatt tttctattac 19380
tctgacagtc catgtgagtc tcatggaaaa caagtagtgt cagatataga ttatgtacca 19440
ctaaagtctg ctacgtgtat aacacgttgc aatttaggtg gtgctgtctg tagacatcat 19500
gctaatgagt acagattgta tctcgatgct tataacatga tgatctcagc tggctttagc 19560
ttgtgggttt acaaacaatt tgatacttat aacctctgga acacttttac aagacttcag 19620
agtttagaaa atgtggcttt taatgttgta aataagggac actttgatgg acaacagggt 19680
gaagtaccag tttctatcat taataacact gtttacacaa aagttgatgg tgttgatgta 19740
gaattgtttg aaaataaaac aacattacct gttaatgtag catttgagct ttgggctaag 19800
cgcaacatta aaccagtacc agaggtgaaa atactcaata atttgggtgt ggacattgct 19860
gctaatactg tgatctggga ctacaaaaga gatgctccag cacatatatc tactattggt 19920
gtttgttcta tgactgacat agccaagaaa ccaactgaaa cgatttgtgc accactcact 19980
gtcttttttg atggtagagt tgatggtcaa gtagacttat ttagaaatgc ccgtaatggt 20040
gttcttatta cagaaggtag tgttaaaggt ttacaaccat ctgtaggtcc caaacaagct 20100
agtcttaatg gagtcacatt aattggagaa gccgtaaaaa cacagttcaa ttattataag 20160
aaagttgatg gtgttgtcca acaattacct gaaacttact ttactcagag tagaaattta 20220
caagaattta aacccaggag tcaaatggaa attgatttct tagaattagc tatggatgaa 20280
ttcattgaac ggtataaatt agaaggctat gccttcgaac atatcgttta tggagatttt 20340
agtcatagtc agttaggtgg tttacatcta ctgattggac tagctaaacg ttttaaggaa 20400
tcaccttttg aattagaaga ttttattcct atggacagta cagttaaaaa ctatttcata 20460
acagatgcgc aaacaggttc atctaagtgt gtgtgttctg ttattgattt attacttgat 20520
gattttgttg aaataataaa atcccaagat ttatctgtag tttctaaggt tgtcaaagtg 20580
actattgact atacagaaat ttcatttatg ctttggtgta aagatggcca tgtagaaaca 20640
ttttacccaa aattacaatc tagtcaagcg tggcaaccgg gtgttgctat gcctaatctt 20700
tacaaaatgc aaagaatgct attagaaaag tgtgaccttc aaaattatgg tgatagtgca 20760
acattaccta aaggcataat gatgaatgtc gcaaaatata ctcaactgtg tcaatattta 20820
aacacattaa cattagctgt accctataat atgagagtta tacattttgg tgctggttct 20880
gataaaggag ttgcaccagg tacagctgtt ttaagacagt ggttgcctac gggtacgctg 20940
cttgtcgatt cagatcttaa tgactttgtc tctgatgcag attcaacttt gattggtgat 21000
tgtgcaactg tacatacagc taataaatgg gatctcatta ttagtgatat gtacgaccct 21060
aagactaaaa atgttacaaa agaaaatgac tctaaagagg gttttttcac ttacatttgt 21120
gggtttatac aacaaaagct agctcttgga ggttccgtgg ctataaagat aacagaacat 21180
tcttggaatg ctgatcttta taagctcatg ggacacttcg catggtggac agcctttgtt 21240
actaatgtga atgcgtcatc atctgaagca tttttaattg gatgtaatta tcttggcaaa 21300
ccacgcgaac aaatagatgg ttatgtcatg catgcaaatt acatattttg gaggaataca 21360
aatccaattc agttgtcttc ctattcttta tttgacatga gtaaatttcc ccttaaatta 21420
aggggtactg ctgttatgtc tttaaaagaa ggtcaaatca atgatatgat tttatctctt 21480
cttagtaaag gtagacttat aattagagaa aacaacagag ttgttatttc tagtgatgtt 21540
cttgttaaca actaaacgaa caatgtttgt ttttcttgtt ttattgccac tagtctctag 21600
tcagtgtgtt aatcttacaa ccagaactca attaccccct gcatacacta attctttcac 21660
acgtggtgtt tattaccctg acaaagtttt cagatcctca gttttacatt caactcagga 21720
cttgttctta cctttctttt ccaatgttac ttggttccat gctatacatg tctctgggac 21780
caatggtact aagaggtttg ataaccctgt cctaccattt aatgatggtg tttattttgc 21840
ttccactgag aagtctaaca taataagagg ctggattttt ggtactactt tagattcgaa 21900
gacccagtcc ctacttattg ttaataacgc tactaatgtt gttattaaag tctgtgaatt 21960
tcaattttgt aatgatccat ttttgggtgt ttattaccac aaaaacaaca aaagttggat 22020
ggaaagtgag ttcagagttt attctagtgc gaataattgc acttttgaat atgtctctca 22080
gccttttctt atggaccttg aaggaaaaca gggtaatttc aaaaatctta gggaatttgt 22140
gtttaagaat attgatggtt attttaaaat atattctaag cacacgccta ttaatttagt 22200
gcgtgatctc cctcagggtt tttcggcttt agaaccattg gtagatttgc caataggtat 22260
taacatcact aggtttcaaa ctttacttgc tttacataga agttatttga ctcctggtga 22320
ttcttcttca ggttggacag ctggtgctgc agcttattat gtgggttatc ttcaacctag 22380
gacttttcta ttaaaatata atgaaaatgg aaccattaca gatgctgtag actgtgcact 22440
tgaccctctc tcagaaacaa agtgtacgtt gaaatccttc actgtagaaa aaggaatcta 22500
tcaaacttct aactttagag tccaaccaac agaatctatt gttagatttc ctaatattac 22560
aaacttgtgc ccttttggtg aagtttttaa cgccaccaga tttgcatctg tttatgcttg 22620
gaacaggaag agaatcagca actgtgttgc tgattattct gtcctatata attccgcatc 22680
attttccact tttaagtgtt atggagtgtc tcctactaaa ttaaatgatc tctgctttac 22740
taatgtctat gcagattcat ttgtaattag aggtgatgaa gtcagacaaa tcgctccagg 22800
gcaaactgga aagattgctg attataatta taaattacca gatgatttta caggctgcgt 22860
tatagcttgg aattctaaca atcttgattc taaggttggt ggtaattata attacctgta 22920
tagattgttt aggaagtcta atctcaaacc ttttgagaga gatatttcaa ctgaaatcta 22980
tcaggccggt agcacacctt gtaatggtgt tgaaggtttt aattgttact ttcctttaca 23040
atcatatggt ttccaaccca ctaatggtgt tggttaccaa ccatacagag tagtagtact 23100
ttcttttgaa cttctacatg caccagcaac tgtttgtgga cctaaaaagt ctactaattt 23160
ggttaaaaac aaatgtgtca atttcaactt caatggttta acaggcacag gtgttcttac 23220
tgagtctaac aaaaagtttc tgcctttcca acaatttggc agagacattg ctgacactac 23280
tgatgctgtc cgtgatccac agacacttga gattcttgac attacaccat gttcttttgg 23340
tggtgtcagt gttataacac caggaacaaa tacttctaac caggttgctg ttctttatca 23400
ggatgttaac tgcacagaag tccctgttgc tattcatgca gatcaactta ctcctacttg 23460
gcgtgtttat tctacaggtt ctaatgtttt tcaaacacgt gcaggctgtt taataggggt 23520
tgaacatgtc aacaactcat atgagtgtga catacccatt ggtgcaggta tatgcgctag 23580
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tgcctacact atgtcacttg gtgcagaaaa ttcagttgct tactctaata actctattgc 23700
catacccaca aattttacta ttagtgttac cacagaaatt ctaccagtgt ctatgaccaa 23760
gacatcagta gattgtacaa tgtacatttg tggtgattca actgaatgca gcaatctttt 23820
gttgcaatat ggcagttttt gtacacaatt aaaccgtgct ttaactggaa tagctgttga 23880
acaagacaaa aacacccaag aagtttttgc acaagtcaaa caaatttaca aaacaccacc 23940
aattaaagat tttggtggtt ttaatttttc acaaatatta ccagatccat caaaaccaag 24000
caagaggtca tttattgaag atctactttt caacaaagtg acacttgcag atgctggctt 24060
catcaaacaa tatggtgatt gccttggtga tattgctgct agagacctca tttgtgcaca 24120
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cacttctgca ctgttagcgg gtacaatcac ttctggttgg acctttggtg caggtgctgc 24240
attacaaata ccatttgcta tgcaaatggc ttataggttt aatggtattg gagttacaca 24300
gaatgttctc tatgagaacc aaaaattgat tgccaaccaa tttaatagtg ctattggcaa 24360
aattcaagac tcactttctt ccacagcaag tgcacttgga aaacttcaag atgtggtcaa 24420
ccaaaatgca caagctttaa acacgcttgt taaacaactt agctccaatt ttggtgcaat 24480
ttcaagtgtt ttaaatgata tcctttcacg tcttgacaaa gttgaggctg aagtgcaaat 24540
tgataggttg atcacaggca gacttcaaag tttgcagaca tatgtgactc aacaattaat 24600
tagagctgca gaaatcagag cttctgctaa tcttgctgct actaaaatgt cagagtgtgt 24660
acttggacaa tcaaaaagag ttgatttttg tggaaagggc tatcatctta tgtccttccc 24720
tcagtcagca cctcatggtg tagtcttctt gcatgtgact tatgtccctg cacaagaaaa 24780
gaacttcaca actgctcctg ccatttgtca tgatggaaaa gcacactttc ctcgtgaagg 24840
tgtctttgtt tcaaatggca cacactggtt tgtaacacaa aggaattttt atgaaccaca 24900
aatcattact acagacaaca catttgtgtc tggtaactgt gatgttgtaa taggaattgt 24960
caacaacaca gtttatgatc ctttgcaacc tgaattagac tcattcaagg aggagttaga 25020
taaatatttt aagaatcata catcaccaga tgttgattta ggtgacatct ctggcattaa 25080
tgcttcagtt gtaaacattc aaaaagaaat tgaccgcctc aatgaggttg ccaagaattt 25140
aaatgaatct ctcatcgatc tccaagaact tggaaagtat gagcagtata taaaatggcc 25200
atggtacatt tggctaggtt ttatagctgg cttgattgcc atagtaatgg tgacaattat 25260
gctttgctgt atgaccagtt gctgtagttg tctcaagggc tgttgttctt gtggatcctg 25320
ctgcaaattt gatgaagacg actctgagcc agtgctcaaa ggagtcaaat tacattacac 25380
ataaacgaac ttatggattt gtttatgaga atcttcacaa ttggaactgt aactttgaag 25440
caaggtgaaa tcaaggatgc tactccttca gattttgttc gcgctactgc aacgataccg 25500
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ataacactcg ctacttgtga gctttatcac taccaagagt gtgttagagg tacaacagta 27480
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gctgataaca aatttgcact gacttgcttt agcactcaat ttgcttttgc ttgtcctgac 27600
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gtttaccttt tacaattaat tgccaggaac ctaaattggg tagtcttgta gtgcgttgtt 28200
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aatcgtgcta caacttcctc aaggaacaac attgccaaaa ggcttctacg cagaagggag 28800
cagaggcggc agtcaagcct cttctcgttc ctcatcacgt agtcgcaaca gttcaagaaa 28860
ttcaactcca ggcagcagta ggggaacttc tcctgctaga atggctggca atggcggtga 28920
tgctgctctt gctttgctgc tgcttgacag attgaaccag cttgagagca aaatgtctgg 28980
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aatgtcgcgc attggcatgg aagtcacacc ttcgggaacg tggttgacct acacaggtgc 29280
catcaaattg gatgacaaag atccaaattt caaagatcaa gtcattttgc tgaataagca 29340
tattgacgca tacaaaacat tcccaccaac agagcctaaa aaggacaaaa agaagaaggc 29400
tgatgaaact caagccttac cgcagagaca gaagaaacag caaactgtga ctcttcttcc 29460
tgctgcagat ttggatgatt tctccaaaca attgcaacaa tccatgagca gtgctgactc 29520
aactcaggcc taaactcatg cagaccacac aaggcagatg ggctatataa acgttttcgc 29580
ttttccgttt acgatatata gtctactctt gtgcagaatg aattctcgta actacatagc 29640
acaagtagat gtagttaact ttaatctcac atagcaatct ttaatcagtg tgtaacatta 29700
gggaggactt gaaagagcca ccacattttc accgaggcca cgcggagtac gatcgagtgt 29760
acagtgaaca atgctaggga gagctgccta tatggaagag ccctaatgtg taaaattaat 29820
tttagtagtg ctatccccat gtgattttaa tagcttctta ggagaatgac aaaaaaaaaa 29880
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 29903
<210> 5
<211> 1273
<212> PRT
<213> 分离株V34的S蛋白
<400> 5
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Val Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 6
<211> 41
<212> DNA
<213> S22-F
<400> 6
gattacgcca agctttacaa tctagtcaag cgtggcaacc g 41
<210> 7
<211> 38
<212> DNA
<213> S22-R
<400> 7
gattacgcca agcttcaata agtagggact gggtcttc 38
<210> 8
<211> 38
<212> DNA
<213> S23-F
<400> 8
gattacgcca agcttctggg accaatggta ctaagagg 38
<210> 9
<211> 38
<212> DNA
<213> S23-R
<400> 9
gattacgcca agcttgcacc aagtgacata gtgtaggc 38
<210> 10
<211> 38
<212> DNA
<213> S24-F
<400> 10
gattacgcca agcttccgtg atccacagac acttgaga 38
<210> 11
<211> 39
<212> DNA
<213> S24-R
<400> 11
gattacgcca agcttcagca actggtcata cagcaaagc 39
<210> 12
<211> 38
<212> DNA
<213> S25-F
<400> 12
gattacgcca agcttcgcct caatgaggtt gccaagaa 38
<210> 13
<211> 39
<212> DNA
<213> S25-R
<400> 13
gattacgcca agcttgagcc acatcaagcc tacaagaca 39
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> CoV-F3
<400> 14
tcctggtgat tcttcttcag gt 22
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> CoV-R3
<400> 15
tctgagagag ggtcaagtgc 20
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> CoV-P3
<400> 16
agctgcagca ccagctgtcc a 21

Claims (10)

1.一株SARS-CoV-2减毒株，其特征在于，相比于野生型SARS-CoV-2，所述减毒株的基因组RNA对应的cDNA具有自5’末端起23597-23617位核苷酸的缺失。
2.根据权利要求1所述的减毒株，其中，所述减毒株的基因组RNA对应的cDNA如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示。
3.一种包含SARS-CoV-2减毒株的基因组RNA对应的cDNA的DNA分子，其特征在于，相比于野生型SARS-CoV-2，所述减毒株的基因组RNA对应的cDNA具有自5’末端起第23597-23617位核苷酸的缺失。
4.根据权利要求3所述的DNA分子，其中，所述cDNA的序列如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示。
5.权利要求1或2所述的减毒株和/或权利要求3或4中所述的DNA分子在治疗和/或预防新冠肺炎中的应用。
6.权利要求1或2所述的减毒株和/或权利要求3或4中所述的DNA分子在研究和/或制备SARS-CoV-2病毒疫苗中的应用。
7.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物中含有活性成分和辅料，所述活性成分包括权利要求1或2所述的减毒株和/或权利要求3或4中所述的DNA分子。
8.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其中，所述活性成分为灭活后的所述减毒株和/或所述DNA分子；
和/或，所述活性成分为减活后的所述减毒株和/或所述DNA分子。
9.根据权利要求7或8所述的疫苗组合物，其中，所述灭活的方式选自甲醛灭活和/或β-丙内酯灭活；
和/或，所述减活的方式选自连续传代和/或基因工程改造。
10.根据权利要求7-9中任意一项所述的疫苗组合物，其中，所述辅料选自：吸附剂、防腐剂、稳定剂和乳化剂中的至少一种。
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