CN112147327B

CN112147327B - 一种检测沙门氏菌抗体的elisa试剂盒及其检测方法和用途

Info

Publication number: CN112147327B
Application number: CN202011030782.5A
Authority: CN
Inventors: 郭莉莉; 廖晓萍; 赵永达; 王民歌; 靳文杰
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2020-09-27
Filing date: 2020-09-27
Publication date: 2022-02-01
Anticipated expiration: 2040-09-27
Also published as: CN112147327A

Abstract

本发明涉及一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒及其检测方法和用途，属于微生物免疫学技术领域。包括抗原蛋白或抗原蛋白溶液或包被所述抗原蛋白溶液的包被板、酶标抗体、显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。该试剂盒可快速、特异、灵敏的检测血清中的沙门氏菌抗体，检测血清抗体的灵敏度为1∶1000；该试剂盒操作简便、成本低廉、反应结果易于观察、灵敏度高、特异性强，适用于沙门氏菌的监测、流行病学调查及临床样本的检测等技术领域。

Description

一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒及其检测方法和用途

技术领域

本发明涉及一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒及其检测方法和用途，属于微生物免疫学技术领域。

背景技术

沙门氏菌，为革兰氏阴性细菌，是一种无芽孢、荚膜的短杆菌，属于肠杆菌科细菌。沙门氏菌作为一种危害人和动物健康的主要的致病细菌，其菌属类型复杂且繁多。至今，人和动物中分离出了67个菌群、2000多个血清型及变种，肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌与鼠伤寒沙门氏菌是现有的较为普遍的沙门氏菌类型。沙门氏菌既能造成家畜、家禽的死亡，作为传染源又长期存于禽畜产品中，严重威胁人类的健康及食品安全。人类感染沙门氏菌的途径主要是通过食用不卫生的肉类、蛋类、未经消毒的奶制品、海产品及未经消毒的蔬菜等。我国每年因沙门氏菌感染而患病的人数约为3亿人，占病原菌引起食源性患病人数的70％～80％。目前，食源性致病菌检测方法很多，大致可以分为传统的检测方法、免疫学检测方法以及现代分子生物学检测方法等。平皿培养法等传统检测方法应用较广泛，检测结果相对稳定，但操作程序繁琐、耗时长，对操作人员的要求较高，传统的检测方法已经不足以保障食品安全问题；免疫学检测方法需要抗体、酶等，费用高，且存在特异性差等问题；PCR、LCR、LAMP等现代分子生物学检测方法已应用到沙门氏菌检测中，但这些检测方法需要酶、PCR仪类变温仪器等的参与。所以，基于沙门氏菌的现有的检测方法存在的许多不足的现状，已有试剂盒价格比较昂贵不利于大规模推广，因此建立一种快速、灵敏、便携、价格低廉的沙门氏菌等食源性致病菌的检测方法，对于维护我国食品安全尤为重要。

发明内容

针对现有技术的上述缺陷，本发明提出了一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒及其检测方法和用途。

一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，包括抗原蛋白或抗原蛋白溶液或包被所述抗原蛋白溶液的包被板，所述抗原蛋白为如下a或b或c：

SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质；

在SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

将a)或b)所示蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由SEQ ID NO.2序列衍生的蛋白质。

进一步地，根据上述所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒：

所述抗原蛋白溶液的包被浓度如下：100μL/孔、抗原蛋白溶液浓度为10μg/mL。

还包括酶标抗体、显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。

所述酶标抗体为HRP兔抗鸡IgG(生产厂家为Bethyl)，稀释倍数为1∶10000。

所述阳性血清为通过沙门氏菌攻毒SPF鸡后的血清；阴性血清为SPF鸡血清。

所述显色液为TMB，所述终止液为2mol/L的H₂SO4。

进一步地，用于扩增沙门氏菌invA基因的特异性引物：

其核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。

进一步地，沙门氏菌invA重组蛋白的制备方法：

包括如下步骤：

核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的特异性引物对沙门氏菌基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物纯化后，将回收的invA PCR产物克隆于原核表达载体，得到重组质粒；

将重组质粒转入表达宿主菌中，获得阳性重组菌株；

诱导阳性重组菌株表达获得沙门氏菌invA重组蛋白。

进一步地，上述任一所述的试剂盒的ELISA检测方法：

包括如下步骤：

(1)将所述抗原蛋白溶液包被孔板；

(2)依次将待测血清、酶标抗体、显色液、终止液加入步骤(1)处理后的孔板，反应，用酶标仪检测OD₄₅₀，得到待测血清的OD₄₅₀；

根据待检血清OD₄₅₀与阴性血清OD₄₅₀的比值判定，若该比值大于等于2则判定为阳性，若该比值小于2则判定为阴性。

进一步地，上述所述试剂盒在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用；

或，上述任一所述试剂盒在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用；

或，上述所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用；

或，上述所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用；

或上述所述抗原蛋白和上述所述的ELISA检测方法在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用；

或上述所述抗原蛋白和上述所述的ELISA检测方法在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用。

本发明的有益效果是：

本发明提供的检测沙门氏备抗体的ELISA试剂盒，可快速、特异、灵敏的检测血清中的沙门氏菌抗体，具体体现为：

(1)选取包被的蛋白为invA蛋白，该蛋白属沙门氏菌种属特异性的保守蛋白，因而使该试剂盒具有特异性；

(2)采用的阳性血清特异性良好，对其他已知的微生物的阳性血清进行交叉反应检验，所有被检血清OD₄₅₀与阴性血清OD₄₅₀的比值(P/N值)均小于2；

(3)重复性好，批内和批间的重复性检验，变异系数均在5％以内；

(4)灵敏性高，检测血清的灵敏度为1∶1000；

(5)准确性高，阳性检出率与商品化IDEXX试剂盒的检测无明显差异。

本发明试剂盒操作简单、成本低廉、反应结果易于观察、灵敏度高、特异性强，适用于沙门氏备的监测、流行病学调查及临床样本的检测等技术领域。

本发明利用invA重组表达蛋白运用到ELISA试剂盒的建立中，其原因在于，大肠杆菌表达的重组蛋白易于制备和纯化，检测时产生的非特异性更小，利于结果的准确性。

附图说明

图1为invA基因的RT-PCR扩增产物的鉴定；M：2000bp Marker；1-2：目的片段；3：ddH₂O；

图2为沙门氏菌invA重组蛋白的SDS-PAGE分析；M：Protein marker(Cat.No.：C600525)；1：上样；2：流出；3-4：20mM Imidazole洗脱组分；5-6：50mM Imidazole洗脱组分；7-9：500mM Imidazole洗脱组分。

具体实施方式

为了使本发明目的、技术方案更加清楚明白，下面结合附图，对本发明作进一步详细说明。

实施例1、检测沙门氏菌ELISA法的确立

一、沙门氏菌invA重组蛋白的制备

1、表达沙门氏菌invA重组蛋白的重组载体构建

根据GenBank中的沙门氏菌ATCC43973基因序列(GenBank：MK017931.1)，运用Primer5.0软件设计特异性引物：

F：ATTGTCACCGTGGTCCAGTTTATCG(SEQ ID NO.3)

R：CTTCATCGCACCGTCAAAGGAA(SEQ ID NO.4)

大小为216bp，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

取冻存的细菌菌液，按照细菌DNA试剂盒，提取细菌DNA，置于-20℃保存，用于invA基因扩增。以细菌DNA为模板，F和R为引物，进行PCR扩增。

PCR扩增体系如表1所示：

表1 PCR扩增体系

反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性1min，55℃退火30s，72℃延伸1min，34个循环；72℃后延伸5min，PCR产物于4℃保存。

将上述PCR扩增产物进行电泳分析，以DNA marker DS2000为分子质量标准，配制1.0％琼脂糖凝胶，取10μL电泳产物，以150V电压电泳15min，进行凝胶紫外成像系统观察拍照和结果分析。扩增出与预期片段大小相符的目的条带，如图1所示。回收目的片段。由生工生物工程(上海)股份有限公司测序，进行核苷酸和氨基酸分析。

核苷酸结果分析为序列表中SEQ ID NO.1；

氨基酸结果分析为序列表中SEQ ID NO.2。

将回收的invA片段与pET28a载体用NdeI/XhoI进行双酶切，酶切条件为37℃作用1.5h，酶切体系如表2所示：

表2酶切体系

根据宝生物工程(大连)有限公司的DNA回收试剂盒回收酶切产物，再将回收产物进行连接反应，得到重组质粒，反应条件为16℃、3h，连接体系如表3所示：

表3连接体系

将重组质粒转化至BL21感受态细胞，在Amp培养基上培养12h，挑取阳性菌落接种于含有Amp的LB液体培养基上，37℃摇床培养12h，提取质粒，双酶切鉴定，送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。

2、沙门氏菌invA重组蛋白的表达及纯化

转化：将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞，热激后涂布在含有对应抗生素的平板上，培养；

活化：挑取单克隆到含有抗生素的液体培养基中培养；

诱导：当OD值达到0.6时，添加诱导剂IPTG，继续培养，分别于20℃条件下培养16h、37℃条件下培养4h，未添加诱导剂的为阴性对照；

收集菌体：离心，弃上清，收集菌体；

表达检测：在收集到的菌体中加入缓冲液A悬浮，使用超声破碎仪使其充分溶解，离心，离心后的沉淀使用缓冲液B进行溶解，分别对上清和沉淀处理，制样，准备SDS-PAGE检测。

大量表达：在含对应抗生素的培养基中培养菌液，当OD值达到0.6时，添加0.5mM诱导剂IPTG，20℃条件下过夜培养进行大量表达，离心收集细胞菌体。

收集粗蛋白：细胞菌体用缓冲液C溶解、超声破碎，离心收集上清粗蛋白。

平衡：取5mL Ni-NTA，用5倍柱床体积的Binding buffer清洗平衡柱子，流速5mL/min；

孵育：将粗蛋白与平衡后的柱填料孵育1h；

上柱：将孵育后的产物上柱，收集流出；

平衡：用Binding buffer清洗平衡柱子；

洗杂：用Washing buffer洗柱子，并收集流出；

洗脱：用Elution buffer洗脱，收集流出；

纯化检测：对粗蛋白、洗杂流出、洗脱流出分别处理，制样，准备SDS-PAGE检测；

透析浓缩：将纯度较好的蛋白透析到50mM Tris，300mM NaCl，0.1％SKL，pH 8.0中，透析结束后用PEG20000浓缩，0.22μm滤膜过滤后分装1mL/tube，-80℃保存。

SDS-PAGE检测：对纯化后蛋白进行处理，制样，跑胶，检测分子量，如图2所示。最终纯化蛋白的浓度为0.62mg/mL，纯度大于80％。

二、检测沙门氏菌的ELISA法的确立

1、ELISA法中抗原蛋白包被浓度的确定：

将纯化的重组猪非典型瘟病毒(APPV)E2蛋白抗原用pH＝9.5、0.05mol/L的碳酸盐缓冲液稀释至50、20、10、5、2.5μg/mL，加入至96孔包被板中，100μL/孔，置4℃过夜，用洗涤液洗涤3次后，加入1％BSA的PBS(0.01mol/L、pH＝7.2)封闭过夜，甩去封闭液，室温，湿度40％以下，自然干燥24～48h，包装。按照检测步骤进行2个阴性血清和2个阳性血清的检测，结果表明当包被的invA蛋白浓度为10μg/mL时，测定值稳定良好。因此确定包被的invA蛋白浓度为10μg/mL，100μL/孔。

2、洗涤液的制备：将14.9g KH₂PO₄，79.1g K₂HPO₄·3H₂O，50.0mL Tritonx-100，1.0g NaN₃，8.0g NaCl溶于500mL水中，调pH为7.2，最终定容至1L。

3、底物显色液的制备：将4.2g柠檬酸，13.6g醋酸钠，0.5g过氧化脲溶解在100mL去离子水中，定容至1000mL，调pH值为5.2，即为底物A液；将1g TMB溶解于50mL二甲基亚砜中，溶解后再加入100mL甲醛，16.0g聚乙烯吡咯烷酮，溶解后用去离子水定容至1000mL，即为底物B液。

4、样品稀释液的制备：从LB培养平板上挑取大肠埃希氏杆菌BL21(E.coli BL21)单菌落，转接于含LB培养液的试管中，37℃培养过夜，制备菌液。将菌液转接到250mL的LB培养基中，接种量为2％，培养6h。8000r/min离心10min。将菌体溶于50mL PBS。将溶解的菌液解冻，超声波裂解。置8000r/min，离心10min，收集上清。用BCA蛋白含量检测试剂盒测定蛋白含量。然后将破碎菌液用0.01M、pH＝7.2的PBS稀释至总蛋白含量为1mg/mL。即为样品稀释液。

5、终止液的制备：配制2mol/L的H₂SO₄。

6、待测血清稀释倍数的确定

将待检测血清用样品稀释液稀释至1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000倍。按照ELISA检测方法分别进行检测，试验结果表明，当待检血清稀释至1∶1000时，测定值仍稳定良好。因此确定血清的敏感性为1∶1000，考虑到实际检测中，尤其是临床上检测以简便快捷为主的原则，因此最终确定试剂盒中待检血清的稀释倍数为1∶100。

7、兔抗鸡酶标抗体稀释倍数的确定

取辣根过氧化物酶标记的HRP兔抗鸡IgG抗体用酶标抗体稀释液稀释1∶100、1∶1000、1∶10000、1∶100000倍。按照ELISA检测方法分别进行2个阴性血清和2个阳性血清的检测，试验结果表明，当酶标抗体稀释液稀释1∶10000时，测定值稳定良好。因此确定HRP兔抗鸡IgG抗体工作浓度为1∶10000。

8、判断标准的确定

用制备的50份阳性血清进行OD₄₅₀测定，结果表明，阳性血清的OD值均大于1，因此确定阳性血清OD₄₅₀值大于1；用从SPF鸡采集的50份阴性血清进行OD₄₅₀测定，结果表明，阴性血清OD₄₅₀值均小于0.2，因此确定阴性血清OD₄₅₀值小于0.2；试验结果表明，所有阴性血清和阳性血清间的OD₄₅₀差异均小于0.2；因此规定，阳性血清和阴性血清重复孔的差距不得大于0.2。这是试验成立的条件。

采集100份山东潍坊养殖场的100份蛋鸡血清样品进行标准的确定，试验结果表明，P/N≥2时判定为阳性，P/N＜2时判定为阴性。结果检测表明，23％的血清为阳性；77％的血清为阴性。

9、ELISA的检测方法：

用包被液将沙门氏菌invA重组蛋白稀释至10μg/mL，每孔100μL，4℃过夜，次日PBST洗板3次，每次5min，拍干；每孔加100μL、5％封闭液，于37℃保温箱封闭2h，PBST洗板3次，每次5min。

将包被板和待检血清室温(25℃)放置30min，待检血清样品按1∶100进行稀释；包被中加入100μL待检血清，37℃孵育2h，PBST洗板3次，每次5min，拍干；加入兔抗鸡酶标抗体100μL，37℃孵育1h，PBST洗板3次，每次5min，拍干；加入显色液100μL，室温避光反应15min；加入终止液50μL；酶标仪以双波长形式读取OD₄₅₀值，计算P/N值(即待检血清OD₄₅₀值与阴性血清OD₄₅₀值的比值)。

判定标准为：当阳性血清OD₄₅₀值大于1，阴性血清OD₄₅₀值小于0.2，且阳性血清和阴性血清重复孔的差距不得大于0.2，空白孔OD₄₅₀＜0.10，实验成立，否则无效。

判定标准：P/N≥2时判定为阳性，P/N＜2时判定为阴性。

实施例2、检测沙门氏菌抗体ELISA法的评价

一、特异性试验

按照实施例1中的检测沙门氏菌抗体的ELISA法检测大肠杆菌阳性血清、金黄色葡萄球菌阳性血清、魏氏梭菌阳性血清、副鸡嗜血杆菌阳性血清、巴氏杆菌阳性血清、鸭疫里默氏杆菌阳性血清；以沙门氏菌阳性血清和沙门氏菌阴性血清对照，判断ELISA方法的特异性。

结果如表4，大肠杆菌阳性血清、金黄色葡萄球菌阳性血清、魏氏梭菌阳性血清、副鸡嗜血杆菌阳性血清、巴氏杆菌阳性血清、鸭疫里默氏杆菌阳性血清的P/N值均小于2，表明建立的ELISA方法与其他细菌血清没有交叉反应，具有良好的特异性。

表4特异性试验结果

二、重复性试验

按照实施例1中的检测沙门氏菌抗体的ELISA法同时检测6份沙门氏菌阳性血清，另取6个不同时间段包被的沙门氏菌invA重组蛋白包被板，进行板间重复性试验。算板内和板间重复性试验的变异系数CV％(Coefficientof variation，CV)，分析该检测方法的板内和板间重复性。方法中采用的纯化蛋白为同一批次。

结果如表5所示，6份沙门氏菌阳性血清，板内和板间重复性试验变异系数均在5％以内，说明建立的ELISA方法具有较好的重复性。

表5重复性试验结果

三、灵敏性试验

按照实施例1中的检测沙门氏菌抗体的ELISA法检测5份沙门氏菌阳性血清，待检血清按1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000、1∶100000进行稀释。

结果如表6所示，待检血清按1∶10、1∶100、1∶1000稀释时，检测结果判定为阳性；待检血清按1∶10000、1∶100000稀释时，检测结果判定为阴性。与待检血清稀释倍数的试验相对应。

表6灵敏性试验结果

四、符合性比较

取100份鸡血清样品，分别用实施例1中的检测沙门氏菌抗体的ELISA法和IDEXX试剂盒进行检测，比较两种方法检测结果的符合率，分析两种方法的符合率。

结果如下：

本研究ELISA试剂盒，阳性检出率为22.9％；

商品化IDEXX试剂盒，阳性检出率为22.8％；

两种方法的符合率达到99.6％，表明建立的ELISA方法与IDEXX具有较好的符合率。

综上所述，利用本发明制备的ELISA试剂盒检测沙门氏菌抗体具有特异性强、重复性好、灵敏性高和准确性高的优点；同时与市售的IDEXX试剂盒相比，ELISA试剂盒价格低廉，更适合兽医临床样品的检测及沙门氏菌疫病的净化，能够大幅度降低养殖户的成本，提高经济效益。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而己，并不以本发明为限制，凡在本发明的精神和原则之内所作的均等修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的专利涵盖范围内。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒及其检测方法和用途

<130> 2020.9.16

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 216

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 1

attgtcaccg tggtccagtt tatcgttatt accaaaggtt cagaacgcgt tgcggaagtc 60

gcagctcgtt tttctctgga tggtatgccc ggtaagcaga tgagtatcga tgccgatttg 120

aaggccggta ttattgatgc tgatgccgcg cgcgaacggc gaagcgtact ggaaagggaa 180

agccagcttt acggttcctt tgacggtgcg atgaag 216

<210> 2

<211> 206

<212> PRT

<213> 人工序列()

<400> 2

Ile Leu Glu Val Ala Leu Thr His Arg Val Ala Leu Val Ala Leu Gly

1 5 10 15

Leu Asn Pro His Glu Ile Leu Glu Val Ala Leu Ile Leu Glu Thr His

20 25 30

Arg Leu Tyr Ser Gly Leu Tyr Ser Glu Arg Gly Leu Ala Arg Gly Val

35 40 45

Ala Leu Ala Leu Ala Gly Leu Val Ala Leu Ala Leu Ala Ala Leu Ala

50 55 60

Ala Arg Gly Pro His Glu Ser Glu Arg Leu Glu Ala Ser Pro Gly Leu

65 70 75 80

Tyr Met Glu Thr Pro Arg Gly Leu Tyr Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Met

85 90 95

Glu Thr Ser Glu Arg Ile Leu Glu Ala Ser Pro Ala Leu Ala Ala Ser

100 105 110

Pro Leu Glu Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Gly Leu Tyr Ile Leu Glu Ile

115 120 125

Leu Glu Ala Ser Pro Ala Leu Ala Ala Ser Pro Ala Leu Ala Ala Leu

130 135 140

Ala Ala Arg Gly Gly Leu Ala Arg Gly Ala Arg Gly Ser Glu Arg Val

145 150 155 160

Ala Leu Leu Glu Gly Leu Ala Arg Gly Gly Leu Ser Glu Arg Gly Leu

165 170 175

Asn Leu Glu Thr Tyr Arg Gly Leu Tyr Ser Glu Arg Pro His Glu Ala

180 185 190

Ser Pro Gly Leu Tyr Ala Leu Ala Met Glu Thr Leu Tyr Ser

195 200 205

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 3

attgtcaccg tggtccagtt tatcg 25

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 4

cttcatcgca ccgtcaaagg aa 22

Claims

1.一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，包括包被抗原蛋白溶液的包被板，所述抗原蛋白为如下a或b或c：

a)SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质；

b)在SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将a)或b)所示蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由SEQ ID NO.2序列衍生的蛋白质；

包被的所述抗原蛋白为invA蛋白，沙门氏菌invA重组蛋白的制备如下：表达沙门氏菌invA重组蛋白的重组载体构建，将回收的invA片段与pET28a载体用NdeI/XhoI进行双酶切，酶切条件为37℃作用1.5h；沙门氏菌invA重组蛋白的表达及纯化；

从LB培养平板上挑取大肠埃希氏杆菌BL21(E.coli BL21)单菌落，转接于含LB培养液的试管中，37℃培养过夜，制备菌液；将菌液转接到250mL的LB培养基中，接种量为2％，培养6h；8000r/min离心10min；将菌体溶于50mL PBS；将溶解的菌液解冻，超声波裂解；置8000r/min，离心10min，收集上清；用BCA蛋白含量检测试剂盒测定蛋白含量；然后将破碎菌液用0.01M、pH＝7.2的PBS稀释至总蛋白含量为1mg/mL；即为样品稀释液；

还包括酶标抗体、显色液、终止液、阳性血清和阴性血清；

所述酶标抗体为HRP兔抗鸡IgG，稀释倍数为1∶10000；

2.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述阳性血清为通过沙门氏菌攻毒SPF鸡后的血清；阴性血清为SPF鸡血清。

3.根据权利要求2所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述显色液为TMB，所述终止液为2mol/L的H₂SO₄。

4.权利要求1-3任一所述试剂盒在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用；

或，权利要求1-3任一所述试剂盒在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用；

或，权利要求1中的所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用；

或，权利要求1中所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用。