CN112121168B - 一种抑制剂在制备治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物中的应用 - Google Patents

一种抑制剂在制备治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抑制剂在制备治疗SARS‑CoV‑2肺炎及其并发症的药物中的应用，其中：所述抑制剂具有以下性质的一种或多种：(1)能减少高密度脂蛋白与其受体结合；(2)能减少SARS‑CoV‑2病毒的S蛋白与胆固醇结合。发明人发现：胆固醇的浓度会随着病情严重程度下降，并进一步发现SARS‑CoV‑2的S蛋白可以与胆固醇结合，推测SARS‑CoV‑2病毒上的S蛋白可能通过与高密度脂蛋白上的胆固醇结合，而高密度脂蛋白又携带着SARS‑CoV‑2病毒通过其逆转运途径进入细胞，从而导致血清中胆固醇的水平显著降低。发明人应用HDL结合蛋白抑制剂SR‑BⅠ蛋白抑制剂能够抑制SARS‑CoV‑2入侵细胞。

Description

一种抑制剂在制备治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物中 的应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，进一步涉及一种抑制剂在制备治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物中的应用。
背景技术
2019新型冠状病毒(2019-nCoV，本文称为SARS-CoV-2)是已知的冠状病毒家族中第 7个能够感染人类的成员，属于冠状病毒家族的β属冠状病毒，该病毒属还包括非典型性肺炎病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征病毒(MERS-CoV)。
SARS-CoV-2基因组为不分节段的单股正链RNA，是位于病毒颗粒中央的不规则核酸部分。SARS-CoV-2病毒颗粒包括刺突蛋白S、膜蛋白E、小分子膜蛋白M和核衣壳蛋 白N这4种结构性蛋白，其中：冠状病毒S蛋白是伸出囊膜的棒球型糖蛋白，属于I型 膜融合蛋白。在病毒成熟过程中，S蛋白被特定蛋白酶识别切割成S1和S2片段。S1片 段与S2片段以非共价键相结合，都通过跨膜区镶嵌在膜上；其中，S1片段包含N端区 域和C端区域都可以作为受体识别区域(Receptor-binding domain,RBD)。SARS-CoV-2S 蛋白与其受体结合后,诱导病毒的蛋白发生结构上的变化，暴露穿膜有效结构域，介导 病毒与宿主细胞膜融合进而侵入细胞引起感染。血管紧张素转化酶(ACE2)是SARS-CoV 入侵细胞的主要功能性受体，它也是SARS-CoV-2的主要受体。
胆固醇不仅是细胞膜的重要组成部分，还是胆酸、维生素D及固醇类激素等很多具有重要生理功能的生物活性物质的前体，因此，胆固醇稳态对维持细胞和生命体正常的 功能至关重要，系统水平的胆固醇稳态需要不同组织的协调。胆固醇通过脂蛋白在体液 进行传送，脂蛋白按照密度递增进行分类，包括高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等，无论 高密度脂蛋白还是低密度脂蛋白，均通过细胞表面的受体进行内吞或者胆固醇的逆转运。 低密度脂蛋白受体(LDLR)属于Ⅰ型跨膜受体，LDLR结合LDL或含有其他载脂蛋白 ApoB-100和ApoE的脂蛋白，将其携带的脂类主要是胆固醇酯内吞入细胞的酸性内体中， LDL被降解成氨基酸，而胆固醇酯被酸性酯酶水解为游离胆固醇进入胞浆的游离胆固醇 池。所以LDLR对于调节胆固醇的体内平衡、调节血浆总胆固醇浓度起关键性的作用。 关于能够与HDL结合的蛋白，目前虽然已克隆了多种能够与HDL结合的蛋白，但是 SR-B I是目前已阐明一级结构的脂蛋白受体中唯一能真正介导细胞与高密度脂蛋白，它 除在肝脏外，在小肠、肾上腺、卵巢、睾丸中亦有较高的浓度。SR-B I可能位于质膜 上称为“陷窝”的富含胆固醇和鞘磷脂的微区，这些微区被认为与胆固醇运输直接有关 SR-B I与HDL结合后,先选择性介导HDL胆固醇进入陷窝中一个可逆的胆固醇池,随 后胆固醇再通过某种机制进入细胞内的胆固醇池中。
目前，尚无针对SARS-CoV-2的特异性抗病毒药物。另外，目前急需一种简单、迅速、可靠的预测SARS-CoV-2感染预后的标志物，其可以指示在感染者突然病情恶化之 前，进行早期的干预和治疗，提高患者的生存率。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当 被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
发明目的
为解决现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种抑制剂在制备治疗 SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物中的应用。
解决方案
为实现本发明目的，本发明实施例提供了以下技术方案：
本发明的第一方面在于，提供了一种抑制剂在制备治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物中的应用，所述抑制剂具有以下性质的一种或多种：(1)能减少高密度脂蛋白 与其受体结合；(2)能减少SARS-CoV-2病毒的S蛋白与胆固醇结合。
本发明的第二方面在于，提供了一种用于治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物， 所述药物包括一种抑制剂，所述抑制剂具有以下性质的一种或多种：(1)能减少高密度脂蛋白与其受体结合；(2)能减少SARS-CoV-2病毒的S蛋白与胆固醇结合。
本发明的第三方面在于，提供了一种用于治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的方法， 包括以下步骤：向患有SARS-CoV-2肺炎及其并发症的受试者施用有效剂量的抑制剂，所述抑制剂具有以下性质的一种或多种：(1)能减少高密度脂蛋白与其受体结合；(2) 能减少SARS-CoV-2病毒的S蛋白与胆固醇结合。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，所述治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症包括阻止SARS-CoV-2病毒感染细胞。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，能减少高密度脂蛋白与其受体结合包括以下的一种或多种：(1)降低高密度脂蛋白受体水平；(2)降低高密度脂蛋白受 体与高密度脂蛋白结合的能力；
能减少SARS-CoV-2病毒的S蛋白与胆固醇结合包括以下的一种或多种：(1)降低SARS-CoV-2病毒的S蛋白水平；(2)降低SARS-CoV-2病毒的S蛋白与胆固醇结合的能 力。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，所述抑制剂包括选自以下的一种或多种：小分子化合物、蛋白质、多肽、核苷酸序列。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，所述抑制剂包括选自以下的一种或多种：SR-B I蛋白抑制剂、SBR-I RNAi、SARS-CoV-2的S蛋白和胆固醇结合基序的 竞争性多肽。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，所述SR-B I蛋白抑制剂包括：ITX5061。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，SARS-CoV-2的S蛋白和胆固醇 结合基序的序列选自以下的一种或多种：LPPAYTNSFTRGVYYPDKV、 KVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNK、VGYLQPRTFLL、VGGNYNYLYRLFRKSNL、 KNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQIL和LGKYEQYIKWPWYIWL。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，高密度脂蛋白受体包括膜蛋白受体；可选地为SR-B I蛋白。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的药物中还包括治疗SARS-CoV-2及其并发症的其他药物，治疗SARS-CoV-2及其并 发症的方法中联合使用治疗SARS-CoV-2的药物及其治疗SARS-CoV-2及其并发症的其 他药物。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，所述治疗SARS-CoV-2肺炎及其并发症的其他药物选自氯喹、羟氯喹、瑞德西韦中的一种或多种。
上述应用、药物在一种可能的实现方式中，所述药物还包括至少一种药学上可接受 的辅料。
上述应用、药物、方法在一种可能的实现方式中，所述药物的使用方式为静脉注射、 肌肉注射、皮下注射、口服给药中的一种或多种。
本发明的第四方面在于，提供一种血清胆固醇检测试剂在制备预测SARS-CoV-2预后情况好坏的检测试剂盒中的应用。
本发明的第五方面在于，提供一种用于预测SARS-CoV-2预后情况好坏的检测试剂盒，所述试剂包括血清胆固醇检测试剂。
有益效果
本发明实施例中发明人发现：胆固醇的浓度会随着病情严重程度下降，并进一步发 现SARS-CoV-2的S蛋白可以与胆固醇结合，因此推测SARS-CoV-2病毒上的S蛋白可能 通过与高密度脂蛋白上的胆固醇结合，而高密度脂蛋白又携带着SARS-CoV-2病毒通过 其逆转运途径进入细胞，从而导致血清中胆固醇的水平显著降低以及SARS-CoV-2病毒 入侵细胞。在此基础上，发明人应用HDL结合蛋白抑制剂，即SR-BⅠ蛋白抑制剂能够抑 制SARS-CoV-2入侵细胞。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这 些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用 作例子、实施例或说明性”。
这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
图1A显示的是本发明实施例1中SARS-CoV-2感染者，从左到右按照轻症(Mild)、中症(Moderate)、重症(Severe)、和危重症(Critical)不同疾病程度分类，血清中TG的水平。 结果显示，虽然血清中的TG水平在轻症和中症之间有显著差别，但是与疾病严重程度并无相关性*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；图1B显示的是本发明实施例1中 SARS-CoV-2感染者，从左到右按照轻症(Mild)、中症(Moderate)、重症(Severe)、和危重 症(Critical)不同疾病程度分类，血清中TC的水平。结果显示，血清中游离胆固醇的水 平，随着疾病进程呈现显著性降低*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；
图2A显示的是本发明实施例2中SARS-CoV-2感染者，从左到右按照轻症(Mild)、中症(Moderate)、重症(Severe)、和危重症(Critical)不同疾病程度分类，血清中HDL的水平。结果显示，血清中HDL的水平，随着疾病进程呈现显著性降低*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；图2B显示的是本发明实施例2中SARS-CoV-2感染者，从左到右按照轻 症(Mild)、中症(Moderate)、重症(Severe)、和危重症(Critical)不同疾病程度分类，血清中LDL的水平。结果显示，血清中LDL的水平，随着疾病进程呈现显著性降低*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；
图3A显示的是本发明实施例3中SARS-CoV-2感染重症患者，分为存活(Survivors)和未存活(Non-survivors)两组，比较二者在治疗前(Pre-therapy)和治疗后(Post-therapy)血 清中TG水平,结果显示，存活重症患者和死亡重症患者，血清中TG的水平在治疗前后无 显著变化；图3B显示的是本发明实施例3中SARS-CoV-2感染重症患者，分为存活(Survivors)和未存活(Non-survivors)两组，比较二者在治疗前(Pre-therapy)和治疗后(Post-therapy)血清中LDL水平,结果显示,存活重症患者和死亡重症患者，血清中LDL的水平在治疗前后无显著差别，在治疗后显著降低*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；
图4A显示的是本发明实施例4中SARS-CoV-2感染重症患者，分为存活(Survivors)和未存活(Non-survivors)两组，比较二者在治疗前(Pre-therapy)和治疗后(Post-therapy)血 清中TC水平，图4B显示的是本发明实施例4中SARS-CoV-2感染重症患者，分为存活 (Survivors)和未存活(Non-survivors)两组，比较二者在治疗前(Pre-therapy)和治疗后 (Post-therapy)血清中HDL水平。结果显示，与治疗前相比，存活重症患者血清中TC和HDL 的水平在治疗后显著升高，而死亡重症患者则正好相反，治疗后血清中TC和HDL水平，显著低于治疗前*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；
图5A显示的是本发明实施例5中SARS-CoV-2S蛋白的胆固醇结合基序；图5B显 示的是本发明实施例5中MST测定S蛋白和胆固醇的结合解离曲线，结果显示， SARS-CoV-2的S蛋白可与胆固醇结合，EC50为187.6±120.5nM；
图6A显示的是本发明实施例6中ITX5061对SARS-CoV-2-S假病毒入侵 Hela-ACE2细胞的影响，结果显示，ITX 5061可以抑制SARS-CoV-2–S的入侵，EC50 为0.52uM±0.06；图6B显示的是本发明实施例7中ITX 5061对Hela-ACE2细胞生长的影 响，结果显示，ITX 5061在所显示的浓度，对细胞生长无显著影响。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中 的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技 术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范 围。
另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实例中， 对于本领域技术人员熟知的方法、手段、元件未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换 如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元 件或其它组成部分。
实验方法
1、本发明中，人血清中的脂类的检测方法如下：隔夜空腹后采血，血清存放于-20℃ 低温冰箱中。采用贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪以及贝克曼公司的总胆固醇试剂盒(货号OSR6116)、甘油三脂检测试剂盒(货号OSR60118)、高密度脂蛋白胆固 醇检测试剂盒(OSR6187)和低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(OSR6183)，进行人血 清中的胆固醇、甘油三脂、HDL和LDL水平的检测。
2、本发明中，微量热涌动实验的检测方法如下：将带有His标签的重组可溶性SARS-CoV-2S蛋白(NCBI Reference Sequence:YP_009724390.1)与RED-tris-NTA标记物室温中避光孵育30分钟；在PCR管中配制15个浓度梯度的胆固醇，将不同浓度的胆 固醇与经过标记的S蛋白混匀室温孵育30分钟，用毛细管分别吸取上述混合液体，依 次注入毛细柱卡槽里；利用微量热涌动仪器(NanoTemper公司)，选择NT115模式进行 SARS-CoV-2S蛋白与胆固醇的结合的检测，并根据拟合曲线计算亲和力数值。
3、本发明中，假病毒的构建方法如下：将293T细胞在10cm的培养皿上培养至 70％左右，将带有荧光素酶报告基因的12μg pNL4-3.Luc.E-R载体(购自Addgene)和6μg 的pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S载体(我们首先将病毒株的S基因GenBank:MN908947通 过全合成获得，并将其构建在真核表达载体pcDNA3.1上，获得pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S 表达载体)共转染，72小时候后收取上清，用20％蔗糖溶液50000g离心90分钟纯化 后，获得SARS-CoV-2假病毒。
4、本发明中，假病毒的感染活性实验方法如下：在假病毒感染Hela-ACE2细胞(购自北京维通达生物技术有限公司)之前，每孔加入HDL(终浓度300ug/ml)和不同浓 度的ITX5061，ITX 5061的终浓度分别为:0、0.0001、0.001、0.01、0.1、1和10uM， 之后每孔用5ng假病毒感染96孔板中的Hela-ACE2细胞，每个孔含有5000细胞。感 染后48小时裂解细胞，将20μL的裂解液加入50μl的荧光素酶底物，用Wallac Multilabel 1450Counter(Perkin-Elmer,Singapore)进行荧光素酶活性分析，每个点做6个 复孔。HDLR抑制剂ITX 5061(购自MedChemExpress,货号：HY-19900)，HDL购自 Sigma-Aldrich公司(L8039)。
5、本发明中，MTT法检测ITX 5061对细胞毒性的实验方法如下：收集生长状态良好Hela-ACE2制备细胞悬液，于96孔板中接种，使每孔的细胞数目为5000个。在37 ℃、5％CO2的培养箱中培养至细胞完全贴壁后，加入ITX 5061溶液，其浓度分别为:0、 0.0001、0.001、0.01、0.1、1和10uM，每组设置6个复孔，并设立空白孔。将96孔板 置于37℃、5％CO2的培养箱中，48小时后将ITX 5061溶液吸出，每孔中加入20μL MTT 溶液(0.5％MTT)，于37℃避光处继续孵育4h。弃去上清液，每孔加入100μLDMSO溶 液，放置于摇床上振荡10min，酶标仪检测492nm吸光度值(OD)。细胞存活率的计算 公式为:(实验组的OD值-空白组的OD值)/(正常组的OD值-空白组的OD 值)X100％。
实施例1、血清中总胆固醇的水平与SARS-CoV-2疾病严重程度呈负相关
实验方法：为研究血清中脂类水平与SARS-CoV-2感染疾病严重程度的相关性，我们进行了单中心的回顾性研究。我们收集了861例SARS-CoV-2感染患者，这些患者包 括215例的轻症，364例中症、217例重症以及65例危重症，SARS-CoV-2患者和对照 人群的年龄和性别无显著差异。诊断标准根据国家卫健委第五版新冠肺炎诊断指南进行。 进行人血清中的胆固醇(TC)和甘油三脂(TG)水平的检测。
实验结果：861例SARS-CoV-2感染患者的甘油三脂水平在轻症的平均水平为1.702±1.584mmol/L、中症平均水平为1.375±0.7788mmol/L、重症平均水平为1.363±0.7mmol/L和危重症平均水平1.628±1.209mmol/L；虽然血清中的甘油三酯水平在轻症和中症之间有显著差别，但是水平在中症、重症和危重症之间并无差别，因此甘油三酯水平 与疾病严重程度并无相关性(图1A)，*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；861例 SARS-CoV-2感染患者的总胆固醇水平在轻症的平均水平为5.073±1.088mmol/L、中症 平均水平为4.674±0.9489mmol/L、重症平均水平为4.470±1.143mmol/L、危重症平均 水平为3.625±1.276mmol/L；血清中总胆固醇的水平，随着疾病进程呈现显著性降低(图 1B)*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001。
实施例2、血清中HDL和LDL的水平与SARS-CoV-2疾病严重程度呈负相关
实验方法：我们收集了861例SARS-CoV-2感染患者，这些患者包括215例的轻症，364例中症、217例重症和65例危重症，诊断标准根据国家卫健委第五版新冠肺炎诊断 指南进行。进行人血清中HDL和LDL水平的检测。
实验结果：861例SARS-CoV-2感染患者的HDL水平在轻症的平均水平为 1.311±0.3021mmol/L、中症平均水平为1.232±0.2955mmol/L、重症平均水平为 1.115±0.3011mmol/L、危重症平均水平为0.888±0.240mmol/L；血清中HDL的水平， 随着疾病进程呈现显著性降低(图2A)*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001；861例 SARS-CoV-2感染患者的LDL水平在轻症的平均水平为3.364±0.8137mmol/L、中症平 均水平为3.165±0.7887mmol/L、重症平均水平为3.038±0.8916mmol/L、危重症平均水 平为2.395±0.880mmol/L；血清中LDL的水平，随着疾病进程呈现显著性降低(图2B) *,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001。
实施例3、血清中TG和LDL的水平与SARS-CoV-2预后无关
实验方法：我们收集了100例存活出院的SARS-CoV-2危重症感染患者和16例死 亡的SARS-CoV-2危重症感染患者在入院之后第一次采集的血清标本以及各种手段治疗 之后出院之前或者病危之前的血清标本，诊断标准根据国家卫健委第五版新冠肺炎诊断 指南进行。进行人血清中甘油三酯和LDL水平的检测。
实验结果：SARS-CoV-2感染重症患者存活和未存活两组，血清中TG的水平在治 疗前后无显著变化(图3A)；存活重症患者，血清中LDL的水平在治疗前后无显著差 别，死亡患者在治疗后显著降低*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001(图3B)；因此， 血清中TG和LDL的水平与SARS-CoV-2预后无关。
实施例4、血清中TC和HDL的水平与SARS-CoV-2预后相关
实验方法：我们收集了100例存活出院的SARS-CoV-2危重症感染患者和16例死 亡的SARS-CoV-2危重症感染患者在入院之后第一次采集的血清标本以及各种手段治疗 之后出院之前或者病危之前的血清标本，诊断标准根据国家卫健委第五版新冠肺炎诊断 指南进行。进行人血清中HDL和TC水平的检测。
实验结果：SARS-CoV-2感染重症患者存活和未存活两组，与治疗前相比，存活重症患者血中TC(图4A)和HDL(图4B)的水平在治疗后显著升高，而死亡重症患者则 正好相反，治疗后血清中TC和HDL水平，显著低于治疗前(图4A-B)*,P<0.05；**, P<0.01；***,P<0.001。
实施例5、SARS-CoV-2的S蛋白能够与胆固醇结合
实验方法：通过序列分析，我们发现SARS-CoV-2的S蛋白有多个与胆固醇结合的基序，其中，RBD结构域也分布着两个重要的胆固醇结合基序(图5A)。我们通过微量 热涌动实验(microscale thermophoresis，MST)，测定了SARS-CoV-2的S蛋白和胆固 醇的结合能力。
实验结果：MST结果也显示，SARS-CoV-2的S蛋白能够与胆固醇结合，其EC50 值为187.6±120.5nM(图5B)。
实施例6、HDLR能够抑制SARS-CoV-2入侵宿主细胞
实验方法：既然SARS-CoV-2的S蛋白能够与胆固醇结合，我们猜测新冠病毒很有可能通过HDL逆转运途径进入细胞，从而导致血清中HDL的水平显著降低。因此，我 们选择了ITX 5061，它是一个SR-BⅠ蛋白抑制剂，可以通过抑制HDL结合蛋白SR-BⅠ 蛋白以提高血清中HDL的水平，目前于抗HCV治疗的I期临床阶段。我们首先将病毒 株的S基因(GenBank:MN908947)通过全合成获得，并将其构建在真核表达载体 pcDNA3.1上，获得pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S表达载体。以非复制型的缺陷病毒 HIV(Addgene,USA)为骨架，与pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S载体共转染，获得SARS-CoV-2 假病毒，并进行假病毒感染活性实验。在假病毒感染Hela-ACE2细胞(购自北京维通达 生物技术有限公司)之前，加入HDL(300ug/ml)和不同浓度的ITX 5061，ITX 5061 的浓度分别为:0、0.0001、0.001、0.01、0.1、1和10uM，每组设置6个复孔，并设立 空白孔。感染后48小时裂解细胞，将20μL的裂解液加入50μl的荧光素酶底物，用 Wallac Multilabel 1450Counter(Perkin-Elmer,Singapore)进行荧光素酶活性分析。
实验结果：结果显示，ITX 5061可以显著抑制病毒的感染能力，其EC50值为0.52uM±0.06(图6A)。
以上结果证明了我们的猜测即：HDLR是SARS-CoV-2入侵宿主细胞的共受体之一。因此，我们认为，靶向HDLR的拮抗剂，能阻止SARS-CoV-2侵入宿主细胞，从而发挥 抗SARS-CoV-2病毒的作用；感染病人血清中的总胆固醇和HDL的水平，可以作为 SARS-CoV-2感染的预后标志物。
实施例7、ITX 5061在有效的浓度范围内对细胞毒性的影响
实验方法：为进一步确定ITX 5061在有效的浓度范围内对细胞毒性的影响，我们收集生长状态良好Hela-ACE2制备细胞悬液，加入ITX 5061溶液，其浓度分别为:0、0.0001、0.001、0.01、0.1、1和10uM，每组设置6个复孔，并设立空白孔。48小时后 加入MTT溶液，利用酶标仪检测492nm吸光度值(OD)。细胞存活率的计算公式为:实 验组的OD值-空白组的OD值)/(正常组的OD值-空白组的OD值)×100％。
实验结果：结果显示，本实验所采用的最大药物浓度10uM情况下进行细胞培养，并没有对细胞的生长产生显著影响(图6B)。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然 可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替 换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的 精神和范围。

Claims (4)

1.ITX 5061在制备治疗SARS-CoV-2肺炎的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于：所述治疗SARS-CoV-2肺炎包括阻止SARS-CoV-2病毒感染细胞。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于：所述治疗SARS-CoV-2肺炎的药物中还包括治疗SARS-CoV-2的其他药物。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：所述治疗SARS-CoV-2肺炎的其他药物选自氯喹、羟氯喹、瑞德西韦中的一种或多种。
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