CN112111420A

CN112111420A - 一株新型有机卤呼吸地质杆菌及其应用

Info

Publication number: CN112111420A
Application number: CN202010698636.3A
Authority: CN
Inventors: 严俊; 姜丽思; 杨毅; 李秀颖
Original assignee: Institute of Applied Ecology of CAS
Current assignee: Institute of Applied Ecology of CAS
Priority date: 2020-07-20
Filing date: 2020-07-20
Publication date: 2020-12-22
Anticipated expiration: 2040-07-20
Also published as: CN112111420B

Abstract

本发明涉及微生物领域，关于一株新型有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)及其在生物修复氯代烷烃类污染物中的应用。地质杆菌IAE菌株已于2020年7月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(菌种保藏号CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101,保藏编号：CGMCC 1.5298。

Description

一株新型有机卤呼吸地质杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及微生物领域，关于一株新型有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)及其在生物修复氯代烷烃类污染物中的应用。

背景技术

氯代烷烃类化合物是一类重要的有机溶剂和工业化学品生产中间体，被广泛应用于机械制造、电子元件清洗、化学化工等过程。由于大规模的生产和使用，在世界范围内氯代烷烃类化合物已成为工业场地常见污染物。例如，1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane，简称1,2-DCA)是一种无色透明油状液体，具有高脂溶性、低可燃性、高蒸汽压及低沸点等特点，在工业上常常作为聚氯乙烯等化学品化学合成的工业原料、有机溶剂和石油添加剂；1,2-二氯丙烷(1,2-dichloropropane,简称1,2-DCP)是一种优良的有机溶剂，常用于配制油漆、油墨、稀释剂及PVC胶粘剂；1,1,2-三氯乙烷(1,1,2-trichloroethane,简称1,1,2-TCA)常用作油、脂肪、树脂、蜡的溶剂，染料和香料萃取剂，农业杀虫剂、熏蒸剂，以及合成1,1-二氯乙烯和树脂、橡胶等的中间体。由于在生产与存储过程中的不当管理，氯代烷烃在地下水环境中被常常被检出且超标严重。它们均具有致癌、致畸、致突变效应，严重威胁到人类健康，已经被列为我国环境“优先控制污染物”名单。

脱卤微生物介导的还原脱氯过程是厌氧环境中有机氯化物生物降解的一条主要途径，这类微生物又叫做有机卤呼吸细菌。氯代烷烃的厌氧降解主要是通过有机卤呼吸细菌所催化的(1)二卤代消除过程，除去两个相邻的氯原子形成碳-碳双键，生成低氯取代或无氯取代烯烃；或(2)氢解消除过程，通过质子置换单个氯原子而形成低氯代烷烃。基于有机卤呼吸细菌的生物修复方法具有成本低、绿色可持续性和环境友好等特点，因此有着广阔的应用前景。目前，已从污染场地分离出几种能够厌氧降解氯代烷烃类有机氯的有机卤呼吸细菌，例如Dehalobacter sp.菌株WL，Dehalogenimonas alkenigignens菌株IP3-3T，Dehalogenimonas lykanthroporepellens菌株BL-DC-9，Dehalococcoidesides mccartyi菌株195，Desulfitobacterium sp.菌株AusDCA，Desulfitobacterium dichloroeliminans菌株LMG。以上这些菌株可以使用乙酸盐/乳酸盐作为碳源，专一使用H₂作为电子供体，但不能用乙酸盐同时使作为碳源和电子供体。目前，只有Desulfuromonas chloroethenica菌株TT4b和Geobacter lovleyi菌株SZ被报道可以使用乙酸盐作为碳源和电子供体，但它们均不能降解氯代烷烃类有机氯，尤其是Geobacter属中未报道有可降解氯代烷烃类有机氯的有机卤呼吸细菌。

发明内容

本发明的目的在于提供一株新型有机卤呼吸地质杆菌属(Geobacter)细菌的分离纯化及其在生物修复氯代烷烃类污染物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一株新型有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE菌株，该菌株有机卤呼吸地质杆菌IAE001(Geobacter)已于2020年7月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(菌种保藏号CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号：CGMCC 1.5298，分类命名为Geobacte lovleyi。

菌株IAE为革兰氏阴性细菌，通过16s rRNA基因序列相似性比较，与地质杆菌属(Geobacter)中下的lovleyi种菌株SZ(菌种保藏号

BAA-1151^TM)的物种相似度为99.68％，因此鉴定菌株IAE属于地质杆菌。

一种有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)的应用，所述菌株IAE在降解氯代烷烃类化合物中的应用。

所述氯代烷烃类化合物为1,2-二氯乙烷、1,2-二氯丙烷、1,1,2-三氯乙烷。

所述菌株IAE在还原异化铁中的应用。

一种降解氯代烷烃类化合物的菌剂，菌剂含所述的有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE菌株。

所述菌剂为该菌株的培养物、菌悬液、浓缩物，分离液中的一种或几种。

所述该菌株的培养物在厌氧无机盐培养基中加入碳源、电子供体和电子受体，接种所述有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE菌株于pH 7.2、30℃避光静置下培养2-6天；其中，碳源和电子供体为5 mM乙酸盐，并按1％(v/v)接种量接种IAE菌株；所得培养物离心收集沉淀经重悬，获得重悬液；液相为分离液；培养物经浓缩得浓缩物。

一种还原异化铁的菌剂，菌剂含所述的有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE菌株。

所述该菌株的培养物在厌氧无机盐培养基中加入碳源、电子供体和电子受体，接种所述有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE菌株于pH 7.2、30℃避光静置条件下培养7-9天；其中，碳源和电子供体为5 mM乙酸盐，并按1％(v/v)接种量接种IAE菌株；所得培养物离心收集沉淀经重悬，获得重悬液；液相为分离液；培养物经浓缩得浓缩物。

本发明所具有的优点：

本发明获得地质杆菌IAE菌株是由污染河流底泥中筛选出的一株氯代烷烃降解型地质杆菌(Geobacter)。

BAA-1151^TM)的物种相似度为99.68％，即鉴定菌株IAE属于地质杆菌。

该菌株在30℃和pH 7.2生长条件下可将1,2-DCA、1,2-DCP和1,1,2-TCA分别降解至乙烯、丙烯和一氯乙烯，对于1,2-DCA的最高耐受浓度可达10mM。对氯代烷烃类化合物具有降解能力，并且对于丰富污染场地原位修复的菌种资源具有重要意义。此外，IAE菌株还能够将6.4mM的Fe(III)完全还原成Fe(II)。

附图说明：

图1为本发明实施例提供的扫描电镜下菌株IAE细胞形态图；

图2为本发明实施例提供的菌株IAE对1,2-DCA的降解曲线；

图3为本发明实施例提供的菌株IAE对1,2-DCP的降解曲线；

图4为本发明实施例提供的菌株IAE对1,1,2-TCA的降解曲线；

图5为本发明实施例提供的菌株IAE对Fe(III)的还原曲线。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步的解释说明，但不应理解为对本发明的限定。

实施例1：菌株的分离、纯化与鉴定

(1)配置基础培养基：

厌氧无机盐培养基成分为：NaCl 1.0g/L、MgCl₂·6H₂O 0.5g/L、KH₂PO₄ 0.2g/L、NH₄Cl 0.3g/L、KCl 0.3g/L、CaCl₂·2H₂O 0.015g/L、FeCl₂·4H₂O 1.5mg/L、CoCl₂·6H₂O190μg/L、MnCl₂·4H₂O 100μg/L、ZnCl₂ 70μg/L、H₃BO₃ 6μg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 36μg/L、NiCl₂·6H₂O 24μg/L、CuCl₂·2H₂O 2μg/L、Na₂SeO₃·5 H₂O 6μg/L、Na₂WO₄·2H₂O 8μg/L、刃天青指示剂0.025％(w/v)、L-半胱氨酸24mg/L、Na₂S·9H₂O48mg/L、二硫苏糖醇77mg/L、NaHCO₃ 2.52g/L(30mM)、乙酸钠0.41g/L(5mM)、调节pH至7.2-7.3。121℃高压灭菌后15分钟加入复合维生素，培养基中各种维生素终浓度如下：生物素20μg/L、叶酸20μg/L、盐酸吡哆醇100μg/L、核黄素50μg/L、硫胺素50μg/L、泛酸50μg/L、尼克酸50μg/L、维生素B₁₂ 50μg/L、对氨基苯甲酸50μg/L、硫辛酸50μg/L。

(2)氯代烷烃厌氧降解菌的富集：

分装100mL上述步骤(1)所述厌氧无机盐培养基至160mL血清瓶中，添加5mM乙酸钠作为碳源和电子供体，通过微量进样器加入10μL(液相浓度1.23mM)1,2-DCA作为电子受体，顶空气体为N₂/CO₂(80/20，vol/vol)。在厌氧手套箱中，接种3mL沉积物泥浆悬液(采自辽宁沈阳细河)后以黑胶塞和铝盖封闭血清瓶建立富集培养体系。于pH 7.2、30℃避光静置培养，应用气相色谱法监测1,2-DCA的降解进程，待1,2-DCA完全降解为乙烯后，3％(v/v)接种量重复转接至同样成分培养基5次。

(3)氯代烷烃厌氧降解菌的分离：

将9mL上述步骤(1)所述无机培养基分装至20mL培养瓶中，置换顶空气体为N₂/CO₂(80/20，v/v)，黑胶塞和铝盖密封后通过微量进样器加入2μL 1,2-DCA。从上述步骤(2)160mL血清瓶中转接1mL上述氯代烷烃厌氧降解菌的富集培养菌液至上述培养瓶中建立10^-1稀释度瓶，以此类推，重复上述10倍梯度稀释操作直至建立10^-10稀释度瓶。待10^-10稀释培养液中1,2-DCA被完全降解至乙烯后，取约50μL培养液涂布于含40mM柠檬酸铁，10mM乙酸钠的固体培养基的培养皿(固体培养基由上述步骤(1)中液体培养基中加入2％琼脂粉)。将培养皿移入厌氧手套箱，30℃避光培养9-12天，挑取单菌落并接种到含1,2-DCA(1.23mM)和5mM乙酸钠的液体培养基中，于pH 7.2、30℃避光静置培养。通过监测1,2-DCA的降解情况，筛选1,2-DCA降解菌。

(4)菌株的鉴定：

通过上述流程筛选所得1,2-DCA降解菌株菌落呈光滑白色。菌体呈杆状，革兰氏染色阴性(参见图1)。采用土壤基因组DNA提取试剂盒提取其基因组，以细菌16S rRNA基因通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)进行PCR扩增，扩增产物提交测序公司测序。16s rRNA序列为AAACTGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGAGTGAAGGAGCTTGCTCTTTCATTTAGTGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTAGATAATCTGCCTTAGACTCTGGGATAACATCTCGAAAGGGGTGCTAATACCGGATAAGCCCACGATGGCGTAAGTCATTGCGGGAAAAGGGGGCCTCTGAATATGCTCTTGATCTAAGATGAGTCTGCGTACCATTAGCTAGTTGGTAGGGTAAGAGCCTACCAAGGCGACGATGGTTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGCGCAATGGGGGAAACCCTGACGCAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTCTAGAGGGAAGAAATGATAATCGGTTAATACCCGGTTTTCTTGACGGTACCTCTGAAGGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTGTTCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGCGTGTAGGCGGTTTGTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCTGGGCTCAACCTGGGAAGTGCATTGGAAACTGGCAGACTTGAATACGGGAGAGGGTAGTGGAATTCCTAGTGTAGGAGTGAAATCCGTAGATATTAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCTACCTGGACCGATATTGACGCTGAGACGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTACTAGGTGTTGCGGGTATTGACCCCTGCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTACTCCGCCTGGGAAGTACGGTCGCAAGACTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGCAGAACCTTACCTGGTCTTGACATCTACGGAACCTCTATGAAAGTAGAGGGTGCCTTTCGGGGAGCCGTAAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCCTCAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTGTGGAGACTGCCGGTGTCAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCCGGTACAAAGAGTTGCGATGCCGCGAGGTGGAGCTAATCTCATAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGGGAGTCGATTGGTCCCGAAGTACGTGAGCTAACCCTTTTGGGAGGCAGCGTCCTAAGGAATGGTCGGTGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTAA

对该菌株的16S rRNA基因序列的BLAST检索结果表明，其与来自地质杆菌属lovleyi种的SZ菌株的物种同源性达到99.68％。该菌株被归类于地质杆菌属并命名为IAE，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期2020年7月7日，保藏编号：CGMCC1.5298。

实施例2：菌株IAE对1,2-DCA的降解性能鉴定

上述100ml步骤(1)所述厌氧无机盐基础培养基中加入5mM乙酸钠，乙酸钠作为碳源和电子供体，通过微量进样器添加10μL(液相浓度1.23mM)1,2-DCA作为电子受体，1％(v/v)接种IAE纯菌，于pH 7.2、30℃避光静置培养。应用气相色谱(Agilent 7890B)串联火焰离子化检测器(FID)，装载Agilent DB-624毛细管柱(60m×0.32mm×1.8μm)测定1,2-DCA及其降解产物。气相色谱参数如下：进样口温度200℃；升温程序为，60℃，保持2min；然后以25℃/min的速度升温到200℃，保持1min；载气为氦气，柱流速3mL/min；FID检测器温度300℃；燃气为氢气，流速30mL/min，助燃剂为合成空气，流速350mL/min，尾吹气为氮气，流速25mL/min。自动进样器参数如下：GC循环时间为17min，样品瓶平衡时间15min，进样持续时间0.5min；加热箱温度为70℃，定量环温度125℃，传输线温度135℃。依据保留时间和峰面积对母体化合物和降解产物进行定性定量分析(参见图2)。

分析结果显示IAE菌株可以将1,2-DCA(液相浓度为1.23mM)彻底降解至无毒害的乙烯，周期约为52h。

实施例3：菌株IAE对1,2-DCP的降解性能鉴定

上述100ml步骤(1)所述厌氧无机盐基础培养基中加入5mM乙酸钠，乙酸钠作为碳源和电子供体，通过微量进样器添加6μL(液相浓度0.57mM)1,2-DCP作为电子受体，1％(v/v)接种IAE纯菌，于pH 7.2、30℃避光静置培养。通过上述气相色谱条件定量监测1,2-DCP及其降解产物丙烯(参见图3)。

分析结果显示IAE菌株可以将1,2-DCP(液相浓度为0.57mM)彻底降解至丙烯，周期约为144h。

实施例4：菌株IAE对1,1,2-TCA的降解性能鉴定

以5mM乙酸钠作为碳源和电子供体，通过微量进样器添加6μL(液相浓度0.63mM)1,1,2-TCA作为电子受体，1％(v/v)接种IAE纯菌培养液，于pH 7.2、30℃避光静置培养。通过上述气相色谱条件定量监测1,1,2-TCA及其降解产物一氯乙烯(参见图4)。

分析结果显示IAE菌株可以将1,1,2-TCA(液相浓度为0.63mM)完全降解至一氯乙烯，周期约为96h。

实施例5：菌株IAE对Fe(III)的还原能力

Fe(III)作为电子受体以可溶态柠檬酸铁(6.4mM)的形式添加至上述100ml步骤(1)所述无机盐基础培养基中，以5mM乙酸钠作为碳源和电子供体。IAE菌株接种量为1％(v/v)，于pH 7.2、30℃避光静置培养9天，培养体系中的Fe(III)被完全还原为Fe(II)。

Fe(III)/Fe(II)的检测方法如下：在厌氧手套箱中抽取样品，并与HCl混合至终浓度0.5M(每1mL样品加入50μL饱和浓盐酸)，室温过夜反应。首先测定样品(或标准品)中总Fe的浓度：向2mL离心管中分别加入750μL ddH₂O、100μL样品(或标准品)、150μL还原剂溶液(1.4M盐酸羟胺溶于2M HCl中)，反应30min后，加入100μL菲洛嗪溶液(0.01M菲洛嗪溶于0.1M的乙酸铵溶液中)和150μL缓冲溶液(pH5的5M乙酸铵溶液)，反应2-3min后，通过分光光度法进行测量562nm读数。再测定样品中的Fe(II)的浓度：向2mL离心管中加入1mL混合液A(750μL ddH₂O、150μL上述菲洛嗪溶液和150μL上述缓冲溶液)，和100μL样品(或标准品)，反应2-3min后，通过分光光度法进行测量562nm读数。最后用总Fe的浓度减去Fe(II)的浓度，即为样品(或标准品)中Fe(III)的浓度(参见图5)。

综上所述，本发明提供的地质杆菌IAE菌株可以在2天左右时间将1,2-DCA(液相浓度1.23mM)彻底降解为无毒的乙烯；可以在6天左右时间将1,2-DCP(液相浓度0.57mM)彻底降解为丙烯；在4天内将1,1,2-TCA(液相浓度0.63mM)降解为一氯乙烯；在9天左右时间将体系中的6.4mM Fe(III)完全还原为Fe(II)。

将所述菌株按照上述记载制备菌剂，如，在无机盐培养基中加入碳源、电子供体和电子受体，接种所述有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE菌株于pH 7.2、30℃避光静置培养2-6天；其中，碳源和电子供体为乙酸盐；每100ml无机盐培养基中加入5mM乙酸钠，并按1％(v/v)接种量接种IAE菌株；所得培养物离心收集沉淀经重悬，获得重悬液；液相为分离液；培养物经浓缩得浓缩物,即得菌剂。将其施入环境或土壤中对氯代烷烃污染场地的生物修复有着良好的应用前景。

以上所述实施例，为本发明专利较佳应用案例，但并非对本发明产生任何形式上的限制。在实际应用过程中，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例。

序列表

<110> 中国科学院沈阳应用生态研究所

<120> 一株新型有机卤呼吸地质杆菌及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1562

<212> DNA

<213> 有机卤呼吸地质杆菌(IAE001)

<400> 1

aaactggaga gtttgatcct ggctcagaac gaacgctggc ggcgtgccta acacatgcaa 60

gtcgaacgga gtgaaggagc ttgctctttc atttagtggc gcacgggtga gtaacgcgta 120

gataatctgc cttagactct gggataacat ctcgaaaggg gtgctaatac cggataagcc 180

cacgatggcg taagtcattg cgggaaaagg gggcctctga atatgctctt gatctaagat 240

gagtctgcgt accattagct agttggtagg gtaagagcct accaaggcga cgatggttag 300

ctggtctgag aggatgatca gccacactgg aactgagaca cggtccagac tcctacggga 360

ggcagcagtg gggaattttg cgcaatgggg gaaaccctga cgcagcaacg ccgcgtgagt 420

gatgaaggct ttcgggtcgt aaagctctgt ctagagggaa gaaatgataa tcggttaata 480

cccggttttc ttgacggtac ctctgaagga agcaccggct aactccgtgc cagcagccgc 540

ggtaatacgg agggtgcaag cgttgttcgg atttattggg cgtaaagcgc gtgtaggcgg 600

tttgttaagt ctgatgtgaa agccctgggc tcaacctggg aagtgcattg gaaactggca 660

gacttgaata cgggagaggg tagtggaatt cctagtgtag gagtgaaatc cgtagatatt 720

aggaggaaca ccggtggcga aggcggctac ctggaccgat attgacgctg agacgcgaaa 780

gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgagtacta 840

ggtgttgcgg gtattgaccc ctgcagtgcc gcagctaacg cattaagtac tccgcctggg 900

aagtacggtc gcaagactaa aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag 960

catgtggttt aattcgacgc aacgcgcaga accttacctg gtcttgacat ctacggaacc 1020

tctatgaaag tagagggtgc ctttcgggga gccgtaagac aggtgctgca tggctgtcgt 1080

cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaacccc tatcctcagt 1140

tgccatcatt aagttgggca ctctgtggag actgccggtg tcaaaccgga ggaaggtggg 1200

gatgacgtca agtcctcatg gcccttatga ccagggctac acacgtgcta caatggccgg 1260

tacaaagagt tgcgatgccg cgaggtggag ctaatctcat aaagccggtc tcagttcgga 1320

ttggagtctg caactcgact ccatgaagtt ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc 1380

cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccacgg gagtcgattg 1440

gtcccgaagt acgtgagcta acccttttgg gaggcagcgt cctaaggaat ggtcggtgac 1500

tggggtgaag tcgtaacaag gtagccgtag gggaacctgc ggctggatca cctcctttct 1560

aa 1562

Claims

1.一株新型有机卤呼吸地质杆菌，其特征在于：地质杆菌IAE001菌株，该菌株已于2020年7月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(菌种保藏号CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号：CGMCC 1.5298。

2.一种权利要求1所述的有机卤呼吸地质杆菌的应用，其特征在于：所述菌株IAE在降解氯代烷烃类污染物中的应用。

3.按权利要求2所述的有机卤呼吸地质杆菌的应用，其特征在于：所述氯代烷烃类化合物为1,2-二氯乙烷、1,2-二氯丙烷、1,1,2-三氯乙烷。

4.按权利要求1所述的有机卤呼吸地质杆菌的应用，其特征在于：所述菌株IAE在还原异化铁中的应用。

5.一种降解氯代烷烃类化合物的菌剂，其特征在于：菌剂含权利要求1所述的有机卤呼吸地质杆菌IAE 001菌株。

6.按权利要求5所述降解氯代烷烃类化合物的菌剂，其特征在于：所述菌剂为该菌株的培养物、菌悬液、浓缩物，分离液中的一种或几种。

7.按权利要求6所述降解氯代烷烃类化合物的菌剂，其特征在于：所述该菌株的培养物在厌氧无机盐培养基中加入碳源、电子供体，接种所述有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE菌株于pH 7.2、30℃避光静置下培养；其中，碳源和电子供体为乙酸盐；电子受体为一种氯代烷烃类化合物。

8.一种还原异化铁的菌剂，其特征在于：菌剂含权利要求1所述的有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE 001菌株。

9.按权利要求5所述还原异化铁的菌剂，其特征在于：所述菌剂为该菌株的培养物、菌悬液、浓缩物，分离液中的一种或几种。

10.按权利要求9所述还原异化铁的菌剂，其特征在于：所述该菌株的培养物在无机盐培养基中加入碳源、电子供体，接种所述有机卤呼吸地质杆菌(Geobacter)IAE 001菌株于pH 7.2、30℃避光静置条件下培养；其中，碳源和电子供体为乙酸盐；电子受体为柠檬酸铁。