CN112067806A - Caspase-1在制备提高CAR-T治疗效果的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了Caspase‑1在制备提高CAR‑T治疗效果的药物中的应用。本发明通过细胞实验证明了抑制Caspase‑1的表达和/或活性可显著减少CAR‑T治疗引发的IL‑1β释放，证明Caspase‑1在CAR‑T治疗诱导的巨噬细胞IL‑1β释放中发挥着重要作用。Caspase‑1的应用为提高CAR‑T治疗效果、缓解其毒副作用提供了理论基础和新思路。

Description

Caspase-1在制备提高CAR-T治疗效果的药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医药与分子生物学领域，涉及Caspase-1在制备提高CAR-T治疗效果的药物中的应用。
背景技术
全球每年因恶性肿瘤死亡人数为8927.4万人，成为仅次于心脑血管疾病的第二大死因。目前，恶性肿瘤的治疗方法主要有手术、化疗、放疗等多种手段，各种治疗手段均可取得一定治疗效果，但也都存在不足或缺点。肿瘤免疫学治疗作为一种新兴疗法，现已发展成为继手术、化疗和放疗之后的第四种肿瘤治疗模式。近年来肿瘤免疫治疗发展迅速，根据不同的作用机制，肿瘤免疫治疗药物分为六类：靶向T细胞免疫调节剂、其他免疫调节剂、肿瘤疫苗、细胞疗法、溶瘤病毒、CD3靶向双特异性抗体等。肿瘤免疫治疗的嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T)由胞外抗原结合区(由来源于单克隆抗体的轻链(VL)和重链(VH)组成，中间由带韧性的铰链区连接形成单链抗体、跨膜区域和胞内信号转导区组成。CAR-T疗法是应用患者自身的T淋巴细胞，经过实验室重新改造，装载上具有识别肿瘤抗原的受体及共刺激分子，体外扩增后再次回输入患者体内，从而识别并攻击自身的肿瘤细胞。CART细胞疗法对于血液瘤疗效显著，2017年8月，美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市全球首个用于治疗25岁以下复发难治性急性B淋巴细胞白血病(r/rBALL)的靶向CD19的CAR-T药物(商品名:Kymriah)。同年10月，治疗复发难治性大B细胞淋巴瘤(r/rLBCL)的CAR-T药物(商品名:Yescarta)获得批准上市。这两种CAR-T疗法药物的上市标志着细胞治疗时代的到来。
随着CAR-T疗法研究的深入，其局限性也逐渐凸显。CAR-T细胞在识别杀伤肿瘤细胞时，其单链可变片段(scFv)与靶抗原相互接触，在胞内CD3结构以及共刺激分子双重信号的激活下，CAR-T细胞在短时间内大量增殖活化，同时分泌大量免疫刺激细胞因子如IFN-γ、TNF-α和IL-2等，此外，在CAR-T细胞分泌细胞因子的刺激以及与靶细胞直接接触的作用下，可以活化巨噬细胞并诱导其释放高水平的促炎细胞因子，如IL-6、IL-1β以及TNF-α等，由此引发CAR-T治疗后严重的毒副作用，即细胞因子风暴或细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性。目前，最新的研究证明，CAR-T治疗引发的CRS主要是由巨噬细胞释放的IL-6、IL-1和NO介导的，并且阻断IL-1的作用，能在有效控制CRS的同时缓解神经毒性，IL-1因此被确定为治疗CRS的新靶点。本申请通过对CAR-T细胞治疗引发巨噬细胞释放IL-1β的机制的研究，发现Caspase-1抑制剂可显著抑制共培养诱导的培养上清液中IL-1β的增加。目前，Caspase-1在制备提高CAR-T治疗效果的药物中的应用未见报道，这一发明为提高CAR-T治疗效果、缓解其毒副作用提供了新思路。
发明内容
本发明的目的是提供一种Caspase-1在制备提高CAR-T治疗效果的药物中的应用，为提高CAR-T治疗效果、缓解CAR-T治疗的毒副作用提供了理论基础和新思路。
本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：
本发明的第一方面提供了Caspase-1在制备提高CAR-T治疗效果的药物中的应用。
进一步，所述药物包括抑制Caspase-1表达和/或活性的试剂。
本发明的第二方面提供了一种抑制Caspase-1表达和/或活性的试剂。
进一步，所述试剂选自以下组：
(1)干扰Caspase-1表达的干扰RNA或其前体；
(2)靶向Caspase-1基因序列的短发夹RNA或反义分子；
(3)抗Caspase-1的抗体；
(4)Caspase-1的竞争性抑制剂。
进一步，所述试剂包括以下形式：多核苷酸、多肽、表达载体、小分子化合物、或其组合物。
本发明的第三方面提供了一种提高CAR-T治疗效果的药物组合物。
进一步，所述药物组合物包括本发明第二方面所述的试剂。
进一步，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或辅料。
进一步，所述药学上可接受的载体和/或辅料是指可以与本发明第二方面所述的试剂一起施用给患者的任何载体或辅料，它们不破坏本发明第二方面所述的试剂的药理活性。
进一步，所述载体和/或辅料包括但不限于离子交换剂，矾土，硬脂酸铝，卵磷脂，半乳化药物递送系统(SEDDS)，在药物剂型中使用的表面活性剂，血清蛋白，缓冲物质，水，盐或电解质，基于纤维素的物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，聚乙二醇和羊毛脂。也可以使用环糊精例如α-环糊精、β-环糊精、和γ-环糊精，或化学修饰的衍生物例如羟基烷基环糊精，包括2-和3-羟基丙基-β-环糊精、或其它增溶衍生物来促进本发明第二方面所述试剂的递送。
本发明的第四方面提供了Caspase-1在筛选提高CAR-T治疗效果的药物中的应用。
进一步，所述应用包括Caspase-1在提高CAR-T治疗效果的候选药物筛选方法中的应用。
本发明的第五方面提供了一种提高CAR-T治疗效果的候选药物的筛选方法。
进一步，所述筛选方法包括如下步骤：
(1)向测试组中的检测体系中加入待检测的测试物质；
(2)检测所述测试组的体系中Caspase-1的表达水平和/或活性，并与阴性对照组进行比较；
(3)选择测试组中与阴性对照组相比可以抑制Caspase-1表达水平和/或活性的测试物质，即为提高CAR-T治疗效果的潜在药物。
进一步，所述检测体系选自细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系中的一种或多种。
进一步，所述测试物质包括但不限于：针对AIM2基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物。
除非另有定义，本发明上下文中的所有科技术语具有本领域普通技术人员所理解的相同含义。此外，对部分术语解释如下。
“药物组合物”
本发明提供了一种提高CAR-T治疗效果的药物组合物。在一方面，本发明提供了可药用的组合物，所述组合物包括有效治疗量的活性成分(抑制Caspase-1表达和/或活性的试剂)与一种或多种药学上可接受的载体和/或辅料的配方；在另一方面，本方面的活性成分可以通过上述方式给予或与可药用载体的混合物一起给予，并可以与其他试剂联合给予。联合治疗包含连续的、同时的和分开或共同给予一种或多种本发明的活性成分，其中第一次给予的疗效在随后给予的物质给予前并不消失。
本发明的药物组合物可以特定配制以固体或液体形式给予，包括：(1)口服给药，例如，灌服剂(水或非水溶液或混悬剂)、片剂例如那些舌用的靶向用于含服、舌下和系统吸收的丸剂、粉剂、颗粒剂、糊剂；(2)非消化道给药，例如，皮下给药、肌肉注射、静脉注射或硬膜外注射例如灭菌溶液或混悬剂、或控释制剂；(3)局部涂药，例如皮肤用乳剂、软膏或控释贴片或喷雾剂；(4)阴道内或直肠内给药，例如，阴道环、乳剂或泡沫；(5)舌下给药；(6)眼部给药；(7)经皮给药；(8)鼻腔给药。
用于口服给药的本发明的药物的液体制剂形式包括药学上可接受的乳剂、微乳、溶液、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性成分外，液体制剂还可以包含本技术领域中广泛使用的惰性稀释剂，例如，水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酷、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、油类、四氢呋喃甲醇、聚乙二醇和山梨聚糖脂肪酸酯，或其混合物。
除了稀释剂、口服组合物还可以包括佐剂如润湿剂、乳化和助悬剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
除了活性成分外，混悬剂还可以包含助悬剂如环氧乙烷异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨醇酯、微晶纤维素、间羟基铝、皂粘土、琼脂和黄耆胶，和其混合物。
本发明用于口服给药的剂型可以是胶囊、扁胶囊、丸剂、片剂、锭剂(使用芳香基底，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄耆胶)、粉剂、颗粒剂或水或非水液体的溶液或混悬剂、或者是水包油或油包水的液体乳、或者是酏剂或糖浆剂、或者是锭剂和/或口洗剂等，每一种都包含一定量的本发明的活性成分。本发明的活性成分也可以用大丸、药糖剂或糊剂给药。
用于口服给药的本发明固体药物剂型中(胶囊、片剂、丸剂、锭剂、粉剂、颗粒剂等)，活性成分是与一种或多种药学上可接受的载体相混合。
在胶囊剂、片剂和丸剂中，药物组合物还可以包含缓冲剂。类似的固体组合物可以在软壳和硬壳明胶胶囊中用作填充剂，所述固体组合物辅料如乳糖或牛乳糖，以及高分子量聚乙二醇等。
片剂可以可选地与一种或多种辅料通过挤压或模压来制备。普通挤压片剂可以通过粘合剂(例如，明胶或羟丙甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羧甲基淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备。模压片剂可以通过适当的机器模压已用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物来制备。
本发明药物组合物的片剂和其他固体剂型，如锭剂、胶囊、丸剂和颗粒剂可以压痕或包衣和包壳，如肠溶衣和其他药物制剂领域中已知的包衣。所述片剂和其他固体剂型同样也可以配方使所给予活性成分达到缓释或控释。
本发明的药物组合物用于直肠或阴道给药的制剂可以是栓剂，所述栓剂可以通过将一种或多种本发明的活性成分与一种或多种适当的载体或辅料例如聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯相混合来制备，所述栓剂蜡或水杨酸酯室温下为固体但体温下为液体，因此可以在直肠内或阴道内融化并释放活性化合物。
本发明活性成分用于局部或透皮给药的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、透皮贴剂和吸入剂。活性化合物以无菌条件下与药学上可接受的载体相混合，任何防腐剂、缓冲剂或抛射剂可以根据需要相混合。
除包含本发明的一种活性成分外，软膏剂、糊剂、乳剂和凝胶剂还可包含辅料如动物和植物脂肪、油类、蜡类、石蜡、淀粉、黄耆胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、聚硅酮类、皂粘土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合物。
除包含本发明的活性成分外，粉末剂和喷雾剂还可包含辅料，如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或其混合物。此外喷雾剂还可包含常用的抛射剂如氯代氟代烃类和挥发性未取代烃类例如丁烷和丙烷。
透皮贴剂具有使本发明的药物组合物定向递释至身体的优点。这种药物剂型可以通过使药物组合物溶解或分散在适当的介质中来制备。吸收促进剂同样也可以用于增加化合物穿过皮肤的量。透皮的速度可以通过添加一层控释膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中并控制。
适用于非消化道给药的本发明的药物剂型由一种或多种本发明的活性成分与一种或多种可药用的无菌等渗水或非水的溶液、分散液、混悬液或乳剂组合组成，或与临用前重组为无菌注射溶液或混悬液的无菌粉末组合而成，所述无菌粉末可以包含糖类、醇类、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使溶液与受体血液等渗的溶质、助悬剂或增稠剂。
在一些情况下，为了延长药物效果，需要减缓从皮下或肌肉内注射的药物吸收的速度。可以通过使用结晶的液体或疏水的非晶形材料混悬液来实现。药物吸收的速度依赖于药物溶出度，溶出度反过来依赖于晶粒大小和结晶形式。此外，胃肠外给药的延迟吸收可以通过将药物溶解或混悬在油类运载体中来实现。
另外，本发明的药物组合物还可包括用于缓解CAR-T治疗毒副作用的其他药物。本发明的的活性成分与用于缓解CAR-T治疗毒副作用的其他药物可以制备成单独的制剂形成联合应用，也可两者制备成一种制剂形式以组合物的形式应用。
本发明的优点和有益效果：
本发明首次将Caspase-1应用于提高CAR-T治疗效果的药物中的应用，在提高CAR-T治疗效果的应用中，表现出有益效果。Caspase-1的应用为提高CAR-T治疗效果、缓解CAR-T治疗的毒副作用提供了理论基础和新思路。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1显示的是Western Blot检测抑制Caspase-1的活性对共培养上清中及巨噬细胞中炎性小体相关蛋白的影响结果图；
图2显示的是ELISA方法检测抑制Caspase-1的活性对CAR-T治疗引发的IL-1β释放的影响结果图，其中，**P<0.01；***P<0.001；n＝3；
图3显示的是Western Blot方法检测IL-1β对巨噬细胞PD-L1和IDO表达的影响。A：10ng/mL IL-1β处理THP-1细胞诱导的M2型巨噬细胞24h；B：10ng/mL IL-1β处理人外周血单核细胞诱导的巨噬细胞24h；
图4显示的是Western Blot方法检测Caspase-1抑制剂(VX-765和Ac-YVAD-CMK)对CAR-T治疗诱导的巨噬细胞PD-L1和IDO表达影响的结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解，仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件，实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1构建细胞共培养模型
1、实验材料
ELISA试剂盒购自于杭州联科生物技术股份有限公司，Western及IP细胞裂解液购自于上海碧云天生物技术有限公司，Raji细胞(表达CD19的肿瘤细胞)、THP-1细胞购自于美国ATCC生物生物标准品资源中心，CD19 CAR-T细胞由徐州医科大学肿瘤防治研究所提供。
2、模型建立方法
(1)THP-1细胞5×105/孔于6孔板中诱导为M2型巨噬细胞。
(2)CD19 CAR-T细胞、Raji细胞分别计数，以CAR-T细胞：Raji细胞：巨噬细胞为1:3:1的比例，接种至6孔板中，与巨噬细胞一起共培养，每孔2mL培养基，放入37℃、5％CO2的恒温孵箱中培养。
(3)药物处理组：在加入CAR-T细胞和Raji细胞之前，THP-1细胞换液，加入2mL新鲜细胞培养基，同时加入VX-765(20μM)、Ac-YVAD-CMK(10μM)培养2h，随后去除培养液，并加入含有CAR-T细胞、Raji细胞以及上述相应药物的培养液。细胞共培养24h后，进行后续实验。
实施例2抑制Caspase-1的活性对CAR-T治疗引发的IL-1β释放的影响
本实施例选择了两种不同的Caspase-1抑制剂，分别是VX-765和Ac-YVAD-CMK，抑制Caspase-1的酶活性以检测抑制Caspase-1对CAR-T治疗引发的IL-1β释放的影响。
1、实验方法
将CD19 CAR-T、肿瘤细胞(Raji)以及巨噬细胞进行共培养，同时加入VX-765和Ac-YVAD-CMK，24h后，收集培养上清以及巨噬细胞进行Western Blot及ELISA的检测。具体Western Blot检测步骤和ELISA检测步骤分别如下：Western Blot检测步骤：
(1)按照细胞培养体系将CD19 CAR-T、肿瘤细胞(Raji)以及巨噬细胞三种细胞按照分组共培养24h，24h后收集实验组及对照组的细胞培养上清，5×loa ding buffer加入上清中，100℃煮10min，分装后存于-80℃冰箱；
(2)收集上清后，将6孔板置于冰上，PBS洗贴壁的巨噬细胞两遍，弃去洗液。加入RIPA裂解液，60μL/孔，裂解贴壁细胞；
(3)用刮板将细胞刮下，将细胞裂解液转移至1.5mL EP管中，涡旋30s，冰上5min，重复3次；
(4)4℃，12000g，15min，离心，将上清吸出，取2μL用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，剩余上清液中以4:1的比例加入5×loading buffer，100℃，金属浴煮10min，5000rpm，5min，离心，-20℃储存；
(5)取96孔板，第一排选9个孔每孔加10μL ddH2O，吸取10μL蛋白原液标准品(4mg/mL)加入第9孔，吹打混匀后，吸取10μL至第8孔，依次往前进行倍比稀释，第一孔加10μLddH2O作空白对照，将待测蛋白样本2μL和8μL ddH2O加入待测孔，混合均匀。配制BCA定量液，溶液A与溶液B按照50:1的比例混匀，每孔加入200μL BCA定量液，37℃，孵育30min，在OD值562nm处检测吸光度，根据标准曲线计算蛋白浓度；
(6)SDS-PAGE电泳，首先配制10％的SDS-PAGE分离胶及浓缩胶，细胞培养上清检测使用预制胶；
(7)取出-20℃冻存样品，100℃，金属浴煮5min。随后，3000rpm，离心5min；
(8)上样，蛋白上样量为10-30μg，对照孔中加入Marker 5μL，恒压100V，电泳至待检测蛋白样品中的溴酚蓝跑至距分离胶下缘1cm处，停止电泳；
(9)转印，提前配制转印液，4℃预冷，将大小合适的生物硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,NC)、滤纸和切好的凝胶在转印液中浸湿，按照滤纸、NC膜、凝胶、滤纸的顺序从下至上铺在半干转仪阳极板上，确保中间无气泡残余，盖上阴极板和盖子，恒流180mA，运行65min；
(10)封闭，转印结束后，取出NC膜，置于5％的脱脂牛奶中，室温，水平摇床封闭1h。封闭结束后用TBST洗2遍，5min/次；
(11)一抗孵育。根据说明书进行操作；
(12)二抗孵育。根据说明书进行操作；
(13)显影，配制ECL发光液，A液和B液1:1混匀后，均匀滴在NC膜上，使用化学发光成像系统(Tanon)成像拍照，分析处理。
ELISA检测细胞培养上清中IL-1β含量的步骤：
(1)按照细胞共培养体系将三种细胞按照分组共培养24h。收集实验组及对照组的细胞培养上清；
(2)将细胞培养上清4℃，300g，10min，离心；
(3)离心后，弃去细胞沉淀，将上清分装，贮存于-80℃超低温冰箱；
(4)取出上清，使其缓慢恢复至室温，按照ELISA试剂盒步骤进行人IL-1β含量检测。
2、数据统计分析
实验数据采用GraphPad Prism 5.0统计学软件进行分析处理。Western Blot结果使用Image lab图像分析软件分析图像。统计图使用GraphPad Prism 5.0软件绘制。计量资料以均数±标准误(mean±SEM)表示。两组间比较采用t检验。多组间比较采用单因素方差分析，取α＝0.05为检验水准。所有结果均以*P<0.05表示差异有统计学意义，**P<0.01表示有显著性差异。
3、实验结果
实验结果显示，CAR-T、肿瘤细胞与巨噬细胞共培养组或同时添加溶剂DMSO共培养组，培养上清中检测到的Cleaved-IL-1β和Cleaved caspase-1显著增多，在CAR-T细胞、肿瘤细胞和巨噬细胞共培养组中，应用20μM VX-765或10μM Ac-YVAD-CMK可显著降低培养上清中Cleaved-IL-1β和Cleaved caspase-1的水平(见图1)。在CAR-T细胞、肿瘤细胞和巨噬细胞共培养组中，应用20μM VX-765，使培养上清中检测到的IL-1β含量从65.29pg/mL降低至39.03pg/mL(P<0.001)，应用10μM Ac-YVAD-CMK，使上清中检测到的IL-1β含量从65.29pg/mL降低至42.64pg/mL(P<0.01)(见图2)。结果表明，应用两种不同的Caspase-1抑制剂，都能明显减少CAR-T治疗引发的IL-1β的释放。
实施例3抑制Caspase-1的活性对CAR-T治疗诱导巨噬细胞PD-L1和IDO表达的影响
本实施例首先验证了CAR-T治疗后的巨噬细胞通过其自分泌的IL-1β，上调其自身PD-L1和IDO的表达，进一步验证抑制Caspase-1的活性对CAR-T治疗诱导巨噬细胞PD-L1和IDO表达的影响。
1、验证IL-1β是否参与巨噬细胞PD-L1和IDO的表达过程
(1)实验方法
将THP-1细胞诱导为M2型巨噬细胞，作为巨噬细胞模型。将重组人IL-1β加入巨噬细胞培养基中，24h后，收集巨噬细胞，Western Blot检测巨噬细胞PD-L1和IDO的表达情况。为排除使用细胞系(THP-1)作为巨噬细胞模型影响实验结果的可能，本实施例将人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞进行相同的实验。
(2)实验结果
实验结果显示，与正常培养的巨噬细胞相比，10ng/mL IL-1β刺激可以显著上调巨噬细胞PD-L1和IDO表达(见图3A)，将人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞进行相同的实验得到的实验结果见图3B，结果显示与正常培养的巨噬细胞相比，10ng/mL IL-1β刺激可以显著上调巨噬细胞PD-L1和IDO表达。表明CAR-T治疗后的巨噬细胞通过其自分泌的IL-1β，上调其自身PD-L1和IDO的表达。
2、进一步验证抑制Caspase-1的活性对CAR-T治疗诱导巨噬细胞PD-L1和IDO表达的影响
(1)实验方法
使用THP-1细胞诱导的M2型巨噬细胞，作为巨噬细胞模型。将CAR-T、肿瘤细胞(Raji)和巨噬细胞进行共培养，同时加入Caspase-1抑制剂VX-765和Ac-YVAD-CMK，不添加抑制剂或添加溶剂DMSO的设为对照组。24h后，收集巨噬细胞进行Western Blot的检测。
(2)实验结果
实验结果显示，在CAR-T、肿瘤细胞和巨噬细胞培养组中，不添加抑制剂或添加溶剂DMSO时，巨噬细胞PD-L1和IDO表达显著上调。而在CAR-T、肿瘤细胞和巨噬细胞培养组中，应用20μM VX-765或10μM Ac-YVAD-CMK可部分下调巨噬细胞中PD-L1和IDO的表达(见图4)。结果表明CAR-T治疗的同时，应用Caspase-1抑制剂抑制巨噬细胞IL-1β的分泌后，部分下调了CAR-T治疗诱导的巨噬细胞PD-L1和IDO的表达，进一步证明了Caspase-1抑制剂能够应用于提高CAR-T治疗效果的药物制备中。
上述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.Caspase-1在制备提高CAR-T治疗效果的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括抑制Caspase-1表达和/或活性的试剂。
3.一种抑制Caspase-1表达和/或活性的试剂，其特征在于，所述试剂选自以下组：
(1)干扰Caspase-1表达的干扰RNA或其前体；
(2)靶向Caspase-1基因序列的短发夹RNA或反义分子；
(3)抗Caspase-1的抗体；
(4)Caspase-1的竞争性抑制剂。
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述试剂包括以下形式：多核苷酸、多肽、表达载体、小分子化合物、或其组合物。
5.一种提高CAR-T治疗效果的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求3所述的试剂。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或辅料。
7.Caspase-1在筛选提高CAR-T治疗效果的药物中的应用。
8.一种提高CAR-T治疗效果的候选药物的筛选方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)向测试组中的检测体系中加入待检测的测试物质；
(2)检测所述测试组的体系中Caspase-1的表达水平和/或活性，并与阴性对照组进行比较；
(3)选择测试组中与阴性对照组相比可以抑制Caspase-1表达水平和/或活性的测试物质，即为提高CAR-T治疗效果的潜在药物。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述检测体系选自细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系中的一种或多种。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述测试物质包括但不限于：针对Caspase-1基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物。
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