CN112062838B - 一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体及其应用 - Google Patents

一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抗新型冠状病毒SARS‑Cov‑2的中和性单域抗体及其应用。该抗体至少具有重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3之一。该抗体可用于制备针对COVID‑19的诊断试剂或诊断试剂盒、抗体药物或药物组合物。本发明通过噬菌体展示技术获得了SARS‑CoV‑2特异性全人源单克隆单域抗体，具有SARS‑Cov‑2伪病毒中和作用，且与IgG型SARS‑CoV‑2中和性抗体4A3联合使用对D614G突变株伪病毒具有协同中和效应；这为COVID‑19的预防和治疗提供了有效的备选抗体药物。

Description

一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体及其应用
技术领域
本发明涉及一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体及其应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
2019年年底爆发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由一种新型冠状病毒(severeacute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)感染所引起的急性呼吸道类传染病[1]。SARS-CoV-2为直径约80-120nm的正链单股RNA病毒，为β属冠状病毒[2]，与SARS-CoV病毒结构极为相似，基因组同源性高达79.5％[3]。研究证实，SARS-Cov-2与SARS-CoV宿主受体均为血管紧张素转换酶2(ACE2)[3]。ACE2是一种羧肽酶，也是一种蛋白质受体，主要在肺泡细胞和肠上皮细胞中表达[4]。SARS-CoV-2通过病毒外壳上spike蛋白S1亚基的受体识别结构域(receptor binding domain,RBD)与ACE2结合，诱发S2亚基结构的改变，进而促进病毒与宿主细胞膜的融合，介导病毒入侵宿主细胞[5]。目前SARS-CoV-2的S蛋白RBD与人受体蛋白ACE2复合物晶体结构已被解析，相互作用位点亦被准确测定[6]。因此，以SARS-CoV-2的S蛋白RBD作为抗原，筛选获得阻断SARS-CoV-2与ACE-2相互作用的中和性抗体，是干预新型冠状病毒感染的可行的预防和治疗手段[7]。
SARS-CoV-2以其遗传多样性和重组频繁的特点不断产生变异体。目前全球已公开72109条SARS-CoV-2全基因组序列(https://bigd.big.ac.cn/ncov/)，基因组变异13764个，在spike蛋白共有1710个位点发生突变，引起氨基酸变化的突变共906个，位于RBD的氨基酸111个。其中，spike蛋白第614位天冬氨酸(D)→甘氨酸(G)为主要突变类型，目前该突变株全基因组序列26310条，占比约36.5％，已迅速成为全球大流行中主导形式。G614病毒与D614相比具有明显更高的感染性滴度，增加约2.6至9.3倍[8]。但是由于单点突变造成的SARS-CoV-2的S蛋白的结构变化有限，因此获得针对变异病毒的中和性抗体难度较大。单域抗体为仅含有抗体重链可变区的抗体片段，具有分子量小、蛋白表达水平较高、免疫原性弱、易于生产制备等优势[9]。单域抗体能够更好地靶向抗原表面隐蔽的精细结构，对抗原的微小结构改变具有更加灵敏的识别能力[10]，因此筛选靶向SARS-CoV-2的RBD的单域抗体，对精准阻断SARS-CoV-2的感染具有重要意义。
发明内容
本发明的主要目的是：克服现有技术存在的问题，提供一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体，具有针对新型冠状病毒SARS-Cov-2的高效抗病毒能力。同时，还提供该抗体的应用。
本发明解决其技术问题的技术方案如下：
一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体，所述单域抗体由重链构成，其特征是，所述抗体至少具有以下技术特征之一：
i、所述重链包括重链CDR1，其氨基酸序列为：DFDFYDY；
ii、所述重链包括重链CDR2，其氨基酸序列为：IGEIHHSGSTYYNPSLKSRV；
iii、所述重链包括重链CDR3，其氨基酸序列为：VKDFVGADGPFVFDY。
优选地，所述重链包括重链CDR1、重链CDR2以及重链CDR3。
优选地，所述单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
优选地，所述重链具有标记，所述标记包括荧光标记、酶标记、以及放射性标记。
本发明还提供：
编码前文所述抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体的核酸。
优选地，所述核酸的序列如SEQ ID NO:1所示。
本发明还提供：
前文所述抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体用于制备诊断试剂或诊断试剂盒、药物或药物组合物的用途。
前文所述核酸用于制备抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体、诊断试剂或诊断试剂盒、药物或药物组合物的用途。
其中，所述药物或药物组合物具有针对新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性抗病毒作用。一种药物组合物，包括药物活性成分，其特征是，所述药物活性成分包括前文所述抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体，以及氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的SARS-CoV-2中和性抗体4A3。
该药物组合物具有针对新型冠状病毒SARS-Cov-2的D614G突变株的协同中和效应。
本发明通过噬菌体展示技术获得了SARS-CoV-2特异性全人源单克隆单域抗体，具有SARS-Cov-2伪病毒中和作用，且与IgG型SARS-CoV-2中和性抗体4A3联合使用对D614G突变株伪病毒具有协同中和效应。本发明为COVID-19的预防和治疗提供了有效的备选抗体药物，具有潜在的临床应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中ELISA检测富集噬菌体对抗原的结合情况图。
图2为本发明实施例2中4D8克隆对SARS-CoV-2-RBD蛋白的特异性结合检测(PhageELISA)图。
图3为本发明实施例3中pFUSE-4D8-hFC质粒图谱。
图4为本发明实施例3中单域抗体4D8纯度鉴定图。
图5为本发明实施例4中ELISA检测单域抗体4D8对SARS-CoV-2-RBD蛋白的结合特异性图。
图6为本发明实施例5中单域抗体4D8的伪病毒中和效应评估图。
图7为本发明实施例6中4D8与4A3联合使用对D614G突变株伪病毒的协同中和效应图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。所用方法如无特别说明均为常规方法，所用试剂和材料如无特别说明均为市售品。
实施例1
本实施例为筛选靶向SARS-CoV-2-RBD的全人源单域抗体。
以Tomlinson I&J噬菌体文库(Genservice Ltd.，Cambridge，UK，文库大小为1.47×108)抗体序列为模板，克隆出该文库抗体重链序列，构建单域抗体文库。采用噬菌体展示技术，以SARS-CoV-2-RBD-his(Arg330-Val524)蛋白为抗原在单域抗体文库中进行筛选。
具体过程如下：
使用50μg/ml SARS-CoV-2-RBD his抗原于4℃包被酶标板过夜，50ul/孔；用含有5％脱脂奶粉，0.1％Tween-20的PBS溶液(PBSTM)室温封闭酶标板1小时；单域抗体噬菌体文库以1012pfu与10％脱脂奶粉PBS溶液(PBSM)1:1混合后室温孵育，2小时后转移至封闭好的SARS-CoV-2-RBD his抗原酶标板中(100μl/孔)，室温孵育1小时。用0.1％Tween-20的PBS溶液(PBST)洗涤酶标板20次；100μl 100mM Triethylamine室温洗脱30分钟；洗脱后的噬菌体感染对数生长期的TG1细胞，扩增和回收后用于下一轮淘选。共进行四轮筛选。淘选后ELISA分析阳性噬菌体富集情况。
Polyclonal phage ELISA：以5μg/ml的SARS-CoV-2-RBD-his和阴性对照蛋白GPC5-his分别于4℃包被酶标板过夜，50ul/孔，每种抗原3个复孔；用含有3％PBSTM温封闭酶标板1小时；将每轮扩增回收的噬菌体以1:1比例与6％PBSM室温孵育2小时，加入封闭好的酶标板中(100μl/孔)，室温孵育1小时；用0.1％PBST洗涤酶标板5次；将HRP/Anti-M13Monoclonal conjugate以1：4000比例与5％PBSTM溶液混合，加入洗涤好的酶标板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％PBST溶液洗涤酶标板5次；将TMB显色液加入酶标板中(100μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸溶液终止显色(100μl/孔)；用酶标仪检测450nm波长下吸光值，并分析每轮扩增后噬菌体的结合情况。
Monoclonal phage ELISA：在第四轮富集的噬菌体中随机挑取200个单克隆，扩增回收噬菌体单克隆。以5μg/ml的SARS-CoV-2-RBD-hFc于4℃包被酶标板过夜，50ul/孔；用含有3％PBSTM温封闭酶标板1小时；将噬菌体单克隆以1:1比例与6％PBSM室温孵育2小时，加入封闭好的酶标板中(100μl/孔)，室温孵育1小时；用0.1％PBST洗涤酶标板5次；将HRP/Anti-M13Monoclonal conjugate以1：4000比例与5％PBSTM溶液混合，加入洗涤好的酶标板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％PBST溶液洗涤酶标板5次；将TMB显色液加入酶标板中(100μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸溶液终止显色(100μl/孔)；用酶标仪检测450nm波长下吸光值，设定高于本底信号10倍以上为阳性克隆，提取质粒并测序，并对序列进行分析。
结果如图1所示，在四轮富集后，富集的噬菌体对SARS-Cov-2-RBD-his抗原的亲和力显著升高。
在第四轮富集的噬菌体中随机挑取200个单克隆，ELISA检测单克隆对SARS-CoV-2-RBD-hFc的结合情况。设定高于本底信号10倍以上为阳性克隆，对阳性克隆进行序列分析，获得富集克隆4D8。该克隆DNA序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列分别如SEQ ID NO：2所示。
DNA序列，SEQ ID NO：1：
caggtgcagctggtgcagtctgggggaggcttggtacagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctgatttcgatttctatgattatgaaatgagctgggtccgccaggctccagggaaggccctggagtggattggggaaatccatcatagtgggagcacctactacaacccgtccctcaagagtcgagtcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacaccctgagagccgaggacacagccatatattactgtgtgaaagatttcgtgggagccgacggaccttttgtctttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca。
氨基酸序列，SEQ ID NO：2：
QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASDFDFYDYEMSWVRQAPGKALEWIGEIHHSGSTYYNPSLKSRVTISRDNSKNTLYLQMNTLRAEDTAIYYCVKDFVGADGPFVFDYWGQGTLVTVSS。
该氨基酸序列中，氨基酸残基26-32(即DFDFYDY)为重链CDR1，氨基酸残基48-67(即IGEIHHSGSTYYNPSLKSRV)为重链CDR2，氨基酸残基96-110(即VKDFVGADGPFVFDY)为重链CDR3。
实施例2
本实施例为噬菌体4D8克隆对SARS-CoV-2-RBD蛋白的特异性结合。
制备实施例1的4D8噬菌体，Phage ELISA检测4D8克隆与SARS-CoV-2-RBD蛋白的结合特异性。
具体过程为：
用5μg/ml的SARS-CoV-RBD-hFc、SARS-CoV-2-RBD-his、SARS-CoV-2-RBD-hFc于4℃包被酶标板过夜；用含有3％PBSTM室温封闭酶标板1小时；将4D8噬菌体与6％PBSM以1:1比例室温孵育2小时后加入封闭好的酶标板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％PBST洗涤酶标板3次(340ul/孔)；将HRP/Anti-M13 Monoclonal conjugate以1：4000比例与5％PBSTM混合，加入洗涤好的酶标板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％PBST洗涤酶标板5次；将TMB显色液加入酶标板中(100μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸溶液终止显色(100μl/孔)；用酶标仪检测450nm波长下吸光值，并分析4D8噬菌体对SARS-CoV-2-RBD蛋白的特异性结合。
如图2所示，结果显示该4D8克隆特异性识别SARS-CoV-2-RBD-his及SARS-CoV-2-RBD-hFc蛋白，但不识别SARS-CoV-RBD-hFc。
实施例3
本实施例为单域抗体4D8的表达与纯化。
将实施例1的4D8抗体序列克隆至真核细胞表达载体，构建pFUSE-4D8-hFC(Invivigen，San Diego，CA)质粒，如图3所示。转染293T细胞后收集上清，并用protein A-Agarose分离柱进行亲和纯化，SDS-PAGE检测抗体的纯度，如图4所示。
具体过程为：将4D8抗体序列克隆至真核细胞表达载体，构建pFUSE-4D8-hFC(Invivigen，San Diego，CA)质粒。用添加10％胎牛血清、100U/ml青霉素、0.1mg/ml链霉素的DMEM完全培养基在10cm细胞培养皿中种5×106个HEK293T细胞，置于5％CO2，37℃二氧化碳培养箱中培养。当细胞密度到达70-80％时，利用PEI将10μg pFUSE-4D8-hFc质粒转染入HEK293T细胞；每天收集上清，连续收集5天。将收集的上清液3500rpm、4℃离心20分钟，并用0.45μm的微孔滤膜过滤，进一步去除细胞碎片；将上清液通过Protein A-Agarose(GEHealthcare，Piscataway，NJ)亲和柱分离纯化4D8-hFc重组蛋白。通过BCA法测定蛋白浓度，取3μg 4D8-hFc重组蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，鉴定4D8-hFc重组蛋白的纯度。
实施例4
本实施例为单域抗体4D8结合特异性分析。
以ELISA检测实施例3纯化的4D8抗体与SARS-CoV-2-RBD-his蛋白结合情况。
具体过程为：用5μg/ml的SARS-CoV-2-RBD-his、GPC5-his于4℃包被酶标板过夜；用含有3％PBSTM室温封闭酶标板1小时；4D8-hFc抗体为一抗，以31A2-hFc为阴性对照，室温孵育1小时；用0.05％PBST洗涤酶标板3次(340ul/孔)；将Goat anti human Fcr HRP以1：4000比例与5％PBSTM混合，加入洗涤好的酶标板中(50μl/孔)，室温孵育1小时；用0.05％PBST洗涤酶标板5次；将TMB显色液加入酶标板中(100μl/孔)，室温显色3分钟后，加入0.5M硫酸溶液终止显色(100μl/孔)；用酶标仪检测450nm波长下吸光值，并分析4D8抗体与抗原结合特异性。
如图5所示，结果显示，4D8抗体特异性识别SARS-CoV-2-RBD-his，但不识别GPC5-his。31A2为阴性抗体对照，GPC5-his为阴性抗原对照。
实施例5
本实施例为4D8抗体对SARS-CoV-2伪病毒中和活性实验。
在慢病毒包装系统中将胞膜质粒PMD2G中VSV-G蛋白基因置换为SARS-CoV-2的spike基因，与包装质粒PSPAX和pLVX-EGFP-Luciferase共转染293T细胞，每隔24小时收集病毒上清，收集48小时，制备表达GFP-Luciferase报告基因的伪病毒，1：1稀释后待用。将CHO-ACE2细胞(过表达human ACE2的CHO-K1细胞)按104/孔接种于96孔板中培养过夜。预先将梯度稀释的实施例3所得4D8抗体与之前待用的病毒上清37℃共孵育1小时后，加入到CHO-ACE2细胞培养板中。培养48小时后，裂解细胞检测Luciferase活性。
如图6所示，结果显示，4D8抗体能够抑制伪病毒对CHO-ACE2细胞的感染，IC50为1.129μg/ml；31A2为阴性抗体对照。
实施例6
本实施例为4D8抗体与SARS-CoV-2中和性抗体4A3联合使用协同抑制SARS-CoV-2Spike D614G突变株伪病毒活性。
注：IgG型SARS-CoV-2中和性抗体4A3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，该抗体能够阻断SARS-Cov-2-RBD与ACE2阳性细胞的结合，对SARS-Cov-2伪病毒具有显著的病毒中和作用。该抗体的详细情况见申请日为2020年04月27日，申请号为202010342471.6的发明专利申请。
SEQ ID NO：3：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSIASSGYYTDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDADSFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASYLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYSAPSTFGQGTKVEIK。
本实施例中，制备表达SARS-CoV-2Spike D614伪病毒和G614伪病毒，分别与1nM4D8抗体，1nM 4A3抗体，以及二者联合组(0.5nM 4D8联合0.5nM4A3)共孵育，1小时后感染CHO-ACE2细胞，检测Luciferase活性。
具体过程为：在慢病毒包装系统中将VSV-G蛋白基因置换为SARS-CoV-2spike(D614)基因或SARS-CoV-2spike(G614)基因，分别与pLVX-EGFP-Luciferase共转染293T细胞，每隔24小时收集病毒上清，收集48小时，制备表达GFP-Luciferase报告基因的D614伪病毒和G614伪病毒，1：1稀释后待用。实验组设置：1n M 4D8/1nM 4A3/0.5nM 4D8+0.5nM 4A3；对照组设置：No pseudovirus组、No antibody组。将CHO-ACE2细胞按104/孔接种于96孔板中培养过夜。预先将抗体与伪病毒上清37℃共孵育1小时后，加入到CHO-ACE2细胞培养板中，抗体终浓度为1nM，每组4复孔。培养48小时后，检测Luciferase活性。分别测定对D614伪病毒和G614伪病毒的中和效应。
由实施例5可知，4D8抗体对D614伪病毒具有较温和的抑制效应，IC50为1.129μg/ml(15nM)，而4D8浓度为0.075μg/ml(1nM)时，对D614伪病毒基本无抑制效应。在本实施例中，得到相同结果。
如图7所示，结果显示，对D614伪病毒，1nM 4D8抗体单独处理，基本无中和效应，与4A3抗体联合后也未显示协同中和效应；对于G614伪病毒，1nM 4D8抗体单独处理具有显著中和效应，与4A3抗体联合后呈现显著的协同中和效应。这说明4D8抗体可在较低浓度下，与4A3联合使用抑制G614突变株伪病毒感染活性。
此外，本发明抗体的重链可具有标记，如，荧光标记、酶标记、放射性标记等。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。
参考文献
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序列表
<110> 南京医科大学
<120> 一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgattt cgatttctat gattatgaaa tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ccctggagtg gattggggaa atccatcata gtgggagcac ctactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 240
caaatgaaca ccctgagagc cgaggacaca gccatatatt actgtgtgaa agatttcgtg 300
ggagccgacg gaccttttgt ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 2
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Phe Asp Phe Tyr Asp Tyr
20 25 30
Glu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Lys Asp Phe Val Gly Ala Asp Gly Pro Phe Val Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ala Ser Ser Gly Tyr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala Asp Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
130 135 140
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
145 150 155 160
Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
195 200 205
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Ser
210 215 220
Ala Pro Ser Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235

Claims (8)

1.一种抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体，所述单域抗体由重链构成，其特征是，所述抗体具有以下技术特征：
所述重链包括重链CDR1、重链CDR2以及重链CDR3；
所述重链CDR1的氨基酸序列为：DFDFYDY；
所述重链CDR2的氨基酸序列为：IGEIHHSGSTYYNPSLKSRV；
所述重链CDR3的氨基酸序列为：VKDFVGADGPFVFDY。
2.根据权利要求1所述的中和性单域抗体，其特征是，所述单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求1或2所述的中和性单域抗体，其特征是，所述重链具有标记，所述标记包括荧光标记、酶标记、以及放射性标记。
4.编码权利要求1至3任一项所述抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体的核酸。
5.根据权利要求4所述的核酸，其特征是，所述核酸的序列如SEQ ID NO:1所示。
6.权利要求1至3任一项所述抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体用于制备诊断试剂或诊断试剂盒、药物或药物组合物的用途；所述药物或药物组合物具有针对新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性抗病毒作用。
7.权利要求4或5所述核酸用于制备抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体、诊断试剂或诊断试剂盒、药物或药物组合物的用途；所述药物或药物组合物具有针对新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性抗病毒作用。
8.一种药物组合物，包括药物活性成分，其特征是，所述药物活性成分包括权利要求1至3任一项所述抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性单域抗体，以及氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示的SARS-CoV-2中和性抗体4A3。
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