CN112048475A - 培养脊索瘤类器官的方法、移植体和培养基 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及一种培养脊索瘤类器官的方法，该方法包括：将脊索瘤组织细胞与第一培养基和基质胶混合，得到第一预混物，其中，所述第一培养基中含有表阿霉素，以所述第一培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为15～25mg/L；对所述第一预混物进行培养3～7天，得到第一培养物；获取所述第一培养物中的液体部分，并分离出所述液体部分中的细胞沉淀，所述细胞沉淀中含有脊索瘤细胞；将所述细胞沉淀与第二培养基和基质胶混合，得到第二预混物，其中，所述第二培养基中含有表阿霉素，以所述第二培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为5～10mg/L；对所述第二预混物进行培养扩增，得到脊索瘤类器官。

Description

培养脊索瘤类器官的方法、移植体和培养基
技术领域
本公开涉及生物医药技术领域，具体涉及一种培养脊索瘤类器官的方法、一种用于构建脊索瘤异种移植模型的移植体及其用途、一种生产脊索瘤异种移植小鼠模型的方法，以及一种用于脊索瘤类器官培养的培养基。
背景技术
脊索瘤是一种罕见的先天性原发骨肿瘤，发病率低于1/100万。脊索瘤对传统的放疗、化疗极度不敏感，且手术难以彻底切除。颅底脊索瘤的复发率为50％，脊柱脊索瘤的复发率为30-40％。目前对于脊索瘤的治疗已成为脊柱肿瘤外科及脑神经外科疾病领域的一大挑战性临床难题。而针对罕见癌症的创新疗法又往往因患者不足而无法建立具有临床治疗效益的试验。
脊索瘤系低度恶性、侵袭性生长的肿瘤，肿瘤细胞具有呈缓慢、浸润性生长的特点，这导致脊索瘤异体移植动物模型建模成功率低、建模时间长。因此，建立临床真实性更强的脊索瘤细胞模型与异体移植动物模型，对脊索瘤疾病机理研究及寻找分子靶向治疗新靶点具有重要意义。
发明内容
本公开的目的是提供一种培养脊索瘤类器官的方法、一种用于构建脊索瘤异种移植模型的移植体及其用途、一种生产脊索瘤异种移植小鼠模型的方法，以及一种用于脊索瘤类器官培养的培养基。
为了实现上述目的，第一方面，本公开提供一种培养脊索瘤类器官的方法，该方法包括：
将脊索瘤组织细胞与第一培养基和基质胶混合，得到第一预混物，其中，所述第一培养基中含有表阿霉素，以所述第一培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为15～25mg/L；
对所述第一预混物进行培养3～7天，得到第一培养物；
获取所述第一培养物中的液体部分，并分离出所述液体部分中的细胞沉淀，所述细胞沉淀中含有脊索瘤细胞；
将所述细胞沉淀与第二培养基和基质胶混合，得到第二预混物，其中，所述第二培养基中含有表阿霉素，以所述第二培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为5～10mg/L；
对所述第二预混物进行培养扩增，得到脊索瘤类器官。
可选地，所述第一预混物中，所述脊索瘤组织细胞的浓度为1×105～5×105个/mL，所述基质胶的含量为1～5体积％；
所述第二预混物中，所述脊索瘤细胞的浓度为3×104～8×104个/mL，所述基质胶的含量为1～5体积％。
可选地，所述第一培养基或所述第二培养基中还含有RPMI 1640培养基、胎牛血清、烟氨酸、氢化可的松、霍乱毒素、胰岛素、青霉素、链霉素和表皮细胞生长因子中的至少一种；
优选地，所述第一培养基或所述第二培养基为基准，所述胎牛血清的含量为5～10体积％，所述烟氨酸的浓度为3～8mM，所述氢化可的松的浓度为0.2～1mg/mL，所述霍乱毒素的浓度为50～150ng/mL，所述胰岛素的浓度为50～100mg/mL，所述青霉素的浓度为50～100U/mL，所述链霉素的浓度为50～100mg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为3～8ng/mL，余量为所述RPMI 1640培养基。
第二方面，本公开提供一种用于构建脊索瘤异种移植模型的移植体，所述移植体包括脊索瘤类器官，以及包裹在所述脊索瘤类器官表面的包裹层，其中，所述脊索瘤类器官由第一方面中任意一项所述的方法制备得到；其中，
所述脊索瘤类器官的直径为1～5mm，所述包裹层的厚度为1～4mm，所述包裹层为基质胶层。
第三方面，本公开提供第二方面所述的移植体在构建脊索瘤异种移植模型中的用途。
第四方面，本公开提供一种生产脊索瘤异种移植小鼠模型的方法，该方法包括：
将第二方面所述的移植体植入免疫缺陷型小鼠的皮下和/或原位组织中，得到所述脊索瘤异种移植小鼠模型。
第五方面，本公开提供一种用于脊索瘤类器官培养的培养基，该培养基中含有表阿霉素。
可选地，以所述培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为15～25mg/L或5～10mg/L。
可选地，所述培养基还含有RPMI 1640培养基、胎牛血清、烟氨酸、氢化可的松、霍乱毒素、胰岛素、青霉素、链霉素和表皮细胞生长因子中的至少一种。
可选地，以所述培养基为基准，所述胎牛血清的含量为5～10体积％，所述烟氨酸的浓度为3～8mM，所述氢化可的松的浓度为0.2～1mg/mL，所述霍乱毒素的浓度为50～150ng/mL，所述胰岛素的浓度为50～100mg/mL，所述青霉素的浓度为50～100U/mL，所述链霉素的浓度为50～100mg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为3～8ng/mL，余量为所述RPMI1640培养基。
通过上述技术方案，由于所采用的培养基中含有表阿霉素，表阿霉素能够抑制成纤维细胞的生长，但是几乎不会影响脊索瘤细胞的生长，因此利用上述方法培养脊索瘤类器官的成功率较高。
本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
本公开的第一方面提供一种培养脊索瘤类器官的方法，该方法包括：将脊索瘤组织细胞与第一培养基和基质胶混合，得到第一预混物，其中，所述第一培养基中含有表阿霉素，以所述第一培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为15～25mg/L；对所述第一预混物进行培养3～7天，得到第一培养物；获取所述第一培养物中的液体部分，并分离出所述液体部分中的细胞沉淀，所述细胞沉淀中含有脊索瘤细胞；将所述细胞沉淀与第二培养基和基质胶混合，得到第二预混物，其中，所述第二培养基中含有表阿霉素，以所述第二培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为5～10mg/L；对所述第二预混物进行培养扩增，得到脊索瘤类器官。
在上述技术方案中，由于所采用的培养基中含有表阿霉素，表阿霉素能够抑制成纤维细胞的生长，但是几乎不会影响脊索瘤细胞的生长，因此利用上述方法培养脊索瘤的成功率较高；此外，上述方法中采用脊索瘤组织细胞作为培养用的原代细胞，由于脊索瘤组织细胞中除了含有脊索瘤细胞外，还含有间质细胞，因此利用上述方法培养得到的脊索瘤类器官较好地保留了脊索瘤的异质性，其生物学特性与脊索瘤原生组织的生物学特性相似，这有利于脊索瘤类器官在体外稳定传代，也有利于脊索瘤的突变基因在脊索瘤类器官中稳定表达。
第一培养基中表阿霉素的浓度为15～25mg/L，该浓度下的表阿霉素对成纤维细胞生长的抑制作用更强，因此第一培养基适用于脊索瘤类器官培养的早期阶段，用于筛选出脊索瘤组织中的脊索瘤细胞。第二培养基中表阿霉素的浓度为5～10mg/L，该浓度下的表阿霉素对脊索瘤细胞的生长几乎没有抑制作用，因此第二培养基适用于脊索瘤类器官培养的扩增阶段，用于对前期筛选出的脊索瘤细胞进行快速扩增。
根据本公开，具体地，脊索瘤组织细胞为脊索瘤原生组织经酶解处理后得到的细胞，其中包括脊索瘤细胞和间质细胞。将脊索瘤原生组织进行酶解处理时，可以将脊索瘤原生组织的组织块与酶解液进行常规的混合培养，然后经过滤和离心等分离操作后，得到上述脊索瘤组织细胞。其中，上述酶解处理过程中涉及的酶解液可以在较大的范围内选择，例如，所述酶解液可以包括DMEM培养基，以及5～10体积％的胎牛血清、1～2mg/mL的Ⅰ型胶原酶溶液、50～150U/mL的青霉素和50～150mg/mL的链霉素。
在将脊索瘤组织细胞与第一培养基和基质胶混合时，可以先将脊索瘤组织与第一培养基混合，然后再加入基质胶。同理，在将所述细胞沉淀与第二培养基和基质胶混合时，可以先将所述细胞沉淀与第二培养基混合，然后再加入基质胶。
其中，在对所述第一预混物进行培养3～7天，得到第一培养物时，可以将第一预混物置于培养板的培养孔中进行培养，每个培养孔中添加250～500μL第一预混物，培养过程中，可以将培养板置于50～80rpm转速的摇床上，并且每隔3～5天往每个培养孔中添加新配置的第一培养基，添加量为200～300μL/孔。
对所述第二预混物进行培养扩增，得到脊索瘤类器官的操作，与上述对第一预混物进行培养的操作类似，此处不再赘述。
根据本公开，所述第一预混物中，所述脊索瘤组织细胞的浓度可以为1×105～5×105个/mL，所述基质胶的含量可以为1～5体积％；所述第二预混物中，所述脊索瘤细胞的浓度可以为3×104～8×104个/mL，所述基质胶的含量可以为1～5体积％。第一预混物和第二预混物中的细胞浓度可以采用已有技术进行检测，此处不再赘述。
可选地，所述第一培养基或所述第二培养基中还含有RPMI 1640培养基、胎牛血清、烟氨酸、氢化可的松、霍乱毒素、胰岛素、青霉素、链霉素和表皮细胞生长因子中的至少一种；优选地，所述第一培养基或所述第二培养基为基准，所述胎牛血清的含量为5～10体积％，所述烟氨酸的浓度为3～8mM，所述氢化可的松的浓度为0.2～1mg/mL，所述霍乱毒素的浓度为50～150ng/mL，所述胰岛素的浓度为50～100mg/mL，所述青霉素的浓度为50～100U/mL，所述链霉素的浓度为50～100mg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为3～8ng/mL，余量为所述RPMI 1640培养基。
根据本公开，脊索瘤培养成功后，可以进行常规冷冻保藏。
本公开的第二方面提供一种用于构建脊索瘤异种移植模型的移植体，所述移植体包括脊索瘤类器官，以及包裹在所述脊索瘤类器官表面的包裹层，其中，所述脊索瘤类器官由第一方面中任意一项所述的方法制备得到；其中，所述脊索瘤类器官的直径为1～5mm，所述包裹层的厚度为1～4mm，所述包裹层为基质胶层。
在上述技术方案中，本公开提供的移植体中含有脊索瘤类器官，由于脊索瘤类器官仅需少量的原生组织即可培养得到，且培养过程简单、快速、成功率高，因此，利用该移植体进行异种移植模型构建时，能够有效增加最终构建得到的异种移植模型的数量，能够为临床治疗或科学研究提供更多的资源。同时，上述移植体还含有包裹层，包裹层包裹在类器官表面，能够保障移植体中的类器官的活性，有效提升构建异种移植模型的成功率。
本公开的第三方面提供第二方面所述的移植体在构建脊索瘤异种移植模型中的用途。
本公开的第四方面提供一种生产脊索瘤异种移植小鼠模型的方法，该方法包括：将第二方面所述的移植体植入免疫缺陷型小鼠的皮下和/或原位组织中，得到所述脊索瘤异种移植小鼠模型。
本公开的第五方面提供一种用于脊索瘤类器官培养的培养基，该培养基中含有表阿霉素。
脊索瘤组织中含有成纤维细胞和脊索瘤细胞，在利用脊索瘤组织进行脊索瘤类器官培养的过程中，成纤维细胞的生长速率显著高于脊索瘤细胞的生长速率，这导致脊索瘤类器官的培养成功率较低。本公开的发明人发现，表阿霉素能够抑制成纤维细胞的生长，但是几乎不会影响脊索瘤细胞的生长，因此，将表阿霉素用于脊索瘤类器官培养，能够有效提升体外培养脊索瘤类器官的成功率。
利用本公开提供的上述培养基，能够有效提升脊索瘤类器官培养的成功率。
优选地，以所述培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为15～25mg/L或5～10mg/L。具体地，当表阿霉素的浓度为15～25mg/L时，表阿霉素对成纤维细胞生长的抑制作用更强，此时的培养基适用于脊索瘤类器官培养的早期阶段，用于筛选出脊索瘤组织中的脊索瘤细胞。当表阿霉素的浓度为5～10mg/L时，表阿霉素对脊索瘤细胞的生长几乎没有抑制作用，此时的培养基适用于脊索瘤类器官培养的扩增阶段，用于对前期筛选出的脊索瘤细胞进行快速扩增。因此，在上述优选情况下，利用本公开提供的培养基培养脊索瘤类器官的成功率更高。
根据本公开，为了进一步提升脊索瘤类器官的培养成功率，优选情况下，所述培养基还含有RPMI 1640培养基、胎牛血清、烟氨酸、氢化可的松、霍乱毒素、胰岛素、青霉素、链霉素和表皮细胞生长因子中的至少一种。
可选地，以所述培养基为基准，所述胎牛血清的含量为5～10体积％，所述烟氨酸的浓度为3～8mM，所述氢化可的松的浓度为0.2～1mg/mL，所述霍乱毒素的浓度为50～150ng/mL，所述胰岛素的浓度为50～100mg/mL，所述青霉素的浓度为50～100U/mL，所述链霉素的浓度为50～100mg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为3～8ng/mL，余量为所述RPMI1640培养基。
下面通过实施例来进一步说明本公开，但是本公开并不因此而受到任何限制。
本公开实施例中涉及的原料、试剂、仪器和设备，如无特殊说明，均可通过购买获得。
在本公开实施例中未注明具体实验温度时，实验温度均为室温(20-25℃)。
本公开实施例中使用的RPMI 1640培养基和胎牛血清(FBS)购自Gibco，烟氨酸(Nicotinamide)、氢化可的松(Hydrocortisone)、霍乱毒素(cholera toxin)、人胰岛素、青霉素(penicillin G)和链霉素购自sigma Invitroge，表皮细胞生长因子(EGF)购自invitrogen公司，表阿霉素购自北京偶合科技。
本公开实施例中使用的清洁级BALB/C裸鼠购自南京君科生物科技。
本公开实施例中使用的第一培养基为筛选培养基，用于筛选出脊索瘤组织细胞中的脊索瘤细胞，包括：RPMI 1640培养基、10％的胎牛血清、5mM的烟氨酸、15mg/L的表阿霉素、0.5mg/ml的氢化可的松、100ng/ml的霍乱毒素、50mg/ml的人胰岛素、100U/ml的青霉素、100mg/ml的链霉素和5ng/ml的表皮细胞生长因子。
本公开实施例中使用的第二培养基为扩增培养基，用于对筛选出的脊索瘤细胞进行扩增，包括：RPMI 1640培养基、10％的胎牛血清、5mM的烟氨酸、5mg/L的表阿霉素、0.5mg/ml的氢化可的松、100ng/ml的霍乱毒素、10mg/ml的人胰岛素、100U/ml的青霉素、100mg/ml的链霉素和5ng/ml的表皮细胞生长因子。
实施例1
本实施例用于说明脊索瘤类器官的制备。
(1)脊索瘤组织样本的保存与运输
获取临床确诊的脊索瘤患者的骶骨处的手术组织，作为脊索瘤组织样本，然后保存在0.9％的无菌生理盐水中，置于冰上，于48小时内运输至操作室。
(2)脊索瘤组织细胞的获取
将上述获取的脊索瘤组织样本置于无菌培养皿中，利用无菌PBS冲洗两次，冲洗结束后加入酶解液，其中，酶解液中含有10％的FBS、1.5mg/mL的Ⅰ型胶原酶、100U/ml的青霉素、100mg/ml的链霉素以及余量的DMEM培养基，每1mg脊索瘤组织样本对应加入0.1mL上述酶解液。将脊索瘤组织样本切割成1mm3左右的小块，然后于37℃培养箱中酶解1-2h，酶解过程中，每隔10min采用无菌移液枪轻轻吹打细胞悬液，避免出现细胞沉淀而导致酶解不充分。
酶解结束后，将收集的酶解液利用100μm细胞筛进行过滤，收集滤液，得到细胞悬液。将收集的细胞悬液以1500rpm的条件离心5min，然后利用PBS漂洗两次。漂洗结束后，于300g的条件下离心3min，弃上清，收集细胞沉淀，得到脊索瘤组织细胞。
(3)脊索瘤类器官的培养
Ⅰ、筛选培养
将步骤(2)获取的脊索瘤组织细胞与第一培养基混合，同时加入2％的基质胶，使得脊索瘤组织细胞的浓度为5×105个/mL，得到第一预混物。将上述第一预混物加入12孔板的培养孔中，每孔加入量为500μL，然后置于80rpm转速的摇床上，于37℃，5％二氧化碳的培养箱中培养。培养过程中，每隔4天在每个培养孔中添加300μL新配置的第一培养基。
Ⅱ、扩增培养
培养至5天后，显微镜下观察，选取培养物生长状态良好且直径为50-150μm的培养孔，吸取其培养液至50mL离心管中，以250rpm的条件离心5min，去除上清，得到细胞沉淀。将得到的细胞沉淀与第二培养基混合，同时加入3％的基质胶，使得脊索瘤细胞的浓度为5×104个/mL，得到第二预混物。将上述第二预混物加入12孔板的培养孔中，每孔加入量为500μL，然后置于80rpm转速的摇床上，于37℃，5％二氧化碳的培养箱中培养。培养过程中，每隔4天在每个培养孔中添加300μL新配置的第二培养基。当单个培养孔中的培养物直径大于0.5mm时，培养成功，得到脊索瘤类器官。
实施例2
本实施例用于说明本公开移植体的制备。
将实施例1中培养的脊索瘤类器官继续培养，直至单个脊索瘤类器官的直径不小于1.0mm，然后将每个培养孔中的类器官连同其周围厚度不小于1.0mm的包覆层一起取出，得到本实施例的移植体A。
实施例3
利用实施例1的方法培养脊索瘤类器官，不同的是，第一培养基中表阿霉素的浓度为25mg/L，第二培养基中表阿霉素的浓度为10mg/L。
实施例4
利用实施例1的方法培养脊索瘤类器官，不同的是，第一培养基中表阿霉素的浓度为20mg/L，第二培养基中表阿霉素的浓度为7mg/L。
对比例1
利用实施例1的方法培养脊索瘤类器官，不同的是：步骤(3)中使用第三培养基对脊索瘤组织细胞进行步骤Ⅰ的筛选培养和步骤Ⅱ的扩增培养，与第一培养基或第二培养基相比，该第三培养基中不含有表阿霉素。
对比例2
按照实施例1的方法培养脊索瘤类器官，不同的是：步骤(3)中仅进行步骤Ⅰ的筛选培养，不进行步骤Ⅱ的扩增培养。
对比例3
利用实施例1的方法培养脊索瘤类器官，不同的是：不进行步骤Ⅰ的筛选培养，直接利用脊索瘤组织细胞进行步骤Ⅱ的扩增培养。
对比例4
利用实施例1的方法培养脊索瘤类器官，不同的是：第一培养基中表阿霉素的浓度为28mg/L，第二培养基中表阿霉素的浓度为2mg/L。
对比例5
利用实施例1的方法培养脊索瘤类器官，不同的是：第一培养基中表阿霉素的浓度为12mg/L，第二培养基中表阿霉素的浓度为13mg/L。
测试例1
1、脊索瘤类器官数量检测
在培养26天后，使用倒置显微镜分别统计实施例1和对比例1～5中培养的直径在0.5mm以上的脊索瘤类器官数量，其数值以“M±SD”表示，统计结果见表1。
表1
培养方法 脊索瘤类器官数量(×10<sup>3</sup>个/mL)
实施例1 10.12±1.34
实施例3 7.03±2.05
实施例4 8.63±1.58
对比例1 1.06±0.03
对比例2 3.18±1.22
对比例3 0.24±2.03
对比例4 0.08±1.62
对比例5 0.16±1.08
由实施例1、实施例3～4、对比例1～5和表1可以看出，在所使用的培养基不同或者培养方法不同的情况下，开始培养26天后，实施例1和实施例3～4中培养成功的脊索瘤类器官数量显著高于对比例1～5，说明本公开提供的培养基或者培养方法能够有效提升脊索瘤类器官培养的成功率。
测试例2
将来自同一患者的脊索瘤组织切割成2.5mm3的小块，得到移植体B。然后利用实施例2制备得到的移植体A和移植体B构建脊索瘤异种移植小鼠模型a和b。
脊索瘤异种移植小鼠模型的构建方法为：取清洁级BALB/C裸鼠，利用10mg/mL麻醉药(含2g/L甲苯噻嗪+5g/L氯胺酮)麻醉后，固定于无菌手术台上，显微镜下暴露其股骨外侧部位，使用无菌器械掀起0.15mm×0.15mm左右的骨皮质，使用1mL注射器吸取接种细胞液10μL于裸鼠髓腔部位缓慢注入。手术完成后，复位骨瓣，使用骨蜡封口后，缝合裸鼠筋膜及皮肤。
建模结束后第6周，采用脱颈法处死全部裸鼠，解剖后取出瘤组织称重，瘤重＞0.5g时，判断模型建立成功，计算成功率，结果见表2。
表2
Figure BDA0002649471600000121
由表2可以看出，利用实施例2制备的移植体构建脊索瘤异种移植小鼠模型的成功率，显著高于利用人脊索瘤组织块的成功率，由此说明，本公开提供的移植体有助于提升构建异种移植模型的成功率。
以上详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (10)

1.一种培养脊索瘤类器官的方法，其特征在于，该方法包括：
将脊索瘤组织细胞与第一培养基和基质胶混合，得到第一预混物，其中，所述第一培养基中含有表阿霉素，以所述第一培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为15～25mg/L；
对所述第一预混物进行培养3～7天，得到第一培养物；
获取所述第一培养物中的液体部分，并分离出所述液体部分中的细胞沉淀，所述细胞沉淀中含有脊索瘤细胞；
将所述细胞沉淀与第二培养基和基质胶混合，得到第二预混物，其中，所述第二培养基中含有表阿霉素，以所述第二培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为5～10mg/L；
对所述第二预混物进行培养扩增，得到脊索瘤类器官。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一预混物中，所述脊索瘤组织细胞的浓度为1×105～5×105个/mL，所述基质胶的含量为1～5体积％；
所述第二预混物中，所述脊索瘤细胞的浓度为3×104～8×104个/mL，所述基质胶的含量为1～5体积％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一培养基或所述第二培养基中还含有RPMI 1640培养基、胎牛血清、烟氨酸、氢化可的松、霍乱毒素、胰岛素、青霉素、链霉素和表皮细胞生长因子中的至少一种；
优选地，所述第一培养基或所述第二培养基为基准，所述胎牛血清的含量为5～10体积％，所述烟氨酸的浓度为3～8mM，所述氢化可的松的浓度为0.2～1mg/mL，所述霍乱毒素的浓度为50～150ng/mL，所述胰岛素的浓度为50～100mg/mL，所述青霉素的浓度为50～100U/mL，所述链霉素的浓度为50～100mg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为3～8ng/mL，余量为所述RPMI 1640培养基。
4.一种用于构建脊索瘤异种移植模型的移植体，其特征在于，所述移植体包括脊索瘤类器官，以及包裹在所述脊索瘤类器官表面的包裹层，其中，所述脊索瘤类器官由权利要求1～3中任意一项所述的方法制备得到；其中，
所述脊索瘤类器官的直径为1～5mm，所述包裹层的厚度为1～4mm，所述包裹层为基质胶层。
5.权利要求4所述的移植体在构建脊索瘤异种移植模型中的用途。
6.一种生产脊索瘤异种移植小鼠模型的方法，其特征在于，该方法包括：
将权利要求4所述的移植体植入免疫缺陷型小鼠的皮下和/或原位组织中，得到所述脊索瘤异种移植小鼠模型。
7.一种用于脊索瘤类器官培养的培养基，其特征在于，该培养基中含有表阿霉素。
8.根据权利要求7所述的培养基，其特征在于，以所述培养基为基准，所述表阿霉素的浓度为15～25mg/L或5～10mg/L。
9.根据权利要求7所述的培养基，其特征在于，所述培养基还含有RPMI1640培养基、胎牛血清、烟氨酸、氢化可的松、霍乱毒素、胰岛素、青霉素、链霉素和表皮细胞生长因子中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的培养基，其特征在于，以所述培养基为基准，所述胎牛血清的含量为5～10体积％，所述烟氨酸的浓度为3～8mM，所述氢化可的松的浓度为0.2～1mg/mL，所述霍乱毒素的浓度为50～150ng/mL，所述胰岛素的浓度为50～100mg/mL，所述青霉素的浓度为50～100U/mL，所述链霉素的浓度为50～100mg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为3～8ng/mL，余量为所述RPMI 1640培养基。
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