CN112011463A - 一种悬浮细胞培养耗材的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：1)培养耗材表面等离子改性处理；2)改性处理后在培养耗材表面包覆一层悬浮细胞培养液。本发明提供一种操作简便、价格便宜、对设备要求低，并无需改变细胞原先培养体系就能达到细胞悬浮培养目的的细胞培养耗材。可以应用于肿瘤细胞或正常细胞未贴附球状原代培养、血细胞的研究、蛋白表达细胞系的悬浮培养以及拟胚体形成等。提高细胞生物学研究的准确性，降低实验室培养设备要求和成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物耗材技术领域，具体涉及一种悬浮细胞培养耗材的制备方法。
背景技术
悬浮细胞培养耗材是一种可以用于贴壁细胞和半贴壁细胞在血清培养体系下悬浮培养的生物耗材。在研究疫苗制备、抗体药物制备以及细胞分化时一般会采用动物细胞的悬浮培养。悬浮培养具有无需消化即可传代；能够不断增值，形成高密度细胞；以及细胞状态均一，可为研究细胞的生长、分化创造条件等优点。
市面上常见的悬浮细胞培养瓶，其结构为瓶身圆柱形，瓶颈两侧有出口便于连接空气过滤器、培养基的倒入与倾出、接种或接入pH电极等，瓶颈上方盖子内接入搅拌桨，搅拌桨底部有搅拌子，通过机械搅拌的方式使细胞悬浮生长。然而机械搅拌的剪切力势必会对细胞产生一定伤害，并且这种培养方法对于细胞生长需要的温度和二氧化碳较难进行控制。
市面上有公司推出一款悬浮细胞培养瓶，用聚苯乙烯材料注塑而成，培养表面为疏水表面，未经TCT组织培养表面处理，这种培养表面贴壁细胞难以有效贴壁，由于贴壁不牢，部分细胞悬浮生长部分细胞半贴壁生长。
在过去的研究和应用中，细胞的悬浮培养都是采用传统的悬浮细胞驯化筛选、转瓶培养系统或生物反应器等方法来进行。悬浮细胞驯化筛选的实质是应用细胞生物学技术，结合特定细胞的营养需求进行培养基优化，以筛选出适合悬浮培养的细胞株。然而，单纯采用驯化细胞的方法，除了会造成细胞培养效果不理想的情况外，筛选的细胞形状可能会发生改变，影响实验结果。细胞培养转瓶是一种中间有带桨叶的细胞培养容器。使用时将转瓶放置在转瓶机上，带动桨叶转动，使培养基由静态变为动态。转瓶培养系统存在着单位体积提供的细胞生长的体积小、细胞生长密度低、使用成本高、劳动强度大和复杂的细胞剪切力控制等缺点，不能满足现代生命科学研究领域的要求。生物反应器作为细胞培养转瓶的升级，解决了细胞生长的体积小、细胞生长密度低、劳动强度大、复杂的细胞剪切力控制等缺点，但是设备过于昂贵，无法在科研实验室普及。因此，在细胞培养领域，越来越需要一种操作简便、成本低、对设备要求低，并无需改变细胞原先培养体系就能达到细胞悬浮培养目的的细胞培养耗材。
因此，亟待一种操作简便、价格便宜、对设备要求低，并无需改变细胞原先培养体系就能达到细胞悬浮培养目的的细胞培养耗材。可以应用于肿瘤细胞或正常细胞未贴附球状原代培养、血细胞的研究、蛋白表达细胞系的悬浮培养以及拟胚体形成等。提高细胞生物学研究的准确性，降低实验室培养设备要求和成本。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提出了一种操作简便、价格便宜、对设备要求低，并无需改变细胞原先培养体系就能达到细胞悬浮培养目的的细胞培养耗材。可以应用于肿瘤细胞或正常细胞未贴附球状原代培养、血细胞的研究、蛋白表达细胞系的悬浮培养以及拟胚体形成等。提高细胞生物学研究的准确性，降低实验室培养设备要求和成本。
为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
1)培养耗材表面等离子改性处理；
2)改性处理后在培养耗材表面包覆一层悬浮细胞培养液。
本发明提供一种操作简便、价格便宜、对设备要求低，并无需改变细胞原先培养体系就能达到细胞悬浮培养目的的细胞培养耗材。可以应用于肿瘤细胞或正常细胞未贴附球状原代培养、血细胞的研究、蛋白表达细胞系的悬浮培养以及拟胚体形成等。提高细胞生物学研究的准确性，降低实验室培养设备要求和成本。
在上述技术方案的基础上，还可做如下改进：
作为优选的方案，步骤1)的培养耗材表面等离子改性处理的步骤包括：通过超疏水气体分子对培养耗材的表面进行等离子改性处理。
作为优选的方案，通过超疏水气体分子对培养耗材的表面进行等离子改性处理在培养耗材表面形成超疏水表面或-CH2-O-CH2-的表面层。
作为优选的方案，所述超疏水表面接触角大于100°。
作为优选的方案，步骤2)中的改性处理后在培养耗材表面包覆一层悬浮细胞培养液后，还包括以下步骤：清洗，烘干，灭菌处理。
作为优选的方案，所述包覆时间为11h-13h。
作为优选的方案，所述悬浮细胞培养液的组分包括：多肽、聚乙二醇、葡聚糖和氯化钠。
附图说明
图1为本发明实施例提供的CHO在TCT表面及悬浮细胞培养表面的生长情况对比显微镜照片图(72h培养，100X相差显微镜照片)。
图2为本发明实施例提供的hMSC在TCT表面及悬浮细胞培养表面的生长情况对比图(72h培养，100X相差显微镜照片)。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面结合附图详细说明本发明的优选实施方式。
除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均可从正规渠道商购获得。
为了达到本发明的目的，本发明提供一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
1)培养耗材表面等离子改性处理；
2)改性处理后在培养耗材表面包覆一层悬浮细胞培养液。
本发明提供一种操作简便、价格便宜、对设备要求低，并无需改变细胞原先培养体系就能达到细胞悬浮培养目的的细胞培养耗材。可以应用于肿瘤细胞或正常细胞未贴附球状原代培养、血细胞的研究、蛋白表达细胞系的悬浮培养以及拟胚体形成等。提高细胞生物学研究的准确性，降低实验室培养设备要求和成本。
在上述技术方案的基础上，还可做如下改进：
在一些实施例中，步骤1)的培养耗材表面等离子改性处理的步骤包括：通过超疏水气体分子对培养耗材的表面进行等离子改性处理。
在一些实施例中，通过超疏水气体分子对培养耗材的表面进行等离子改性处理在培养耗材表面形成超疏水表面或-CH2-O-CH2-的表面层。
在一些实施例中，所述超疏水表面接触角大于100°。
在一些实施例中，步骤2)中的改性处理后在培养耗材表面包覆一层悬浮细胞培养液后，还包括以下步骤：清洗，烘干，灭菌处理后，放入二氧化碳培养箱中即可培养。
二氧化碳是大多数动物细胞培养所需的通用条件。
在一些实施例中，所述包覆时间为11h-13h。
在一些实施例中，所述悬浮细胞培养液的组分包括：多肽、聚乙二醇、葡聚糖和氯化钠。
本发明提供了一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，包括等离子体表面处理、表面包覆各种生物材料的方法来抑制细胞在材料表面的贴壁培养，从而使得细胞在该方法处理培养板/瓶中悬浮培养，获得更多的细胞量。
一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，通过表面改性和包覆的方法使得细胞不能在培养表面贴壁生长，达到细胞悬浮(细胞贴比率＜10％)培养的效果。
本发明通过使用超疏水气体分子对培养耗材的表面进行等离子改性处理，改性处理后在培养耗材的表面包覆了一层悬浮细胞培养液，悬浮细胞培养液的成分由一种多肽、聚乙二醇、葡聚糖和氯化钠组成，经过夜包覆后，过夜包覆时间为11h-13h，清洗，烘干并灭菌处理。其外观与普通细胞培养瓶/板外观相同，成本远远低于搅拌桨式培养瓶或生物反应器，且培养简单，放入二氧化碳培养箱中即可培养，温度和二氧化碳浓度都可控。
本发明提供了一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，通过表面进行等离子改性处理的方法在细胞培养耗材的表面形成超疏水表面，或者形成-CH2-O-CH2-的表面层，从而减少细胞的贴壁。
本发明提供的一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，产生如下的有益效果：
1)在细胞培养表面形成比较特殊的改性涂层，大大减少了细胞的贴壁；
2)在同一培养条件下，在该产品中可以获得更大量的均一细胞。
3)开发了超疏水表面(表面接触角大于100°)，在培养耗材表面包覆一层降低细胞贴壁基质。
4)所开发产品接种CHO、293E等贴壁细胞时，细胞贴壁率小于10％。
以上的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
1)培养耗材表面等离子改性处理；
2)改性处理后在培养耗材表面包覆一层悬浮细胞培养液。
2.根据权利要求1所述的悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，步骤1)的培养耗材表面等离子改性处理的步骤包括：通过超疏水气体分子对培养耗材的表面进行等离子改性处理。
3.根据权利要求2所述的悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，通过超疏水气体分子对培养耗材的表面进行等离子改性处理在培养耗材表面形成超疏水表面或-CH2-O-CH2-的表面层。
4.根据权利要求3所述的悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，所述超疏水表面接触角大于100°。
5.根据权利要求1所述的悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，步骤2)中的改性处理后在培养耗材表面包覆一层悬浮细胞培养液后，还包括以下步骤：清洗，烘干，灭菌处理。
6.根据权利要求5所述的悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，所述包覆时间为11h-13h。
7.根据权利要求5所述的悬浮细胞培养耗材的制备方法，其特征在于，所述悬浮细胞培养液的组分包括：多肽、聚乙二醇、葡聚糖和氯化钠。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201201 |