CN112007071A - 青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的用途。通过实验证明，青钱柳水提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、嗜酸乳杆菌均有杀伤作用，特别是对大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌多种耐药细菌具有杀伤作用。其杀伤能力随浓度递增，并且其杀菌能力明显强于对照产品普洱茶叶水提物。所以，青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上具有很好的应用前景。

Description

青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的用途
技术领域
本发明涉及药物领域，具体涉及青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的用途。
背景技术
青钱柳，Cyclocarya paliurus(Batal.)ljinskaja，又名青钱李、摇钱树、甜茶树等，系胡桃科青钱柳属植物特有单种属，为我国所特有，属濒危树种。青钱柳是一种高大速生阔叶乔木，因其树形似柳，果实圆形似铜钱，色青而下垂，故名“青钱柳”。据《中国中药资源志要》记载，其树皮、叶具有清热消肿、止痛的功能，可用于治疗顽癣。长期以来，民间用其叶片做茶，因其味甜且具有清热解暑、降血糖、降血压和延年益寿的作用。青钱柳为我国特有的降糖药用植物资源，近年来的青钱柳研究也多集中在降糖药理、药效物质基础等方面。
中国专利CN201210271132.9公开了“一种祛痰止咳组合物及其制备方法”，CN201310462576.5公开了“一种青钱柳提取物在制备预防和治疗白血病药物中的应用”，中国专利CN106236828A公开了青钱柳叶或其提取物在制备调理阴虚体质的保健食品或治疗未病的药物中的应用，中国专利CN106377572A公开了青钱柳叶或其提取物在制备预防和/或缓解胃热证的保健食品或药物中的应用。这些专利拓宽了青钱柳的应用范围。
然而，作为我国所特有的植物，有关青钱柳叶更多的功效还被充分开发，比如，关于青钱柳叶或其提取物作为抑菌剂的用途还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的新用途。
本发明提供了青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的用途。
进一步地，所述抗菌剂用于杀灭细菌和/或抑制细菌的生长和繁殖。
进一步地，所述细菌选自大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌、嗜酸乳杆菌，优选为金黄色葡萄球菌ATCC25923，表皮葡萄球菌ATCC8033，嗜酸乳杆菌ATCC4356。
进一步地，所述细菌选自耐药细菌；优选地，所述耐药细菌选自大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌。
进一步地，所述青钱柳叶提取物为青钱柳叶水提物。
进一步地，所述青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，即得；
或，所述青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，浓缩或干燥，即得。
进一步地，所述水为青钱柳叶的5-30倍量；所述加热温度为70-110℃；所述提取时间为0.5-3小时；所述提取次数为1-4次；
优选地，所述水为青钱柳叶的15倍量；所述加热温度为90℃；所述提取时间为1.5小时；所述提取次数为2次。
本发明还提供了一种抗菌的药物或者日化用品，所述抗菌的药物或者日化用品是由青钱柳叶或其提取物为活性成分，加上药学或日化用品领域常用的辅料制备而成。
进一步地，所述抗菌的药物或者日化用品能够杀灭细菌和/或抑制细菌的生长和繁殖，所述细菌选自：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌、嗜酸乳杆菌；优选为金黄色葡萄球菌ATCC25923，表皮葡萄球菌ATCC8033，嗜酸乳杆菌ATCC4356；
和/或，所述细菌选自耐药细菌；优选地，所述耐药细菌选自大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌。
进一步地，所述青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，即得；或，取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，浓缩或干燥，即得；
优选地，所述水为青钱柳叶的5-30倍量；所述加热温度为70-110℃；所述提取时间为0.5-3小时；所述提取次数为1-3次；
更优选地，所述水为青钱柳叶的15倍量；所述加热温度为90℃；所述提取时间为1.5小时；所述提取次数为2次。
通过试验证明，青钱柳水提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、嗜酸乳杆菌均有杀伤作用，特别是对大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌多种耐药细菌具有杀伤作用。其杀伤能力随浓度递增，并且其杀菌能力明显强于对照产品普洱茶叶水提物。所以，青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上具有很好的应用前景。
本发明中“抗菌剂”包括杀菌剂和抑菌剂，能够杀灭细菌和/或抑制细菌的生长和繁殖。
抗菌的药物是指具有杀菌或抑菌活性的药物。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为青钱柳叶水提物、普洱茶叶水提物对各种细菌的杀菌效果曲线。
具体实施方式
本发明所用原料与仪器均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1、青钱柳叶水提物的制备
取50g青钱柳叶(来源于四川南江县光雾山种植基地，经清洗后室温干燥保存)，加15倍量水，加热90℃提取2次，每次1.5h。水提物趁热抽滤，冷却，测定体积为1450ml，即得青钱柳叶水提物。
取250mL上述水提物于80℃，65r/min进行减压浓缩，浓缩定容至60mL，备用(下述实验例1中使用)。
采用紫外-可见分光光度法(《中国药典》2015年版通则0401)，以芦丁为对照，测得浓缩液中总黄酮浓度为0.0426％；以无水葡萄糖为对照，测得浓缩液中总多糖浓度为0.0042％。
对照例1、普洱茶叶水提物的制备
按照实施例1中相同的方法，将原料青钱柳叶替换为普洱茶叶(购买的商品用普洱茶成品)，得到备用普洱茶叶水提物(下述实验例1中使用)。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1、青钱柳叶水提物的杀菌作用测试
1、细菌的培养
培养基：大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、金黄色葡萄球菌ATCC25923、表皮葡萄球菌ATCC8033、腐生葡萄球菌的培养采用MH培养基；肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌的培养采用含5％血清的MH培养基；嗜酸乳杆菌ATCC4356的培养采用MRS培养基。
培养条件：各菌在37℃液体摇床培养4小时；肺炎链球菌、嗜酸乳杆菌、腐生葡萄球菌过夜培养。
2、实验方法
提取物的稀释：提取物(分别取实施例1所得备用青钱柳叶水提物、对照例1所得备用普洱茶叶水提物)对倍稀释在96孔板中进行。稀释液用各菌相应的培养基(MH培养基或加血清的MH培养基，嗜酸乳杆菌的培养基为MRS液体培养基)。第1、2孔分别加备用水提物100μl，从第2孔开始加100μl培养基做对倍稀释至第9孔，第10孔为只加培养基的生长对照孔。以备用水提物为基准，从第1孔到第9孔，各孔对应的提取物的浓度分别为原始备用水体物浓度的1/1倍、1/2倍、1/4倍、1/8倍、1/16倍、1/32倍、1/64倍、1/128倍、1/256倍。
菌液的稀释：各菌接种于3ml MH培养基中，37℃摇床培养4小时，麦氏比浊0.5个麦氏单位，再将菌液稀释1000倍备用，菌浓度约5×105个/ml。
杀菌测试：在含各浓度提取物的孔中分别加入稀释菌液100μl；在一组稀释提取物孔中加入100μl培养基作为空白对照。经充分混匀后，培养板置湿盒中37℃孵育过夜。取各菌液30μl，用生理盐水10倍稀释，100μl涂布于培养平板，置37℃孵育过夜，计数菌落数。
杀菌率＝(1-细菌数量/生长对照细菌数量)×100
MBC50和MBC90由GraphPad Prism(Version7.04)采用非线性回归分析方式计算，其中MBC50：到达50％杀菌效果的最低浓度；MBC90：到达90％杀菌效果的最低浓度。
3、实验结果
如图1所示，可以看出，青钱柳叶水提物对受试菌均有不同程度的杀伤作用，且杀伤能力随浓度递增。青钱柳叶水提物对细菌的杀伤作用大小依次为：金黄色葡萄球菌ATCC25923≈表皮葡萄球菌ATCC8033＞肺炎链球菌ATCC6303＞大肠杆菌CMCC44155≈腐生葡萄球菌＞大肠杆菌ATCC25922＞嗜酸乳杆菌ATCC4356≈乙型溶血性链球菌＞甲型溶血性链球菌。
此外，与对照普洱茶叶水提物相比，除对肺炎链球菌外，青钱柳水提物的杀菌作用均强于对照普洱茶叶水提物。
进一步计算得出青钱柳叶和普洱茶叶水提物杀菌作用的MBC50和MBC90，结果如表1所示。可以看出，除肺炎链球菌外，青钱柳水提物达到50％和90％杀菌效果所需的最低浓度均比普洱茶叶水提物低。并且，在杀灭金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、嗜酸乳杆菌上，两者的差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。说明青钱柳叶水提物的杀菌效果明显强于对照产品普洱茶叶水提物。
表1青钱柳、普洱茶叶水提物对细菌的MBC50和MBC90
Figure BDA0002075617640000051
综上，本发明提供了青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的用途。通过实验证明，青钱柳水提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、嗜酸乳杆菌均有杀伤作用，特别是对大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌多种耐药细菌具有杀伤作用。其杀伤能力随浓度递增，并且其杀菌能力明显强于对照产品普洱茶叶水提物。所以，青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上具有很好的应用前景。

Claims (10)

1.青钱柳叶或其提取物在制备抗菌剂上的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述抗菌剂用于杀灭细菌和/或抑制细菌的生长和繁殖。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述细菌选自大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌、嗜酸乳杆菌，优选为金黄色葡萄球菌ATCC25923，表皮葡萄球菌ATCC8033，嗜酸乳杆菌ATCC4356。
4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述细菌选自耐药细菌；优选地，所述耐药细菌选自大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌。
5.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于：所述青钱柳叶提取物为青钱柳叶水提物。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，即得；
或，所述青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，浓缩或干燥，即得。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述水为青钱柳叶的5-30倍量；所述加热温度为70-110℃；所述提取时间为0.5-3小时；所述提取次数为1-4次；
优选地，所述水为青钱柳叶的15倍量；所述加热温度为90℃；所述提取时间为1.5小时；所述提取次数为2次。
8.一种抗菌的药物或者日化用品，其特征在于：所述抗菌的药物或者日化用品是由青钱柳叶或其提取物为活性成分，加上药学或日化用品领域常用的辅料制备而成。
9.根据权利要求8所述的抗菌的药物或者日化用品，其特征在于：所述抗菌的药物或者日化用品能够杀灭细菌和/或抑制细菌的生长和繁殖，所述细菌选自：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌、嗜酸乳杆菌；优选为金黄色葡萄球菌ATCC25923，表皮葡萄球菌ATCC8033，嗜酸乳杆菌ATCC4356；
和/或，所述细菌选自耐药细菌；优选地，所述耐药细菌选自大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌CMCC44155、肺炎链球菌ATCC6303、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌。
10.根据权利要求8或9所述的抗菌的药物或者日化用品，其特征在于：所述青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，即得；或，取青钱柳叶，加水，加热提取，抽滤，取液体，浓缩或干燥，即得；
优选地，所述水为青钱柳叶的5-30倍量；所述加热温度为70-110℃；所述提取时间为0.5-3小时；所述提取次数为1-3次；
更优选地，所述水为青钱柳叶的15倍量；所述加热温度为90℃；所述提取时间为1.5小时；所述提取次数为2次。
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