CN112004554A

CN112004554A - 通过激活自噬用于毛发生长的方法和组合物

Info

Publication number: CN112004554A
Application number: CN201980026164.2A
Authority: CN
Inventors: 黄菁; 柴敏; 凯伦·林恩·罗伊; 劳伦特·韦尔涅; 盖伊·米里亚姆·克鲁克斯; 斯蒂芬妮·科乔诺·德·巴罗斯; 江梅生
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 2018-04-16
Filing date: 2019-04-15
Publication date: 2020-11-27
Also published as: AU2019255539A1; JP2021521241A; US20210145833A1; JP7545896B2; WO2019204183A1; KR20210008481A; EP3781207A1; CA3096543A1; EP3781207A4

Abstract

公开了用一种或多种自噬诱导剂在受试者中改善或刺激的毛发再生；治疗、抑制或减少毛发脱落；改善或刺激毛发生长；治疗、抑制或减少色素沉着损失；和/或改善或刺激色素沉着产生的方法。

Description

通过激活自噬用于毛发生长的方法和组合物

相关申请交叉引用

本申请要求于2018年4月16日提交的美国专利申请号62/658,113的优先权，其通过援引整体并入本文。

对经由EFS-网提交的序列表的引用

大小为1.13kb的名为“20190415_034044_183WO1_seq_ST25”的于2019年4月15日创建并经由EFS-网同本申请一起电子提交的序列表的ASCII文本文件的内容以其全文通过援引并入本文。

确认政府支持

本发明是在国立卫生研究院授予的授权号为HL090553和AG049753的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。

背景技术

毛发在生物学上和心理上的重要性是公认的。哺乳动物的毛发生长由毛囊的休止期(静止)、生长期(再生)和退化期(变性)阶段的循环重复组成。这个毛囊周期受内在信号和外在信号两者的调节，这些内在信号和外在信号均控制毛囊干细胞(HFSC)的静止和激活。不足的HFSC激活和增殖是许多生物学和病理学病症(包括衰老)中的脱发的原因。强烈地寻找可以促进HFSC激活和生长期开始的分子，因为它们既可以帮助揭示毛发再生如何调节，又提供治疗和美容干预。

作为用于降解和再循环细胞组分的基本过程，自噬对于适应营养素饥饿和其他不利环境条件是至关重要的，并且其受这样的信号调节。通过消除错误折叠或受损的蛋白质和受损的细胞器，自噬对于蛋白质稳态的质量控制也很重要。自噬受损可能与神经退行性变和其他疾病有因果地相关。自噬随着年龄下降，这可能导致老年人自噬相关疾病(例如，癌症和神经退行性疾病)的患病率更高。需要自噬清除造血干细胞中的活跃、健康的线粒体以维持静止和干性，而自噬满足静止肌肉干细胞激活所需要的营养素。在皮肤中，自噬是表皮和真皮干细胞的自我更新和分化所必需的，但其在毛囊干细胞中的作用仍存在争议。一方面，毛发生长可能需要自噬，因为来自自噬相关基因7(Atg7)缺陷的小鼠的皮肤移植物展现出异常的毛发生长。另一方面，心理应激可能诱导自噬和毛发周期延迟。

毛发脱落或脱发影响全世界数百万，并且可能由于衰老、荷尔蒙功能障碍、自身免疫或作为癌症治疗的副作用而发生。高度追求可用于使毛发再生的方法和组合物，但仍缺乏。

发明内容

在一些实施方式中，本发明涉及一种刺激有此需要的受试者的毛发再生的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，本发明涉及一种刺激有此需要的受试者的新的毛发生长的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，本发明涉及一种用于治疗、抑制或减少受试者的毛发脱落(损失)的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，本发明涉及一种用于改善或刺激受试者的毛发生长的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，本发明涉及一种用于治疗、抑制或减少受试者的色素沉着损失的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，本发明涉及一种用于改善或刺激受试者的色素沉着产生的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，所述毛发脱落是所述受试者衰老的结果。在一些实施方式中，所述色素沉着损失是所述受试者衰老的结果。在一些实施方式中，所述受试者是衰老的和/或所述受试者是老年受试者。在一些实施方式中，以治疗有效量施用所述一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，所述治疗有效量在给定的时间段内以数个剂量施用，例如，日剂量持续一周或更长时间。

在一些实施方式中，将所述一种或多种自噬诱导剂施用至所述受试者上想要新的毛发生长的区域。在一些实施方式中，所述区域具有的毛发量小于较早时期存在的量。在一些实施方式中，所述区域没有毛发。在一些实施方式中，由于减少或抑制毛发生长的疾病或病症，所述区域没有毛发。在一些实施方式中，由于损伤，所述区域没有毛发。在一些实施方式中，由于化学疗法和/或放射疗法，所述区域没有毛发。在一些实施方式中，由于外科手术，所述区域没有毛发。在一些实施方式中，所述受试者患有甲状腺疾患。在一些实施方式中，所述受试者患有脑下垂体疾患。在一些实施方式中，所述受试者患有斑秃。在一些实施方式中，所述受试者患有生长期脱发和/或休止期脱发。

在一些实施方式中，所述治疗有效量以单剂量施用。在一些实施方式中，所述治疗有效量以至少两剂量、至少三剂量、至少四剂量、至少五剂量或更多剂量施用。在一些实施方式中，所述治疗有效量每天施用。在一些实施方式中，所述治疗有效量每隔一天施用。

在一些实施方式中，所述方法进一步包括向所述受试者施用补充剂。在一些实施方式中，所述补充剂包括一种或多种生长因子。在一些实施方式中，所述生长因子包括TGF-β2、IGF-1、KGF或HGF。在一些实施方式中，所述补充剂与所述一种或多种自噬诱导剂组合施用。在一些实施方式中，所述补充剂与所述一种或多种自噬诱导剂顺序施用。在一些实施方式中，所述补充剂和所述一种或多种自噬诱导剂以统一剂型施用。在一些实施方式中，所述补充剂和所述一种或多种自噬诱导剂以分开的剂型施用。在一些实施方式中，将所述剂型配制为用于刺激细胞进入生长期阶段。

在一些实施方式中，在施用所述一种或多种自噬诱导剂之后所述受试者的毛囊的数目相对于在施用所述一种或多种自噬诱导剂之前所述受试者的毛囊的数目更高。在一些实施方式中，在施用所述一种或多种自噬诱导剂之后所述受试者的毛发的重量相对于在施用所述一种或多种自噬诱导剂之前所述受试者的毛发的重量更大。在一些实施方式中，在施用所述一种或多种自噬诱导剂之后所述受试者的毛发的毛干长度相对于在施用所述一种或多种自噬诱导剂之前所述受试者的毛发的毛干长度更快地增加。在一些实施方式中，在施用所述一种或多种自噬诱导剂之后所述受试者的毛发的生长速率相对于在施用所述一种或多种自噬诱导剂之前所述受试者的毛发的生长速率增加。在一些实施方式中，所述受试者是人。

在一些实施方式中，所述一种或多种自噬诱导剂以组合物的形式施用。在一些实施方式中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成用于口服、肠胃外或局部施用。在一些实施方式中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成用于局部施用。在一些实施方式中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成凝胶。在一些实施方式中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成乳膏。在一些实施方式中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成软膏。在一些实施方式中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成洗剂。

前面的一般描述和下面的详细描述两者仅仅是示例性和解释性的，并且旨在提供对所要求保护的本发明的进一步解释。包括附图以提供对本发明的进一步理解，并且附图被并入本说明书中并构成本说明书的一部分，阐明了本发明的若干实施方式，并且与说明书一起解释了本发明的原理。

附图说明

通过参考附图进一步理解本发明，其中：

图1.通过用α-KG局部处理诱导毛发再生。小图(A)α-KG的结构式。小图(B)α-KG诱导毛发再生。雄性小鼠在出生后第44天(休止期)剃毛，并用媒介物对照(DMSO，在约250μLPLO基质中)或α-KG(溶于DMSO中，并且然后以最终32mM添加至约250μL PLO基质中)在39天内每隔一天局部处理。指示由处理引起生长期诱导的α-KG处理的动物的皮肤中的黑色素色素沉着早在第12天就变得可见；媒介物处理的小鼠至少39天没有示出显著的色素沉着。在约5-7天内，来自α-KG处理的小鼠的色素沉着的皮肤区域的毛发生长是可见的。示出的照片是在处理后的第39天拍摄的，到那时，用α-KG处理的小鼠展现出整体毛发生长，而对照小鼠除了某些动物的随机毛发小块外，一般仍然没有毛发。动物总数：对照(32)，α-KG(34)。在雌性小鼠中看见了由α-KG引起的类似效果(图6，小图D中示出的)。小图(C)量化用α-KG对比对照处理的小鼠皮肤中黑色素色素沉着(指示生长期的开始)的外观。方法中描述了色素沉着评分。小图(A)中示出的动物数目：对照(4)，α-KG(4)。小图(D)来自用32mMα-KG处理的小鼠的苏木精和伊红(H&E)染色的皮肤组织切片的显微照片，示出新的毛囊和增大的毛球、细长的毛干以及增厚的真皮层。苏木精是一种碱性染料，其将核酸染成紫蓝色；伊红是一种酸性染料，其将细胞质和细胞外基质(例如，胶原)染成粉红色。Ki-67(细胞增殖的标志物)的免疫组织化学进一步证明了新毛囊的形成。IL-6和F4/80分别是炎性细胞因子和巨噬细胞标志物。IL-6和F4/80阳性炎性皮肤的对照示于图6，小图E中。小图(E)在用α-KG处理6小时、24小时和5天的小鼠的休止期皮肤中诱导自噬相关的标志物，包括LC3、p62和磷酸化的Beclin1。如通过缺乏皮肤色素沉着所证实的，在处理时期期间皮肤保持在休止期中。每个泳道均来自不同的动物。动物数目：每个处理4个。

图2.通过用寡霉素和雷帕霉素局部处理诱导毛发再生。小图(A)寡霉素的结构。小图(B)寡霉素(100μM)诱导毛发再生。将雄性小鼠在出生后第44天剃毛，并且每隔一天局部处理。在处理后的第23天拍摄示出的照片。动物数目：对照(23)，寡霉素(23)。在雌性小鼠中看见了通过寡霉素的类似效果(图6，小图D)。小图(C)量化用寡霉素对比对照处理的小鼠皮肤中黑色素色素沉着的外观。动物数目：对照(3)，寡霉素(3)。小图(D)来自用100μM寡霉素处理的小鼠的H&E和Ki-67染色的皮肤组织切片的显微照片。小图(E)在用指示的化合物处理5天的小鼠的休止期皮肤中自噬相关的标志物的蛋白质印迹分析。Ctrl，对照；Oligo，寡霉素；Rapa，雷帕霉素。

小图(F)雷帕霉素的结构。小图(G)雷帕霉素(1.6μM)诱导毛发再生。将雄性小鼠在出生后第43天剃毛，并且每隔一天局部处理。在处理后的第37天拍摄照片。动物数目：对照(18)，雷帕霉素(17)。100nM的雷帕霉素产生与1.6μM相似的结果(图7)。在雌性小鼠中看见了通过雷帕霉素的类似效果(图7，小图B)。然而，16μM的雷帕霉素导致毛发脱落和开放性创伤(数据未示出)，这可能是由于mTOR受到更严重的抑制，据报道mTOR是HFSC激活所必需的。小图(H)量化用雷帕霉素(1.6μM)对比对照处理的小鼠皮肤中黑色素色素沉着的外观。动物数目：对照(3)，雷帕霉素(3)。小图(I)来自小图(G)中示出的小鼠的H&E和Ki-67染色的皮肤组织切片的显微照片。

图3.通过AICAR、二甲双胍和α-KB诱导毛发再生。小图(A)AICAR的结构。小图(B)AICAR(16mM)诱导毛发再生。将雄性小鼠在出生后第44天剃毛，并且每隔一天局部处理。在处理后的第41天拍摄照片。动物数目：对照(12)，AICAR(11)。雌性中类似效果(未示出)。小图(C)量化来自小图(B)的小鼠中的皮肤色素沉着。动物数目：对照(3)，AICAR(3)。小图(D)来自用16mM AICAR处理的小鼠的H&E和Ki-67染色的皮肤组织切片。小图(E)二甲双胍的结构。小图(F)二甲双胍(160mM)诱导毛发再生。将雄性小鼠在出生后第43天剃毛，并且用二甲双胍或媒介物对照(本实验中为H₂O)每隔一天局部处理。在处理后的第48天拍摄照片。动物数目：对照(13)，二甲双胍(12)。雌性中类似效果(未示出)。

小图(G)量化来自小图(F)的小鼠中的皮肤色素沉着。动物数目：对照(3)，二甲双胍(3)。小图(H)来自小图(F)中示出的小鼠的H&E和Ki-67染色的皮肤组织切片。小图(I)α-KB的结构。小图(J)口服α-KB(在饮用水中为8mM)处理消除老年雌性小鼠的毛发脱落。照片是在131周龄时拍摄的。动物数目：对照(5)，α-KB(5)。小图(K)局部α-KB(32mM)在年轻雄性小鼠中诱导毛发再生。将小鼠在出生后第44天剃毛，并且每隔一天局部处理。在处理后的第39天拍摄照片。动物数目：对照(18)，α-KB(18)。雌性中类似效果(未示出)。小图(L)量化来自小图(K)的小鼠中的皮肤色素沉着。动物数目：对照(4)，α-KB(4)。小图(M)来自用32mMα-KB处理的小鼠的H&E和Ki-67染色的皮肤组织切片。小图(N)在用指示的化合物处理5天的小鼠的休止期皮肤中自噬相关的标志物的蛋白质印迹分析。

图4.SMER28以依赖自噬的方式诱导毛发再生。小图(A)SMER28的结构。小图(B)在用1mM SMER28处理5天的小鼠的休止期皮肤中自噬相关的标志物的蛋白质印迹分析。每个泳道均来自单独的小鼠。小图(C)将雄性小鼠在出生后第45天剃毛，并每天用1mM SMER28处理；在处理后的第23天拍摄照片。每隔一天的处理展示出相似的结果(未示出)。动物数目：对照(6)，SMER28(6)。雌性中观察到类似效果(未示出)。小图(D)与autophinib(4mM)的共同处理抑制了SMER28(2mM)诱导的毛发再生。将小鼠在出生后第51天剃毛，并且每隔一天局部处理。在处理后的第20天拍摄照片；示出了相应皮肤组织切片的组织学。动物数目：对照(20)，SMER28(16)，SMER28+autophinib(7)，autophinib(7)。

图5.自噬水平指示毛囊周期阶段，当生长期诱导时增加。将雄性小鼠在出生后第93天剃毛以及将将雌性小鼠在出生后第92天剃毛，并监测毛发周期进程。处死每个指定阶段的小鼠用于自噬标志物的蛋白质印迹分析。T，休止期；A，生长期；C，退化期。

图6.在雄性和雌性小鼠两者中，均可通过α-KG或寡霉素处理诱导毛发再生。与图1相关。小图(A)米诺地尔(5％，在PLO基质中)作为毛发再生的阳性对照。在处理后的第22天拍摄示出的照片。动物数目：对照(3)，米诺地尔(3)，α-KG(3)。小图(B)与图1，小图A中的6.5周龄小鼠相比，α-KG诱导8周龄动物的毛发再生更快。将雄性小鼠在出生后第57天(休止期)剃毛，并且用32mMα-KG每隔一天局部处理。在处理后的第20天拍摄示出的照片。动物数目：对照(4)，α-KG(3)。小图(C)量化来自(A)的小鼠中的皮肤色素沉着。α-KG处理的动物的色素沉着早在第7天就变得可见，并且在处理后的第20天观察到完全背部毛发覆盖。动物数目：对照(3)，α-KG(3)。小图(D)α-KG和寡霉素还刺激雌性动物的毛发再生。将雌性小鼠在出生后第58天(休止期)剃毛，并且用媒介物对照(DMSO)、α-KG(16mM)或寡霉素(10μM)每隔一天局部处理。在处理后的第26天拍摄示出的照片。动物数量：对照(9)，α-KG(9)，寡霉素(10)。小图(E)阳性对照，示出受损皮肤中IL-6和F4/80。使用具有皮肤损伤例如战斗创伤或咬伤损伤的8周龄雄性小鼠。小图(F)定量RT-PCR，示出α-KG(*P＝0.026；通过t-检验，双尾，两样本不等方差)和SMER28(*P＝0.017；通过t-检验，双尾，两样本不等方差)处理的皮肤中的增加的p62转录物水平。持家基因B2m(β-2-微球蛋白)用作内部对照。绘制平均值±标准偏差(s.d.)。

图7.雷帕霉素对毛发再生的影响。与图2相关。小图(A)100nM的雷帕霉素也促进毛发再生。将雄性小鼠在出生后第45天(休止期)剃毛，并且用媒介物对照(DMSO)或100nM雷帕霉素每隔一天局部处理。在处理后的第23天拍摄示出的照片。动物数目：对照(7)，雷帕霉素(7)。小图(B)雷帕霉素还促进雌性动物的毛发再生。将雌性小鼠在出生后第58天(休止期)剃毛，并且用媒介物对照(DMSO)或雷帕霉素(1.6μM)每隔一天局部处理。动物数目：对照(9)，雷帕霉素(11)。

图8.α-KG需要自噬来诱导毛发再生。与图4相关。小图(A)Autophinib抑制由α-KG引起的毛发再生。将雄性小鼠在出生后第53天(休止期)剃毛，并且用媒介物对照(DMSO)、autophinib(4mM)、α-KG(64mM)或者α-KG(64mM)和autophinib(4mM)一起每隔一天局部处理。在处理后的第20天拍摄示出的照片。动物数目：每个处理4个。小图(B)在处理后的第5天的小鼠皮肤中自噬相关的标志物的蛋白质印迹分析。小图(C)巴佛洛霉素A1也抑制由α-KG引起的毛发再生。将雄性小鼠在出生后第52天(休止期)剃毛，并且用媒介物对照(DMSO)、巴佛洛霉素(200μM)、α-KG(64mM)或者α-KG(64mM)连同巴佛洛霉素(200μM)一起每隔一天局部处理。在处理后的第21天拍摄示出的照片。动物数目：每次处理4个。图9.表示小鼠毛发周期进程分数在0与100之间的图像。与图1至图3相关。将小鼠剃毛并监测毛发周期进程。基于皮肤色素沉着水平和毛干密度分配0至100的任意值，其中0指示没有毛发生长(以及没有色素沉着)，并且数越高对应皮肤越暗并且浓密毛发生长的区域越大。例如，对于50％的背部皮肤区域上全长毛发生长或者还没有毛干的100％的背部皮肤区域上色素沉着分配50的分数。对于70％的背部皮肤上全长毛发生长或者具有约30-40％毛干的100％的背部皮肤上色素沉着分配70的分数。值100指示在100％的背部皮肤上全长毛发生长。

具体实施方式

本文公开了诱导自噬并且从而刺激原本休止期皮肤中的毛发再生(例如，毛发生长和毛囊再生)的化合物。即α-酮戊二酸酯(α-KG)、α-酮丁酸酯(α-KB)以及影响TOR和AMPK信号传导的药品诸如雷帕霉素和二甲双胍诱导自噬并且从而刺激毛发再生。通过这些试剂刺激毛发再生被特定自噬抑制剂阻断，表明自噬与毛发再生之间的机理联系。与此想法一致，在自然毛囊周期期间，一旦进入生长期，就会检测到自噬增加。本文的实验指示，自噬的强迫诱导可以激活静止的休止期的毛囊。

如本文公开的，在用α-KG、寡霉素、雷帕霉素和SMER28处理的小鼠之中不时观察到整个背部休止期皮肤上的迅速生长期进入，但是在α-KB、二甲双胍或AICAR处理的小鼠中从未观察到整个背部休止期皮肤上的迅速生长期进入，也不在媒介物对照小鼠中观察到整个背部休止期皮肤上的迅速生长期进入。暂时地，与通过α-KG、寡霉素或雷帕霉素的约5-14天相比，通过α-KB、AICAR或二甲双胍的色素沉着(生长期进入)诱导花费长得多的时间，例如约12-18天的时间范围。可能的是这可反映了通过mTOR抑制和通过AMPK激活对自噬调节的差别作用。代谢与自噬之间的串扰是复杂的。自噬通常是由ATP可用性的限制或缺少必需营养素(包括葡萄糖和氨基酸)引起的，但是自噬需要ATP。饥饿以及因而发生的减少的能荷和增加的ROS水平是自噬的有效激活剂。

自噬的诱导是由与饮食限制(DR)对长寿的影响有关或牵连的某些相同的细胞能量代谢调节剂介导的。代谢物α-酮戊二酸酯(α-KG)增加蠕虫和培养的哺乳动物细胞两者中的自噬。因此，如本文公开的，使用体内C57BL/6J小鼠背部皮肤模型检查了α-KG是否可以刺激毛发再生。为了比较，将用于治疗患者毛发脱落的血管扩张药米诺地尔包括进来，因为在许多有关毛发研究的论文中，米诺地尔通常已经用作阳性对照(图6，小图A)。当背部皮肤毛囊处于休止期阶段时，将6.5周龄的雄性小鼠(出生后第44天)在背面剃毛。每隔一天局部施加α-KG或媒介物对照处理。1α-KG处理大幅度增强毛发再生(图1，小图A-B)。因为小囊黑色素细胞的黑素原活性与毛发周期的生长期阶段严格偶联，因此黑色小鼠的生长期通过皮肤可见的黑色素色素肉眼上可辨认。在图1，小图B中示出的实验中，通过用α-KG处理后的第12天可见皮肤色素沉着(图1，小图C)。相比之下，在媒介物处理的对照小鼠中，至少直到第39天，当处死动物进行组织学和生化分析时，没有色素沉着或只有一些分散的色素沉着的斑点显见。在约5-7天内，毛发从α-KG处理的小鼠的色素沉着的皮肤区域中生长出来，而到处理后的第39天，α-KG处理的小鼠展现出强健的毛发生长；相比之下，对照小鼠总体上示出很少或没有毛发生长(图1，小图B)。当处理8周龄的休止期后段小鼠时，α-KG对生长期开始和毛发再生的影响甚至更显著(图6，小图B-C)。α-KG刺激毛发生长与性别无关；α-KG在雌性小鼠中展现出相似的毛发刺激作用(图6，小图D)。

通过组织学分析相应地证明了在α-KG处理的小鼠中毛囊的形成和分化(图1，小图D)。在α-KG处理组中观察到更多的小囊和高增殖标志物Ki-67表达，示出生长期阶段诱导(图1，小图D)。在休止期皮肤中，早在处理后的第7天，α-KG引发了新的生长期波。由于已知炎症和创伤修复会刺激组织，包括毛发再生，因此本文的实验集中在不会引起皮肤损伤或其他异常皮肤病症的分子上。根据目视检查通过在本研究(除非另有说明)中描述的α-KG或其他小分子处理，没有皮肤刺激或炎症的迹象，并通过IL-6和F4/80染色证实(图1，小图D以及图6，小图E)。

还对与再生实验所用的那些相同年龄的小鼠进行了急性处理，并对早期生化变化进行了分析。在处理后的第24小时和第5天，通过LC3的蛋白质印迹分析，支持了α-KG处理的小鼠皮肤中自噬诱导的增加(图1，小图E)。自噬底物p62/SQSTM1(其被广泛用作自噬降解的指标)的表达也随着在小鼠皮肤中由α-KG引起的自噬诱导而增加(图1，小图E)以及随着通过雷帕霉素诱导的自噬的自噬诱导而增加(参见以下)。这可能是由于通过上调p62转录进行的补偿(图6，小图F)。

发现通过直接抑制高度保守的线粒体ATP合酶/ATP酶(复合物V)和随后降低下游的雷帕霉素靶蛋白(TOR)活性，在分子水平上介导由α-KG引起的寿命增加。还检查了通过α-KG的毛发再生是否也可以由ATP合酶抑制介导。用复合物V抑制剂寡霉素进行局部处理在雄性(图2，小图A-D)和雌性(图6，小图D)小鼠二者中均相似地促进了毛发再生。同样，与α-KG一样，寡霉素处理也导致TOR抑制和自噬激活。如通过LC3表达所示，在局部寡聚霉素处理的小鼠皮肤中检测到自噬增加(图2，小图E)。

雷帕霉素靶蛋白(TOR)蛋白质是DR长寿效果的主要介导物。例如，通过雷帕霉素对TOR的抑制引起自噬。因此，还检查了雷帕霉素是否增加了毛发再生。如图2，小图F-I和图7中示出的，如通过视觉和组织学方法两者确定的局部雷帕霉素处理加速了毛发再生。自噬LC3、p62和依赖mTOR的磷酸化的Beclin 1S14在雷帕霉素处理的小鼠休止期皮肤中增加(图2，小图E)。一致地，用α-KG(图1，小图E)和寡霉素(图2，小图E)处理后的第5天，在小鼠皮肤中的Beclin 1S14磷酸化也增加。总之，这些结果示出，可以通过间接或直接抑制TOR途径活性和诱导自噬来加速毛发再生。

AMP激活的蛋白质激酶(AMPK)是α-KG和寡霉素的另一种常见下游效应物。AMPK(关键的细胞能量传感器)通过减少细胞能荷来激活，例如在葡萄糖饥饿和许多其他细胞应激条件时。AMPK还提高自噬。与该理解一致，在用α-KG和寡霉素处理的小鼠皮肤中，S91上的依赖AMPK的Beclin1磷酸化增加(图1，小图E和图2，小图E)。进一步地，如图3，小图A-D中示出的，还通过用AMPK激活剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)(AMP类似物)进行局部处理来刺激生长期诱导和毛发再生。AMPK的另一种激动剂二甲双胍类似地诱导自噬和毛发再生(图3，小图E-H)。

理论上，二甲双胍已示出抑制电子传递链中的线粒体复合物I。有趣地，长寿的秀丽线虫(C.elegans)线粒体突变体在胞外代谢物组(exometabolome)中积累了各种α-酮酸代谢物。30周内的在饮用水中补充α-酮丁酸酯(α-KB)大大改善老小鼠的毛发覆盖层(图3，小图I-J)。在测试对老年小鼠进行局部处理的中试实验中，局部α-KB处理仅适度促进了剃毛的老年动物的毛发生长，而局部α-KG或雷帕霉素并未明显增加(或甚至略有减少，如果它完全改变的话)毛发再生(数据未示出)。相比之下，在年轻小鼠中，如α-KG和雷帕霉素处理，局部α-KB处理大幅度引起皮肤色素沉着和毛发再生(图3，小图K-M)。如通过在处理的皮肤中升高的LC3和磷酸化的Beclin 1指示的，自噬也被诱导(图3，小图N)。

先前已经报道了mTOR是HFSC激活和生长期进入所必需的。然而，本文公开的结果指示伴有自噬诱导的通过雷帕霉素对mTOR的适度抑制刺激毛发再生。对于线粒体调节，这样的二分法也可能存在。HFSC周期需要线粒体呼吸，而线粒体功能的遗传扰动取消毛发再生。示出寡霉素(复合物V抑制剂)实际上促进了毛发再生的实验表明温和的线粒体抑制可能被证明是有益的。由于从秀丽线虫到果蝇(Drosophila spp.)和人，线粒体复合物V在TOR的上游起作用，并且通过线粒体复合物V抑制和通过TOR抑制两者诱导自噬(图2，小图E)，检查了仅自噬诱导是否可以足以引起毛发再生。

如本文公开的，不依赖TOR的自噬诱导小分子SMER28被用于确定单独的自噬诱导是否会引起毛发再生。局部SMER28施用增加小鼠背部皮肤中的LC3和p62的自噬诱导(图4，小图A-B和图6，小图F)。取决于mTOR的Beclin 1 Ser14磷酸化水平在SMER28处理的皮肤中并未增加(图4，小图B)，指示了通过SMER28的不依赖mTOR的自噬诱导作用。此外，由于Beclin 1 S91磷酸化在SMER28处理的皮肤中也没有增加，因此SMER28似乎不通过影响AMPK来诱导自噬(图4，小图B)。引人注目地，SMER28也极大地诱导了毛发再生(图4，小图C)。这些发现强烈支持自噬在刺激毛发再生中的作用。

为了检查自噬对于SMER28刺激的毛发再生是否必要，采用了抑制VPS34和自噬体形成的autophinib。与autophinib共同处理阻止由SMER28引起的毛发再生(图4，小图D)，指示自噬对毛发再生重要。同样，自噬对于通过α-KG刺激毛发再生很重要(图8)，如通过与autophinib以及与巴佛洛霉素A1共同处理示出的，autophinib或巴佛洛霉素A1通过抑制依赖液泡H(+)-ATP酶(V-ATP酶)的酸化和依赖Ca-P60A/SERCA-的自噬体-溶酶体融合破坏自噬流。

为了理解自噬是否可能是自然毛囊周期不可缺的，检查了在不同毛囊阶段的自噬，并且随着毛囊通过生长期自然发展，自噬被提高；自噬在退化期中减少，而在休止期中保持很低(图5)。

总之，本文的实验示出，可通过诱导自噬来刺激毛发再生。

因此，在一些实施方式中，本发明涉及刺激有此需要的受试者的毛发再生，其包括通过向受试者施用一种或多种自噬诱导剂在受试者诱导自噬。如本文所用，“有需要的”的受试者包括由于休止期阶段延长、生长期阶段缩短和/或生长期诱导受阻患有毛发脱落的那些受试者，以及想要毛发再生、毛发生长和/或改善的毛发色素沉着的那些受试者。在一些实施方式中，本发明涉及用于在受试者中治疗、抑制或减少毛发脱落；改善或刺激毛发生长；治疗、抑制或减少色素沉着损失；和/或改善或刺激色素沉着产生的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。在一些实施方式中，本发明涉及用于在受试者中治疗、抑制或减少毛发脱落；改善或刺激毛发生长；治疗、抑制或减少色素沉着损失；和/或改善或刺激色素沉着产生的组合物，所述组合物包括一种或多种自噬诱导剂。

在一些实施方式中，受试者是动物。在一些实施方式中，受试者是动物，诸如啮齿动物或非人类灵长类。在一些实施方式中，所述受试者是人。在一些实施方式中，受试者是衰老的。在一些实施方式中，受试者是老年受试者。如本文所用，“衰老”的受试者是指当未处理的对照受试者开始在身体上、精神上和/或生物学上恶化时生命时期中的受试者。在一些实施方式中，衰老的受试者是其实龄至少在未处理的对照受试者的平均寿命的中点处的受试者。如本文所用，“老年”受试者是其实龄至少是未处理的对照受试者的平均预期寿命的三分之二的受试者。例如，如果给定种类的实验室小鼠的平均预期寿命为2年，则该种类的老年小鼠至少为16个月，并且如果另一种类实验室小鼠的平均预期寿命为3年，则该种类的老年小鼠为24个月。对于人而言，如果人的平均预期寿命约为80岁，则老年人为约53岁。应当注意，衰老的受试者可以是或可以不是老年受试者。

如本文所用，“自噬诱导剂”是指与阴性对照相比诱导自噬的化合物。自噬诱导剂包括ATP合酶抑制剂、TOR抑制剂、AMPK激活剂和不依赖TOR的自噬增强剂。然而，如本文定义的，明确地从“自噬诱导剂”中排除的是如WO 2018064468中所述的α-酮丁酸酯化合物和戊二酸酯化合物。在一些实施方式中，两种或更多种自噬诱导剂被共同施用给受试者。如本文所用，“共同施用”是指向受试者施用至少两种不同的试剂，例如，第一自噬诱导剂和第二自噬诱导剂。在一些实施方式中，共同施用是同时发生的。在涉及同时发生的共同施用的实施方式中，试剂可以作为单一组合物例如混杂物或作为两个分开的组合物施用。在一些实施方式中，在施用第二试剂之前和/或之后施用第一试剂。在共同施用是顺序的情况下，可以将第一试剂和第二试剂的施用间隔一段时间，例如数分钟、数小时或数天。本领域技术人员理解所使用的各种试剂或疗法的制剂和/或施用途径可以变化。共同施用的适当剂量可以由本领域技术人员容易地确定。在一些实施方式中，当两种或更多种试剂被共同施用时，以比用于其单独施用的适当的更低的剂量来施用各自试剂。

如本文所用，“ATP合酶抑制剂”是指与对照相比抑制ATP合酶的化合物。ATP合酶抑制剂的实例包括α-螺旋碱性肽抑制剂、血管抑素、肠抑素、腾毒素(tentoxin)、腾毒素类似物、白灰制菌素类(leucinostatins)、efrapeptins、芪类、黄酮、异黄酮、甾族雌二醇、雌激素代谢物、聚酮类抑制剂(例如，大环内酯)、有机锡化合物、α-吡喃酮及其衍生物、两亲性阳离子染料等。参见，例如，Hong,et al.,(2008)Microbiology and Molecular BiologyReviews:MMBR,72(4):590–641。在一些实施方式中，ATP合酶抑制剂是大环内酯，诸如寡霉素(任何类型，例如，A、B、C、D、E和F)、佩里霉素(peliomycin)、杀黑星菌素(venturicidin)(任何类型，诸如，A、B或X)、奥萨霉素(ossamycin)、apoptolidin和胞变霉素(cytovaricin)。在一些实施方式中，ATP合酶抑制剂是寡霉素。在一些实施方式中，寡霉素是寡霉素A。

如本文所用，“TOR抑制剂”是指与对照相比抑制TOR(雷帕霉素靶蛋白)的化合物。TOR抑制剂的实例包括雷帕霉素、雷帕霉素衍生物(例如，西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司等)、dactolisib、GSK2126458、XL765、AZD8055、INK128/MLN0128.OSI027、RapaLinks等。参见，例如，Xie,et al.(2016)F1000Research,5,F1000 Faculty Rev-2078。在一些实施方式中，TOR抑制剂是雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。

如本文所用，“AMPK激活剂”是指与对照相比激活AMPK(AMP激活的蛋白质激酶)的化合物。AMPK激活剂的实例包括间接AMPK激活剂(例如，WO 2009124636、WO 2009100130、WO2011029855、WO 2011138307、WO 2011080277、WO 2011032320、WO 2011033099中公开的化合物)、双胍(例如，二甲双胍)、噻唑烷二酮类、多酚、人参皂苷类、α-硫辛酸，直接AMPK激活剂(例如，5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)、噻吩并吡啶酮、苯并咪唑、水杨酸酯、化合物13、PT-1、MT 63-78(Debio0930))、噻吩并吡啶酮及其衍生物、苯并咪唑及其衍生物、5-(5-羟基-异噁唑-3-基)-呋喃-2-膦酸(C-2)等。参见，例如，Kim,et al.(2016)Experimental&molecular medicine,48(4):e224。在一些实施方式中，AMPK激活剂是直接AMPK激活剂。在一些实施方式中，AMPK激活剂是5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)。在一些实施方式中，AMPK激活剂是双胍。在一些实施方式中，AMPK激活剂二甲双胍。

如本文所用，“不依赖TOR的自噬增强剂”是指与对照相比不依赖于TOR信号传导途径而诱导或增强自噬的化合物。不依赖TOR的自噬增强剂的实例包括SMER28，还包括在体内诱导自噬的氯喹和3-MA等。

组合物

本文考虑了包括一种或多种自噬诱导剂的组合物，其包括药物组合物。术语“药物组合物”是指适用于受试者的药物用途的组合物。药物组合物通常包括有效量的活性剂，例如，一种或多种自噬诱导剂，以及药学上可接受的载体。术语“有效量”是指足以产生期望结果的剂量或量。期望结果可以包括剂量或量的接受者的客观或主观的改善，例如，长期存活、有效预防疾病状态等。除一种或多种自噬诱导剂外，药物组合物还可包括一种或多种补充剂。合适的补充剂的实例包括如WO 2018064468中所述的α-酮丁酸酯化合物和戊二酸酯化合物，生长因子(例如，TGF-β2、IGF-1、KGF、HGF)等。

在一些实施方式中，组合物包括一种或多种自噬诱导剂、基本上由一种或多种自噬诱导剂组成或由一种或多种自噬诱导剂组成。如本文所用，在基本上由一种或多种自噬诱导剂组成的组合物的上下文中，短语“基本上由……组成”意指可以包括除自噬以外的展现生物学活性或功能的其他成分，只要这些成分不显著改变一种或多种自噬诱导剂的活性。如本文所用，在由一种或多种自噬诱导剂组成的组合物的上下文中，短语“由……组成”意指组合物不包括展现旨在对所治疗的受试者产生作用的生物学活性或功能的其他成分，例如，不包括其他活性药物成分，然而，组合物可以包括旨在防止组合物本身中的细菌和真菌生长的抗细菌剂和抗真菌剂、载体、稀释剂、粘合剂等。

可以将一种或多种自噬诱导剂优选以药物组合物的形式向受试者施用。优选地，受试者是哺乳动物，更优选地，受试者是人。优选的药物组合物是包括治疗有效量的至少一种自噬诱导剂和药学上可接受的载体的那些药物组合物。

如本文所用，“治疗有效量”是指与对照诸如安慰剂相比可用于治疗、预防或抑制受试者的给定疾病或病症诸如毛发脱落的量。再次，技术人员将理解，某些因素可能影响有效治疗受试者所需的量，包括毛发脱落的程度、先前的治疗、受试者的总体健康和年龄等。然而，可以通过本领域的方法容易地确定治疗有效量。在一些实施方式中，对于肠胃外制剂，自噬诱导剂的治疗有效量范围为约0.01至约10mg/kg体重、约0.01至约3mg/kg体重、约0.01至约2mg/kg、约0.01至约1mg/kg或约0.01至约0.5mg/kg体重。口服施用的治疗有效量可能最高达约10倍。应该注意，具有治疗有效量的受试者的治疗可以作为单剂量或一系列数个剂量施用。用于治疗的剂量可以在给定的治疗过程中增加或减少。对于给定条件组的最佳剂量可以由本领域技术人员使用本领域中的剂量测定测试和/或诊断试验来确定。剂量测定测试和/或诊断试验可用于在治疗过程期间监测和调整剂量。

可以将药物组合物使用本领域已知的方法配制成用于预期的递送途径，包括静脉内、肌内、腹膜内、皮下、眼内、鞘内、关节内、滑膜内、小脑延髓池、肝内、病变内注射、颅内注射、输注，和/或吸入施用途径。药物组合物可以包括以下的一种或多种：pH缓冲溶液、佐剂(例如，防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂)、脂质体制剂、纳米颗粒、分散体、悬浮液或乳剂以及用于重构成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。可以使用本领域的方法对组合物和制剂进行优化以增加稳定性和功效。参见，例如，Carra et al.,(2007)Vaccine 25:4149-4158。

可以通过任何合适的途径将组合物施用给受试者，包括口服、经皮、皮下、鼻内、吸入、肌内和血管内施用。将理解，优选的施用途径和药物制剂将随受试者的病症和年龄、待治疗病症的性质、期望的治疗效果以及所用的具体自噬诱导剂而变化。在一些实施方式中，将一种或多种自噬诱导剂局部施用给受试者上待治疗的部位。

如本文所用，“药学上可接受的媒介物”或“药学上可接受的载体”可互换使用，并且是指溶剂、分散介质、涂料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等，其与药物施用兼容并且遵守可适用的标准和法规，例如，美国药典和国家处方集(United StatesPharmacopeia and the National Formulary)(USP-NF)书中针对药物施用陈述的药典标准。因此，例如，对于至少用于静脉内施用的药学上可接受的载体，未消毒的水是被排除的。药学上可接受的媒介物包括本领域已知的那些。参见，例如，Remington:The Science andPractice of Pharmacy 20th ed(2000)Lippincott Williams&Wilkins,Baltimore,MD。

药物组合物可以剂量单位形式提供。如本文所用，“剂量单位形式”是指适合于作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单元包含预定量的一种或多种自噬诱导剂以及所需的药学上可接受的载体，所述一种或多种自噬诱导剂经计算产生期望的治疗效果。本发明的剂量单位形式的规范由给定的自噬诱导剂的独特特征和所要达到的预期治疗效果以及配混用于治疗个体的这样的活性化合物的领域中固有的限制所决定，并直接取决于其。

根据本发明的自噬诱导剂及其组合物的毒性和治疗功效可以使用细胞培养物和/或实验动物和本领域的药物程序来确定。例如，通过本领域中的方法可以确定致死剂量LC₅₀(剂量表示为浓度x暴露时间，其为对种群的50％致死)或LD₅₀(对种群的50％致死的剂量)和ED₅₀(对种群的50％治疗有效的剂量)。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且其可以表示为比率LD₅₀/ED₅₀。展现大治疗指数的自噬诱导剂是优选的。尽管可以使用产生毒性副作用的自噬诱导剂，但应小心设计将这样的化合物靶向治疗部位的递送系统，以对未感染细胞的潜在损伤最小化，并且从而减少副作用。

从细胞培养物试验和动物研究中获得的数据可用于配制用于人的剂量范围。优选的剂量提供了包括ED₅₀的具有很少毒性或没有毒性的一系列循环浓度。剂量可以取决于所采用的剂型和所利用的施用途径而变化。一种或多种自噬诱导剂的治疗有效量和剂量可以首先从细胞培养物试验中估算。可以在动物模型中配制剂量以达到循环血浆浓度范围，该范围包括如细胞培养物中确定的IC₅₀(即，达到症状最大抑制一半的测试化合物的浓度)。这样的信息可用于更准确地确定对人有用的剂量。血浆中的水平可以例如通过高效液相色谱法测量。此外，可以由主治医师或合格的医师基于各种临床因素确定适合给定受试者的剂量。

试剂盒

在一些实施方式中，本发明提供了试剂盒，其包括一种或多种自噬诱导剂，所述一种或多种自噬诱导剂任选地呈组合物或与一种或多种补充剂组合，用一种或多种试剂或药品递送装置包装在一起，用于预防、抑制、减少或治疗受试者的毛发脱落。在一些实施方式中，试剂盒包括一种或多种自噬诱导剂，任选地呈一种或多种单位剂型，包装在一起作为包装物和/或包装在药品递送装置中，例如预填充的注射器中。

在一些实施方式中，试剂盒包括可以被分隔以接受一个或多个容器(诸如小瓶、管等)的载体、包装物或容器。在一些实施方式中，试剂盒任选地包括识别描述或标签或与其用途有关的说明。在一些实施方式中，试剂盒包括由政府机关规定的信息，该信息调节如本文考虑的化合物和组合物的制造、用途或销售。

以下实施例旨在说明而非限制本发明。

实施例-方法

小鼠毛发再生的试验

在雄性和雌性小鼠两者中都测试了所有化合物。每个实验独立重复至少2次。同时进行了使用不同试剂的某些处理，共享对照组。C57BL/6J雄性小鼠在6周或8周龄时从杰克逊实验室(Jackson Laboratories)(巴尔港(Bar Harbor)，缅因州(ME))获得。C57BL/6J雌性小鼠在8周龄时从杰克逊实验室(巴尔港，缅因州)获得。在整个研究过程中，给小鼠喂食标准的食物饮食，并使其随意获得食物和水。在休止期将小鼠背部地剃毛，即，分别地，雄性在出生后的天数约为43-45(除非另有说明)，而雌性则是第58天。在实验期间(3-6周)，每隔一天(除非另有描述)将媒介物对照(25μL DMSO，除非另有说明)或测试化合物(在25μLDMSO中，除非另有说明)局部施加在剃毛的皮肤上。通过照片和视频监控并记录皮肤色素沉着和毛发生长的外观。还基于色素沉着水平和毛干密度分配进程，值为0至100，其中0指示没有毛发生长(以及没有色素沉着)，并且数越高对应皮肤越暗并且浓密毛发生长的区域越大。在图9中呈现了代表不同分数的图像。对各小鼠使用在约250μL Premium卵磷脂有机凝胶(PLO)基质(Transderma Pharmaceuticals Inc.)中的α-KG(Sigma，75890)、寡霉素(CellSignaling，9996L)、雷帕霉素(Selleckchem，S1039)、AICAR(Selleckchem，S1802)、二甲双胍(Sigma，PHR1084)、α-KB(Sigma，K401)、SMER28(Selleckchem，S8240)、autophinib(Selleckchem，S8596)、巴佛洛霉素A1(bafilomycin A1)(Selleckchem，S1413)或指定的组合。媒介物DMSO还与PLO基质混合用于局部施加。使用PLO基质+DMSO对比单独PLO基质，毛发周期的时机没有改变。

老年小鼠

对于口服α-KB处理，在87周龄获得了老年雄性和雌性C57BL/6J小鼠(NIA老年啮齿动物集落)。将小鼠置于UCLA的受控SPF设施(22±2℃，6:00-18:00，12h/12h亮/暗周期)中。在整个研究过程中，给小鼠喂食标准的食物饮食，并使其随意获得食物和水。当小鼠在101周龄时，开始用水(媒介物对照)或饮用水中的α-KB(90mg/kg体重)进行处理。对于局部α-KB处理，在21个月龄时获得了老年雄性C57BL/6J小鼠(NIA老年啮齿动物集落)，接下来的一周剃光，并且每隔一天用α-KB(32mM)局部处理一个月。所有实验均由UCLA校长动物研究委员会批准。

组织学和显微镜检查

在收集小鼠背部皮肤用于组织学和分子分析之前，将其剃毛。然后将全层皮肤组织固定在10％福尔马林溶液(Sigma，HT501128)中过夜，并且脱水以包埋在石蜡中。使5μm石蜡切片经受苏木精/伊红染色，并对Ki-67(Cell Signaling，12202)、IL-6(Abcam，ab6672)或F4/80(Bio-Rad，MCA497G)进行免疫组织化学。图像由Leica Aperio ScanScope AT明视场系统以X20放大倍率捕获。

蛋白质印迹法

从出生后的第43天开始，每隔一天将雄性小鼠剃毛并进行处理。5天后，收获休止期皮肤样品并进行阶段确认。通过在T-PER组织蛋白质提取缓冲液(Thermo Scientific，78510)中与蛋白酶抑制剂(Roche，11836153001)和磷酸酶抑制剂(Sigma，P5726)一起通过FastPrep-24(MP Biomedicals)均化制备小鼠皮肤组织裂解物。通过离心去除组织和细胞碎片，并将裂解物在含有5％β-巯基乙醇的1x SDS上样缓冲液中煮沸5min。然后使样品在NuPAGE Novex 12％Bis-Tris凝胶(Invitrogen，NP0343BOX)上经受SDS-PAGE，并用针对LC3(Novus，NB100-2220)、p62(Sigma，P0068)、Phospho-Beclin-1(Ser15)(对应于小鼠中的Ser14)(Cell Signaling，84966)、Phospho-Beclin-1(Ser93)(对应于小鼠中的Ser91)(Cell Signaling，14717)，Beclin-1(Abcam，ab207612)或GAPDH(Ambion，AM4300)的抗体进行蛋白质印迹法。

定量逆转录PCR(RT-qPCR)

在处理后的24小时，收获休止期皮肤样品，并使用TRIzol试剂(Invitrogen)从整个厚度的小鼠皮肤组织中分离总RNA。使用iScript Reverse Transcription Supermix(Bio-Rad)合成cDNA。使用iTaq Universal SYBR Green Supermix(Bio-Rad)和Bio-RadCFX Connect仪器进行定量RT-PCR。用于RT-qPCR的引物序列如下：

p62正向：

SEQ ID NO:1:GAAGAATGTGGGGGAGAGTGTGG

p62反向：

SEQ ID NO:2:TGCCTGTGCTGGAACTTTCTGG

B2m正向：

SEQ ID NO:3:CAGCATGGCTCGCTCGGTGAC

B2m反向：

SEQ ID NO:4:CGTAGCAGTTCAGTATGTTCG

统计分析

所有处理重复至少两次。数据代表生物学平行测定。每个图均使用适当的统计测试。数据满足每个图描述的统计测试的假设。平均值±s.d.在所有图中都被绘出。

参考文献

在必要的程度上，以下参考文献通过援引并入本文：

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除非另外说明，否则本申请中使用的所有科学和技术术语具有本领域中通常使用的含义。

如本文所用，术语“受试者”、“患者”和“个体”可互换地用于是指人和非人类动物。术语“非人类动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人类灵长类、马、绵羊、狗、牛、猪、鸡和其他兽医受试者和测试动物。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，所述受试者是人。

如本文所用，术语“诊断”是指通知(即，口头或通过书写(例如，在纸或电子媒体上)来进行沟通)另一方(例如，患者)诊断的物理和主动步骤。类似地，“提供预后”是指通知(即，口头或通过书写(例如，在纸或电子媒体上)来进行沟通)另一方(例如，患者)预后的物理和主动步骤。

除非另有特别说明，否则单数的使用可以包括复数。如在说明书和所附权利要求中所用，除上下文另有明确规定，否则单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”可以包括复数指示物。

如本文所用，“和/或”意指“和”或者“或”。例如，“A和/或B”意指“A、B或者A和B两者”，而“A、B、C和/或D”意指“A、B、C、D或其组合”并且所述“A、B、C、D或其组合”意指A、B、C和D的任何子集，例如，单成员子集(例如，A或B或C或D)、两个成员子集(例如，A和B；A和C；等)、或三成员子集(例如，A、B和C；或者A、B和D；等)，或所有四成员(例如，A、B、C和D)。

如本文所用，短语“……中的一个或多个”，例如“A、B和/或C中的一个或多个”意指“A中的一个或多个”、“B中的一个或多个”、“C中的一个或多个”、“A中的一个或多个和B中的一个或多个”、“B中的一个或多个和C中的一个或多个”、“A中的一个或多个和C中的一个或多个”以及“A中的一个或多个、B中的一个或多个和C中的一个或多个”。

短语“包括A、基本上由A组成或者由A组成”被用作避免过多的页和翻译费的工具，并且意指在一些实施方式中讨论中的给定事物：包括A、基本上由A组成或者由A组成。例如，句子“在一些实施方式中，组合物包括A、基本上由A组成或者由A组成”应解释为好像写为以下三个单独的句子：“在一些实施方式中，组合物包括A。在一些实施方式中，组合物基本上由A组成。在一些实施方式中，组合物由A组成。”

类似地，叙述一系列替代词的句子将被解释为好像提供了一系列句子，使得每个给定的替代词都是本身以一个句子提供。例如，句子“在一些实施方式中，组合物包括A，B或C”应解释为好像写为以下三个单独的句子：“在一些实施方式中，组合物包括A。在一些实施方式中，组合物包括B。在一些实施方式中，组合物包括C。”作为另一个实例，句子“在一些实施方式中，组合物至少包括A、B或C”应解释为好像写为以下三个单独的句子：“在一些实施方式中，组合物至少包括A。在一些实施方式中，组合物至少包括B。在一些实施方式中，组合物至少包括C。”

在理解或完成本发明的公开内容所必需的程度上，本文所提及的所有出版物、专利和专利申请通过援引清楚地并入本文，其程度好像各自单独地如此并入的相同。

因此已经描述了本发明的示例性实施方式，本领域技术人员应注意，在公开内容内仅是示例性的，并且可以在本发明的范围内做出各种其他替代、改编和修改。因此，本发明不限于如本文所示的特定实施方式，而是仅由以下权利要求限制。

序列表

<110> 加州大学董事会（The Regents of the University of California）

<120> 通过激活自噬用于毛发生长的方法和组合物

<130> 034044.183WO1

<150> US 62/658,113

<151> 2018-04-16

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 用于RT-qPCR，p62正向的引物序列。

<400> 1

gaagaatgtg ggggagagtg tgg 23

<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 用于RT-qPCR，p62反向的引物序列。

<400> 2

tgcctgtgct ggaactttct gg 22

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 用于RT-qPCR，B2m正向的引物序列。

<400> 3

cagcatggct cgctcggtga c 21

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 用于RT-qPCR，B2m反向的引物序列。

<400> 4

cgtagcagtt cagtatgttc g 21

Claims

1.一种用于在受试者中改善或刺激毛发再生；治疗、抑制或减少毛发脱落；改善或刺激毛发生长；治疗、抑制或减少色素沉着损失；和/或改善或刺激色素沉着产生的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种自噬诱导剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂是ATP合酶抑制剂、TOR抑制剂、AMPK激活剂和/或不依赖TOR的自噬增强剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂是大环内酯，诸如寡霉素。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂是雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂是双胍，诸如二甲双胍。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂是5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂是SMER28。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂选自由以下组成的组：大环内酯诸如寡霉素、雷帕霉素或雷帕霉素衍生物，双胍诸如二甲双胍，5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)，SMER28以及其任何组合。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成用于口服、肠胃外或局部施用。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种自噬诱导剂被配制成凝胶、乳膏、软膏、糊剂或洗剂。