CN111996216A - 腺相关病毒介导的新型冠状病毒抗体诱导物及疫苗组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种基于腺相关病毒的新型冠状病毒的抗体诱导物，其能够在体内诱导产生针对新型冠状病毒的抗体，以及提供包含该抗体诱导物的病毒载体及疫苗组合物。

Description

腺相关病毒介导的新型冠状病毒抗体诱导物及疫苗组合物

技术领域

本发明涉及利用腺相关病毒等病毒载体制备的新型冠状病毒抗体诱导物，其可在哺乳动物体内表达新型冠状病毒的部分抗原序列，从而使生物体对新型冠状病毒产生抗体。

背景技术

生物体对于外源异物，如病毒、蛋白等会产生免疫反应，从而产生针对特定蛋白序列或部分序列的抗体，抗体进一步结合抗原物质沉降从而代谢消耗，保护机体免受该类物质对机体的伤害。利用这一原理，可以使用各种灭活病毒或是病毒的部分组成部分等制备疫苗。

目前主要疫苗的种类包括：灭活病毒疫苗、重组蛋白疫苗、RNA疫苗、腺病毒疫苗等。

新型冠状病毒(Coronavirus)SARS-CoV-2为在全球范围内迅速爆发的RNA病毒，隐匿性和传染性很强，除引起无症状感染以外，还可引起病毒性肺炎、严重呼吸综合征、肾衰竭，已造成大量死亡。目前对其的防控主要在于以隔离消毒等控制向未感染人群的传播，尚无成熟有效而安全的新型冠状病毒预防性疫苗。

目前处于研发中的新型冠状病毒疫苗存在其各自的弊端。

灭活病毒疫苗使用直接灭活的新型冠状病毒作为抗原对人体进行免疫，从而产生抗体，效果最为直接，有效性较高，但是在灭活疫苗的生产过程中的技术难度大，活病毒大规模制备要求高、难度大、安全性缺乏保障，存在有病毒未完全灭活以及环境泄露的风险。

重组蛋白疫苗需要辅助使用佐剂激活人体的免疫应答，而佐剂的选择对疫苗副作用的产生具有较大影响，同时由于蛋白质稳定性的问题，生物体无法长期持续性产生抗体。

而对于RNA疫苗而言，其机理为通过修饰抗原决定簇的编码mRNA使得其不具备较强的炎症激活能力，通过被细胞吸收，从而在宿主细胞内表达出抗原决定簇，使得免疫系统识别该宿主细胞产生细胞免疫，从而杀灭病毒。但RNA疫苗载体本身具有一定的免疫原性，外源性核酸感染细胞时会导致炎症活化，从而使得大量RNA被降解。

而腺病毒疫苗的问题在于，由于人体对腺病毒的免疫反应强烈，会伴随大量副作用的产生，甚至死亡案例出现，通过参考上世纪90年代基因治疗导致杰西卡死亡的案例可知，存在着极大的风险。

重组型腺相关病毒(adeno-associated virus)是一类非整合性的单链线性DNA病毒，其存在DNA不整合以及无法复制的特性，在哺乳动物上使用十分安全。目前美国以及欧洲均已批准腺相关病毒的临床药物上市，有大量临床案例辅助证实了其安全性。但目前较少有基于重组型腺相关病毒制备的有效新型冠状病毒疫苗、及其作用机制的报道。

发明内容

本发明人通过将新型冠状病毒SARS-CoV-2的受体结合结构域(receptor bindingdomain,RBD)进行序列选择及改造后，采用基因工程手段载入病毒载体如腺相关病毒载体中，并使用其作为抗体诱导物感染哺乳动物，从而在哺乳动物的肌肉细胞中表达新型冠状病毒特征蛋白，诱导机体产生针对新型冠状病毒的抗体，激活免疫应答，从而实现了本发明。

本发明的抗体诱导物感染哺乳动物细胞后，在该生物体细胞中表达新型冠状病毒的受体结合结构域RBD的部分蛋白序列，并释放至该生物体内引起免疫应答反应，产生对新型冠状病毒的特异性抗体，保护机体免受新型冠状病毒的感染。

本发明的抗体诱导物具有以下特点：本发明的抗体诱导物包含的作为抗原的RBD序列(SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或编码SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列)，为新型冠状病毒的刺突蛋白三聚体立体结构(图9)中的一个完整的RBD和一个由β折叠组成的小结构域(图中所有区域)，两者互作紧密，不可分开。因此，本发明人推测，通过使用这样的序列，与只包含RBD区域的序列相比，编码形成的蛋白的整体将更加稳定，具有更好的抗原免疫性，从而更好地诱导新型冠状病毒的抗体产生。

并且，由于例如腺相关病毒表达的目标蛋白会激发生物体的免疫反应，故无需使用佐剂。同时，由于腺相关病毒自身的非整合性以及非复制性，造成环境泄露的风险低，安全性较好，其引起的相关副作用相较于腺病毒也较低，因此，腺相关病毒疫苗作为新型冠状病毒的疫苗具备优势。

下文中，有时使用“AAV”指代腺相关病毒(adeno-associated virus)。

本发明包括以下内容：

1、针对新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体诱导物，其包含DNA序列，及病毒载体，

其中，所述DNA序列为选自SEQ ID No.1、SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8所示的序列，或编码SEQ ID No.2、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.9所示的氨基酸序列的核苷酸序列，

优选为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或编码SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

2、根据项1所述的抗体诱导物，其包含蛋白跨膜释放信号肽序列，所述蛋白跨膜释放信号肽优选为SEQ ID No.10所示的序列。

3、根据项1、2所述的抗体诱导物，其中，所述病毒载体的病毒种类包括但不限于慢病毒、水泡炎病毒、腺相关病毒，优选为腺相关病毒。

4、根据项1～3中任一项所述的抗体诱导物，其中，所述腺相关病毒为重组腺相关病毒，优选选自AAV2/2、AAV2/5、AAV2/7、AAV2/8、AAV2/9亚型，更优选为AAV2/9亚型，进一步优选为具有SEQ ID No.3所示序列的腺相关病毒载体。

5、新型冠状病毒的疫苗组合物，其包含项1～4中任一项所述的抗体诱导物，及佐剂。

6、项1～4中任一项所述的抗体诱导物或项5的疫苗组合物在制备用于预防新型冠状病毒感染的药物中的用途。

7、项5所述的疫苗组合物的制备方法，包括：

抗体诱导物DNA序列的准备，病毒载体(优选AAV载体)的构建、病毒载体包装、纯化以及

体内注射诱导生物体产生抗体。

8、根据项7的制备方法，其中，所述AAV包装使用杆状病毒制备AAV的方式，优选使用293T细胞三质粒转染法。

9、根据项7或8的制备方法，其中，所述纯化使用选自氯化铯密度梯度离心、聚乙二醇纯化，碘克沙醇密度梯度离心的方式，优选碘克沙醇密度梯度离心。

10、根据项7～9中任一项的制备方法，其中，体内注射选自肌肉注射、静脉注射方式，优选为肌肉注射。

11、根据项7～10中任一项的制备方法，其中，接受体内注射的生物体选自人、非人灵长类、小鼠、大鼠。

本发明的一个实施方式涉及基于腺相关病毒的抗体诱导物。所述抗体诱导物使用新型冠状病毒的RBD结构域作为免疫抗原，包含SEQ ID No.1所示的序列或编码氨基酸序列SEQ ID No.2的DNA序列，并且，上述序列插入到具有SEQ ID No.3所示序列的AAV载体中。

在本发明的一些具体实施方式中，抗体诱导物使用了新型冠状病毒的突刺蛋白作为潜在的哺乳动物的抗原决定簇，包含突刺蛋白1的编码序列SEQ ID No.4和编码氨基酸序列SEQ ID No.5的DNA序列，或包含突刺蛋白2的编码序列SEQ ID No.6和编码氨基酸序列SEQ ID No.7的DNA序列，并且，上述序列插入到具有SEQ ID No.3所示序列的AAV载体中。

在本发明的一些具体实施例中，抗体诱导物使用了序列更长的包含RBD结构域的蛋白作为潜在的免疫抗原，包含SEQ ID No.8的序列或编码氨基酸序列SEQ ID No.9的DNA序列作为新型冠状病毒的抗原决定簇的模拟，并且，上述序列插入到具有SEQ ID No.3所示序列的AAV载体中。

为了在哺乳动物的肌肉细胞中更好地进行新型冠状病毒RBD蛋白的表达，本发明中使用的基因表达的启动子优选为CAG启动子。作为广谱表达的启动子，CAG启动子在哺乳动物肌肉细胞中具有很好的启动下游基因的表达功能。并且，根据后续免疫位置和免疫方法的不同(如静脉注射免疫和肌肉注射免疫)，任何其他的广谱性启动子(如EF1α)或者特异性的启动子的替换均属于本发明的发明内容。

在本发明的抗体诱导物中包含蛋白跨膜释放信号肽序列，以帮助在体细胞中完成合成的BRD蛋白或者突刺蛋白释放至细胞外，引起生物体的免疫应答反应。本发明中使用的蛋白跨膜释放信号肽序列优选为FVFLVLLPLVSSQC，其编码序列为SEQ ID No.10。其他的蛋白跨膜释放信号肽的替换也属于本发明的发明内容。

另一方面，作为本发明的一个实施方式，可在蛋白的氮末端加上HA标签，用于检测新型冠状病毒的RBD或者突刺蛋白的在体表达情况。当存在HA标签时，使得其位于蛋白跨膜释放信号肽序列之前。使用任何其他的标签或者不使用标签的选择以及标签序列的位置选择也属于本发明的发明内容。

在本发明的一些具体实施例方式中，由于AAV2/9血清型的病毒的表达时间为感染后7天至两个月以上，引起免疫反应的强度温和可控，感染细胞的类型广泛，能够很好的感染肌肉细胞，故优选使用血清型AAV2/9型的腺相关病毒。但本领域技术人员应该知道，由于后续免疫位置和免疫方法的不同(如静脉注射免疫和肌肉注射免疫)，任何其他血清型的腺相关病毒的亚型，包括但不局限于AAV2/5，AAV2/8等均属于本发明的发明内容。

使用本发明的抗体诱导物引起生物体免疫的策略包括但不限于：1.直接在生物体内肌肉注射腺相关病毒。2.直接在生物体内静脉注射腺相关病毒。3.生物体内肌肉注射腺相关病毒同时使用佐剂激发生物体的免疫反应。4.在生物体内静脉注射腺相关病毒同时使用佐剂激发生物体的免疫反应。5.利用腺相关病毒在非生物体内进行感染后收集病毒表达的蛋白产物注射生物体产生免疫反应。

在本发明的一些具体实施方式中，本发明的抗体诱导物可以与佐剂一起使用。虽然实施例中选择了铝佐剂，但其他的一些佐剂的选择，如弗氏佐剂等的选择也属于本发明的发明内容。

在本发明中，所述的基因来自于微生物、植物、动物、细胞、哺乳动物或人。

在本发明中，所述的生物体包括但不仅限于小鼠，猕猴和人。

本发明的抗体诱导物及疫苗组合物的优点在于，能有效产生对于新型冠状病毒的抗体；使用腺相关病毒作为载体，引起生物体的免疫反应以及对生物体进行感染时，安全有效；引起的生物体的免疫反应温和，无明显的副作用。

附图说明

图1示出的是RBD蛋白的腺相关病毒质粒图谱。

图2示出的是突刺蛋白12的腺相关病毒质粒图谱。

图3示出的是突刺蛋白2的腺相关病毒质粒图谱。

图4示出的是长蛋白的腺相关病毒质粒图谱。

图5示出的是RBD蛋白的腺相关病毒的电子显微镜负染色结果图。

图6示出的是注射疫苗24天后小鼠血清中新型冠状病毒抗体的ELISA结果图。

图7为注射抗体诱导物后猕猴血清中新型冠状病毒抗体ELISA结果图。X轴为血清稀释倍数，Y轴为OD-450读数。

图8为注射抗体诱导物后猕猴血清中新型冠状病毒抗体的竞争性ELISA结果图，其中H-M表示新型冠状病毒治愈患者的血清。4-14为4号猴免疫14天，右侧为血清的稀释比例。

图9为本发明的抗体诱导物编码的多肽在新冠病毒刺突蛋白三聚体中的冷冻电镜的立体结构示意图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式及实验数据对本发明作进一步的说明。尽管为了清楚的目的，在下文中使用了专用术语，但这些术语并不意味着定义或限制本发明的范围。

本发明中，术语“AAV”指腺相关病毒(adeno-associated virus)，是一类结构简单的单链DNA缺陷型病毒。本发明中，术语“腺相关病毒”例如为本发明实施例中使用的血清型为AAVA2/9的腺相关病毒。

本发明中，术语“肌肉注射”在本发明的实施例中，具体指在小鼠的股直肌注射或在猕猴的肱二头肌注射。

本发明中，术语“ELISA”酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbentassay，简写ELISA)，是将可溶性的RBD抗原结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。检测值为450nm的吸光值OD450。

实施例

实施例1不同免疫抗原的抗体诱导物诱导的小鼠新型冠状病毒抗体产生

1.AAV病毒载体。

AAV病毒载体的制备：分别将委托金斯瑞公司合成的SEQ ID No.1、SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8所示的序列，使用BamH1与EcoRV双酶切而与SEQ ID No.3所示的AAV载体序列(AAV2/9血清型)进行连接，分别得到基于RBD蛋白的腺相关病毒、基于突刺蛋白1的腺相关病毒，基于RBD长蛋白(简写为L-RBD)的腺相关病毒。

各AAV病毒载体的包装使用293T细胞培养基纯化的方法进行。在10cm吸附的培养皿中用10mL含10％胎牛血清的DMEM培养基培养293T细胞(可从常规试剂公司购买)至70％的细胞密度时，使用5mL含4％胎牛血清的DMEM培养基培养6小时后，使用PEI(Polyethylenimine聚乙烯亚胺)的方法将各腺相关病毒质粒pHleper，AAV2/9,AAV-RBD共20μg转染293T细胞，10小时后更换为10mL含4％胎牛血清的DMEM培养基，继续培养72小时。

收取培养皿中的培养基，并加入10mL含4％胎牛血清的DMEM培养基，继续培养72小时后收取上清，使用蛋白浓缩柱4℃以3000g的离心速度离心初步纯化病毒。使用密度梯度离心(碘克沙醇，32000rpm 4小时)。并使用蛋白浓缩柱(Millipore,Amicon Ultra-15)纯化浓缩病毒，通过实时荧光定量PCR法检测病毒滴度，利用常温电镜负染色法检测病毒质量(图5)。

结果表明：从图5可知，包装的病毒颗粒完整，形态清晰。空壳率低，约为2％。获得的病毒毒性低，可以有效完成后续实验。

2.抗体诱导物的肌肉注射。

本实验中的小鼠使用了C57BL/6J小鼠(斯贝福生物技术有限公司)，小鼠为8周龄，雄鼠14只，雌鼠7只。实验分为7组进行，每组3只小鼠(雄鼠两只，雌鼠一只)，注射了上述“AAV病毒载体的制备”中制备的腺相关病毒。

其中，Ctrl组为PBS的对照组；S12组注射基于突刺蛋白12的腺相关病毒；S2组注射为基于突刺蛋白2的腺相关病毒，RBD组注射为基于RBD蛋白的腺相关病毒，L-RBD组注射为基于RBD长蛋白的腺相关病毒，RBD-Al组注射为RBD蛋白+铝佐剂，2X L-RBD组注射2倍的长蛋白的腺相关病毒。

具体施用及用量：

Ctrl组注射100μL PBS；S12组，S2组，RBD组，L-RBD组注射病毒量为1X 10¹¹vg(virus genome，实时荧光定量Q-PCR法测定，下同)，L-RBD组注射病毒量为2X 10¹¹vg，RBD-Al组注射病毒1X 10¹¹vg+0.2mg铝佐剂(Thermo，77161)。各组的注射体积为100μL，给药方式为分别注射于小鼠的左右股直肌各50μL。

3.免疫小鼠的血清的新型冠状病毒抗体的ELISA。

肌肉注射免疫24天后，在C57BL/6J小鼠尾静脉处收取30μL的血液，室温静置40分钟后，室温4000g的离心速度离心10分钟后收取上清，作为小鼠的试样血清。后续使用100μL200μg/mL RBD蛋白(SARS-CoV-2完整RBD蛋白，使用质粒(pCDNA3.1-RBD，该质粒中用于编码RBD序列的序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述序列由金斯瑞公司合成后，由本实验室自行连接获得，下同)转染HEK293F细胞表达后，同上进行蛋白纯化而获得，作为RBD抗原使用)结合到96孔板上，将试样血清按图6中的稀释比例进行稀释，与RBD蛋白结合，耦合HRP山羊抗鼠IgG的二抗(生工，D110087)结合血清中的RBD抗体，最后通过TMB底物显色的方法，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。检测值为450nm的吸光值OD450，检测结果见图6。

图6中，Ctrl组为注射PBS对照组；S12组注射为突刺蛋白12的腺相关病毒；S2组注射为突刺蛋白2的腺相关病毒，RBD组注射为RBD蛋白的腺相关病毒，L-RBD注射为长蛋白的腺相关病毒质粒，RBD-Al组注射为RBD蛋白加0.2mg铝佐剂，2X L-RBD组注射2倍的长蛋白的腺相关病毒。X轴为血清稀释倍数，Y轴为OD-450读数。

结果表明：根据C57BL/6J小鼠肌肉注射免疫反应实验可知，在第24天时，对于注射RBD蛋白的腺相关病毒组的小鼠其血清中新型冠状病毒抗体的浓度相对于对照组小鼠(PBS组)上升，注射RBD蛋白的腺相关病毒组的小鼠在血清稀释1000倍，2000倍，4000倍，8000倍和16000倍时，其血清中新型冠状病毒抗体的浓度相对于对照组小鼠(PBS组)显著性上升(图6)。同时，突刺蛋白12蛋白的腺相关病毒组也产生了少量新型冠状病毒抗体。并且，未观察到添加铝佐剂组与相应的仅腺相关病毒组的差异。

以上结果说明RBD蛋白的腺相关病毒疫苗能够有效地引起小鼠的免疫应答，产生了针对新型冠状病毒的抗体。

实施例2基于RBD的抗体诱导物诱导的猕猴的新型冠状病毒抗体产生

1.AAV病毒载体的包装。

对猕猴的免疫实验中使用了实施例1中制备的基于RBD蛋白的腺相关病毒，AAV病毒载体的包装过程如实施例1中所述。具体质粒图谱见图1。

2.抗体诱导物的肌肉注射。

实验中共使用了3只猕猴(中国科学院合肥物质科学研究院提供)，分别编号为4，5，6号。4号猕猴为雄性，6岁，体重5.6Kg。5号猕猴为雄性，6岁，体重5.8Kg。6号猕猴为雌性，4岁，体重3.6Kg。采取一只一笼饲养。在到采血的整个实验过程中，各组动物精神良好，摄食状况正常，体重无显著变化，体温正常，被毛具有光泽，未出现体温显著升高及精神萎靡等不良表现。

实验的抗体诱导物病毒的注射量为1×10¹²vg，注射疫苗体积为1mL，注射位置为右臂三角肌。注射病毒时猕猴处于浅度麻醉(舒泰50，法国维克有限公司，0.67ml/kg)的状态。

分别在免疫猕猴注射AAV疫苗前，以及免疫7天，14天，21天，均于浅度麻醉后从猕猴的下肢静脉处抽取3mL的血液于促凝管中。室温4000g的离心速度离心10分钟后收取上清，作为猕猴的血清。

3.免疫猕猴的血清中新型冠状病毒抗体的ELISA分析。

将猕猴的血清作为试样血清，按图7中的稀释比例进行稀释。使用100μL 200μg/mLRBD蛋白(同上)结合到96孔板上，通过各组血清和RBD蛋白结合，山羊抗猴IgG的二抗(Abcam，ab112764)结合血清中的RBD抗体，再使用耦合HRP的兔抗山羊IgG的三抗(生工，D110117)结合兔抗猴IgG的二抗，最后通过TMB底物显色的方法，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。检测值为450nm的吸光值OD450。检测结果见图7。

图7中，A为4号猕猴注射疫苗免疫后血清中新型冠状病毒抗体ELISA结果图；B为5号猕猴注射疫苗免疫后血清中新型冠状病毒抗体ELISA结果图；C为6号猕猴注射疫苗免疫后血清中新型冠状病毒抗体ELISA结果图。

结果表明：在接受RBD蛋白的腺相关病毒注射21天时，4号，5号，6号猕猴均有效地产生了针对新型冠状病毒的抗体，其中4号猕猴产生的抗体的滴度约为200，5号猕猴产生的抗体的滴度约为3200，而6号产生的抗体的滴度约为1000(见图7)。

4.免疫猕猴的血清中新型冠状病毒抗体的竞争性ELISA分析。

使用ELISA的方法检测血清中新型冠状病毒抗体与ACE2蛋白(使用质粒转染HEK293F细胞表达后蛋白纯化)的竞争性实验，ACE2的终浓度为15nM，治愈患者的血清为中国科学技术大学附属第一医院提供的15名康复患者的血清混合物。

竞争性实验实验步骤：

使用100μL 200μg/mL RBD蛋白(同上)结合到96孔板上，通过加入各组试样血清(按图8所示比例稀释)以及ACE2蛋白和RBD蛋白竞争性结合，再通过耦合HRP的二抗(生工，D110150)结合血清中的RBD抗体，最后通过TMB底物显色的方法，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。检测值为450nm的吸光值OD450。

实验结果见图8，其中，H-M表示新型冠状病毒治愈患者的血清。4-14编号指4号猴免疫14天，依次类推，右侧为血清的稀释比例。

结果表明：竞争性ELISA的结果显示，5号和6号猕猴产生的抗体具有明显的和人造新型冠状病毒抗体的竞争作用，5号和6号猕猴在免疫后21天产生抗体的竞争性显著的强于治愈患者的血清中抗体的竞争性(图8)。

以上结果说明，当根据本发明的RBD蛋白的腺相关病毒疫苗在哺乳动物尤其是灵长类动物中作为抗体诱导物注射时，能够有效引起猕猴的免疫应答，同时使其产生了针对新型冠状病毒的抗体，具有强大的中和活性。

参考新冠病毒刺突蛋白三聚体的冷冻电镜三维结构(图9)，发明人认为，这样优良的免疫原性可能与本发明的RBD蛋白的腺相关病毒中表达的免疫抗原蛋白的立体结构有关。

根据本发明的所述免疫抗原蛋白包括一个完整的RBD和一个由β折叠组成的小结构域，占图9中的全部结构，因此其整体具有体内的优良稳定性。可以预测，如果在图9中的全部结构中缺少一部分β折叠片段时，图中由β折叠组成的完整的小结构域将无法形成，导致其稳定性大大降低，降解加速，在体内的存在时间缩短，从而不能长期稳定地诱导生物体产生足够的免疫应答。

以上，基于本发明的实施方式进行了说明，但本发明不限定于此，本领域的技术人员应该明白，在本发明的主旨的范围内能够以进行变形和变更的方式实施，这样的变形和变更的方式，理应属于本发明的保护范围。

Claims (11)

1.针对新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体诱导物，其包含DNA序列，及病毒载体，

其中，所述DNA序列为选自SEQ ID No.1、SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8所示的序列，或编码SEQ ID No.2、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.9所示的氨基酸序列的核苷酸序列，

优选为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或编码SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的抗体诱导物，其包含蛋白跨膜释放信号肽序列，所述蛋白跨膜释放信号肽优选为SEQ ID No.10所示的序列。

3.根据权利要求1、2所述的抗体诱导物，其中，所述病毒载体的病毒种类包括但不限于慢病毒、水泡炎病毒、腺相关病毒，优选为腺相关病毒。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的抗体诱导物，其中，所述腺相关病毒为重组腺相关病毒，优选选自AAV2/2、AAV2/5、AAV2/7、AAV2/8、AAV2/9亚型，更优选为AAV2/9亚型，进一步优选为具有SEQ ID No.3所示序列的腺相关病毒载体。

5.新型冠状病毒的疫苗组合物，其包含权利要求1～4中任一项所述的抗体诱导物，及佐剂。

6.权利要求1～4中任一项所述的抗体诱导物或权利要求5的疫苗组合物在制备用于预防新型冠状病毒感染的药物中的用途。

7.权利要求5所述的疫苗组合物的制备方法，包括：

抗体诱导物DNA序列的准备，病毒载体(优选AAV载体)的构建、病毒载体包装、纯化以及

体内注射诱导生物体产生抗体。

8.根据权利要求7的制备方法，其中，所述AAV包装使用杆状病毒制备AAV的方式，优选使用293T细胞三质粒转染法。

9.根据权利要求7或8的制备方法，其中，所述纯化使用选自氯化铯密度梯度离心、聚乙二醇纯化，碘克沙醇密度梯度离心的方式，优选碘克沙醇密度梯度离心。

10.根据权利要求7～9中任一项的制备方法，其中，体内注射选自肌肉注射、静脉注射方式，优选为肌肉注射。

11.根据权利要求7～10中任一项的制备方法，其中，接受体内注射的生物体选自人、非人灵长类、小鼠、大鼠。

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