CN111995622B - 化合物及其用途 - Google Patents

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CN111995622B CN202010843311.XA CN202010843311A CN111995622B CN 111995622 B CN111995622 B CN 111995622B CN 202010843311 A CN202010843311 A CN 202010843311A CN 111995622 B CN111995622 B CN 111995622B
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Abstract

本发明公开了式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure DDA0002642202260000011
其中X1、X2、X3、R、R1、R2、R3和linker如本发明中的定义。本发明还提供了制备本发明化合物的方法及其在制备预防和/或治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的药物中的用途。

Description

化合物及其用途
技术领域
本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种化合物及其用途。
背景技术
目前已被FDA批准用于临床治疗艾滋病的27种抑制剂和9种组合抑制剂主要在HIV-1感染靶细胞周期中的各阶段发挥作用，包括CD4受体结合、辅助受体(CXCR4或CCR5)结合、膜融合、逆转录、DNA整合和蛋白质合成等阶段。虽然主要由逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂组成的高活性抗逆转录病毒疗法(HAART)降低了HIV-1感染者的发病率和死亡率，但耐药株的出现使得治疗失败的概率增加；此外，由于这些药物作用于病毒进入靶细胞后的阶段，并不能阻止病毒进入细胞，以及逆转录酶在复制过程中的高频突变，也使得越来越多的患者受到现有治疗方案的限制。因此，新一类的将病毒抵御于靶细胞之外的HIV-1抑制剂在缓解已有的耐药问题具有独特的优势。
I型艾滋病病毒(HIV-1)通过其包膜糖蛋白(Env)所介导的病毒膜-细胞膜的融合而进入靶细胞。Env是一个高度糖基化的、大小约160kD的糖蛋白(也被称作gp160)，其在成熟时被分为两个非共价结合的亚基，一个是表面亚基gp120，一个是跨膜亚基gp41。在HIV-1侵入细胞的过程中，gp120起到重要的始发和控制作用，其首先与靶细胞上的CD4受体结合，随后与趋化因子辅助受体CCR5或CXCR4结合，从而开启gp41介导的膜融合过程以及随后的一系列分子事件。在天然的Env中，三个gp120结合并稳定并处于融合前构象的gp41三聚体，形成一个稳定的复合物并定位在HIV-1的膜表面。跨膜亚基gp41的胞外域是Env介导的病毒膜与靶细胞膜融合的重要分子机器，包含了N端融合肽(Fusion peptide，FP)、N端七肽重复功能区(N-terminal heptad repeat，NHR)、环状区(Loop)、C端七肽重复功能区(C-terminal heptad repeat，CHR)和近膜区(Membrane-proximal external region，MPER)。NHR和CHR相互作用所形成的六螺旋束(Six-helix bundle，6HB)是gp41发挥功能的核心分子，它的核心结构在1997年被解析出，其中三个NHR形成同源三聚体的内核，三个CHR反向平行与之结合形成被称为6HB的coiled-coil结构。
能够阻遏HIV-1进入细胞的HIV-1抑制剂，其作用靶点既可以是病毒包膜蛋白，如gp120和gp41，也可以是靶细胞上与HIV-1进入有关的蛋白，如CD4或CCR5、CXCR4等受体分子。但是，以人体自身蛋白为靶点，可能会影响机体正常的生理功能；另外，以CCR5或CXCR4为药物靶点的辅助受体拮抗剂，只能对相应的R5或X4病毒起作用，不能抑制能使用两种辅助受体的R5X4病毒，导致治疗和/或预防的失败。
gp120与CD4的结合在病毒进入的首个步骤中起关键作用，可溶性CD4(sCD4)可以与CD4受体竞争配体，而被最早考虑发展成抗HIV-1药物。相比于锚定在膜上的CD4受体，sCD4缺乏跨膜结构域和胞质尾巴，保留了天然构象和与HIV-1结合的特性，其前两个胞外结构域(D1D2)能够模拟CD4受体与gp120结合。这些CD4模拟物表现出有效的抗HIV-1活性。此外，以gp41为靶点的T20(Enfuvirtide，Fuzeon)多肽由来源于gp41 CHR的36个氨基酸组成，于2003年被美国FDA批准用于临床治疗HIV-1感染，也是至今唯一被批准用于临床的HIV-1多肽类融合抑制剂，之后第二、三代融合抑制剂(T1249和T1144)被开发出来。然而蛋白类药物具有半衰期短、成本高、活性不稳定，及贮藏和运输不方便等缺点，因此，本领域的技术人员致力于开发一类能够阻遏HIV-1进入细胞的小分子类HIV-1抑制剂。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是针对现有艾滋病治疗药物的耐药性以及蛋白类药物半衰期短、成本高、活性不稳定，及贮藏和运输不方便。为实现上述目的，本发明提供了式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002642202250000021
其中，X1、X2和X3各自独立地选自卤素；
R、R1、R2和R3各自独立地选自H、C1～C6烷基和C1～C6杂烷基；
linker为空白，或者如式II、式III或式IV所示：
Figure BDA0002642202250000022
其中，R4、R5各自独立地选自空白和C1～C6烃基，m1选自1～10的整数，m2选自0～10的自然数；
R6、R7各自独立地选自空白和C1～C6烃基，n选自1～10的整数；
R8选自空白或C1～C6烃基，j选自1～10的整数。
进一步地，X1为Cl。
进一步地，X2为F。
进一步地，X3为Cl。
进一步地，R选自H或乙基。
进一步地，所述化合物如式V所示：
Figure BDA0002642202250000031
进一步地，式V所示化合物中R为H，linker选自如下结构：
Figure BDA0002642202250000032
进一步地，式V所示化合物中R为CH3CH2-，linker为
Figure BDA0002642202250000033
进一步地，式V所示化合物中R为H，linker为空白。
另一方面，本申请还提供了药物组合物，其包括本申请所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药物学上可接受的载体。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。
进一步地，所述人类免疫缺陷病毒(HIV)包括1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的化合物作为人类免疫缺陷病毒(HIV)抑制剂/失活剂的应用。
进一步地，所述人类免疫缺陷病毒(HIV)包括1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)。
进一步地，所述应用为体外应用。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
使如式III-1所示的反应物1与如式IV-1所示的反应物2反应：
Figure BDA0002642202250000041
其中，X1、X2和X3各自独立地选自卤素；
R、R1、R2和R3各自独立地选自H、C1～C6烷基和C1～C6杂烷基；
R8选自空白或C1～C6烃基，j选自1～10的整数。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
使如式N-1所示的反应物3与如式N-2所示的反应物4发生点击化学反应：
Figure BDA0002642202250000042
其中，X1、X2和X3各自独立地选自卤素；
R、R1、R2和R3各自独立地选自H、C1～C6烷基和C1～C6杂烷基。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
使如式II-1所示的反应物5与如式II-2所示的反应物6发生点击化学反应：
Figure BDA0002642202250000051
其中，X1、X2和X3各自独立地选自卤素；
R、R1、R2和R3各自独立地选自H、C1～C6烷基和C1～C6杂烷基；
R4、R5各自独立地选自空白和C1～C6烃基，m1选自1～10的整数，m2选自0～10的自然数。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
使如式III-1所示的反应物7与如式III-2所示的反应物8发生反应：
Figure BDA0002642202250000052
其中，X1、X2和X3各自独立地选自卤素；
R、R1、R2和R3各自独立地选自H、C1～C6烷基和C1～C6杂烷基；
R6、R7各自独立地选自空白和C1～C6烃基，n选自1～10的整数。
与现有技术相比，本发明具有如下效果：
(1)本发明提供的化合物为能够广谱失活HIV-1的小分子化合物，相对于蛋白类药物具有成本低、活性稳定，以及便于贮藏和运输的优点。并且其能主动进攻HIV-1使其失去感染能力，阻碍HIV-1侵入靶细胞，从而更大程度地保护细胞正常的生理功能，降低HIV-1进入细胞后形成潜伏库的大小，延缓目前HAART治疗引起的耐药性。
(2)本发明提供的化合物用于制备广谱失活HIV-1的药物，具有“可口服”的独特优势，为患者提供更方便的治疗方案。
(3)本发明提供的制备化合物的方法，制备周期短，成本低，所得化合物性质稳定。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅是为了阐释本申请的化合物、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
具体实施方式
除非另外定义，本发明中使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
在本申请中，如本领域技术人员可知的，“烷基”、“杂烷基”等之类的术语可以在名称前加一个标识表示在特定情况下基团中存在的原子数，例如，C1～C6”是指基团的主链中具有1至6的范围内的任意整数值的碳原子，例如1、2、3、4、5、6个碳原子，“C”后所跟下标数字表示在基团中存在的碳原子数。
在本申请中，术语“烷基”是指具有直链或支链的饱和脂肪族烃基；其非限制性实例包括甲基、乙基、丙基、正丁基、叔丁基、戊基等。
在本申请中，术语“杂烷基”是指包含至少一个选自N、O、Si、P和S的杂原子的烷基。
在本申请中，术语“烃基”是指只含碳、氢两种原子的基团，一般指相应的烃失去一个氢原子(H)后剩下的自由基。
在本申请中，术语“盐”是指可以方便的或合乎需要的制备、纯化和/或处理本发明中化合物的对应盐，例如，药学上可接受的盐。除非另有说明，本发明中对特定化合物的提及也包括其盐形式。
在本申请中，术语“载体”是指活性成分之外的其他任何物质。例如药学上可接受的涉及携带或转运化学试剂的物质、组合物或媒介物。例如缓冲液、表面活性剂、稳定剂、防腐剂、用于增强生物利用度的吸收促进剂、液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂、包囊材料和/或其他常规的增溶剂或分散剂等。各载体在与该制剂的其它成分在可相容的意义上是“可接受的”并且不会对患者产生损害。
在本申请中，术语“抑制”是指化合物与病毒同时与受试者接触的情况下病毒的复制能力降低。例如在本申请实施例3中，将化合物1a、1b、1c、1d、1e、2a、2b、2c、2d、3分别与HIV-1IIIB一起病毒处理细胞，之后收集细胞上清液，通过ELISA检测病毒p24抗原表明病毒的复制能力降低(未检测到p24抗原或p24减少)。所述化合物可称为“抑制剂”。
在本申请中，术语“失活”是指化合物处理病毒一段时间后，之后在没有化合物存在的情况下病毒侵入细胞的能力降低。例如在本申请实施例4中，利用化合物1a、1c、1e、2b、2c或3处理病毒之后将病毒溶液中的游离化合物去除，仅用处理后的HIV-1IIIB病毒感染细胞，之后收集细胞上清液，通过ELISA检测病毒p24抗原表明化合物处理病毒后病毒入侵细胞的能力降低(未检测到p24抗原或p24减少)。用于处理病毒的所述化合物可称为“失活剂”。
在本申请中，术语“室温”是指反应时未进行加热或冷却等温控处理，反应瓶或其他反应容器直接与实验室环境接触。一般定义为25摄氏度(℃)，其温度范围为20℃至26℃。
实施例1化合物合成
示例性地，本实施例合成了如下式所示结构的化合物，其中linker所示结构、取代基R以及化合物编号列于表1中：
Figure BDA0002642202250000071
表1化合物编号及对应的取代基
Figure BDA0002642202250000072
(1)化合物1a～1e的合成
1)化合物18a-b的合成方法
Figure BDA0002642202250000081
试剂和条件：(i)Boc-Tyramine,K2CO3,DMF,80℃,12h；(c)AcCl,CH3OH,0℃-室温,24h；(ii)bis(carboxymethyl)trithiocarbonate,Et3N,DME,MW,90℃,15min。
1.化合物17a
向Boc-酪胺(3.5g,14.7mmol)的30mL DMF溶液中依次加入碳酸钾(2.4g,17.5mmol)，80％溴丙炔(16a 2.0mL,17mmol)，升温至80℃反应12h，停止加热，待反应冷却至室温后，用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后，闪柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到2.65g淡黄色油状物17a，收率66％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),4.68(d,J＝2.8Hz,2H),4.53(br s,1H),3.55(q,J＝2.4Hz,2H),2.74(t,J＝6.4Hz,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H)；
2.化合物17b
向Boc-酪胺(1.46g,6.15mmol)的20mL DMF溶液中依次加入碳酸钾(1.7g,12.3mmol)，16b(1.64g,9.23mmol)，升温至80℃反应12h，停止加热，待反应冷却至室温后，用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后，闪柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/2)得到0.8g白色油状物17b，收率41％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.11(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),4.51(br s,1H),4.28(d,J＝2.0Hz,2H),4.15-4.13(m,2H),3.91-3.89(m,2H),3.96(q,J＝6.0Hz,2H).
3.化合物18a-b的合成通法：
冰浴下，向17a-b(1当量)的5mL/mmol MeOH中加入AcCl(3当量)，再置于常温反应2-5h，将反应液直接浓缩后，加入小量乙醚，静置，过滤得到胺基中间体；向胺基中间体的1mL/mmol的异丙醇溶液中依次加入三乙胺(1.2当量)，双(羧甲基)三硫代碳酸盐(1当量)，微波加热至90℃反应45min，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，闪柱纯化[石油醚/乙酸乙酯＝0-40％]得到产物18a-b。
3.1化合物18a
由17a(2.65g,9.6mmol)得到胺基中间体1.83g，收率90％；取中间体(100mg,0.47mmol)经反应得到80mg淡黄色固体产物，收率58％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),4.68(d,J＝2.8Hz,2H),4.18-4.14(m,2H),3.94(s,2H),2.90-2.86(m,2H),2.53(t,J＝2.4Hz,1H)；2.89(t,J＝8.0Hz,2H).
3.2化合物18b
由17b(800mg,2.5mmol)得到胺基中间体610mg，收率95％；取中间体(500mg,2.0mmol)经反应得到370mg淡黄色固体产物，收率56％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.17(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,2H),4.28(d,J＝2.0Hz,2H),4.18-4.12(m,2H),3.93-3.89(m,2H),2.75(t,J＝7.2Hz,2H),2.47(t,J＝6.4Hz,1H).
2)化合物4a-c的合成方法
Figure BDA0002642202250000091
试剂和条件：(i)EtBr,K2CO3,DMF,室温,12h；(ii)15a-b,AcONH4,EtOH,回流(reflux),2h.
1.化合物4a
向1(100mg,0.4mmol),18a(116mg,0.4mmol)的10mL乙醇溶液中加入催化量(10％mol)的乙酸铵，升温回流反应2h，有大量红色固体产物析出，停止加热，待反应冷却后过滤，用乙醇洗，抽干后得到170mg红色固体产物，收率81％。其表征如下:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.8Hz,1H),7.66(s,1H),7.47(d,J＝3.6Hz,1H),7.39(d,J＝3.6Hz,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),4.76(s,2H),4.22(t,J＝8.0Hz,2H),3.56(s,1H),2.91(t,J＝8.0Hz,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ193.57,166.80,166.31,156.21,155.96,149.63,131.42,130.29,129.69,127.32,126.66,125.80,123.08,118.99,118.16,114.90,111.33,79.33,78.17,55.33,45.44,31.32；
2.化合物4b
向1(90mg,0.36mmol),18b(120mg,0.36mmol)的10mL乙醇溶液中加入催化量(10％mol)的乙酸铵，升温回流反应2h，有大量红色固体产物析出，停止加热，待反应冷却后过滤，用乙醇洗，抽干后得到140mg红色固体产物，收率68％。其表征如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J＝2.4Hz,1H),7.84(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(s,1H),7.43(d,J＝4.0Hz,1H),7.36(d,J＝4.0Hz,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,2H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H),4.21-4.16(m,4H),4.07-4.05(m,2H),3.76-3.74(m,2H),3.49-3.47(t,J＝3.0Hz,1H),2.90(t,J＝7.2Hz,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ193.59,166.47,166.32,157.15,155.98,149.71,131.72,131.69,129.74,127.65,126.12,123.03,119.11,118.15,114.48,111.49,80.22,77.41,66.72,66.70,57.61,44.50,31.30；ESI-HRMS(m/z)568.0652[M+H]+,585.0911[M+Na]+.
3.化合物4c(19的乙酯)
向1(700mg,2.8mmol)及碳酸钾(580mg,4.2mmol)的10mL DMF中加入溴乙烷(0.25mL,3.35mmol)，室温反应12h，用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后过滤，浓缩得到730mg棕色固体产物19，收率94％。
向19(150mg,0.54mmol)，18a(157mg,0.54mmol)的10mL乙醇溶液中加入催化量(10％mol)的乙酸铵，升温回流反应2h，有大量红色固体产物析出，停止加热，待反应冷却后过滤，用乙醇洗，抽干后得到240mg红色固体产物4c，收率81％。其表征如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(s,1H),7.41(d,J＝4.0Hz,1H),7.32(d,J＝4.0Hz,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,2H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),4.76(d,J＝2.4Hz,2H),4.40(q,J＝7.2Hz,2H),4.18(t,J＝7.6Hz,2H),3.56(t,J＝2.4Hz,1H),2.89(t,J＝7.6Hz,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ193.12,165.83,163.72,155.56,155.08,149.31,131.91,131.56,130.15,129.84,129.24,127.93,127.09,125.99,122.44,118.90,117.58,114.48,111.18,78.90,77.74,61.24,54.92,44.98,30.90,13.78.
3)化合物5a-b的合成方法
Figure BDA0002642202250000101
试剂及条件:(i)Et3N,CH3CN,室温(r.t.),2d.
1.化合物5a
向14(200mg,0.81mmol)和三乙胺(0.14mL，1.0mmol)15mL乙腈溶液中加入4a(123mg，1.0mmol)，室温反应2天，将反应液浓缩，闪柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)后得到220mg白色固体产物，收率94％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.26(br s,1H),7.75(br s,1H),7.74(dd,J＝10.8,2.8Hz,2H),7.39(t,J＝8.4Hz,1H),7.31-7.21(m,1H),3.58-3.55(m,4H).
2.化合物5b
向14(100mg,0.41mmol)和三乙胺(0.14mL，0.61mmol)15mL乙腈溶液中加入4b(102mg，0.61mmol)，室温反应2天，将反应液浓缩，闪柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)后得到120 mg白色固体产物，收率92％。其表征如下：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.30(br s,1H),7.84(br s,1H),7.75(dd,J＝10.8,2.8 Hz,1H),7.40(t,J＝8.8 Hz,1H),7.30-7.24(m,1H),3.71-3.58(m,6H),3.42(t,J＝4.8 Hz,2H).
如下所示，向反应底物4a～c(1当量)和5a～b(1.1-1.2当量)的10 mL的DMSO溶液中，加入CuSO4(0.2当量)的2 mL的叔丁醇/水(v/v 1/1)溶液，再加入抗坏血酸钠(0.6当量)，室温反应12 h，将反应液缓慢倒入100 mL冷水中，有固体产物析出，静置过滤后，将固体产物加入到10 mL无水乙醇中，加热回流2 h后，停止加热，待冷却至室温后过滤，烘干得到目标产物。
Figure BDA0002642202250000111
(2)化合物2a～2d的合成
1)化合物7a-d的合成
1.化合物7a-c的合成方法
Figure BDA0002642202250000121
试剂及条件:(i)Boc-Tyramine,TBAI,Cs2CO3,DMF,60-70℃,24h；(ii(1)MsCl,TEA,DCM,0℃-室温,1h；(2)NaN3,DMF,70℃,12h；(iii)(1)10％Pd-C,CH3OH,室温,6h；(2)14,THF,回流(reflux),12h；(iv)(1)AcCl,MeOH/CH2Cl2,0℃-室温,1d；(2)bis(carboxymethyl)trithiocarbonate,i-PrOH,TEA,Microwave,100℃,30min。
2.化合物7d的合成方法
Figure BDA0002642202250000122
试剂及条件:(i)corresponding oxoacetic acid,HBTU,DIPEA,DMF,室温,12h；(ii)(1)AcCl,MeOH/CH2Cl2,0℃-室温,1d；(2)bis(carboxymethyl)trithiocarbonate,i-PrOH,TEA,Microwave,100℃,30min.
3.化合物21a-c合成通法：
向Boc-酪胺(1当量)，加入三正丁基胺基碘(0.1当量)，碳酸铯(2当量)的5mL/mmolDMF溶液中加入相应的卤代烷烃20a-c(1.5当量)，升温至70℃反应24h，停止加热，待反应冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，闪柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到产物21a-c。
3.1化合物21a
由Boc酪胺(1.5g,6.32mmol)和溴乙醇(0.67mL,9.48mmol)得到960mg白色腊状固体，收率54％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(d,J＝8.4Hz,2H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H),4.54(br s,1H),4.08(t,J＝4.8Hz,2H),3.97(t,J＝4.8Hz,2H),3.38-3.30(m,2H),2.75(t,J＝7.2Hz,2H),1.43(s,9H).
3.2化合物21b
由Boc酪胺(1.5g,6.32mmol)和2-(2-氯乙氧基)乙醇(1mL,9.48mmol)得到1.4g白色片状固体，收率68％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.11(d,J＝8.4Hz,2H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H),4.56(br s,1H),4.14-4.11(m,2H),3.88-3.85(m,2H),3.77-3.75(m,2H),3.70-3.66(m,2H),3.34-3.32(m,2H),2.74(t,J＝7.2Hz,2H),1.43(s,9H).
3.3化合物21c
由Boc酪胺(1.4g,5.9mmol)和2-氯乙氧基-2-乙氧基二乙醇(1.3mL,8.85mmol)得到1.58g白色固体，收率72％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.10(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,2H),4.15-4.11(m,2H),3.87(t,J＝8.8Hz,2H),3.78-3.61(m,10H),3.35-3.32(m,2H),2.74(t,J＝6.4Hz,2H),1.44(s,9H).
4.化合物22a-c操作通法：
冰浴下，向21a-c(1当量)的10mL/mmol无水二氯甲烷中加入三乙胺(2当量)，再加入甲磺酰氯(1.2当量)，室温反应1h，用少许甲醇猝灭反应，用二氯甲烷萃取，5％碳酸氢钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥后过滤，浓缩；将剩余物溶于10mL/mmol的DMF中，向其中加入NaN3(3当量)，升温至70℃反应2h，用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，闪柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到产物22a-c。
4.1化合物22a
由21a(900mg,3.2mmol)得到780mg黄白色固体产物，收率80％。其表征如下：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(d,J＝8.4Hz,2H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),4.52(br s,1H),4.14(t,J＝4.8Hz,2H),3.59(t,J＝4.8Hz,2H),3.34-3.32(m,2H),2.74(t,J＝6.8Hz,2H).
4.2化合物22b
由21b(1.4g,3.8mmol)得到1.2g黄白色固体产物，收率90％。其表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,2H),4.51(brs,1H),4.13(t,J＝4.8Hz,2H),3.86(t,J＝4.8Hz,2H),3.75(t,J＝4.8Hz,2H),3.42-3.32(m,4H),2.73(t,J＝6.8Hz,2H)；1.42(s,9H).
4.3化合物22c
由21c(450mg,1.22mmol)得到360mg无色油状物，收率75％。其表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.11(d,J＝8.4Hz,2H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),4.52(brs,1H),4.14-4.09(m,2H),3.88-3.67(m,8H),3.40-3.33(m,4H),2.74(t,J＝7.2Hz,2H),1.43(s,9H).
5.化合物23a-c操作通法：
向22a-c(1当量)的15mL/mmol的甲醇溶液中加入10％Pd/C(0.1当量)，通入氢气，室温反应6h，将反应液过滤后，浓缩，将剩余物溶于10mL/mmol的THF中，再加入14(1当量)，升温回流反应12h，将反应液浓缩，闪柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到产物23a-c。
5.1化合物23a
由22a(450mg,1.47mmol)得到433mg白色固体产物，收率61％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.34(br s,1H),7.94(br s,1H),7.74(dd,J＝10.8,2.4Hz,1H),7.40(t,＝7.6Hz,1H),7.27-7.24(m,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,2H),4.35(brs,1H),4.11(t,J＝5.2Hz,2H),3.80-3.76(m,2H),3.35-3.39(m,2H),2.75(t,J＝6.8Hz,2H),1.43(s,9H).
5.2化合物23b
由22b(1g,2.85mmol)得到900mg白色固体产物，收率60％。其表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.37(br s,1H),7.89(br s,1H),7.74(dd,J＝10.6,2,4Hz,1H),7.39(t,J＝8.0Hz,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H),4.53(br s,1H),4.13(t,J＝4.4Hz,2H),3.86(t,J＝4.4Hz,2H),3.72(t,J＝4.8Hz,2H),3.62-3.68(m,2H),3.34-3.32(m,2H),2.74(t,J＝6.8Hz,2H),1.43(s,9H).
5.3化合物23c
由22c(350mg,0.89mmol)得到340mg白色固体产物，收率67％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.32(br s,1H),7.92(br s,1H),7.75(d,J＝10.8Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.26-7.22(m,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,2H),4.55(br s,1H),4.15-4.11(m,2H),4.89(t,J＝5.2Hz,2H),3.75-3.55(m,8H),3.34-3.30(m,2H),2.73(t,J＝6.4Hz,2H),1.43(s,9H).
4)化合物7a-c的合成方法同18a-b
1.化合物7a
由23a(400mg,0.83mmol)得到125mg淡黄色固体产物，收率30％。其表征如下：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.29br s,1H),7.91(br s,1H),7.74(d,J＝10.8Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.26-7.17(m,3H),6.85(d,J＝8.4Hz,2H),4.18-4.08(m,4H),3.95(s,2H),3.81-3.78(m,2H),2.90(t,J＝8.0Hz,2H).
2.化合物7b
由23b(0.9g,1.72mmol)得到370mg淡黄色固体产物，收率40％。其表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.02(t,J＝6.0Hz,1H),7.95(dd,J＝12.0,2.4Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),7.60(t,J＝8.8Hz,1H),7.11(d,J＝8.8Hz,2H),6.88(d,J＝8.8Hz,2H),4.23(s,2H),4.06-3.96(m,4H),3.75(t,J＝4.4Hz,2H),3.61(t,J＝5.6Hz,2H),3.42(q,J＝5.6Hz,2H),2.77(t,J＝8.0Hz,2H).
3.化合物7c
由23c(220mg,0.39mmol)得到170mg淡黄色固体产物，收率75％。其表征如下：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.36(br s,1H),7.97(br s,1H),7.74(dd,J＝10.8,2.4Hz,1H),7.39(t,J＝7.6Hz,1H),7.26-7.15(m,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝8.4Hz,2H),4.18-4.08(m,4H),3.93(s,2H),3.88(t,J＝4.8Hz,2H),3.75-3.55(m,8H),2.88(t,J＝8.0Hz,2H)；ESI-MS(m/z)622.05[M+NH4]+.
4.化合物绕丹宁衍生物7d的合成
4.1化合物26
室温下，向25(552mg,2.52mmol)的20mL无水DMF悬浮液中依次加入DIPEA(1.32mL,7.56mmol)及HATU(1.92g,5.04mmol)，搅拌反应直至全部溶解，再加入24(600mg,2.52mmol)，室温反应12h，将反应液缓慢倒入200mL冰水中，有白色固体析出，静置后过滤，用水洗，晾干后闪柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到540mg白色固体产物26，收率49％。其表征如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21(s,1H),10.86(s,1H),8.00(dd,J＝12.0,2.4Hz,1H),7.79-7.75(m,3H),7.64(t,J＝8.8Hz,1H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.91(s,1H),3.13-3.10(m,2H),2.69(t,J＝7.6Hz,2H),1.37(s,9H)；ESI-MS(m/z)474.10[M+K]+.
4.2化合物7d合成方法同18a-b
由26(500mg,1.15mmol)得到70mg橙黄色固体产物，收率13％。其表征如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H),10.89(s,1H),8.00(dd,J＝12.0,2.4Hz,1H),7.81-7.76(m,3H),7.64(t,J＝8.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,2H),4.25(s,2H),4.07(t,J＝8.0Hz,2H),2.85(t,J＝7.6Hz,2H)；ESI-MS(m/z)474.10[M+Na]+.
5)化合物2a-d的合成
如下所示，向1(1.1当量)及7a～d(1当量)的10mL乙醇溶液中加入催化量(10％mol)的乙酸铵，升温回流反应2～5h，有大量固体产物析出，停止加热，待反应冷却后过滤，用乙醇洗，烘干后得到产物。
Figure BDA0002642202250000161
试剂及条件:(i)TrCl,Py,CH3CN,室温,2h；(ii)2-chloroacetyl chloride,Et3N,CH2Cl2,0℃-室温,2h；(iii)tert-butyl 4-hydroxyphenethylcarbamate,K2CO3,DMF,80℃,5h；(iv)50％AcOH,室温,0.5h；(v)Et3N,Toluene,MW,150℃,3h；(vi)(1)AcCl-MeOH,室温,1h；(2)bis(carboxymethyl)trithiocarbonate,Et3N,i-PrOH,MW,80℃,45min.
1.化合物10
2,2,6,6-四甲基-N-三烷基哌啶-4-胺(2,2,6,6-tetramethyl-N-tritylpiperidin-4-amine)
将9(3.36mL,19.2mmol)溶于CH3CN(30mL)，然后依次加入吡啶(5.1mL,63.36mmol)、TrCl(5.9g,21.12mmol)，常温反应2h，TLC检测反应完全(DCM/MeOH＝20/1)，有大量白色固体析出，过滤、烘干得7.86g白色粉末状固体产物10，收率93％。其表征如下：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.08(s,1H),7.76(s,1H),7.51-7.18(m,15H),2.70(m,1H),1.27-1.19(m,8H),1.03-0.98(m,8H).
2.化合物11
2-氯-1-(2,2,6,6-四甲基-4-(三氨基)哌啶-1-基)乙酮(2-chloro-1-(2,2,6,6-tetramethyl-
4-(tritylamino)piperidin-1-yl)ethanone)
将10(2.4g,6.02mmol)溶于DCM(20mL)中，向其中加入Et3N(2.52mL,18.06mmol)，冰浴下，向其中缓慢滴加氯乙酰氯(560μL,7.22mmol)，常温反应2h，TLC检测反应完全(DCM/MeOH＝20/1)，将反应液倒入冰水中猝灭反应，DCM萃取，无水Na2SO4干燥，柱层析分离得到1.38g的白色固体产物11，收率48％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55-7.26(m,15H),4.03(s,2H),2.95-2.91(m,1H),1.64-1.58(m,2H),1.45-1.36(m,8H),1.20(s,6H).
3.化合物12
叔丁基-4-(2-氧代-2-(2,2,6,6-四甲基-4-(三氨基)哌啶-1-基)乙氧基)苯乙基氨基甲酸酯(tert-butyl-4-(2-oxo-2-(2,2,6,6-tetramethyl-4-(tritylamino)piperidin-1-yl)ethoxy)
phenethylcarbamate)
将11(1.5g,3.2mmol)溶于DMF(15mL)中，依次向其中加入K2CO3(869mg,6.3mmol)、TBAI(155mg,0.21mmol)以及Boc-酪胺(898mg,3.78mmol)，80℃，5h，TLC检测反应完全(PE/EtOAc＝10/3)，直接用EtOAc萃取，无水Na2SO4干燥，柱层析分离得到1.65g的黄色油状产物12，收率76％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56-7.18(m,15H),7.07-6.79(m,4H),4.55(s,2H),3.32-3.30(m,2H),2.95(q,1H,J＝7.2Hz),2.75-2.68(m,2H),1.47-1.34(m,19H),1.22(s,6H).
4.化合物13
叔丁基-4-(2-(4-氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)苯乙基氨基甲酸酯(tert-butyl-4-(2-(4-amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-1-yl)-2-oxoethoxy)phenethylc arbamate)
向12(1g,1.48mmol)中加入50％CH3COOH水溶液(10mL)，常温反应，0.5h，TLC检测反应完全(DCM/MeOH＝10/1.5)，用饱和Na2CO3水溶液中和反应液至近中性，EtOAc萃取，无水Na2SO4干燥，柱层析分离得到480mg白色油状产物13，收率75％。其表征如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.09(d,2H,J＝8.8Hz),8.50(s,1H),7.88(d,2H,J＝8.8Hz),4.65(s,2H),3.42-3.34(m,1H),3.10-3.05(m,2H),2.62(t,2H,J＝8.0Hz),2.02(dd,2H,J＝14.0,6.4Hz),1.71(dd,2H,J＝14.0,9.0Hz),1.50(s,6H),1.40(s,6H),1.36(s,9H)；ESI-MS(m/z)434.30[M+H]+
5.化合物15
tert-butyl-4-(2-(4-(2-((4-chloro-3-fluorophenyl)amino)-2-oxoacetamido)-2,2,6,6-t etramethylpiperidin-1-yl)-2-oxoethoxy)phenethylcarbamate
将13(100mg,0.23mmol)溶于甲苯(5mL)中，分别加入14(50mg,0.20mmol)及Et3N(56μL,0.40mmol)，150℃微波反应3h,TLC检测反应完全(DCM/MeOH＝30/1)，EtOAc萃取，无水Na2SO4干燥，柱层析分离得110mg白固体产物15，收率87％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.31(s,1H),7.73～7.70(m,1H),7.54(d,1H,J＝8.0Hz),7.40～7.37(m,1H),6.87(d,2H,J＝8.4Hz),4.65(s,2H),4.38～4.34(m,1H),3.35(d,2H,J＝6.0Hz),2.75(t,2H,J＝7.2Hz),2.30(q,2H,J＝7.6Hz),1.87(q,2H,J＝7.2Hz),1.64(d,9H,J＝10.4Hz),1.56(s,5H),1.43(s,9H),1.28～1.24(m,2H)；ESI-MS(m/z)633[M+H]+.
6.化合物2
N1-(4-氯-3-氟苯基)-N2-(2,2,6,6-四甲基-1-(2-(4-(4-氧代-2-硫氧噻唑烷-3-基)乙基)苯氧基)乙酰基)哌啶-4-基)草酰胺(N1-(4-chloro-3-fluorophenyl)-N2-(2,2,6,6-
tetramethyl-1-(2-(4-(2-(4-oxo-2-thioxothiazolidin-3-yl)ethyl)phenoxy)acetyl)piper idin-4-yl)oxalamide)
将15(580mg,1.09mmol)、双(羧甲基)三硫代碳酸盐(258.55mg,1.14mmol)及Et3N(305μL,2.18mmol)加入到异丙醇(5mL)中，90℃微波反应45min,TLC检测反应完全(DCM/MeOH＝30/1)，EtOAc萃取，无水Na2SO4干燥，柱层析分离得220mg白色固体产物2，收率31％。其表征如下：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),7.51(d,1H,J＝9.0Hz),7.43(dd,1H,J＝10.6,2.5Hz),7.24(t,1H,J＝7.8Hz),7.04-6.94(m,3H),6.76(d,2H,J＝8.8Hz),5.13(d,1H,J＝9.0Hz),4.83-4.81(m,1H),4.28(dd,2H,J＝27.4,14.6Hz),4.09-4.02(m,2H),3.94(s,2H),2.79-2.72(m,2H),1.74-1.65(m,8H),1.47-1.41(m,8H)；ESI-HRMS(m/z)649.17[M+H]+.
7.化合物3
如下所示，将化合物1(42.36mg,0.17mmol)、2(100mg,0.15mmol))及CH3COONH4(1.19mg,0.015mmol)加入到EtOH(5mL)中，80℃微波反应2h，TLC检测反应完全(DCM/MeOH＝4/1)，静置2h，过滤，用乙醇洗，烘干得66.70mg红色固体产物3。
Figure BDA0002642202250000191
实施例2化合物结构表征
采用核磁共振和质谱对化合物的结构进行表征。
化合物1a：由S1a(50mg,95.4μmol)及S2a(30mg,105μmol)制备得到56mg橙色固体产物，收率72％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.71(br s,1H),11.02(s,1H),9.26(t,J＝6.0Hz,1H),8.22(s,1H),7.93(dd,J＝11.2,2.0Hz,2H),7.74-7.66(m,3H),7.59(t,J＝8.8Hz,1H),7.48(d,J＝4.0Hz,1H),7.40-7.37(m,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.96(d,J＝8.4Hz,2H),5.08(s,2H),4.57(t,J＝5.6Hz,2H),4.19(t,J＝7.6Hz,2H),3.70-3.66(m,2H,),2.87(t,J＝7.6Hz,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ193.54,166.27,159.67,158.45,157.94,156.77,155.51,149.70,137.18,138.08,130.49,129.81,129.65,124.75,122.92,119.15,118.09,117.32,117.29,114.69,114.44,111.48,108.60,108.34,61.04,48.17,45.40,31.24；ESI-MS(m/z)809[M-H]-。
化合物1b：由S1b(60mg,105μmol)及S2a(33mg,116μmol)得到60mg红色固体产物，收率67％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.78(s,1H),11.00(s,1H),9.24(t,J＝5.6Hz,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.94-7.91(m,2H),7.75-7.71(m,2H),7.65(s,1H),7.57(t,J＝8.8Hz,1H),7.47(s,1H),7.37(s,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,2H),6.82(d,J＝8.4Hz,2H),4.57-4.54(m,4H),4.20(t,J＝7.2Hz,2H),4.00(s,2H),3.72-3.65(m,4H),3.36(s,4H),2.90(t,J＝6.8Hz,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ193.55,166.28,159.64,158.45,157.94,157.09,155.51,149.70,138.17,138.07,130.49,129.63,129.52,124.26,122.92,118.09,117.30,117.27,114.44,114.40,108.58,108.32,67.92,66.84,63,52,48.14,45.44,31.25；ESI-MS(m/z)851[M-H]-。
化合物1c：由S1a(50mg,95.4μmol)及S2b(35mg,105μmol)得到48mg橙色固体产物，收率59％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.68(br s,1H),10.99(d,J＝6.4Hz,1H),8.93(s,1H),8.21-8.14(m,2H),7.92-7.63(m,5H),7.53-7.45(m,2H),7.36(s,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.89(d,J＝8.0Hz,2H),5.02(s,2H),4.53(s,2H),4.19(s,2H),3.80(s,2H),3.52(s,2H),3.32(s,2H),2.88(s,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ192.61,165.34,158.55,157.83,155.79,154.57,148.76,137.26,137.16,129.51,128.81,128.66,128.81,128.66,124.03,121.96,118.23,117.14,116.32,113.63,113.47,113.30,110.53,107.61,107.36,67.31,67.01,59.94,48.39,44.49,30.33；ESI-MS(m/z)851[M-H]-。
化合物1d：由S1b(60mg,106μmol)及S2b(42mg,127μmol)得到67mg橙色固体产物，收率70％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.80(br s,1H),10.98(s,1H),8.95(t,J＝6.4Hz,1H),8.16-7.88(m,3H),7.73-7.25(m,5H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.84(d,J＝8.0Hz,2H),4.53-4.50(m,4H),4.21-4.15(m,2H),4.06-4.10(m,2H),3.81-3.70(m,4H),3.53-3.50(m,2H),3.34(q,J＝5.6Hz,2H),2.89-2.86(m,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ193.55,166.28,159.51,158.78,157.95,155.52,149.66,138.23,138.13,130.49,129.64,129.49,124.41,122.96,119.06,122.96,119.06,118.12,117.30,117.27,114.42,114.24,111.38,108.58,108.23,77.28,68.31,68.00,67.67,66.82,63.50,57.55,49.25,45.44,31.25；ESI-MS(m/z)895[M-H]-。
化合物1e：由S1c(50mg,90.6μmol)及S2a(31mg,108μmol)得到46mg红色固体产物，收率61％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),9.25(t,J＝5.6Hz,1H),8.26(d,J＝2.0Hz,1H),8.22(s,1H),8.02(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.95(dd,J＝12.0,2.0Hz,1H),7.78-7.72(m,2H),7.66(s,1H),7.59(t,J＝8.8Hz,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.38(d,J＝3.6Hz,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.96(d,J＝8.4Hz,2H),5.08(s,2H),4.57-4.55(m,2H),4.42(q,J＝7.2Hz,2H),4.20(t,J＝7.6Hz,2H),3.68-3.66(m,2H),2.89(t,J＝7.2Hz,2H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ193.57,166.28,164.23,159.70,158.47,157.95,155.51,148.78,138.22,138.10,132.17,131.98,130.85,130.51,129.66,128.35,127.59,126.38,124.73,122.81,119.40,118.03,117.34,117.31,114.71,114.64,111.62,108.61,108.35,61.67,61.05,48.18,45.42,31.26,14.11；ESI-MS(m/z)835[M-H]-。
化合物2a：由H2b(50mg,0.1mmol)及H1(25mg,0.1mmol)得到黄色固体产物53mg，收率68％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.71(br s,1H),11.05(s,1H),9.19(t,J＝5.6Hz,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.96-7.90(m,2H),7.75-7.72(m,2H),7.63(s,1H),7.59(t,J＝8.8Hz,1H),7.47(d,J＝4.0Hz,1H),7.36(d,J＝4.0Hz,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),4.19(t,J＝7.2Hz,2H),4.08(t,J＝5.6Hz,2H),3.59-3.54(m,2H),2.90(t,J＝8.0Hz 2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ194.00,166.72,166.67,160.20,159.21,158.42,157.42,156.26,155.99,150.17,138.70,138.60,132.85,132.31,132.25,130.98,130.19,130.12,128.05,127.94,126.74,123.40,119.60,118.55,117.80,117.78,114.97,114.90,114.72,111.96,109.08,108.82,65.70,45.90,31.70；ESI-MS(m/z)726[M-H]-。
化合物2b：由7c(100mg,0.185mmol)及1(50mg,0.2mmol)得到黄色固体产物104mg，收率73％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.71(br s,1H),11.02(s,1H),9.01(t,J＝5.6Hz,1H),8.22(d,J＝2.0Hz,1H),7.96-7.92(m,2H),7.75-7.72(m,2H),7.64(s,1H),7.59(t,J＝8.8Hz,1H),7.47(d,J＝3.6Hz,1H),7.36(d,J＝3.6Hz,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,2H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),4.18(t,J＝8.0Hz,2H),4.05(t,J＝4.8Hz,2H),3.74(t,J＝4.0Hz,2H),3.61(t,J＝5.6Hz,2H),3.42(q,J＝12.0,6.0Hz,2H),2.88(t,J＝7.6Hz,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ194.10,166.83,166.80,160.11,159.40,158.53,157.72,156.38,156.11,150.28,138.83,138.73,133.02,132.40,132.36,131.08,130.22,130.16,130.08,128.16,128.06,126.84,123.51,119.73,118.65,117.90,117.87,115.05,114.98,114.81,112.10,109.17,108.92,60.22,68.85,67.52,46.01,31.81；ESI-MS(m/z)770[M-H]-。
化合物2c：由7d(100mg,0.17mmol)及1(47mg,0.19mmol)得到黄色固体产物88mg，收率63％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.17(br s,1H),11.03(s,1H),8.98(t,J＝6.0Hz,1H),7.96(dd,J＝12.0,2.4Hz,1H),7.86(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.74(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(s,1H),7.58(t,J＝8.8Hz,1H),7.43(d,J＝3.6Hz,1H),7.35(d,J＝3.6Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.85(d,J＝8.4Hz,2H),4.18(t,J＝7.2Hz,2H),4.03(t,J＝4.8Hz,2H),3.73(t,J＝4.8Hz,2H),3.57-3.52(m,6H),3.39(q,J＝12.0,6.0Hz,2H),2.88(t,J＝7.2Hz,2H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ194.10,167.31,166.84,160.06,159.41,158.53,157.71,156.76,156.11,150.17,138.83,138.73,131.97,131.95,131.07,130.02,130.06,127.86,127.14,126.32,123.58,119.52,118.70,117.89,117.86,114.99,114.81,111.85,109.16,108.90,70.36,70.07,69.49,68.74,67.53,46.01,31.83；ESI-MS(m/z)814[M-H]-。
化合物2d：由H2a(50mg,0.11mmol)及H1(28mg,0.11mmol)得到黄色固体产物40mg，收率53％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.64(br s,1H),11.19(s,1H),10.87(s,1H),8.19(s,1H),7.99-7.92(m,2H),7.78-7.61(m,6H),7.48-7.38(m,2H),7.24(d,J＝6.4Hz,2H),4.24-4.23(m,2H),3.00-2.90(m,2H)；ESI-MS(m/z)682[M-H]-。
化合物3：由G1(100mg,0.15mmol)及G2(42.36mg,0.17mmol)制66.70mg红色固体产物3，收率49％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.95(s,1H),9.02(d,J＝9.0Hz,0.70H),8.80(d,J＝9.5Hz,0.32H),8.12(s,0.78H),7.88-7.81(m,2H),7.70-7.63(m,3H),7.53(t,J＝8.7Hz,1H),7.45(d,J＝3.6Hz,1H),7.38(d,J＝3.6Hz,1H),7.25-7.23(m,1.1H),7.08-7.02(m,2.3H),6.84-6.79(m,2.4H),5.20(d,J＝9.2Hz,0.8H),4.74-4.65(m,1.5H),4.35-4.29(m,2.2H),4.17-4.11(m,2.3H),2.86-2.80(m,2H),2.33-2.24(m,0.42H),2.17-2.10(m,1.5H),1.90-1.80(m,1.1H),1.68-1.61(m,6H),1.30-1.28(m,7H)；ESI-MS(m/z)881.1624[M+H]+。
实施例3各化合物对实验室适应株HIV-1IIIB的抑制作用
按照文献(Xu,W.；Pu,J.；Su,S.；Hua,C.；Su,X.；Wang,Q.；Jiang,S.；Lu,L.,Revisiting the mechanism of enfuvirtide and designing an analog with improvedfusion inhibitory activity by targeting triple sites in gp41.Aids 2019,33,1545-1555)中记载的方法检测实施例1中制备得到的化合物对实验室适应株HIV-1IIIB复制的抑制作用。
本申请实施例中，HIV-1IIIB毒株由美国NIH艾滋病试剂和参照物项目提供，目录号398。
HIV-1IIIB(X4)在MT-2细胞(由美国NIH艾滋病试剂和参照物项目提供，目录号237)上扩增并进行滴度测定，分装保存于-80℃。为测定化合物的抗病毒活性，将各化合物分别溶于DMSO中，化合物1a、1b、1c、1d、1e、2a、2b、2c、2d、3的起始浓度均为50μM。用无血清1640培养基(购自gibco，货号：22400089)于96孔板中对各化合物进行3倍的梯度稀释，终体积为50μL，每个化合物设置10个浓度。将病毒用无血清1640培养基稀释后加入上述96孔板中，每孔50μL，相当于100TCID50的病毒量，并将化合物-病毒混合液置于37℃培养箱中孵育30min。用含有10％FBS(购自atlanta biologicals，货号：S11550)的1640培养基将MT-2细胞(作为IIIB感染的靶细胞)稀释后加入上述96孔板中，3×104/孔，100μL/孔。同时设置阳性药物对照(AMD3100为抑制IIIB感染的阳性对照)、细胞对照(只含有细胞，不含有药物和病毒)和病毒对照(不含有药物，只含有细胞和病毒)。将各组置于37℃、5％CO2的培养箱中过夜培养后，弃去150μL的上清液，并加入150μL的新鲜完全培养基。4天后，观察细胞病变，收集上清液50μL/孔，并加入5％的Triton-100，50μL/孔，对上清中的病毒进行裂解。用双抗夹心ELISA检测上清中的p24抗原，判断化合物对HIV-1的抑制活性。具体如下：用Anti-HIVImmune Globulin(HIVIG)(由美国NIH艾滋病试剂和参照物项目提供，目录号3957)(5μg/ml，50μL/孔)四度过夜包被96孔ELISA板，PBST(0.05％吐温20)洗板3次，用2％的脱脂奶粉(100μL/孔)37℃封闭2h，PBST(0.05％吐温20)洗板3次，加入1:10稀释的病毒裂解液(50μL/孔)于37℃孵育1h，PBST(0.05％吐温20)洗板3次，加入1.5μg/mL，50μL/孔的183抗体(由美国NIH艾滋病试剂和参照物项目提供抗HIV-1p24杂交瘤细胞，目录号1513，利用protein G层析纯化该细胞培养的上清液得到183抗体)。于37℃孵育1h，PBST(0.05％吐温20)洗板3次，加入HRP标记的抗鼠二抗(50μL/孔)(购自life technologies，货号：QB213078)于37℃孵育1h，PBST(0.05％吐温20)洗板3次，加入TMB底物显色，加入硫酸终止。酶标仪(型号：Infinite M200 Pro)测定OD450nm，GraphPad软件计算IC50，结果列于表2中。
表2化合物IC50计算结果
Figure BDA0002642202250000231
Figure BDA0002642202250000241
结果表明，化合物1a、1b、1c、1d、2a、2b、2c、2d、3均能够有效地抑制HIV-1IIIB病毒的复制。
实施例4化合物对HIV-1IIIB病毒颗粒的失活作用
按照文献(Qi,Q.；Wang,Q.；Chen,W.；Du,L.；Dimitrov,D.S.；Lu,L.；Jiang,S.,HIV-1gp41-targeting fusion inhibitory peptides enhance the gp120-targetingprotein-mediated inactivation of HIV-1virions.Emerg Microbes Infect 2017,6,e59.)记载的方法，以实施例1中制备得到的化合物1a、1c、1e、2b、2c和3作为示例，进行失活实验。具体如下：
将各化合物分别溶于DMSO中。化合物1a、1c、1e、2b、2c和3的起始浓度均为10μM，用无血清1640培养基进行4倍的梯度稀释，每个化合物设置7个浓度，50μL/孔。将病毒用无血清培养基进行稀释后加入不同浓度梯度的药物中，50μL/孔，加入的病毒量相当于800TCID50。将上述药物与病毒混合物置于4℃孵育1h。加入15％PEG-6000，25μL/孔，PEG-6000的终浓度为3％，置于4℃孵育1h。将上述混合物于4℃、13000r/min离心30min，弃去上清中的化合物。用含有10mg/mL BSA的3％PEG-6000重悬病毒，于4℃、13000r/min离心30min，弃去上清中残留的化合物。重复上一步骤一次。用无血清培养基100μL/孔重悬病毒，并加入用完全培养基稀释的对应靶细胞(MT-2细胞)3×104/孔。实验同时设置药物对照(AMD3100作为失活X4毒株IIIB的对照药物、Maraviroc作为失活R5毒株Bal的对照药物)、细胞对照(仅含有细胞，不加病毒和药物)以及病毒对照(不含有药物，加入病毒和对应的靶细胞)。将各组置于37℃、5％CO2的培养箱中培养，第4天收集上清50μL/孔，并加入50μL/孔5％Triton-100裂解病毒。按照实施例3中记载的双抗夹心ELISA检测上清中的p24抗原来测定化合物对病毒的失活活性，结果列于表3中。
表3化合物EC50数据
Figure BDA0002642202250000242
Figure BDA0002642202250000251
结果表明，化合物1a、1c、2b、2c和3均能够主动进攻游离的病毒颗粒，对HIV-1IIIB病毒具有失活活性，能够降低病毒入侵细胞后形成潜伏库的能力。
实施例5对不同HIV-1毒株的广谱抑制和失活作用
选取化合物3作为示例进一步检测其对包括耐药株在内的不同HIV-1毒株的广谱抑制和失活作用。
临床株93/BR/020、96USSN20、92/UG/001、92/UG/024由美国NIH艾滋病试剂和参照物项目提供，货号分别是2329、4113、1647、1649。T20耐药株D36G(NL4-3 WT)、V38A、V38AN42T、V38A N42D、V38E N42S由美国NIH艾滋病试剂和参照物项目提供，货号分别是9489、9490、9498、9488、9496。T2635耐药株质粒由Rogier W.Sanders博士提供(具体信息请见：J.Virol.2011；85:10785-10797)，利用100μg Polyethylenimine转染试剂(购自：Polysciences，货号：23966-1)将每个突变质粒(25μg)分别转染到HEK 293T/17细胞(购自：ATCC，货号：CRL-11268)中，72小时后收集上清并在MT-2细胞上进行扩增和滴度测定，最后保存于-80℃。
对不同毒株的抑制实验和失活实验方法与实施例3中抑制和失活IIIB毒株相同，其中，AMD3100和Maraviroc分别是CXCR4阻断剂和CCR5阻断剂，作为对照药物。
表4化合物3对临床株的广谱抑制活性
Figure BDA0002642202250000252
表5化合物3对耐药株的广谱抑制活性
Figure BDA0002642202250000253
Figure BDA0002642202250000261
表6化合物3对临床株和耐药株的广谱失活活性
Figure BDA0002642202250000262
以上结果表明，与已知的抑制病毒进入细胞的抑制剂AMD3100、Maraviroc相比，化合物3能够广谱抑制不同嗜性、不同亚型HIV-1毒株的复制，以及有效地抑制耐药株的复制。而且，化合物3主动进攻游离的病毒颗粒，对HIV-1不同的临床株和耐药株均具有广谱失活活性，降低了病毒入侵细胞后形成潜伏库的可能性。化合物3与临床应用的抗HIV-1药物的作用机制不同，因此，可以减缓现有的耐药问题，并为患者提供更多的可选治疗方案。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (4)

1.下式所示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003322031480000011
2.药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药物学上可接受的载体。
3.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。
4.如权利要求3所述的用途，所述人类免疫缺陷病毒(HIV)包括1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)。
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