CN111983061A

CN111983061A - 检测陈皮的陈化方式的方法

Info

Publication number: CN111983061A
Application number: CN202010772235.8A
Authority: CN
Inventors: 陈明权; 商雪莹; 张怀; 何风雷; 覃仁安; 石洪超
Original assignee: Guangzhou Baiyunshan Chen Liji Pharmaceutical Factory Co ltd
Current assignee: Guangzhou Baiyunshan Chen Liji Pharmaceutical Factory Co ltd
Priority date: 2020-08-04
Filing date: 2020-08-04
Publication date: 2020-11-24
Anticipated expiration: 2040-08-04
Also published as: CN111983061B

Abstract

本发明涉及一种检测陈皮的陈化方式的方法。本发明将5‑羟甲基糠醛作为标志物应用于检测陈皮的陈化方式中，方法包括：取待测陈皮，检测所述待测陈皮中5‑羟甲基糠醛的含量。本发明通过对多批次的不同来源、不同陈化年份、不同陈化方式的陈皮中的5‑羟甲基糠醛(5‑HMF)含量的检测、分析发现，5‑羟甲基糠醛的含量在高温加速陈化陈皮和其他陈化方式陈皮中存在差异，该化学成分可以作为标志物，通过对其含量的测定，可将高温陈化陈皮和其他陈化方式陈皮予以有效区分。

Description

检测陈皮的陈化方式的方法

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，特别涉及一种检测陈皮的陈化方式的方法。

背景技术

在2020版《中国药典》一部中，陈皮为芸香科植物橘(Citrus reticulata Blanco)及其栽培变种茶枝柑(Citrus reticulate‘Chachi’)、大红袍(Citrus reticulate‘Dahongpao’)、温州蜜柑(Citrus reticulate‘Unshiu’)、福橘(Citrus reticulate‘Tangerina’)的成熟果皮，经晒干或低温干燥而成，主要有陈皮及广陈皮两个品种，其中广陈皮(Citrus reticulate‘Chachi’)主产于广东新会，新会陈皮为道地药材。

陈皮是经典的药食同源药材，收录于国家卫生计生委办公厅颁布的《按照传统既是食品又是中药材物质目录管理办法》，具有理气健脾、燥湿化痰的功效，长期深受广大消费者的青睐。传统中医药理论及历代本草论述中均认为陈皮“陈久者良”，是指陈皮需放置陈化后才能作为药用，且陈化时间越久的陈皮药效越好。在广东省地方标准《DB44/T 604-2009地理标志产品新会陈皮》中定义“陈皮”为：在自然陈化环境下保存时间三年或以上的茶枝柑皮。

目前的陈皮市场中，对于高年份陈皮的追捧一直热度不减，且由于前3～5年翻晒或储藏环境变化造成的霉变虫蛀及损耗，陈皮每年的价格涨幅都在15～20％。新会产区新皮的价格约为150元/斤，陈化5年陈皮价位约在450元/斤，陈化25年陈皮约在8,000元/斤，陈化50年的陈皮价格可高达约380,000元/斤，从而产生了“一两陈皮一两金，百年陈皮胜黄金”的说法。陈化年份对陈皮的价格具有决定性的影响，也导致了不乏商家以做旧新皮伪装为高年份陈皮赚取高额利润的市场乱象。

对于陈皮年份的鉴定，国家没有统一的标准，基本靠陈皮厂商自律和采购者的经验鉴别。色泽是鉴定药材最直观的方式，也是陈皮陈化年份的重要判别标志。一般随着陈化年份的增加，陈皮外表皮颜色会逐渐变深，颜色的变化是传统肉眼分辨陈皮年份的重要判别方式，但是，通过肉眼区分色泽的方法缺乏客观性，手段单一，不能进行有效推广。特别是，不良商贩为了追求高利润，采用各种“加速陈化工艺”对新皮进行加速处理，例如将新皮放入电烤箱、洒水湿闷或煮茶染色，以使新皮表皮颜色快速变深(也称为“工艺皮”)用以冒充高年份陈皮售卖，“工艺皮”极大的扰乱了陈皮市场。因此，建立鉴别自然陈化陈皮和人工加速陈化陈皮的方法对于维护陈皮市场的良好生态显得尤为重要。

发明内容

基于此，本发明的主要目的是提供一种5-羟甲基糠醛的新应用以及检测陈皮的陈化方式的方法。本发明采用5-羟甲基糠醛作为区别指标，通过对其含量得测定，能够将高温加速陈化的陈皮和其他陈化陈皮区分开来。

本发明的技术方案如下：

本发明的一个目的是提供一种5-羟甲基糠醛作为标志物在检测陈皮的陈化方式中的应用。

本发明的另一目的是提供一种检测陈皮的陈化方式的方法，所述方法包括：

取待测陈皮，检测所述待测陈皮中5-羟甲基糠醛的含量。

在其中一个实施例中，所述5-羟甲基糠醛的含量大于等于0.25mg·g^-1，则所述待测陈皮的陈化方式为高温加速陈化；所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1，则所述待测陈皮的陈化方式为其他陈化方式。

在其中一个实施例中，所述方法还包括对待测陈皮的色度值进行检测并获得总色差值的步骤。

在其中一个实施例中，所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1且所述总色差值小于等于68，则所述待测陈皮的陈化方式为非高温加速陈化；所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1且所述总色差值大于68，则所述待测陈皮的陈化方式为自然陈化。

在其中一个实施例中，所述检测采用液相质谱联合检测。

在其中一个实施例中，所述检测的步骤包括：

取5-羟甲基糠醛的标准品，制备标准品溶液；

取待测陈皮，制备供试品溶液；

取所述标准品溶液和所述供试品溶液，进行液相质谱联合检测。

在其中一个实施例中，所述液相的条件设置包括：

固定相：Waters T3色谱柱；

流动相：流动相A为甲醇；流动相B为甲酸质量百分含量为0.08～0.12％的甲酸水溶液；

采用梯度洗脱程序：0～12min，2～8％流动相A；12～20min，8～10％流动相A；

流速：0.3～0.8mL·min^-1；

柱温：33～37℃；

进样量：0.8～1.2μL。

在其中一个实施例中，所述质谱的条件设置包括：采用负离子模式；电喷雾离子源；离子源温度：580～620℃；正离子检测；选择性离子监测；毛细管电压：0.7～0.9kV；锥孔电压：13～17V。

在其中一个实施例中，制备所述标准品溶液采用的溶剂为甲醇体积百分含量为8～12％的甲醇溶液。

在其中一个实施例中，制备所述供试品溶液采用的溶剂为甲醇体积百分含量为8～12％的甲醇溶液。

在其中一个实施例中，制备所述供试品溶液的步骤包括：取待测陈皮，粉碎，加入所述溶剂，超声，离心，过滤。

本发明的有益效果包括：

本发明通过对多批次的不同来源、不同陈化年份、不同陈化方式的陈皮中的5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量的检测、分析发现，5-羟甲基糠醛的含量在高温加速陈化陈皮和其他陈化方式陈皮中存在差异，该化学成分可以作为标志物，通过对其含量的测定，可将高温陈化陈皮和其他陈化方式陈皮予以有效区分。

进一步地，本发明通过配合对总色度值的检测，能够将其他陈化方式陈皮中的非高温加速陈化(例如茶叶水染色加速陈化)陈皮和自然陈化陈皮区分开来。

附图说明

图1为部分陈皮样品内表皮直观图；

图2为SIM色谱图；

图3为5-羟甲基糠醛的质谱图；

图4为49个陈皮样品中5-羟甲基糠醛含量(mg·g^-1)散点图；

图5为35个陈皮样品总色差值△E散点图；

图6本发明的检测陈皮陈化方式的流程图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明实施例涉及5-羟甲基糠醛的新应用，具体涉及5-羟甲基糠醛作为标志物在检测陈皮的陈化方式中的应用。

可以理解的是，本发明实施例对陈皮的种类不做特别限定，包括但不限于新会陈皮。

本发明实施例进一步涉及检测陈皮的陈化方式的方法，所述方法包括：

取待测陈皮，检测所述待测陈皮中5-羟甲基糠醛的含量。

优选地，所述5-羟甲基糠醛的含量大于等于0.25mg·g^-1，则所述待测陈皮的陈化方式为高温加速陈化；所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1，则所述待测陈皮的陈化方式为其他陈化方式。

本发明实施例通过对多批次的不同来源、不同陈化年份、不同陈化方式的陈皮中的5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量的检测、分析发现，5-羟甲基糠醛的含量在高温加速陈化陈皮和其他方式陈化陈皮中存在差异，该化学成分可以作为标志物，通过对其含量的测定，可将高温陈化陈皮和其他陈化方式陈皮予以有效区分。

本发明实施例所述的“其他陈化方式”具体指除高温加速陈化外的陈化方式，包括但不限于非高温加速陈化方式以及自然陈化方式，非高温加速陈化方式例如采用煮茶染色加速陈化的方式。本发明实施例所述的高温加速陈化的条件例如：高温(110℃)高湿加速陈化，高温(130℃)加速陈化30min，高温(150℃)加速陈化30min等。

优选地，所述方法还包括对待测陈皮的色度值进行检测并获得总色差值的步骤。

优选地，所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1且所述总色差值小于等于68，则所述待测陈皮的陈化方式为非高温加速陈化；所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1且所述总色差值大于68，则所述待测陈皮的陈化方式为自然陈化。

发明人发现，有些加速陈化方式得到的陈皮，其5-羟甲基糠醛含量与自然陈化陈皮接近，仅通过5-羟甲基糠醛含量无法予以区分。基于此，本发明实施例进一步分析发现，总色差值在非高温加速陈化陈皮和自然陈化陈皮差异显著，将5-羟甲基糠醛含量和△E结合，就能很好的将非高温加速陈化陈皮和自然陈化陈皮予以有效区分。本发明实施例所述的“非高温加速陈化”包括但不限于煮茶染色加速陈化。同时，发明人还发现，通过△E能够鉴别50年以内的自然陈化陈皮。

本发明实施例首次提出以双指标5-HMF含量、△E判断陈皮的陈化方式，并规定其限度。该双指标可以同时监控陈皮外观色泽及含量限度，可以客观、准确地判定陈皮陈化方式，同时可以为传统陈皮陈化年份鉴定提供规范化的评价方法，对维护陈皮市场稳定、健康发展具有重要意义。

可以理解的是，5-羟甲基糠醛含量的检测方法可以有多种，包括但不限于采用液相质谱联合检测。

优选地，所述检测的步骤包括：

取5-羟甲基糠醛的标准品，制备标准品溶液；

取待测陈皮，制备供试品溶液；

优选地，所述液相的条件设置包括：

固定相：Waters T3色谱柱；

流速：0.3～0.8mL·min^-1；

柱温：33～37℃；

进样量：0.8～1.2μL。

本发明实施例采用的固定相Waters T3色谱柱例如Waters X

HSS T3色谱柱(2.5μm，3.0×150mm)，流动相B为甲酸质量百分含量为0.1％的甲酸水溶液。

优选地，所述质谱的条件设置包括：采用负离子模式；电喷雾离子源；离子源温度：580～620℃；正离子检测；选择性离子监测；毛细管电压：0.7～0.9kV；锥孔电压：13～17V。

优选地，制备所述标准品溶液采用的溶剂为甲醇体积百分含量为8～12％的甲醇溶液。

优选地，制备所述供试品溶液采用的溶剂为甲醇体积百分含量为8～12％的甲醇溶液。

优选地，制备所述供试品溶液的步骤包括：取待测陈皮，粉碎，加入所述溶剂，超声，离心，过滤。

以下结合具体实施例对本发明的技术方案予以举例说明：

下述实施例以不同来源、不同陈化年份、不同处理方式等49批陈皮样品对研究对象，首先根据陈皮高温加速陈化会发生Maillard反应的特点，建立了灵敏度高、重复性好的HPLC-QDa联用测定5-HMF含量的方法；并制定了可以有效判别出“高温加速陈化陈皮”的5-HMF含量限度(≥0.25mg·g-1)；在此基础上，然后引入色差分析仪对陈皮外观色泽进行客观的数据量化，分析非高温加速样品的总色差值△E变化范围，则制定了可以有效判别出“煮茶染色加速陈皮”的△E值限度(≤68)。最终，通过双指标5-HMF含量、总色差值△E的综合判断，准确鉴别出陈皮的陈化方式。具体流程参见图6。

1仪器与试药

1.1仪器

三恩驰便携式电脑色差仪(NH310型，深圳市三恩驰科技有限公司)、WatersACQUITY Arc-QDa高效液相色谱-质谱联用仪及Empower 3软件处理器(美国沃特世公司)、X

HSS T3色谱柱(2.5μm，3.0×150mm，美国沃特世公司)、XPR 26/A百万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)、Sartorius BS110S万分之一电子天平、TGL-15B离心机(上海安亭科学仪器厂)、Milli-Q Reference纯水机(法国Millipore)、SB-5200DT超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)、津腾

尼龙66 0.22μm微孔滤膜、WXJ型粉碎机(上海凯旋中药机械制造有限公司)。

1.2试剂

色谱级甲醇(德国Merck)、超纯水、色谱级甲酸(纯度>98％，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，5-羟甲基糠醛标准品(批号：19060403，中国广州分析测试中心科力技术开发公司)。

1.3试验样品

本发明的试验样品包括定向采购样品(D1～D15)、市售样品(S16～S26)、新会产区购置样品(C27～C30)、基地采集自然陈化至今的样品(J31～J41，J45)，以及自制加速陈化陈皮样品。

其中自制加速陈化陈皮样品的处理方式如下：

(1)将2007年11月采集的大红皮(J41，自然陈化)分别制成不同的自制加速陈化样品：

①高温110℃、高湿加速陈化(W42)；

②高温130℃加速陈化30分钟(W43)；

③高温150℃加速陈化30分钟(W44)。

(2)将2007年10月采集的青皮(J45，自然陈化)制成不同的自制加速陈化样品：

①高温110℃、高湿加速陈化(W46)；

②高温130℃加速陈化30分钟(W47)；

③高温150℃加速陈化30分钟(W48)。

(3)将2003年当年新皮用煮开的普洱茶水浸泡染色并晾干，自制成煮茶染色加速样品(R49)。

试验样品详细信息见表1，部分样品内表皮外观情况见图1。

表1、试验样品信息表

注：“——”代表信息不详。编号代码D为定向采购样品，C为新会产区购置样品，S为市售样品，J为基地采集样品，W为高温加速陈化样品，R为煮茶染色加速样品。

2、方法与结果

2.1 5-羟甲基糠醛含量的测定

2.1.1液相及质谱条件

液相条件：使用Waters X

HSS T3色谱柱(2.5μm，3.0×150mm)。流动相由溶剂A(甲醇)和溶剂B(含0.1％甲酸的水)组成，采用path 2通道，使用梯度洗脱程序：2～8％A(0～12min)，8～10％A(12～20min)。流速设定为0.5mL·min^-1，柱温保持在35℃，进样量：1μL。

质谱条件：采用负离子模式，质谱参数设置为：采用电喷雾离子源(ESI源)，离子源温度(Probe)为600℃；正离子检测，选择性离子监测(SIM)；毛细管电压0.8kV，锥孔电压15V，以m/z 127.04(5-HMF)为测定离子。

2.1.2标准品溶液的配置

精密称取对照品5-HMF 20mg，置于100mL容量瓶中，加入10％甲醇溶液充分溶解并稀释至刻度线作为储备液，储存于4℃冰箱中。

2.1.3供试品溶液的配置

取陈皮试验样品适量，粉碎过65目筛。取陈皮粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL 10％甲醇溶液，称重，超声处理45min(功率300W，频率40kHz)，放冷后称重，并用10％甲醇溶液补足重量。10000r·min^-1离心10min，取上清，过0.22μm微孔滤膜过滤，即得。

2.1.4专属性考察

分别精密吸取标准品溶液(standard)、供试品溶液(Sample)和溶剂(10％甲醇溶液，Negative Sample)各1μL，注入液相色谱-质谱联用仪进行测定，记录色谱图。样品色谱图与对照品色谱图峰保留时间一致，且溶剂无干扰。

色谱及质谱图分别见图2、图3。图2样品色谱图(Sample)中出现与对照品色谱图(standard)中保留时间一致(RT＝10.11min)的色谱峰，无陈皮的阴性样品(NegativeSample)对测定无干扰。

2.1.5线性关系考察

取标准品储备液依次稀释并制成6个质量浓度分别为25.00、6.26、1.56、0.39、0.09、0.04μg·mL-1的标准品溶液。按上述质谱条件测定峰面积，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：5-羟甲基糠醛y＝6.92×10^5x+4.60×10^5(R＝0.9998)，线性范围为0.04～25.00μg·mL^-1。

2.1.6精密度试验

精密吸取标准品溶液(1.56μg·mL-1)1μL，连续进样6次，测得5-羟甲基糠醛峰面积的积分值RSD值为2.1％。结果证明仪器精密度良好。

2.1.7重复性试验

平行制备6份相同浓度的供试品溶液(J18)，进样测试，按照上述色谱及质谱条件进行检测，测得5-羟甲基糠醛峰含量分别为0.023、0.024、0.023、0.025、0.021、0.024μg·g^-1，RSD为4.6％。重复性良好。

2.1.8稳定性试验

取1号样品(D1)供试品溶液室温放置，分别于制备后0、2、4、8、12、24小时进样测定，在24小时内5-羟甲基糠醛峰面积积分值RSD为3.1％，表明方法稳定性良好。

2.1.9加样回收率

取已测得5-HMF含量的陈皮样品(D5)0.5g，精密称定9份，分为3组，每组3份，分别加入其中5-HMF的0.5倍、1倍、1.5倍量对照品，按照上述供试品制备方法及色谱-质谱条件进样测定，加样回收率为96.30％，RSD值为2.77％。表明本方法回收率较好。

2.1.10样品含量测定

精密称取1～49号样品各2份，分别按照“2.1.3”项下条件制备供试品溶液，按照“2.1.1”项下条件进样测定。采用外标法计算5-HMF的含量，并根据其含量大小进行排序，结果见表2、图4。

表2、试验样品中5-羟甲基糠醛含量(n＝2)

注：“——”代表陈化方式未知。

从表2可知：不同来源陈皮的5-HMF含量存在明显差异。自然陈化样品(C、D、J)中的5-HMF含量介于0.003～0.213mg·g^-1之间，自制的高温加速陈化样品(W)的5-HMF含量(0.434～7.516mg·g^-1)均大于0.25mg·g^-1；而煮茶染色加速样品(R49)的5-HMF含量仅为0.022mg·g^-1，远低于高温加速陈化样品的。同时，还可以发现，四个不同陈皮专营店购买的市售样品(S)之间的5-HMF含量差异也较明显，其中除了从“陈皮专营店3”购买的样品(S22～S24)的5-HMF含量小于0.25mg·g^-1；其他市售样品的含量均大于0.25mg·g^-1，特别是从“陈皮专营店2”购买的市售样品(S18～S21)中5-HMF含量(0.257～1.133mg·g^-1)，与自制的高温加速陈化样品(W)的含量范围存在交集，说明市售样品(S18～S21)可能经过高温加速处理；据此类推，市售样品(S16～S17，S25～S26)也可能是经过高温加速处理的。

结合图4可知：当5-HMF含量≥0.25mg·g^-1时，可以将高温加速处理样品与其他样品区分开来。一方面，从“陈皮专营店3”购买的市售样品(S22～S24)中的5-HMF含量范围为0.014～0.114mg·g^-1，根据判别指标5-HMF仅可推测市售样品(S22～S24)未经过高温加速处理；另一方面，煮茶染色加速样品(R49)的5-HMF含量(0.022mg·g^-1)在自然陈化样品(C、D、J)5-HMF含量(0.003～0.213mg·g^-1)范围内，表明判别指标5-HMF无法将“煮茶染色加速样品”鉴别出来。

此外，还可以发现与制备前的样品(J41，J45)相比，自制的高温加速陈化样品中5-HMF含量会随着处理温度的升高而增加。经110℃、130℃、150℃高温加速后，大红皮加速样品(W42～W44)中5-HMF含量由加速陈化前的0.091mg·g^-1分别增加至0.476、1.819、7.516mg·g^-1，而青皮(W46～W48)中5-HMF含量由加速陈化前的0.133mg·g^-1分别增加至0.434、0.858、3.196mg·g^-1，其5-HMF含量变化程度较大红皮的小；从侧面可以反映出，在相同加速条件下，大红皮发生Maillard反应的程度较青皮的快。

2.1.11小结

以上结果表明，仅凭判别指标5-HMF含量及限度，可以有效判断出“高温加速陈化陈皮”；而不能将“煮茶染色加速陈皮”鉴别出来，需要结合外观色差等其他指标进一步研究。

2.2陈皮外观色差测定

2.2.1测定方法

采用国际照明委员会(CIE)认可的D65光源(相当于自然日光，6504K)，采用仪器配套的白板进行校正。各陈皮样品均粉碎过65目筛，取约3.5g，置于粉末测试盒(光距长1.0cm)，压实，测定样品的色度值为L^*、a^*、b^*，按如下公式计算各样品的总色差值(△E)。

色度仪利用的是L^*、a^*、b^*三个不同的坐标轴，指示颜色在几何坐标图中的位置及代号。a^*和b^*表示不同的色调方向，a^*表示红绿方向，+a^*表示红方向，-a^*表示绿方向；b^*表示黄蓝方向，+b^*表示黄方向，-b^*表示蓝方向；L^*表示明度，L^*越大亮度越高。以这3个数值计算的△E可以客观地表示不同样品的色泽能力，△E数值越大，其色泽越浅；反之，△E数值越小，其色泽越深。

2.2.2测定结果

每个样品(除W、S16～S21，S25～S26等14个高温加速处理样品之外)重复测定三次，以各色度值(L^*、a^*、b^*)的平均值计算总色差值(△E)；并根据其△E大小进行排序，结果见表3、图5。

表3、35个陈皮样品色度值(n＝3)

注：“——”代表陈化方式未知。

从表3可以看出，不同来源的同一陈化年份样品的总色差值△E存在明显的差异。其中自然陈化样品(C、D、J)的色差值△E介于68.74～88.21之间，而市售样品(S22～S24)的△E值范围为61.87～67.04，煮茶染色加速样品(R49)的△E值67.56；三者之间的△E值并不存在交集。

一方面，按照新会陈皮陈化年份越久，其外观色泽越深、色差值△E越小的变化趋势；而市售样品(S22～S24)的陈化年份(17～30年)低于自然陈化样品(C30)的陈化年份(39年)，其总色差值△E(61.87～67.04)却小于自然陈化样品C30(68.74)的，这不符合新会陈皮自然陈化的变化规律，表明市售样品(S22～S24)的陈化方式不是自然陈化。另一方面，市售样品(S22～S24)的△E值也均小于煮茶染色加速样品(R49)的结果表明，市售样品(S22～S24)可能也经过煮茶染色处理。

结合图5可知，当总色差值△E≤68时，可以有效判断出“煮茶染色加速陈皮”；而自然陈化的陈皮样品总色差值△E＞68。

2.2.3小结

以上结果表明，以总色差值△E作为判别指标，可以有效判断出“煮茶染色加速陈皮”。同时，按照新会陈皮随陈化年份越久，各相近年份陈皮之间的外观色差值变化越小的规律；可以推测，上述总色差值△E能够鉴别50年以内的自然陈化陈皮。

3结论

广东省地方标准《DB44/T 604-2009地理标志产品新会陈皮》中定义，陈皮应在自然干爽通风的条件下，贮存于透气性良好的包装容器内陈化。陈皮的市场价值一直以陈化年份为导向，不同陈化年份的陈皮价格差异巨大。随着陈化年份的增加，陈皮表皮颜色会逐渐变深，以肉眼观察颜色的变化是传统分辨陈皮年份的重要判别方式，此模式通常会过于主观、单一。因此市场上不乏商家以做旧新皮伪装为高年份陈皮赚取高额利润。

本发明以不同来源、不同陈化年份、不同处理方式等49批陈皮样品为研究对象，首先根据陈皮高温加速陈化会发生Maillard反应的特点，建立了灵敏度高、重复性好的HPLC-QDa联用测定5-HMF含量的方法；并制定了可以有效判别出“高温加速陈化陈皮”的5-HMF含量限度(≥0.25mg·g-1)；在此基础上，引入色差分析仪对陈皮外观色泽进行客观的数据量化，分析非高温加速样品的总色差值△E变化范围，则制定了可以有效判别出“煮茶染色加速陈皮”的△E值限度(≤68)。由此可见，分别通过判别指标5-HMF含量、总色差值△E，可以有效鉴别出陈皮的陈化方式。

本发明首次提出以双指标5-HMF含量、△E判断陈皮的陈化方式，并规定其限度。该双指标可以同时监控陈皮外观色泽及含量限度，可以客观、准确地判定陈皮陈化方式，同时可以为传统陈皮陈化年份鉴定提供规范化的评价方法，对维护陈皮市场稳定、健康发展具有重要意义。

4讨论

关于自制加速陈化样品的选择，鉴于新会陈皮在采收过程中，会根据果实成熟度的递增依次称为青皮、二红皮、大红皮，本研究同时选用青皮和大红皮制作加速陈化样品。结果发现，在相同加速条件下大红皮发生Maillard反应的程度较青皮的快，5-HMF含量变化幅度较青皮的大，分析原因，可能是大红皮中多糖类物质较青皮多，Maillard反应以糖类为反应底物，以致大红皮在高温加速Maillard反应时得到的产物5-HMF比青皮的多，外观色泽变得也较青皮的深。

以上实施例，以不同来源陈皮样品为研究对象，首先根据陈皮高温加速陈化会发生Maillard反应的特点，建立了灵敏度高、重复性好的HPLC-QDa联用测定5-HMF含量的方法；并制定可以有效判别出“高温加速陈化陈皮”的5-HMF含量限度；在此基础上，然后引入色差分析仪对陈皮外观色泽进行客观的数据量化，分析非高温加速样品的总色差值△E变化范围，以制定可以有效判别出“煮茶染色加速陈皮”的△E值限度。最终，通过双指标5-HMF含量、总色差值△E的综合判断，准确鉴别出陈皮的陈化方式。广东省地方标准《DB44/T604-2009地理标志产品新会陈皮》规定，陈皮烘干时最高温度不超过45℃，且2020版《中国药典》中亦有规定陈皮应晒干或低温干燥而成。一方面，自然陈化的陈皮样品不会经过高温处理，而人工加速陈化的陈皮一般会通过高温、高湿处理，根据Maillard反应的原理，高温则会导致其经典产物5-HMF的含量显著增加，因此以5-HMF含量作为判别“高温加速陈化陈皮”的指标是科学的。另一方面，陈皮经过煮茶染色处理后，其外观色泽变黑，较同年份的自然陈化陈皮的色泽深；因此以外观色差△E值作为判别“非高温加速陈皮”(如煮茶染色加速陈皮)的指标是可行的。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。如调整顺序先测定总色差值△E，制定可以有效判别出“煮茶染色加速陈皮”的△E值限度；再测定5-HMF含量，制定可以有效判别出“高温加速陈化陈皮”的5-HMF含量限度的技术方案等，也属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.5-羟甲基糠醛作为标志物在检测陈皮的陈化方式中的应用。

2.一种检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述方法包括：

取待测陈皮，检测所述待测陈皮中5-羟甲基糠醛的含量。

3.根据权利要求2所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述5-羟甲基糠醛的含量大于等于0.25mg·g^-1，则所述待测陈皮的陈化方式为高温加速陈化；所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1，则所述待测陈皮的陈化方式为其他陈化方式。

4.根据权利要求2或者3所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述方法还包括对待测陈皮的色度值进行检测并获得总色差值的步骤。

5.根据权利要求4所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1且所述总色差值小于等于68，则所述待测陈皮的陈化方式为非高温加速陈化；所述5-羟甲基糠醛的含量小于0.25mg·g^-1且所述总色差值大于68，则所述待测陈皮的陈化方式为自然陈化。

6.根据权利要求2、3以及5任一项所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述检测采用液相质谱联合检测。

7.根据权利要求6所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述检测的步骤包括：

取5-羟甲基糠醛的标准品，制备标准品溶液；

取待测陈皮，制备供试品溶液；

8.根据权利要求7所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述液相的条件设置包括：

固定相：Waters T3色谱柱；

流速：0.3～0.8mL·min^-1；

柱温：33～37℃；

进样量：0.8～1.2μL。

9.根据权利要求7或者8所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，所述质谱的条件设置包括：采用负离子模式；电喷雾离子源；离子源温度：580～620℃；正离子检测；选择性离子监测；毛细管电压：0.7～0.9kV；锥孔电压：13～17V。

10.根据权利要求7或者8所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，制备所述标准品溶液采用的溶剂为甲醇体积百分含量为8～12％的甲醇溶液。

11.根据权利要求7或者8所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，制备所述供试品溶液采用的溶剂为甲醇体积百分含量为8～12％的甲醇溶液。

12.根据权利要求11所述的检测陈皮的陈化方式的方法，其特征在于，制备所述供试品溶液的步骤包括：取待测陈皮，粉碎，加入所述溶剂，超声，离心，过滤。