CN111982825B - 一种全偏振快速动态斯托克斯成像的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种全偏振快速动态斯托克斯成像的方法,包括以下步骤:1)将样品放在立式装置的样品台上;2)光源发出的光线经过偏振片和第一1/4波片进行偏振调制,调制为一种特定的偏振态垂直入射到样品表面;3)经过样品散射后的散射光经过第二1/4波片和偏振片后被CCD采集,CCD对第二1/4波片的每一个旋转角度进行拍照;4)使用至少连续5幅图像计算这一时间段的斯托克斯矢量,并依次后移所需图像的编号,不断用后来新增的图像信息替代掉最初的图像进行斯托克斯矢量的计算,实现在一段时间内对动态样品进行连续均匀的斯托克斯成像。本发明方法可以快速测量样品的斯托克斯矢量,适用于动态样品的监测。
Description
技术领域
本发明涉及快速偏振光学检测技术领域,特别是一种适合动态样品监测的斯托克斯快速测量的方法和装置。
背景技术
随着偏振光学器件、探测仪器的日益成熟以及数据处理能力的提升,偏振测量作为一种非接触、无损伤但是具有高分辨率的测量方法,已经广泛用于大气颗粒物识别、海洋生物识别以及生物医学领域。偏振对于微观结构敏感,现常通过穆勒矩阵测量来获取样品的微观属性。穆勒矩阵反映了组织的退偏、双折射、各向异性等很多特性,但是由于穆勒矩阵的测量时间一般在2min左右,不适合动态样品的监测,而斯托克斯矢量作为穆勒矩阵的基础,同样反映了样品的偏振信息,而且可以大幅度的缩短测量时间,可以实现对动态样品的实时连续的监测。
斯托克斯在静态样品的测量上展现了很好的应用,但还没有应用在动态样品的成像上,特别是观察样品的微观结构在生物变化过程中的改变。
发明内容
本发明要解决的技术问题就是为了解决动态生物样品的斯托克斯成像的问题,提出了一种基于斯托克斯快速测量的方法和装置,可实现监测在一个动态的生物变化过程中微观结构的变化,反映样品的特征。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种全偏振斯托克斯矢量成像方法,包括以下步骤:1)将样品放在立式装置的样品台上;2)光源发出的光线经过偏振片和第一1/4波片进行偏振调制,调制为一种特定的偏振态(此装置的入射偏振态是可以根据样品特性进行调整的,可以以水平线偏、45度线偏、垂直线偏、135度线偏、右旋圆偏或者的左旋圆偏入射)垂直入射到样品表面;3)经过样品散射后的散射光经过第二1/4波片和偏振片,CCD对第二1/4波片的每一个旋转角度进行光强信息采集(第二1/4波片每旋转一个角度,CCD获取一幅图像);4)使用至少连续5幅图像计算这一时间段(即CCD采集5个角度的图像的时间,用的是第二1/4波片转了5个角度CCD拍到的5张图像进行计算的)的斯托克斯矢量,并依次后移所需图像的编号,不断用后来新增的图像信息替代掉最初的图像进行斯托克斯矢量的计算,通过调节递推速度可调节斯托克斯向量的刷新率(比如,用1-5、2-6、3-7……这样计算,提高斯托克斯图像的刷新率,这样只间隔一个的递推是比较快的方法;如果用例如1-5、4-8……这样,间隙三个的递推,刷新速度要比前者慢一些),实现在一段时间内对动态样品进行连续均匀的斯托克斯成像(即计算得到斯托克斯矢量。因为CCD采集的是二维图像,每一个像素点都可以计算斯托克斯,所以最后的斯托克斯计算出来也是二维的,故也称为图像);5)后续可以分析样品的斯托克斯矢量以及进一步反演出来的其他偏振参数,从而获取更多样品的属性。具体实验装置图如图1所示。
所述装置整体是一个立式装置,中间设有样品台,可以呈放样品,特别适用于带有组织培养液的生物组织,在连续监测的过程中不需要移动样品,确保了成像区域不变。
所述装置的起偏装置由一个偏振片和一个1/4波片构成,可调制成水平、垂直、45°和135°线偏光入射以及左右旋圆偏光六种不同的偏振光入射样品,在确定入射光的偏振态后,起偏装置中的偏振片和1/4波片都固定不动。
所述装置的检偏结构由一个1/4波片和一个偏振片组成,其中偏振片的主通光方向是固定的但是1/4波片是可旋转的即快轴方向可调,1/4波片的单次旋转角度应为0度到180度的子集,且每次旋转角度固定。在初始时刻,1/4波片的快轴角度和偏振片的主通光方向保持一致,随着1/4波片的转动,用β表示1/4波片的快轴方向与偏振片的主通光方向之间的夹角。
所述步骤3)执行时,对应于每一个1/4波片旋转的角度,都用CCD采集其光强信息,且1/4波片是向一个方向连续旋转。
所述步骤3)执行时,对于CCD的摆放位置即检偏端的位置,偏振检偏端与起偏端之间的夹角可在0至180度之间调节,常用角度为180度和20度,分别对应背向散射光和前向散射光两种不同模式的斯托克斯成像方式。
所述步骤4)执行时,在采集完一系列的偏振图像之后,使用连续的n幅图像进行斯托克斯矢量的计算(其中n>=5),可设置采样间隔为g张图像(g最小为1)。针对动态样品,利用第1+(s-1)*g到n+(s-1)*g图的偏振信息计算第s个斯托克斯向量,不断用后来新增的图像信息替代掉最初的图像进行斯托克斯成像,其中采样间隔代表测量的刷新率,g越小表明刷新越快,在相同的测量时间内,可以计算更多的斯托克斯向量来表征动态样品的变化,用最少的数目的图像输入获取最多的斯托克斯图像的输出,大大缩短测量时间。
所述步骤4)执行时,可根据动态样品的变化快慢调节斯托克斯测量的频率(即刷新率),使其更能准确地描述样品的动态变化。
所述步骤4)执行时,利用偏振图像计算斯托克斯矢量的方法如下,根据CCD采集到的光强信息与1/4波片的快轴方向和偏振片的主通光方向之间的夹角β之间的关系:
其中S0、S1、S2、S3分别代表了斯托克斯矢量的第一个、第二个、第三个、第四个分量,β是1/4波片的快轴和偏振片的主通光方向之间的夹角,其中偏振片的主通光方向应该放置在水平线。
求取傅里叶系数来计算斯托克斯矢量,
可得待测动态样品的斯托克斯矢量为:
所述步骤5)执行时,可利用图像分析方法直接对斯托克斯图像进行分析(比如用灰度共生矩阵、小波变换、傅里叶变换这些图像处理方法提取信息),也可对斯托克斯进一步反演得到的偏振参数,包括对线偏振度、偏振角、线性相位延迟等等参数中的任一者或多者进行分析。
所述全偏振斯托克斯矢量成像装置,其与测量穆勒矩阵的装置中的光学器件完全一致,仅通过软件控制就可以实现在动态快速斯托克斯测量和更为详细的穆勒测量两种偏振测量模式之间切换。
所述全偏振斯托克斯矢量成像装置,特别适用于动态样品的测量,而对于静态样品,也可通过这样的成像方式取多次测量的平均值来减小误差。
本发明的具体装置和穆勒矩阵的测量装置是一样的,本发明的装置可以在保留穆勒矩阵测量的基础上,进行更为便捷的更快速的斯托克斯测量,本发明的装置的兼容性很强,可仅用软件操作就可在穆勒测量以及斯托克斯测量两种模式之间切换,该测量方式可以实现斯托克斯矢量的连续测量,特别适用于不断变化的动态样品,本发明可以实时连续监测其微观结构的变化,结合后期的图像处理等方法可以反演出样品的相关物理属性随时间的变化,另外,本发明的对于斯托克斯矢量的测量速度可调,可以根据样品变化的快慢调节测量频率,可操控性更强。
相比于穆勒矩阵的测量,本发明的具体优势有:
1)测量时间短,测量速度快,通过图像处理等手段,可以得到很多相关的偏振参数进行进一步的分析,穆勒矩阵的测量时间在2min左右,而此发明方法最快可达10s。
2)斯托克斯向量得到的是穆勒矩阵中的部分元素的线性组合,可以通过选择入射光的偏振态去除穆勒矩阵中的冗余信息,简化后期的参数分析。
相比于静态斯托克斯的测量,本发明的具体优势有:
1)可以实现连续的斯托克斯测量,以新的偏振图像不断迭代最初的偏振图像实现动态测量,可以连续观察一段时间内样本的微观变化
2)这种连续成像方式最大程度的利用了偏振图像,提高了测量效率,对于静态样品,也可以通过这种方法减小误差。
附图说明
图1是本发明实施例具体实验装置图。
图2是本发明实施例全偏振斯托克斯矢量动态样品成像流程。
图3所示为本发明实施例动态样品斯托克斯矢量随时间的变化图。
图4本发明实施例迭代计算斯托克斯示例图。
图中,1为LED光源,2为透镜,3为偏振片,4为第一1/4波片,5为样品,6为第二1/4波片,7为偏振片,8为透镜。
具体实施方式
下面结合具体实施方式并对照附图对本发明做进一步详细说明,分为测量方法和装置两部分,但下述说明仅仅是示例行动,不应以此限制本发明的保护范围。
本发明中的测量方法是一种全偏振斯托克斯成像方法,是一种斯托克斯快速成像的方法,适用于动态样品的监测,根据穆勒矩阵在生物医学方面的广泛应用,可知偏振对生物组织的微观结构敏感,比如常用的退偏参数可以用来表征样品在散射中的特性。根据样品的不同特性,可以选择不同偏振态的偏振光入射,由于生物组织各向异性的程度比较高,一般选择右旋圆偏光入射,可以尽量避免由于生物组织各向异性带来的空间取向对测量的影响。传统的静态斯托克斯测量并不能做到连续实时监测,而穆勒测量的时间太长,无法观察到动态样品在短时间内的变化,而该装置既可以进行动态斯托克斯测量还兼容了穆勒测量,可以根据样品特性,通过软件控制选择偏振信息更为丰富的穆勒测量方式或者是可以实现实时连续测量的动态斯托克斯的测量方式,还可根据样品变化的快慢调节斯托克斯成像的速度,具有操作便捷,可测量的样品广的特点。
下面结合图示对测量的有效性简要分析,所测试的样品为猪皮,在通透试剂的浸泡下,猪皮样本逐渐从不透明变得透明,从猪皮归一化的斯托克斯向量图3可以看出,在右旋圆偏振的入射光情况下,S1、S2、S3的每个像素点的绝对值都在增加,根据退偏度的定义,由于入射光为完全偏振光——右旋圆偏振,所以只需要计算出射光中完全非偏振光的占比,即
可以看出随着通透试剂浸泡的时间越长,退偏越小,说明光的散射越小,这和宏观上表现出来的组织变得“透明”是相吻合的。说明这种全偏振的斯托克斯快速测量的方法是可以用来观察动态样品光学属性上的变化的。
本具体实施方式的对于动态样品斯托克斯快速测量的流程如图2所示,包括以下步骤
1)将样品放在立式装置的样品台上。
2)使入射光首先经过由线偏振片和1/4波片组成的起偏端,将线偏振片的主通光方向调至水平方向,1/4波片的快轴方向和水平方向夹角为45°,使得入射光为右旋圆偏振,并垂直入射到样品的表面。
3)经过样品散射后的散射光经过第二1/4波片和偏振片,其中波片的步进速度为30°/次,CCD对第二1/4波片的每一个旋转角度都进行光强采集。
4)使用至少连续5幅图像计算这一时间段的斯托克斯矢量,并依次后移所需图像的编号,不断用后来新增的图像信息替代掉最初的图像进行斯托克斯矢量的计算,通过调节递推速度可调节斯托克斯向量的刷新率,实现在一段时间内对动态样品进行连续均匀的斯托克斯成像。
步骤3)中,可以根据成像需求选择成像模式,有前向探测和背向探测两种模式。
步骤4)中,Stokes的计算方法如下,根据采集到的连续n幅图像的光强信息I1、I2、……In
求得傅里叶系数再根据傅里叶系数求解斯托克斯的各个分量,最后进行归一化处理,每一个像素点的斯托克斯矢量都相对于S0归一。
步骤4)中,如图4所示,采用连续的n=6幅图像,采样间隔g=3,依次后移需要计算的偏振图像的序号,不断用后面新的偏振图像取代最初的偏振图像代入计算,达到连续动态监测的目的,并可根据样品的变化速度,调节斯托克斯矢量测量的刷新率。
5)分析样品的斯托克斯矢量以及进一步反演出来的其他偏振参数,从而获取更多样品的属性。斯托克斯向量的结果往往不够直观,只根据各个元数据分布特点不能直接和样品的属性连接到一起,这里所尝试使用的退偏参数可以和样品对光的散射能力相联系,可以比较直观的解释现象,我们也试图在不断的实验中找到更多可以和样品属性联系比较紧密的偏振参数进行分析。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明,不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下做出若干替代或明显变型,而且性能或用途相同,都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种全偏振斯托克斯矢量成像方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、将样品放在立式装置的样品台上;S2、光源发出的光线经过偏振片和第一1/4波片进行偏振调制,调制为一种特定的偏振态垂直入射到样品表面;S3、经过样品散射后的散射光经过第二1/4波片和偏振片,CCD对第二1/4波片的每一个旋转角度进行光强信息采集;所述步骤S3执行时,对应于每一个1/4波片旋转的角度,都用CCD采集其光强信息,且1/4波片是向一个方向连续旋转;S4、使用至少连续5幅图像计算这一时间段的斯托克斯矢量,并依次后移所需图像的编号,不断用后来新增的图像信息替代掉最初的图像进行斯托克斯矢量的计算,实现在一段时间内对动态样品进行连续均匀的斯托克斯成像;所述步骤S4执行时,在采集完一系列的偏振图像之后,使用连续的n幅图像进行斯托克斯矢量的计算,其中n>=5,设置采样间隔为g张图像,其中g最小为1;针对动态样品,利用第1+(s-1)*g到n+(s-1)*g图的偏振信息计算第s个斯托克斯向量,不断用后来新增的图像信息替代掉最初的图像进行斯托克斯成像;在步骤S4中,通过调节递推速度可调节斯托克斯向量的刷新率;所述步骤S4执行时,根据动态样品的变化快慢调节斯托克斯测量的频率,即刷新率,使其更能准确地描述样品的动态变化;
其中,采样间隔代表测量的刷新率,g越小表明刷新越快,在相同的测量时间内,可计算更多的斯托克斯向量来表征动态样品的变化,用最少的数目的图像输入获取最多的斯托克斯图像的输出,缩短测量时间;
所述装置的起偏装置由一个偏振片和一个1/4波片构成,可调制成水平、垂直、45°和135°线偏光入射以及左右旋圆偏光六种不同的偏振光入射样品,在确定入射光的偏振态后,起偏装置中的偏振片和1/4波片都固定不动;
所述装置的检偏结构由一个1/4波片和一个偏振片组成,其中偏振片的主通光方向是固定的但是1/4波片是可旋转的即快轴方向可调,1/4波片的单次旋转角度为0度到180度的子集,且每次旋转角度固定;在初始时刻,1/4波片的快轴角度和偏振片的主通光方向保持一致。
2.如权利要求1所述的全偏振斯托克斯矢量成像方法,其特征在于,所述步骤S3执行时,对于CCD的摆放位置即检偏端的位置,偏振检偏端与起偏端之间的夹角可在0至180度之间调节,分别对应背向散射光和前向散射光两种不同模式的斯托克斯成像方式。
3.如权利要求2所述的全偏振斯托克斯矢量成像方法,其特征在于,偏振检偏端与起偏端之间的夹角角度为180度和20度。
4.如权利要求1所述的全偏振斯托克斯矢量成像方法,其特征在于,所述步骤S4执行时,利用偏振图像计算斯托克斯矢量的方法如下:根据CCD采集到的光强信息与1/4波片的快轴方向和偏振片的主通光方向之间的夹角之间的关系:
其中S0、S1、S2、S3分别代表了斯托克斯矢量的第一个、第二个、第三个、第四个分量,β是1/4波片的快轴和偏振片的主通光方向之间的夹角,其中偏振片的主通光方向放置在水平线。
5.如权利要求4所述的全偏振斯托克斯矢量成像方法,其特征在于,通过求取傅里叶系数来计算斯托克斯矢量,
得待测动态样品的斯托克斯矢量为:
6.如权利要求1所述的全偏振斯托克斯矢量成像方法,其特征在于,还包括步骤S5:利用图像分析方法直接对斯托克斯图像进行分析,或对斯托克斯进一步反演得到偏振参数。
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