CN111919119A - 辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法、试剂盒、装置及计算机程序 - Google Patents

辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法、试剂盒、装置及计算机程序 Download PDF

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Abstract

本发明涉及辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法。另外，本发明涉及用于该方法的试剂盒。进一步地，本发明涉及用于判定免疫检查点抑制剂的奏效性的装置及计算机程序。

Description

辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法、试剂盒、装置 及计算机程序
技术领域
本发明涉及辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法。另外，本发明涉及用于该方法的试剂盒。进一步地，本发明涉及用于判定免疫检查点抑制剂的奏效性的装置及计算机程序。
背景技术
已活化的T细胞的表面表达被称为PD-1(Programmed cell death-1，程序性细胞死亡-1)的受体分子(参照非专利文献1)。已知PD-1为抑制T细胞的过度活化、负调控生物体的免疫应答的分子。另外，已活化的T细胞的表面还表达被称为CTLA-4(Cytotoxic Tlymphocyte antigen-4，细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)的分子。CTLA-4也与PD-1同样地具有抑制T细胞的活化的功能。另一方面，肿瘤局部细胞中也存在在细胞表面表达作为PD-1的配体的PD-L1(Programmed cell death-ligand 1，程序性细胞死亡配体1)的细胞。已知这类肿瘤局部细胞通过自身的PD-L1与T细胞的PD-1的结合来抑制T细胞的活化、避免受到T细胞的攻击。其结果是，肿瘤在生物体内增大。实际上，肿瘤局部的PD-L1表达量与癌症患者的预后不良率存在相关关系。像这样，PD-L1、PD-1及CTLA-4参与免疫调控，因此也被称为免疫检查点分子。
近年来，作为新的癌症治疗药，针对免疫检查点分子的抗体受到关注。包含这些抗体作为有效成分的制剂也被称为免疫检查点抑制剂。免疫检查点抑制剂通过阻碍抑制T细胞的活化的上述分子而促进T细胞的活化，增强该T细胞的抗肿瘤应答性。即，利用免疫检查点抑制剂的治疗中，通过给药上述抗体而活化生物体的免疫状态，从而消灭肿瘤。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:Agata Y.等,Expression of the PD-1antigen on the surfaceof stimulated mouse T and B lymphocytes.Int.Immunol.,1996,vol.8,p.765-772
发明内容
发明要解决的课题
期望开发出能够以高精度来判定免疫检查点抑制剂的奏效性预测的检测。到目前为止，已知悉对采自癌症患者的肿瘤组织进行免疫染色并确认PD-L1阳性肿瘤细胞的比例、从而预测抗PD-1抗体药和抗PD-L1抗体药的有效性的方法。本发明的课题在于，提供可以进行免疫检查点抑制剂的奏效性的预测的新方法。
用于解决课题的方案
本发明提供判定免疫检查点抑制剂的奏效性的方法，其包括：测定采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的工序；和基于测定结果，判定免疫检查点抑制剂对该被检者的奏效性的工序，该游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少1种。
本发明提供一种癌症治疗方法，其包括：测定采自癌症患者的液体试样中的游离蛋白质标志物的工序；基于测定结果，判定免疫检查点抑制剂对该患者的奏效性的工序；和对被判定为免疫检查点抑制剂奏效的患者给药免疫检查点抑制剂的工序，该游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少1种。
本发明提供一种含有免疫检查点抑制剂的癌症治疗用药物组合物，其特征在于，给药于通过本实施方式的判定方法而判定为免疫检查点抑制剂奏效的癌症患者；以及，提供一种含有免疫检查点抑制剂的癌症治疗剂，其特征在于，对通过本实施方式的判定方法而判定为免疫检查点抑制剂奏效的癌症患者进行给药。
本发明提供一种游离蛋白质标志物的测定值的取得方法，其包括取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值的工序，该游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少1种，在取得的游离蛋白质标志物的测定值低于对应于各标志物的规定阈值时，表示免疫检查点抑制剂对该被检者奏效。
本发明提供用于辅助上述判定的方法的试剂盒，其包含选自下述试剂中的至少1种试剂：包含能够与游离CTLA-4特异性结合的物质的试剂、包含能够与游离PD-1特异性结合的物质的试剂、及包含能够与游离PD-L1特异性结合的物质的试剂。
本发明提供一种辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法，其包括：进行采自被检者的肿瘤组织的免疫染色，计算PD-L1阳性肿瘤细胞的比例的工序；测定采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的工序；和基于计算结果和测定结果判定免疫检查点抑制剂对被检者的奏效性的工序，该游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少1种。
本发明提供一种免疫检查点抑制剂的奏效性的判定装置，其具备包含处理器及处于该处理器控制下的存储器的计算机，该存储器中记录有计算机程序，所述计算机程序用于使上述计算机执行取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值的步骤、和基于该标志物的测定值判定免疫检查点抑制剂对该被检者的奏效性的步骤，该游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少1种。
本发明提供一种游离蛋白质标志物的测定值的取得装置，其具备包含处理器及处于该处理器控制下的存储器的计算机，该存储器中记录有计算机程序，所述计算机程序用于使上述计算机执行取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值的步骤，该游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少1种，在取得的游离蛋白质标志物的测定值低于对应于各标志物的规定阈值时，表示免疫检查点抑制剂对该被检者奏效。
本发明提供一种用于判定免疫检查点抑制剂的奏效性的计算机程序，其记录在计算机可读取的介质中，该计算机程序用于使该计算机执行取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值的步骤、和基于该标志物的测定值判定免疫检查点抑制剂对该被检者的奏效性的步骤，该游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少1种。
发明的效果
根据本发明，能够在对被检者给药免疫检查点抑制剂之前判定免疫检查点抑制剂对该被检者是否奏效。
附图说明
图1A为示出本实施方式的试剂盒的一例的概要图。
图1B为示出本实施方式的试剂盒的一例的概要图。
图1C为示出本实施方式的试剂盒的一例的概要图。
图2为示出免疫检查点抑制剂的奏效性的判定装置的一例的概要图。
图3为示出上述判定装置的硬件构成的框图。
图4A为使用上述判定装置的免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的流程图。
图4B为使用上述判定装置的免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的流程图。
图4C为使用上述判定装置的免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的流程图。
图5为示出游离蛋白质标志物的测定值的取得装置的处理步骤的流程图。
图6A为示出被归类为PD-L1阴性病例的肺癌症患者的、免疫检查点抑制剂给药前的血浆中的游离PD-1的测定值(pg/mL)的分布的坐标图。
图6B为示出被归类为PD-L1阴性病例的肺癌症患者的、免疫检查点抑制剂给药前的血浆中的游离CTLA-4的测定值(pg/mL)的分布的坐标图。
图6C为示出被归类为PD-L1阴性病例的肺癌症患者的、免疫检查点抑制剂给药前的血浆中的游离PD-L1的测定值(pg/mL)的分布的坐标图。
图7为将基于PD-L1的免疫组织染色的判定和基于游离蛋白质标志物的测定值的判定组合而成的免疫检查点抑制剂的奏效性的判定流程。
图8A为示出给药了免疫检查点抑制剂的食道癌症患者的、游离PD-1的测定值与总生存期(OS)的相关性的生存率曲线。
图8B为示出给药了免疫检查点抑制剂的食道癌症患者的、游离CTLA-4的测定值与OS的相关性的生存率曲线。
图8C为示出给药了免疫检查点抑制剂的食道癌症患者的、游离PD-L1的测定值与OS的相关性的生存率曲线。
图9A为示出给药了免疫检查点抑制剂的子宫内膜癌患者的、游离PD-1的测定值与OS的相关性的生存率曲线。
图9B为示出给药了免疫检查点抑制剂的子宫内膜癌患者的、游离CTLA-4的测定值与OS的相关性的生存率曲线。
图9C为示出给药了免疫检查点抑制剂的子宫内膜癌患者的、游离PD-L1的测定值与OS的相关性的生存率曲线。
具体实施方式
[1.免疫检查点抑制剂的奏效性的判定方法]
本实施方式的免疫检查点抑制剂的奏效性的判定方法(以下也称为“判定方法”)首先测定作为采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的、选自游离PD-1、游离CTLA-4及游离PD-L1中的至少1种。优选的实施方式中，测定选自游离PD-1、游离CTLA-4及游离PD-L1中的至少2种。更优选的实施方式中，测定游离PD-1、游离CTLA-4及游离PD-L1。
免疫检查点抑制剂只要为包含抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体及抗PD-L1抗体中的至少一种作为有效成分的制剂即可。作为包含抗PD-1抗体作为有效成分的制剂，纳武单抗、派姆单抗等是公知的。作为包含抗PD-L1抗体作为有效成分的制剂，阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐鲁单抗等是公知的。作为包含抗CTLA-4抗体作为有效成分的制剂，伊匹单抗等是公知的。本实施方式的判定方法特别适合于包含抗PD-1抗体作为有效成分的制剂的奏效性的判定。
作为本实施方式的方法中的被检者，可列举例如怀疑罹患癌症的人及癌症患者。本说明书中，“癌症患者”包括除去肿瘤组织后的被检者。除去肿瘤组织后，作为辅助化学疗法，有时会给药免疫检查点抑制剂。本实施方式的判定方法也可用于判定用于辅助化学疗法的免疫检查点抑制剂的奏效性。作为癌症患者，优选接受免疫检查点抑制剂治疗之前的癌症患者。被检者可以接受过免疫检查点抑制剂以外的治疗。作为此种治疗，可列举手术、放射线照射、化学疗法及这些的组合等。癌症种类没有特别限定，可列举例如实体癌及血液癌等各种癌症。作为实体癌，可列举例如肺癌、食道癌、子宫内膜癌、肾癌、卵巢癌、黑素瘤、胃癌、结肠癌等。作为血液癌，可列举例如白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等。这些中，肺癌(特别是非小细胞肺癌)、食道癌及子宫内膜癌特别适合于本实施方式的判定方法。
如上所述，通过对采自癌症患者的肿瘤组织进行免疫染色并确认PD-L1阳性肿瘤细胞的比例、从而预测免疫检查点抑制剂的有效性的方法是已知的。但是，该方法中使用肿瘤组织，因此不能适用于例如由于身体负担等原因无法采集肿瘤组织的被检者。另一方面，本实施方式的判定方法可以使用血液试样等通过侵入性低的方法采集的试样。即，本实施方式的判定方法也可以适用于难以采集肿瘤组织的被检者。另外，免疫染色由于检查手法烦杂而不适合自动化。与此相对地，液体试样中的游离蛋白质标志物的测定适合于自动化，从推进病理检查的高效率化的观点出发，优选本实施方式的判定方法。
还能够将上述的免疫染色与本实施方式的判定方法组合使用。由此可提高判定精度。例如，如后述的实施例所示，本实施方式的判定方法可以从PD-L1阳性肿瘤细胞的比例低于规定值的患者中选出免疫检查点抑制剂奏效的患者。这种情况下，被检者为通过肿瘤组织的免疫染色而被判定为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例低于规定值的癌症患者。
肿瘤组织的免疫染色可以通过该技术领域中公知的免疫组织染色法来进行。特别优选按照病理诊断指导手册等使用特异性识别免疫检查点分子的抗体进行免疫组织染色。免疫组织染色可以使用市售的染色用试剂盒来进行。作为用于肿瘤组织的PD-L1免疫染色的试剂盒，PD-L1 IHC 22C3 pharmDx“DAKO”(Agilent Technologies,Inc.)、PD-L1 IHC28-8 pharmDx“DAKO”(Agilent Technologies,Inc.)等是公知的。
肿瘤组织的PD-L1免疫染色例如可以如下进行。首先，从被检者中采集肿瘤组织，将得到的肿瘤组织在1小时以内用10％中性缓冲福尔马林固定。固定时间设为12小时以上且72小时以内。将经固定的肿瘤组织用乙醇脱水。将经脱水的肿瘤组织浸渍于二甲苯而进行透明处理。将处理后的肿瘤组织浸渍于已熔融的石蜡(60℃以下)并冷却，得到福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织标本。将得到的FFPE组织标本切成4～5μm的厚度，贴在载玻片上。对得到的薄切片添加二甲苯进行脱石蜡处理。将经脱石蜡处理的薄切片浸渍于乙醇而进行亲水化处理。将贴有经亲水化处理的薄切片的载玻片放入市售的抗原活化液中并加热，由此进行抗原活化处理。对于处理后的薄切片，使用抗PD-L1抗体进行免疫组织染色，得到组织标本。
PD-L1阳性肿瘤细胞的比例为通过肿瘤组织的免疫染色而得到的组织标本中的、呈现部分或完全的细胞膜染色的肿瘤细胞相对于全部肿瘤细胞的比例。作为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例，可以使用PD-L1 IHC 22C3 pharmDx“DAKO”的染色结果判定手册所定义的Tumor Proportion Score(TPS，肿瘤比例评分)。TPS可以由下式来计算。式中，“肿瘤细胞总数”为通过肿瘤组织的HE染色而得到的组织标本中的全部肿瘤细胞数，需要为至少100个。“PD-L1阳性肿瘤细胞数”为组织标本中的呈现部分或完全的细胞膜PD-L1免疫染色的肿瘤细胞数。PD-L1阳性肿瘤细胞中不包括巨噬细胞、淋巴细胞等肿瘤相关免疫细胞。关于各细胞数，可通过光学显微镜下的观察来计数。
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Figure BDA0002702239210000081
上述的规定值为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例的临界值。规定值本身没有特别限定，可根据免疫染色中使用的抗体(或染色用试剂盒)及成为对象的癌症种类等适当决定。例如在使用PD-L1 IHC 22C3 pharmDx“DAKO”对非小细胞肺癌的肿瘤组织进行免疫染色时，将50％的TPS作为规定值来决定利用派姆单抗进行一次治疗的对象。另外，将1％的TPS作为规定值来决定利用派姆单抗进行二次治疗的对象。具体而言，在TPS为50％以上时判定为PD-L1阳性(高表达)，在TPS为1％以上且低于50％时判定为PD-L1阳性(低表达)，在TPS低于1％时判定为PD-L1阴性(不表达)。被判定为PD-L1阳性(高表达)的被检者成为利用派姆单抗进行一次治疗的对象。被判定为PD-L1阳性(低表达)的被检者被从一次治疗的对象中排除，但是成为利用派姆单抗进行二次治疗的对象。被判定为PD-L1阴性的被检者则被排除在利用派姆单抗进行治疗的对象之外。
本实施方式中的被检者可以是被判定为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例低于规定值的癌症患者。被判定为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例低于规定值的癌症患者可以为从利用免疫检查点抑制剂进行一次治疗的对象被排除的患者。
液体试样只要是采自被检者、可能包含游离蛋白质的液状的试样就没有特别限定。作为这类液体试样，可列举例如血液试样、脑脊髓液、胸水、腹水、淋巴液、尿等。在本实施方式中，作为液体试样，优选血液试样。作为血液试样，可列举全血、血浆及血清，特别优选血浆及血清。
在液体试样包含细胞等不溶性的夹杂物时，可以通过例如离心分离、过滤等公知手段从液体试样中除去夹杂物。另外，液体试样可以根据需要用合适的水性介质稀释。这样的水性介质只要不妨碍后述的测定就没有特别限定，可列举例如水、生理盐水、缓冲液等。缓冲液只要在中性附近的pH(例如6以上且8以下的pH)下具有缓冲作用就没有特别限定。作为这样的缓冲液，可列举例如HEPES、MES、Tris、PIPES等GOOD’S缓冲液、磷酸缓冲生理盐水(PBS)等。
游离PD-1、游离CTLA-4及游离PD-L1均为游离蛋白质。以下也将游离PD-1、游离CTLA-4及游离PD-L1分别称为“sPD-1”、“sCTLA-4”及“sPD-L1”。本说明书中，“游离蛋白质”是指从细胞表面脱离而存在于该细胞的外部(液体试样中)的蛋白质。这样的游离蛋白质可以为溶解于液体试样的液体成分(液相)的蛋白质、包封在囊泡中的蛋白质及存在于囊泡表面的蛋白质中的任一种。囊泡只要是由膜构成的泡囊就没有特别限定。囊泡可以在内部包含液相。优选的囊泡为细胞外泡囊，可列举例如外泌体、微囊泡、凋亡小体等。
测定游离蛋白质标志物的手段只要可以取得反映液体试样中包含的游离蛋白质标志物的量或浓度的值(以下也称为“标志物的测定值”)就没有特别限定。在本实施方式中，优选使用能够与游离蛋白质标志物特异性结合的物质来捕捉该标志物的方法。通过用本技术中公知的方法检测被这样的物质捕捉的游离蛋白质标志物，可以测定液体试样中包含的游离蛋白质标志物。
作为能够与游离蛋白质标志物特异性结合的物质，可列举例如抗体、适体等，这些中特别优选抗体。针对PD-1、CTLA-4及PD-L1各蛋白质的抗体本身在该技术中是公知的，通常是能够获得的。针对游离蛋白质标志物的抗体只要是可以与游离蛋白质标志物特异性结合的抗体就没有特别限定。这类抗体可以为单克隆抗体、多克隆抗体及它们的片段(例如Fab、F(ab')2等)中的任一种。另外，可以使用市售的抗体。
使用抗体测定游离蛋白质标志物的方法没有特别限定，可以从公知的免疫学测定法中适当选择。本实施方式中优选酶联免疫吸附法(ELISA法)，特别优选夹心ELISA法。作为测定工序的一例，以下说明利用夹心ELISA法测定液体试样中的游离蛋白质标志物的情况。
首先，在固相上形成包含游离蛋白质标志物、用于捕捉游离蛋白质标志物的抗体(以下也称为“捕捉用抗体”)、和用于检测游离蛋白质标志物的抗体(以下也称为“检测用抗体”)的复合物。该复合物可以通过将可包含游离蛋白质标志物的液体试样、捕捉用抗体、和检测用抗体混合来形成。并且，通过使包含复合物的溶液与可以固定捕捉用抗体的固相接触，可以在固相上形成上述的复合物。或者，也可以使用预先固定有捕捉用抗体的固相。即，通过使固定有捕捉用抗体的固相、液体试样、和检测用抗体接触，可以在固相上形成上述的复合物。需要说明的是，在捕捉用抗体及检测用抗体均为单克隆抗体的情况下，优选彼此的表位不同。
捕捉用抗体向固相固定的方式没有特别限定。例如，可以使捕捉用抗体和固相直接结合，也可以使捕捉用抗体和固相借助其它物质而间接结合。作为直接结合，可列举例如物理性吸附等。作为间接结合，可列举例如介由生物素与亲和素或链霉亲和素(以下也称为“亲和素类”)的组合的结合。这种情况下，可以通过将捕捉用抗体预先用生物素修饰、在固相上预先结合亲和素类，从而介由生物素和亲和素类的结合而使捕捉用抗体和固相间接结合。
固相的材料没有特别限定，可以从例如有机高分子化合物、无机化合物、生物体高分子等中选择。作为有机高分子化合物，可列举胶乳、聚苯乙烯、聚丙烯等。作为无机化合物，可列举磁性体(氧化铁、氧化铬及铁素体等)、二氧化硅、氧化铝、玻璃等。作为生物高分子，可列举不溶性琼脂糖、不溶性葡聚糖、明胶、纤维素等。可以将这些中的两种以上组合使用。固相的形状没有特别限定，可列举例如粒子、膜、微孔板、微管、试管等。这些中，优选粒子，特别优选磁性粒子。
本实施方式中，在复合物的形成工序与复合物的检测工序之间可以进行B/F(Bound/Free)分离，所述B/F分离除去未形成复合物的未反应的游离成分。未反应的游离成分是指不构成复合物的成分。例如，可列举未与游离蛋白质标志物结合的捕捉用抗体及检测用抗体等。B/F分离的手段没有特别限定，若固相为粒子，则可以通过利用离心分离仅回收捕捉了复合物的固相而进行B/F分离。若固相为微孔板、微管等容器，则可以通过除去包含未反应的游离成分的液体而进行B/F分离。另外，在固相为磁性粒子的情况下，可以在用磁体通过磁力而固定磁性粒子的位置的状态下通过喷嘴抽吸除去包含未反应的游离成分的液体，从而进行B/F分离，从自动化的观点出发是优选的。在除去未反应的游离成分后，可以用PBS等合适的水性介质洗涤捕捉有复合物的固相。
然后，用该技术中公知的方法检测形成在固相上的复合物，从而可以取得液体试样中包含的游离蛋白质标志物的测定值。例如，在使用用标记物标记后的抗体作为检测用抗体时，可以通过检测该标记物所产生的信号来取得液体试样中的标志物的测定值。或者，在使用针对检测用抗体的标记二抗时，也可以同样地取得液体试样中的标志物的测定值。
另外，作为使用抗体测定游离蛋白质标志物的方法的例子，还可以使用日本特开平1-254868号公报记载的免疫复合物转移法。
本说明书中，“检测信号”包括定性检测有无信号的方式、对信号强度进行定量的方式、及半定量地检测信号的强度的方式。半定量地检测是指：如“不产生信号”、“弱”、“中”、“强”等分阶段地表示信号强度的方式。在本实施方式中，优选定量或半定量地检测信号强度。
标记物没有特别限定。标记物可以是例如本身产生信号的物质(以下也称为“信号发生物质”)，也可以是催化其它物质的反应而产生信号的物质。作为信号发生物质，可列举例如荧光物质、放射性同位素等。作为催化其它物质的反应而产生能检测的信号的物质，可列举例如酶。作为酶，可列举碱性磷酸酶、过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶等。作为荧光物质，可列举荧光素异硫氰酸酯(FITC)、罗丹明、Alexa Fluor(注册商标)等荧光染料、GFP等荧光蛋白等。作为放射性同位素，可列举125I、14C、32P等。这些中，作为标记物，优选酶，特别优选碱性磷酸酶及过氧化物酶。
检测信号的方法本身在该技术中是公知的。在本实施方式中，可适当选择与来自上述标记物的信号的种类相应的测定方法。例如，在标记物为酶时可以如下进行：使用分光光度计等公知的装置，测定使针对该酶的底物进行反应而产生的光、颜色等信号。
酶的底物可以根据该酶的种类从公知的底物中适当选择。例如，在使用碱性磷酸酶作为酶时，作为底物，可列举CDP-Star(注册商标)(4-氯-3-(甲氧基螺[1,2-二氧杂环丁烷-3,2'-(5'-氯)三环[3.3.1.13,7]癸烷]-4-基)苯基磷酸二钠)、CSPD(注册商标)(3-(4-甲氧基螺[1,2-二氧杂环丁烷-3,2-(5'-氯)三环[3.3.1.13,7]癸烷]-4-基)苯基磷酸二钠)等化学发光底物；5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(BCIP)、5-溴-6-氯-吲哚基磷酸二钠、对硝基苯基磷酸等显色底物。另外，在使用过氧化物酶作为酶时，作为底物，可列举鲁米诺及其衍生物等化学发光底物、2,2'-联氮基双(3-乙基噻唑啉-6-磺酸铵)(ABTS)、1,2-亚苯基二胺(OPD)、3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)等显色底物。
在标记物为放射性同位素时，可以使用闪烁计数器等公知的装置测定作为信号的放射线。另外，在标记物为荧光物质时，可以使用荧光酶标仪等公知的装置测定作为信号的荧光。需要说明的是，可以根据使用的荧光物质的种类来适当决定激发波长及荧光波长。
可以使用信号的检测结果来作为标志物的测定值。例如，在定量检测信号强度时，可以使用信号强度的测定值本身或由该测定值取得的值作为标志物的测定值。作为由信号强度的测定值取得的值，可列举例如由该测定值减去阴性对照试样的测定值或背景的值而得的值、将该测定值代入标准曲线而取得的值等。阴性对照试样可以适当选择，可列举例如由健康人得到的液体试样等。
在本实施方式中，优选通过使用固定于磁性粒子的捕捉用抗体和用标记物标记的检测用抗体的夹心ELISA法测定液体试样中包含的游离蛋白质标志物。这种情况下，可以使用HISCL系列(希森美康株式会社制)等市售的全自动免疫测定装置进行测定。
接着，本实施方式的判定方法基于测定结果判定免疫检查点抑制剂对被检者的奏效性。在本实施方式中，优选比较由测定而取得的游离蛋白质标志物的测定值与对应于各标志物的规定阈值、并基于比较结果进行判定。具体而言，在该测定值低于该规定阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在该测定值为该规定阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂不对被检者奏效。
在取得sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1中的任意1者的测定值时，可以如下所述地进行判定。
一实施方式中，在取得sPD-1的测定值的情况下，比较sPD-1的测定值与对应于sPD-1的阈值。在sPD-1的测定值低于阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在sPD-1的测定值为阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
另一实施方式中，在取得sCTLA-4的测定值时，比较sCTLA-4的测定值与对应于sCTLA-4的阈值。在sCTLA-4的测定值低于阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在sCTLA-4的测定值为阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
另一实施方式中，在取得sPD-L1的测定值时，比较sPD-L1的测定值与对应于sPD-L1的阈值。在sPD-L1的测定值低于阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在sPD-L1的测定值为阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
在取得sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1中的两者或三者的测定值时，在取得的标志物的全部测定值低于对应于各标志物的规定阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在取得的标志物的测定值中的至少1者为对应于该标志物的规定阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。具体如下述。
一实施方式中，在取得sPD-1及sCTLA-4的测定值时，比较sPD-1的测定值与第1阈值，比较sCTLA-4的测定值与第2阈值。在该例中，第1阈值为对应于sPD-1的阈值，第2阈值为对应于sCTLA-4的阈值。在sPD-1的测定值低于第1阈值且sCTLA-4的测定值低于第2阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在sPD-1的测定值为第1阈值以上或sCTLA-4的测定值为第2阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
另一实施方式中，在取得sPD-1及sPD-L1的测定值的情况下，比较sPD-1的测定值与第1阈值，比较sPD-L1的测定值与第2阈值。该例中，第1阈值为对应于sPD-1的阈值，第2阈值为对应于sPD-L1的阈值。在sPD-1的测定值低于第1阈值且sPD-L1的测定值低于第2阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在sPD-1的测定值为第1阈值以上或sPD-L1的测定值为第2阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
另一实施方式中，在取得sCTLA-4及sPD-L1的测定值的情况下，比较sCTLA-4的测定值与第1阈值，比较sPD-L1的测定值与第2阈值。该例中，第1阈值为对应于sCTLA-4的阈值，第2阈值为对应于sPD-L1的阈值。在sCTLA-4的测定值低于第1阈值且sPD-L1的测定值低于第2阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在sCTLA-4的测定值为第1阈值以上或sPD-L1的测定值为第2阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
另一实施方式中，在取得sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1的测定值时，比较sPD-1的测定值与第1阈值，比较sCTLA-4的测定值与第2阈值，比较sPD-L1的测定值与第3阈值。该例中，第1阈值为对应于sPD-1的阈值，第2阈值为对应于sCTLA-4的阈值，第3阈值为对应于sPD-L1的阈值。在sPD-1的测定值低于第1阈值、sCTLA-4的测定值低于第2阈值且sPD-L1的测定值低于第3阈值时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在sPD-1的测定值为第1阈值以上、或sCTLA-4的测定值为第2阈值以上、或sPD-L1的测定值为第3阈值以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
在本实施方式中，可以对取得的游离蛋白质标志物的测定值与对应于各标志物的阈值的比较结果进行评分。例如，在取得的游离蛋白质标志物的测定值低于对应于该标志物的阈值时，将评分设为0。另外，在取得的游离蛋白质标志物的测定值为对应于该标志物的阈值以上时，将评分设为1。在取得2个以上的游离蛋白质标志物的测定值时，可以对各标志物的评分相加。例如，在取得sPD-1及sCTLA-4的测定值的情况下，在sPD-1的测定值及sCTLA-4的测定值两者低于各自对应的阈值时，评分为0。在sPD-1的测定值及sCTLA-4的测定值中的任一者为其所对应的阈值以上时，评分为1。在sPD-1的测定值及sCTLA-4的测定值两者为各自对应的阈值以上时，评分为2。在取得sPD-L1的测定值而代替sPD-1的测定值及sCTLA-4的测定值中的任一者时，也可以同样地计算评分。
在取得sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1的测定值的情况下，在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值均低于各自对应的阈值时，评分为0。在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值中的任意一者为其所对应的阈值以上时，评分为1。在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值中的任意两者为各自对应的阈值以上时，评分为2。在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值均为各自对应的阈值以上时，评分为3。
在本实施方式中，在评分为0时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另外，在评分为1以上时，可以判定为免疫检查点抑制剂对被检者不奏效。
上述的对应于各标志物的规定阈值可以适当设定。规定阈值例如可以基于采自癌症患者的液体试样的游离蛋白质标志物的数据而设定。例如，可以如下所述地设定规定阈值。首先，由未给药免疫检查点抑制剂的多名癌症患者采集液体试样。在采集液体试样后，对癌症患者给药免疫检查点抑制剂，观察经过。基于肿瘤大小的变化、无进展生存时间(PFS)、总生存期(OS)等公知的评价指标确认免疫检查点抑制剂的奏效性。然后，将液体试样归类为免疫检查点抑制剂已奏效的患者的试样和免疫检查点抑制剂未奏效的患者的试样。对各试样测定游离蛋白质标志物，取得测定值。然后，由取得的测定值求出能够区分免疫检查点抑制剂已奏效的患者和免疫检查点抑制剂未奏效的患者的值，将该值设为规定阈值。在设定规定阈值时，优选也考虑判定的灵敏度、特异性、阳性的命中率及阴性的命中率。
本实施方式的判定方法能够在免疫检查点抑制剂给药前判定免疫检查点抑制剂对被检者是否奏效。由此向医生等提供辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的信息。另外，本实施方式的判定方法也可以换种说法而称为免疫检查点抑制剂的效果的预测方法。
[2.游离蛋白质标志物的测定值的取得方法]
上述的判定方法中得到的游离蛋白质标志物的测定值也可称为关于免疫检查点抑制剂对被检者的奏效性的信息。因此，本发明的范围中也包括游离蛋白质标志物的测定值的取得方法(以下也称为“取得方法”)。
本实施方式的取得方法中首先测定采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物。游离蛋白质标志物为选自sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1中的至少1种。优选游离蛋白质标志物为选自sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1中的至少两种。更优选游离蛋白质标志物为sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1。关于被检者、液体试样、游离蛋白质标志物的测定手段，与上述的判定方法中所述相同。优选的实施方式中，被检者为肺癌(特别是非小细胞肺癌)的患者、食道癌症患者及子宫内膜癌患者。另外，被检者可以为除去肿瘤后的癌症患者。
本实施方式的取得方法中，被检者可以为通过肿瘤组织的免疫染色而被判定为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例低于规定值的癌症患者。关于肿瘤组织的免疫染色、PD-L1阳性肿瘤细胞的比例、规定值及被检者的癌症的种类，与上述判定方法中所述相同。在本实施方式中，被检者可以为基于肿瘤组织的免疫染色的结果而被排除在利用包含抗PD-1抗体作为有效成分的免疫检查点抑制剂进行一次治疗的对象之外的患者。
本实施方式的取得方法中得到的游离蛋白质标志物的测定值成为通过与对应于各标志物的规定阈值的比较而示出免疫检查点抑制剂对被检者的奏效性的信息。例如，在取得的游离蛋白质标志物的测定值均低于对应于各标志物的规定阈值时，取得的游离蛋白质标志物的测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。
一实施方式中，在取得的sPD-1的测定值低于对应于sPD-1的阈值时，该测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另一实施方式中，在取得的sCTLA-4的测定值低于对应于sCTLA-4的阈值时，该测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另一实施方式中，在取得的sPD-L1的测定值低于对应于sPD-L1的阈值时，该测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。
一实施方式中，在取得的sPD-1的测定值低于第1阈值且取得的sCTLA-4的测定值低于第2阈值时，这些测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另一实施方式中，在取得的sPD-1的测定值低于第1阈值且取得的sPD-L1的测定值低于第2阈值时，这些测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。另一实施方式中，在取得的sCTLA-4的测定值低于第1阈值且取得的sPD-L1的测定值低于第2阈值时，这些测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。
一实施方式中，在取得的sPD-1的测定值低于第1阈值、且取得的sCTLA-4的测定值低于第2阈值、且取得的sPD-L1的测定值低于第3阈值时，这些测定值表示免疫检查点抑制剂对被检者奏效。需要说明的是，关于规定阈值，与上述判定方法中所述相同。
本实施方式的取得方法中，免疫检查点抑制剂可以为包含抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体及抗PD-L1抗体中的至少一种作为有效成分的制剂。作为包含抗PD-1抗体作为有效成分的制剂，纳武单抗、派姆单抗等是公知的。作为包含抗PD-L1抗体作为有效成分的制剂，阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐鲁单抗等是公知的。作为包含抗CTLA-4抗体作为有效成分的制剂，伊匹单抗等是公知的。
[3.试剂盒]
本发明的范围中还包括用于上述判定方法的试剂盒。本实施方式的试剂盒包含选自下述试剂中的至少1种试剂：包含能够与sPD-1特异性结合的物质的试剂、包含能够与sCTLA-4特异性结合的物质的试剂、及包含能够与游离PD-L1特异性结合的物质的试剂。优选试剂盒含有选自包含能够与sPD-1特异性结合的物质的试剂、包含能够与sCTLA-4特异性结合的物质的试剂、及包含能够与sPD-L1特异性结合的物质的试剂中的至少两种试剂。更优选含有包含能够与sPD-1特异性结合的物质的试剂、包含能够与sCTLA-4特异性结合的物质的试剂、及包含能够与sPD-L1特异性结合的物质的试剂。作为能够与各游离蛋白质标志物特异性结合的物质，可列举例如抗体、适体等。这些中，特别优选抗体。
将本实施方式的试剂盒的一例示于图1A。图1A中，11表示试剂盒，12表示第1容器，其收容包含能够与游离PD-1特异性结合的物质的试剂，13表示第2容器，其收容包含能够与游离CTLA-4特异性结合的物质的试剂，14表示包装箱，15表示附加文件。虽然未图示，但是该例的试剂盒可以包含第3容器，其收容包含能够与游离PD-L1特异性结合的物质的试剂。
优选的实施方式中，本实施方式的试剂盒包含各游离蛋白质标志物的捕捉用抗体及检测用抗体。检测用抗体可以被标记物标记。关于捕捉用抗体、检测用抗体及标记物，与上述本实施方式的判定方法中所述相同。另外，试剂盒可以包含固相和底物。关于固相及底物，与上述的本实施方式的判定方法中所述相同。
将另一实施方式的试剂盒的一例示于图1B。图1B中，21表示试剂盒，22表示第1容器，其收容包含游离PD-1的捕捉用抗体的试剂，23表示第2容器，其收容包含游离PD-1的检测用标记抗体的试剂，24表示第3容器，其收容包含游离CTLA-4的捕捉用抗体的试剂，25表示第4容器，其收容包含游离CTLA-4的检测用标记抗体的试剂，26表示附加文件，27表示包装箱。虽然未图示，该例的试剂盒可以包含收容包含游离PD-L1的捕捉用抗体的试剂的第5容器、及收容包含游离PD-L1的检测用标记抗体的试剂的第6容器。
在上述任一试剂盒中，均优选包含校准品。作为校准品的一例，可列举用于定量游离PD-1的校准品(PD-1用校准品)、用于定量游离CTLA-4的校准品(CTLA-4用校准品)、及用于定量游离PD-L1的校准品(PD-L1用校准品)。PD-1用校准品例如可以具备不含PD-1的缓冲液(阴性对照)、和以已知浓度包含PD-1的缓冲液。CTLA-4用校准品例如可以具备不含CTLA-4的缓冲液(阴性对照)、和以已知浓度包含CTLA-4的缓冲液。PD-L1用校准品例如具备不含PD-L1的缓冲液(阴性对照)、和以已知浓度包含PD-L1的缓冲液。
另一校准品的例子为具备不含PD-1、CTLA-4及PD-L1中的任一者的缓冲液(阴性对照)、以已知浓度包含PD-1的缓冲液、以已知浓度包含CTLA-4的缓冲液、以及以已知浓度包含PD-L1的缓冲液。另一校准品的例子为具备不含PD-1、CTLA-4及PD-L1中的任一者的缓冲液(阴性对照)以及分别以已知浓度包含选自PD-1、CTLA-4及PD-L1中的两种的缓冲液。又一校准品的例子为具备不含PD-1、CTLA-4及PD-L1中的任一者的缓冲液(阴性对照)以及分别以已知浓度包含PD-1、CTLA-4及PD-L1的缓冲液。
将另一实施方式的试剂盒的一例示于图1C。图1C中，31表示试剂盒，32表示第1容器，其收容包含游离PD-1的捕捉用抗体的试剂，33表示第2容器，其收容包含游离PD-1的检测用标记抗体的试剂，34表示第3容器，其收容包含游离CTLA-4的捕捉用抗体的试剂，35表示第4容器，其收容包含游离CTLA-4的检测用标记抗体的试剂，36表示第5容器，其收容不含PD-1、CTLA-4及PD-L1中的任一者的缓冲液，37表示第6容器，其收容分别以规定浓度含有PD-1及CTLA-4的缓冲液，38表示包装箱，39表示附加文件。不含PD-1、CTLA-4及PD-L1中的任一者的缓冲液以及分别以规定浓度含有PD-1及CTLA-4的缓冲液可以作为用于定量PD-1及CTLA-4的校准品来使用。虽然未图示，该例的试剂盒可以含有收容包含游离PD-L1的捕捉用抗体的试剂的第7容器、收容包含游离PD-L1的检测用标记抗体的试剂的第8容器、及收容以规定浓度含有PD-L1的缓冲液(PD-L1定量用校准品)的第9容器。
[4.装置及计算机程序]
本发明的范围中还包括用于实施上述的本实施方式的判定方法的装置。这样的装置为免疫检查点抑制剂的奏效性的判定装置(以下也简称为“判定装置”)。另外，本发明的范围中还包括用于使计算机执行上述的本实施方式的判定方法的计算机程序。这样的计算机程序为用于判定免疫检查点抑制剂的奏效性的计算机程序。进一步地，本发明的范围中还包括用于实施上述的本实施方式的取得方法的装置。这样的装置为游离蛋白质标志物的测定值的取得装置。
以下参照附图说明用于实施上述的本实施方式的方法的装置的一例。但是，本实施方式不仅限于该例所示的方式。图2为判定装置的概要图。图2所示的判定装置10包括免疫测定装置20、和与该免疫测定装置20连接的计算机系统30。游离蛋白质标志物的测定值的取得装置的硬件构成也与判定装置10相同。
本实施方式中，免疫测定装置的种类没有特别限定，可以根据游离蛋白质标志物的测定方法适当选择。在图2所示的例子中，免疫测定装置20为：能够检测由夹心ELISA法产生的化学发光信号的市售的自动免疫测定装置，所述夹心ELISA法使用固定有捕捉用抗体的磁性粒子及经酶标记的检测用抗体。免疫测定装置20只要能够检测基于所用的标记物的信号就没有特别限定，可以根据标记物的种类适当选择。
当将包含固定有捕捉用抗体的磁性粒子的试剂、包含经酶标记的检测用抗体的试剂、及采自被检者的液体试样设置于免疫测定装置20，则该免疫测定装置20使用各试剂执行抗原抗体反应，作为基于与游离蛋白质标志物特异性结合的酶标记抗体的光学信息，取得化学发光信号，将得到的光学信息发送到计算机系统30。
计算机系统30包含计算机主体300、输入部301、和显示被检体信息或判定结果等的显示部302。计算机系统30从免疫测定装置20接收光学信息。然后，计算机系统30的处理器基于光学信息执行安装在硬盘313的、用于判定免疫检查点抑制剂的奏效性的计算机程序。需要说明的是，计算机系统30可以如图2所示那样为与免疫测定装置20分开的设备，也可以为包封免疫测定装置20的设备。在后者的情况下，计算机系统30本身可以成为判定装置10。可以在市售的自动免疫测定装置中搭载用于判定免疫检查点抑制剂的奏效性的计算机程序。
参照图3，计算机主体300具备CPU(Central Processing Unit)310、ROM(ReadOnly Memory)311、RAM(Random Access Memory)312、硬盘313、输入输出接口314、读取装置315、通信接口316、和图像输出接口317。CPU310、ROM311、RAM312、硬盘313、输入输出接口314、读取装置315、通信接口316及图像输出接口317通过总线318以能够进行数据通信的方式连接。另外，免疫测定装置20通过通信接口316与计算机系统30以能够进行通信的方式连接。
CPU310能够执行存储在ROM311或硬盘313中的程序及下载到RAM312中的程序。CPU310计算游离蛋白质标志物的测定值，读出存储在ROM311或硬盘313中的对应于各标志物的规定阈值，判定免疫检查点抑制剂对被检者是否奏效。CPU310输出判定结果并使其显示在显示部302。
ROM311由掩模ROM、PROM、EPROM、EEPROM等构成。如上所述，ROM311中记录有由CPU310来执行的计算机程序及在执行该计算机程序中使用的数据。ROM311中可以记录对应于各游离蛋白质标志物的规定阈值等用于后述的判定流程的数据。
RAM312由SRAM、DRAM等构成。RAM312在读取记录在ROM311及硬盘313中的程序时使用。在执行这些程序时，还作为CPU310的操作区域来利用RAM312。
硬盘313安装有用于使CPU310执行的操作系统、应用程序(上述的用于癌症判定的计算机程序)等计算机程序及在执行该计算机程序时使用的数据。硬盘313中也可以记录对应于各游离蛋白质标志物的规定阈值等用于后述的判定流程的数据。
读取装置315由软盘驱动器、CD-ROM驱动器、DVD-ROM驱动器等构成。读取装置315可以读取记录在便携型记录介质40中的程序或数据。
输入输出接口314由例如USB、IEEE1394、RS-232C等串行接口、SCSI、IDE、IEEE1284等并行接口、以及由D/A转换器、A/D转换器等形成的模拟接口构成。在输入输出接口314连接有键盘、鼠标等输入部301。操作者能够通过该输入部301向计算机主体300输入各种指令。
通信接口316为例如Ethernet(注册商标)接口等。计算机主体300还能够通过通信接口316向打印机等发送印刷数据。
图像输出接口317连接于由LCD、CRT等构成的显示部302。由此，显示部302可以输出相应于由CPU310提供的图像数据的影像信号。显示部302根据所输入的影像信号而显示图像(画面)。
参照图4A，对由判定装置10执行的、免疫检查点抑制剂的奏效性的判定流程进行说明。这里，以下述情况为例进行说明：由使用固定有捕捉用抗体的磁性粒子及经酶标记的检测用抗体的夹心ELISA法所产生的化学发光信号取得sPD-1的测定值，使用所取得的测定值进行判定。该例子中，第1阈值为对应于sPD-1的阈值。但是，本实施方式不仅限于该例。也可以取得sCTLA-4的测定值或sPD-L1的测定值来代替sPD-1的测定值。
步骤S101中，CPU310由免疫测定装置20取得光学信息(化学发光信号)，由取得的光学信息计算sPD-1的测定值并存储到硬盘313。步骤S102中，CPU310比较计算出的sPD-1的测定值与存储在硬盘313中的第1阈值。在sPD-1的测定值低于第1阈值时，处理进行到步骤S103。步骤S103中，CPU310将免疫检查点抑制剂对被检者奏效的判定结果存储到硬盘313。
另一方面，步骤S102中，sPD-1的测定值为第1阈值以上时，处理进行到步骤S104。步骤S104中，CPU310将免疫检查点抑制剂对被检者不奏效的判定结果存储在硬盘313中。步骤S105中，CPU310输出判定结果，使其显示在显示部302或使其由打印机打印。由此，可以向医生等提供辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的信息。
参照图4B，对由判定装置10执行的、免疫检查点抑制剂的奏效性的判定流程进行说明。这里，以下述情况为例进行说明：由使用固定有捕捉用抗体的磁性粒子及经酶标记的检测用抗体的夹心ELISA法所产生的化学发光信号取得sPD-1及sCTLA-4的测定值，使用所取得的测定值进行判定。该例中，第1阈值为对应于sPD-1的阈值，第2阈值为对应于sCTLA-4的阈值。但是，本实施方式不仅限于该例。也可以取得sPD-L1的测定值，来代替sPD-1及sCTLA-4的测定值中的任一者。
步骤S201中，CPU310由免疫测定装置20取得光学信息(化学发光信号)，由取得的光学信息计算sPD-1及sCTLA-4的测定值并存储到硬盘313。步骤S202中，CPU310比较计算出的sPD-1的测定值与存储在硬盘313中的第1阈值。在sPD-1的测定值低于第1阈值时，处理进行到步骤S203。步骤S203中，CPU310比较计算出的sCTLA-4的测定值与存储在硬盘313的第2阈值。在sCTLA-4的测定值低于第2阈值时，处理进行到步骤S204。步骤S204中，CPU310将免疫检查点抑制剂对被检者奏效的判定结果存储到硬盘313。
另一方面，步骤S202中，在sPD-1的测定值为第1阈值以上时，处理进行到步骤S205。步骤S203中，在sCTLA-4的测定值为第2阈值以上时，处理进行到步骤S205。步骤S205中，CPU310将免疫检查点抑制剂对被检者不奏效的判定结果存储到硬盘313。步骤S206中，CPU310输出判定结果，使其显示在显示部302或使其由打印机打印。由此，可以向医生等提供辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的信息。需要说明的是，该例中，步骤S202及步骤S203的处理顺序可以交换。
参照图4C，对由判定装置10执行的、免疫检查点抑制剂的奏效性的判定流程进行说明。这里以下述情况为例进行说明：除了sPD-1及sCTLA-4的测定值以外，进一步取得sPD-L1的测定值，使用所取得的测定值进行判定。该例中，第1阈值为对应于sPD-1的阈值，第2阈值为对应于sCTLA-4的阈值，第3阈值为对应于sPD-L1的阈值。但是，本实施方式不仅限于该例。
步骤S301中，CPU310由免疫测定装置20取得光学信息(化学发光信号)，由取得的光学信息计算sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1的测定值并存储到硬盘313。步骤S302中，CPU310比较计算出的sPD-1的测定值与存储在硬盘313的第1阈值。在sPD-1的测定值低于第1阈值时，处理进行到步骤S203。步骤S303中，CPU310比较计算出的sCTLA-4的测定值与存储在硬盘313中的第2阈值。在sCTLA-4的测定值低于第2阈值时，处理进行到步骤S304。步骤S304中，CPU310比较计算出的sPD-L1的测定值与存储在硬盘313中的第3阈值。在sPD-L1的测定值低于第3阈值时，处理进行到步骤S305。步骤S305中，CPU310将免疫检查点抑制剂对被检者奏效的判定结果存储到硬盘313。
另一方面，步骤S302中，在sPD-1的测定值为第1阈值以上时，处理进行到步骤S306。步骤S303中，在sCTLA-4的测定值为第2阈值以上时，处理进行到步骤S306。步骤S304中，在sPD-L1的测定值为第3阈值以上时，处理进行到步骤S306。步骤S306中，CPU310将免疫检查点抑制剂对被检者不奏效的判定结果存储到硬盘313。步骤S307中，CPU310输出判定结果，使其显示在显示部302或使其由打印机打印。需要说明的是，该例中，步骤S302、步骤S303及步骤S304的处理顺序可以交换。
参照图5，对由游离蛋白质标志物的测定值的取得装置10执行的处理步骤进行说明。这里以下述情况为例进行说明：由使用固定有捕捉用抗体的磁性粒子及经酶标记的检测用抗体的夹心ELISA法所产生的化学发光信号取得sPD-1的测定值，使用所取得的测定值进行判定。但是，本实施方式不仅限于该例。也可以取得sCTLA-4的测定值或sPD-L1的测定值来代替sPD-1的测定值。在另一实施方式中，可以取得选自sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1中的2个游离蛋白质标志物的测定值。或者，可以取得sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1的测定值。
步骤S401中，CPU310由免疫测定装置20取得光学信息(化学发光信号)，由取得的光学信息计算sPD-1的测定值并存储到硬盘313。步骤S402中，CPU310输出所取得的sPD-1的测定值，使其显示在显示部302或使其由打印机打印。需要说明的是，该例中，可以将对应于该标志物的规定阈值与取得的游离蛋白质标志物的测定值一起进行输出。
由取得装置得到的游离蛋白质标志物的测定值成为通过与对应于各标志物的规定阈值的比较而显示免疫检查点抑制剂对被检者的奏效性的信息。具体而言，与本实施方式的取得方法的说明相同。
本发明中，“免疫检查点抑制剂对被检者奏效”是指“免疫检查点抑制剂对被检者奏效的可能性高”，另外换种说法可以是“被检者作为免疫检查点抑制剂的给药对象被选择”。另外，“免疫检查点抑制剂对被检者不奏效”是指“免疫检查点抑制剂对被检者奏效的可能性低”，另外换种说法可以是“被检者未作为免疫检查点抑制剂的给药对象被选择”。
[4.癌症治疗方法及药物组合物]
本发明的一实施方式涉及癌症治疗方法。本实施方式的癌症治疗方法包括下述工序：基于采自癌症患者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定结果，对癌症患者给药免疫检查点抑制剂。该治疗方法中，游离蛋白质标志物为选自游离PD-1、游离CTLA-4及游离PD-L1中的至少1种。优选游离蛋白质标志物为选自sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1中的至少两种。更优选游离蛋白质标志物为sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1。免疫检查点抑制剂可以为包含抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体及抗PD-L1抗体中的至少一种作为有效成分的制剂。优选为包含抗PD-1抗体作为有效成分的制剂，一实施方式中为纳武单抗或派姆单抗。
本实施方式的治疗方法中，可以对由游离蛋白质标志物的测定结果而判定为免疫检查点抑制剂奏效的患者实施上述的给药工序。关于该方法中的免疫检查点抑制剂的奏效性判定，与上述判定方法中所述相同。另外，关于癌症的种类、液体试样、游离蛋白质标志物的测定手段、判定等，与上述判定方法中所述相同。
本实施方式的治疗方法适合于肺癌患者、食道癌患者及子宫内膜癌患者。给药工序优选对癌症患者给药治疗上的有效量的免疫检查点抑制剂。治疗上的有效量可根据癌症的种类、癌症的进展度、免疫检查点抑制剂的种类、治疗指导手册等适当决定。
本发明的一实施方式涉及一种含有免疫检查点抑制剂的癌症治疗用药物组合物，其特征在于，给药于通过上述判定方法判定为免疫检查点抑制剂奏效的癌症患者。在本实施方式中，癌症治疗用药物组合物可以为免疫检查点抑制剂本身。免疫检查点抑制剂的详细情况如上所述。癌症治疗用药物组合物可以包含药物上可接受的成分。这类成分可以从该技术领域中公知的药品添加物中适当选择。癌症治疗用药物组合物可以进一步包含不同于免疫检查点抑制剂的癌症治疗用药剂。作为这类癌症治疗用药剂，可列举例如化学疗法剂、分子靶向药等。癌症治疗用药物组合物的形态没有特别限定，可以为晶体、粉末等固体，也可以为溶液、乳化液、悬浮液等液体。
以下通过实施例详细地说明本发明，但本发明不受这些实施例限定。
实施例
实施例1
对非小细胞肺癌患者，研究免疫检查点抑制剂给药前的血液试样中的游离蛋白质标志物的浓度与免疫检查点抑制剂给药后的治疗效果的相关性。
1.被检者
以未给药免疫检查点抑制剂的非小细胞肺癌患者(50例)为被检者。实施例1中，对全部患者(50例)给药作为免疫检查点抑制剂的纳武单抗(小野药品工业株式会社)，以无进展生存时间(PFS)为评价指标来观察经过。
2.液体试样
在免疫检查点抑制剂给药前，从上述患者(50例)采集血液。通过常规方法对得到的血液进行分离，得到血浆。使用得到的血浆(50个被检体)作为液体试样。
3.肿瘤组织的PD-L1免疫染色
在免疫检查点抑制剂给药前，通过手术或活检从上述患者(50例)采集肿瘤组织，通过常规方法制作FFPE组织标本。将得到的FFPE组织标本切片，通过常规方法对得到的薄切片进行脱石蜡处理、亲水化处理及抗原活化处理。使用抗PD-L1抗体(28-8抗体)对处理后的薄切片进行免疫组织染色，得到组织标本。在光学显微镜下观察得到的组织标本，将细胞膜部分或完全染色的肿瘤细胞作为“PD-L1阳性肿瘤细胞”并进行计数。通过上述式子计算TPS，作为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例。其结果是，50例中的13例的TPS为50％以上。其余37例的TPS小于50％。以下，也将TPS小于50％的患者称为“PD-L1阴性病例”。
4.游离蛋白质标志物的测定
(4.1)试剂的制备
(4.1.1)第1试剂(生物素标记抗体溶液)
·PD-1捕捉用第1试剂
作为捕捉用抗体，使用抗PD-1抗体(克隆No.MIH4)。将该抗体用Biotin LabelingKit-SH(Catalog No.LK10、同仁化学公司制)进行生物素标记。具体的操作按照该试剂盒附带的手册来进行。将得到的生物素标记抗PD-1抗体添加到100mM HEPES(pH 7.5)中，制备PD-1捕捉用第1试剂(抗体浓度5μg/ml)。
·CTLA-4捕捉用第1试剂
作为捕捉用抗体，使用抗CTLA-4抗体(克隆No.BNI3)。与上述同样地用生物素标记该抗体。将得到的生物素标记抗CTLA-4抗体添加到100mM MES(pH 6.5)中，制备CTLA-4捕捉用第1试剂(抗体浓度5μg/ml)。
·PD-L1捕捉用第1试剂
作为捕捉用抗体，使用抗PD-L1抗体(克隆No.27A2)。与上述同样地用生物素标记该抗体。将得到的生物素标记抗PD-L1抗体添加到100mM MES(pH 6.5)中，制备PD-L1捕捉用第1试剂(抗体浓度5μg/ml)。
(4.1.2)第2试剂(含有链霉亲和素结合粒子的液体)
将表面固定有链霉亲和素的磁性粒子(平均粒径2μm。每1g磁性粒子的链霉亲和素的量为2.9～3.5mg。以下也称为“STA结合磁性粒子”)用10mM HEPES缓冲液(pH 7.5)洗涤3次。将洗涤后的STA结合磁性粒子添加到10mM HEPES(pH 7.5)中，使得链霉亲和素浓度达到18～22μg/ml(STA结合磁性粒子的浓度为0.48～0.52mg/ml)，得到含有STA结合粒子的液体。
(4.1.3)第3试剂(碱性磷酸酶标记抗体溶液)
·PD-1检测用第3试剂
作为检测用抗体，使用抗PD-1抗体(克隆No.PD1.3.1.3)。将该抗体使用AlkalinePhosphatase Labeling Kit-SH(Catalog No.LK13、同仁化学公司制)进行碱性磷酸酶标记。具体的操作按照该试剂盒附带的手册来进行。将得到的碱性磷酸酶标记抗PD-1抗体通过凝胶过滤而纯化。将该碱性磷酸酶标记抗PD-1抗体添加到100mM HEPES(pH 7.5)中而达到75倍稀释，由此制备PD-1检测用第3试剂。
·CTLA-4检测用第3试剂
作为检测用抗体，使用抗CTLA-4抗体(克隆No.14D3)。对于该抗体，与上述同样地用碱性磷酸酶标记、纯化。将得到的碱性磷酸酶标记抗CTLA-4抗体添加到100mM MES(pH6.5)中而达到75倍稀释，由此制备CTLA-4检测用第3试剂。
·PD-L1检测用第3试剂
作为检测用抗体，使用抗PD-L1抗体(克隆No.9L814)。对于该抗体，与上述同样地用碱性磷酸酶标记、纯化。将得到的碱性磷酸酶标记抗PD-L1抗体添加到100mM MES(pH6.5)中而达到75倍稀释，由此制备PD-L1检测用第3试剂。
(4.1.4)第4试剂(测定用缓冲液)
使用HISCL R4试剂(希森美康株式会社制)作为第4试剂。
(4.1.5)第5试剂(底物溶液)
使用包含作为碱性磷酸酶的化学发光底物的CDP-Star(注册商标)(AppliedBiosystems公司)的HISCL R5试剂(希森美康株式会社制)作为第5试剂。
(4.2)测定
使用上述的第1～第5试剂，通过全自动免疫测定装置HISCL-800(希森美康株式会社制)进行各游离蛋白质标志物的测定。需要说明的是，该测定基于磁性粒子上的夹心ELISA。具体的操作如下所述。向第1试剂(50μL)中加入血浆(20μL)并混合后，加入第2试剂(30μL)并混合。通过磁力收集所得到的混合液中的磁性粒子，除去上清，加入HISCL洗涤液(300μL)洗涤磁性粒子。除去上清，向磁性粒子中添加第3试剂并混合。各第3试剂的添加量如下所述。PD-1检测用第3试剂为100μL，CTLA-4检测用第3试剂为100μL，PD-L1检测用第3试剂为80μL。通过磁力收集所得到的混合液中的磁性粒子，除去上清，加入HISCL洗涤液(300μL)洗涤磁性粒子。除去上清，对磁性粒子添加第4试剂(50μL)及第5试剂(100μL)，充分混合，测定化学发光强度。所有工序的反应时间为17分钟。将得到的化学发光强度代入标准曲线，计算各游离蛋白质标志物的浓度。
5.结果
实施例1中，将PFS为6个月以上的患者归类为纳武单抗已奏效的组，将PFS小于6个月的患者归类为纳武单抗未奏效的组。在全部患者(50例)中，PFS为6个月以上的患者为21例，PFS小于6个月的患者为29例。另外，在PD-L1阴性病例(37例)中，PFS为6个月以上的患者为10例，PFS小于6个月的患者为27例。图6A～6C示出PD-L1阴性病例的、纳武单抗给药前的血浆中的各游离蛋白质标志物的测定值(pg/mL)的分布。图中，“奏效”表示纳武单抗已奏效的组，“非奏效”表示纳武单抗未奏效的组。另外，在图中，虚线表示测定值的中位值。如图6A～6C所示，可知纳武单抗已奏效的患者有血液试样中的游离PD-1、游离CTLA-4及游离PD-L1的测定值低的倾向。
将PD-L1阴性病例(37例)根据各游离蛋白质标志物的测定值及6个月PFS归类。另外，计算基于标志物的测定值判定纳武单抗的奏效性时的灵敏度及特异性。将结果示于表1～3。在表中，关于“6个月PFS”，将PFS为6个月以上的被检者归类在“+”中，将PFS小于6个月的被检者归类在“-”。表中，关于“sPD-1”、“sCTLA-4”及“sPD-L1”，将测定值低于阈值的被检者归类在“+”中，将测定值高于阈值的被检者归类在“-”中。实施例1中，将对应于sPD-1的阈值设为150pg/mL，将对应于sCTLA-4的阈值设为0.5pg/mL，将对应于sPD-L1的阈值设为219pg/mL。
[表1]
Figure BDA0002702239210000291
[表2]
Figure BDA0002702239210000301
[表3]
Figure BDA0002702239210000302
被归类为PD-L1阴性病例的37名患者为通过基于免疫组织染色的以往预测法判断为纳武单抗不奏效的患者。但是，本实施例中，通过使用sPD-1的测定值的判定，可以从PD-L1阴性病例中进一步选出6名作为纳武单抗奏效的患者。另外，通过使用sCTLA-4的测定值的判定，可以进一步选出9名作为纳武单抗奏效的患者，通过使用sPD-L1的测定值的判定可以进一步选出7名作为纳武单抗奏效的患者。
实施例2
基于实施例1的结果确认判定免疫检查点抑制剂的奏效性时的判定精度。
1.利用免疫组织染色进行的奏效性的判定
计算通过实施例1中计算的TPS判定纳武单抗的奏效性时的灵敏度及特异性。将结果示于表4。在表中，关于“6个月PFS”，将PFS为6个月以上的被检者归类为“+”，将PFS小于6个月的被检者归类为“-”。关于“免疫组织染色(PD-L1)”，将TPS为50％以上的被检者归类为“+”，将TPS小于50％的被检者归类为“-”。
[表4]
Figure BDA0002702239210000311
如表1所示，可知基于肿瘤组织的PD-L1表达率的判定中特异性高、但是灵敏度低。即，该判定会遗漏免疫检查点抑制剂本来奏效的患者。因此，以下对利用免疫组织染色的判定中被判断为阴性的被检者(TPS＜50％)进一步进行基于游离标志物蛋白质的测定值的判定。
2.利用免疫组织染色及游离蛋白质标志物进行的奏效性的判定
(2.1)游离蛋白质标志物的测定值的评分化
对于实施例1的PD-L1阴性病例(37例)，基于阈值将血液试样中的游离蛋白质标志物(sPD-1及sCTLA-4)的测定值进行评分。实施例2中，使用测定值的中位值作为阈值。如表5所示，在sPD-1的测定值及sCTLA-4的测定值两者低于各自对应的阈值时，将评分设为0。在sPD-1的测定值及sCTLA-4的测定值中的任一者低于其所对应的阈值时，将评分设为1。将sPD-1的测定值及sCTLA-4的测定值两者高于各自对应的阈值时，将评分设为2。
[表5]
Figure BDA0002702239210000321
(2.2)奏效性的判定
将PD-L1阴性病例(37例)根据游离蛋白质标志物的评分和6个月PFS进行归类。另外，计算基于评分判定纳武单抗的奏效性时的灵敏度及特异性。将结果示于表6。
[表6]
Figure BDA0002702239210000322
如表6所示，发现：在利用游离蛋白质标志物的测定值的判定中，将评分分为0和1以上时，可以高灵敏度地选择纳武单抗奏效的患者。因此，在利用游离蛋白质标志物的测定值的判定中，在评分为0时，判定免疫检查点抑制剂奏效的可能性高，选择被检者作为免疫检查点抑制剂的给药对象。另一方面，在评分为1以上时，判定免疫检查点抑制剂奏效的可能性低，不选择被检者作为免疫检查点抑制剂的给药对象。
另外，将上述(2.1)的利用免疫组织染色的判定与利用游离蛋白质标志物的测定值的判定组合来判定纳武单抗的奏效性。将利用该组合的判定的流程示于图7。计算该判定的灵敏度及特异性。将结果示于表7。在表中，关于“免疫组织染色(PD-L1)及血中标志物检查(sPD-1及sCTLA-4)”，将TPS为50％以上的被检者、及TPS小于50％且评分为0的被检者归类为“+”，将其余的被检者归类为“-”。
[表7]
Figure BDA0002702239210000331
如表7所示，在将利用免疫组织染色的判定与利用游离蛋白质标志物的测定值的判定组合而判定纳武单抗的奏效性时，灵敏度显著提高。如图7示出的流程所示，表示：通过对免疫组织染色中显示阴性的被检者进行基于血液试样中的游离蛋白质标志物的测定值的判定，可以提取免疫检查点抑制剂可能奏效的患者。
实施例3
对于与实施例1相同的被检者(50例)，基于sPD-1、sCTLA-4及sPD-L1这3种标志物的测定值判定纳武单抗的奏效性。另外，将利用3种标志物的测定值的判定与实施例2的利用免疫组织染色的判定组合来判定纳武单抗的奏效性。
1.利用标志物的测定值的判定
(1.1)测定值的评分化
对各标志物的测定值基于阈值进行评分。实施例3中，作为对应于各标志物的阈值，使用与实施例1相同的阈值。如表8所示，在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值均低于各自对应的阈值时，将评分设为0。在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值中的任一者高于其所对应的阈值时，将评分设为1。在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值中的任意两种高于其所对应的阈值时，将评分设为2。在sPD-1的测定值、sCTLA-4的测定值及sPD-L1的测定值均高于各自对应的阈值时，将评分设为3。
[表8]
Figure BDA0002702239210000341
(1.2)奏效性的判定
将被检者(50例)根据游离蛋白质标志物的评分和6个月PFS进行归类。另外，计算基于评分判定纳武单抗的奏效性时的灵敏度及特异性。将结果示于表9。
[表9]
Figure BDA0002702239210000342
如表9及表4所示，基于血液试样中的标志物的测定值的判定与基于肿瘤组织的免疫染色的判定具有同等程度的灵敏度及特异性。血液采集与肿瘤组织采集相比侵入性低，因此可知，本实施方式的判定方法也可以适用于不能进行肿瘤组织切除的患者。
2.利用标志物的测定值的判定与利用免疫组织染色的判定的组合
将上述(1.2)的利用3种标志物的测定值的判定与实施例2的利用免疫组织染色的判定组合，判定纳武单抗的奏效性。将结果示于表10。在表中，关于“免疫组织染色及血中标志物检查”，将TPS为50％以上的被检者及TPS小于50％且评分为0的被检者归类为“+”，将其余的被检者归类于“-”。
[表10]
Figure BDA0002702239210000351
如表10所示，通过将利用免疫组织染色的判定与利用3种游离蛋白质标志物的测定值的判定组合，能够进行灵敏度及特异性均高的判定，可以说判定精度提高。
实施例4
对于食道癌症患者及子宫内膜癌患者，研究免疫检查点抑制剂给药前的血液试样中的游离蛋白质标志物的浓度与免疫检查点抑制剂给药后的治疗效果的相关性。
1.被检者
以未给药免疫检查点抑制剂的食道癌患者(64例)及子宫内膜癌患者(22例)为被检者。对全部患者给药纳武单抗(小野药品工业株式会社)，以总生存期(OS)为评价指标评价经过。
2.液体试样及测定
在免疫检查点抑制剂给药前，从上述患者采集血液，制备血浆。使用这些血浆与实施例1同样地计算游离蛋白质标志物的浓度。
3.结果
对于各游离蛋白质标志物，制作比较测定值高的组和测定值低组的基于Kaplan-Meier法的生存率曲线。将结果示于图8及9。图中，横线表示生存率为50％的线。另外，在图中，横轴之下所示的各组的数值为横轴的各时刻的生存者人数。如这些图所示，可知：关于任一游离蛋白质标志物，测定值低的组(图中实线所示)与测定值高的组(图中虚线所示)相比，有通过给药免疫检查点抑制剂而延长OS的倾向。这些结果表示，本实施方式的判定方法也可以适用于食道癌症患者及子宫内膜癌患者。
符号说明
11、21、31：试剂盒
12、22、32：第1容器
13、23、33：第2容器
24、34：第3容器
25、35：第4容器
36：第5容器
37：第6容器
14、27、38：包装箱
15、26、39：附加文件
10：判定装置
20：免疫测定装置
30：计算机系统
40：记录介质
300：计算机主体
301：输入部
302：显示部
310：CPU
311：ROM
312：RAM
313：硬盘
314：输入输出接口
315：读取装置
316：通信接口
317：图像输出接口
318：总线

Claims (31)

1.一种辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法，其包括：
测定采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的工序；和
基于测定结果，判定免疫检查点抑制剂对所述被检者的奏效性的工序，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、游离PD-1(Programmed cell death-1；程序性细胞死亡-1)及游离PD-L1(Programmed cell death-ligand 1；程序性细胞死亡配体1)中的至少1种。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少两种。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，
所述游离蛋白质标志物为游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，
在所述判定工序中，在所述测定工序所取得的游离蛋白质标志物的测定值低于对应于各标志物的规定阈值时，判定为免疫检查点抑制剂对所述被检者奏效。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的两种，
在一种游离蛋白质标志物的测定值低于对应于该标志物的阈值、且另一种游离蛋白质标志物的测定值低于对应于该标志物的阈值时，判定为免疫检查点抑制剂对所述被检者奏效。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，
所述游离蛋白质标志物为游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1，
在游离CTLA-4的测定值低于对应于游离CTLA-4的阈值、游离PD-1的测定值低于对应于游离PD-1的阈值、且游离PD-L1的测定值低于对应于游离PD-L1的阈值时，判定为免疫检查点抑制剂对所述被检者奏效。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，
所述被检者为通过肿瘤组织的免疫染色而被判定为PD-L1阳性肿瘤细胞的比例低于规定值的癌症患者。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，
所述被检者为肺癌患者、食道癌症患者或子宫内膜癌患者。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，
所述免疫检查点抑制剂为包含抗PD-1抗体作为有效成分的制剂。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，
所述液体试样为血液试样。
11.一种游离蛋白质标志物的测定值的取得方法，其包括取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值的工序，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、游离PD-1(Programmed cell death-1；程序性细胞死亡-1)及游离PD-L1(Programmed cell death-ligand 1；程序性细胞死亡配体1)中的至少1种，
在取得的游离蛋白质标志物的测定值低于对应于各标志物的规定阈值时，表示免疫检查点抑制剂对所述被检者奏效。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少两种。
13.根据权利要求11所述的方法，其中，
所述游离蛋白质标志物为游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1。
14.根据权利要求11～13中任一项所述的方法，其中，
所述免疫检查点抑制剂为包含抗PD-1抗体作为有效成分的制剂。
15.根据权利要求11～14中任一项所述的方法，其中，
所述被检者为肺癌患者、食道癌症患者或子宫内膜癌患者。
16.根据权利要求11～15中任一项所述的方法，其中，
所述液体试样为血液试样。
17.一种辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法，其包括：
进行采自被检者的肿瘤组织的免疫染色，计算PD-L1阳性肿瘤细胞的比例的工序；
测定采自所述被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的工序；和
基于计算结果和测定结果，判定免疫检查点抑制剂对所述被检者的奏效性的工序，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、游离PD-1(Programmed cell death-1；程序性细胞死亡-1)及游离PD-L1(Programmed cell death-ligand 1；程序性细胞死亡配体1)中的至少1种。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，
在所述判定工序中，在所述计算工序所取得的PD-L1阳性肿瘤细胞的比例低于规定值、且所述测定工序所取得的游离蛋白质标志物的测定值低于对应于各标志物的规定阈值时，判定为免疫检查点抑制剂对所述被检者奏效。
19.一种试剂盒，其用于权利要求1～18中任一项所述的方法，其包含选自下述试剂中的至少1种试剂：包含能够与游离CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)特异性结合的物质的试剂、包含能够与游离PD-1(Programmed celldeath-1；程序性细胞死亡-1)特异性结合的物质的试剂、及包含能够与游离PD-L1(Programmed cell death-ligand 1；程序性细胞死亡配体1)特异性结合的物质的试剂。
20.根据权利要求19所述的试剂盒，其包含选自下述试剂中的至少两种试剂：包含能够与游离CTLA-4特异性结合的物质的试剂、包含能够与游离PD-1特异性结合的物质的试剂、及包含能够与游离PD-L1特异性结合的物质的试剂。
21.根据权利要求19所述的试剂盒，其包含：
包含能够与游离CTLA-4特异性结合的物质的试剂、包含能够与游离PD-1特异性结合的物质的试剂、及包含能够与游离PD-L1特异性结合的物质的试剂。
22.一种免疫检查点抑制剂的奏效性的判定装置，其具备包含处理器及处于所述处理器控制下的存储器的计算机，
所述存储器中记录有用于使所述计算机执行下述步骤的计算机程序，所述步骤为：
取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值的步骤；和
基于所述标志物的测定值判定免疫检查点抑制剂对所述被检者的奏效性的步骤，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、游离PD-1(Programmed cell death-1；程序性细胞死亡-1)及游离PD-L1(Programmed cell death-ligand 1；程序性细胞死亡配体1)中的至少1种。
23.根据权利要求22所述的装置，其中，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少两种。
24.根据权利要求22所述的装置，其中，
所述游离蛋白质标志物为游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1。
25.一种游离蛋白质标志物的测定值的取得装置，其具备包含处理器及处于所述处理器控制下的存储器的计算机，
所述存储器中记录有用于使所述计算机执行下述步骤的计算机程序，所述步骤为：
取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、游离PD-1(Programmed cell death-1；程序性细胞死亡-1)及游离PD-L1(Programmed cell death-ligand 1；程序性细胞死亡配体1)中的至少1种，
在取得的游离蛋白质标志物的测定值低于对应于各标志物的规定阈值时，表示免疫检查点抑制剂对该被检者奏效。
26.根据权利要求25所述的装置，其中，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少两种。
27.根据权利要求25所述的装置，其中，
所述游离蛋白质标志物为游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1。
28.一种用于判定免疫检查点抑制剂的奏效性的计算机程序，其记录于计算机可读取的介质，
所述计算机程序用于使所述计算机执行下述步骤：
取得采自被检者的液体试样中的游离蛋白质标志物的测定值的步骤；和
基于所述标志物的测定值判定免疫检查点抑制剂对所述被检者的奏效性的步骤，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4；细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、游离PD-1(Programmed cell death-1；程序性细胞死亡-1)及游离PD-L1(Programmed cell death-ligand 1；程序性细胞死亡配体1)中的至少1种。
29.根据权利要求28所述的计算机程序，其中，
所述游离蛋白质标志物为选自游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1中的至少两种。
30.根据权利要求28所述的计算机程序，其中，
所述游离蛋白质标志物为游离CTLA-4、游离PD-1及游离PD-L1。
31.一种含有免疫检查点抑制剂的癌症治疗用药物组合物，其特征在于，
给药于通过权利要求1～10、17及18中任一项所述的方法而被判定为免疫检查点抑制剂奏效的癌症患者。
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