CN111904972A - 肌苷在制备抗感染药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及肌苷在制备抗感染药物中的应用。本发明研究发现，肌苷可以与脯氨酸羟化酶结合，降解缺氧诱导因子(HIF‑1α)蛋白，调节机体中的IL‑1β因子、补体3C，使在LPS刺激或细菌感染影响下的生物体的IL‑1β因子含量显著降低，补体3C含量显著增加，提高机体自身的抵抗力，从而提高被感染生物的存活率，在抗感染的治疗中具有广阔的应用前景。

Description

肌苷在制备抗感染药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及肌苷在制备抗感染药物中的应用。
背景技术
肌苷(Inosine)，也称为次黄苷、次黄嘌呤核苷等，是由次黄嘌呤与核糖结合而成的核苷类化合物。肌苷是人体的正常成分，为腺嘌呤的前体，能直接透过细胞膜进入体细胞，参与体内的正常代谢，如蛋白质合成、核酸代谢、能量代谢等。临床上肌苷常用作辅酶类药物，主要用于急、慢性肝炎的辅助治疗，同时也可以用于治疗白细胞减少、血小板减少、心力衰竭、中心视网膜炎、视神经萎缩等。
细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入宿主中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的疾病。目前临床上治疗宿主感染的药物主要为抗生素，可作用于细菌的DNA、RNA和蛋白质合成系统的特定环节，干扰细菌的代谢作用，从而妨碍细菌的生命活动或抑制细菌生长，如β-内酰胺类抗生素(青霉素类、头孢菌素类等)、氟喹诺酮类抗生素(环丙沙星、氧氟沙星等)、大环内酯类抗生素(罗红霉素、克拉霉素)、氨基糖苷类抗生素(丁氨卡那霉素等)等。但是现有技术常用抗生素主要是通过干扰细菌的代谢来抑制细菌的生长繁殖，而细菌在生长繁殖的过程中在抗生素的选择压力下，会逐渐产生耐药性，使得针对细菌感染的治疗更加困难。因此，提供一种提高宿主抵抗细菌感染的药物，具有更加重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术缺少提高宿主抵抗细菌感染药物的缺陷和不足，提供一种全新的肌苷在制备提高宿主抵抗细菌感染药物中的应用。
本发明的目的是提供肌苷在制备抗感染药物中的应用。
本发明另一目的是提供一种含有有效量肌苷的抗感染药物。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明研究发现，肌苷可以与脯氨酸羟化酶结合，调节机体中的细胞因子，如IL-1β因子、补体3C。实验证明，生物体在LPS刺激或细菌感染影响下，细胞因子IL-1β因子含量会显著增加，补体3C含量则显著降低；摄入肌苷后，肌苷可以与脯氨酸羟化酶结合，可以降解缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白，显著抑制IL-1β因子含量增加，同时促进补体3C含量增加，提高机体自身的抵抗力，从而提高被感染生物的存活率。
进一步地，所述肌苷包括肌苷，肌苷的可药用的盐和酯，选择性取代的类似物，肌苷立体异构体、几何异构体、水合物、溶剂化物或药学上可接受的盐或前药。
另外的，本发明还提供了一种含有有效量肌苷的抗感染药物。
进一步地，所述药物为口服剂型或注射剂型。
更进一步地，所述药物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物，包括哺乳动物，啮齿类动物等等。另外一些动物的实例包括马、狗和猫等。
进一步地，实验证明所述药物也可以应用于鱼类感染的治疗，显著提高感染鱼类的存活率。
本发明具有以下有益效果：
本发明研究结果显示，肌苷可以与脯氨酸羟化酶结合，降解缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白，调节机体中的IL-1β因子、补体3C，使在LPS刺激或细菌感染影响下的生物体的IL-1β因子含量显著降低，补体3C含量显著增加，提高机体自身的抵抗力，从而提高被感染生物的存活率，在抗感染的治疗中具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中肌苷提高细菌感染小鼠的存活率数据统计图，其中，A-LPS刺激，B-大肠杆菌Y17感染，C-迟缓爱德华氏菌EIB202感染，D-溶藻弧菌VA。
图2为本发明实施例1中肌苷对小鼠血液中IL-1β因子、补体C3含量影响的数据统计图。
图3为本发明实施例1中死亡和存活小鼠血液中IL-1β因子、补体C3含量统计图。
图4为本发明实施例2中外源肌苷对小鼠巨噬细胞RAW264.7的il1b和补体c3基因表达影响的数据统计图。
图5为本发明实施例2中不同浓度外源肌苷对小鼠巨噬细胞RAW264.7的il1b和补体c3基因表达影响的数据统计图。
图6本发明实施例2中外源肌苷对小鼠巨噬细胞Raw264.7-ASC的il1b和补体c3基因表达影响的数据统计图。
图7为本发明实施例3中肌苷与脯氨酸羟化酶的结合情况统计图。
图8为本发明实施例3中肌苷对缺氧诱导因子HIF-1α蛋白表达影响的数据统计图。
图9为本发明实施例3中外源肌苷与脯氨酸羟化酶抑制剂对i11b和c3基因表达影响的数据统计图。
图10为本发明实施例3中外源肌苷与PHD基因缺失细胞对i11b和c3基因表达影响的数据统计图。
图11为本发明实施例4中外源添加肌苷对鱼类迟缓爱德华氏菌感染的存活率影响的数据统计图。
图12为本发明实施例4中外源肌苷对鱼类迟缓爱德华氏菌感染的il1b和补体c3基因表达影响的数据统计图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
其中，IL-1β因子、补体C3为蛋白质，斜体的il1b和补体c3为基因。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1肌苷提高小鼠对细菌感染的抵抗能力
1.1肌苷提高细菌感染小鼠的存活率
从-80℃冰箱取出保存的细菌甘油菌株，全部加入到100mL的LB培养基中(250mL培养瓶)，恒温(溶藻弧菌和迟缓爱德华氏菌为30℃，大肠杆菌Y17为37℃)200rpm培养。待细菌生长至OD600约1.0时，离心收集细菌，弃上清。用生理盐水洗涤3次备用。
Balb/c小鼠(5-8周龄，体重21±3g)先喂养一周使其适应试验环境后，随机分成4组(LPS和3种细菌各为1组)，每组40只小鼠。每组中20只小鼠按照300mg/kg剂量采用肌肉注射方式注射肌苷，另外20只小鼠肌肉注射相同体积的生理盐水。3小时后，4组小鼠分别以腹腔注射方式进行LPS刺激或3种细菌感染。剂量分别为：LPS 75mg/kg，迟缓爱德华氏菌EIB202为5×107CFU/只、溶藻弧菌VA为3×108CFU/只、人源大肠杆菌Y17为2×106CFU/只。观察7天，统计小鼠的死亡情况，并计算小鼠存活率。计算公式为：小鼠存活数量/小鼠总数×100％，结果参见图1。
由图可见，注射肌苷小鼠组，其存活率明显高于未注射肌苷的对照组小鼠，说明肌苷可以提高细菌感染小鼠的存活率。具体情况如下：注射肌苷后再注射LPS组的小鼠存活率为80％，而未注射肌苷仅注射LPS组的小鼠存活率仅为25％，存活率提高了55％，具有明显差异(图1A)；注射肌苷后再用大肠杆菌Y17感染组小鼠的存活率为80％，而未注射肌苷仅大肠杆菌Y17感染组小鼠的存活率仅为40％，存活率提高了40％，具有明显差异(图1B)；注射肌苷后再用迟缓爱德华菌EIB202感染组的小鼠存活率为70％，而未注射肌苷仅迟缓爱德华菌感染组的小鼠存活率仅为30％，存活率提高了40％，具有明显差异(图1C)；注射肌苷后再用溶藻弧菌感染组的小鼠存活率为80％，而未注射肌苷仅溶藻弧菌感染组的小鼠存活率仅为50％，存活率提高了30％，具有明显差异(图1D)。
1.2肌苷对小鼠血液中IL-1β因子、补体C3含量的影响
现有技术研究发现，炎症因子紊乱会引起自身免疫性疾病导致死亡(Shaw etal.Trends in Molecular Medicine,2011,17(2):57-64；Mao et al.Frontiers inImmunology,2018.9:2566；Gabay et al.Nature Reviews Rheumatology,2010,6(4):232-241)，血液中的IL-1β因子和补体C3含量都与机体免疫功能、细菌感染后机体的存活率密切相关。
将80只小鼠随机分成4组(LPS和3种细菌各1组)，每组20只。每组中10只小鼠按照300mg/kg剂量采用肌肉注射方式注射肌苷，另外10只小鼠注射相同体积的生理盐水。3小时后，4组小鼠分别以腹腔注射进行LPS刺激或3种细菌感染。剂量分别为：LPS是5mg/kg，3种细菌感染剂量都为1×104CFU/只。LPS刺激后2小时，溶藻弧菌和Y17感染后12小时，EIB202感染后16小时，采用眼眶取血方式采集每只小鼠血液，用ELISA试剂盒测定IL-1β因子和补体C3的含量，结果参见图2。
从图中可以看出，小鼠注射肌苷组，不管是LPS刺激还是大肠杆菌Y17、溶藻弧菌VA或迟缓爱德华菌EIB202感染，其血液中IL-1β因子含量都显著低于未注射肌苷组；而补体C3含量却显著高于未注射肌苷组。具体情况如下：注射肌苷后再注射LPS组小鼠血液IL-1β因子含量为222.43pg/mL，补体C3含量为81.6μg/mL，而未注射肌苷组小鼠血液IL-1β因子含量为716.53pg/mL，补体C3的含量为32.43μg/mL，IL-1β因子含量降低了3.22倍，而补体C3含量增加了2.52倍，两组间均具有明显差异；注射肌苷后再用大肠杆菌Y17感染组小鼠血液IL-1β因子含量为180.54pg/mL，补体C3含量为96.39μg/mL，而未注射肌苷组小鼠血液IL-1β因子含量为511.08pg/mL，补体C3含量为30.54μg/mL，IL-1β因子含量降低了2.83倍，而补体C3含量增加了3.16倍，两组间均具有明显差异；注射肌苷后再用溶藻弧菌感染组小鼠血液IL-1β因子含量为48.68pg/mL，补体C3含量为68.57μg/mL，而未注射肌苷组小鼠血液IL-1β因子含量为322.15pg/mL，补体C3的含量为26.29μg/mL，IL-1β因子含量降低了6.62倍，而补体C3含量增加了2.61倍，两组间均具有明显差异；注射肌苷后再用迟缓爱德华菌感染组小鼠血液IL-1β因子含量为89.97pg/mL，补体C3含量为65.65μg/mL，而未注射肌苷组小鼠血液IL-1β因子含量为424.23pg/mL，补体C3含量为42.02μg/mL，IL-1β因子含量降低了4.72倍，而补体C3含量增加了1.56倍，两组间均具有明显差异。
这些结果说明，肌苷通过降低宿主血液IL-1β因子的含量，升高补体C3的含量，从而提高了细菌感染后小鼠的存活率。
1.3死亡和存活小鼠血液中IL-1β因子、补体C3含量的检测
将30只昆明小鼠随机分成2组：溶藻弧菌攻毒组20只，生理盐水对照组10只。溶藻弧菌腹腔攻毒剂量为3×108CFU/只，对照组腹腔注射同等剂量生理盐水。6小时后采用眼眶取血，并将每只小鼠及相应的血液样本做好标记，样品-80℃保存用于后期IL-1β和C3含量测定。然后继续观察小鼠7天，记录每只小鼠的存活情况。结果发现，20只攻毒小鼠中有12只存活，8只死亡。采用ELISA方法测定每只小鼠IL-1β因子和补体C3含量，并将死亡和存活小鼠的IL-1β因子和补体C3含量各自归为1组，将结果统计得图3。
由图可见，死亡小鼠血液中IL-1β因子含量均值为360.11pg/mL，而存活组小鼠血液中IL-1β因子含量均值为290.06pg/mL，死亡小鼠血液中IL-1β因子含量显著高于存活小鼠。死亡小鼠血液中补体C3含量均值为9.29μg/mL，而存活组小鼠血液中补体C3含量均值为15.36μg/mL，死亡小鼠血液中补体C3含量显著低于存活小鼠。
这些结果说明，IL-1β因子和补体C3的含量高低与细菌感染后小鼠的存活和死亡有关，IL-1β因子含量过高或补体C3含量过低的小鼠易死亡。
实施例2外源肌苷对小鼠巨噬细胞il1b和补体c3基因表达的影响
2.1外源肌苷对小鼠巨噬细胞RAW264.7的il1b和补体c3基因表达的影响
将RAW264.7细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴锅中溶解，用低糖DMEM(含10％FBS)在CO2培养箱中培养。两天后换液。当细胞生长密度达到80～90％左右时，用0.0025％EDTA消化细胞，再以1×106/每孔的数量将细胞加入6孔板中进行铺板。
将铺好的细胞放入CO2培养箱中培养12小时后，加入浓度为5mM的肌苷，对照组加入等体积的细胞培养基。再继续培养12小时后，用100ng/ml LPS刺激2、8和24小时，分别收集细胞，提取总RNA。每个条件4个重复。采用荧光定量PCR检测il1b和补体c3基因的表达情况。这2个基因引物分别为：il1b(上游：tcaggcaggcagtatcactc，下游：gaggatgggctcttcttcaa)，补体c3(上游：catcctgcactcaggtagtg，下游：gcattagatccctgagtgac)，结果参见图4。
由图可见，小鼠巨噬细胞受到LPS刺激后，外源添加肌苷与不添加肌苷比较，il1b表达下降，而c3表达增加。具体情况如下：LPS刺激后2小时，添加肌苷的细胞il1b表达下降3.05倍，而c3表达基本不变；LPS刺激后8小时，添加肌苷的细胞il1b表达下降5.15倍，而c3表达增加1.81倍；LPS刺激后24小时，添加肌苷的细胞il1b表达下降1.98倍，而c3表达增加1.81倍。
这些结果说明小鼠巨噬细胞在受到外源肌苷作用后，对LPS刺激表现出和小鼠同样的反应，即肌苷可以抑制小鼠巨噬细胞il1b的表达，而促进小鼠巨噬细胞c3的表达。
2.2不同浓度外源肌苷对小鼠巨噬细胞RAW264.7的il1b和补体c3基因表达的影响
将铺好的RAW264.7细胞放入培养箱培养12小时后，分别加入浓度为0.63mM、1.25mM、2.5mM、5mM和10mM的肌苷，对照组仅加细胞培养基，每组4个重复。再继续培养12小时，然后用100ng/ml的LPS刺激8小时。收集细胞，提取每个样品的RNA。荧光定量检测外源添加不同浓度肌苷情况下，LPS刺激后il1b和补体c3的表达情况，结果统计参见图5。
由图可见，小鼠巨噬细胞受到LPS刺激后，外源添加肌苷与不添加肌苷比较，il1b表达降低，且随着肌苷浓度的增加而逐渐下降；补体c3表达上升，且随着添加肌苷浓度的增加而逐渐上升。具体情况为：相对于不添加肌苷组，加入0.625mM肌苷后il1b下降了2.988倍，补体c3上升了1.076倍；加入1.25mM肌苷后il1b下降了4.506倍，c3后上升1.385了倍；加入2.5mM肌苷后il1b下降了4.875倍，c3上升了1.441倍；加入5mM肌苷后il1b下降了7.672倍，c3上升了2.060倍；加入10mM肌苷后il1b下降了13.803倍，c3上升了2.099倍，相互间具有显著差异。
2.3外源肌苷对小鼠巨噬细胞Raw264.7-ASC的IL-1β因子和补体C3的影响
参考2.1的过程培养Raw264.7-ASC细胞，以1×106/每孔的数量将细胞加入6孔板中进行铺板。将铺好的细胞放入培养箱培养12小时，加入浓度为5mM的肌苷，对照组加入细胞培养基，每组4个重复。再继续培养12小时后，用100ng/ml的LPS刺激8小时，加入10μM的尼日利亚菌素培养2小时，收集上清培养液。ELISA测定上清中的IL-1β因子和补体C3的含量，结果参见图6。
由图可见，仅LPS刺激细胞，IL-1β蛋白的分泌量2919pg/mL，而添加肌苷再受到LPS刺激的细胞，IL-1β蛋白的分泌量降低到1007pg/mL，下降了2.9倍。而补体C3蛋白的分泌情况正相反。仅LPS刺激细胞，补体C3分泌量为8.32μg/mL，而添加肌苷再受到LPS刺激的细胞，补体C3分泌量为19.9μg/mL，上升了2.4倍。相互间具有显著差异。
这些结果说明，外源肌苷可使受到LPS刺激的小鼠巨噬细胞il1b基因表达下降，IL-1β蛋白分泌减少，而补体c3基因表达上升，补体C3蛋白分泌增加。
实施例3外源肌苷通过与脯氨酸羟化酶结合影响缺氧诱导因子的稳定性来调节il1b和c3的表达
现有技术研究发现，LPS引起的il1b的升高与缺氧诱导因子(HIF-1α)有关(Palsson-Mcdermott et al.Cell metabolism.2015,21(1):65-80；Sumbayev VV.FEBSletters.2008,582(2):319-326)；脯氨酸羟化酶(PHD)可以降解HIF-1α蛋白，破坏其稳定性(Couvelard et al.Clinical Cancer Research.2008,14(20):6634-6639)。肌苷调节il1b和c3的表达可能与脯氨酸羟化酶有关，因此，本发明检测了肌苷和脯氨酸羟化酶间的关系，以及LPS刺激后细胞中hif-1α，i11b和c3的表达情况。
3.1肌苷与脯氨酸羟化酶的相互作用
将30μLDMSO加入NT染料(浓度为430μM)染料中，完全溶解后，用DMSO稀释至30μM后，将纯化的脯氨酸羟化酶PHD蛋白(浓度10μM)或者标签蛋白His tag(阴性对照)与NT染料等体积混匀(总体积200μL)，室温孵育30min。然后加入分离柱中，当最后一滴液体从分离柱中流出后，加入PBS磷酸盐缓冲液，在柱子底部收集蛋白样品，至600μL左右即停止收集，然后用NT.LabelFree微量热泳动(MST)分子间相互作用分析仪(德国Nano Temper公司)检测染料和蛋白结合的丰度来判断蛋白是否结合至染料上。将结合了染料的PHD蛋白加到200μL离心管中，进行梯度稀释。在每个离心管中加入500uM肌苷，室温孵育30min，Nano Temper上机检测，结果参见图7。
由图可见，阴性对照标签蛋白His tag与肌苷不结合，而脯氨酸羟化酶可以与肌苷结合，其结合常数Kd值为15.5mM。
3.2肌苷对缺氧诱导因子HIF-1α蛋白表达的影响
将铺好的RAW264.7细胞放入培养箱培养12小时后，加入浓度为0.6mM、2.5mM和10mM的肌苷，对照组加入细胞培养基。再继续培养12小时后，用100ng/ml LPS刺激8小时，分别收集细胞，提取其总蛋白质，进行SDS-PAGE电泳。将总蛋白质电转至PVDF膜上后，用兔抗缺氧诱导因子HIF-1α抗体(美国Abcam生物公司)和鼠抗兔二抗抗体(厦门博生生物有限公司)进行孵育，检测缺氧诱导因子蛋白HIF-1α表达情况，结果参见图8。
由图可见，随着添加肌苷浓度的增加，缺氧诱导因子HIF-1α蛋白的表达逐渐下降，甚至无法检测到。具体情况如下：RAW264.7细胞受到LPS刺激后，缺氧诱导因子蛋白的表达最高，而添加0.6和2.5mM肌苷后，缺氧诱导因子蛋白的表达下降，添加10mM肌苷后，缺氧诱导因子蛋白甚至不表达。
3.3外源肌苷与脯氨酸羟化酶结合对i11b和c3基因表达的影响
(1)将Raw264.7细胞，以1×106/每孔数量铺板到6孔板中，放入细胞培养箱培养12小时。加入0.005mM、0.05mM和0.5mM的脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG处理2小时后，再加入5mM的肌苷，对照组加入细胞培养基。再继续培养12小时后，用100ng/ml的LPS刺激8小时。每组4个重复。分别收集细胞，提取总RNA。荧光定量PCR检测il1b和c3基因的表达情况，结果见图9。
由图可见，Raw264.7细胞受到LPS刺激后il1b表达升高，而肌苷抑制了il1b表达，抑制倍数为12倍。Raw264.7细胞受到LPS刺激后，加入脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG，则促进il1b的表达，最高可达3.3倍；而加入抑制剂同时再加入肌苷，则il1b的表达降低，当脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG为0.5mM时，加入肌苷是未加肌苷的89％。
同时，Raw264.7细胞受到LPS刺激后c3表达也升高，再加入肌苷使il1b表达继续增加1.66倍。Raw264.7细胞受到LPS刺激后，如加入脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG，则抑制c3表达；而加入抑制剂同时再加入肌苷，则c3的表达上调，当脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG为0.5mM时，加入肌苷是未加肌苷的1.9倍。
(2)将Raw264.7-PHD-/-细胞(PHD基因缺失细胞)以1×106/每孔数量铺板到6孔板中，放入细胞培养箱培养12小时。加入5mM的肌苷，对照组加入细胞培养基，每组4个重复。继续培养12小时后，用100ng/ml的LPS刺激8小时，收集细胞，提取每个样品的总RNA。荧光定量PCR检测il1b和c3的表达情况，结果参见图10。
由图可见，脯氨酸羟化酶PHD缺失后，il1b表达增加，而补体c3表达下降，而脯氨酸羟化酶PHD缺失株添加肌苷后，肌苷对il1b表达的抑制效果和对补体c3表达的促进效果均消失。
上述结果说明，如果脯氨酸羟化酶PHD受到了抑制或者细胞缺少这个酶，那么细胞受到LPS刺激后，即使再加入肌苷，由于肌苷与脯氨酸羟化酶PHD结合减少，或者无法与脯氨酸羟化酶PHD结合，从而不能影响缺氧诱导因子的稳定性，这样就无法抑制il1b表达和促进c3表达。也就是说明肌苷首先必须与脯氨酸羟化酶PHD结合，才能影响缺氧诱导因子的稳定性，从而实现对il1b和c3表达的调节。
实施例4肌苷提高鱼类对迟缓爱德华菌感染的抵抗能力
4.1外源添加肌苷提高鱼类对迟缓爱德华氏菌感染的存活率影响
将试验用鱼(鲫鱼，草鱼和罗非鱼)在实验室喂养一周，使其适应试验环境后，各随机分成4组。先采用肌肉注射方式每尾鱼注射体积10μL的肌苷((鲫鱼和草鱼剂量分别为25μg、50μg和100μg，罗非鱼剂量分别为10μg、20μg和40μg)，每天2次。对照组注射相同体积的生理盐水。3天后，采用肌肉注射迟缓爱德华氏菌(1×105CFU/鲫鱼，1×106CFU/草鱼，1×105CFU/罗非鱼)。连续观察15天，统计死亡鱼的数量，并计算存活率，结果统计参见图11。
由图可知，随着肌苷注射量的增加，鲫鱼、草鱼和罗非鱼感染迟缓爱德华氏菌后存活率逐渐增加。具体为：鲫鱼在未注射肌苷的情况下，存活率为40％，注射25μg肌苷后存活率为57％，注射50μg肌苷后存活率为73％，注射100μg肌苷后存活率为77％，存活率提高了17-37％。草鱼在未注射肌苷的情况下，存活率为40％，注射25μg肌苷后存活率为43％，注射50μg肌苷后存活率为53％，注射100μg肌苷后存活率为80％，存活率提高了3-40％。罗非鱼在未注射肌苷的情况下，存活率为60％，注射10μg肌苷后存活率为63％，注射20μg肌苷后存活率为70％，注射40μg肌苷后存活率为77％，存活率提高了3-17％。
4.2外源肌苷对鱼类感染迟缓爱德华氏菌后的免疫因子影响
将每种鱼各分组2组，迟缓爱德华氏菌感染组，肌苷+迟缓爱德华氏菌感染组。先采用肌肉注射方式每尾鱼注射10μL的肌苷(含量分别为50μg)，对照组注射相同体积的生理盐水。每天2次。对照组注射相同体积的生理盐水。三天后，采用肌肉注射迟缓爱德华氏菌(1×104CFU/鲫鱼，1×105CFU/草鱼，1×104CFU/罗非鱼)。6小时后，收集鱼的脾脏样品，每组4个生物学重复，荧光定量PCR检测免疫基因il1b和c3的表达情况。引物如下：鲫鱼：il1b1(上游atgcgctgctcaacttcat，下游ctggcccttattttgttgag)，il1b2(上游caaagcgatcctcttcattt，下游attcgggtcatcagttttaa)，C3(上游tggggatggatctgaaaca，下游tgcccatgatgaggtacga)。草鱼：il1b(上游gccatttccaagagtaatct，下游aacggattcaaaagtgttatta)，C3(上游atacatcggcatcactgaac，下游cccaaacggatattatgaag)。罗非鱼：il1b(上游aaggcacaaacctctatctg，下游tgtcgcgtttgtagaagaga)，c3(上游atgttaccttaacacccaag，下游gctctccatacaggtacctg)，结果数据统计参见图12。
由图可见，肌苷促进c3表达，而抑制il1b表达。具体情况为：相对于单独注射细菌组，草鱼在注射肌苷后il1b下降了2倍，补体c3上升了3倍。鲫鱼在注射肌苷后il1b1下降了3.2倍，il1b2下降了5倍，补体c3上升了2.5倍。罗非鱼在注射肌苷后il1b下降了4倍，补体c3上升了3.9倍。
这些结果说明，肌苷可提高宿主抗细菌感染在鱼类模型上也是适用的。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.肌苷在制备抗感染药物中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述肌苷可以与脯氨酸羟化酶结合调节细胞因子。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述细胞因子为IL-1β因子。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述肌苷可以抑制所述IL-1β因子含量增加。
5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述细胞因子为补体3C。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述肌苷可以促进所述补体3C含量增加。
7.根据权利要求1～6任一所述应用，其特征在于，所述抗感染药物可以提高被感染生物的存活率。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述肌苷包括肌苷，肌苷的可药用的盐和酯，选择性取代的类似物，肌苷立体异构体、几何异构体、水合物、溶剂化物或药学上可接受的盐或前药。
9.一种抗感染药物，其特征在于，含有有效量的肌苷。
10.根据权利要求9所述药物，其特征在于，所述药物为口服剂型或注射剂型。
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