CN111896650B - 一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法 - Google Patents

一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于分析化学技术领域，具体公开了一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S‑N‑Boc‑哌啶醇的方法：首先将R/S‑N‑Boc‑哌啶醇与芳香酰氯经过柱前衍生酯化反应得到R/S‑N‑Boc‑哌啶醇酯；然后采用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用正己烷和醇作为流动相，将R/S‑N‑Boc‑哌啶醇酯配制成浓度为0.2‑1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.5‑1.5mL/min，进样量为5‑15μL，检测波长为230‑255nm，色谱柱柱温为25‑35℃，从而将R/S‑N‑Boc‑哌啶醇分离。本发明方法得到的色谱峰峰型和对称性好、分离度高，可以灵敏地拆分R/S‑N‑Boc‑哌啶醇。

Description

一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法
技术领域
本发明属于分析化学技术领域，涉及一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法。
背景技术
S-N-Boc-哌啶醇
Figure GDA0003729756530000011
是一个重要的药物中间体，被广泛应用于镇痛、抗精神病和抗肿瘤等药物的合成，主要用于合成抗充血性心力衰竭药卡莫瑞林和治疗套细胞淋巴瘤、慢性淋巴性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤和EGFR突变型的非小细胞肺癌依鲁替尼的合成。S-N-Boc-哌啶醇作为重要中间体，它的光学纯度直接影响到合成的原料药的光学纯度。因此，对R/S-N-Boc-哌啶醇手性分离方法研究有着重要的工业价值。
目前，R/S-N-Boc-哌啶醇手性拆分方法主要是酶促法。经文献检索，CN105420307A公开了一种制备(S)-N-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶的方法，该专利通过酶催化拆分N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮，但未说明检测方法。CN103789368A公开了一种N-保护哌啶醇的生产方法，该专利采用酶催化N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮和1-苄基-3-哌啶酮产生相应的哌啶醇，并对最终的产物进行了检测，其检测方法为：通过使用Chiralpak ODH柱(250×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为正己烷/异丙醇＝95/5；出峰时间：S型7.0min，R型7.4min；该方法响应低，未达到完全分离。
发明内容
本发明的目的在于解决现有R/S-N-Boc-哌啶醇的拆分方法成本高、灵敏度低以及色谱峰分离度未达到要求等问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，包括以下步骤：
a、将R/S-N-Boc-哌啶醇与芳香酰氯经过柱前衍生酯化反应得到R/S-N-Boc-哌啶醇酯；
b、采用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用正己烷和C2～C4烷基醇的混合液作为正相流动相，将R/S-N-Boc-哌啶醇酯配制成浓度为0.2-1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.5-1.5mL/min，进样量为5-15μL，检测波长为230-255nm，色谱柱柱温为25-35℃，从而将R/S-N-Boc-哌啶醇分离。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤a中，所述芳香酰氯为苯甲酰氯、对硝基苯甲酰氯、邻氯苯甲酰氯或对甲氧基苯甲酰氯。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，所述柱前衍生酯化反应包括以下步骤：将R/S-N-Boc-哌啶醇与芳香酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，以吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到R/S-Boc-哌啶醇酯；所述芳香酰氯：R/S-N-Boc-哌啶醇：吡啶的摩尔比为0.80～0.84：1.00：1.25～1.30。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所述正己烷和C2～C4烷基醇的混合液，按体积比计算，即正己烷：C2～C4烷基醇为60～90％：10～40％。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，所述C2～C4烷基醇选自乙醇和/或异丙醇。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，当C2～C4烷基醇为乙醇和异丙醇时，乙醇和异丙醇的体积比为1：3。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，进行色谱分离时，流速为1.0mL/min，进样量为10μL，色谱柱柱温为30℃。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所述直链淀粉类手性柱是5μm硅胶表面涂敷有直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；优选的，所述直链淀粉类手性柱为Chiralpak AD-H250*4.6mm手性柱。
其中，上述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，步骤b中，所用的高效液相色谱仪为：Agilent 1260InfinityⅡ1260Quat Pump VLG7111A1260VWD G7114A1260Viaisample G7129C。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的方法通过将R/S-N-Boc-哌啶醇与衍生试剂芳香酰氯反应，使得衍生物具有较强的紫外吸收，在广泛使用的紫外检测器中检测时，具有较高的灵敏度；另外，本发明以正己烷和C2～C4烷基醇的混合液为流动相，可以将S-N-Boc-哌啶醇酯和R-N-Boc-哌啶醇酯快速分离，并且分离度好。本发明的方法克服了现有技术中存在的缺陷和不足，具有操作简单便捷、检测快速灵敏、色谱峰峰形和对称性好，分离度高等优势，在医药合成分析领域具有广泛的应用前景。
附图说明
图1是实施例1中R/S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱分离图；
图2是实施例1中S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱定位图；
图3是实施例2中R/S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱分离图；
图4是实施例2中S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱定位图；
图5是实施例3中R/S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱分离图；
图6是实施例3中S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱定位图；
图7是实施例4中R/S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱分离图；
图8是实施例4中S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯液相色谱定位图。
具体实施方式
下面通过具体实施例和附图对本发明进行进一步的阐述，但并不限制本发明。
本发明各实施例中所用的高效液相色谱仪为：Agilent 1260InfinityⅡ1260QuatPump VL G7111A 1260 VWD G7114A 1260 Viaisample G7129C。
实施例1
(1)R/S-N-Boc-哌啶醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-N-Boc-哌啶醇酯，结构如下：
Figure GDA0003729756530000041
其中R为COC6H5。
所述柱前衍生酯化反应是将R/S-N-Boc-哌啶醇与苯甲酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到R/S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；所用的苯甲酰氯、R/S-N-Boc-哌啶醇和缚酸剂吡啶的量，按摩尔比计算为0.80～0.84：1.00：1.25～1.30；
所述柱前衍生酯化反应具体包括如下步骤：
在带有温度计的50mL三口瓶中依次加入R/S-Boc-3-哌啶醇(0.69g，3.43mmol)，吡啶(0.34g，4.30mmol)，加入10mL二氯甲烷溶解，在10℃下加入苯甲酰氯(0.4g，2.86mmol)，随后加热至20℃，并保温搅拌1h，浓缩体系，用石油醚/乙酸乙酯(6：1，v/v)做淋洗液，硅胶柱柱层析得白色固体。收率为90％，液相检测纯度大于98％。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对上述所得的白色固体进行测定，得核磁共振数据，如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(d,J＝7.6Hz,2H),7.55(t,J＝7.3Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,2H),5.04(s,1H),3.83(d,J＝48.8Hz,2H),3.30(d,J＝95.6Hz,2H),1.92(s,3H)1.36(d,J＝49.9Hz,10H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得白色固体为R/S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体，其结构式分别如下：
Figure GDA0003729756530000051
(2)同步骤(1)的柱前衍生操作，将S-Boc-3-哌啶醇与苯甲酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到白色固体S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对柱前衍生的白色固体进行测定，得核磁共振数据，如下：
1H NMR(501MHz,CDCl3)δ8.02(d,J＝7.5Hz,2H),7.53(t,J＝7.2Hz,1H),7.40(t,J＝7.5Hz,2H),5.02(s,1H),3.85(d,J＝64.8Hz,2H),3.62-3.05(m,2H),1.90(s,3H),1.50-1.18(m,10H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得的白色固体为S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
(3)分别取25mg步骤(1)所得的R/S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体衍生物和50mg步骤(2)所得的S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，用流动相溶解定容至50mL容量瓶，得到0.5mg/mL供试品溶液和1.0mg/mL定位溶液；按下述液相条件进行高效液相色谱分析。液相色谱分析的条件如下：
仪器：Agilent 1260InfinityⅡ；
色谱柱：Chiralpak AD-H(250mm*4.6mm)5um,大赛璐药物手性技术有限公司。
流动相流速：1.0mL/min；
色谱柱温度为30℃；
进样量为10μL；
检测波长为230nm；
流动相为正己烷：异丙醇＝90：10
图1为步骤(1)所得白色固体液相色谱图，图2为步骤(2)所得白色固体液相色谱图。从图2可以看出，保留时间5.151min为S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。从图1可以看出，保留时间5.202min为S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；保留时间6.333min为R-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，两者的分离度为3.01。由此表明了本发明方法的分离度高、出峰时间合适，在10min内完成检测，可以快速灵敏的检测R/S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
实施例2
(1)R/S-N-Boc-哌啶醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-N-Boc-哌啶醇酯，结构如下：
Figure GDA0003729756530000061
其中R为COC6H4NO2。
所述柱前衍生化反应是将R/S-N-Boc-哌啶醇与对硝基苯甲酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到R/S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；所用的对硝基苯甲酰氯、R/S-N-Boc-哌啶醇和缚酸剂吡啶的量，按摩尔比计算为0.80～0.84：1.00：1.25～1.30；
上述的柱前衍生酯化反应，具体包括如下步骤：
在带有温度计的50mL三口瓶中依次加入R/S-N-Boc-哌啶醇(0.65g，3.23mmol)，吡啶(0.32g，4.05mmol)，加入10mL二氯甲烷溶解，10℃下加入对硝基苯甲酰氯(0.5g，2.69mmol)，随后加热至20℃，并保温搅拌1h，浓缩体系，用石油醚/乙酸乙酯(6：1，v/v)做淋洗液，硅胶柱柱层析得淡黄色固体。收率为82％，液相检测纯度大于98％。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对上述所得的淡黄色固体进行测定，得到核磁共振数据，如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.84(d,J＝7.3Hz,1H),7.41(dd,J＝17.9,7.4Hz,2H),7.28(dd,J＝12.0,4.7Hz,1H),5.07(s,1H),3.79(d,J＝45.9Hz,2H),3.47(d,J＝13.5Hz,1H),3.21(s,1H),1.91(s,3H),1.47-1.24(m,10H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得的淡黄色固体为R/S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体，其结构式如下：
Figure GDA0003729756530000071
(2)同步骤(1)的柱前衍生操作，S-Boc-3-哌啶醇与对硝基苯酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到淡黄色固体S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对柱前衍生的淡黄色固体进行测定，得核磁共振数据，如下：
1H NMR(501MHz,CDCl3)δ8.28(d,J＝7.9Hz,2H),8.20(d,J＝8.3Hz,2H),5.09(s,1H),3.86(d,J＝58.8Hz,2H),3.44(d,J＝13.5Hz,1H),3.20(s,1H),1.94(s,3H),1.47-1.24(m,10H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得的淡黄色固体是S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
(3)分别取25mg步骤(1)所得的R/S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体衍生物和25mg步骤(2)所得的S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，用流动相溶解定容至25mL容量瓶，得到1.0mg/mL供试品溶液和1.0mg/mL定位溶液；按下述液相条件进行高效液相色谱分析；液相色谱分析的条件如下：
仪器：Agilent 1260InfinityⅡ；
色谱柱：Chiralpak AD-H(250mm*4.6mm)5um,大赛璐药物手性技术有限公司。
流动相流速：1.0mL/min；
色谱柱温度为30℃；
进样量为10μL；
检测波长为254nm；
流动相为正己烷：异丙醇＝60：40
图3为步骤(1)所得淡黄色固体液相色谱图，图4为步骤(2)所得淡黄色固体液相色谱图。从图4可以看出，保留时间5.828min为S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；从图3可以看出，保留时间5.698min为S-苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，保留时间4.824min为R-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，两者的分离度为2.51，由此表明了本发明方法的分离度高、出峰时间合适，在8min内完成检测，可以快速灵敏的检测R/S-对硝基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
实施例3
(1)R/S-N-Boc-哌啶醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-N-Boc-哌啶醇酯，结构如下：
Figure GDA0003729756530000091
其中R为COC6H4Cl。
所述柱前衍生化反应是将R/S-N-Boc-哌啶醇与邻氯苯甲酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到R/S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；所用邻氯苯甲酰氯、R/S-N-Boc-哌啶醇和缚酸剂吡啶的量，按摩尔比计算为0.80～0.84：1.00：1.25～1.30。
所述柱前衍生化反应具体包括如下步骤：
在带有温度计的50mL三口瓶中加入N-Boc-3-哌啶醇(0.69g，3.43mmol)，吡啶(0.34g，4.30mmol)，加入10mL二氯甲烷溶解，在10℃下加入邻氯苯甲酰氯(0.5g，2.86mmol)，随后加热至20℃，并保温搅拌1h，浓缩体系，用石油醚/乙酸乙酯(6：1，v/v)做淋洗液，硅胶柱柱层析得黄色液体。收率为75％，液相检测纯度大于85％。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对上述所得的黄色液体进行测定，得到核磁共振数据，如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.84(d,J＝7.3Hz,1H),7.41(dd,J＝17.9,7.4Hz,2H),7.28(dd,J＝12.0,4.7Hz,1H),5.07(s,1H),3.79(d,J＝45.9Hz,2H),3.47(s,1H),3.21(s,1H),1.91(s,3H),1.57(s,1H),1.36(s,9H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得的黄色液体为R/S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体，其结构式分别如下：
Figure GDA0003729756530000101
(2)同步骤(1)的柱前衍生操作，S-Boc-3-哌啶醇与邻氯苯甲酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到黄色液体S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对柱前衍生的黄色液体进行测定，得核磁共振数据，如下：
1H NMR(501MHz,CDCl3)δ7.82(s,1H),7.40(d,J＝12.7Hz,2H),7.31-7.26(m,1H),5.05(s,1H),3.79(d,J＝64.0Hz,2H),3.47(d,J＝34.9Hz,1H),3.17(s,1H),1.89(s,3H),1.55(s,1H),1.34(s,9H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得的淡黄色固体是S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
(3)分别取10mg步骤(1)所得的R/S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体衍生物和20mg步骤(2)所得的S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，用流动相溶解定容至50mL容量瓶，得到0.2mg/mL供试品溶液和0.4mg/mL定位溶液；按下述液相条件进行高效液相色谱分析；液相色谱分析的条件如下：
仪器：Agilent 1260InfinityⅡ；
色谱柱：Chiralpak AD-H(250mm*4.6mm)5um,大赛璐药物手性技术有限公司。
流动相流速：1.0mL/min；
色谱柱温度为30℃；
进样量为10μL；
检测波长为230nm；
流动相为正己烷：异丙醇＝90：10
图5为步骤(1)所得黄色液体液相色谱图，图6为步骤(2)所得黄色液体液相色谱图。从图6可以看出，保留时间5.705min为S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；从图5可以看出，保留时间5.705min为S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，保留时间6.928min为R-对邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，两者的分离度为2.86，由此表明了本发明方法的分离度高、出峰时间合适，在10min内完成检测，可以快速灵敏的检测R/S-邻氯苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
实施例4
(1)R/S-N-Boc-哌啶醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-N-Boc-哌啶醇酯，结构如下：
Figure GDA0003729756530000111
其中R为COC6H4OCH3；
所述柱前衍生化反应即将R/S-N-Boc-哌啶醇与对甲氧基苯甲酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到R/S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；所用的对甲氧基苯甲酰氯、R/S-N-Boc-哌啶醇和缚酸剂吡啶的量，按摩尔比计算为0.80～0.84：1.00：1.25～1.30。
上述的柱前衍生酯化反应，具体包括如下步骤：
在带有温度计的50mL三口瓶中加入N-Boc-3-羟基哌啶(0.69g，3.43mmol)，吡啶(0.34g，4.30mmol)，加入10mL二氯甲烷溶解，在10℃下加入对甲氧基苯甲酰氯(0.49g，2.86mmol)，随后加热至20℃，并保温搅拌1h，浓缩体系，用石油醚/乙酸乙酯(6：1，v/v)做淋洗液，硅胶柱柱层析得白色固体。收率为82％，液相检测纯度大于90％。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对上述所得的白色固体进行测定，得到核磁共振数据，如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝16.6Hz,2H),6.89(d,J＝8.6Hz,2H),5.00(s,1H),3.84(s,3H),3.79-3.00(m,4H),1.89(s,3H),1.50-1.21(m,10H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得的白色固体为R/S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体，其结构式分别如下：
Figure GDA0003729756530000121
(2)同步骤(1)的柱前衍生操作，S-Boc-3-哌啶醇与对甲氧基苯甲酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到白色固体S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
采用核磁共振仪器(Bruker-500/VANCEⅢ)对柱前衍生的白色固体进行测定，得核磁共振数据，如下：
1H NMR(501MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝7.7Hz,2H),6.89(d,J＝7.7Hz,2H),4.99(s,1H),3.95-2.98(m,8H)，1.89(s,3H),1.47-1.40(m,3H),1.26(d,J＝23.2Hz,6H).
从上述的核磁共振数据可以看出，所得的白色固体是S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
(3)分别取10mg步骤(1)所得的R/S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯非对映异构体衍生物和25mg步骤(2)所得S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，用流动相溶解定容至25mL的容量瓶，分别得到0.4mg/mL供试品溶液和1.0mg/mL定位溶液；按下述液相条件进行高效液相色谱分析；液相色谱分析的条件如下：
仪器：Agilent 1260InfinityⅡ；
色谱柱：Chiralpak AD-H(250mm*4.6mm)5μm,大赛璐药物手性技术有限公司。
流动相流速：1.0mL/min；
色谱柱温度为30℃；
进样量为10μL；
检测波长为254nm；
流动相为正己烷：异丙醇：乙醇＝60：30：10；
图7为步骤(1)所得白色固体液相色谱图，图8为步骤(2)所得白色固体液相色谱图。从图8可以看出，保留时间4.321min为S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯；从图7可以看出，保留时间4.290min为S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，保留时间5.361min为R-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯，两者的分离度为3.45，由此表明了本发明方法的分离度高、出峰时间合适，在8min内完成检测，可以快速灵敏的检测R/S-对甲氧基苯甲酸N-Boc-哌啶醇酯。
综上所述，本发明提供了一种手性衍生试剂柱前衍生高效液相色谱拆R/S-Boc-哌啶醇的方法，综合考察了衍生试剂苯甲酰氯、对硝基苯甲酰氯、邻氯苯甲酰氯、对甲氧基苯甲酰氯衍生得到N-Boc-哌啶醇酯，色谱峰之间的分离度、出峰时间、色谱峰峰型的影响，为R/S-Boc-哌啶醇酯提供了可以快速灵敏检测其构型和比例的液相方法，与以往分析方法相比，能够快速简单的对R/S-N-Boc-哌啶醇的分离和测定，而且达到良好的分离、成本低、操作简便。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、将R/S-N-Boc-哌啶醇与芳香酰氯经过柱前衍生酯化反应得到R/S-N-Boc-哌啶醇酯；
b、采用高效液相色谱仪，以Chiralpak AD-H 250mm*4.6mm*5μm手性柱为色谱柱，将R/S-N-Boc-哌啶醇酯配制成浓度为0.2-1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.5-1.5mL/min，进样量为5-15μL，检测波长为230-255nm，色谱柱柱温为25-35℃，从而将R/S-N-Boc-哌啶醇分离；
所述芳香酰氯为苯甲酰氯或者邻氯苯甲酰氯时，正相流动相为正己烷和异丙醇的混合液，所述正己烷与异丙醇的体积比为90:10；
所述芳香酰氯为对硝基苯甲酰氯时，正相流动相为正己烷和异丙醇的混合液，所述正己烷与异丙醇的体积比为60:40；
所述芳香酰氯为对甲氧基苯甲酰氯时，正相流动相为正己烷、异丙醇和乙醇的混合液，所述正己烷、异丙醇和乙醇的体积比为60:30:10。
2.根据权利要求1所述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，其特征在于，所述柱前衍生酯化反应包括以下步骤：将R/S-N-Boc-哌啶醇与芳香酰氯溶解在二氯甲烷溶剂中，以吡啶作为缚酸剂进行酯化反应得到R/S-Boc-哌啶醇酯；所述芳香酰氯：R/S-N-Boc-哌啶醇：吡啶的摩尔比为0.80～0.84：1.00：1.25～1.30。
3.根据权利要求2所述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，其特征在于，步骤b中，进行色谱分离时，流速为1.0mL/min，进样量为10μL，色谱柱柱温为30℃。
4.根据权利要求3所述的一种柱前衍生高效液相色谱拆分R/S-N-Boc-哌啶醇的方法，其特征在于，步骤b中，所用的高效液相色谱仪为：Agilent 1260InfinityⅡ，1260QuatPump VL G7111A，1260VWD G7114A，1260Viaisample G7129C。
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