CN111896533A - 一种耐受辐照的酚红试剂及其应用 - Google Patents

一种耐受辐照的酚红试剂及其应用 Download PDF

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唐大运
陈俊飞
刘梅
项春燕
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    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
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Abstract

本发明涉及一种耐受辐照的酚红试剂及其应用，属于保护剂改良技术领域。其在酚红指示剂或含有酚红的试剂中添加酚红保护剂，充分混匀后即可。本发明在含有酚红的溶液里添加保护剂，可让酚红耐受伽马射线或电子束的辐照，可改变含酚红的无菌试剂需要过滤除菌或高压除菌的方式，可将配置好的试剂直接进行辐照处理，无需对试剂的溶液瓶处理，也无需后续的处理，可提高含有酚红的溶液的生产效率，降低生产难度，降低生产成本，降低生产环节染菌的概率，可提高一次性合格率。

Description

一种耐受辐照的酚红试剂及其应用
技术领域
本发明涉及一种耐受辐照的酚红试剂及其应用，属于保护剂改良技术领域。
背景技术
酚红指示剂是由酚红(Phenolsulfonphthalein)所配制成的0.02％～0.05％的醇溶液。当被测溶液的pH值小于6.8，则指示剂呈现黄色的酸性反应；若被测溶液的pH值大于8.4，则指示剂呈现红色的碱性反应。
酚红做为一种常用的指示剂，在培养基(hanks平衡液、IMDM培养基1640、MEM)及化学试剂的配制过中经常使用，但酚红溶液对伽马射线或电子束较为敏感，如配制的含有酚红的试剂需要无菌，大多需要使用无菌过滤或高压灭菌的方式，但这两种无菌的方式需要耗费大量的人力及财力，且不便于大规模的生产。
辐照具有速度快，灭菌彻底、生产工艺简单等优势，已在食品、医疗器械等领域大规模应用。但酚红指示剂本身并不能够经受辐照，因此，亟待提供一种经过改性的酚红指示剂，能够经受辐照。
发明内容
本发明的目的是克服上述不足之处，提供一种一种耐受辐照的酚红试剂及其应用，可让酚红耐受伽马射线或电子束的辐照，可提高生产效率。
本发明的技术方案，一种耐受辐照的酚红试剂，在酚红指示剂中添加酚红保护剂，充分混匀后即可。
所述酚红保护剂具体为半胱氨酸、半胱胺、胱胺、氨乙基异硫脲、氨基丙胺基乙基硫代磷酸单钠盐和抗坏血酸中的一种或几种。
如权利要求1所述耐受辐照的酚红试剂，所述酚红保护剂的添加量具体为0.01％～5％。
耐受辐照的酚红试剂的应用，混匀后的试剂能够进行辐照处理。
所述辐照具体为伽马射线或电子束的辐照，计量为0.1-30kGy。
本发明的有益效果：本发明在含有酚红的溶液里添加保护剂，可让酚红耐受伽马射线或电子束的辐照，可改变含酚红的无菌试剂需要过滤除菌或高压除菌的方式，可将配置好的试剂直接进行辐照处理，无需对试剂的溶液瓶处理，也无需后续的处理，可提高含有酚红的溶液的生产效率，降低生产难度，降低生产成本，降低生产环节染菌的概率，可提高一次性合格率。
具体实施方式
实施例1hanks平衡液(含酚红)
在hanks平衡液里加入保护剂半胱氨酸，添加量为0.1％，辐照后hanks平衡液(含酚红)仍保持红色。不加保护剂的hanks平衡液变为无色。
细胞毒性实验
采用hela细胞系和CCK-8溶液证明细胞毒性，具体实验结果如下表1所示，实验结果表明辐照后的hanks平衡液(含酚红)没有明显的细胞毒性。
表1
Figure BDA0002620542290000021
保存能力验证：
采用呼吸道相关病毒，包括副流感病毒和A型流感病毒H1N1，进行保存能力验证，引物序列如表2所示，扩增体系如表3所示。扩增条件为63℃1min，60个循环，收集FAM荧光。
表2
pH1N1-HA-100-F3 ACATCCGATCACAATTGGAA
pH1N1-HA-100-B3 CCTACTGCTGTGAACTGTG
pH1N1-HA-100-FIP CCTTCAATGAAACCGGCAATGGCCACAGGATTGAGGAATGTC
pH1N1-HA-100-BIP ATCAAAATGAGCAGGGGTCAGGTCTCGTCAATGGCATTCTG
pH1N1-HA-100-LF GGCCTCTAGATTGAATAGACGG
pH1N1-HA-100-LB ATATGCAGCCGACCTGAAG
HPIV-2-N-2-F3 GCTTCAACTTTCACAATCAAGA
HPIV-2-N-2-B3 CTAGACTCTGATAATGTAGCATG
HPIV-2-N-2-FIP CCATTCCRCTGTGTTCAATGTATTAGCAAACCGCTAYTATGC
HPIV-2-N-2-BIP ATATGGACTTGGAACAAGATGGCCAGAGCTTTTAATTTCTGGAGTTC
HPIV-2-N-2-LF TTGCCAATGTCTCCYACCA
HPIV-2-N-2-LB GCTCTTGCAGCATTYTCWGGK
表3
组分 体积(μL)
Mix 10
引物<sup>ε</sup> 1
模板 5
Bst酶 1
AMV 0.05
H<sub>2</sub>O 7.95
结果如下表4，实验结果表明辐照后的hanks平衡液(含酚红)具有较好的保存能力。
表4
保存液 副流感病毒 A型流感病毒H1N1
0h 13.90 14.85
24h 14.89 16.43
48h 14.46 15.93
实施例2病毒运送培养基(含酚红)
在病毒运送培养基里加入保护剂胱胺，加入量为0.2％，辐照后病毒运送培养基仍保持红色。不加保护剂的病毒运送培养基平衡液变为无色。
细胞毒性实验
采用hela细胞系和CCK-8溶液证明细胞毒性，具体实验结果如下表5所示，实验结果表明辐照后的病毒运送培养基(含酚红)没有明显的细胞毒性。
表5
Figure BDA0002620542290000031
保存能力验证：
采用呼吸道相关病毒，包括副流感病毒和A型流感病毒H1N1，进行保存能力验证，引物序列如表6所示，扩增体系如表7所示。扩增条件为63℃1min，60个循环，收集FAM荧光。
表6
pH1N1-HA-100-F3 ACATCCGATCACAATTGGAA
pH1N1-HA-100-B3 CCTACTGCTGTGAACTGTG
pH1N1-HA-100-FIP CCTTCAATGAAACCGGCAATGGCCACAGGATTGAGGAATGTC
pH1N1-HA-100-BIP ATCAAAATGAGCAGGGGTCAGGTCTCGTCAATGGCATTCTG
pH1N1-HA-100-LF GGCCTCTAGATTGAATAGACGG
pH1N1-HA-100-LB ATATGCAGCCGACCTGAAG
HPIV-2-N-2-F3 GCTTCAACTTTCACAATCAAGA
HPIV-2-N-2-B3 CTAGACTCTGATAATGTAGCATG
HPIV-2-N-2-FIP CCATTCCRCTGTGTTCAATGTATTAGCAAACCGCTAYTATGC
HPIV-2-N-2-BIP ATATGGACTTGGAACAAGATGGCCAGAGCTTTTAATTTCTGGAGTTC
HPIV-2-N-2-LF TTGCCAATGTCTCCYACCA
HPIV-2-N-2-LB GCTCTTGCAGCATTYTCWGGK
表7
组分 体积(μL)
Mix 10
引物<sup>ε</sup> 1
模板 5
Bst酶 1
AMV 0.05
H<sub>2</sub>O 7.95
结果如下表8所示，实验结果表明辐照后的hanks平衡液(含酚红)具有较好的保存能力。
表8
保存液 副流感病毒 A型流感病毒H1N1
0h 12.42 15.43
24h 12.90 14.97
48h 12.64 14.78
在原有的试剂基础上增加酚红保护剂，达到辐照灭菌后酚红仍保持原来颜色的性能。

Claims (5)

1.一种耐受辐照的酚红试剂，其特征是：在酚红指示剂或含有酚红的试剂中添加酚红保护剂，充分混匀后即可。
2.如权利要求1所述耐受辐照的酚红试剂，其特征是：所述酚红保护剂具体为半胱氨酸、半胱胺、胱胺、氨乙基异硫脲、氨基丙胺基乙基硫代磷酸单钠盐和抗坏血酸中的一种或几种。
3.如权利要求1所述耐受辐照的酚红试剂，其特征是：所述酚红保护剂的添加量具体为0.01%~5%。
4.耐受辐照的酚红试剂的应用，其特征是：混匀后的试剂能够进行辐照处理。
5.如权利要求4所述耐受辐照的酚红试剂的应用，其特征是：所述辐照具体为伽马射线或电子束的辐照，计量为0.1-30kGy。
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