CN111892578A - 一种靶向降解黏着斑激酶的化合物及应用 - Google Patents

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CN111892578A CN202010767144.5A CN202010767144A CN111892578A CN 111892578 A CN111892578 A CN 111892578A CN 202010767144 A CN202010767144 A CN 202010767144A CN 111892578 A CN111892578 A CN 111892578A
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Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了如通式(I)的化合物及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药和它们的制备方法。化合物对黏着斑激酶(FAK)具有良好的降解活性。所述的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药如通式I所示，其中，Y、L、X、Z、R1如权利要求和说明书所述。

Description

一种靶向降解黏着斑激酶的化合物及应用
技术领域
本发明涉及生物医药和药物合成领域，涉及一类靶向降解黏着斑激酶(FAK) 蛋白的化合物，以及所述化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，它们的制备方法及其作为治疗剂特别是作为FAK降解剂的用途。
背景技术
黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)是一种细胞内的非受体酪氨酸激酶，属于酪氨酸蛋白激酶超家族，1992年由Schaller等人首次发现。FAK的结构可以分为4个部分：中间的激酶催化结构域、氨基端的FERM (4.1-ezrin-radixin-moesin)结构域、羧基端的局部粘附靶向结构域(focal adhesion targeting，FAT)和富含脯氨酸的结构域(proline-rich regions，PRRs)。其中，激酶域主要负责调控FAK的激酶活性，而FERM、FAT和PRR结构域主要调控蛋白质与蛋白质的相互作用，从而触发下游一系列的信号传导通路。因此，FAK 主要包括激酶依赖性的催化功能和非激酶依赖的骨架功能，这两种功能在癌症的发展、早期胚胎的发育、生殖等方面都是至关重要的。
虽然国际大的制药公司开发了一些FAK小分子抑制剂，并且针对恶性肿瘤的治疗已经进入临床试验阶段。然而这些抑制剂的作用位点主要集中在FAK激酶域的ATP结合口袋，是ATP竞争性抑制剂，只能影响或阻断激酶域的功能，不能阻断FAK非激酶依赖的骨架功能，并且容易发生耐药。因此，开发能够将 FAK蛋白降解的PROTAC(Proteolytic TargetingChimera)分子来同时阻断激酶依赖性的催化功能和非激酶依赖的骨架功能对FAK相关疾病的研究有具有重要的意义。
发明内容
基于上述问题，发明人设计合成了一系列新的蛋白靶向降解嵌合体 (PROTAC)化合物分子，该类分子作为双功能分子，包括三部分:一部分是靶向目标蛋白FAK的配体；另一部分是可以招募蛋白降解体系的结构(E3连接酶配体)；中间通过合适的连接链连接。PROTAC分子在进入细胞后，其结构中的靶蛋白(Protein of interest，POI)配体特异性的与靶蛋白结合，另一端E3连接酶配体(E3 ligand)结合E3连接酶(E3 ligase)，从而形成POI-PROTAC-E3 ligase 三元复合物，E3连接酶介导泛素结合酶E2将靶蛋白泛素化，三元复合物解离后，被泛素标记的靶蛋白会被送入蛋白酶体(proteasome)降解从而选择性地降低靶蛋白的水平。此过程无需靶蛋白配体长时间占据结合位点，只需三元复合物短暂的形成便可完成目标蛋白的泛素化，贴有泛素化标签的蛋白会被蛋白酶体识别并被降解，并且PROTAC在细胞内可多次循环发挥作用。该类分子可以降解整个 FAK蛋白，进而能同时影响激酶依赖的催化功能和非激酶依赖的骨架功能。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，
Figure RE-GDA0002692264110000021
Y为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、羧基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基；
X为CH2或羰基；
Z为C或N；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、羧基、(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基；
L为通式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)或(II-5)所示化合物，
Figure RE-GDA0002692264110000022
n为0-12之间的整数；
m为0-12之间的整数；
k为1-6之间的整数。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，
其中，Y为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、卤代(C1-C3)烷基、(C1-C3) 烷基、(C1-C3)烷氧基或(C3-C6)环烷基；
X为CH2或羰基；
Z为N；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基；
L为通式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)或(II-5)所示化合物，
Figure RE-GDA0002692264110000023
n为0-12之间的整数；
m为0-12之间的整数；
k为1-6之间的整数。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，
其中，Y为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基、(C1-C3)烷基；
X为CH2或羰基；
Z为N；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲基、甲氧基；
L为通式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)或(II-5)所示化合物，
Figure RE-GDA0002692264110000031
n为0-10之间的整数；
m为1-10之间的整数；
k为1-3之间的整数。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，
其中，Y为卤素或三氟甲基；
X为CH2或羰基；
Z为N；
R1为氢或甲氧基；
L为通式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)或(II-5)所示化合物，
Figure RE-GDA0002692264110000032
n为0-10之间的整数；
m为1-5之间的整数；
k为1-3之间的整数。
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，
其中，Y为三氟甲基；
X为CH2或羰基；
Z为N；
L为通式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)或(II-5)所示化合物，
Figure RE-GDA0002692264110000041
R1为氢或甲氧基；
n为2-7之间的整数；
m为1-5之间的整数；
k为1-3之间的整数。
本发明优选如下结构的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，
Figure RE-GDA0002692264110000042
Figure RE-GDA0002692264110000051
Figure RE-GDA0002692264110000061
Figure RE-GDA0002692264110000071
Figure RE-GDA0002692264110000081
而且，按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明中通式(I)的部分化合物具有碱性基团，可以与酸生成药学上可接受的盐。可药用加成盐包括无机酸和有机酸加成盐，与下列酸加成的盐是特别优选的：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。最优选为盐酸。
此外，本发明还包括本发明衍生物的前药。本发明衍生物的前药是通式(I) 的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
通式(I)所示的衍生物可以以非溶剂化形式和含有药学上可接受的溶剂(如水、乙醇等)的溶剂化形式。通式(I)所示的衍生物可以含有不对称或手性中心，因此可以以不同立体异构形式存在。本发明的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物(如外消旋混合物)，均包括在本发明的范围内。
通式(I)所示的化合物可以以不同的互变异构体形式存在，所有这些形式均包括在本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指经由低能垒互相转化的不同能量的结构异构体。
本发明中“卤素”是指氟、氯、溴或碘代；“烷基”是指直链或支链的烷基。
本发明可以含有通式(I)的衍生物，及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药作为活性成份，与药学上可接受的载体或赋型剂混合制备成组合物，并制备成临床上可接受的剂型，上述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的衍生物可以与其他活性成份组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。
本发明的药用组合物可配制成若干种剂型，其中含有药物领域中一些常用的赋形剂。如上所述的若干种剂型可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
用于本发明药物组合物的载体是药物领域中可得到的常见类型，包括：粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂、防腐剂、加溶剂和基质等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
本发明所述含有通式(I)的衍生物可以通过包括化学领域众所周知的方法来合成，尤其根据本发明的说明来合成。本发明中室温指环境温度，为10摄氏度至30摄氏度。
本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一类能够靶向降解黏着斑激酶 (FAK)的化合物，及其制备方法、药物组合物和应用。本发明的化合物对FAK激酶具有良好的降解效果，可以用于预防、治疗或辅助治疗与FAK激酶的表达或活性有关的多种疾病。
本发明提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下属实例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。本发明的通式(I)的化合物，可按照下述合成路线的方法制备得来，这些路线中应用的全部可变因数如权利要求中的定义。
附图说明
图1为化合物1和8的酶抑制活性曲线图；
图2为化合物1-12对FAK蛋白降解活性图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，下面描述的实施例是示例性的，旨在解释本发明，不需要进一步详细说明，认为本领域熟练技术人员借助于前面的描述，可以最大程度的利用本发明。因此下面提供的实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。
原料一般可以从商业来源获取的或者使用本领域技术人员所熟知的方法来制备，或根据本发明所述的方法制备。未经特殊说明，所用试剂均为分析纯或化学纯。
化合物结构确证所用的高分辨质谱采用Agilent6530精确质量四级杆飞行时间质谱仪测定。柱层析纯化产物使用的是青岛海洋化工厂生产的100-200目或者200-300目硅胶。
合成路线
Figure RE-GDA0002692264110000101
试剂与条件：a)4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯,ZnBr2,TEA,t-BuOH/DCE, 0℃；b)DIPEA,1,4-dioxane,100℃；c)CF3COOH,CH2Cl2,25℃.
a)将2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(2g，9.26mmol)加入叔丁醇(10mL) 和1,2-二氯乙烷(10mL)混合溶剂中，冷却到0℃，再加入溴化锌(2.5g，11.11 mmol)，搅拌30min。然后再反应体系中加入4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (2.57g，9.26mmol)和三乙胺(2.57mL，18.52mmol)，0℃条件下继续反应3 h。加水淬灭反应，二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和NaCl水溶液(3×15 mL)洗涤，Na2SO4干燥。滤除干燥剂，减压浓缩经柱层析纯化得中间体2(3.09 g,72.3％yield)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),7.54(s,1H),7.44(d,J＝ 8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.7Hz,2H),3.64–3.55(m,4H),3.16–3.08(m,4H),1.49 (s,10H).
b)将中间体2(2g，4.38mmol)、N-(2-(氨基甲基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(1.03 g，4.81mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.83mL，4.81mmol)加入二氧六环(20 mL)中，100℃条件下反应6h。冷却至室温，加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(3×15 mL)，有机层用饱和NaCl水溶液(3×15mL)洗涤，Na2SO4干燥。滤除干燥剂，减压浓缩经柱层析纯化得中间体3(2.26g,81.3％yield)。
c)将中间体3(2.26g，3.56mmol)溶于二氧甲烷(10ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，25℃反应5h，直接旋干，得到4的三氟乙酸盐。然后向烧瓶中加入二氯甲烷溶解产物，加入饱和碳酸氢钠水溶液，调节pH至偏碱性，将三氟乙酸盐游离，减压浓缩二氯甲烷层，得到中间体4(1.78g,93.6％yield)。
Figure RE-GDA0002692264110000111
试剂与条件：a)NaOAc,AcOH,140℃；b)DIPEA,DMF,90℃；c)CF3COOH, CH2Cl2,25℃；d)HATU,DIPEA,25℃；e)Ts-Cl,Et3N,CH2Cl2,30℃；f)Pd/C,H2, MeOH,40℃；g)i)SOCl2,CH2Cl2,40℃；ii)16,18or20,25℃.
a)将4-氟异苯并呋喃-1,3-二酮(3g，18.07mmol),3-氨基哌啶-2,6-二酮(2.55 g，19.88mmol)和乙酸钠(1.92g，23.47mmol)加入乙酸(30ml)中，升温至 140℃反应8h，用旋转蒸发仪直接将乙酸旋干，然后用二氯甲烷和甲醇的混合溶剂溶解后，拌样，经柱层析纯化得到中间体6(3.42g,68.7％yield)。1H NMR (400MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),7.97–7.92(m,1H),7.79(d,J＝7.3Hz,1H), 7.73(t,J＝8.9Hz,1H),5.16(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),2.89(ddd,J＝17.1,13.9,5.5 Hz,1H),2.66–2.51(m,2H),2.11–2.02(m,1H).MS(ESI)m/z(％):277.1[M+H]+ .只需将相应的反应底物进行替换，按同样的制备方法即可得到中间体15。
b)将中间体6(2g，7.25mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中，向反应体系中加入叔丁基甘氨酸(1.14g，8.69mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.64 ml，9.43mmol),90℃反应5h，加水(20mL)淬灭反应，二氯甲烷萃取(3×20 mL)，有机层用饱和NaCl水溶液(2×20mL)洗涤，Na2SO4干燥。滤除干燥剂，浓缩，柱层析纯化得中间体7(1.58g,56.2％yield)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.04(s,1H),7.51(dd,J＝8.4,7.2Hz,1H),7.15(d,J＝6.8Hz,1H),6.76(d,J＝8.4 Hz,1H),6.71(s,1H),4.96–4.90(m,1H),3.94(s,2H),2.89–2.74(m,3H),2.14–2.10(m,1H),1.50(s,9H).MS(ESI)m/z(％):410.2[M+Na]+.
只需相应地将反应底物进行替换，按同样的制备方法即可得到中间体9和中间体12a-b。
c)将中间体7(1.58g,4.08mmol)溶于二氧甲烷(10ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，25℃反应8h，直接旋干，得到中间体8。MS(ESI)m/z(％):332.1[M+H]+ .按同样的方法制得中间体10。
d)将中间体10(1equiv)溶于二氧甲烷中，加入溴取代的羧酸链(1.1equiv)， 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.2equiv)和N,N-二异丙基乙胺(1.5equiv)，25℃反应，TLC检测反应完毕，加水，二氯甲烷萃取，饱和NaCl水溶液洗涤有机层，Na2SO4干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，经柱层析纯化得到中间体11a-e。
e)将中间体12a-b(1equiv)溶于二氧甲烷中，加入三乙胺(1.3equiv)和对甲基苯磺酰氯(1.1equiv)，30℃反应，TLC检测反应完毕，加水，二氯甲烷萃取，饱和NaCl水溶液洗涤有机层，Na2SO4干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，经柱层析纯化得到中间体13a-b。
f)将中间体15(2g，6.60mmol)溶于甲醇(20ml)，加入10％Pd/C(0.2g)。反应液在氢气(1atm)条件下40℃搅拌3h，滤除钯碳，浓缩，柱层析纯化得到中间体16(1.51g,83.7％yield)。
g)将相应的溴代羧酸链(1.2equiv)加入茄形瓶中，然后向其中加入氯化亚砜，80℃搅拌5h。反应体系冷却后，旋干。向其中加入干燥的四氢呋喃溶解，然后再加入中间体16(1equiv)，50℃条件下反应，TLC监测反应完全后，冷却后抽滤即可得到中间体17a-d的粗品。只需将相应的反应底物替换，即可得到中间体19a-f和21a-d。
Figure RE-GDA0002692264110000121
试剂与条件：a)NaN3,DMF,100℃；b)CBr4,PPh3,CH2Cl2,25℃；c) propane-1,3-diol,tritionB,CH3CN,25℃；d)I2,PPh3,imidazole,THF,25℃；
a)将2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(2g，11.9mmol)和叠氮化钠(1.55 g，23.8mmol)加入DMF中，100℃反应12h。降至室温，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和NaCl水溶液(3×15mL)洗涤，Na2SO4干燥。滤除干燥剂，减压浓缩经柱层析纯化得中间体23(0.99g,47.5％yield)。 MS(ESI)m/z(％):176.3[M+H]+.
b)将中间体23(0.5g，2.85mmol)，四溴化碳(1.13g，3.42mmol)，三苯基膦(0.89g，3.42mmol)加入二氯甲烷(15mL)中，25℃反应12h。加水淬灭反应，二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和NaCl水溶液(3×15mL)洗涤，Na2SO4干燥。滤除干燥剂，减压浓缩经柱层析纯化得中间体24(0.36g,53.7％ yield)。MS(ESI)m/z(％):238.1[M+H]+.
c)将丙烯酸叔丁酯(2g，15.63mmol)，1,3-丙二醇(5.66mL，78.15mmol)， 40％的苄基三甲基氢氧化铵(0.24mL，0.57mmol)加入乙腈(10mL)中，25℃反应3d。加水淬灭反应，二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和NaCl水溶液(3×15mL)洗涤，Na2SO4干燥。滤除干燥剂，减压浓缩经柱层析纯化得中间体26(1.15g,36.2％yield)。MS(ESI)m/z(％):227.0[M+Na]+.
d)将三苯基膦(1.54g，58.79mmol)，咪唑(0.4g，58.79mmol)和碘(1.86 g，73.49mmol)溶于干燥的四氢呋喃中，对反应进行氩气保护，然后将中间体 26(1g，48.99mmol)的四氢呋喃溶液滴加到反应体系中，25℃反应3h。将反应混合物过滤，除去白色沉淀，减压浓缩经柱层析纯化得中间体27(0.49g,31.8％ yield)。
Figure RE-GDA0002692264110000131
试剂与条件：a)24or27,K2CO3,CH3CN,80℃；c)PPh3,THF/H20,70℃；f)8or10, HATU,DIPEA,CH2Cl2,25℃；d)F3CCOOH,CH2Cl2,25℃.
a)将中间体4(0.5g，0.91mmol)和中间体24(0.26g，0.11mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入碳酸钾(0.2g，1.44mmol)后升温至80℃反应6h，加水，二氯甲烷萃取(3×10mL)，饱和NaCl水溶液(2×10mL)洗涤有机层， Na2SO4干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，柱层析得到中间体28(0.39g,63.3％ yield)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(s,1H),7.54–7.44(m,2H),7.40(d,J＝ 9.0Hz,2H),7.37–7.30(m,2H),7.28–7.26(m,1H),6.87(d,J＝9.0Hz,2H),5.98(s,1H),5.13(s,1H),4.65(s,1H),3.72–3.64(m,8H),3.40–3.36(m,2H),3.24(s, 3H),3.20–3.16(m,4H),2.97(s,3H),2.77–2.69(m,6H).
只需相应地将反应底物进行替换，按同样的制备方法即可得到中间体30。
b)将中间体28(0.3g，0.43mmol)和三苯基膦(0.34g，1.29mmol)加入四氢呋喃(10mL)和水(3mL)的混合溶剂中，80℃反应，TLC检测反应完毕后，减压浓缩，将四氢呋喃旋出。二氯甲烷萃取(3×10mL)，饱和NaCl水溶液(2×10mL)洗涤有机层，Na2SO4干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，得到中间体29。
c)将中间体29(0.22g，0.33mmol)溶于二氧甲烷(5mL)中，加入中间体8(0.12g，0.37mmol)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (0.16g，0.43mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.08mL，0.49mmol)，25℃反应， TLC检测反应完毕，加水，二氯甲烷萃取(3×10mL)，饱和NaCl水溶液(2×10 mL)洗涤有机层，Na2SO4干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，经柱层析纯化得到化合物实施例1。按同样的制备方法即可得到化合物实施例2。
Figure RE-GDA0002692264110000141
试剂与条件：a)13a-b,DIPEA,DMF,90℃；b)19a-f、11a-e、21a-dor17a-d,KI,K2CO3,CH3CN,80℃.
a)中间体4(1equiv)和中间体13a或13b(1.1equiv)加入DMF中，再向其中加入N,N-二异丙基乙胺(1.3equiv)，升温至90℃反应。TLC检测反应完毕后，加水，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，柱层析纯化得到化合物实施例3或4。
b)中间体4(1equiv)和相应的中间体19a-f、11a-e、21a-d或17a-d(1.1equiv) 加入乙腈中，再向其中加入碘化钾(1.1equiv)和碳酸钾(1.3equiv)，升温至 80℃反应。TLC检测反应完毕后，加水，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥过夜。滤除干燥剂，减压浓缩，柱层析纯化得到化合物实施例5-10、实施例11-15、实施例16-19和实施例20-23。
实施例1：
Figure RE-GDA0002692264110000151
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.00(s,1H),8.14(s,1H),7.51–7.48(m,1H),7.44 (d,J＝5.8Hz,1H),7.39(d,J＝8.7Hz,2H),7.35–7.27(m,3H),7.18(d,J＝7.1Hz, 1H),6.97(s,1H),6.84(d,J＝8.7Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.70(t,J＝5.7 Hz,1H),5.96(s,1H),5.13(s,1H),4.90(dd,J＝11.4,4.4Hz,1H),4.66(s,1H),3.94 (d,J＝5.8Hz,2H),3.62–3.52(m,9H),3.45–3.42(m,1H),3.24(s,3H),3.15(s, 4H),2.97(s,4H),2.86–2.77(m,2H),2.72–2.64(m,6H),2.11(dd,J＝8.8,3.9Hz, 1H).HRMS calcd for C45H52F3N11O9S,[M+H]+,980.3695；found 980.3712.
实施例2：
Figure RE-GDA0002692264110000152
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.76(s,1H),8.14(s,1H),7.72(s,1H),7.50–7.46 (m,1H),7.45–7.41(m,3H),7.34–7.27(m,3H),7.08(d,J＝7.1Hz,1H),6.97(d,J ＝8.6Hz,1H),6.82(d,J＝8.7Hz,3H),6.41(t,J＝4.9Hz,1H),5.99(s,1H),5.12(s, 1H),4.88(dd,J＝12.0,5.4Hz,1H),4.65(d,J＝11.3Hz,1H),3.66(t,J＝5.6Hz, 2H),3.51–3.44(m,6H),3.22(s,3H),3.15(s,4H),2.96(s,3H),2.80–2.65(m,7H), 2.50–2.46(m,4H),2.09(dd,J＝7.8,5.3Hz,1H),1.82–1.78(m,2H).HRMS calcd for C45H52F3N11O8S,[M+H]+,964.3746；found964.3788.
实施例3：
Figure RE-GDA0002692264110000153
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.40(s,1H),8.15(s,1H),7.71(s,1H),7.49–7.45 (m,1H),7.44(d,J＝6.6Hz,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,2H),7.34–7.27(m,3H),7.09 (d,J＝7.1Hz,1H),6.90(d,J＝8.6Hz,1H),6.85(d,J＝8.9Hz,2H),6.52(t,J＝5.5 Hz,1H),6.00(s,1H),5.13(s,1H),4.87(dd,J＝11.5,4.1Hz,1H),4.64(d,J＝11.5 Hz,1H),3.73–3.69(m,4H),3.67–3.64(m,4H),3.47–3.44(m,2H),3.22(s,3H), 3.17(s,4H),2.96(s,3H),2.80–2.65(m,9H),2.10–2.06(m,1H).HRMS calcd for C43H49F3N10O8S,[M+H]+,923.3480；found923.3513.
实施例4：
Figure RE-GDA0002692264110000161
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.79(s,1H),8.15(s,1H),7.61(s,1H),7.49–7.43 (m,2H),7.39(d,J＝8.9Hz,2H),7.35–7.27(m,3H),7.09(d,J＝7.1Hz,1H),6.89 (d,J＝8.5Hz,1H),6.83(d,J＝8.9Hz,2H),6.50(t,J＝5.4Hz,1H),5.99(s,1H), 5.13(s,1H),4.88(dd,J＝12.3,5.4Hz,1H),4.64(d,J＝11.8Hz,1H),3.72–3.64(m, 12H),3.46–3.42(m,2H),3.23(s,3H),3.16(s,4H),2.96(s,3H),2.84–2.67(m, 9H),2.12–2.08(m,1H).HRMS calcd forC45H53F3N10O9S,[M+H]+,967.3743； found 967.3778.
实施例5：
Figure RE-GDA0002692264110000162
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.04(s,1H),9.43(s,1H),8.81(d,J＝8.5Hz,1H), 8.15(s,1H),7.83-7.68(m,2H),7.54(d,J＝7.3Hz,1H),7.44(d,J＝7.3Hz,1H), 7.41(d,J＝8.8Hz,2H),7.35–7.27(m,3H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),6.00(s,1H), 5.14(s,1H),4.92(dd,J＝12.4,5.3Hz,1H),4.64(d,J＝12.3Hz,1H),3.23(s,3H), 3.14(s,4H),2.96(s,3H),2.87(d,J＝15.8Hz,1H),2.79–2.71(m,2H),2.61(s,4H), 2.50(t,J＝7.3Hz,2H),2.47–2.44(m,2H),2.13–2.10(m,1H),1.82–1.77(m,2H), 1.66–1.60(m,2H).HRMS calcd forC42H45F3N10O7S,[M+H]+,891.3218；found 891.3225.
实施例6：
Figure RE-GDA0002692264110000163
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.90(s,1H),9.43(s,1H),8.81(d,J＝8.5Hz,1H), 8.15(s,1H),7.78–7.64(m,2H),7.54(d,J＝7.2Hz,1H),7.45-7.41(m,3H),7.36– 7.27(m,3H),6.86(d,J＝8.8Hz,2H),6.01(s,1H),5.13(s,1H),4.94(dd,J＝12.3, 5.3Hz,1H),4.65(d,J＝11.6Hz,1H),3.24(s,3H),3.21(s,4H),2.97(s,3H),2.89(d, J＝15.7Hz,1H),2.81–2.70(m,6H),2.53-2.46(m,4H),2.18–2.14(m,1H),1.82– 1.76(m,2H),1.67–1.61(m,2H),1.46-1.41(m,2H).HRMS calcd for C43H47F3N10 O7S,[M+H]+,905.3375；found 905.3394.
实施例7：
Figure RE-GDA0002692264110000171
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.10(s,1H),9.44(s,1H),8.80(d,J＝8.5Hz,1H), 8.14(s,1H),7.70(t,J＝7.9Hz,1H),7.54(d,J＝7.3Hz,1H),7.44-7.40(m,3H), 7.35–7.27(m,3H),6.87(d,J＝8.7Hz,2H),6.00(s,1H),5.13(s,1H),4.93(s,1H), 4.65(d,J＝11.3Hz,1H),3.23(s,3H),3.18(s,4H),2.97(s,3H),2.88(d,J＝15.6Hz, 1H),2.79–2.72(m,2H),2.68(s,4H),2.46(t,J＝7.1Hz,4H),2.17–2.14(m,1H), 1.79-1.74(m,2H),1.60-1.57(m,2H),1.44–1.38(m,4H).HRMS calcd for C44H49F3N10O7S,[M+H]+,919.3531；found919.3543.
实施例8：
Figure RE-GDA0002692264110000172
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.73(s,1H),9.44(s,1H),8.79(d,J＝8.5Hz,1H), 8.13(s,1H),7.98(s,1H),7.69(t,J＝7.9Hz,1H),7.53(d,J＝7.3Hz,1H),7.45-7.41 (m,3H),7.35–7.27(m,3H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),6.04(s,1H),5.12(s,1H),4.93 (dd,J＝11.9,5.4Hz,1H),4.64(d,J＝11.2Hz,1H),3.28-3.20(m,7H),2.96(s,3H), 2.87(d,J＝13.6Hz,1H),2.76-2.72(m,6H),2.53-2.49(m,2H),2.44(t,J＝7.3Hz, 2H),2.17-2.15(m,1H),1.74(dt,J＝13.3,6.7Hz,2H),1.62–1.58(m,2H),1.41– 1.30(m,6H).HRMS calcd forC45H51F3N10O7S,[M+H]+,933.3688；found 933.3702.
实施例9：
Figure RE-GDA0002692264110000173
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.97(s,1H),9.47(s,1H),8.80(d,J＝8.5Hz,1H), 8.14(s,1H),7.77–7.64(m,2H),7.53(d,J＝7.3Hz,1H),7.45-7.40(m,3H),7.35– 7.26(m,3H),6.84(d,J＝8.9Hz,2H),6.02(s,1H),5.12(s,1H),4.93(dd,J＝12.2, 5.4Hz,1H),4.64(d,J＝11.6Hz,1H),3.25–3.21(m,7H),2.96(s,3H),2.86(dd,J＝ 13.2,2.4Hz,1H),2.80–2.71(m,6H),2.52(s,2H),2.45(dd,J＝14.3,7.3Hz,2H), 2.17–2.12(m,1H),1.77–1.71(m,2H),1.63–1.58(m,2H),1.40–1.30(m,8H). HRMS calcd for C46H53F3N10O7S,[M+H]+,947.3844；found 947.3866.
实施例10：
Figure RE-GDA0002692264110000181
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ11.02(s,1H),9.44(s,1H),8.81(d,J＝8.3Hz,1H), 8.14(s,1H),7.76(s,1H),7.69(t,J＝7.7Hz,1H),7.53(d,J＝7.0Hz,1H),7.44– 7.39(m,3H),7.34–7.27(m,3H),6.84(d,J＝8.1Hz,2H),6.01(s,1H),5.13(s,1H), 4.93(dd,J＝11.8,4.8Hz,1H),4.64(d,J＝8.0Hz,1H),3.23(s,3H),3.18(s,4H), 2.96(s,3H),2.87(d,J＝15.6Hz,1H),2.81–2.69(m,6H),2.46–2.43(m,4H), 2.16-2.13(m,1H),1.76–1.72(m,2H),1.55(s,2H),1.40–1.30(m,10H).HRMS calcd for C47H55F3N10O7S,[M+H]+,961.4001；found961.4022.
实施例11：
Figure RE-GDA0002692264110000182
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.57(s,1H),8.14(s,1H),7.78(s,1H),7.46(dd,J＝17.1,9.0Hz,2H),7.41(d,J＝8.6Hz,2H),7.34–7.26(m,3H),7.07(d,J＝7.1Hz, 1H),6.96(d,J＝8.6Hz,1H),6.82(d,J＝8.6Hz,2H),6.48(s,1H),6.41(s,1H),6.00 (s,1H),5.12(s,1H),4.89(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),4.65(d,J＝11.5Hz,1H),3.44 (s,4H),3.22(s,3H),3.13(s,4H),2.96(s,3H),2.82–2.70(m,3H),2.63(s,4H),2.44 (s,2H),2.20(t,J＝7.0Hz,2H),2.09–2.05(m,1H),1.66–1.62(m,2H),1.58-1.54 (m,2H).HRMS calcd forC44H50F3N11O7S,[M+H]+,934.3640；found 934.3689.
实施例12：
Figure RE-GDA0002692264110000191
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ11.03(s,1H),8.14(s,1H),7.65(s,1H),7.47(t,J＝7.7Hz,1H),7.43(d,J＝6.9Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,2H),7.35–7.27(m,3H), 7.09(d,J＝7.0Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,2H),6.40(s, 1H),6.24(s,1H),5.98(s,1H),5.12(s,1H),4.88(dd,J＝11.6,5.1Hz,1H),4.68– 4.59(m,1H),3.53–3.41(m,4H),3.22(s,3H),3.16(s,4H),2.96(s,3H),2.84–2.66 (m,7H),2.43(d,J＝6.3Hz,2H),2.18(s,2H),2.11–2.07(m,1H),1.68–1.63(m, 2H),1.58–1.54(m,2H),1.35-1.31(m,2H).HRMScalcd for C45H52F3N11O7S, [M+H]+,948.3797；found 948.3851.
实施例13：
Figure RE-GDA0002692264110000192
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ11.07(s,1H),8.14(s,1H),7.60(s,1H),7.49–7.46 (m,1H),7.44(d,J＝7.1Hz,1H),7.39(d,J＝8.6Hz,2H),7.35–7.27(m,3H),7.09 (d,J＝7.1Hz,1H),6.93(d,J＝8.5Hz,1H),6.83(d,J＝8.7Hz,2H),6.41(s,1H), 6.11(s,1H),5.98(s,1H),5.12(s,1H),4.88(dd,J＝12.2,5.4Hz,1H),4.64(d,J＝ 9.0Hz,1H),3.59-3.56(m,1H),3.47–3.40(m,3H),3.22(s,3H),3.17(s,4H),2.96 (s,3H),2.83–2.67(m,7H),2.49–2.40(m,2H),2.22–2.13(m,2H),2.09–2.07(m, 1H),1.65(t,J＝11.2Hz,2H),1.54(s,2H),1.36–1.29(m,4H).HRMS calcd for C46H54F3N11O7S,[M+H]+,962.3953；found 962.4011.
实施例14：
Figure RE-GDA0002692264110000193
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.46(s,1H),8.14(s,1H),7.62(s,1H),7.50–7.47 (m,1H),7.44(d,J＝7.5Hz,1H),7.40(d,J＝8.9Hz,2H),7.35–7.26(m,3H),7.09 (d,J＝7.1Hz,1H),6.98(d,J＝8.6Hz,1H),6.83(d,J＝8.9Hz,2H),6.40(d,J＝5.0 Hz,1H),6.13(s,1H),5.99(s,1H),5.12(s,1H),4.90(dd,J＝12.3,5.4Hz,1H),4.64 (d,J＝13.1Hz,1H),3.49–3.43(m,4H),3.23(s,3H),3.20(s,4H),2.97(s,3H),2.86 –2.67(m,7H),2.46(d,J＝7.7Hz,2H),2.16(t,J＝7.5Hz,2H),2.11–2.08(m,1H), 1.63–1.59(m,2H),1.56–1.53(m,2H),1.33–1.28(m,6H).HRMS calcd for C47H56F3N11O7S,[M+H]+,976.4110；found 976.4171.
实施例15：
Figure RE-GDA0002692264110000201
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.94(s,1H),8.15(s,1H),7.57–7.44(m,3H),7.41(d, J＝8.9Hz,2H),7.35–7.27(m,3H),7.10(d,J＝7.1Hz,1H),7.00(d,J＝8.6Hz, 1H),6.85(d,J＝8.9Hz,2H),6.40(d,J＝5.2Hz,1H),5.99(d,J＝15.2Hz,2H),5.14 (s,1H),4.91(dd,J＝12.4,5.4Hz,1H),4.66(s,1H),3.49–3.44(m,4H),3.24(s,3H), 3.19(s,4H),2.97(s,3H),2.87–2.66(m,7H),2.44(s,2H),2.16(t,J＝7.5Hz,2H), 2.12–2.08(m,1H),1.63–1.60(m,2H),1.57–1.53(m,2H),1.33-1.26(m,8H). HRMS calcd for C49H60F3N11O7S,[M+H]+,1004.4423；found 1004.4482.
实施例16：
Figure RE-GDA0002692264110000202
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.79(s,1H),9.31(s,1H),8.18(s, 1H),7.82(d,J＝7.2Hz,1H),DMSO-d67.54(d,J＝7.3Hz,1H),7.52–7.47(m,2H), 7.38–7.24(m,6H),6.69(s,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.85(s,1H),4.74(s, 1H),4.37(q,J＝17.4Hz,2H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),3.00(s,4H),2.94–2.89(m, 1H),2.60(d,J＝16.8Hz,1H),2.49–2.45(m,4H),2.41–2.32(m,5H),2.04–2.01 (m,1H),1.64(dt,J＝15.0,7.4Hz,2H),1.54–1.50(m,2H).HRMS calcd for C42H47F3N10O6S,[M+H]+,877.3426；found877.3482.
实施例17：
Figure RE-GDA0002692264110000211
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.79(t,J＝6.8Hz,1H),9.33(s,1H),8.18(s,1H),7.82(dd,J＝7.4,0.9Hz,1H),7.54(d,J＝7.3Hz,1H),7.51–7.47(m, 2H),7.38–7.24(m,6H),6.70(s,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.84(s,1H), 4.75(s,1H),4.37(dd,J＝35.0,17.4Hz,2H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),3.01(s,4H), 2.94–2.89(m,1H),2.61(d,J＝16.8Hz,1H),2.49–2.45(s,4H),2.39–2.30(m, 5H),2.04–2.01(m,1H),1.64(dt,J＝15.2,7.5Hz,2H),1.54–1.47(m,2H),1.35(td, J＝13.2,6.9Hz,2H).HRMS calcdforC43H49F3N10O6S,[M+H]+,891.3582；found 891.3625.
实施例18：
Figure RE-GDA0002692264110000212
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),9.79(s,1H),9.31(s,1H),8.19(s, 1H),7.82(d,J＝7.4Hz,1H),7.54(d,J＝7.2Hz,1H),7.52–7.47(m,2H),7.39– 7.25(m,6H),6.70(s,2H),5.15(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.85(s,1H),4.75(s,1H), 4.37(dd,J＝36.2,17.4Hz,2H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),3.02(s,4H),2.95–2.89 (m,1H),2.61(d,J＝17.0Hz,1H),2.54(s,4H),2.40–2.28(m,5H),2.05–2.01(m, 1H),1.62(s,2H),1.48(s,2H),1.36–1.28(m,6H).HRMS calcd for C45H53F3N10O6S, [M+H]+,919.3895；found 919.3960.
实施例19：
Figure RE-GDA0002692264110000213
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.76(s,1H),9.31(s,1H),8.18(s, 1H),7.83–7.79(m,1H),7.55–7.53(m,1H),7.52–7.47(m,2H),7.37–7.24(m, 6H),6.70(s,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.84(s,1H),4.75(s,1H),4.36(dd, J＝35.6,17.4Hz,2H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),2.98(s,4H),2.95–2.89(m,1H), 2.61(d,J＝17.1Hz,1H),2.46(s,4H),2.37–2.25(m,5H),2.04–2.01(m,1H),1.62 –1.59(m,2H),1.44(s,2H),1.35-1.26(m,10H).HRMS calcd for C47H57F3N10O6S, [M+H]+,947.4208；found 947.4282.
实施例20：
Figure RE-GDA0002692264110000221
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),10.63(s,1H),9.33(s,1H),8.28(s, 1H),8.18(s,1H),7.92(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,1H),7.41–7.21(m,6H),6.70(s,2H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.84(s, 1H),4.75(s,1H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),3.02(s,4H),2.92–2.85(m,1H),2.66– 2.50(m,6H),2.47–2.34(m,4H),2.07–2.02(m,1H),1.68–1.62(m,2H),1.55(s, 2H).HRMS calcd forC42H45F3N10O7S,[M+Na]+,913.3038；found 913.3094.
实施例21：
Figure RE-GDA0002692264110000222
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),10.58(s,1H),9.32(s,1H),8.27(s, 1H),8.18(s,1H),7.91(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝ 7.8Hz,1H),7.38–7.24(m,6H),6.69(s,2H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.85(s, 1H),4.75(s,1H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),3.00(s,4H),2.91-2.85(m,1H),2.62– 2.50(m,6H),2.41(t,J＝7.3Hz,2H),2.36–2.29(m,2H),2.04(dd,J＝9.0,3.6Hz, 1H),1.65(dt,J＝15.0,7.4Hz,2H),1.52–1.46(m,2H),1.38–1.31(m,2H).HRMS calcd for C43H47F3N10O7S,[M+H]+,905.3375；found 905.3441.
实施例22：
Figure RE-GDA0002692264110000231
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),10.56(s,1H),9.32(s,1H),8.27(d,J ＝1.4Hz,1H),8.18(s,1H),7.91(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),7.86(d,J＝8.2Hz,1H), 7.56–7.52(m,1H),7.39–7.19(m,6H),6.69(s,2H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H), 4.85(s,1H),4.75(s,1H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),2.99(s,4H),2.89–2.84(m,1H), 2.61–2.52(m,2H),2.48(s,4H),2.40(t,J＝7.4Hz,2H),2.30(s,2H),2.05–2.02 (m,1H),1.64–1.60(m,2H),1.44(s,2H),1.33–1.29(m,6H).HRMS calcd for C45H51F3N10O7S,[M+H]+,933.3688；found933.3748.
实施例23：
Figure RE-GDA0002692264110000232
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),10.57(s,1H),9.31(s,1H),8.26(s, 1H),8.18(s,1H),7.91(d,J＝8.3Hz,1H),7.86(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝7.4 Hz,1H),7.38–7.18(m,6H),6.70(s,2H),5.12(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.85(s, 1H),4.75(s,1H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),3.00(s,4H),2.91-2.85(m,1H),2.62– 2.51(m,6H),2.39(t,J＝7.3Hz,2H),2.30(s,2H),2.06–2.01(m,1H),1.65–1.60 (m,2H),1.45(s,2H),1.35-1.26(m,10H).HRMS calcd for C47H55F3N10O7S,[M+H]+, 961.4001；found 961.4094.
实施例24：本发明化合物的体外酶抑制活性研究
实验材料：
Tecan
Figure RE-GDA0002692264110000233
F500酶标仪。
Figure RE-GDA0002692264110000234
KinEASETM-TK试剂盒(包含生物素化的多肽底物TK，Eu3+标记的只针对特异性磷酸化位点的单抗，Sa-XL665标记的链霉亲和素，KinEASE酶反应缓冲液)，384浅孔板，FAK蛋白,MgCl2，乙二胺四乙酸(EDTA)，二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol，DTT)，DMSO。
实验方法：
第一步：激酶反应。首先将化合物样品用DMSO配成20mM的溶液，之后根据测试需要，再用激酶反应缓冲溶液稀释成1μM、0.1μM等浓度。然后将FAK 激酶(浓度为0.111ng/μl)、ATP(20μM)、生物素标记的多肽底物TK(1μM) 和化合物样品(4μl)加入到10μl激酶反应缓冲溶液(含有MgCl2 5mM,DTT 1mM 和SEB 0.025μM)中，在室温下孵育50分钟，激酶将底物磷酸化。之后加入10μl 的含有EDTA的检测试剂，来检测磷酸化产物。
第二步：检测磷酸化产物。稀土元素铕(Eu3+)标记的抗体识别磷酸化底物， XL665标记的链霉亲和素与底物上的生物素结合。Eu3+是荧光供体，XL665是荧光受体，当Eu3+与XL665接近，Eu3+能量转移给XL665，产生HTRF信号。
结果评定方法：荧光信号是由Eu3+的620nm和XL665的665nm荧光吸收信号产生的。所以每一个孔板反应的HTRF信号(665/620)比值被计算。
Figure RE-GDA0002692264110000241
表1实施例化合物在0.5μM、0.1μM浓度下体外FAK抑制活性百分比
Figure RE-GDA0002692264110000242
如上表所示，本发明中通式(I)的实施例化合物对FAK激酶活性具有抑制作用,能与FAK蛋白相结合。
实施例25：本发明部分化合物对A549细胞中FAK的降解作用
实验方法：
第一步：细胞样品处理
⑴于六孔板中每孔加入4x10^5个细胞，培养24h。加药，培养24h。
⑵每孔细胞加1ml胰酶，平放，然后轻轻摇动洗涤细胞，加入2ml培养基。
⑶用移液枪将细胞转移到15ml离心管中，1000r/min，5min。
⑷1ml PBS将细胞饼重悬，并将细胞悬液转移至1.5ml EP管中，3000r/min， 5min。
第二步：裂解细胞
⑴计算裂解液用量，按每ml裂解液加10μl PMSF(100mM)，摇匀置于冰上。
⑵吸除每个ep管中的PBS，然后往每个ep管细胞加裂解液100μl，超声破碎 2s×3次后，置于冰上裂解30min。
⑶于4℃，12000r/min离心15min。
⑷经离心后所得上清液即为所需的蛋白样品，将其分装入1.5ml离心管中 -80℃冰箱待用，或直接进行蛋白定量。
第三步：BCA法蛋白定量
⑴取1.2ml蛋白标准配制液加入到1管蛋白标准(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后立即使用或分装后在-20℃长期保存。
⑵取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。
⑶梯度稀释法制备0.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/ml BSA标准品溶液。
⑷各组蛋白上清用TBS稀释50倍后，取20μl稀释后上清于96孔板中。
⑸根据样品数量，按BCA试剂A与试剂B为50：1的比例，配制适量BCA工作液，现用现配，充分混匀。
⑹各孔加入200μl BCA工作液，37℃孵育30min。
⑺酶标仪检测样品在562nm波长下吸光度，根据标准曲线计算得出各组蛋白浓度。
第四步：蛋白样品制备
⑴将各组蛋白上清用TBS和5x loading buffer定量到2μg/μl。
⑵100℃加热15min，使蛋白变性，放置-80℃冰箱待用。
第五步：VSDS-PAGE电泳
⑴制胶前检查制胶玻璃板，认真清洗玻璃板，避免影响胶的质量。
⑵根据需要按配方配制分离胶(配方见表2-1)，充分混匀后将胶快速添加置玻璃板中，加入胶的高度为距玻璃板上缘1.5cm左右，接着马上加入异丙醇 200μl封胶。1h后待下层胶凝固完毕，用蒸馏水洗净异丙醇。
表2-1 SDS-PAGE分离胶配方(8％)
Figure RE-GDA0002692264110000251
⑶根据需要按配方配制积层胶(配方见表2-2)，迅速加入至玻璃板中，随即插入梳齿(成孔器)，45min后待上层胶凝固完毕，4℃密封保存待用。
表2-2 SDS-PAGE积层胶配方(5％)
Figure RE-GDA0002692264110000252
⑷将10×电泳缓冲液稀释至1×使用浓度。
⑸组装电泳装置：取出配好胶的玻璃板，小心拔出梳子，避免抖动。用与玻璃板匹配的电泳装置进行组装。组装完毕，向内槽倒入电泳缓冲液到液面与玻璃板齐平，确定没有渗漏后，向外槽继续加入电泳缓冲液至浸没铂丝即可。
⑹上样/电泳：移液器向加样孔加入蛋白Marker及定量蛋白样品。接通电源，电压为积层胶稳压70V，待样品前沿电泳至两胶界限，Marker分开，换电压为分离胶稳压120V。待电泳前沿溴酚蓝条带移动至玻璃板底端，提示电泳完成，可关闭电源。
⑺配制1x转移缓冲液、封闭液(5％脱脂奶粉/TBS-T),准备滤纸及PVDF 膜。
⑻转膜：将准备好的转膜夹、衬垫、按规格剪好的PVDF膜(事先在甲醇中活化30s)及2层滤纸在转移液中浸泡去除气泡，向夹子黑面依次放置衬垫、1层滤纸、凝胶、PVDF膜、1层滤纸、衬垫，避免气泡产生，严格注意各项内容的放置顺序，小心合上夹子。将其仿佛转移槽中。倒满转移液，并放置冰盒一个，接通电源，将转移槽置于加满冰块的泡沫盒中。恒流200mA转移1-3h(依据蛋白质分子量而定)。
⑼封闭：转膜时间到后，将PVDF膜浸泡于封闭液中，标好Marker位置，将其置与摇床，室温条件封闭2h。
⑽配制一抗，FAK抗体按1:1000用封闭液稀释，GADPH抗体按1:2000用封闭液稀释，4℃孵育过夜。
⑾TBS-T洗膜15min/次，洗3次。
⑿配制二抗，二抗用封闭液按1:4000稀释，室温孵育2h。
⒀TBS-T洗膜15min/次，洗3次。
第六步：显影
⑴按照A液：B液＝1:1的比例配制适量ECL发光工作液。
⑵用显影仪显影。
采用Western blot技术测试了化合物的蛋白降解活性。选取了两个的浓度梯度(10nM,100nM)的PROTAC分子与A549细胞孵育24小时，然后将细胞裂解后进行Western blot实验测试了A549细胞内FAK蛋白含量的变化。如图2所示，Western blot测试结果表明：①大部分化合物对A549细胞中的FAK蛋白具有强效的降解活性；②其中，化合物4-10的降解活性较强，在10nM浓度下，对FAK蛋白的降解率分别为79％,72％,74％,62％,75％,71％,76％。
本发明中通式(I)的化合物可单独施用，但通常是和药用载体混合物给予，所述药用载体的选择要根据所需用药途径和标准药物实践，下面分别用该类化合物的各种药物剂型，例如片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂和软膏剂的制备方法，说明其在制药领域中的新应用。
实施例26：片剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，按照药剂学一般压片法加辅料20g混匀后，压制成100片，每片重300mg。
实施例27：胶囊剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，按照药剂学胶囊剂的要求将辅料20g混匀后，装入空心胶囊，每个胶囊重300mg。
实施例28：注射剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，按照药剂学常规方法，进行活性炭吸附，经0.65μm微孔滤膜过滤后，填入氮气罐制成水针制剂，每只装2mL，共灌装100瓶。
实施例29：气雾剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，用适量丙二醇溶解后，加入蒸馏水及其他辐料后，制成500mL的澄清溶液即得。
实施例30：栓剂
用含有权利要求1中化合物的化合物(以实施例8化合物为例)10g，将之研细加入甘油适量，研匀后加入已熔化的甘油明胶，研磨均匀，倾入已涂润滑剂的模型中，制得栓剂50颗。
实施例31：膜剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，将聚乙烯醇、药用甘油、水等搅拌膨胀后加热溶解，80目筛网过滤，再将实施例18化合物加入到滤液中搅拌溶解，涂膜机制膜100片。
实施例32：滴丸剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，与明胶等基质 50g加热熔化混匀后，滴入低温液体石蜡中，共制得滴丸1000丸。
实施例33：外用搽剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，按照常规药剂学方法与乳化剂等辅料2.5g混合研磨，再加蒸馏水至200mL制得。
实施例34：软膏剂
用含有权利要求1中的化合物(以实施例8化合物为例)10g，研细后与凡士林等油性基质500g研匀制得。
尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围。

Claims (10)

1.通式(I)所示的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药:
Figure FDA0002615137020000011
Y为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、羧基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基、卤代(C1-C6)烷基；
X为CH2或羰基；
Z为C或N；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、羧基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基；
L为通式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)或(II-5)所示化合物，
Figure FDA0002615137020000012
n为0-12之间的整数；
m为0-12之间的整数；
k为1-6之间的整数。
2.权利要求1所述的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药:
Y为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、卤代(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基或(C3-C6)环烷基；
Z为N；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基。
3.权利要求1或2所述的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药:
Y为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基、(C1-C3)烷基；
R1为氢、氘、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲基、甲氧基；
n为0-10之间的整数；
m为1-10之间的整数；
k为1-3之间的整数。
4.权利要求1-3任何一项所述的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药:
Y为卤素或三氟甲基；
R1为氢或甲氧基；
n为0-10之间的整数；
m为1-5之间的整数；
k为1-3之间的整数。
5.权利要求1-4任何一项所述的化合物，及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药:
Y为三氟甲基；
R1为氢或甲氧基；
n为2-7之间的整数；
m为1-5之间的整数；
k为1-3之间的整数。
6.下列通式I的化合物及其几何异构体或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药：
Figure FDA0002615137020000021
Figure FDA0002615137020000031
Figure FDA0002615137020000041
Figure FDA0002615137020000051
Figure FDA0002615137020000061
7.一种药用组合物，包含权利要求1至6中任何一项的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药作为活性成分以及药学上可接受的赋形剂。
8.权利要求1-6任何一项所述的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药或权利要求7所述的药用组合物在制备FAK蛋白降解剂中的应用。
9.权利要求1-6任何一项所述的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药或权利要求7所述的药用组合物在制备用于治疗或预防肿瘤相关疾病的药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为脑膜瘤、结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、皮肤癌、肺癌、宫颈癌、卵巢癌或乳腺癌。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112341436A (zh) * 2020-11-20 2021-02-09 中国药科大学 基于靶向抑制和降解alk的苯并咔唑类蛋白水解靶向嵌合分子、制备方法及用途
WO2021190413A1 (zh) * 2020-03-23 2021-09-30 沈阳药科大学 靶向降解黏着斑激酶的化合物及其在医药上的应用
WO2022028372A1 (zh) * 2020-08-03 2022-02-10 沈阳药科大学 靶向降解黏着斑激酶的化合物及其应用
CN114716385A (zh) * 2022-04-08 2022-07-08 北京师范大学 靶向粘着斑激酶的化合物及制备方法和应用
CN115403583A (zh) * 2021-05-28 2022-11-29 四川大学 一种靶向降解fak蛋白的化合物及其用途
WO2023185920A1 (en) * 2022-03-30 2023-10-05 Berrybio (Shanghai) Limited Fak degraders, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications
WO2024008097A1 (zh) * 2022-07-04 2024-01-11 华东理工大学 靶向降解cdk蛋白的化合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010055117A1 (en) * 2008-11-14 2010-05-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh 2,4-diaminopyrimidine derivates as ptk2- inhibitors for the treatment of abnormal cell growth
CN109563076A (zh) * 2016-08-18 2019-04-02 葛兰素史克知识产权开发有限公司 新型化合物
CN111285851A (zh) * 2020-03-23 2020-06-16 沈阳药科大学 靶向降解黏着斑激酶的化合物及其在医药上的应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109422733A (zh) * 2017-09-03 2019-03-05 上海美志医药科技有限公司 一类抑制并降解酪氨酸蛋白激酶alk的化合物
CN110684015A (zh) * 2018-07-06 2020-01-14 四川大学 靶向alk的protac及其应用
CN111892578B (zh) * 2020-08-03 2023-10-20 沈阳药科大学 一种靶向降解黏着斑激酶的化合物及应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010055117A1 (en) * 2008-11-14 2010-05-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh 2,4-diaminopyrimidine derivates as ptk2- inhibitors for the treatment of abnormal cell growth
CN109563076A (zh) * 2016-08-18 2019-04-02 葛兰素史克知识产权开发有限公司 新型化合物
CN111285851A (zh) * 2020-03-23 2020-06-16 沈阳药科大学 靶向降解黏着斑激酶的化合物及其在医药上的应用

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021190413A1 (zh) * 2020-03-23 2021-09-30 沈阳药科大学 靶向降解黏着斑激酶的化合物及其在医药上的应用
WO2022028372A1 (zh) * 2020-08-03 2022-02-10 沈阳药科大学 靶向降解黏着斑激酶的化合物及其应用
CN112341436A (zh) * 2020-11-20 2021-02-09 中国药科大学 基于靶向抑制和降解alk的苯并咔唑类蛋白水解靶向嵌合分子、制备方法及用途
CN115403583A (zh) * 2021-05-28 2022-11-29 四川大学 一种靶向降解fak蛋白的化合物及其用途
CN115403583B (zh) * 2021-05-28 2023-06-30 四川大学 一种靶向降解fak蛋白的化合物及其用途
WO2023185920A1 (en) * 2022-03-30 2023-10-05 Berrybio (Shanghai) Limited Fak degraders, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications
CN114716385A (zh) * 2022-04-08 2022-07-08 北京师范大学 靶向粘着斑激酶的化合物及制备方法和应用
CN114716385B (zh) * 2022-04-08 2024-03-12 北京师范大学 靶向粘着斑激酶的化合物及制备方法和应用
WO2024008097A1 (zh) * 2022-07-04 2024-01-11 华东理工大学 靶向降解cdk蛋白的化合物及其应用

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