CN111869604A - 一种卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物遗传育种技术领域，尤其涉及一种卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法；通过亲鱼的选择与培育，亲鱼锻炼，亲鱼的标记，亲鱼催产，交配亲鱼筛选，亲鱼配对及新群体的构建，取鱼取卵，受精卵孵化实现卵形鲳鲹全同胞家系的构建；本发明可以准确判断追尾亲鱼性别，追尾的两条鱼，在前面游的为雌鱼，后面追逐的为雄鱼，可以获得遗传背景清晰的全同胞家系，而目前尚未见有获得卵形鲳鲹全同胞家系的报道；采用本发明，配对成功率可达90％以上，可以一次获得多个全同胞家系，可以为卵形鲳鲹家系选育及遗传图谱构建等提供材料，并且可以为卵形鲳鲹的家系选育提供技术支撑，对卵形鲳鲹产业的发展具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于生物遗传育种技术领域，尤其涉及一种卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法。
背景技术
目前，最接近的现有技术：卵形鲳鲹又称金鲳鱼，暖水性中上层鱼类，具有洄游和群居习性，主要分布于印度洋、太平洋、大西洋，以及非洲沿岸的热带和亚热带水域，在我国南海、东海和黄海均有分布。卵形鲳鲹属于高蛋白低脂肪鱼类，富含多种蛋白质及其它营养成分，历来被列为名贵食用鱼类。该鱼具有生长速度快、食性简单、饲料转化率高的特点，使其成为我国近、远海集约化养殖的良好选择。
随着养殖技术的不断成熟，卵形鲳鲹产业的发展迅速，但由于落后的选育技术以及不规范的选择方法，卵形鲳鲹种质退化现象较为严重。因此，采用现代遗传育种技术，进行种质发掘与创新势在必行。目前水产动物中常规的选育方法主要有群体选育和家系选育。
群体选育是水产动物常用的育种方法之一，可短期内获得较理想的个体，但该方法对性状的选择更多的是基于表型判断，由于不能有效使用系谱，极易造成群体近交衰退。而基于数量遗传学的家系选育技术则在优良品种的选择，近交衰退的控制等方面具有突出的优势，是目前水产育种主流技术。而家系的构建是进行水产动物家系选育的基本要求。目前水产动物的家系构建，主要有以下两种方法：
1、人工催产授精法。当雌雄鱼性成熟时，对雌雄鱼进行人工催产，获得成熟雄鱼的精液和成熟雌鱼的卵子，利用1尾雄鱼的精液和1尾雌鱼的卵子进行干法授精、半干法授精，或湿法授精，获得受精卵，将受精卵进行孵化、培育，获得全同胞家系。该方法操作步骤少，但技术要求较高，而且要求雌雄鱼精液及卵子较容易挤出。
2、一对一配对繁殖法。选择性成熟的雌雄亲鱼，进行人工催产(部分鱼不需要进行人工催产)，将1尾雄鱼和1尾雌鱼放置到一个水池或网箱，亲鱼自行完成交配受精，待受精卵孵化后即可获得一个全同胞家系。该方法操作十分简单，但要求雌雄鱼性别清楚，而且两尾鱼在一个独立的环境下仍可以完成交配受精。
目前卵形鲳鲹的繁育一般是对一个小群体进行人工催产，然后将其放置到一个网箱，使其部分雄鱼与雌鱼发生追尾、交配、产卵，进而孵化获得子代群体，但该方法获得的子代无法区分其父母本，也无法对不同的全同胞家系进行区分。
在生产中，要获得遗传背景清楚的卵形鲳鲹全同胞家系十分困难，获得大量全同胞家系尤为困难。一是人工催产授精比较困难。卵形鲳鲹腹壁较厚而且较硬，通过挤压腹部挤出精液或卵子十分困难，即使在繁殖季节或催产后，用手挤压亲鱼的腹部也难以挤出精液和卵子，因此，在不损伤亲鱼的情况下，采用常规方法将精子与卵子挤出，然后进行人工授精获得全同胞家系十分困难。二是性别难以判断。成年雌雄卵形鲳鲹体型规格相似，生殖孔也极其相似，从体型及生殖孔难以鉴别性别。在繁殖季节，雌雄卵形鲳鲹的性别特征差异也不明显，通过挤压腹部获得精子或卵子来判断性别也十分困难。在不了解性别的情况下，将任意两尾亲鱼放在一起交配，往往也由于部分配对个体性别相同而无法获得全同胞家系。三是一对一配对繁殖获得全同胞家系十分困难。卵形鲳鲹具有群游习性，交配繁殖需要经过追尾、排卵、受精等一系列过程，雄鱼会在群体中选择合适的雌鱼进行追尾，进而排卵受精。而传统的一对一配对方式，将雌雄亲鱼单独放置于水池或网箱，亲鱼一般不会发生追尾，已有的追尾行为也会因为无群游环境而停止追尾交配，难以构建全同胞家系。
综上所述，现有技术存在的问题是：
(1)现有的卵形鲳鲹群体选育方法极易造成群体近交衰退。
(2)现有的卵形鲳鲹家系选育方法存在人工催产授精困难、性别难以判断、一对一繁殖获得全同胞家系困难的问题。
解决上述技术问题的难度：如何准确判断卵形鲳鲹的性别，并可使雌雄亲鱼自然交配，从而获得全同胞家系。
解决上述技术问题的意义：解决上述技术问题，可以获得遗传背景清晰的全同胞家系，可为卵形鲳鲹家系选育及遗传图谱构建等提供材料，可以实现卵形鲳鲹的家系选育，对卵形鲳鲹产业的发展具有重要的意义。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法。
本发明是这样实现的，一种卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，所述卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法包括：
步骤一，亲鱼的选择与培育：从人工养殖5～7年的卵形鲳鲹成鱼中选择体重大、健康无缺陷的个体用作家系构建的后备亲鱼，经过强化培育后，作为繁殖用亲鱼，用于家系构建。
步骤二，亲鱼锻炼：亲鱼于标记及催产前，每天分早晚两次拉网锻炼，连续锻炼2～3天，以锻炼其适应环境变化的能力，减少后期操作的应激反应，利于顺利交配产卵。
步骤三，亲鱼的标记：选择色彩鲜艳，且容易区分的环志20～30个，然后将不同的环志固定到25尾卵形鲳鲹的尾柄上，以对每尾亲鱼进行标记。
步骤四，亲鱼催产：对亲鱼注射HCG与LRH～A2或LRH～A3进行人工催产，背肌注射或尾柄肌肉注射。然后将亲鱼放置于产卵网箱。
步骤五，交配亲鱼筛选：催产3小时左右，观察亲鱼追尾情况，雄鱼追尾雌鱼时，会一直紧随雌鱼后，用嘴部触碰雌鱼腹部，记录追尾雌雄鱼尾部的环志颜色与图案。
步骤六，亲鱼配对及配对环境的构建：根据追尾亲鱼的标记，将追尾的亲鱼小心捞起，放入另一个单独的网箱或水池，网箱或水池内投入性未成熟的卵形鲳鲹，构成一个新的卵形鲳鲹配对环境，每一对追尾亲鱼用一个网箱或水池进行配对繁殖。
步骤七，取鱼取卵：催产后第二天清晨，观察亲鱼排卵受精情况，卵形鲳鲹受精卵为浮性卵，将排卵的亲鱼小心捞出，用捞网将浮于水中的受精卵捞出进行培育。
步骤八，受精卵孵化：将每个家系的受精卵经过多次清洗后，各自放入0.5～1m3孵化桶，采用微充气带动受精卵在桶中翻转，避免沉淀缺氧，直至受精卵孵化。
进一步，在步骤一中，亲鱼培育时投喂小杂鱼，并添加适量复合维生素促进性腺发育。
进一步，在步骤二中，亲鱼于标记及催产前，每天分两次拉网锻炼，以减少后期操作的应激反应。
进一步，在步骤三中，尼龙色带宽度约1～2cm，环志由不同的颜色与图案组成，在水下易区分。
进一步，在步骤四中，催产剂量为：注射HCG 500～1000U/kg，LRH～A2或LRH～A32～7μg/kg。
进一步，在步骤五中，通过观察亲鱼追尾情况，确定可配对的亲鱼并准确判断亲鱼性别。
进一步，在步骤六中，网箱或水池内投入的性未成熟卵形鲳鲹体重约为2～3Kg，数量20～30尾，构建交配环境。
进一步，在步骤八中，受精卵的孵化温度为22～32℃，盐度为25～35‰，pH为7.2～8.5，溶氧量为4mg/L以上，密度控制在60万粒/m3以下。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明可以准确判断追尾亲鱼性别，追尾的两条鱼，在前面游的为鱼为雌鱼，后面追逐的为雄鱼，可以实现2尾亲鱼单独交配产卵，获得遗传背景清晰的全同胞家系，而目前尚未见有获得卵形鲳鲹全同胞家系的报道。
采用本发明，配对成功率可达90％以上，可以一次获得多个全同胞家系，可以为卵形鲳鲹家系选育及遗传图谱构建等提供材料，并且可以为卵形鲳鲹的家系选育提供技术支撑，对卵形鲳鲹产业的发展具有重要的意义。
附图说明
图1是本发明实施例提供的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。
如图1所示，所述卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，具体包括：
S101：亲鱼的选择与培育：从人工养殖5～7年的卵形鲳鲹成鱼中选择体重大、健康无缺陷的个体用作家系构建的后备亲鱼，经过强化培育后，作为繁殖用亲鱼，用于家系构建。
S102：亲鱼锻炼：亲鱼于标记及催产前，每天分早晚两次拉网锻炼，连续锻炼2～3天，以锻炼其适应环境变化的能力，减少后期操作的应激反应。
S103：亲鱼的标记：选择色彩鲜艳，且容易区分的环志20～30个，然后将不同的环志固定到20～30尾卵形鲳鲹的尾柄上。
S104：亲鱼催产：对亲鱼注射HCG与LRH～A2或LRH～A3进行人工催产，背肌注射或尾柄肌肉注射。然后将亲鱼放置于产卵网箱。
S105：交配亲鱼筛选：催产3小时左右，观察亲鱼追尾情况，雄鱼追尾雌鱼时，会一直紧随雌鱼后，用嘴部触碰雌鱼腹部，记录追尾雌雄鱼尾部的环志颜色与图形。
S106：亲鱼配对及配对环境的构建：根据追尾亲鱼的标记，将追尾的亲鱼小心捞起，放入另一个单独的网箱或水池，网箱或水池内投入性未成熟的卵形鲳鲹，构成一个新的卵形鲳鲹配对环境，每一对追尾亲鱼用一个网箱或水池进行配对繁殖。
S107：取鱼取卵：催产后第二天清晨，观察亲鱼排卵受精情况，卵形鲳鲹受精卵为浮性卵，将排卵的亲鱼小心捞出，用捞网将浮于水中的受精卵捞出进行培育。
S108：受精卵孵化：将每个家系的受精卵经过多次清洗后，各自放入0.5～1m3孵化桶，采用微充气带动受精卵在桶中翻转，避免沉淀缺氧，直至受精卵孵化。
在S101中，亲鱼培育时投喂小杂鱼，并添加适量复合维生素促进性腺发育。
在S103中，环志宽度约1～2cm，由不同的颜色与图案组成，在水下易区分。
在S104中，催产剂量为：注射HCG 500～1000U/kg，LRH～A2或LRH～A3 2～7μg/kg。
在S106中，网箱或水池内投入的性未成熟卵形鲳鲹体重约为2～3kg，数量20～30尾。
在S108中，受精卵的孵化温度为22～32℃，盐度为25～35‰，pH为7.2～8.5，溶氧量为4mg/L以上，密度控制在60万粒/m3以下。
下面结合实验对本发明的技术效果作详细的描述。
实验一：
将26尾体重为8～13kg，性成熟的卵形鲳鲹亲鱼按照S101进行培育，采用S104进行催产后，放到13个3m*6m*8m(长*宽*深)网箱进行配对繁殖，第二天清晨检查产卵情况，均未成功配对产卵。在原网箱继续配对2天，均未发现成功配对现象，其中2尾雌鱼由于无法按时排卵腹胀而死，配对成功率为0。
实验二：
将25尾体重为8～13kg，性成熟的卵形鲳鲹亲鱼按照S101进行培育，采用S103步骤进行标记，步骤S104催产后，获得5对追尾亲鱼，将追尾亲鱼小心取出，放到5个单独的网箱继续配对繁殖，连续2天观察繁殖产卵情况，结果无一对配对成功，配对成功率为0。
实验三：
将25尾体重为8～13kg，性成熟的卵形鲳鲹亲鱼按照S101进行培育，采用S103步骤进行标记，步骤S104催产后，获得4对追尾亲鱼，将追尾亲鱼小心取出，放到4个单独的网箱继续配对繁殖，每个网箱放置20～30尾体重约为3kg的性未成熟卵形鲳鲹，第二天清晨观察配对产卵情况，结果发现4对追尾亲鱼均产卵，配对成功率为100％，平均受精率约为70％以上。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，所述卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法包括：
步骤一，亲鱼的选择与培育：从人工养殖5～7年的卵形鲳鲹成鱼中选择体重大、健康无缺陷的个体用作家系构建的后备亲鱼，经过强化培育后，作为繁殖用亲鱼，用于家系构建；
步骤二，亲鱼锻炼：亲鱼于标记及催产前，每天分早晚两次拉网锻炼，连续锻炼2～3天，以锻炼其适应环境变化的能力，减少后期操作的应激反应；
步骤三，亲鱼的标记：选择色彩鲜艳，且容易区分的环志20～30个，然后将不同的环志固定到20～30尾卵形鲳鲹的尾柄上；
步骤四，亲鱼催产：对亲鱼注射HCG与LRH～A2或LRH～A3进行人工催产，背肌注射或尾柄肌肉注射，然后将亲鱼放置于产卵网箱；
步骤五，交配亲鱼筛选：催产3小时左右，观察亲鱼追尾情况，雄鱼追尾雌鱼时，会一直紧随雌鱼后，用嘴部触碰雌鱼腹部，记录追尾雌雄鱼尾部的环志颜色与图形；
步骤六，亲鱼配对及配对环境的构建：根据追尾亲鱼的标记，将追尾的亲鱼小心捞起，放入另一个单独的网箱或水池，网箱或水池内投入性未成熟的卵形鲳鲹，构成一个卵形鲳鲹配对环境，每一对追尾亲鱼用一个网箱或水池进行配对繁殖；
步骤七，取鱼取卵：催产后第二天清晨，观察亲鱼排卵受精情况，卵形鲳鲹受精卵为浮性卵，将排卵的亲鱼小心捞出，用捞网将浮于水中的受精卵捞出进行培育；
步骤八，受精卵孵化：将每个家系的受精卵经过多次清洗后，各自放入0.5～1m3孵化桶，采用微充气带动受精卵在桶中翻转，避免沉淀缺氧，直至受精卵孵化。
2.如权利要求1所述的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，在步骤一中，亲鱼培育时投喂小杂鱼，并添加复合维生素促进性腺发育。
3.如权利要求1所述的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，在步骤二中，亲鱼于标记及催产前，每天分两次拉网锻炼，以减少后期操作的应激反应。
4.如权利要求1所述的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，在步骤三中，塑料环志宽度1～2cm，环志由不同的颜色与图案组成，在水下易区分。
5.如权利要求1所述的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，在步骤四中，催产剂量为：注射HCG 500～1000U/kg，LRH～A2或LRH～A32～7μg/kg。
6.如权利要求1所述的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，在步骤五中，通过观察亲鱼追尾情况，确定可配对的亲鱼并准确判断其性别。
7.如权利要求1所述的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，在步骤六中，网箱或水池内投入的未达性成熟的卵形鲳鲹体重约为2～3kg，数量20～30尾，构建交配环境。
8.如权利要求1所述的卵形鲳鲹全同胞家系的构建方法，其特征在于，在步骤八中，受精卵的孵化温度为22～32℃，盐度为25～35‰，pH为7.2～8.5，溶氧量为4mg/L以上，密度控制在60万粒/m3以下。
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